JPH07112978B2

JPH07112978B2 - 抗腫瘍剤

Info

Publication number: JPH07112978B2
Application number: JP20420287A
Authority: JP
Inventors: 敏明松崎; 晃小岩井
Original assignee: Japan Tobacco Inc
Current assignee: Japan Tobacco Inc
Priority date: 1987-08-19
Filing date: 1987-08-19
Publication date: 1995-12-06
Anticipated expiration: 2010-12-06
Also published as: JPS6447795A

Description

【発明の詳細な説明】〔産業上の利用分野〕この発明は、抗腫瘍剤に関する。

〔従来の技術〕

従来、抗腫瘍剤としては、植物性分から得られるビンク
リスチンや合成品のシスプラスチン及び微生物由来のプ
レオマイシン等が一般に良く知られている。これらの薬
剤は、抗腫瘍効果は高いにもかかわらず、正常細胞に対
する細胞毒性や急性毒性なども極めて強いものである。

〔発明が解決しようとする問題点〕

本発明は、生体に対する急性毒性を示さずに抗腫瘍効果
を示す化合物を提供するものである。

〔問題点を解決するための手段〕

本発明者等は、種々の植物体中に含まれる生理活性物質
を探索し、それらの薬効について検討したところ、ナス
科ニコチアナ属の有機溶媒抽出物が抗腫瘍作用を示すこ
とを知り、本発明を完成するに至った。

この発明の抗腫瘍剤は、式（１）で示される庶糖エステ
ル一種あるいは二種以上を有効成分として含有すること
を特徴とする抗腫瘍剤である。

（式中、R1、R2、R3は炭素数３〜８の分岐または直鎖の
アシル基を表し、R4はアセチル基または水素を表す。）前記式（１）で示される化合物は、ナス科ニコチアナ属
植物の葉・花・茎部に含まれている。特に、野生種のた
ばこ植物に多量に含まれている。式（１）で示される化
合物は、ニコチアナ属植物をクロロホルム、酢酸エチ
ル、アセトン、メタノールなどの有機溶媒に浸せきして
抽出した後、抽出物を濃縮して得た樹脂画分をシリカゲ
ルカラムクロマトグラフィー、次いで高速液体クロマト
グラフィーにより順次分離して得られる。以下、製造例
によりこの発明を詳細に説明する。

〔式（１）で示される化合物の製造例〕ニコチアナグルチノーザ（Nicotiana Glutinosa）の
生葉4Kgをクロロホルム20に約２〜３分間浸せきして
クロロホルム可溶の葉面樹脂成分を抽出する。こうして
得た抽出液をろ紙でろ過し、ろ液をロータリーエバポレ
ーターで35℃下に濃縮し、葉面樹脂44gを得た。この葉
面樹脂の全量を少量のクロロホルムに溶解し、シリカゲ
ルカラムクロマトグラフィーを行った。カラム（カラム
径×高さ＝40mm×300mm）にワコーゲルC200（商品名）
をつめ、クロロホルム、クロロホルム：アセトン（1:
1）、アセトン、メタノール各１で順次溶出し、４画
分（画分１〜画分４）を得た。上記画分中、画分２を濃
縮したのち再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー
（カラム径×高さ＝40mm×300mm、ワコーゲルC300を使
用）にかけ、クロロホルム、クロロホルム：アセトン
（7:3）、クロロホルム：アセトン（4:6）、アセトン各
300mlで順次溶出し、100mlずつ分取して12の画分（画分
１〜画分12）を得た。上記12の画分のうち画分４及び画
分７をそれぞれ濃縮したのち、以下に示した装置・操作
条件で高速液体クロマトグラフィーを行い、画分４より
物質M₁（以下、M₁と略記する。）9g、画分７より物質M₂
（以下、M₂と略記する。）5gを得た。

高速液体クロマトグラフィーの条件カラム；シリカゲル型カラム（山村化学社製YMC SIL A0
24）溶媒；クロロホルム：アセトン（1:1）流量;1.5ml/分 M₁のリテンションタイムは12分で、M₂のリテンションタ
イムは19分であった。また、M₁及びM₂は順相の薄層プレ
ート（メルク社製Art5642）を用いた薄層クロマトグラ
フィーでは、それぞれ１スポットを示し、M₁のRf値は0.
42,M₂のRf値は0.29であった。M₁及びM₂は、それぞれ下
記にそのデータを示すように¹³C−NMR,IRによる分析及
びアルカリ分解して調べた結果から、庶糖と低級脂肪酸
のエステル化合物であることが判明した。¹³ C−NMR（δppm,重クロロホルム中）庶糖炭素のケミカルシフト； M₁;60.6,61.6,64.3,68.5,69.1,70.6,71.4,72.0,79.3,8
2.6,89.7,104.2 M₂;60.9,61,7,64.2,68.8,69.6,71.0,71.5,73.4,77.2,8
1.5,88.8,104.7 IR（cm^-1）； M₁;3450,1748 M₂;3450,1748 M₁及びM₂の低級脂肪酸のモル組成比は表−１に示すとお
りであった。表−１中、炭素記号に付した数字は脂肪酸
の炭素数を表す。

M₁には酢酸が存在し、M₂には酢酸が存在していなかっ
た。

さらに、M₁とM₂化学構造を調べるためにD₂OとH₂Oを用い
た同位体効果による¹³C−NMRの測定からそれぞれのエス
テルの位置を決定した。その結果M₁では、グルコースの
６位、フラクトースの1,4,6位に由来する炭素シグナル
が、M₂ではグルコースの６位、フラクトースの1,3,4,6
位に由来する炭素のシグナルが二重線に分離することか
ら、M₁は（2,3,4−トリ−Ｏ−アシル）−α−Ｄ−グル
コピラノシル−（３−Ｏ−アセチル）−β−Ｄ−フラク
トフラノシド、M₂は（2,3,4−トリ−Ｏ−アシル）−α
−Ｄ−グルコピラノシル−β−Ｄ−フラクトフラノシド
であると同定された。

次ぎに、M₁及びM₂を別々にそれぞれ下記の条件で、高速
液体クロマトグラフィーを数回繰り返して行い、M₁から
化合物1,2,3,4,5及び６をそれぞれ0.2,0.4,1.2,1.0,2.0
及び2.0gを得た。

高速液体クロマトグラフィーの条件カラム;YMC A314,ODS型溶媒；メタノール：アセトニトリル：水＝8:2:1.5 流量;0.8ml/分化合物１〜６のリテンションタイムはそれぞれ9,11,13,
15,18,21分であった。

また、M₂から化合物7,8,9,10,11及び12をそれぞれ0.1,
0.3,0.3,1.5,0.6及び0.5gを得た。

高速液体クロマトグラフィーの条件カラム;YMC A314,ODS型溶媒；メタノール：アセトニトリル：水＝8:2:2 流量;1.0ml/分化合物７〜12のリテンションタイムはそれぞれ11,13,1
6,18,25,34分であった。

上記化合物１〜12において、前記式（１）中R₁,R₂,R₃の
炭素数の和、R₄の種類及び脂肪酸の組成比率は表−２に
示すとおりであった。脂肪酸の組成比率は、それぞれの
化合物について、加水分解後の脂肪酸組成及び加水分解
前のTMS化物のガスクロマトグラフィー面積比より算出
した。

すなわち、加水分解後の脂肪酸組成は、化合物No.1〜12
のそれぞれについて1mgをサンプル管にとり、1NKOH80％
メタノール溶液に溶解し、100℃、15分間加水分解し
た。この加水分解物に４℃下、6NHClを加えた後、エチ
ルエーテルを添加し、沈殿物を沈殿させた後、該エーテ
ル液をガスクロマトグラフィー（カラム；フェーズドシ
リカキャピラリーunisole 400,ガスクロ工業社製、60〜
150℃の４℃/min昇温）で分析した。

次に、TMS化物については、化合物No.1〜12のそれぞれ
についてBSTFAでトリメチルシリル化した後、ガスクロ
マトグラフィー（カラム；フェーズドシリカキャピラリ
ー、OV−1,ヒューレットパッカード社製、290℃）で分
析した。

〔投与量，投与方法〕この発明の庶糖エステルを抗腫瘍剤として用いる場合、
静脈内注射、皮下注射、経口カプセル等の方法で投与さ
れ、投与量は成人に対し、水溶剤（注射）では５〜100m
g/Kg体重、経口剤では20〜500mg/Kg体重の範囲である。
また、投与剤の形態は、製薬上許容しうる賦形剤又は溶
剤との混和により常法で製剤した散剤、顆粒、錠剤、カ
プセル、注射液、局所用剤等いずれでもよい。

〔作用・効果〕

この発明の抗腫瘍剤は、以下の実施例から明らかなよう
に、ザルコーマ180細胞及びシリアンハムスター肺細胞
由来のNG100腫瘍細胞に対して優れた細胞増殖阻止作用
を示し、抗腫瘍剤として有用である。

〔実施例〕

以下本発明を実施例について更に詳細に説明する。

（Ｉ）ザルコーマ180を用いる試験前記製造例を全く同様にして製造したM₁,M₂及び化合物
１〜12を被験物質として用いた。被験物質M₁,M₂及び化
合物１〜12は少量のジメチルスルホキシド（DMSOと略
す）に溶解後0.5％カルボキシメチルセルロース生理食
塩水溶液に懸濁して準備した。なおDMSOの最終濃度は３
％以下とした。試験動物として５週令のICR−JCLマウス
を１検体当たり６匹、対照用に６匹を用いた。投与方法
としては、ザルコーマ180細胞１×10⁷個/0.05ml Hanks
液をマウスの腹腔内に移植し、その１日後から１日１回
づつ５日間にわたり被験物懸濁液0.5ml（投与量として
は、被験物質100mg/Kg）を各々腹腔内に投与した。対照
区は、試料化合物がなく、0.5％カルボキシメチルセル
ロース生理食塩水のみを投与した。細胞移植後、７日目
にマウスを屠殺した。腹水を採取し、3,000rpmで５分間
遠心し、沈澱した腫瘍細胞の容積を測定した。各々の被
験物質について腫瘍抑制率〔＝｛１−（処理区細胞総容
積÷対照区細胞総容積）｝×100（％）〕を求めた。結
果は表−３に示すとおりであった。

表−３から明らかなように、化合物１〜12、及びM₁,M₂
いずれもザルコーマ180細胞に対して阻害効果が認めら
れた。

（II） NG 100腫瘍細胞増殖抑制試験前記製造例と全く同様にして製造したM₁,M₂及び化合物
１〜12を被験物質として用いた。被験物質M₁,M₂及び化
合物１〜12を少量のジメチルスルホキシドに溶解し、こ
れに10％牛胎仔血清を加えたイーグルの最小必須培値で
所定濃度に希釈し、径60mmのプラスチックシャーレに分
注した。これにシリアンハムスター肺細胞（授乳期）由
来のNG100腫瘍細胞を200個播種し、炭酸ガス雰囲気下37
℃、７日間培養した。メタノール固定後、ギムザ染色を
して出現したコロニー数を計測した。上記で測定した試
料の各濃度に対するコロニー数をプロットし、このグラ
フから対照（試料化合物が無い場合）におけるNG100腫
瘍細胞のコロニー数（100％とする）の50％に相当する
試料化合物の濃度をED₅₀として求めた。その結果を表−
４に示した。

表−４から明らかなように、化合物１〜12及びM₁,M₂い
ずれもNG100腫瘍細胞に対して阻害効果が認められた。

〔急性毒性試験〕マウスを用いて経口投与により急性毒性試験を行った。

（１）被験物質；前記製造例と全く同様にして製造し
たM₁,M₂及び化合物１〜12を被験物質として用いた。被
験物質は、オリーブ油に溶解して用いるが、溶解しにく
いため溶解助剤としてジメチルスルフォキシド（DMSO）
を用いた。被験物質各1000mgを0.35mlのDMSOに溶解し、
これにオリーブ油を加え5.0mlの被験物質溶液（検体）
を調整した。また対照として被験物質を含まない0.35ml
のDMSOを含むオリーブ油5.0mlを調整した。

（２）試験物質;10週齢の雌のICR−SLCマウス（SPF
動物）を１検体当たり６匹、対照用に６匹を用いた。

（３）投与方法・量；各検体をマウス体重10g当たり
0.1mlの割合で胃ゾンデを用いて強制的に投与した。投
与は２回行い、１回目の投与後２週間目に２回目の投与
を行った。マウス１匹当たりの投与量は4000mg/Kgであ
った。

（４）検査；投与後13日間飼育観察を続け、14日目に
屠殺解剖して肉眼所見をとった。

（５）試験結果；投与後供試動物に死亡はなく生存率
100％であり、一般状態にも異常は認められなかった。
また解剖時の剖見所見でも特に異常は認められなかっ
た。従って、被験物質の最小致死量は4000mg/Kgより高
い値であると推定され、急性経口毒性に関しては厚生省
の基準によれば極めて安全性の高い物質であり、普通薬
に属する。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】式（１）で示される化合物を有効性分とし
て含有する抗腫瘍剤（式中、R1、R2、R3は炭素数３〜８の分岐または直鎖の
アシル基を表し、R4はアセチル基または水素を表す。）