JPH0716095A

JPH0716095A - タンニン配糖体の製造法

Info

Publication number: JPH0716095A
Application number: JP18350393A
Authority: JP
Inventors: Satoru Kitao; 悟北尾; Yoko Shimaoka; 洋子嶋岡; Toshiaki Ariga; 敏明有賀; Tatsuo Horiuchi; 達雄堀内; Hiroshi Sekine; 廣関根
Original assignee: Kikkoman Corp
Current assignee: Kikkoman Corp
Priority date: 1993-06-30
Filing date: 1993-06-30
Publication date: 1995-01-20

Abstract

(57)【要約】【目的】タンニンの本来有する優れた生理活性をそのま
ま保持し、且つ色沢安定性を有する新規なタンニン配糖
体を得る。【構成】タンニンに糖供与体の存在下、糖転移酵素を作
用させてタンニン配糖体を得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、タンニンの本来有する
優れた生理活性をそのまま保持し、かつ色沢安定性の高
いタンニン配糖体の製造法に関する。さらに詳しくは、
シュークロースホスホリラーゼ等の糖転移酵素を利用し
て、フェノール性水酸基を有する種々のタンニンの該フ
ェノール性水酸基にグルコースなどの糖類を結合した新
規物質（以下、タンニン配糖体という）を効率的に製造
する方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、タンニンは広く植物体に存在しそ
の化学構造により、縮合型タンニン、加水分解型タンニ
ン、及び複合タンニンに分類される。例えば、縮合型タ
ンニンは小豆〔アグリカルチュラル・バイオロジカル・
ケミストリー（Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．）Ｖ
ｏｌ．５２，ｐ２７１７−１７２２，１９８８参照〕や
ブドウ種子〔特開平３−２００７８１号参照〕などに存
在することが知られ、そこから抽出精製され取得するこ
とができる。単純縮合型タンニンの最小単位であるフラ
バン−３−オール類の一つである（＋）−カテキンに澱
粉またはシクロデキストリンを加えて、シクロマルトデ
キストリン−グルカノトランスフェラーゼを反応させ、
（＋）カテキン配糖体を得る方法が知られている（日本
農芸化学会会誌、６５巻、３号、第５頁、２Ａｐ１４、
平成３年３月１５日発行、特開平４−２７３８９０参
照）。

【０００３】

【発明が解決する課題】このように（＋）−カテキン配
糖体の製造法は知られているが、その多量体であるタン
ニンについての配糖体およびその製造法については知ら
れていない。

【０００４】一方、このタンニンは、抗酸化作用、
色素細胞に対する白色化作用、抗変異原性作用、収
れん作用、そして、皮脂分泌抑制作用などを有するこ
とから食品・化粧品及び医薬産業上重要な物質である。

【０００５】しかしながら、光や熱に対する色沢安定性
が非常に悪い欠点を有し、上記食品、化粧品及び医薬品
産業において利用範囲が制約を受ける問題点を有してい
る。

【０００６】

【課題を解決するための手段】そこで本発明者等はこの
ような問題点を解消するため種々検討を重ねた結果、タ
ンニンに糖供与体の存在下、糖転移酵素を作用させるこ
とによって、タンニンの有する優れた生理活性は殆ど損
うことなく、光や熱に対する色沢安定性が非常に高いタ
ンニン配糖体が得られることを知り、この知見に基いて
本発明を完成した。

【０００７】即ち、本発明は、タンニンに糖供与体の存
在下、糖転移酵素を作用させることを特徴とするタンニ
ン配糖体の製造法である。

【０００８】以下、本発明を詳細に説明する。先ず本発
明を実施するには、タンニンに糖供与体の存在下、糖転
移酵素を作用させる。

【０００９】ここで用いるタンニンは、植物体からの抽
出あるいは合成により得られる、縮合型タンニン、加水
分解型タンニン、および複合タンニン等であって、単純
縮合型タンニンの最小単位であるフラバン−３−オール
類を含まない。

【００１０】次に、糖転移酵素としては、糖転移作用の
あるグリコシダ−ゼやトランスグリコシダ−ゼなどの酵
素が用いられる。上記酵素源としては動物・植物・微生
物より得られるものが挙げられるが、これらのうち微生
物の生産するものが、工業的には適している。上記酵素
としては、例えばシュ−クロースホスホリラーゼ、αま
たはβ−アミラ−ゼ、αまたはβ−グルコシダ−ゼ、α
またはβ−ガラクトシダ−ゼ、ガラクタナ−ゼ、サイク
ロデキストリングルカノトランスフェラ−ゼ、グルコア
ミラ−ゼ、フラクトシルトランスフェラ−ゼ、プルラナ
−ゼ、キシロシダ−ゼ、キシラナーゼ等が挙げられる
が、このうちシュ−クロースホスホリラーゼは糖転移能
が強いので好ましい。シュ−クロースホスホリラーゼ
は、無機リン酸の存在下でシュークロースに作用してグ
ルコース−１−リン酸とフラクトースを生成する、また
はこの逆反応を触媒する酵素として知られている。

【００１１】シュ−クロースホスホリラーゼの起源とし
ては例えばロイコノストック・メセンテロイデス（Ｌｅ
ｕｃｏｎｏｓｔｏｃｍｅｓｅｎｔｅｒｏｉｄｅｓ）、
シュードモナス・サッカロフィラ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎ
ａｓｓａｃｃｈａｒｏｐｈｉｌａ）、シュードモナス
・パトリファシエンス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｐｕ
ｔｒｅｆａｃｉｅｎｓ）、クロストリジウム・パステイ
リアナム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐａｓｔｅｕｒｉ
ａｎｕｍ）、アセトバクター・キシリナム（Ａｃｅｔｏ
ｂａｃｔｅｒｘｙｌｉｎｕｍ）、プルラリア・プルラ
ンス（Ｐｕｌｌｕｌａｒｉａｐｕｌｌｕｌａｎｓ）等
のものが知られている〔バイオテクノロジー・アンド・
バイオエンジニアリング（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉ
ｏｅｎｇ．，）Ｖｏｌ．２９，Ｐｐ８−１５，１９８７
参照〕が、これらに限定されるものではない。

【００１２】次に、糖供与体としては、グルコース−１
−リン酸、シュークロース、デンプン、水飴、デキスト
リン、デキストラン、サイクロデキストリン、マルト−
ス、マルトトリオ−ス、マルトテトラオ−ス、マルトペ
ンタオ−ス、マルトヘプタオ−ス、グルコ−ス、フラク
ト−ス、キシロ−ス、ガラクト−ス、乳糖、キシロオリ
ゴ糖、フラクタン、アラビノガラクタン、ｏ−ニトロフ
ェニル−αまたはβ−グルコシド、ｏ−ニトロフェニル
−αまたはβ−ガラクトシド、それらの含有物等が挙げ
られる。

【００１３】本発明を実施するには、先ずタンニンと糖
供与体とを水に溶解して、混合液を調製する。水に対す
る上記２つの成分の添加量は、全体として重量％濃度で
５〜１００％、更に望ましくは２０〜６０％である。そ
して糖転移酵素としてシュ−クロ−スホスホリラ−ゼを
使用し、また糖供与体としてシュ−クロ−ス（またはグ
ルコ−ス−１−リン酸）を用いる場合、上記混合液に対
するシュークロースホスホリラーゼの添加量は、タンニ
ンとシュークロース（又はグルコース−１−リン酸）と
の総重量１グラム当たり１単位以上、望ましくは５０〜
５００単位である。

【００１４】なお、１単位とは特開平３−４７８５「シ
ュークロースホスホリラーゼの製造法」に記載の方法に
従って求めたものである。

【００１５】また、シュ−クロ−スホスホリラ−ゼを用
いる場合の酵素反応のｐＨは５．０〜８．５、望ましく
は７．０〜８．０であり、また温度は２０〜５０℃、望
ましくは３５〜４５℃であり、また時間は１〜２４時
間、望ましくは８〜１５時間である。

【００１６】このようにして得られた反応液から、目的
とするタンニン配糖体の分離は、通常のタンニン類化合
物の単離方法を採用すれば良い。即ち、セファデックス
ＬＨ−２０等のデキストラン誘導体を担体とするクロマ
トグラフィー法［Ｒ．Ｓ．Ｔｏｍｐｓｏｎ等著、Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．ＰｅｒｋｉｎＩ，Ｎｏ．１１，１
３８７（１９７２）］、ポリアミドを担体とするカラム
クロマトグラフィー法［Ｊ．Ｐ．ＶａｎＢｕｒｅｎ
等著、Ｊ．ＦｏｏｄＳｃｉ．，ｖｏｌ．３１．９６４
（１９６６）］、シリカゲルを用いる液体クロマトグラ
フィ−法［Ｃ．ＷｉｌｌｉａｍＧｌｅｎｎｉｅ等
著、Ｊ．Ａｇｒｉｃ．ＦｏｏｄＣｈｅｍ．，ｖｏｌ．
２９．９６５〜９６８（１９８１）］、水と酢酸エチル
間の向流分配による方法［ＡｎｄｒｅｗＧ．Ｈ．Ｌｅ
ａ著、Ｊ．Ｓｃｉ．ＦｄＡｇｒｉｃ．，ｖｏｌ．２
９．４７１〜４７７（１９７８）］、ポリスチレン系樹
脂、例えばダイヤイオン、ＨＰ２０、ＨＰ２１、ＳＰ２
０６、ＳＰ２０７、ＳＰ８５０、ＣＨＰ３Ｃ、ＣＨＰ５
Ｃ、ＣＨＰ２０Ｐ（以上何れも三菱化成工業社製）、ア
ンバーライトＸＡＤ−１、ＸＡＤ−２、ＸＡＤ−４（以
上何れもオルガノ社製）を用いたクロマトグラフィ−法
［特開昭６３−１６２６８５］、あるいは限外濾過膜や
逆浸透膜を用いて分画する方法［特開昭６３−２６７７
７４］が挙げられる。これらは単独、または組合わせる
ことにより目的とするタンニン配糖体を含有する画分を
分離することができる。例えば、濾過樹脂（例えばファ
ルマシア社製、セファデックスＬＨ−２０）を充填した
カラムに通液し、次いで水を通液して未反応の糖、酵素
（蛋白質）等を除去し、次いでアセトン水溶液を通液す
ることによって、未反応のタンニン及びタンニン配糖体
を溶出し、得ることができる。

【００１７】

【本発明の効果】本発明によれば、タンニンに糖供与体
の存在下、糖転移酵素を作用させるという極めて簡単な
操作によって、タンニンの本来有する優れた生理活性を
そのまま保持し、且つ色沢安定性の良好なタンニン配糖
体を提供することができる。

【００１８】以下、実施例を示して本発明をより具体的
に説明する。

【実施例１】縮合型タンニンとしてプロシアニジン六量
体を用いた。プロシアニジン六量体は広南桂皮よりＳ．
Ｍｏｒｉｍｏｔｏ等の方法［ケミカル・アンド・ファル
マスーチィカル・ブリテン（Ｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄ
ＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ）
Ｖｏｌ．３４，ｐ６３３−６４２，１９８６参照］に準
じて調製した。このプロシアニジン六量体２００ｍｇ
を、１００ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に４
００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したシュークロース溶液１
０ｍｌに混合し、これにシュークロースホスホリラーゼ
（キッコーマン社製）９７０単位を添加し、４２℃１７
時間反応させ、糖化合物生成反応を行い、酵素反応処理
液を得た。

【００１９】次に、得られた反応液をセファデックスＬ
Ｈ−２０カラム（内径３センチ、長さ３０センチ）に流
速１ml/minで通液し、水を通液して未反応の糖及び蛋白
質（酵素）を洗い流した後、アセトン水溶液を通流させ
て、目的とするタンニン配糖体を含有する溶液を得た。
次いで、ロータリーエバポレーターにて乾固させた後、
２０％トリフロロ酢酸水溶液１ｍｌに溶解し、１００℃
１５時間の加熱処理を行なった。この酸加水分解産物を
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）にてグルコー
スを定量した。その結果、３４．７２ｍｇのグルコース
が検出された。尚、シュークロースホスホリラーゼ無添
加の反応処理液を同様の操作により酸加水分解を行なっ
たところ、グルコースは検出されなかった。

【００２０】［高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬ
Ｃ）分析の条件］カラム；ＴＳＫｇｅｌＡｍｉｄｅ８０、内径４．６
ｍｍ、長さ２５０ｍｍ流速；１ｍｌ／分移動相；アセトニトリル：水＝６０：４０検出；ＲＩ

【００２１】

【実施例２】実施例１と同じくプロシアニジン六量体２
００ｍｇを、１００ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩
衝液に２００ｍｇ／ｍｌの濃度に溶解したグルコース−
１−リン酸溶液１０ｍｌに混合し、これにシュークロー
スホスホリラーゼ（キッコーマン社製）９７０単位を添
加し、４２℃１７時間反応させ、糖化合物生成反応を行
い、酵素反応処理液を得た。以下、上記実施例１と全く
同様な操作を行ない、１９．３６ｍｇのグルコースを検
出した。

【００２２】

【実施例３】加水分解型タンニンとして、タンニン酸
（日本薬局方、岩城製薬社販売）２００ｍｇを、１００
ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に４００ｍｇ／
ｍｌの濃度に溶解したシュークロース溶液１０ｍｌに混
合し、これにシュークロースホスホリラーゼ（キッコー
マン社製）９７０単位を添加し、４２℃１７時間反応さ
せ、糖化合物生成反応を行い、酵素反応処理液を得た。
以下、上記実施例１と全く同様な操作を行ない、１２．
５６ｍｇのグルコースを検出した。

【００２３】

【実施例４】加水分解型タンニンとして、タンニン酸
（日本薬局方、岩城製薬社販売）２００ｍｇを、１００
ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）緩衝液に２００ｍｇ／
ｍｌの濃度に溶解したグルコース−１リン酸溶液１０ｍ
ｌに混合し、これにシュークロースホスホリラーゼ（キ
ッコーマン社製）９７０単位を添加し、４２℃１７時間
反応させ、糖化合物生成反応を行い、酵素反応処理液を
得た。以下、上記実施例１と全く同様な操作を行ない、
８．２８ｍｇのグルコースを検出した。以上、実施例１
ー４で得られる酵素反応処理液は、その酸加水分解液中
にグルコースが検出されることから、タンニン配糖体が
生成含有することが確認される。

【００２４】

【応用例１】「タンニン酸及びタンニン酸配糖体の色沢安定性試験」
タンニン酸２００ｍｇ（区分１）、又は、実施例３と同
様に糖化合物生成反応を行ない、セファデックスＬＨ−
２０カラムにより７０％アセトン水溶液で溶出されたタ
ンニン酸配糖体を含有する乾固物２００ｍｇ（区分２）
を純水１ｍｌに溶解し、それぞれ蛍光灯（２７Ｗ）５ｃ
ｍ直下により可視光線１９５００ルクス、紫外線強度
（３１０〜４００ｎｍ）０．２０ｍＷ／ｃｍ2の条件で
照射し、経時的にサンプルの一部を採取しこれを４２０
ｎｍの吸光度の増加により着色の程度を測定した。その
結果を図１に示す。

【００２５】図１の結果から、タンニン酸を溶解した区
分１は時間の経過と共に茶褐色化し、色の安定性が非常
に悪いが、これに対しタンニン酸配糖体を溶解した区分
２では色沢が安定であることが判る。

【図面の簡単な説明】

【図１】タンニン酸、及びタンニン酸配糖体の水溶液中
での経時的色沢安定性を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者堀内達雄千葉県野田市野田339番地キッコーマン株式会社内 (72)発明者関根廣千葉県野田市野田339番地キッコーマン株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】タンニンに糖供与体の存在下、糖転移酵
素を作用させることを特徴とするタンニン配糖体の製造
法。
【請求項２】タンニンが縮合型タンニン類、加水分解
型タンニン類、及び複合タンニン類からなる群より選ば
れた一種である請求項１に記載のタンニン配糖体の製造
法。