JPH07508652A - 融合タンパク質の製造によって酵素を微生物細胞の細胞壁に固定化する方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、遺伝子工学によって製造した固定化酵素を用いる変換処理に係わる。

発明の背景 洗剤、パーソナルケア用品及び食品の製造分野では、これらの製品の成分として 天然物質を指向する傾向、及び環境的に許容可能な工程を用いる傾向が強い。酵 素変換処理は全（天然で行ない得るので、上記のような消費者の要求を満たすう えで非常に重要である。そのうえ、酵素処理は非常に特異的であり、従って最少 量の副産物しか生成させない。このような処理は、温和な温度及び大気圧の下で 水中で実施し得る。しかし、遊離酵素に基づく酵素処理は酵素の損失に起因して きわめて高価となるか、または酵素を捕捉するウルトラメンプランシステムのよ うな高価な設備を必要とする。

あるいは他の場合には、酵素を物理的または化学的に固定化することができる。

化学的固定化法にはしばしば、非天然の化学薬剤を用い、かつ環境の観点から好 ましくない方法で結合を実現するという欠点が存在する。そのうえ、酵素の化学 的改変はほぼ常にさほど特異的でな（、このことは結合が酵素の活性に悪影響を 及ぼす恐れが有ることを意味する。

物理的固定化は消費者の要求に適い得るが、やはり酵素の活性に悪影響を及ぼし かねない。しかも、物理的に固定化した酵素は遊離酵素と平衡し、このことは連 続反応容器内では熱力学の法則に従って酵素の相当の損失が不可避であることを 意味する。

微生物細胞への酵素の固定化に関する刊行物が幾つか存在する（参考文献１参照 ）。本発明は、酵素を微生物細胞の細胞壁に非常に正確に固定化する方法を提供 する。加えて、本発明の固定化方法は何等の化学的または物理的結合ステップも 必要とせず、かつ非常に効率的である。成る種の細胞外タンパク質は、該タンパ ク質が宿主細胞の細胞壁に結合している場合にのみ発揮し得る特別の機能を有す ることが知られている。この種のタンパク質はしばしば、細胞壁に固定（ａｎｃ ｈｏｒ）された長いＣ末端部を有する。

このＣ末端部は非常に特殊なアミノ酸配列を有する。−典型例はプロリンに富ん だＣ末端配列を介して固定されている（参考文献２参照）。タンパク質を細胞壁 に固定させる別の機構に、タンパク質がグリコジルホスファチジルイノシトール （ＧＰＩ）アンカーを有するというもの（参考文献３参照）、及びタンパク質の Ｃ末端部が相当数の潜在的セリン及びトレオニングリコジル化部位を有するとい うものが有る。前記部位のＯ−グリコリル化は当該タンパク質のＣ末端部に棒状 のコンホーメーションを付与する。このようなマンノタンパク質には、下等真核 生物の細胞壁からＳＤＳで抽出できないので前記細胞壁中のグルカンに連結する と考えられるがグルカナーゼ処理によって解離し得るという特徴も有る。

発明の概要 本発明は、酵素を固定化する方法であって、組み換え体ＤＮＡ技術を用いて酵素 または酵素の機能部を宿主細胞、好ましくは微生物細胞の細胞壁に連結すること を含み、その際酵素または酵素の機能フラグメントを細胞壁の外側に位置させる 方法を提供する。好ましくは、酵素または酵素の機能部を、細胞壁への固定を保 証するタンパク質のＣ末端部への連結によって固定化する。

本発明はその一実施態様において、触媒活性を具えたタンパク質をコードする構 造遺伝子と、真核または原核細胞の細胞壁に固定し得るタンパク質をコードする 遺伝子の少なくとも一部分とを含み、前記一部分は前記固定（またはアンカー） タンパク質の少な（ともＣ末端部をコードする組み換え体ポリヌクレオチドを提 供する。好ましくはこのポリヌクレオチドは、該ポリヌクレオチドの発現産物の 分泌を保証するシグナルペプチドをコードする配列も含む。

上記のようなシグナルペプチドは、グリコジルホスファチジルイノシトール（Ｇ ＰＩ）アンカータンパク質、α因子、α−アグルチニン、インベルターゼもしく はイヌリナーゼ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属のα−アミラーゼ、または乳酸菌のプロテ イナーゼに由来し得る。細胞壁に固定し得るタンパク質をコードするＤＮＡ配列 は、α−アグルチニン、ＡＧＡｌ、ＦＬＯＩ、もしくは下等真核生物の主要細胞 壁タンパク質（Ｍａｊｏｒ　Ｃｅ１ｌ　Ｗａｌｌ　Ｐｒｏｔｅｉｎ）、または乳 酸菌のブロティナーゼをコードし得る。本発明の組み換え体ポリヌクレオチドは プロモーター、好ましくは誘導可能なプロモーターに作動的に連結されている。

触媒活性を具えたタンパク質をコードするＤＮＡ配列は加水分解酵素、例えばリ パーゼかオキシドレダクターゼ、例えばオキシダーゼをコードし得る。

本発明はその別の実施態様において、上述のポリヌクレオチドを含む組み換え体 ベクターも提供する。このベクターは、触媒活性を具えたタンパク質でマルチマ ー形態（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｃ　ｆｏｒｍ）で存在する時にその触媒活性を呈示 するタンパク質をコードするＤＮＡ配列を含む場合、触媒活性を具えた同じタン パク質をコードする構造遺伝子を含む第二のポリヌクレオチドもこの第二のポリ ヌクレオチドの発現産物の分泌を保証するシグナルペプチドをコードする配列と 組み合わせて含み得、その際第二のポリヌクレオチドは調節可能なプロモーター 、好ましくは誘導または抑制可能なプロモーターに作動的に連結されている。

本発明は更に別の実施態様において、先に述べたポリヌクレオチドによってコー ドされたキメラタンパク質も提供する。

先に述べたポリヌクレオチドまたは先に述べたベクターを保持する宿主細胞、好 ましくは微生物も本発明の一態様である。触媒活性を具えたタンパク質がマルチ マー形態で存在する時にその触媒活性を呈示する場合、上記宿主細胞または微生 物は触媒活性を具えた同じタンパク質をコードする構造遺伝子を含む第二のポリ ヌクレオチドもこの第二のポリヌクレオチドの発現産物の分泌を保証するシグナ ルペプチドをコードする配列と組み合わせて保持し得、その際第二のポリヌクレ オチドは調節可能なプロモーター、好ましくは誘導または抑制可能なプロモータ ーに作動的に連結されており、かつ別のベクター中にか、または微生物の染色体 中に存在する。好ましくは、上記宿主細胞または微生物は上述のポリヌクレオチ ドのうちの少なくとも一つをその染色体中に組み込まれている。そのような宿主 細胞または微生物を培養することによって本発明は、先に述べたタンパク質がそ の細胞壁に固定化された宿主細胞、好ましくは微生物を提供する。宿主細胞また は微生物は下等真核生物、特に酵母であり得る。

本発明は、固定化した触媒活性タンパク質を用いて酵素処理を行なう方法であっ て、前記触媒活性タンパク質の基質を本発明による宿主細胞または微生物と接触 させる方法も提供する。

図面の簡単な説明 第１図は−３，ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの完全なＡＧａｌ遺伝子を含む６０５７ｂ ｐのＨｉｎｄｎ［断片のＤＮＡ配列示す（配列番号１及び２参照）。本明細書に 説明した構築に用いる非反復ＮｈｅＩ部位及びＨｉｎｄＩ［Ｉ部位の位置をヘッ ダにおいて特定する。

第２図はｐＵＲ２９６９の構築の概略的説明図である。

用いたエンドヌクレアーゼの制限部位を示す。

使用略号： ＡＧ−ａｌｐｈａ−１：Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来のα−アグルチニンを 発現する遺伝子。

ａｍｐ　：β−ラクタマーゼ耐性遺伝子。

ＰＧＫｐ・ホスホグリセレートキナーゼプロモーター。

ＰＧＫｔ：同遺伝子のターミネータ−０第３図はバッチ培養の間にｐｓＹ１３で 形質転換したΣユｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ　ＭＴ３０２／ＩＣ細胞及び培養液のα −ガラクトシダーゼ活性を示す。

Ａ：単位時間当たりのＵ／１α−ガラクトシダーゼ。０Ｄ５３Ｇも示す。

Ｂ：Ｕ１０Ｄ５３Ｇで表わした遊離及び結合酵素のα−ガラクトノダーゼ活性。

第４図はバッチ培養の間にｐＵＲ２９６９で形質転換しび培養液のα−ガラクト シダーゼ活性を示す。

Ａ：単位時間当たりのＵ／′１α−ガラクトシダーゼ。０Ｄ５３Ｇも示す。

Ｂ　：　Ｕ　／　ＯＤ　５３０で表わした遊離及び結合酵素のα−ガラクトシダ ーゼ活性。

第５図は指数増殖期の細胞（ＯＤｓｓｏ＝２）の細胞外画分を抗α−ガラクトシ ダーゼ血清でウェスタン分析した結果を示す。分析した画分はいずれも４ｍｇ細 胞壁（新鮮重量）に相当する。

Ａ・α−ガラクトシダーゼを発現させるＭＴ３０２／ＩＣ。

レーン１；増殖培地 レーン２；単離した細胞壁のＳＤＳ抽出物レーン３　；　ＳＤＳ抽出細胞壁のグ ルカナーゼ抽出物Ｂ：α−Ｇａｌ−ＡＧα１融合タンパク質を発現させるＭＴ３ ０２／ＩＣ。

レーン１：増殖培地 レーン２：単離した細胞壁のＳＤＳ抽出物レーン３；ＳＤＳ抽出細胞壁のグルカ ナーゼ抽出物レーン４；Ｅｎｄｏ−Ｈ処理したグルカナーゼ抽出物第６図はα− Ｇａｌ−α−アグルチニン融合タンパク質を発現させる指数増殖期のＭＴ３０２ ／ＩＣ細胞（ＯＤ　ｓ　ｓ−＝２）の免疫蛍光標識（抗α−ガラクトシダーゼ） を示す完全細胞の位相差顕微鏡写真である。

Ａ：概観。

Ｂ、細部。

第７図はｐＵＲ２９７ＯＡ、ｐＵＲ２９７１Ａ、ｐＵＲ２９７２Ａ及びｐＵＲ２ ９７３の構築の概略的説明図である。用いたエンドヌクレアーゼの制限部位を図 示する。ＰＣＲオリゴヌクレオチド配列については本文中で言及する。

使用略号： ＡＧａｌ　ｃｄｓ：α−アグルチニンのコーディング配列。

ａ−ＡＧＧ＝ＡＧａｌ：Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来のα−アグルチニンを 発現する遺伝子。

ａｍｐ　：β−ラクタマーゼ耐性遺伝子。

Ｐｇａ　１７＝ＧＡＬ７　：　ＧＡＬ７プロモーター。

ｌ１ｐｏｌａｓｅ：Ｈｕｍｉｃｏｌａ属のリパーゼ遺伝子。

１ｎｖＳＳ：５ＵＣ２シグナル配列。

ａ−ＭＦ：ブレプローα−接合因子配列。

ａ−ｇ’ａｌ：α−ガラクトシダーゼ遺伝子。

ＬＥＵ２ｄ　：　ＬＥＵ２遺伝子の截頭（ｔ　ｒｕｎｃａ　ｔ　ｅｄ）プロモー ター。

子。

第８図はＧｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕｍ株３３５４２６のリパーゼＢ の完全なコーディング配列を含む断片のＤＮＡ配列を示す（配列番号１１及び１ ２参照）。

成熟リパーゼＢの配列は、図示した配列の９７位のヌクレオチドから始まる。コ ーディング配列は４０位のヌクレオチド（ＡＴＧ）から始まる。

第９図はｐＵＲ２９７５及びｐＵＲ２９７６の構築の概略的説明図である。用い たエンドヌクレアーゼの制限部位を示す。

使用略号： ａ−ＡＧＧ：Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来のα−アグルチニンを発現する遺 伝子。

ａ−ＭＦ：ブレプローα−接合因子配列。

ＬＥＵ２ｄ　：　ＬＥＵ２遺伝子の截頭プロモーター。

］　ｌ１ｐｏｌａｓｅ：Ｈｕｍｉｃｏｌａ属のリパーゼ遺伝子。

１ｉｐａｓｅＢ：Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕｍのリパーゼＢ遺伝子 。

第１０図はｐＵＲ２９８１及びｐＵＲ２９８２の構築の概略的説明図である。用 いたエンドヌクレアーゼの制限部位を示す。

使用略号： ａ−ＡＧＧ＝ＡＧ−ａｌｐｈａｌ：Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ由来のａ−アグ ルチニンを発現する遺伝子。

ｍｕｃｏｒ　１ｉｐａｓｅ：Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅ　ｉのリパーゼ 遺伝子。

２ｕ：２μｍ配列。

Ｐｇａ　Ｉ　７＝ＧＡＬ７　：ＧＡＬ７プロモーター。

１ｎｖｓｓ　：　５ＵＣ２シグナル配列。

３−ＭＦ：ブレプローα−接合因子配列。

１ｉｐｏｌａｓｅ：Ｈｕｍｉｃｏｌａ属のリノく一ゼ遺伝子。

ａｍｐ　：β−ラクタマーゼ耐性遺伝子。

ＬＥＵ２ｄ　：　ＬＥＵ２遺伝子の截頭プロモーター。

ＬＥＵ２　完全なプロモーター配列を伴ったＬＥＵ２遺伝子。

第１１図はＦＬＯＩ遺伝子の８９４アミノ酸コーディング部のＤＮＡ配列（２６ ８５塩基）を示す（配列番号２１及び２２参照）。図示した配列は、最初のアミ ノ酸のコドンで始まり、終結コドンで終わる。

第１２図はプラスミドｐＵＲ２９９０を示す概略的説明図である。図中に記した クローニング手順に関連するエンドヌクレアーゼの幾つかの制限部位を示す。

第１３図はプラスミドｐＵＲ７０３４を示す概略的説明図である。

第１４図はプラスミドｐＵＲ２，９７２Ｂを示す概略的説明図である。

第１５図はｌ１ｐｏｌａｓｅ／α−アグルチニン融合タンパク質を発現させる指 数増殖期の５ＤＩＯ細胞（ＯＤ。

、＝０．５）の免疫蛍光標識（抗１ｉｐｏｌａｓｅ）を示す。

Ａ：位相差顕微鏡写真。

Ｂ：整合蛍光顕微鏡写真。

発明の詳細な説明 本発明は、酵素を固定化する方法であって、組み換え体ＤＮＡ技術を用いて酵素 または酵素の機能部を宿主細胞、好ましくは微生物細胞の細胞壁に固定化するこ とを含む方法を提供する。特に、酵素または酵素の機能部を、細胞壁への固定を 保証するタンパク質のＣ末端部に、酵素が細胞表面上または細胞表面の僅かに上 方に位置するように結合する。このようにして酵素を細胞の表面に固定化する。

上記結合は遺伝子レベルで行ない、この遺伝子レベルの結合は、酵素をコードす る構造遺伝子をアンカータンパク質をコードする遺伝子の少なくとも一部に、発 現産物において酵素のＣ末端がアンカータンパク質のＣ末端部に結合するように 結合させるという特徴を有する。好ましくはキメラ酵素の上流に、キメラタンパ ク質の効率的な分泌を保証するシグナル配列を配置する。

即ち本発明は、触媒活性を具えたタンパク質をコードする構造遺伝子と、真核ま たは原核細胞の細胞壁に固定し得るタンパク質をコードする遺伝子の少なくとも 一部分とを含む組み換え体ポリヌクレオチドを提供し、その際前記一部分は前記 固定（即ちアンカー）タンパク質の少なくともＣ末端部をコードする。アンカー タンパク質のＣ末端部の長さは様々であり得る。この構造タンパク質の全体を用 いることは可能であるが、一部しか用いない方が好ましく、その場合細胞を取り 巻く培地中での酵素タンパク質のより効率的な暴露が実現する。アンカータンパ ク質の固定部は、好ましくはその全体が存在するべきである。−例として、アン カータンパク質のＣ末端部のおよそ半分を用い得る。

好ましくは、上記ポリヌクレオチドは更に、該ポリヌクレオチドの発現産物の分 泌を保証するシグナルペプチドをコードする配列も含む。シグナルペプチドはＧ ＰＩアンカータンパク質、α因子、α−アグルチニン、インベルターゼもしくは イヌリナーゼ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ属のα−アミラーゼ、または乳酸菌のプロティ ナーゼに由来し得る。

細胞壁に固定し得るタンパク質は好ましくは、α−アグルチニン、ＡＧＡｌ、Ｆ ＬＯＩ　（凝集タンパク質）、下等真核生物の主要細胞壁タンパク質、及び乳酸 菌のプロティナーゼの中から選択する。本発明のポリヌクレオチドは好ましくは 、プロモーター、好ましくは調節可能なプロモーターで特に誘導可能なプロモー ターに作動的に連結されている。

本発明は、上述のポリヌクレオチドを含む組み換え体ベクター、及び前記ポリヌ クレオチドまたは前記ベクターを保有する宿主細胞も提供する。オキシドレダク ターゼに関してあり得るような、触媒活性を具えたタンパク質がマルチマー形態 で存在する時にその触媒活性を呈示するという特別の場合には、モノマーのダイ マー化またはマルチマー化が活性の必要条件となり得る。その場合、ベクター及 び／または宿主細胞は触媒活性を具えた同じタンパク質をコードする構造遺伝子 を含む第二のポリヌクレオチドも、この第二のポリヌクレオチドの発現産物の分 泌を保証するシグナルペプチドをコードする配列と組み合わせて有し得、その際 第二のポリヌクレオチドは調節可能なプロモーター、好ましくは誘導または抑制 可能なプロモーターに作動的に連結されている。第一のポリヌクレオチドの発現 及び分泌の後に第二のポリヌクレオチドの発現及び分泌が起こることによって、 細胞壁の外側に活性なマルチマーが生成する。

宿主細胞または微生物は先に述べた本発明のポリヌクレオチドを、または組み合 わせの場合は上記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも一つを、好ましくはその 染色体中に組み込まれた状態で保持する。

本発明は特に、非常に安定な細胞壁を有し、かつ細胞壁に固定されていることが 知られているタンパク質、例えばα−アグルチニンや遺伝子ＦＬＯＩの産物を有 する酵母のような下等真核生物に係わる。適当な酵母は、Ｃａｎｄ　ｉｄａ属、 Ｄｅｂａ　ｒｙｏｍｙｃｅｓ属、Ｈａｎｓｅｎｕｌａｌｊｌ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏ ｍｙｃｅｓ属、Ｐｉｃｈｉａ属及びＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ属に属する。真 菌、特にＡｓｐｅｒｇｉ　Ｉ　Ｉｕｓ属、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属及びＲｈ　 ｉ　ｚｏｐｕｓ属も用い得る。用途によっては原核生物も適用可能である。

酵母の場合、本発明は特に、 ａｏ例えばα因子遺伝子、インベルターゼ遺伝子、α−アグルチニン遺伝子また はイヌリナーゼ遺伝子に由来するシグナル配列と、 ｂ、α−ガラクトシダーゼ、プロテアーゼ、ペプチダーゼ、ペクチナーゼ、ペク チルエステラーゼ、ラムノガラクッロナーゼ、エステラーゼ及びリパーゼなどの 加水分解酵素、またはオキシダーゼなどの非加水分解酵素をコードする構造遺伝 子と、 Ｃ１α−アグルチニン（参考文献４参照）、ＡＧＡＩ（参考文献５参照）及びＦ ＬＯＩ　（本願出願前未公表の参考文献６参照）などの典型的な細胞壁結合タン パク質のＣ末端と から成るキメラ酵素をコードする遺伝子に係わる。

このような遺伝子の発現は構成プロモーターの制御下に置くことができるが、プ ロモーターは、５ａｃｃｈａｒ。

ｍｙ　ｃ　ｅ　ｓ属ではＧＡＬ７プロモーター、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙ　ｃ　ｅ 　ｓ属ではイヌリナーゼプロモーター、Ｈａｎｓｅｎｕｌａ属ではメタノール− オキシダーゼプロモーターといった調節可能な、即ち抑制または誘導可能なプロ モーターの方がより好ましい。

構築物は好ましくは、新しい遺伝情報が宿生細胞の染色体中に安定に組み込まれ るように形成される。

本発明は、上述のキメラタンパク質が細胞壁に固定化された宿主細胞、特に微生 物も提供する。本発明はまた、そのような微生物の、酵素の基質を当該微生物と 接触させることによる酵素処理の実施への使用も提供する。前記処理は、例えば 充填カラム内で微生物を固体粒子に支持させて実施するか、または反応容器内で 攪拌下に実施し得る。反応は水性であっても非水性であってもよい。必要であれ ば、酵素の機能に必要な添加物、例えば補因子を反応媒質中に導入し得る。

自然に固定化された酵素系を処理において繰り返し用いると、系の性能が低下す る恐れが有る。これは、酵素が物理的に変性するか、または化学的に有毒化した り、脱着したりすることによる。本発明は特に、使用した系を反応媒質から単な る遠心または膜濾過技術によって回収できること、及びそのようにして集めた細 胞を回復媒質に移し得、この媒質中で細胞は急速に再生し、それと共にキメラタ ンパク質が生成し、このようにして細胞の表面が完全に活性な固定化酵素によっ て覆われることが保証されることを特徴とする。上記再生法は単純かつ安価であ り、従って酵素処理の経済性を改善し、固定化酵素系に基づ（処理の用途をはる かに拡張し得る。

しかし、本発明は決して固定化酵素の再利用性に限定されない。

本発明を、本発明の範囲を限定しない以下の実施例によって詳述する。

実施例Ｉ Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの表面に固定したα−ガラクトシダーゼ／α−アグ ルチニン α−アグルチニンをコードする遺伝子についてはＬｉｐｋｅ等が述べている（参 考文献４参照）。ＡＧα１遺伝子の全体を含む、ｐＴＺ１８Ｒ中の６０５７ｂｐ のＨ４ｎｄ■挿入体の配列を第１図に示す。コーディング配列は６５０アミノ酸 を越えて伸長し、３６５３位のヌクレオチドからＡＴＧをもって始まる推定シグ ナル配列を含む。非反復Ｎｈｅ１部位がこのＤＮＡを、アミノ酸３３０をコード する部分内で上記コーディング配列の９８８位において切断し、それによってα −アグルチニンをほぼ同寸法のＮ末端部とＣ末端部とに分割する。

ｐＵＲ２９６８（第２図参照）をＮｈ　ｅ　Ｉ／Ｈｉ　ｎ　ｄｍで消化すること によって、推定される細胞壁アンカーの配列情報を担った１、４ｋｂ断片を放出 させた。α−ガラクトシダーゼへの融合のために、５ＵＣ２インベルタ一ゼシグ ナル配列に後続するα−ガラクトシダーゼ配列を含む、ＹＥｐｌａｃ１８１に基 づくエピソームベクターであるプラスミドｐｓＹ１６を用い、これを構成ＰＧＫ プロモータトシダーゼ遺伝子の読み取り枠の最後の９塩基対中に存在するΣ±Ｖ Ｉ部位をＡＧα１遺伝子断片のＮ　ｈ　ｅ　１部位に連結した。枠内融合を確実 にするため、５ｔｙＩ／Ｈｉｎ填し、かつＮｈｅ工部位の５′オーバーハングを 除去した（第２図参照）。

新しいプラスミドの適正構築を確認するため、大腸菌Ｊシャトルベクターで、Ｃ ｈｕｎｇ等が述べている形質転換プロトコル（参考文献８参照）により形質転換 した。陽性クローンのうちの、記号ｐＵＲ２９６９を付した一つを更に特性付け 、ＤＮＡをＱｕ　ｉ　ａｇｅｎプロトコルに従って単離及び精製し、そのｌ＆Ｄ ＮＡ配列決定によって特性付けた。ＤＮ、Ａ配列決定は主としてＳａｎｇｅ　ｒ 等（参考文献９参照）及びＨｓｉａｏ（参考文献１０参照）が述べているように して行ない、その際ここではＴ７　ＤＮＡポリメラーゼ（Ａｍｅｒｓｈａｍ　Ｉ ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌｐｌｃ）及び［３５ＳコｄＡＴＰａｓ　（Ａｍｅｒｓ ｈａｍＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ｐｌｃ：３７０　ＭＢＱ／ｍｅ：２２　Ｔ Ｂｑ／ｍｍｏｌ）を用いるプロトＤ　／ｌ／　ニ従いＵｎｉｔｅｄ　５ｔａｔｅ ｓ　ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａＩ　Ｃｏｍｐａｎｙの５ｅｑｕｅｎａｓｅバージヨン ２゜０キツトを用いた。

次に、このプラスミドでＳ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ株ＭＴ３０２／Ｉ　Ｃを、 Ｋｌｅｂｅ等のプロトコル（参考文献１１参照）に従って形質転換した。

酵母形質転換細胞を、ロイシンを存在させない選択プレート上に４０μｌ　（Ｄ ＭＦ　２０ｍｇ／ｍｎ）載せて選択した。Ｘ−α−Ｇａｌ（５−ブロモ−４−ク ロロ−３−インドリル−ａ−Ｄ−グルコース；ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＭａｎｎｈ ｅｉｍ）を塗り広げ、α−ガラクトシダーゼ活性について直接試験した（参考文 献１２参照）。キメラタンパク質の発現、分泌、局在及び活性を証明するべく、 次の分析を行なった。

ラクトシダーゼ遺伝子を含むプラスミドｐｓＹ１３か、またはα−ガラクトシダ ーゼ／α−アグルチニン融合構築物を含むプラスミドｐＵＲ２９６９で形質転換 した。バッチ培養の間α−ガラクトシダーゼ活性を、洗浄した細胞と増殖培地と において測定した。結果を第３図及び第４図に示す。プラスミドｐｓＹ１３を保 持する酵母細胞から発現されたα−ガラクトシダーゼは大部分が専ら増殖培地中 に存在した（第３図のＡ）が、α−ガラクトシダーゼ−α−アグルチニン融合タ ンパク質の方は大部分が専ら細胞に結合していた（第４図のＡ）。そのうえ、固 定化された、細胞壁に結合したα−ガラクトシダーゼ−α−アグルチニン融合酵 素は全インキュベーション時間にわたって完全な活性を維持したが、分泌及び放 出された酵素は６５時間のインキュベーション後に約９０％の活性を失った。こ のことは、上述の酵素を酵母の細胞壁に固定化すれば該酵素を、おそら（はプロ テイナーゼによる不活性化から保護することになり、それによって安定性が著し く向上することを示している。更に、様々な遺伝子産物の局在に関してウェスタ ン分析により考察した。即ち、細胞を遠心によって集取し、０℃においてｐＨ７ ，８の１０ｍＭ）リス−ＨＣｌ、及び１ｍＭ　ＰＭＳＦで洗浄し、後の諸ステッ プは前記と同じ温度で実施した。細胞１ｇ（湿潤重量）当たり３　ｍ　ｌの単離 緩衝液と１０ｇのガラスピーズとを添加した。混合物をＧｒｉｆｆｉｎ振盪機に おいて、該振盪機の最高速度の５０％の速度で３０分間振盪した。上清を単離し 、ガラスピーズをＩＭＮａＣＩ及び１ｍＭ　ＰＭＳＦで洗液が澄むまで洗浄した 。上清及び洗液をプールした。細胞壁を遠心によって回収し、その後１ｍＭ　Ｐ ＭＳＦで洗浄した。

２％　ＳＤＳ、１００ｍＭ　ＥＤＴＡ及び４０ｍＭ　β−メルカプトエタノール を含有するｐＨ７，８の５０ｍＭトリス・ＨＣｌ中での５分間の煮沸によって細 胞壁に、共有結合以外で結合したタンパク質、またはジスルフィド架橋を介して 結合したタンパク質を放出させた。１０ｍｇ（湿潤重量）の細胞壁を、１ｍＭ　 ＰＭＳＦを含有するｐＨ５，０の１００ｍＭ酢酸ナトリウム２ＯＮ中に取り上げ た。これに０．５ｍＵのβ−１，３−グルカナーゼ（Ｌａｍｉｎａｒａｓｅ；Ｓ ｉｇｍａ　Ｌ５１４４）を添加し、続いて３７℃で２時間インキュベートした。

その後、再び０．５ｍＵのβ−１，３−グルカナーゼを添加してから３７°Ｃで 更に２時間インキュベートした。

タンパク質を、５分間煮沸してからＥｎｄｏ−Ｈ処理を施すことによって変性さ せた。２ｍｇのタンパク質を、１００　ｍ　Ｍ　β−メルカプトエタノール及び ０．５ｍＭＰＭＳＦを含有するｐＨ５，５の５０ｍＭリン酸カリウム１ｍｅ中で ４０ｍＵのＥｎｄｏ−Ｈ（Ｂｏｅｈｒ　ｉｎｇｅｒ）と共に３７℃で４８時間イ ンキュベートした。その後、２０ｍＵのＥｎｄｏ−Ｈを添加してから３７℃で２ ４時間インキュベートした。

タンパク質を、２．２−２０％勾配ゲルにおいてＬａｅｍｍｌｉ（参考文献１３ 参照）に従い５ＤＳ−ＰＡＧＥによって分離した。ゲルを、Ｔｏｗｂ　ｉ　ｎ等 が述べている■ｍｍｏｂｉｌｏｎポリビニリデンージフルオリド膜（Ｍｉｌｌｉ ｐｏｒｅ）上への電気泳動転移によってブロッティングした（参考文献１４参照 ）。高度にグリコリル化したタンパク質の場合は、その後、５０ｍＭ過ヨウ酸、 ｐＨ４゜５の１００ｍＭ酢酸ナトリウム中で４℃で数時間、温和な過ヨウ酸塩処 理を施した。後のインキュベーションは総て室温で行なった。プロットを、０． ５％のゼラチン及び０゜５％のＴｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳ中で１時間ブ ロックし、続いて１：２００に稀釈した血清を含有するプローブ緩衝液（ＰＢＳ ；　０．２％ゼラチン、０，１％Ｔ　ｗ　ｅｅｎ−２０）中で１時間インキュベ ーションを行なった。

その後、プロットを洗浄緩衝液（ＰＢＳ；　０．２％セラチン、０５％Ｔｗｅｅ ｎ−２０）中で数回洗浄し、続いて１２５１標識タンパク質Ａ（Ａｍｅｒｓｈａ ｍ）を含有するプローブ緩衝液中で１時間インキュベーションを行なった。洗浄 緩衝液中で数回洗浄後、プロットを風乾し、Ｓａｒａｎ（Ｄｏｗ）に包み、これ を用いて一７０℃において、増感スクリーンを具備したＸ−ｏｍａｔＳフィルム （Ｋｏｄａｋ）を露光した。Ｏｍｎｉｍｅｄｉａ　６ｃｘスキヤナ及びＡｄｏｂ ｅ　Ｐｈｏｔｏｓｈｏｐプログラムを用いて、標識されたタンパク質を定量した 。両形質転換細胞からタンパク質を単離した様々な操作の結果を第５図に示す。

プラスミドｐｓＹ１３を保持する形質転換細胞の場合、酵素は全般に培地中に局 在し、その際少量の酵素のみが細胞壁に、結合したというよりは捕捉された（第 ５図のＡ）−この酵素はＳＤＳ抽出によって完全に除去可能−が、融合タンパク 質の方は細胞壁に強固に結合し、少量のα−ガラクトシダーゼ／α−アグルチニ ンのみが周囲の培養液中に放出され、またはＳＤＳ抽出可能であった。遊離α− ガラクトシダーゼを発現させる細胞からの細胞壁のラミナリナーゼ抽出ではそれ 以上の酵素解離は観察されなかったことに対して、融合酵素発現細胞に同じ処理 を施すと融合酵素は全般に解離した。このことは、融合タンパク質はα−アグル チニン同様−ミュ　ｃｅｒｅｖｉｓ　ｉａｅの細胞壁グルカンと強固に結合する が、α−ガラクトシダーゼ単独ではそのようなことはないということを示してい る。後から行なったＥｎｄｏ−Ｈ処理は融合タンパク質の著しいグリコジル化を 示したが、これは先に説明した、α−アグルチニンのＣ末端部の拡大グリコジル 化と完全に一致する結果で抗α−ガラクトシダーゼ血清での免疫蛍光標識を完全 細胞に対して行ない、それによって細胞壁におけるα−ガラクトシダーゼ／α− アグルチニン融合タンパク質の存在及び分布を測定した。免疫蛍光標識は、Ｗａ ｔｚｅｌｅ等による固定（参考文献５参照）はせずに行なった。ＯＤ、。

＝２の細胞を単離し、ＴＢＳ　（１４０ｍＭ　ＮａＣ＋、５ｍＭ　ＥＤＴＡ及び ２０ａｇ　／　ｍ　１シクロへキシミドを含有するｐＨ７，８の１０ｍＭ）リス ・ＨＣＩ）中で洗浄した。細胞をＴＢＳ十抗α−ガラクトシダーゼ血清中で１時 間インキュベートし、続いてＴＢＳ中で数回洗浄した。その後、ＦＩＴＣと結合 させた抗ウサギＩ　ｇＧ　（Ｓ　ｉ　ｇｍａ）を添加して３０分間、インキュベ ーションを行なった。ＴＢＳ中で洗浄後、細胞を、ｌ　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌのｐ −フェニレンジアミン及び０．１％のアジドを含有するｐＨ９，０の１０ｍＭト リス−ＨＣｌ中に取り、Ｚｅｉｓｓ　６８０００顕微鏡において写真撮影した。

この分析の結果を示す第６図からは、α−ガラクトシダーゼ／α−アグルチニン キメラが酵母細胞の表面に局在することが明らかである。非常に小さいものまで 非常に均一に標識された様々な大きさのパッド（ｂｕｄｓ）が、融合酵素が全細 胞周期を通じて連続的に細胞壁中に取り込まれ、かつ瞬時に強固に結合すること を明示している。

３、活性 α−ガラクトシダーゼ活性を定量的に評価するべく、ｐＨ４，５の０．１Ｍ酢酸 ナトリウム及び１０ｍＭ　ｐ−−−トロフェニル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド （Ｓ　ｉ　ｇｍａ）を含有する２００μ！試料を３７℃で正確に５分間インキュ ベートした。１ｍｎの２％炭酸ナトリウムの添加によって反応を停止させた。先 に述べたように遠心によって分離し、かつ単離及び洗浄した完全細胞及び細胞壁 からα−ガラクトシダーゼ活性を、４１０ｎｍにおいて１８．４ｃｍ２／ｍｏｌ であるｐ−ニトロフェノールの消衰係数を用いて算出した。１単位を、３７℃に おける１分間当たりの基質１μｍｏ＋の加水分解と定義した。

表１．酵母細胞における遊離及び固定化α−ガラクトシダーゼ活性の分布α−ガ ラクトシダーゼ　１４．７　０．３７　０．０１ａ　Ｇａｌ／　ａ＾ＧＧ融合タ ンパク質　０．５４　１３．３　１０．９ける１分間当たりのｐ−ニトロフェニ ル−α−Ｄ−ガラクトピラノシド１μＩＩｏｌの加水分解と定義する。

結果を表１にまとめる。大部分のα−ガラクトシダーゼは培養液中に分布し、一 方融合物はそのほとんどが細胞、主として細胞壁に結合していた。第３図〜第６ 図及び表１に示した結果を勘案すれば、キメラ酵素の酵素α−ガラクトシダーゼ 活性は遊離酵素のものに劣らないと推測できる。

そのうえ、定常期の間に増殖培地中のα−ガラクトシダーゼの活性は低下したが 、細胞壁に結合したα−ガラクトンダーゼ／α−アグルチニン融合タンパク質の 活性は不変のままであり、このことは細胞に結合した融合タンパク質が失活また はタンパク質分解から保護されることを示している。

注記：本実施例の主旨は優先権主張年中にＭ、Ｐ、５ｃｈｒｅｕｄｅｒ等によっ て公表された（参考文献２５参照）。

プラスミドｐＵＲ７０２１は、市販ベクターｐＴＺ１８Ｒドする合成りＮＡ断片 （参考文献１６並びに配列番号７及び８参照）を含む（第７図参照）。成熟リパ ーゼをコードするＤＮＡ部分の５′末端と３′末端との両方を１ステツプで適正 に改変するのにＰＣＲ技術を適用し得る。従って、標準的ＰＣＲプロトコルにお いてＤＮＡオリゴヌクレオチドＩｊｐｏｌ（配列番号３参照）及びＩ　１ｐｏ２ 　（配列番号６参照）をプライマーとして用いて、両末端にＥａｇＩ制限部位及 びＨｉｎｄＩ［Ｉ制限部位をそれぞれ有する長さ８２６ｂｐのＤＮＡ断片を生じ させ得、この断片を、本明細書中で先に述べたインベルターゼシグナル配列に後 続するα−ガラクトシダーゼ遺伝子を含むプラスミドであるＥａｇ　Ｉ　／　Ｈ ｉ　ｎ　ｄ　ｍ消化ｐＵＲ２６５０の大きい方の部分と組み合わせることにより プラスミドｐＵＲ２９７ＯＡを生じさせ得る（第７図参照）。

Ｈｕｍｉｃｏｌａ属リパーゼとα−アグルチニンのＣ末端との枠内連結のための ＰＣＲオリゴヌクレオチド ａ、　５ＵＣ２シグナル配列とリパーゼのＮ末端との間の転移（ｔ　ｒａｎｓ　 ｉ　ｔ　１ｏｎ）のためのＰＣＲオリゴヌクレオチド 〉成熟リパーゼ （非ニーディング鎖；配列番号４参照）ｂ、リパーゼのＣ末端とα−アグルチニ ンのＣ末端部との間の枠内転移のためのＰＣＲ−アグルチニンのＣ末端部をコー ドするＤＮＡとの枠内連結を可能にする。そうすれば、プラスミドｐＵＲ２９７ ０ＡをＮｈｅＩ及び）（ｉｎｄｍで消化し得、プラスミドｐＵＲ２９６８に由来 する、α−アグルチニンのＣ末端部を含い方の部分と組み合わせてプラスミドｐ ＵＲ２９７１Ａを■で処理したｐＵＲ２７４１中に連結し得、その際プラスリパ ーゼ／α−アグルチニンキメラ遺伝子、２μｍ配列、細胞ハ、リパーゼ／α−ア グルチニンキメラ遺伝子の発現を惹起する誘導物質としてガラクトースを抑制量 のグルコースの不在下に含有するＹＰ培地中で培養することができる。

リパーゼ／α−アグルチニンキメラの発現、分泌、局在及び活性の分析は、実施 例１に述べたのと同様の操作を用いて可能である。

同様にして、ｒＤＮＡ技術を介して得られるＨｕｍｉｃｏｌａ属リパーゼの変異 体（ｖａｒｉａｎｔｓ）をα−アグルチニンのＣ末端部に結合することも可能で あり、前記変異体はエステル化反応またはエステル交換反応の間、より高い安定 性を有し得る。

実施例２Ａでは、特定構築物を製造するプロトコルを説明する。研究を行なう前 、本実施例２Ｂでの構築手順が実施例２Ａでの構築手順と僅かな点でしか異なら ず、しかも得られるプラスミドは実施例２Ａに述べたものと同等でないように実 施例１に述べた発現ベクターを用いることが好ましいと考えられた。しかし、プ ロモーターと、シグナル配列と、融合タンパク質をコードする構造遺伝子とを含 む実質的な遺伝子構築物は実施例２Ａと実施例２Ｂとで同じα−アグルチニン細 胞壁タンパク質のＣ末端部をコードすることによって、（実施例２ＡのｐＵＲ７ ０２１に類似する）プラスミドｐＵＲ７０３３を調製した（配列番号７及び８並 びに参考文献１６参照）。

リパーゼをα−アグルチニンのＣ末端の、細胞壁アンカーを含む領域に融合させ るために、プラスミドｐＵＲ７０酵母発現ベクターｐｓＹ１　（参考文献２７参 照）中に連結し、それによってｐＵＲ７０３４を生じさせた（第１３図口モータ ーの制御下にインベルターゼ（ＳＵＣ２）シグナル配列に後続するα−ガラクト シダーゼ遺伝子を含む２μｍエピゾーム発現ベクターである。

ルボキシル末端アミノ酸のためのコドンを有する長さ５７ｂｐのＤＮＡ断片を解 離させた。この断片を配列番号９及び１０の、化学的に合成した２個のデオキシ オリゴヌクレオチドのハイブリダイゼーションによって生じさせた小さいＤＮＡ 断片に対して交換した。両ＤＮＡ鎖のアニーリング後、これら２個のオリゴヌク レオチドは最初のリパーゼ遺伝子の３′コーディング配列の残部を実質的に再構 成するが、リパーゼ遺伝子の下流に新たなＮｈｅＩ制限部位を導入し、これにＨ ｉｎｄｍ部位が近接して続き、その際ＮｈｅＩ部位の最初の３個のヌクレオチド はリパーゼの最後のアミノ酸のコドンを構成する。得られたプラスミドに記号“ ｐＵＲ２９７ＱＢ”を付した。次に、この構築中間体をＥａｇｌ及びＮｈｅｌで 消化し、リパーゼコーディング断片を単離してｐＵＲ２９６８の１．４ｋｂのＮ ｈｅＩ／Ｈｉｎｄｍ断片と共にＥａｇＩ及びＨｉｎｄｍ切断ｐＳＹ１ベクター中 に連結した。この三点連結によって得られた最終的なｌ１ｐｏｌａｓｅ−α−ア グルチニン酵母発現ベクターを“ｐＵＲ２９７２Ｂ”と命名した（第１４図参照 ）。

換細胞を、リパーゼ／α−アグルチニンキメラ遺伝子の発現を惹起する誘導物質 としてガラクトースを抑制量のグルコースの不在下に含有するＹＰ培地中で培養 した。

２、活性 リパーゼ活性を定量するべく、２種の別個の基質に関して２種の活性測定を行な った。いずれの場合も、プラスミドｐＵＲ７０３４またはｐｓＹｌで形質転換し た５ＵＩＯ酵母細胞を対照として用いた。従って、プラスミドｐＳＹ１、プラス ミドｐＵＲ７０３４またはプラスミドｐＵＲ２９７２Ｂを保持する形質転換酵母 細胞を、ヒスチジン及びウラシルを添加したＹＮＢ−グルコース培地中で２４時 間増殖させ、その後５％ガラクトースを添加したＹＰ培地中で１．１０に稀釈し 、再び培養した。３０℃で２４時間のインキュベーション後、上記両アッセイの ための第一の測定を行なった。

適用した第一のアッセイはｐＨスタット法であった。このアッセイではリパーゼ 活性の１単位を、ラジオメーターｐＨスタット装置（ｐＨＭ　８４メーター、Ａ ＢＵ　８０自動ビユレツト、ＴＴＡ　６０滴定アセンブリー）において標準的な アッセイ条件（１：１ｗ／ｗアラビアゴムで乳化した純粋なトリオレエートと看 做される３８ｍＭのオリーブ油と、２０ｍＭの塩化カルシウムと、４０ｍＭの塩 化ナトリウムと、５ｍＭのトリスとを含有する３０ｍ１アツセイ溶液、ｐＨ９， ０，３０℃）下にトリグリセリド基質から毎分１μｍｏｌの脂肪酸を遊離させ得 る酵素量と定義する。生じた脂肪酸を０．０５Ｎ　ＮａＯＨで滴定し、測定した 活性は推定酵素バッチの添加後１〜２分間隔でのアルカリ消費に基づ（ものであ った。固定化リパーゼ活性について試験するべく、ｌ　ｍ　１の各培養物を遠心 し、上清を取り分け、ペレットを１ｍＡ’の１Ｍソルビトール中に再懸濁させて 洗浄し、その後再び遠心し、かつ２００μｌのＩＭソルヒヒトル中に再懸濁させ た。各種の酵母細胞から得た最初の上清及び洗浄した細胞をリパーゼ活性につい て試験した。

Ａ：２４時間後のリパーゼ活性（ＬＵ／真ｌ）結合細胞　培養液 ｐｓＹｌ　５．９　８．８ ｐＵｌｌｉ７０３４　２４．１　６３２．０ｐＵＲ２９７２Ｂ−（１）　１８． ７　５９．６ｐＵＲ２９７２Ｂ−（２）　２４．６　４０．５Ｂ：４８時間後の リパーゼ活性（ＬＵ／ｉ／）結合細胞　培養液　００６６０ ｐｓｙｔ　６．４　４．３　−４０ ｐＵＲ７０３４２１５，０２７５０，０−４０ｐＵＲ２９７２Ｂ−（１）　３７ ．０　８７．０　−４０ｐＵＲ２９７２Ｂ−（２）　３４．０　８２．０　−４ ０残りの酵母培養物を更にインキュベートし、４８時間後に実質的に同じ分離操 作を行なった。測定した初期活性に応じて、測定試料の実際量は２５μｌから１ ５０μｌまで様々とした。

この一連の測定は、リパーゼ−α−アグルチニン融合タンパク質をコードするプ ラスミドを保持する酵母細胞が実際上、酵母細胞に関係付けられる幾分かのリパ ーゼ活性を呈することを示している。

リパーゼの活性が酵母細胞表面に固定化されることを更に確認するべく、付加的 な第二のアッセイを行なった。平炉に言えばこのアッセイでは、ＰＮＰ　（＝バ ラニトロフェニル）のＰＮＰ−ブチレートからの遊離の反応速度を４゜Ｏｎｍに おけるＯＤの測定によって決定する。従って、ｐＳＹＩ、ｐＵＲ７０３４または ｐＵＲ２９７２Ｂを保持する酵母細胞を含有する培養物１０　ｍ　Ａ’を遠心し 、ペレットを４　ｍ　ｌの緩衝液Ａ　（ｐＨ５，０のＯ，ＬＭ　Ｎａ０Ａｃ、及 Ｕ　１　ｍ　Ｍ　Ｐ　Ｍ　Ｓ　Ｆ　）中に再懸濁させ、この４　ｍ　ｌのうちの ５００μｌを再び遠心し、かつ５００μｌのＰＮＢ緩衝液（ｐＨ９，０の２０ｍ Ｍトリス−ＨＣｌ、２０ｍＭＣａＣ１□、２５’ｍＭ　’ＮａＣＩ）中に再懸濁 させ、再度遠心し、最後に４００μｌのＰＮＢ緩衝液中に再懸濁させた。この画 分を用いて、リパーゼの細胞結合部分を測定した。

残りの３５００μｌを遠心し、ペレットを４１ｒＬＩ！のＡ中に再懸濁させ、得 られた各懸濁液に４０μｌのラミナリナーゼ（ｅｘ　ｍｏｌ　Ｉｕｓｃ、１．２ ５ｍＵ／μＡ）を添加し、最初３７℃で３時間、続いて２０℃で一晩インキユベ ートした。次に、完全細胞をなお含有する反応混合物を再び遠心し、上清を用い て、本来細胞壁に結合していたがラミナリナーゼインキュベーションにより遊離 した物質の量を測定した。最終ペレットを４００μｌのＰＮＰ緩衝液中に再懸濁 させ、細胞になお結合している部分を算定した。

４　ｍ　ｌのアッセイ緩衝液に加えた所定量の特定培養物画分のブランク反応を 測定し、その後８０μｌの基質溶液（メタノール中に１００ｍＭ　ＰＮＰ−ブチ レート）の添加によって反応を開始させ、分光光度計において２５℃及び４００ μｍで観察した。

細胞結合　培地中　ラミナリナー七　ラミナリナーゼ活性本　活性　抽出物　抽 出細胞　」以但しｐｓＹｌ　０゜００１（１１６μり　０．００１　０．０２８ 　０．０００　２．６ｐＵＲ７０３４０，２９３（２２０μｌ’）　０．４４６ 　０．０７６　０．９８５　２．３６ｐｌＪＲ２９７２Ｂ−（１）　０．４９４ （１４３μｔ）　０．０２１　０．１７０　０．２０８　２．１０本；特に断ら ないかぎり、添加した酵素溶液の量は２０μｌであった。

この結果は、プラスミドｐＵＲ２９７２Ｂを保持する酵母細胞の表面に相当量の リパーゼ活性が固定化されることを明示している。ここでも、完全細胞の細胞壁 に挿入されたリパーゼによって反応が触媒されるように導入が実現したが、この ことは外向きの固定化を示唆する。そのうえ、ラミナリナーゼと共にインキュベ ートした後に相当量のリパーゼ活性が呈示されることも、α−アグルチニンのＣ 末端部との遺伝子操作融合により異種酵素がおそらくは共有結合によって導入さ れることを明示する。

３　局在 リパーゼ−α−アグルチニン融合タンパク質の発現、分泌、及び酵母細胞壁への その後の導入も、実質的に実施例１の２“局在”に述べた、抗１ｉｐｏｌａｓｅ 血清を用いる免疫蛍光標識によって確認した。

第１５図から知見され得るように、ここでの免疫蛍光染色はα−ガラトシダーゼ 免疫染色と実質的に類似する像を示し、反応性は細胞表面外側に明らかに検出で きる（細胞を取り巻く明瞭な光幅を示す第１５図のＡ１及び細胞表面のより明る い円を示す第１５図のＢ参照）が、培地中や細胞内部には検出できない。ｐＵＲ ２９７２ＢにＨｕｍｉｃｏｌａ属リパーゼ−α−アグルチニン融合タンパク質を 発現させる酵母細胞は表面を均一に染色されるようになり、このことはα−アグ ルチニンＣ末端を有するキメラ酵素の実質的に総てが酵母細胞の外側に固定化さ れたことを示す。

行なった対照実験では、プラスミドｐＵＲ７０３４を保持する５ＵＩＯ酵母細胞 を対照として用い、この実験で適用した抗リパーゼ血清に対する細胞表面結合反 応性は検出できなかった。

同様にして、ｒＤＮＡ技術を介して得られるＨｕｍｉｃｏｌａ属リパーゼの変異 体をα−アグルチニンのＣ末端部に結合することも可能であり、前記変異体はエ ステル化反応またはエステル交換反応の間、より高い安定性を有し得る。

遺伝子を含む約２．２ｋｂの断片を単離することができる。

プラスミドｐｓＹ１６をＥａｇＩ及びＨｉｎｄｍで制限し、前記２酵素の制限部 位間に、リパーゼ／α−アグルチニン断片を含む２．２ｋｂ断片を連結してｐＵ Ｒ２９７３を得ることができる。このプラスミドの、キメラ酵素の産生に関与す る部分はｐＵＲ２９７２に類似し、ただしシグナル配列は異なる。ｐＵＲ２９７ ２は５ＵＣ２インベルタ一ゼシグナル配列を含むが、ｐＵＲ２９７３はα−接合 因子配列を含む（参考文献１８参照）。そのうえ、プラスミドｐＵＲ２９７３は ｐＵＲ２９７２の截頭プロモーターに替えて、完全なプロモーター配列を伴った Ｌｅｕ２マーカー遺伝子を含む。

ＡＧα−１（α−アグルチニン）のＣ末端部を含む１゜４ｋｂのＮｈｅＩ／Ｈｉ ｎｄＩ［断片の構築及び単離は実施例１に述べた。α−アグルチニンのＣ末端膜 アンカーをコードするＤＮＡの、株ＣＭＩＣＣ３３５４２６に由来するＧｅｏｔ ｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕｍリパーゼＢの完全コーディング配列への枠内遺 伝子融合（第８図並びに配列番号１１及び１２参照）のためにプラスミドｐＵＲ ２９７４を用い得る。市販のｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ　ｌｌ５Ｋプラスミドに由 来するこのプラスミドは長さ１８５０（第９図参照）。

ＢのＮ末端を標準的な技術で実験により決定した。得られたアミノ酸配列”Ｇｌ ｎ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａ　ｌ　−−・・・−・”　は、Ｇ、 　ｃａｎｄｉｄｕｍリノく−ゼ■のシグナルペプチダーゼ切断部位と完全に一致 する（参考文献１９参照）。

成熟リパーゼＢを、一方では５ＵＣ２（インベルターゼ）またはα−接合因子（ プレプローαＭＦ）の−＄エ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅシグナル配列に融合させ、 他方ではＡＧα１遺伝子の３′末端部に枠内融合させるのにＰＣＲ技術を用い得 る。ＰＣＲプライマー］１ｐｏ３（配列番号１３参照）は、（成熟タンパク質の コドン５〜７にわたる）コーディング配列の５′末端部に本来存在するＥａｇＩ 部位がアミノ酸配列を同等変化させることなく不活性となるように構築すること ができる。後のクローニング操作を容易にするべく、ＰＣＲプライマーの５′末 端に、５ＵＣ２シグナル配列やプレプロ−αＭＦ配列への枠内連結のための新Ｐ ＣＲプライマー１ｉｐｏ４（配列番号１６参照）は、リパーゼＢのＣ末端をコー ドするヌクレオチドの後方に位置する余分なＮｈｅＩ部位を含み、それによって α−アグルチニンのＣ末端部への適正な融合を確実化する。

（非ニーディング鎖；配列番号１４参照）ｂ、α−アグルチニンのＣ末端部への Ｃ末端融合５ＮＦＥＴＤＶＮＬＹＧ （リパーゼコーディング鎖の部分に関しては配列番号１５参照）改変された末端 を有するＰＣＲ産物は、やはり校正活性を示してエラーの無いＤＮＡ鋳型を保証 する新規な熱安定性ＶＥＮＴポリメラーゼを通常のＡｍｐｌｉ−Ｔａｑポリメラ ーゼの替わりに用いて標準的なＰＣＲプロトコルにより生成させ得る。先に述べ たプラスミドｐＵＲ２９７２を−ドするＤＮＡ断片に対し交換し、それによって 最終的なを調製することができる（第９図参照）。

先に述べたベクターｐＵＲ２９７３をＥａｇＩ／ＨｉｎｄＩ［［で消化すること によりＨｕｍｉｃｏｌａ属リパーゼ−α−アグルチニン融融合タンパクココ−デ ィング配列上述のリパーゼＢ／α−アグルチニン融合構築物に対し交換すれば、 ｐＵＲ２９７６が得られる（第９図参照）。

実施例５ Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの表面に固定化したＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅ ｈｅｉリパーゼ／α−アグルチニンα−アグルチニンのＣ末端部をコードする１ 、４ｋｂのＮｈｅＩ／Ｈｉｎｄｍ断片の構築及び単離は実施例１に述べた。プラ スミドｐＵＲ２９８０は市販のｐＵＣ１８の旦ｍａＩ部位にクローニングされた １、２５ｋｂのｃＤＮＡ断片を含み、（人工的な合成可能な）この断片は、トリ アンルグリセロールをエステル交換する（参考文献２１参照）か、またはバイオ サーファクタントを製造する（参考文献２２参照）幾つかの方法において用いら れる酵素であるＲｈｉｚｏｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅｉのトリグリセリドリパーゼ の完全なコーディング配列をコードする（参考文献２０参照）。この断片は成熟 リパーゼ分子の２６９コドンの外に、２４アミノ酸シグナルペプチドのためのコ ドン、並びにプロペプチドの７０アミノ酸のためのコドンも含む。

易に適用し得る。次の２個のプライマー１ｉｐｏ５（配列番号１７参照）及び］ １ｐｏ６（配列番号２ｏ参照）は８３３ｂｐのＤＮＡ断片をもたらし、この断片 はブロティナプラスミドｐＵＲ２９７２及びｐＵＲ２９７３それぞれにクローニ ングすることができる（第７図参照）。

（リパーゼ非ニーディング鎖の部分に関しては配列番号１８参照）ＴＧＬＣＴ これらの新規な一ミュ　ｃｅｒｅｖｉｓ　ｉａｅ発現プラスミドはＧＡＬ７プロ モーターと、インベルターゼシグナル配列（ｐＵＲ２９８１）またはブレブロー α−接合因子配列（ｐＵＲ２９８２）と、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅｉ リパーゼ／α−アグルチニンキメラ遺伝子と、２μｍ配列と、欠陥（截頭）Ｌｅ ｕ２プロモーターと、Ｌｅｕべたプロトコルを用いて分析することができる。

実施例６ Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅの表面に固定化したＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉ ｇｅｒグルコースオニーダーゼ／ＧＰＩ固定細胞壁タンパク質 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ由来のグルコースオキシダーゼ（β−り、 酸素１−オキシドレダクターゼ；ＥＣ１，１，３，４）は、β−Ｄ−グルコース のグルコノ−δ−ラクトンへの酸化とそれに伴う酸素分子の過酸化水素への還元 とを触媒する。この真菌酵素は、強固に結合した２個のＦＡＤ補因子を含む分子 量１５０．０００のホモダイマーから成る。この酵素はグルコース検出キットで 用いられるほか、食物の保存における過酸化水素源として有用でもある。遺伝子 はｃＤＮＡとゲノムライブラリーとの両方からクローニングした。ただ１個の読 み取り枠は介在配列を含まず、６０５アミノ酸のタンパク質をコードする（参考 文献２３参照）。

２個の適正なオリゴヌクレオチドを用いて、配列のコーディング部をＰＣＲでの ワンステップ改変操作において、グルコースオキシダーゼ、並びにＦＬＯＩ遺伝 子産物またはα−−アグルチニンＣ末端細胞壁アンカーをコードする融合遺伝子 産物が得られるように調節する。即ち、先の諸実施例に述べたプラスミドのうち の幾つかを用いて対応する配列を、先の諸実施例で用いたシグナル配列のうちの 一つとＡＧα１遺伝子のＮｈｅＩ／Ｈｉｎｄｍ部分との間に枠内で組み込むこと ができる。

２個のモノマーのダイマー化が活性の必要条件となり得るので、別のアプローチ ではＧＰＩアンカーを伴わないグルコースオキシダーゼのための完全なコーディ ング配列を、融合構築物を既に保持するＳ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ形質転換細 胞において発現させ得る。このような発現は、ＧＰＩアンカーを有する融合構築 物の、例えばＧＡＰＤＨまたはＰＧＫプロそ一ターの補助下での構成発現によっ て実現し得る。例えばＧＡＬ７プロモーターなどの誘導可能なプロモーターを含 むＤＮＡ構築物を用いることにより、固定しない未結合モノマーを製造すること が可能である。

プラスミドｐＵＲ２９６９で形質転換した酵母は大規模に培養できる。培養の間 一定の時間間隔で、洗浄した細胞をその表面におけるα−ガラクトシダーゼ活性 の存在に関し、実施例１に述べた方法で分析するべきである。細胞密度と単位生 物量当たりのα−ガラクトシダーゼ活性との両方がその最大値に達したら、酵母 細胞を遠心によって回収し、洗浄し得る。洗浄した細胞はダイズ抽出物に添加し 得る。酵母細胞の最終濃度は０　１ｇ／ｌから１０ｇ／ｌまでとし得るが、好ま しくは前記濃度は１ｇ／ｌを上回るべきである。ダイズ抽出物の温度は酵母細胞 の代謝活性を低減するべ（８℃より低くするべきである。ラフィノース及びスタ キオースの変換はＨＰＬＣ法で分析し得、前記糖質の９５％変換後、酵母細胞を 遠心によって分離して、その生物量１ｇ当たりのα−ガラクトシダーゼ活性を測 定し得る。優れた活性を有する遠心分離物は後の変換過程で用い得、一方本来の 活性の５０％未満の活性しか有しない遠心分離物は増殖培地中で蘇生させ得、そ の際細胞は２〜４時間掛けて回復させ得る。その後、細胞を遠心し、洗浄してか ら、後の変換過程で用い得る。

実施例８ 酵母に固定化したＨｕｍｉ　ｃｏ　Ｉ　ａ属すパーゼ／α−アグルチニンを用い てのバイオサーファクタントの製造プラスミドｐＵＲ２９７２または２９７３で 形質転換した酵母は大規模に培養できる。培養の間一定の時間間隔で、洗浄した 細胞をその表面におけるリパーゼ活性の存在に関し、実施例１に述べた方法で分 析し得る。細胞密度と単位生物量当たりのリパーゼとの両方がその最大値に達し たら、酵母細胞を遠心によって回収し、洗浄し得る。洗浄した細胞は、少量の水 中に懸濁させて、好ましくは炭素原子１２〜１８個の鎖長を有する脂肪酸と、好 ましくはグルコース、ガラクトースまたはスクロースである糖質との混合物を収 容した反応容器に加え得る。（酵母細胞中の水を除いた）水の総量は０．１％未 満であり得る。酵母細胞の最終濃度は０．１ｇ／ｌＶから１０ｇ／ｆまでとし得 るが、好ましくは前記濃度は１ｇ／ｌを上回る。反応容器は、（不飽和）脂肪酸 の酸化を回避し、かつ酵母の代謝活性を最小限に留めるべくＮｚ及びＣＯ２の雰 囲気下に保持しなければならない。容器内の混合物の温度は、用いる脂肪酸の種 類に応じて３０〜６０°Ｃとするべきである。脂肪酸の変換はＧＬＣ法で分析し 得、脂肪酸の９５％変換後、酵母細胞を遠心によって分離して、その生物量１ｇ 当たりのリパーゼ活性を測定し得る。優れた活性を有する遠心分離物は後の変換 過程で用い得、一方本来の活性の５０％未満の活性しか有しない遠心分離物は増 殖培地中で蘇生させ得、その際細胞は２〜８時間掛けて回復させ得る。その後、 細胞を再び遠心し、洗浄し、後の変換過程で用い得る。

プラスミドｐＵＲ２９８１または２９８２で形質転換した酵母は大規模に培養で きる。培養の間一定の時間間隔で、洗浄した細胞をその表面におけるリパーゼ活 性の存在に関し、実施例１に述べた方法で分析し得る。細胞密度と単位生物量当 たりのリパーゼとの両方がその最大値に達したら、酵母細胞を遠心によって回収 し、洗浄し得る。洗浄した細胞は、少量の水中に懸濁させて、様々なトリアジル グリセロール及び脂肪酸の混合物を収容した反応容器に加え得る。

（酵母細胞中の水を除いた）水の総量は０．１％未満であり得る。酵母細胞の最 終濃度は０．１ｇ／ｌから１０ｇ／ｌまでとし得るが、好ましくは前記濃度は１ ｇ／ｌを上回る。反応容器は、（不飽和）脂肪酸の酸化を回避し、かつ酵母の代 謝活性を最小限に留めるべくＮ２及びＣＯ２の雰囲気下に保持しなければならな い。容器内の混合物の温度は、用いるトリアジルグリセロール及び脂肪酸の種類 に応じて３０〜７０℃とするべきである。エステル交換の程度はＧＬＣ／ＭＳ法 で分析し得、所望種類のトリアジルグリセロールが理論値の８０％以上生成した 後、酵母細胞を遠心によって分離して、その生物量１ｇ当たりのリパーゼ活性を 測定し得る。優れた活性を有する遠心分離物は後の変換過程で用い得、一方本来 の活性の５０％未満の活性しか有しない遠心分離物は増殖培地中で蘇生させ得、 その際細胞は２〜８時間掛けて回復させるべきである。その後、細胞を遠心し、 洗浄し、後のエステル交換反応過程で用い得る。

（実施例１に述べた）プラスミドｐｓＹ１３またはプラスミドｐＵＲ２９６９で 形質転換した株ＭＴ３０２／ＩＣのパン酵母はブダペスト条約に従い、それぞれ 仮番号３３０．９２及び３２９．９２の下に１９９２年７月３日付でＣｅｎｔｒ ａａｌｂｕｒｅａｕ　ｖｏｏｒ　Ｓｃｈｉｍｍｅｌｃｕｌｔｕｒｅｓ　（ＣＢＳ ）に寄託した。

“分散する酵素細胞のフロックへの（可逆的）凝集”と定義されるフロキュレー ション（参考文献２４参照）は、工業的発酵における酵素株の最も重要な特徴で ある。フロキュレーションは、細胞壁タンパク質に関連する特性であは染色体Ｉ の右端から約２４ｋｂのところに位置し、旦↓近決定された（参考文献２６参照 ）。この配列を第１１図並びに配列番号２１及び２２に示す。クローン化断片は 、サザン及びノザンハイブリダイゼーションから判断してゲノムコピーより約２ ｋｂ短いと考えられるが、ＦＬＯＩ遺伝子の両端を含む。ＤＮＡ配列データの解 析によって、推定されるタンパク質がＮ末端に、分泌のためのシグナル配列を保 証する疎水性領域を有し、またＧＰＩアンカーの結合のためのシグナルとして機 能し得る疎水性Ｃ末端を有し、かつ特にＣ末端に多くのグリコジル化部位を有し 、任意に定義したＣ末端（アミノ酸２７１〜８９４）の４６．６％はセリン及び トレオニンであることが判明している。これらのことから、ＦＬＯＩ遺伝子産物 が酵母細胞壁に配向して局在し、隣接細胞との相互作用過程に直接関与し得ると 考えることができる。従って、クローニングしたＦＬｏ１配列は、タンパク質ま たはペプチドを細胞表面に、異なる種類の細胞壁アンカーによって固定化するの に適当でありのアミノ酸２７１〜８９４をコードするＤＮＡ、即ち第１１図のポ リヌクレオチド８１１〜２６８２を用いることによって得ることができる。２個 のＰＣＲプライマーｐｃｒｆｌｏｌ（配列番号２３参照）及びｐｃｒｆ　Ｉｏ２ 　（配列いて、ｐＵＲ２９７２（ＡまたはＢ）中に存在する、α−コードする１ 、９ｋｂのＤＮＡ断片によって置き換え得、それによって得られるプラスミドｐ ＵＲ２９９０（第１２図参照）は（ａ）インベルターゼシグナル配列（ＳＵＣ２ ）と、これに後続する（ｂ）融合タンパク質とをコードするに後続する（ｂ、２ ）ＦＬＯＩタンパク質のＣ末端（アミノ酸２７１〜８９４）とから成る。

Ｈｕｍｉｃｏｌａ属リパーゼをコードする遺伝子と、ＦＬＯＩ遺伝子産物のＣ末 端部をコードする遺伝子との枠内連結のためのＰＣＲオリゴヌクレオチド５ＮＹ ＡＶＳＴ ＳＮＦＥＴＤＶＮＬＹＧ （コーディング鎖の部分に関しては配列番号２５参照）は誘導物質としてガラク トースを含有するＹＰ培地中で培養することができる。

リパーゼ／ＦＬＯＩキメラタンパク質の発現、分泌、局在及び活性は、実施例１ に述べたのと同様の操作を用いて分析可能である。

参考文献 １．　Ｍｏｎ５ａｎ、　Ｐ、、　Ｃｏｍｂｅｓ、　Ｄ、　（１９８８）　’″Ｅ ｎｚｙｍｅ　５ｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｂｙ　ｉｍｍｏｂ奄撃奄嘯＝{ｉｏ ｎ”；　ｉｎ Ｍｅ山、　ｉｎ　Ｅｎｚｙｍｏｌ、　Ｖｏｌ、　Ｌ１２５８４−５９８゜２、Ｋ ｏｋ、　Ｊ、　（１９９０）　”Ｇｅｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｐｒｏ＋ｅｏｌｙ＋ ｉｃ　ｓｙｓｔｅｍｓ　ｏ（１ａｃｔｉｃ　ａｃｉｄ刀@ｂａｃｔｅｒｉａ”　 ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、　Ｒｅｖ、８２１５−５４３、　Ｃｏｎｚｅｌｍａｎｎ、 　Ａ、、　Ｆａｎｋｈａｕｓｅｒ、　Ｃ，、Ｄｅｓｐｏｎｄｓ、　Ｃ，（１９９ ０）　”Ｍｙｏｉｎｏｓｉｔ盾戟@ｇｅｔｓ １０ｃｏｒｐｏｒａ＋ｅｄ　ｉｍｏ　ｎｕｍｅｒｏｕｓ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｇ ｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｒ　Ｓ、ｃｅｒｅｖｉｓｉｏ■F　１ｎｃｏｒ− ｐｏｒａ＋ｉｏｎ　ｉｓ　ｄｅｐｅ而ｅｒ面　ｏｎ　ｐｈｏｓｐｈｏｍａｎｎｏ ｍｕ＋ａｓｅ”　（ＳＥＣ５３）、　ＥＭＢＯ（１６５３−U６１ ４、Ｌｉｐｋｅ、　Ｐ、、Ｎ、、　Ｗｏｊｃｉｃｃｈｏｗｉｃｚ、　Ｄ、、　Ｋ ｕｒｊａｎ、　Ｊ、　（１９８９）　”ＡＧａｌ　ｉｓ　ｔ■■@ｓ＋ｒｕｃ＋ ｕｒａｌ　ｇｅｎｅ ［（）口１＋ｃ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｃｓ　ｃｅｒｅｖｒｓｉａｅ　α−ａ ｇｇ１曲０１０．　ＸＩｃｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　ｇｌｙモ盾垂窒盾狽■奄氏 @１ｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ　ｃｅｌｌ−ｃｅｌｌ　ｉｒ＋＋ｅｒａｃ＋１ｏｎｓ　ｄｕｒｉｎｇ　ｍａ ｔｉｎｇ”　Ｍｏ１．　Ｃｅ１１．　Ｂｉｏｌ、　ｑ　３１T５−３］６５゜ ５、　Ｒｏｙ、　Ａ、、　Ｌｕ、　Ｃ，Ｆ、、　Ｍａｒｙｋｗａｓ、Ｄ、、　Ｌ ｉｐｋｅ、　Ｐ、、　Ｋｕｒｊａ、　Ｊ、　（１９９］）　sｂｅ　ＡＧＡＩ　 ｇｅｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔ　ｉｓ　１ｎｖｏｌｖｅｄ　ｉｎ　ｃｅｌｌ　５ｕｒｆａｃｅ　 ａｕａｃｈｍｅｒｕ　ｏｆ山ｅ　Ｓ、　ｃｅｒｅｖｉｓｉａ■@ｃｅｌｌ　ａｄ ｈｅｓｉｏｎ ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ　ａ−ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ”、　Ｍｏ１．　Ｃｅ１ １．　Ｂｉｏｌ、　ｎ４１９６−４２０６゜６、　Ｔｅｕｎｉｓｓｅｎ、　Ａ、 Ｗ、Ｒ，Ｈ，、ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｂｅｒｇ、　Ｊ、に、　Ｓｔｅｅｎｓｍａ、　 Ｈ，Ｙ、　（１９９３）@”Ｐｈｙｓｉｃａｌ ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ　ｇｅｎ ｅ　ＦＬＯＩ　ｏｎ　ｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅ　Ｉ　ｏｆ　ＳA　ｃｅｒｅｖＬ； ｊａｃ。

Ｙｅａｓｔ　１　（１）　１−１０ ７、　Ｙａｎｉｓｃｈ　Ｐｅｒｒｏｎ、　Ｃ，、Ｖｉｅｒａ、　Ｊ、、　Ｍｅｓ ｓｉｎｇ、　Ｊ、　（１９８５）　”Ｉｍｐｒｏｖｅｄ　ＭP３　ｐｈａｇｅ　 ｃｌｏｎｉｎｇ ｖｅｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｈｏｓｔ　５ｔｒａｉｎｓ：　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ 　５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｍ１３　ｍｐ１８　ａ獅п@ｐＵｃ１９ ｖｅｃｚｏｒｓ、’　Ｇｅｎｅ　３３１０３−１１９゜８、　Ｃｈｕｎｇ、　Ｃ ，Ｔ、、　Ｎｉｅｍｅｌａ、　Ｓ、　Ｌ、、　Ｍｉｌｌｅｒ、　Ｒ，Ｈ，（１９ ８９）　”Ｏｎｅ　５ｔｅｐ　ｐｒ■垂≠窒≠狽奄盾氏@ｏｒ ｃｏｍｐｅｔｅｎｔ　Ｅ、　ｃｏｌｉ：　Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ａｎ ｄ　ｓｔｏｒａｇｅ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉａｌ　ｃｅｌｌ刀@ｉｎ山ｅ　ｓａ ｍｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ”　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ 　Ｂ！：１２１７２−２１７５゜９、　Ｓａｎｇｅｒ、　Ｆ、、　Ｎ１ｃｋｌｅ ｎ、　Ｓ、、　Ｃｏｕｌｓｏｎ、　Ａ、　Ｒ，（１９７７）　”ＤＮＡ　ｓｅｑ ｕｅｎｃｉｎ■@ｗｉ山ｃｈａｉｎ ｔｅｒｍｉｎａｔｉｎｇ　ｉｎｈ市１ｔｏｒｓ”　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａ ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　１！１５４６３−５４６７゜１０、　Ｈｓｉａｏ 、　Ｋ、　（１９９１）　”Ａ　ｆａｓｔ　ａｎｄ　ｓｉｍｐｌｅ　ｐｒｏｃｅ ｄｕｒｅ　ｆｏｒ　ｓｅｑｕｅｎｃｉｎ■@ｄｏｕｂｌｅ　５ｔｒａｎｄｅｄ ＤＮＡ　ｗｉｔｈ　５ｅｑｕｅｎａｓｅ″Ｎｕｃ１．　Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅｓ、　 １！９２７８７゜Ｉｌ、　Ｋｌｅｂｅ、　ＲＪＪ、、　Ｈａｒｒｉｓｓ、　Ｖ、 、　５ｈａｒｐ、　Ｚ、Ｄ、、　Ｄｏｕｇｌａｓ、　Ｍ、Ｇ、　（１９８３）@ −Ａ　ｇｅｎｅｒａｌ　ｍｅ山０ｄ ｆｏｒ　ｐｏｌｙｅ山ｙｌｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｌ　１ｎｄｕｃｅｓ　ｇｅｎｅｔ ｉｃ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒ奄＝@ａｎｄ　ｙｅ ａｓｔ” Ｇｅｎｅ　’１５３３３−３４１゜ １２、０ｖｅｒｂｅｅｋｅ、　Ｎ、、　Ｆｅｌｌｉｎｇｅｒ、　Ａ、　Ｊ、、　 Ｔｏｏｎｅｎ、　Ｍ、　Ｙ、、　ｖａｎ　Ｗａｓｓｅｎａａ秩A　Ｐ、　Ｄ、、 　Ｖｅｒｒｉｐｓ、　Ｃ。

Ｔ、　（１９８９）　”Ｃｌｏｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ　５ｅ ｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ａ−ｇａｌａｃｔｏｓｉｄａ唐■@ｇｅｎｅ　ｆ ｒｏｍ Ｃｙａｍｏｐｓｉｓ　ｔｅｖａｇｏｎｏｌｏｂａ″Ｐｌａｎｔ　Ｍｏ１．　Ｂｉ ｏｌ、　４３５４１−５５０゜１３ＬＩｅｍｍｌｉ、　Ｕ、　Ｋ、　（１９７０ ）　”Ｃｌｅａｖａｇｅ　ｏ（５ｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｄｕ ｒｉｎｇ　狽■■@ａｓｓｅｍｂｌｙ　ｏｆ ｈｅａｄｓ　ｏｆ　ｂａｃｔｅｒｉｏｐｈａｇｅ　Ｔ４．”　Ｎａｔｕｒｅ　２ ２２６８０−６８５゜１４、　Ｔｏｗｂｉｎ、　Ｈ，Ｓ＋ｅａｈｅｌｉｎ、　Ｔ 、、　Ｇｏｒｄｏｎ、　Ｊ、　（１９７９）　”ＥＩｅｃ＋ｒｏｐｈｏｒｅ＋ｉ ｃ@ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎｓｆｒｏｍ　ｐｏｌｙａｃｒｙｌ ａｍｉｄｅ　ｇｅｌｓ　ｔｏ　ｎ１ｔｒｏｃｅｌｌｕｌｏｓｅ　５ｈｅｅ＋ｓ： 　Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ　ａｎп@ｓｏｍｅ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、 　ＵＳＡ　Ｊ７４３５０−４３５４゜＋５．　Ｗａ＋ｚｅｌｅ、　Ｍ、、　Ｋ１ １ｓ、　Ｆ、、Ｔａｎｎｅｒ、　Ｗ、　（１９８８）　Ｔｈｅ　ｉｍｍｕｎｏｌ ｏｇｉｃａｌ　ａ獅п@ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａ−ａｇｇｌｕｔｉｎｉｎ　ｆｒｏ ｍ　Ｓ、ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ”　ＥＭＢＯＪ、ｌ　１４８R−１４８８ ＋６．　［３ｏｅ１．　Ｅ、、　ｌ−１ｕｇｅ−Ｊｅｌ−１ｕ、　Ｂ、、　Ｂｒ ｏｗｎ、　Ｊ、　Ｄ、　（１９８９）　”Ｉ−ｈｕｎｉＣｏ撃狽噤@１ｉｐａｓ ｅ　ａｎｄ　ｐｒｏｃｅｓｓ　Ｆｏｒ山ｅ　ｐｒｏｄｕｃ＋ｉｏｎ　ｏｆ　ｒｅ ｃｏｍｂｉｎａｎ＋　Ｈｕｍｉｃｏｌａ　１ｉｐａｓｅｓ−Ｅｌ’−ＡＩ−０３ ０５２１６ １７、Ｖｅｒｂａｋｃｌ、　Ｊ、Ｍ、Ａ、　（１９９１）　”Ｈｅｔｅｒｏｌｏ ｇｏｕｓ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｔｂｅ@ｙｅａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ”　Ｉ’ｈＤ山ｅｓｉｓ、 　Ｒｉｊｋｓｕｎｉｖｅｒｓｉ＋ｅｉ＋　Ｕｔｒｅｃｈｔ、@Ｔｈｅ　Ｎｅｔｈ ｅｒｌａｎｄｓ １８、　Ｋｕｒｊａｎ、　Ｊ、、　ＨｅｒｓｋｏｗｉＩ２．１．　（１９８２） 　”５ｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ　ａ　ｙｅａｓｔ　Ｉ’ｈｅ窒盾高盾獅■@Ｇｅ ｎｅ　（ＭＦａ）：　Ａｐｕ＋ａ＋ｉｖｅ　ａ−Ｆａｃｔｏｒ　ｐｒｅｃｕｒｓ ｏｒ　ｃｏｎｔａｉｎｓ　ｆｏｕｒ　ｔａｎｄｅｍ　ｃｏｐｉｅｒｓ　ｏｆ　ｍ ａｔ浮窒■@ａ−ｆａｃｔｏｒ”　Ｃｅ１ｌ ；ＩＱ　９３３−９４３゜ １９、５！＋ｉｍａｄａ、　Ｙ、、　Ｓｕｇｉｈａｒａ、　Ａ、、　Ｔｏｍｉｎ ａｇａ、　Ｙ、、　ｌ１ｚｕ而、　Ｔ、、　Ｔｓｕｎａｓａ翌＝A　Ｓ、　（１ ９８９）ｃＤＮＡ ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄ ｉｄｕｍ　１ｉｐａｓｅ”　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　ｌｊ刀@３８３−３８８ ゜ ２０、　Ｂｏｅｌ、　Ｅ、、　Ｈｕｇｅ−Ｊｅｎｓｅｎ、　Ｂ、、　Ｃｈｒｉｓ ｔｅｎｓｅｎ、　Ｍ、、　Ｔｈ１ｍ、　Ｌ、　Ｆｉｉｌ、　m、　（１９８８） 　”Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒｍｊｅｈｅｉ　Ｔｒｉｇｌｙｃｅｒｉｄｅ　Ｌｊｐａ ｓｅ　ｉｓ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ　ａｓ　ａ　Ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ”　１ｊ ｐｉｄ刀A　Ｖｏｌ、７Ｊ　Ｎｏ　７゜ ２１、５ｃｈｕｃｌ＋、　Ｒ，、Ｍｕｋｈｅｒｊｅｅ、　Ｋ、Ｄ、　（１９８８ ）　ｉｎ″Ｗｏｒｌｄ　ｃｏｎｒｅｒｅｎｃｅ　ｏｎ　Ｂｉ盾狽■モ■獅盾撃盾 ■凵@ｒｏｒ ｔｈｅ　ｆａｔ　ａｎｄ　ｏｉｌ　１ｎｄｕｓｔｒｙ″ｌ５ＢＮ　０−９３５３ １５−２１−７．３２８−３２９゜２２、　Ｋｏｓａｒｉｃ、　Ｎ、、　Ｃａ１ ｒｕｓ、　Ｗ、Ｌ、　Ｇｒａｙ、　Ｎ、Ｃ，Ｃ，（ｅｄｉｔｏｒｓ）　（１９８ ７）Ｂｉｏｓｕ窒■≠モ狽≠獅狽刀@ａｎｄ Ｉ３ｉｏ＋ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ″Ｍａｒｃｅｌ　Ｄｅｋｋｅｒ　Ｉｎｃ、、　Ｎ ｅｗ　Ｙｏｒｋ、　Ｖｏｌ、　２：Ｌ。

２３、　Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ、　Ｋ、Ｒ，、Ｔｕｎｇ、　Ｊ、、　Ｅｍｅｒｉｋ 、　Ｒ，Ｓ、、　Ｍａｓｉａｒｚ、　Ｆ、Ｒ，、Ｃｈａｍｂ■窒撃≠奄氏A　Ｓ 、Ｈ，。

Ｖａｓａｖａｄａ、　Ａ、、　Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ、　Ｓ、　（１９９０）　’ ″Ｇｌｕｃｏｓｅ　ｏｘｉｄａｓｅ　ｆｒｏｍ　Ａｓｐｅｒ■奄撃撃浮刀@ｎｉ ｇｅｒ″、Ｊ。

Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、、　Ｖｏｌ、星、　Ｎｏ、７．３７９３−３８０２゜２ ４、Ｊｏｈｎｓ＋ｏｎ、Ｊ、Ｒ，、Ｒｅａｄｅｒ、Ｈ，Ｐ、（１９８３）”Ｇｅ ｎｅ＋ｉｃ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｆｌｏｃｃｕｌａｔ奄盾氏h　ｉｎ　’Ｙ ｅａｓｔ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、　Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ　ａｎｄ　ａｐｐｌｉｅｄ　ａｓ ｐｅｃｔｓ’、　５ｐｅｎｃｅｒ、　Ｊ、Ｆ、Ｔ、　（Ｅｄ奄狽盾秩j、　ｌ５ ＢＮ　０− ５４０−９０７９３−９．　ｐ、　２０５−２２４゜２５、５ｃｈｒｅｕｄｅｒ 、　Ｍ、Ｉ’、、　Ｂｒｅｋｅｌｍａｎｓ、　Ｓ、、　Ｖａｎ　ｄｅｎ　Ｅｎｄ ｅ、　Ｈ，、Ｋ１１ｓ、　Ｆ、ＭA　（１９９３）　Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏ（ａ　ＩＩｅ＋ｅｒｏｌｏｇｏｕｓ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　ｔｏ　ｔｈｅ　Ｃｅ１ ｌ　Ｗａｌｌ　ｏｆ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒ■魔奄唐奄≠■h　 Ｙｅａｓｔ　’１ ９９ＡＯ９ ２６、Ｔｅｕｎｉｓｓｅｎ、　Ａ、Ｗ、Ｒ，Ｈ，、Ｈｏ１ｕｂ、　Ｅ、、　Ｖａ ｎ　ｄｅｒ　Ｈｕｃｈｊ、　Ｊ、、　Ｖａｎ　Ｄｅｎ　Ｂｅ窒■A　Ｊ、Ａ、。

Ｓｔｅｅｎｓｍａ、　Ｈ，Ｙ、　（１９９３）５ｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ山ｅ　０ ｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　ｏｆ山ｅ　ＦＬＯＩ@Ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ　Ｓａｃｃｈａｒｏｍ、ｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ″ＹＥＡＳＴ 　９４２３−４２７゜２７、ＩＩＸ］ｒｍｓｅｎ、Ｍ、Ｍ、、Ｌ＋ｎｇｅｄｉｊ ｋ、Ａ、Ｃ，、Ｖａｎ　Ｔｕｉｎｅｎ、Ｅ、、Ｇｃｅｒｓｅ、Ｒ，Ｈ，；　Ｒａ ｕ■AＩｌ、Ａ、。

Ｎｌ＊ａ＋、　Ｊ、　（１９９３）　ＥＪ（ｅｃ＋　ｏｆ　ａ　ｐｍｒｌ　ｄｉ ｓｒｕｐｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｉｇｒ{＋Ｉ　５ｅｑｕｃ ｎｃｃｓ　Ｏｎ山Ｃ １ｒｕｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　ａｎｄ　５ｅｃｒｅｔｉ ｏｎ　ｏｒ　Ｃｙａｍａｐｓｉｓ　ｔｅｔｒａｇｏｎｏｌｏｂ＝@ａ−ｇａｌａ ｃ＋ｏｓｉｄａｓｃ ｌ〕〜′５ｔｌＣｃ／ｍｒｏｍｙｃｃｓ　ｃｅｒｃｖｉｓｉｎｃ　Ｇｅｎｅ　］ ：’５　］　１５−１２３〔配列表〕 配列番号：１ 配列の長さ：　６０５７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列ノ種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮ＾起源 生物色：　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（サツカロミセ ス１セレビンエ）配列の特徴 特徴を表す記号：　ＣＤＳ 存在位置：　３６５３．．５６０５ 他の情報：／機能＝“有性凝集”／生成物＝“α−凝集素“配列・ 鮎Ｇ（ＴＴＴＡＧＧ　ＴＡＡＧＧＧＡＧＧＣｋＧＧＧＧＧｋｈ）Ｊ＋　ＧＡτＡ ＣＴＧＭＡτＧλＣＧＧＡＡＡＡ　ＣＧＡＧＡＡＴＡＴＧ　U０ ＧＡＧＣＡＧＧＧＡＧ　ＣＡＡＣＴＴＴＴｋＧ　ＡＧＣＴＴＴＡＣＣＣＧττＡ 入ＡＡＧｃτ　Ｃ＾＾Ａτｃａ入ｃｃｃττＣＣτＧＣＣＴ@１２０ ＴＴＧＴＣ？ＧＡＴＴ　ＴＴＡＧＴＡＣＴＡＣＣＧＧＡＡＧＧＴｒＴ　ＡＴ’ｒ ＡＣＧＣＣＣＡ＾ＧＡＡＣＡＧＴＧＣＴＴＧｋｋＴＴＧｋＧ@１８０ ＴＴＣＴＣＧＧにＡＣＡＣＧＧＧＡＡＡＧ八　ＣＡＡＴＧＧＡＡＧＡ　へ人入Ａ ＴＴτＡ（：Ａ　ＴτＣＡＧτＡにＣｃ　ττＡＴＡτＡＴfＡ　２４０ ＡＡＴＧＣＴＣ，ＣＣＡ　ＡＧＣＣＡＣＧＴＣＴ　ＴＴＡＴＡＡＧＴＡＧ　ＡＴ ＡＡＴＧＴＣＣＣＡＴＧＡＣＣＴにＡＡ　ＣＴＡＴＧＧＧＡ`Ｔ　３００ ＴＴＡＴにＡＣＧＣＡ　ＧＴＴＣＡＴＴにＴＡ　ＴＡＴＡＴＡＴＴＡＣＡＴＴ入 ＡＣＴＣＴτ　丁ＡにＴＴｒＡＡＣＡ　ＴＣＴＧＡＡＴＴＧs　３６０ ＴＴＴＡＴＡＡＡＡＴ　ＡＡＣ？ＴＴＴＴＧＡ　ＡＴＴＴ丁τＴＴｋＴ　ＧＡＴ ＣＧＣＴＴＡＧ　ＴＴＡＡＧＴＣＴＡＴ　ＴＡＴＡＴＣＡＧfＴ　４２０ ＴＴＴＴＴＣＡＴＴＣＡＴＣＡτＡＡＴＴに　ＴＴＣＣＴＴＡＡＡＴ　ＡＴにＡ ＧτＡＴＡτ　ＴＴＡＪｔＡτＡＣＡＧ　Ｇ入＾ＴτへＧＴ`τ　４８０ ＣＡｔｒ？ＧＣＡＧＴ　ＣＡＣＧｋ）ＪＪ＋ＧＧ　ＧＣＣＧＴＴＴＣｋＴ　ＡＧ ＾ＧＡＧτ！’ＴＴ　（ＴＴＭＴＭＡＧ　ＴＴＧλＧＣＧＴs’Ｔ　５４０ ＧＴＡＴＧＴＧＴＴＴ　ＡＣＴＴＧＴＴＧＣＡ　ＧＧＴＡＣＧＧＴｋｋ　ＡＧＣ ？ＡＧＴＴＣＧ　ＡＴＣＡＴＴＴＣＡＴ　ＧＧＧＴｈＴＣＣ汲求@１Ｂ６０ ｋＴｕＴＧｃＴｃ、ｃ　ＧＧＣλＣ入λＣＣＧ　ＡＡＧＴＣにＴＣＡＡ　入λＣ Ｔτｃｃへ人ＡＡＣλＧτ入ｃｃｃＴ　τλＴτＣＣＡＣτb１９２０ Ｃ入ＡττＣＡＡＴＧ　にＡＧτ入入Ａへ人Ｇ　ｍｃＭｃＡｃＴ　Ｇ入ＧＴＧＣ ；ＴＧＡＡＡ　ＡＣＡＴＴＧ入ＡＣＡ　ＡＣτ＾ＣＡＴＧＣ`　３２４０ ＧτττＣＣＣＧＣＣＡＣＧ入ＧＧＣ入λＧ　τＧτＡＧＧＴＣＣτ　丁τＧ丁 ＣＣへ丁丁Ｔ　ＣＧＣＴτ丁ＧτｉＴ　τＧＣ八Ｃへ丁Ｃ＾s　３３００ ＣＣＴＣｆｌ　ＣＴＴＭτＡτＡＧＴＣＡＧＣＡＣＡＡＡＡＧＧＡＡ　ＣＭＣＡ ＡＴＴＣＧ　ＣＣＡＧＴＴ’ｒＴＣ）、　ＡＡ　ＡＴＧ　３U５５ ＴＴＣＡＣＴ　Ｔｒ’Ｔ　ＣＴＣＡＡＡ　ＡＴＴ　ＡＴＴ　ＣＴＧ　ＴにＧ　Ｃ Ｔ’Ｔ　ＴＴＴ　ＴＣＣＴＴＧ　ＧＣＡ　ＴＴＧ　ＧＣＣ３V０３ Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ工１ｅ工１ｅ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｌａ ｕ　Ｐｈａ　Ｓａｒ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　ＡＬａ５　１０　１ｓ ＴＣＴ　ＧＣＴ　ＡＴＡ　入Ａτ　＾τＣＡＡＣ（Ｊτ　ＡＴＧ　ＡＣＡ　ＴＴ Ｔ　ＴＣＣ入ＡＴ　丁Ｔ＾　ＧＡＡ　ＡτＴＡＣ丁　コツ５P Ｓｅ【　＾１＆　工Ｌｅ　Ａｓｎ　工１ｅ　八ｓｎ　Ａｓｐ　工１ｅ　Ｔｈｒ　 Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｌｓｕ　Ｇｌｕ　工１ｅ　丁ｈｒＣＣｋ　ＣＴＧ　Ａ ＣＴ　ＧＣｋ　ＡＡＴ　ＡＡＡ　ＣＡＡ　Ｃｃ′ＴＧＡＴ　ＣＡＡ　００７ＴＧ Ｇ　ＡＣＴ　ＧＣＣＡＣＴ　ＴＴＴ　３V９９ Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　 Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　ＰｈｅＧＡＴ　ＴＴＴ　Ａ ＧＴ　ＡＴＴ　ＧＣＡ　ＣＡＴ　ＧＣＧ　ＴＣＴ　ＴＣＣ＾ττ　ＡＧＧ　ＧＡ Ｇ　ＧＧＣＧＡＴ　ＣＡＡ　ＴＴＣ３８S７ Ａｓｐ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　工１ｅ　Ａｌａ　Ａｓｐ　ＡＬａ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 工１ｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　ＰｈｅＳｏ　５５　６０　 ６５ Ａｃｋ　ＴＴＡ　ＴＣＡ　ＡＴＧ　ＣＣＡ　ＣＡＴ　ＣＴＴ　ＴＡＴ　ＡＧＧ　 ＡＴＴ　入ＡＧＣτＡ　ＴＴＡ　ＡＡＣＴＣＡ　τＣに　３W９５ Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　ＨＬｓ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ工 １ｅ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌｓｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　５ｅｒ７０　７５　ＢＯ Ｃ入ＡＡＣ八　へＣＴ　ＡＣＴ　ＡＴＴ　τ（（ττＸ　ＧＣＧ　ＧＡＴ　ＧＧ Ｔ　ＡＣＴ　にＡＧ　ＧＣＴ　丁τＣ八人Ａ　ＴＧＣ３９４R Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　丁ｈｒ　工１ｅ　Ｓａｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ａｓｐ　 Ｇｌｙ　’ｒｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｈａ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ｃｙ■ τ入τ　ＧＴＴ　τｃｃｃ入Ａ　ＣＡＧ　ＧＣＴ　ＣＣＡ　ＴＡＣＴＴＧ　７八 τ　ＧｋＡ　ＡＡＴ　ＡＣＴ　ＡＣＴ　ＴＴＣＡＣＡ　３９Xユ τ’／ｒ　’Ｊ＆Ｌ　ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　ＡＬａ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｌｅ ｕ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　ｘｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔ■■ ｉｏｏ　１０５　１１０ ＴＧＴ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　ＣＡＡ　入ＡＴＧ入ＣＣＴＧ　丁ＣＣＴＣＣＴＡＴ　 八ＡＴ　ＡＣＧ　入ｉτ　ＣＡＴ　ＧＧＡ　ＴＣＣ４０３９Ｃｙｇ　Ｔｈｒ　Ａ ｌａ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　丁 ｈｒ　Ｉｌａ　Ａｇｐ　Ｇｌｙ　５ｅｒＡτＡ　ＡＣＡ　τＴ丁ｒｃｃ　ＣＴＡ 　ＡＡＴ　ＴＴＴ　ＡＧＴ　ＧＡＴ　ｃＧＴｃａＴＴＣＣＡａｃ　ＴＡＴ　Ｇ入 ＡＴＡ丁　４０８７１１ａ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ 　５ｅｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　５ｅｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ ＧＡＧ　ＴＴＡ　ＧＡＡ　ＡＡＣＧＣＴ　ｋｈＧ　ＴＴＴ　ＴｒＣ入八Ａ　ＴＣ Ｔ　ＧＧＧ　ＣＣＡ　入τＧ　ＣＴＴ　ＧＴＴ　ＡＡＡ　４P３５ Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ＾Ｌａ　Ｌｙｓ　Ｐｈ＠Ｐｈｅ　ＬｙＩＩＳｅ ｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒ口Ｍｅｔ　Ｌａｕ　ＶａＬ　ＬｙｓＣＴＴ　ＧＧＴ　ＡＡＴ　 ＣＡＡ　ＡＴＧ　ＴＣＡ　ＧｋＴ　ＧＴＧ　ＧＴＧ　ＡＡＴ　ＴＴＣＧＡＴ　Ｃ ＣＴ　ＧＣＴ　ＧＣＴ　ｍ　４１Wコ Ｌｅｕ　Ｃ１ｙ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　入ｓｐ　Ｖａｔ　Ｖａｌ　 Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｇｐ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　Ａｌａ　Ｐｈｅ１６５　１］０　１ ７５ ＡＣＡ　ＣＡに　入ＡＴ　ＣＴＴ　Ｔｉ　ＣＡＣ’ｒＣＴ　ＧＧＧ　ＣＧＴ　Ｔ ＣＡ　ＡＣＴ（，０丁　丁ＡＣＧＧτ　ＴＣＴ　Ｔｆｆｌ　S２３１ τｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　ｉ’ｈｅ　）Ｉｔｓ　Ｓａｒ　ＧＬｙ　ｋｒ ｑ　Ｓｉｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｘ：　oｈｅ ＧＡＡ　ＡＧＴ　ＴＡＴ　ＣＡＴ　ＴＴＧ　００丁　ＡＴＧ　ＴＮＴ　ＴＧＴ　 ＣＣＡ　ＡＡＣＧＣＡ　ＴＡＴ　’！”ｒＣｃＴＧ　ＣＧＴ@４２７９ ＧＬｕ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｍｅヒ　Ｔｙｒ　ＣＴＧ　 Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｌａｕ　ＧｌｙＧＧＴ　ＸＣＴ　Ｃ ＡＧ　八人Ｇ　ＡＴＴ　ＧＡＴ　ＴＡＣＣＡＣ八Ｇτ　ＴＣＣ入Ａτ　ＡＡＣ八 人τ　ＧτＣａＸτ　丁ＴＯ４３２７Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＣＬｕ　Ｌｙｓ　工ｉｌ ｌ！　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ａｇｐ　５ｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ａｓｎ＾ｓｎ　Ｖａ ｌ　Ａｓｐ　Ｌａ■ ＧＡτ　１０丁　丁Ｃτ　ＴＣＡ　ＧＴ’Ｔ　ＣＡに　ＧＴＴ　ＴＡＴ　ＴＣＡ 　ＴＣＣ八人Ｔ　ＧＡＴ　７丁丁　入ＡＴ　ＣＡＴ　丁ＧＧ@４３７５ Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　ＶａＬ　Ｔｙｒ　Ｓｅｔ　 Ｓｅｒ　Ａｓｎ　八ｓｐ　Ｐｈｅ　Ａｓｎ　Ａｇｐ　ＴｒｐＴＧＧ　ＴｒＣＣＣ Ｇ　ＣＡＡ　八ＧＴ　ＴＡＣｙτ　ＧＡＴ　ＡＣＣ入ＡＴ　ＧＣＴ　ＧＡＣＧＴ ＣＡＣＴ　ＴＧＴ　’ｆ？？　４４２３Ｔｒｐ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｓｅ ｒ　丁ｙｒ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　八ｌａ　八ｓｐ　Ｖａｌ　Ｔｈ ｒ　Ｃｙｓ　ＰｈｅＧＧＴ　ＡＧＴ　入ＡＴ　ＣＴＧ　ＴＧＧ　Ｊ１１丁τ　Ａ ＣＡ　ＣＴＴ　ＧＡＣＧＡＡ　ＡＡＡ　ＣＴＡ　ＴＡＴ　ＧＥＴ　ＧＧＧ　ＧＡ `　４４７１ Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　八ｓｎ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　 Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　ＧｌｕＡＴＧ　ＴＴＡ　Ｔ ＧＧ　ＧＴＴ　ＡＡＴ　Ｇｅｌ　ＴＴＡ　ＣＡＡ　ＴＣＴ　ＣＴＡ　ＣＣＣＣＣ Ｔ　八人Ｔ　Ｇτ八　入ＡＣ八Ｃ＾　４T１９ ｐｅ＝　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　ｌＳｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　 Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　八ｌａ　Ａｓｎ　ＶａＬ　Ａｓｎ　τｈｒＡＴＡ　ＧＡＴ　Ｃ ＡＴ　ＧＣＧ　ＴＴＡ　ＧＡＡ　ＴＴＴ　ＣＡＡ　ＴＡＣＡＣＡ　ＴＧＣＣＴＴ 　ＧＡＴ　ｈｃｃ　ＡＴＡ　ＧＣＡ　４T６７ エｉ＠　Ｍｐ　Ｈｉｓ　ＡＬａ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈａ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｔ ｈｒ　Ｃｙｓ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　工ＩＣ入１ａ人λ丁　ＡＣＴ　ＡＣＧ 　ＴＡＣＧＣＴ　ＡＣＧ　ＣＡＡ　ＴＴＣＴＣＧ　ＡＣＴ　ＡＣＴ　ＡＣＧ　Ｇ 入ＡＴＴＴ　入ττ　ＣＴＴ　４６P５ λｓｎ　丁ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　入Ｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｐｈａ　Ｓａｔ　 Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｐｈａ　Ｉｌｅ　Ｖａ１ＴＮＴ　ＣＡに　Ｇ ＧＴ　ＣＯＧ　入ＡＣｃＴｃ　ｃＧＴ　ＡＣＡ　ＧＣＴ　ＡＣＣＧＣＣＡＡＡ　 ＡＧＣＴＣＴ　ＴＴＴ　入丁Ｃ４６６３Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ａｒｑ　ｋｓ ｎ　ｆ、ｓｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　５ｅｒ　Ｓ ｅｒ　Ｐｈｅ工１ｅＴＣＡ　ＡＣＣＡＣＴ　八ＣＴ　ＡＣＴ　ＣＡＴ　ＴＴＡ　 入ＣＡ　Ｍ；τ　ＡＴＡ　ＡＡＣＡＣＴ　ＡＣＴ　ＧＣＧ　ＴＡＴ　ＴＣＣ４７ P１ Ｓｉｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　 工１ｅ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　５ｅｒ八〇ＴにＧ八　ＴＣ ＣへＴ丁　ＴＣＣＡＣＡ　ＧＴＡ　Ｇへ人ｋｃｋ　ＧＧＣＡＡＴ　ＣＧＡ　ＡＣ Ｔ　ＡＣＡ　ＴＣＡ　ＧＡＡ　４７５９Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　工１ｅ　Ｓｅ ｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　に１ｙ　Ａｍｎ　入ｘｑ　Ｔｈｒ　Ｔｈ ｒ　Ｓｅｒ　ＧＬｕＧＴＧ　ＡＴＣＡＣＴ　ＣＡＴ　ＣＴＧ　ＧＴＧ　ＡＣＴ　 ＡＣＣＡＧＣＡＣＡ　ＡＡＡ　ｃｒｃ　ＴＣＴ　ＣＣＡ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　４８ O７ ＶａＬ工１ｅ　Ｓｅｒ　ＨＬｓ　Ｖａｌ　ＶａＬ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔ ｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　ＡｌａＡＣＴ　八ＣＣＡＧＣ ＣＴＣ入ＣＡ　ＡＴｒ　ＧＣＡ　ＣＡＡ　Ａｃｅ　ＡＧＴ　ＡＴＣＴＡＴ　ＴＣ Ｔ　ＡＣＴ　ＧＡＣＴＣＡ　４８５５Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ 　ＩＬｅ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　工ｉｓ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ 　Ａｓｐ　５ｅｒ人ＡＴＡτＣＡＣＡ　ＧＴＡ　ＧＧＡ　ＡＣＡ　ＧＡＴ　ＡＴ Ｔ　ＣＡＣＡＣＣＡＣＡ　ＴＣＡ　ＧＡＡ　ＧＴに　ＡＴＴ　ＡＧＴ　４９０R Ａｓｎ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　にＬｙ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　工ｌａ　ＭＬｓ　 Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　ＧＬｕ　Ｖａｌ　工１ｍ　５ｅｒＧｋＴ　ＧＴＧ　Ｇ ＡＡ　ＡＣＣＡＴＴ　八ＧＣＡＣＡ　ＧＡＡ　ＡＣＡ　ＧＣＴ　ＴＣＧ　ＡＣＣ Ｇ丁τ　ＧＴｋ　ＧＣＣＧＣＴ　４９５P Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ工ｌｅ　Ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａ ｌａ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　ＶａＬ　Ａｌａ　ＡｌａＣ（Ｊ　ＡＣＣＴＣＡ 　ＡＣ）ｔ　ＡＣＴ　ＧＧＡ　ＴＧＧ　ＡＣＡ　ＧＧＣＧＣＴ　ＡＴに　ＡＡＴ 　ＡＣＴ　ＴＡＣＡＴＣＣＣＧ　４９X９ Ｐｒｏτｈｒ−５ｅ＋−Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　ＧＬｙ　Ａ ｌａ　Ｍｅｔ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ工ｌｅ　Ｐｒ。

Ｃ入Ａ　７丁丁　ＡＣＡ　ＴＣＣＴＣＴ　丁ＣＴ　ＴＴＣＧＣＡ　ＡＣＡ　ＡＴ ＣＡＡＣＡにＣＡＣＡ　Ｃ（：Ａ　ＡＴＡ　ＡＴＣ５０４７Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｔ ｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ａｇｎ　Ｓ ｅｒ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　工１ｅ人ＡＡ　（ＪＧ　ｅｃＡ　ＴＣＣＡＣＴ 　ｅｃｃ　ＴＣＡ　ＴＣＴ　ＴＡＴ　ＡＣＧ　ＴＣＴ　ＴＣＣＣＣＡ　ＣＴＣＧ ＴＡ　ＴＣＧ　５２R９ Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　５ｅｒ　Ｓｅｒ　ｉ’ｒｏ　５ｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ 　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　５ｅ■ ＴＣＣＣＴＣＴＣＣＧＴＡ　ＡＧＣＡＡＡ　ＡｉＪ　ＴＴＡ　ＣＴＡ　ＡＧＣＡ ＣＣＭＡＴ　ＴＴＴ　ＡＣＧ　ＣＣＴ　ＴＣＴ　５２８７Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅ ｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅ ｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　５ａｒＧＴＧ　ＣＣＡ　ＡＣＡ　ＴＣＴ　ＡＡＴ 　ＡＣＡ　ＴＡＴ　ＡＴＣＡＡＡ　ＡＣＧ　ＧＡＡ　ＡＡＴ　Ａｃｅ　ＧＧＴ　 ＴＡＣｆｆｒ　５R３５ Ｖａｌ　Ｐｒｏτｈｒ　ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　Ｌｙｓ　Ｔ ｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ２７５　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　ＰｈｅＧＡＧ　ＣＡＣＡＣＧ　 ＧＣＴ　ＴＴＧ　ＡＣＡ　ＡＣＡ　ＴＣＴ　ＴＣＡ　にＴＴ　ＧＧＣＣＴＴ　Ａ ＡＴ　ＴＣＴ　ＴＴＴ　ＡＧＴ　５R８３ Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　ＡＬａ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓａｒ　 ＶａＬ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　５ｅｔＧｋＡ　ＡＣＡ　Ｇ ＣＡ　ＣＴＣＴＣＡ　ＴＣＴ　ｃＡＧ　ＧＧＡ　ＡＣＧ　ＡＡＡ　ＡＴＴ　ＧＡ ＣＡＣＣｍ　ＴＴＡ　ＧＴＧ　５４３１Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅ ｒ　Ｓｅｔ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｘｌ＠Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ 　Ｌｅｕ　Ｖａ１ＴＣＡ　ＴＣＣＴ’ＴＧ　ＡＴＣＧＣＡ　ＴＡＴ　ＣＣＴ　Ｔ ＣＴ　ＴＣＴ　ＧＣＡ　ＴＣＡ　ＧＧＡ　ＡＧＣＣＡＡ　ＴＴＧ　丁ＣＣ５４l ９ Ｓｅｒ　５ｅｒ　Ｌｅｕ　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　５ｅｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　５ｅｒＧＧＴ　ＡＴＣＣＡ Ａ　ＣＡＧ　ＡＡＴ　ＴＴＣＡＣＡ　ＴＣＡ　ＡＣＴ　ＴＣＴ　ＣＴＣＡＴに　 ＡＴＴ　ＴＣＡ　ＡＣＣＴＡＴ　５５２V Ｇ入ＡＧＣτ　入ＡＪＩ　ＧＣＧ　ＴＣＴ　ＡＴＡ　丁τ丁　丁τＣＴＣＡ　Ｇ ＣＴ　ＧＡＧ　ＣＴＣＧＯＴ　ＴＣＧ　入丁ＯＡτ丁　５５V５ Ｇｉ・」Ｇｌｙ　ＬＹＳ　Ａｌａ　Ｓｅｒｃｒｃ　Ｐｈｅ　’Ｐｈｅ　５ｅｒ　 Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ工１＠ＸＬｅτ丁Ｔ　ＣＴＧ　ＣＴＴ ＴＴＧ　ＴＣＧ　Ｔｈｅ　ＣＴＧ　ＣＴＡ　ＴＴＣＴんυｕｃＧＧＧＴ　ＡＣＴ ＯＴＡＣＡＧＴ　５６２２Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　 Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ配列番号＝２ 配列の長さ＝６５０ 配列の型・アミノ酸 トポロジー　直鎖状 配列の種類　タンパク質 配列。

Ｍｅｔ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｐｈｓ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　！ｌｅｌｉｓ　Ｌ＠ｕ　Ｔ ｒｐ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｌｅｕｌ　Ｓ　１０　ｘｓ 八へａ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　工１ｅ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　工ｌｅ　 Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　１ｅτｈ＝　Ｐｒｏ　Ｌｅ ｕ　Ｔｈｒ　八ｌａ　Ａｓｎ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ａ＝ｐ　Ｇｉｎ　Ｇｌ ｙ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　ＴｈｒＰｈｅ　ＪｌＩＳＩ’ｌ　Ｐｈｅ　５ｅｒ 　Ｉｌｅ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ａｉａ　５ｅｒ　Ｓｅｒ　工１ｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ 　ＧｌｙＡｓｐ　fｌｕ Ｓｏ　５５　６０ Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　ｆ、ｅｕ　Ｓｅｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　１４１ｇ　ＶａＬ　Ｔｙ ｒ　Ａｒ９工１ｅ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　５ｅ■ ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　工ｌｅ　５ｅｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　 Ａｓｐ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｐｈｅ　ＬｙｓP Ｃｙｓ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ａｌａ　ｋｌａ　Ｔｙｒ　 Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅｌｏｏ　１０５　１ １０ τｈｒ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　ｋｓｎ　Ａｇｐ　Ｌａｕ　Ｓｅｒ　 ５ｓｒ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ丁ヒエｌａ　Ａｓｐ　ＧｌｙＳｅｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　 Ｐｈｅ　５ｅｒ　Ｌｅｕ　Ａ旺Ｐｈｅ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ　ＧＬｙ　Ｓｅ ｒ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　ＧｌｕＴｙｒ　（ｌｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ａｌａ 　Ｌｙｓ　Ｐｈｅ　Ｐｈ＠Ｌｙｅ　ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｍｅｔ　Ｌｅｕ　 Ｖａ１Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｇｉｎ　Ｍｅｔ　Ｓｅｒ　Ａｓ＋ｐ　 Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ａｇｎ　Ｐｈ＠入ｍｐ　Ｐｒｏ　入１ａ　Ａｌａ１６５　ｌ） ０　１７５ Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｈｉｓ　５ｅｒ　Ｇｌｙ　 ｋｒｑ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　５ｅｒＩＥＩＯ１８５１９ ０ Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｈｉｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｍｅｔ　Ｔｙｒ　 Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　ＬｅｕＧｌｙ　＋：１ｙ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ工１ｅ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａ ｓｎ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　ＡｓｎＬｅｕ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｓｅｒ　Ｓｅ ｒ　Ｖａｌ　Ｇｉｎ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｇｎ　Ａｓｐ　Ｐｈ ｅ　Ａｇｎ　入５ｐＴｒｐ　Ｔｒｐ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ 　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　入１ａ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　工ｌｅ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　 Ａｓｐ　Ｇｌｕ　ＬｙＩＩ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　Ｇｌ■ Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ａｉｎ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　 ５ｅｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ａｓｎ　ＶａＬ　Ａｓｎτｈｒ　工Ｌｅ　Ａ ｇｐ　）ｌｉｓ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｈｅ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　 Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　ｌ１■ Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　入ｒ９　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　 入１ａ　Ｓｉｒ　入１ａ　Ｌｙｓ　ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅコ２５　３３０　３ ３５ Ｘ１自　５ｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＡｇＩＰ　Ｌｅｕ　丁ｈｒ 　Ｓａｒ　１１ｓ　Ａｓｎ　Ｔｈｅ　５ｅｒ　Ａｌａ　τｙ■ Ｓ＠ｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｍｎ　Ａｒｇ　Ｔｈｅ　Ｔｈｅ　５ｅｒＧｌｕ　Ｖａｌ　Ｘ ｉｓ　Ｓｅｒ　１４ｉｓ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓ＠ｒ　Ｔｈｒ　 Ｌｙｍ　Ｌｅｕ　Ｓａｒ　Ｐｒｏ　τｈ■ ＾１ａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　５＠ｒ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　入１ａ　Ｇｉｎ　 Ｔｈｒ　５ｅｒ　工１ａ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｅ　ＡｓｐＳ＠ｒλｓｎ工ｌ＠ Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｔｈｅ　Ａｓｐ工１ｍ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒτｈｒ　ｓａ ｒ　ＧＬｕ　ＶａｌＩｌｅ４０５　４ユ０　４１５ ５ｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　（Ｊｕ　Ｔｈｒ工ｌｅ　５ｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｌｕ　Ｔ ｈｒ＾ｌａ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｖａ工＾１ａＡｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　 Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＧＬｙ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　ＡＬａ　Ｍｔ　Ａ ｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　工１ｅＰｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｔ　Ｓｅ ｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　工ｌｅ　Ａｇｎ　５＠ｒ　Ｔｈｒ　Ｐｒ ｏ　工１ｅ工ｌｅ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｇｌｕ 　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｓｅｒ　Ｘｌｅ　Ｖａｌ　ＡｇｎＶａｌ　 Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｓｎ　ｌｅ　Ｔｈｒ　ｋｓｎ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａ ｌａ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　５ｅｒ　Ｇｉｕ　Ｇｌｕ４ＢＳ　４９０　４９５ Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　ＡＬａ　Ｔｈｒ　入！＋９　Ａｓｎ 　Ｓｅｒ　Ｌｓｕ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　Ｃｙｔｓ　５■■ ｓｏｏ　ｓｏｓ　ｓユ０ ５＊ｒ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　５ｓｒ　Ｓｅｒ　 Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓ＠ｒ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｖａ１Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌ ｓｕ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　５ｅｒ　Ｔ ｈｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｉ　Ｔｈｒ　Ｐｒ。

Ｐｈｅ　Ｇｌｕ　ＨＬｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｌａｕτｈｒ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　Ｓ ｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ａｓ＋ｎ　５ｅｒ　ＰｈｅＳｅｒ　Ｇｌｕτｈ ｒ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｇ１１ｌ　ＧＩＹ　Ｔｈｒ　Ｌｙｇ工１ ｅ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｐｈａ　Ｌ＠ｕＶａｌ　５ｅｒ　ｓｅｒ　Ｌａｕ　）ｉｔ ｓ　入１ｍ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　５ａｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　５ｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅ ｒ　Ｇｌｎ　Ｌａ■ Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　ｉ’ｈａ　Ｔｈｘ　Ｓｅｒ 　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｌａｕ　Ｍｓｔ　Ａｌａ　ＳｅｒτｈｒＴｙｒ　Ｇｌｕ　Ｇ ｌｙ　Ｌｙｓ　Ａｌａ　Ｓａｒ　Ｘ１ｅ　Ｐｈｅ　Ｐｈａ　５ｅｒ＾ｌａ　Ｇｌ ｕ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓａｒ　ｌ１ｅ工ｌｅ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ 　Ｓａｒ　Ｔｙｒ　Ｌ＠ｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ配列番号＝３ 配列の長さ：２９ 配列の型・核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマー１ｉｐｏｌ 配列： ＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧ　ＡＧＧＴＣＴＣＧＣＡ　ＡＧＡＴＣＴＧＧ＾　２ｅ配列 番号＝４ 配列の長さ：３３ 配列の型：核酸 鎖の数、−重鎮 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名：部分非ニーディング鎖リパーゼ配列： ＴＴＴＧＴＣＣＡＧＧ　ＴＣＴＴＧＣＧＡＧＡ　ＣＣＴＣＴＣＧＡＣＧ＾＾Ｔ　 ３３配列番号　５ 配列の長さ・３２ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー・直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名・部分コーディング鎖リパーゼ配列。

ＴＴＣＧＧＧＴＴＡＡ　ＴＴＧＧＧＡＣＡＴＧ　ＴＣＴＴＴＡＧＴＧＣＧＡ　３ ２配列番号・６ 配列の長さ・４０ 配列の型：核酸 鎖の数・−重鎖 トポロン−８直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマー１ｉｐｏ２ 配列： ＣＣＣＣＡＡＧＣＴＴ　ＡＡＧＧＣＴＡＧＣＡ　ＡＧＡＣＡＴＧＴＣＣＣＡＡＴ ＴＡＡＣＣＣ４０配列番号＝７ 配列の長さ：８９４ 配列の型：核酸 鎖の数、二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ起源 生物名：　Ｈｕｍｉｃｏｌａ　ｌａｎｕｇｉｎｏｓａ配列の特徴 特徴を表す記号・ＣＤＳ 存在位置：　７２．．８８４ 他の情報：／生成物＝“リパーゼ” 配列の特徴 特徴を表す記号：　ｍａｔ　ｐｅｐｔｉｄｅ存在位置：　７２．．８８１ 他の情報：／生成物＝“リパーゼ” 配列。

ＧｋＡＴＴＣＧＴＡＧ　ＣＧＡＣＧＡＴＡＴＧ　ＡＧＧＡＧＣＴＣＣＣＴＴＧＴ ＧＣＴＧＴＴ　ＣＴｒＴＧＴＣ’ｒＣＴ　ＧＣＧＴＧＧｋＣfＧ　６０ ＣＣＴＴＧＧＣＣｋＣＧ　ａｃｅ　ＧＡＧ　ＧＴＣＴＣＧ　ＣＡＡ　ＧＡＴ　Ｃ ＴＧ　ＴＴＴ　ＡＡＣＣｋＧ　ＴＴＣＡＡＴ　ＣＴＣ１１０Ａｌａ　にｌｕ　Ｖ ａｌ　Ｓｅｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｐｈ＠　入ｓｎ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ａ ｇｎ　Ｌｅｕ１５１゜ ＴＴＴ　ＧＣＡ　（ＪＧ　ＴＮＴ　ＴＣＴ　ＧＣＴ　ＧＣＣＧＣＡ　ＴＡＣＴＧ ＣＧＣＡ　へ人入　ＡＡＣＡＡＴ　ＧＡＴ　ＧＣＣ１５８Ｐｈｅ　ＡＬａ　Ｇｉ ｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ａ１１ｌ　ｘｌａ　ｘｌａ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌ ｙＩＩ　Ａｓｎ　入ｓｎ　Ａｓｐ　＾Pａ ＣＣＡ　ｃｃｒ　ｃｃＴ　λＣ＾　入ＡＣＡＴＴ　ＡｃＯＴＧＣＡｃＧ　ＣＧＡ 　ＡＡＴ　ＧＣＣＴＧＣＣＣＣＧｋＧ　ＧＴＡ　２０６Ｐｒｏ　ＡＩＪＩ　Ｇｌ ｙ　Ｔｈｌ：　Ａ１１ｎ　ＸＬ＠τｈｒ　Ｃｙｇτｈｒ　Ｇｌｙ　ｘｓｎ　Ａｌ ａ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ＶａP ＧＡＧ　ＡＡＧ　ＧＣＧ　ＧＡＴ　ＧＣＡ　Ａ（：Ｇ　ｍ　ＣＴＣＴＡＣＴＣＧ 　ＴＴｒ　ＧＡＡ　ＧＡＣ〒（：’Ｔ　（ＪＡ　ＧτＧ２５S Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　ＡＬａ　Ａｇｐ　入ｉａ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　 Ｓａｒ　Ｐｈａ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　５ａｒ　ＧＬｙ　Ｖａ１ＧＧＣＧＡＴ　ＧＴ ＣＡＣＣＧＧＣＴＴＣＣＴＴ　ＧＣＴ　ｃＴＡ　ＧＡＣＡＡＣＡＣＧ　ＡＡＣＡ ＡＡ　Ｔ’ＴＧ　ＡＴＣ３０２Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｐｈ ＠Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｌ＠ｕ　Ａｓｐ　Ｍｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｌｙｅ　Ｌａｕ工 １ｅａＴｃ　ｃτｅＴＣＴ　〒丁ｃ　ｃｃＴ　ｃｃｃ　ＴＣＴ　ＣＧＴ　ＴＣＣ ＡＴＡ　ＧＡＡ　ＡＡＣ↑ＧＧＡτＣＧＧ＾　ＡＡＴ　３５０ｖａＬ　Ｌ＠ｕ　 ５ｅｒ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ　Ｓｅｔ　Ａｒｇ　Ｓｅｒ　ＸＬａ　Ｇｌｕ　 Ａｓｎτクエｌａ　Ｇｌｙ＾ａｎＣＴＴ　ＡＡＣＴＴＣＧＡＣＴＴＧ　ＡＡＡ　 ＧＡＡ　ＡＴＡ　ＡＡＴ　ＧｋＣＡＴＴ　ＴＧＣＴＣＣＧＧＣＴＧＣＡＧＯ３９ １１Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｉｌｅ　Ａｓ ｎ　Ａｓｐ　Ｉｌｅ　Ｃｙｓ　５ｅｒ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　ＡｒｇＧＧＡ　ＣＡＴ 　ＧＡＣｃｃｃ　’ｒ’ｒｃ　ＡＣＣＴＣＩ：　ｋＧＣ丁ＧＧ　ＡＧＧ　ＴＣＴ 　ＧＴＡ　ＧＣＣＣＡＴ　ＡｃＧ　ＴＴ八　S４６ Ｇｌｙ　Ｈ１ｓ＾ｓｐ　Ｇｌｙ　Ｐｈ＠Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓａｔ　ＴｒｐＡｒｇ 　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　ＡＬａλ叩τｈｒ　ＬａｕＡＧＧ　ＣＡＧ　ＡＡＧ　ＧＴＧ 　ＧＡＧ　ＧＡＴ　ＧＣＴ　ＧＴＧ　ＡＧＧ　ＧＡＧ　ＣＡＴ　ＣＣＣＧｋＣＴ ＡＴ　ＣＧＣＣＴＣ４９４Ａｒｇ　Ｇｌｎ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　 Ａｌａ　Ｖａｌ　Ａｒｇ　ＧＬｕ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　 Ｖａ１ＧＴＧ　ＴＴＴ　Ａｃｅ　にＧＡ　ＣＡＴ　ｋＧｃ　ＴＴＧ　ＧＧＴ　Ｇ ＧＴ　にＣＡ　ＴＴＧ　ＧＣＡ　ＡＣＴ　ＧＴＴ　ＧＣＣＧＧＡ　T４２ Ｖａｌ　Ｐｈ−Ｔｈｌ　ＧＬｙ　Ｈｉｓ　ｓ＠ｒ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｇ、ｌｙ　 Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　ＡＬａ　ＧｌｙＧＣＡ　ＧＡＣＣｒ Ｇ　ＣＧＴ　ＧＧＡ　ＡＡＴ　ＧＧＧ　ＴＡＴ　ＧＡＣＡＴＣＧｋＣＧＴＧ　Ｔ ＴＴ　ＴＣＡ　丁ＡＴ　ＧＧＣ５９０人１ａ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｇｌｙ 　Ａｇｎ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ａｓｐ　工Ｌａ　Ａｓｐ　ＶａＬ　Ｐｈｅ　ｓ＠ｒ 　Ｔｙｒ　ＧＬｙＧＣＣＣＣＣＣＧＡ　ＧＴＣＧＧＡ　入ｋＣＡＧＧ　ＣＣＴ　 ７７丁　Ｇ（ｍＡ　ＧＡＡ　ＴＴＣＣＴＧ　ＡＣＣＧＴＡ　ＣＡＧ　６３８Ａｌ ａ　Ｐｒｏ＾ｒｇ　Ｖａｌ　Ｃ１ｙ　Ａｓｎ　ｋｒｑ　Ａｌａ　Ｐｈ＠Ａｌａ　 Ｇｌｕ　Ｐｈ＠Ｌ＠ｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｇ１ｎＡｃｅ　ＧＧＣＧＧＴ　ＡＣＣ ＣＴＣＴＡＣＣＧＣＡＴＴ　ＡＣＣＣＡＣＡＣＣＡＪｌｉＴ　ＧｋＴ　ＡＴＴ　 ＧＴＣＣＣＴ　６ｅ６丁ｈｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｒ ｇ　Ｘ１ｅ　Ｔｈｒ　Ｈｉｓ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　ＸＬｅ　Ｖａｌ　Ｐｒ 。

１９ａ　１９５　２００　２０５ ＡＧλ　ＣＴＣＣＣＧ　ＣＣＧ　ＣＧＣＣＡＧ　丁τＣＧＧτ　ＴＡＣＡＧＣＣ ＡＴ　ＴＣＴ　ＡＧＣＣＣＡ　ＣＡＧ　丁ＡＣ７３４人ｒｇ　Ｌａｕ　ｐｒｏ　 Ｐｒｏ　入ｒｇ　Ｇｌｕ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　５ｅｒ　１４ｉｓ　Ｓ＠ｒ 　Ｓａｔ　Ｐｒｏ　ＧＬｕ　Ｔｙ■ ＴＧＧ　ＡＴＣＡＡＡ　ＴＣＴ　ＧＧＡ　ｋＣＣＣＴｒ　ＧＴＣＣＣＣＧＴＣＡ ＣＣＣＧＡ　ＡＡＣＣＡＣＡＴＣＧｉＧ　フ８２τ１工１＠Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇ ｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ＾ｒ９＾ｓｎ　Ａｓｐ 　ｕｓ　Ｖａ１２２５　２コ０　２３５ ３５ＧＡＧＴＡ　ＧＡＡ　ＧＧＣＡＴＣＧＡＴ　ＧＣＣＡＣＣＧＧＣＧＧＣ入Ａ τ　ＡＡＣＣＡＧ　ＣＣＴ　ＡＡＣＡＴＴ　８３０Ｌｙｓ　ＩＩｓ　Ｇｌｕ　Ｇ ｌｙ　工１＠　Ａｓｐ　ｌｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ａｓｎ　Ｇ ｉｎ　ｐｒｏ　入ｓｎ　Ｉｌ＊ｃｃｃ　ｃλτ　入ＴＣＣｃ＋ｒ　ＧＣＧ　（Ｊ ＣｃＴＡ　ＴＧＧ　ＴＡＣ丁ＴＣＧＧＧ　τＴＡ　ＡＴＴ　ＧＧＧ　入Ｃ入　丁 Ｇテ　８７a Ｐｒｏ　入ｓｐ　工１ｅ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　Ｈｉｓ　Ｌｓｕ　丁ｒｐ　Ｔｙｒ　 Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　工１ｅ　ＧＬｙ　Ｔｈｌ　ＣｙｓＣＴτ　丁入Ｇ丁Ｃ ＣＧＡＡＧ　ＣＴＴ　８９４配列番号＝８ 配列の長さ・２７０ 配列の型二アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列： Ａｌａ　ＧＬｕ　Ｖａｌ　５＠ｒ　Ｇｉｎ　Ａｓｐ　Ｌ＠ｕ　Ｐｈａ　Ａｓｎ　 Ｇｉｎ　ｔｈ＠　Ａｇｎ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　ＡＬａ　にｉｎｌ　Ｓ　１０　１５ Ｔｙｒ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ａｉａ　八Ｌａ　Ｔｙｔ　Ｃｙｍ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　 Ａｇｎ　Ａｇｎ　Ａｇｐ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　ＧＬｙＴｈｒ　Ａｓｎ　工 １ｅ　丁ｈｒ　Ｃｙｌ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｇｎ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｇ Ｌｕ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｌｙｓ　＾１ａ八ｓｐ　ＡＬａ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌｅ ｕ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ　ＧＬｕ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇｌ ｙ　Ａｓｐ　ＶａｌＳｏ　５５　６０ Ｖａｌ　ＧｌｕＡｓｐ　Ａｌａ　Ｖａｌ　ｌｒｇ　ＧＬｕ　Ｈｉｓ　Ｐｒｏ　Ａ ｓｐ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　ＶａＩＶａｌ　Ｐｈａτｈｒｆ’ｒｏ　Ａｌａ　＋４ｉ ｓ　Ｌｅｕ　Ｔｒｐ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ工ｉｓ　ＧＬｙ　Ｔｈｒ 　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ配列番号；９ 配列の長さ：５５ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマー 配列。

＾ＴＣＣＣＴＧＣＧＣＡＣＣＴＡＴＧＧＴＡ　ＣＴＴＣＧＧＧＴＴＡ　ＡＴＴＧ ＧＧＡＣＡＴ　ＧＴＣＴＴＧＣＴＡＧ　ＣＣＴＴＡ　５５配列番号＝１０ 配列の長さ：５９ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名・プライマー 配列： ＡＧＣＴＴＡＡＧＧＣＴＡＧＣＡＡＧＡＣＡ　ＴＧＴＣＣＣＡＡＴＴ　ＡＡＣＣ ＣＧＡＡＧＴ　ＡＣＣＡＴＡＧＧＴＧ　ＣＧＣＡＧＧＧＡＴ@５９ 配列番号：１１ 配列の長さ：　１８２８ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　ｃＤＮＡ　ｔｏ　ｍＲＮＡ起源 生物名：　Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ　ｃａｎｄｉｄｕＩ１１株名：　ＣＭＩＣＣ３ ３５４２６ 配列の特徴 特徴を表す記号：　ＣＤＳ 存在位置：　４０．　、１７３１ 他の情報：／生成物＝“リパーゼ″ 配列の特徴 特徴を表す記号二ｓｉｇ　ｐｅｐｔｉｄｅ存在位置：４０．．９６ 配列の特徴 特徴を表す記号：　ｍａｔ　ｐｅｐｔｉｄｅ存在位置：　９７．　、１７２ｓ 他の情報：／生成物＝“リパーゼ”／遺伝子＝“１ｉｐＢ”配列： λｋＴ丁ＣＧＧｃＪｋｃ　Ｇ＾ＧｋＴＴＣＣＭ　ＴＧＡτττＧＣλＡ　ＣｒＧ ＴＴλ＾丁ＣＡＴＧ　ＣＴＴ　Ｔ（：（：　＾入＾　ＡＧＣT４ Ｈａｔ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　５ａｔ−１９−１ｓ Ｔｒ’Ｔ　ＴＸＴ　ＴＴＧ　ＧｃＴ　ＧＣＧ　ＧＣｃＣＴＣＭＣＧτＡ　ＧＴＧ 　ＧＧＣｋｃｃ　ｆｆ１Ｇ　ＧＣＣ（：ＡＧ　ＧＣＣ１０２Ｐｈ＠Ｐｈ＠Ｌｅｕ 　Ａｌａ＾１ａ＾ｌａ　Ｌａｕ　Ｍｎ　ＶＪＬＩ　ＶＪＩＩ　Ｇｌｙ　’Ｔｈｒ 　Ｌａｕ＾ｌａ　Ｇｉｎ　ＡｌａＣＣＣｋＣＧ　ＧＣＣＧＴＴ　ＣＴＴ　ＭＴ　 ＧＧＣＭＣＣＡＧ　ＧＴＣＡＴＣＴＣτＣＣ丁ＧＴＣＣＴｒ　ＧＡＧ　１５０Ｐ ｒｏ　Ｔｈｒ　入１ａ　Ｖａｌ　！、ｓｕ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｇｎ　Ｇｌｕ　 Ｖａｌ　Ｘｌ・　５ｅｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ　ＧＬ■ ５　１０　１ｓ ＧＧＣ＾＾ａ　ＧＴＴ　ＧＡＴ　ＡＣＣＴＴＣＡＡＧ　ＧＧＡ　ＡＴＣＣＣＡ　 ＴＴ’Ｔ　ＧｃＴ　ＧへＣＣＣτ　ＣＣＴ　０７丁　１９８Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｖ ａｌ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｐｈ＠Ｌｙｓ　Ｇｌｙ工ｉ＠Ｐｒｏ　Ｐｈ＠＾１＆＾ｓ ｐ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｖａ１ＧＧＴ　ＧＡＣＴ’ＴＧ　ＣＧＧ　’！ＴＣＡＡＧ 　ＣＡＣＣＣＣｃＡＧ　ＣＣＴ　ＴＴＣＡＣＴ　ＧＣＡ　ＴＣＣＴＡＣＣＡＣ２ ４６Ｃ１ｙ　八＊ｐ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　ＨＬｓ　Ｐｒｏ　Ｇｉ ｎ　Ｐｒｏ　Ｐｈ＠　丁ｈｒ　Ｇｌｙ　Ｓ＠ｒ　Ｔｙｒ　Ｇ１ｎ３５　４０　４ ５　Ｓ。

ＧＧＴ　ＣＴＴ　八ＡＧ　ＧＣＣ入ＡＣＧ入Ｃ丁ＴＣＸにＣＴＣＴ　ＧｃＴ　Ｔ ＧＴ　λ丁ＧＣ＾ＧＣ丁τ　ＣＡＴ　ＣＣＴ　２９４Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　 Ａｌａ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｐｈｓ　５ａｆ　５＊ｒ　Ａ１蟲　Ｃｙｓ　Ｍｅｔ　 Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　八ｓｐ　ｉ’ｒB ＣＴ’Ｔ　ＣＣＴ　ＣＡＴ　入ＡＣＣＴＴ　ＡＧＡ　（、ＧＣＣＣＴ　ＣＴ’Ｔ 　ＴＡＴ　ＣＡＣＡＴＧ　ＧＣＣＣＡＧ　ＧＧＴ　ＡＧＴ　R９０ ＧＴＣＴＣＣＡＴＧ　ＡＡＴ　ＣＡＧ　ＧＡＣＴＧＴ　ＣＴＣＴＡＣＣＴＴ　Ａ ＡＣＧＴＴ　Ｔ’ＴＣ（：ＧＣＣＣＣＧＣＴ　４３８Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｈａｔ　 Ａｓｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　 Ｐｈａ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　ＡｌａＺｏｏ　１０５　１１０ ｃｃｃ　ｘｃｃ　入ＡＧ　ＣＣＴ　ＧＡＴ　ＣＣｒ　ＡＡＧ　ＣＴＣＣＣＣＣＴ Ｃ入ＴＧ　ＣＴＴ　ＴＣＧ　ＡＴｒ　τλＣＧＧ丁　４８６ＧＩＹ　Ｔｈｒ　Ｌ ｙｓ　ＰｒｏＡＩＩｐ＾ｌａ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｎ　Ｍｅｔ　Ｖａ ｌ　Ｔｒｐ　Ｉｌｅ　Ｔｙｒ　ＧｌｙＧＧＴ　ＧＣＣＴＴＴ　０Ｔ（ｉ　ＴＴＴ 　ＧＯＴ　ＴＣＴ　ＴＣＴ　ＧｃＴ　ＴＣＴ　ＴＡＣＣｃＴ　ＧＧＴ　ＡＡＣＧ ＧＣＴＡＣ５３４Ｇｌｙ　入Ｌａ　Ｐｈｅ　Ｖａｌ　Ｐｈ＠Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓ ｅｒ　Ａｌａ　５ｅｒ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　入ｓｎ　Ｇｌｙ　テｙｒＧＴ ＣＡＡＧ　ＣＡＧ　ＡＧＴ　ＧＴＧ　ＧＭ　ＡＴＣＧＧＣＣＡＧ　ＣＯＴ　ＧＴ Ｔ　Ｇτｃ　ｍ　ｃｒｒτＣＣＡτｃ５８２Ｖａｌ　ＬｙＩＩ（ｌｕ　５＠ｒ　 ＶａＩＧｌｕ　Ｍａｔ　にＧＬｙ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｐｈａ　 Ｖａｌ　５ｓｒ　ｌ１ｅＡＡＣＴＡＣＣＧＴ　ＡＣＣＧＧＣＣＣＣＴｋＴ　ＧＧ ｈ　ＴＴＣＴＴＧ　ＣＧＴ　ＧＧＴ　にＡＴ　ＧＣＣＡＴＣＡＣＣ６３０Ａｓｎ 　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｐｈ＠　Ｌ、ａ ｕ　ＧＬｙ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｌａ　工１＠　τｈ■ ＧＣＴ　ＧｋＧ　Ｇｅｅ　ＡＡＣ＾ＣＯＡＡＣＧＣＴ　ＧＧＴ　ＣＴＧ　ＣＡＣ ＧＡＣＣＪＧ　ＣＧＣＡＡＧ　（＆Ｔ　ＣＴＣ６７８＾１ａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　 Ａｇｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　入１ａ　Ｇｌｙ　Ｌｓｕ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ　Ｇｉｎ　 Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　ＬｅｕＧｋＧ　ＴＧＧ　ＣＴｒ　ＡＧＣＧＡＣＡＡＣ ＡＴＴ　ＧＣＣＡＡＣＴＴＴ　ＧＯ丁ＧＧＴＧＡＴ　Ｃｅ（ｎ　ＧＡＣｋｋＧ　 ７２６Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　ＶａＬ　Ｓｓｒ　Ａｍｐ　Ａｓｎ　Ｉｌｅ　Ａ１轟　Ａ ｇｎ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　ＬｙｓＧＴＣＡＴＯ Ａ’ＬＴ　Ｔ’ｒＣＧＧＴ　ＧＡＧ　ＴＣＣＣＣＴ　ＣＧＴ　ＧＣＣＡＴＧ　Ａ ＧＴ　ＧＴＴ　ＧＣＴ　ＣＡＣＣＡＧ　７フ４ＶａＩ　ＭＣセ　Ｉｌｅ　Ｐｈ＠ 　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　Ｈａｔ　５ｅｒ　Ｖａｌ 　Ａｌａ　ＨＬｔｓ　Ｇ１■ ＣＴ’Ｔ　ＧＴＴ　Ｇｅｅ　ＴｋＣＧＧＴ　ＧＧＴ　ＧｋＣＭＣＡＣＣＴＡＣ入 ＡＣＧｌｌ；Ａ　入ＡＧ　ＣＡＧ　ＣＴＴ　Ｔ′ＴＣ８２２Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ａ ｌａ　Ｔｙｒ　ＧＬｙ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｇ ｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｐｈ＊（：ＡＣＴＣＴ　ＧＣＣＡＴＴ　（ＴＴ 　ＩＪＧ　ＴＣＴ　ＧＧＣＣＧＴ　ＣＣＴ　ＣＴＴ　ＣｃＴ　ＴＡＣτττ　Ｇ ＡＣ丁ＣＴ　９７ＱＨｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｓａｒ 　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ａｓｐ　５ａｒ ２４５　２５０　２ｓｓ ＡＣｔ　ＴｃＴ　ＧＴＴ　ＧＧＴ　ＣＣＣＧＡＧ　ＡＧＴ　ＧＣＣＴＡＣＡＧＣ ＡＧＡ　ｍ　ＧＣＴ　ｃＡＧ　ＴＡＴ　ＧＣＣ９１８丁ｈｒ　５ａｒ　Ｖａｌ　 Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　入ｒｇ　Ｐｈｅ　 Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　ＡｌａＧＧＡ　ＴＧＴ　ＧＡＣＡＣＣＡＧＴ　ＧＣＣ ＡにＴ　ＧＡＴ　入ＡＴ　ＧＡＣＡＣＴ　ＣＴＣＧＣＴ　Ｔに？　ＣＴＣＣＧＣ ９６６Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｓｅｔ　Ａｓｐ　Ａ ｇｎ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　入１ａ　Ｃｙｓ　！Ｊｕ　ＡｒｇｋＧｃ　ＡＡ Ｇ　ＴＣＣＡＧＣＧＡＴ　ＧＴＣＴｒＧ　ＣＡＣＡＣＴ　ＧＣＧ　ＣＡＧ　ＡＡ ＣＴＣＣＴＡＴ　ＧＡＴ　ＣＴＴ　１０１４Ｓ＠ｒ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｓ＠ｒ＾ ｓｐ　Ｖａｌ　Ｌ＠ｕ　Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　Ａｓｎ　Ｓｅｒ　Ｔ ｙｒ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ２９５　コ００　３０５ ＡＡＧ　ＧＡＣｃ’ｒＧ　ＴＴＴ　ＧＧＴ　ＣＴＧ　ＣＴＣＣＣＴ　ＣＡＡ　Ｔ ｒＣＣＴＴ　ＧＧＧＴＴＴ　ＧＯＴ　ＣＣＣＡＧＡ　１０６Q Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　 Ｐｈ＠Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ３１ｏ　３ユ５　コ２ ０ ＣＣＣに７１１ＣＧＧＣＡＡＣＡＴＴ　ＡＴＴ　ＣＣＣＧＡＴ　ＧＣＣＧＣＴ　 τ入τ　ＧＡＧ　ＣＴＣＴＡＣＣＧ（：　ＡＧＣｌエユ０Ｐｒｏ　Ａｍｐ　Ｇｌ ｙ　Ａｓｎ　ＸＬｅ　Ｘｌｅ　Ｐｒｏ　Ａｍｐ　＾１＆　Ａｌａ　Ｔｙｒ　ＧＬ ｕ　Ｌａｕ　Ｔｙｒ　八ｒｇ　５ｅｒコ２５　３３０　３３５ ＧＧＴ　ＡＧＡ　ＴＡＣＧＣＣＡＡＧ　ＧＴＴ　ＣＣＣＴＡＣＡＴＴ　ｋＣＴ　 ＧＧＣ入ＡＣＣＡＧ　ＧＡＧ　ＣＡＴ　ＧＡＧ　１１５ＢＧｌｙ　ｋｒｑ　Ｔｙ ｒ　Ａｌａ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ａｇ ｎ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　ＧｌｕＧＧＴ　ＡＣＴ　ＡＴＴ　ＣＴＴ　ＧＣＣ ＣＣＣＣＴＴ　ＧＣＴ　ＡＴＴ　ＡＡＴα：’ｒ　ＡＣＣＡＣＴ　ＮｃＴＣＣＣ ＣＡＴ　１２０６Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　工ｌ＠　Ｌｅｕ　ＡＩＪＩ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ 　Ａｌａ　工１ａ　Ａ＋ｎ　入１ａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｈｉ■ ＧＴＴ　入ＡＧ　ＡＡＧ　ＴＧＧ　ＴＴＧ　）ＬＡＧ　ＴｋＣＡＴＴ　ＴＣＴ　 ＡＧＣＣＡＧ　ＧＣＴ　ＴｅＴ　ＣＡＣＧｃＴ　ＴＣＧ　１Q５４ Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｌｙｓ　Ｔｒｐ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ｔｙｒ工ｌｅ　Ｃｙｓ　Ｓ ａｒ　Ｇ工ｎ　Ａｌａ　５ｅｒ　Ａｓｐ　Ａｌａ　５ｅｒＣＴＴ　ＧＡＴ　Ｃに Ｔ　ＧＴＴ　ＴＴＣＴＣＧ　ＣＴＣＴＡＣＣＣＣＧＧＣＴＣＴ　ＴにＧ　ＴＣＧ 　ＧＡＧ　ＣＧＴ　ＴＣＡ　１３０２Ｌｅｕ　Ａｓｐ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｌｅｕ 　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ｓｉｒ　Ｇｌｕ 　Ｇｌｙ　５ｅｒＣＣＡ　ＴＴＣＣＧＣＡＣＴ　ＧＧＴ　＾Ｔ’ｒ　ＣＡＴ　入 ｋＴ　ＧＣＴ　ＣＴＴ　ＡＣＣＣＣＴ　（：ＡＧ　’ｌ”ｒＣＡＪＩＧ　ＣＧb ，１３５０ ＰｒＯＰｈｅ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ａｌａ　Ｌ ｅｕ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　入ｒ９４０５　４１０　４ユ ５ ＡＴＧ　ＣＴ’Ｔ　ＡＡＣにＧｃＴ　ＡＣＣＡＡＧ　ＧＡＣＧＴＣＡＡＣＣＧＣ ＴＧＧ　ＡＣｒ　ＴＡＣ（ＴＴ　ＣＣＣＡＣＣ１４４６Ｍｅｔ　１．ｅｕ　Ａ１ １ｎ　入１ａ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｍｎ　入ｒ９丁ｆＰ　Ｔｈｒ 　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　τｈｒＣｋＧ　ＣＴＣＣＡＴ　ＡＡＣＣＴＣＧＴＴ 　ＣＣＡ　Ｔ’＋ｉπＧ弱τＡＣＴ　ＴＴＣＣＡＴ　Ｇｌｌ；Ｃ＾ＧτＧＡτ　 １４９４Ｇｉｎ　ｔ、ｅｕ　１４１ｓ　Ａｓｎ　Ｌｓｕ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　Ｐｈ ｅ　Ｌ＠ｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈ＠ＨＬｓ　Ｇｌｙ　５ａｒ　Ａｓ■ ＣＴＴ　ＣＴＴ　ＴＴＴ　ＣＡＡ　ＴＡＣＴＡＣＧＴＧ　にＸＣＣｆｆ１　（４ ＣＣＣＡ　ＴＣ’ｒ　ＴＣ’Ｔ　ＯＣＴ　ＴＡＣＣＧＣ１５S２ Ｌａｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈ＠Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｇ ｌｙ　Ｐｒ口　Ｓ＠ｒ　Ｓａｔ　入１ａ　Ｔｙｒ　λｒ９ｃｃｃ　Ｔｘｃ　ｍ　 入ＴＣＴＣＧ　ｍ　ＧＣＣ入ＡＣＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡ（：　ＣＴＴ　 ＧＧＴ　入Ｃｃ　１５９０Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　Ｉｌｅ　５ｅｒ　Ｐｈａ　 Ａｌａ　Ａｇｎ　Ｈｉｓ　Ｈｉｓ　入ｓｐ　Ｐｒｏ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　 丁ｈｒＡＡＣＣＴＣＣｌ１ｉＡ　ＣＡＧ　ＴＧＧ　ＧＡＴ　ＡＴＯＴＡＣＡＣＴ 　（２ｋＴ　ＧＣＡ　ＧＧＣＭＧ　ＧＡＧ　ＡＴＣＣＴＴ　１６３P１ Ａｓｎ　Ｌ＠ｕ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　入＠ｐ　Ｍｅｔ　丁ｙｒ　Ｔｈｒ　 Ａｓｐ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔ　Ｌｅｕ５００　ＳＯ５５１ ０ （ＪＧ　Ａｆｆｌ　ＣＡＴ　ＡＴＧ　ＡＴＴ　ＧＧＴ　Ｍｅ　ＴｃＴ　ＡＴＧ　 ＡＧＡ　ＡＣＴ　ＧＡＣＧＡＣＴＴＴ　ＡＧＡ　ＡＴＣ１６W６ ＧＡＧ　ＧＧＡ　ＡＴＣＴＣＧ　ＡＡＣＴＴＴ　ＧＡＧ　ＴＣＴ　ＧＡｃ　ＧＴ Ｔ　ＡＣＴ　ＣＴＣＴＴＣＧＧＴ　ＴＭＴＣＣＣＡＴ？　１P３８ Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｘｌｅ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　ＧＬｕ　５ｅｒ　八ｓｐ　 Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｐｈａ　ＧｌｙτＡＧＣ入ＡＧＴＴＴ　τＧＴＧＴＡ τｒｒｃ　入ＡＧτＡＴＡＣＣＡ　ＧττＧＡτＧ丁入Ａ　丁Ａ丁ＡτＣＡＡτ 入　ＧＡＴτＡＣ入八`τ　へ人　１７９８ ＴＡＡＴＴＡＧＴＧＡ　ＡＡＡＡＡＡＡ人＋ｔ−Ａ　υＮ〃込触Ｃ１８２ｓ配列 番号＝１２ 配列の長さ５６３ 配列の型二アミノ酸 トポロジー・直鎖状 配列の種類・タンパク質 配列： Ｍｅｔ　Ｖａｌ　５ｅｒ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｐｈａ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　 Ａｌａ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ａｓｎ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ−１９−１ｓ　−１ ０’　−５ Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ａｌａ　Ｇｉｎ　入Ｌａ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　ＡＬａ　ＶａＬ　 Ｌｅｕ　入ｓｎ　Ｇｌｙ　Ａｇｎ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　工１ｅＳ＠ｒ　Ｇｌｙ　Ｖ ａｌ　Ｌｅｕ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ＾ｓｐ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙ ｓ　にｌｙＬｙｓ　Ｐｒｏ　Ｐｈａｉｓ　２０　２５ Ａｌａ＾ｓｐ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｖａｎ　Ｇｌｙ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　ｌｒｇ　Ｐ ｈａ　Ｌｙｓ　ＨＬｓ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　ＰｈｅＴｈｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅ ｔ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　入１ａ　Ａｓｎ　Ａｓｐ　Ｐｈ ａ　Ｓｅｒ　５ａｒ　八Ｌａ　ＣｙｓＭｅｔ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ａｓｐ　ｌ’ｒ ｏ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ＾ｌａ　Ｐｈｅ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｌａｕ　Ａｓｐ　Ｌｙｓ 　Ｖａｎ　Ｖａ１Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　工ｌｅ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　 ＡＩＩｐ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ａｓ■ Ｍｅセ入１ａ　にＧｉｎ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｍａｔ　Ａｓｎ　 にＬｕ　Ａｓｐ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　＾５ｎＶａｌ　Ｐｈ１ｌ　 Ａｒｇ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　ＡＬａ　 Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　）ｌ■■ ｌｌｏ　１１５　１２０　１２５ Ｖａｌ　Ｔｒｐ　工ｌｅ　Ｔｙｒ　にｌｙ　Ｇｌｙ　ＡＬａ　Ｐｈａ　Ｖａｌ　 Ｐｈｅ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　入１ａ　Ｓｅｒ　ＴｙｒＰｒｏ　Ｃ１ｙ　Ａ ｓｎ　にＡｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　ｃｌｕ　Ｓｅｙ：　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　 Ｍｅｔ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｖａ■ Ｖａｌ　Ｐｈｍ　ＶａＬ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ａｓｎ　Ｔｙｒ＾ｒ９τｈｒ　Ｇｌ ｙ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ｐｈｅ　Ｌｅｕ　ＧｌｙＣｌｙ　Ａｓｐ　ＡＬａ 　Ｘｌｅ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ａｇｎ　Ｔｈｒ　八ｓｎ　ＡＬａ 　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　ＡｓｐＧｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　 Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ａｇｎ　Ｉｌｅ　ＡＬａ　Ａｇｎ　 Ｐｈｅ　ＧｌｙＬｅｕ　Ａｌａ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ａｒｑ　Ｓａｒ　Ｌｙｓ　Ｓ ｅｒ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　ｒＡｕ　ＨＬｓ　Ｓａｒ　Ａｌａ　Ｇ１ｎ＾ｓ ｎ　Ｂａｒ　Ｔｙｒ　ｋｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｐｈ＠Ｇｌｙ 　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　ＬａｕＴｒｐ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　 Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　ＧｌｙＬｙｓ　Ｌｅｕ　Ａ ｓｎ　Ａｌａ　Ｌｅｕ　ＴｈｒＰｒｏ　Ｇｉｎ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ＾ｒｇ　Ｉｌ＠ λｌａ　ＡＬａ　Ｘｌｅ　Ｐｈ＠τｈｒ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｓｕ　Ｐｈ＠Ｇ１ ｎＴｈｒ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｌｅｕ　Ｈｉｓ　Ａｇｎ 　Ｌａｕ　Ｖａｔ　Ｐｒｏ　Ｐｈａ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　ＴｈｒＰ’ｈｅ　Ｈｉｓ 　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｌｅｕ　Ｐｈａ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　？）τ Ｖａｌ　Ａｓｐ　Ｌａｕ　Ｇｌｙ　Ｐｒ。

５ｅｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　ｋｒｑ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ　工１ａ　 Ｓｅｘ　Ｐｈｅ　Ａｌａ　ｋｓｎ　Ｈｉｓ　Ｈｉｓ　Ａｓｐ１’ｒｏ　Ａｇｎ　 Ｖａｔ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｌｅｕ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　Ａｓｐ　 Ｍｅｔ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　入ｓｐ　＾１P ４９５　５００　５Ｏ５ Ｇｌｙ　Ｌｙｓ　Ｇｌｕ　Ｍｅセ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　工ｉｓ　Ｈｉｓ　Ｍｅｔ　 工ｌ＠　Ｇｌｙ　ｋＢｎ　Ｓｅｒ　Ｍｅｔ　入ｒｇ　ＴｈｒＡｓｐ　Ａｓｐ　Ｐ ｈｅ　Ａｒｇ　工ｌｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　工１ｅ　５ｅｒ　Ａｓｎ　Ｐｈｅ　Ｇ ｌｕ　Ｓａｔ　ＡＩＩＰ　ＶＪＩＩ　丁■■ Ｌａｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ 配列番号：１３ 配列の長さ：３６ 配列の型：核酸 鎖の数、−重鎖 トポロンー：直鎖状 配列の種類　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ 直接の起源 クローン名、プライマー１ｉｐｏ３ 配列： ＧＧＧＧＣＧＧＣＣＧ　ＣＧＣＡＧＧＣＣＣＣＡＡＧＧＣＧＧＴＣＴ　ＣＴＣＡ ＡＴ　３ｅｒ列番号＝１４ 配列の長さ、３０ 配列の型：核酸 鎖の数、−重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名二部分非ニーディング鎖すパーゼ■配列： ＡＴＴＧＡＧＡＧＡＣＣＧＣＣＧＴＧＧＧＧ　ＣＣＴＧＧＧＣＣＡＧ　３０配列 番号：１５ 配列の長さ、３８ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名・部分コーディング鎖すパーゼ■配列： ＣＡＡＡＣＴＴＴＧＡ　ＧＡＣＴＧＡＣＧＴＴ　ＡＡＴＣＴＣＴＡＣＧ　ＧＴＴ ＡＡＡＡＣ３ｇ配列番号：１６ 配列の長さ・３２ 配列の型、核酸 鎖の数−一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列ノ種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマー１ｉｐｏ４ 配列： ＣＣＣＣＧＣＴＡＧＣＡＣＣＧＴＡＧＡＧＡ　ＴＴ＾＾ＣＧＴＣＡＧ　ＴＣ３２ 配列番号＝１７ 配列の長さ：３０ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマー１ｉｐｏ５ 配列： ＣＣＣＧＣＧＧＣＣＧ　ＣＣＡＧＣＡＴＴＧＡ　ＴＧＧＴＧＧＴＡＴＣ３０配列 番号＝１８ 配列の長さ：１８ 配列の型・核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名二部分非ニーディング鎮リパーゼ配列： ＧＡＴＡＣＣＡＣＧＡ　ＴＣ＾＾ＴＧＣＴ　１８配列番号＝１９ 配列の長さ：１８ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名：部分ニーディング鎖リパーゼ配列： ＾ＡＣＡＣＡＧＧＣＣＴＣＴＧＴＡＣＴ　１８配列番号＝２０ 配列の長さ＝２８ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロノー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマー１ｉｐｏ６ 配列・ ＣＣＧＣＧＣＴＡＧＣＡＧＴＡＣＡＧＡＧＧ　ＣＣＴＧＴＧＴＴ　２８配列番号 ：２１ 配列の長さ：　２６８５ 配列の型：核酸 鎖の数二二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮ＾起源 生物名：　Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ（サツカロミセ スＯセレビシェ）直接の起源 クローン名：　ｐＹＹ１０５ 配列の特徴 特徴を表す記号：　ＣＤＳ 存在位置：　１．．２６８５ 他の情報・／生成物＝”凝集タンパク質”／遺伝子＝“ＦＬＯＩ”配列： ＡＴＧ　ＡＣＡ　ＡＴＧ　ＣＣＴ　ＣＡＴ　ＣＧＣＴＡＴ　ｋＴＧ　Ｔｒ’Ｔ　 ｆｆ１Ｇ　ＧＣＡ　ＣＴＣＴＴＴ　ＡＣＡ　ＣＴＴ　ＣＴＧ@４８ Ｍｅｔ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　Ｈｉｓ　Ａｒｇ　Ｔｙｒ　Ｍｔ　Ｐｈａ　Ｌ ａｕ　入１ａ　Ｖａｌ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｌａｕｚ　５　１０　１ｓ Ｇ（Ｊ　ＣＴＡ　ＡＣＴ　ＡＧＴ　ＧＴＧ　ＧＣＣＴＣＡ　ＧにＡ　ＧＣＣＡＣ Ａ　ＣＡＧ　ＧＣＣＴＧＣＴＴＡ　ＣＣＡ　ＣＣＡ　９６ＡＬａ　Ｌａｕ　丁ｈ ｒ　５ｅｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　５ｅｒ　Ｇｌｙ　八ｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｌ ａ　Ｃｙｓ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　ＡｌａＧＧＣＣＡＧ　ＡＧＯ入入Ａ　ＡＣＴ　Ｇ ＧＧ　ＡＴＧ　入Ｉ　ＡＴＡ　入＾τ　丁Ｔτ　ＴＡＣＣＡＧ　τ入τ　丁Ｃへ 　ＴτＧ　１４４Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｍｅｔ　 Ａｓｎ　Ｘｉｓ　Ａｓｎ　Ｐｈｓ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ人 ＡＡ　ＣＡＴ　ＴＣＣＴＣＣ１八ＣＡ　ＴｋＴ　丁ＣＧ　ＡＡＴ　ＧＣＡ　ＧＣ Ａ　ＴＡＴ　ＡＴＧ　ＧＣＴ　ＴＡＴ　ＧＧＡ　ＴＡＴ　P９２ Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｓａｔ　Ａｓｎ　Ａｌａ＾ ｌａ　Ｔｙｒ　Ｍｅｔ＾ｌａ　Ｔｙｒ　ｃｌｙ　ＴｙｒＳｏ　５５　６０ ＧＣＣＴＣＡ　入入Ａ　ｋＣＣＡＡＡ　ＣＴＡ　ＧＧＴ　ＴＣＴ　ＧＴＣＧＧＡ 　ＧＧＡ　ＣＭ　ＡＣＴ　ＧＡＴ　ＡＴＣＴＣＧ　２４０＾１ａ　Ｓｅｒ　Ｌｙ ｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｓｕ　Ｇｌｙ　５ｅｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｇｌ ｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｚｌｅ　５ｅｒＡＴＴ　ＧＡＴ　ＴＮＴ　入ＪＩＬＴ　Ａ ＴＴ　ＣＣＣＴＧＴ　ＧＴｒ　ＡＣＴ　ＴＣＡ　ＴＣＡ　ＧＧＣＡＣＡ　ＴＴＴ 　ＣＣＴ　ＴＣ７Q８８ 工１ｅ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　ＩＩｓ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　 Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　ＧＬｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｐｒｏ　ｃｙ＊ｃｃｒ　ＣＡＡ　Ｇ ＡＡ　ＣＡＴ　ＴＣＣＴＡＴ　ＧＧＡ　ＭＣＴＧＧ　ＧＧＡ　ＴＧＣＡＡＡ　に ＧＡ　ＡＴＧ　ＧＣＴ　ＧＣＴ　３３６Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｓｅ ｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ａｓｎ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｃｙｓ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｍｅ セＧｌｙ　ＡＬａｌｏｏ　１０５　１１０ ＴＧＴ　ＴＣＴ　入ＡＴ　八ＧＴ　ＣＡＡ　ＧＧｋ　ＡＴＴ　ＣＣＡ　ＴＡＣＴ ＧＧ　Ａにτ　ＡＣＴ　にＡＴ　ＴＴＡ　ＴＴＴ　ＧＧＴ　R８４ Ｃｙｓ　５ｅｒ　八ｓｎ　５ｅｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　Ｉｌｅ　入１ａ　Ｔｙｒ　 Ｔｒｐ　５ｓｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｌｅｕ　Ｐｈｅ　ＧｌｙＬｙｓ　１２０　１ ２ｓ Ｔ丁ＣＴＡＴ　ＡＣＴ　Ａｃｅ　ＣＣＡ　ＡＣＡ　ＡＡＣＧＴｋ　ＡＣＣＣＴＡ 　Ｇｋｋ　ＡＴＯ入ＣＡ　ＧＣＴ　丁Ａτ　τττ　４３２Ｐｈ＠　Ｔｙｒ　Ｔ ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａａｎ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｍ ｔ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｐｈｅ１コ０　１３５　１４０ τ丁Ａ　ＣＣＡ　ＣＣｋ　ＣＡＧ　ＡｃＧ　ＧＧＴ　ＴＣＴ　ＴＡｃ　ＡＣＡ　 ＴＴＣ入＾Ｇ　ＴＴＴ　ＣＣＴ　＾ＣＡＧ丁τ　ＧＡＣ４８O Ｌ＊ｕ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｓ＠ｔ　丁ｙｒ　丁ｈｒ　 Ｐｈ＠　Ｌｙｓ　Ｐｈｓ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ａｓｐ１４５　１５０　Ｘ ５Ｓ　１６０ ＧＡＣＴＣＴ　ＧＣＡ　ＡＴＴ　ＣＴＡ　ＴＣＡ　ＧＴＡ　ＧＧＴ　ＧＯＴ　Ｇ ＣＡ　入ＣＣＧＣＧ　ττＣ＾ＡＣ７６丁　ＴＧＴ　５２８＾ｓｐ　ｓｅｒ　Ａ ｌａ　工１＠　Ｌａｕ　Ｓ！ｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　入１ａ　Ｔｈｒ　Ａ ｌａ　Ｐｈａ　Ａａｎ　Ｃｙｓ　ＣｙｓＧＣＴ　ＣＡＡ　ＣＸＧ　ＣＡＡ　ＣＣ Ｇ　ＣＣＧ　Ａｒｃ　ＡＣＡ　ＴＣＡ　入ＣＧ　＾＾ＣＴττ　λＣＣＡττ　 ＧＡＣＧＣＴ　５７U ＾１ａ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　 Ｔｈｒ　λｌｌｎ　Ｐｈａ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　入ｓｐ　ＧＬ■ ｌｌｌｏ　１１１５　１９０ ＡＴＣＡＡＧ　ＣＣＡ　τｃｃ　ｃＧＴ　ＧＧＡ　ＡＧＴ　ＴＴＧ　ＣＣＡ　Ｃ ＣＴ　入入τ＾ＴＣＧｋｈ　ＧＧＡ　ＡＣＣＣＴＣ６２４１１ｅ　Ｌｙｓ　Ｐｒ ｏ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　＾ｌＩｎ　Ｉ ｌｅ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　ＶａP ＴＡＴ　ＡＴＣＴＡＣＧＣ’Ｔ　ＧＧＣＴＡＣＴｋＴ　ＴＡＴ　ＣＣＡ　ＡＴＧ 　ＡＡＧ　Ｇ’ｒｒ　ＧＴＴ　ＴＡＣＴＣＧ　ＡＡＣ６７２丁ｙｒ　Ｍｅｔ　Ｔ ｙｒ　ＡＬａ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　ＭＣセ　Ｌｙｓ　Ｖ ａｌ　Ｖａｔ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　ＡｓｎｃｃＴ　ｃτＴ　ＴＣＴ　ＴＧＧ　ＧＧ Ｔ　ＡＣＡ　ＣＴＴ　ＣＣＡ　ＡＴＴ　ＡＣＴ　ＧＴＧ　ＡＣＡ　ＣＴＴ　ＣＣ ｋ　ＧＡＴ　ＧＧＴ@７２０ ＡＬａ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ｘ１＠５ ｅｒ　Ｖａｌτｈｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏ　Ａｓｐ　ＧｌｙＡＣＣＡＣＴ　ＧＴＡ　 ＡＧＴ　ＣＡＴ　ＧＡＣＴＴＣＧＡＡ　ＧＧＧ　ＴＡＣＧＴＣＴＡττＣＣττ τＧＡＣＣＡＴ　７６８Ｔｈｒτｈｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ａｓｐ＾ｓｐ　Ｐｈｅ 　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｓｉｒ　Ｐｈｅ＾ｓｐ　ＡｓｎＧ ｋＣｃＴＡ　ＡＧＴ　ＣＡＡ　ＴＣＴ　ＡＡＣＴＧＴ　ＡＣＴ　ＧＴＣＣＣＴ　 Ｇ＾ＣＣＣ丁τＣＡ　入Ａτ　τ＾τ　にＣ’Ｔ　８１６Ａｓｐ　Ｌｓｕ　Ｓｅ ｒ　Ｇｉｎ　Ｓｅｒ　Ａｇｎ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　Ｐｒｏ　ｌａｐ　Ｐｒ ｏ　Ｓｅｒ　Ａａｎ　Ｔｙｒ　ＡＬａＧＴＣＡＣＴ　八ＣＣＡＣＴ　ＡＣＡ　Ａ ＣＴ　ＡＣＡ　ＡＣＧ　ＧＡＡ　ＣＣＡ　ＴＣＧ　ＡＣＣＧＧＴ　ＡＣＴ　ＴＴ ＣＡＣＴ　８６４Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ２ ７５　２８０　２ＢＳ τＣτ　八ＣＡ　ＴＣＴ　ＡＣＴ　Ｇｋｋ　ＡＴＧ　入ＣＣＡＣＣＧＴＣＡＣＣ ＧＧＴ　ＡＣＣＡＡＣＧにＣＣＴＴ　ＣＣＡ　９４２Ｓｅ＝τｈｒ　５ｅｒ　Ｔ ｈｒ　Ｇｌｕ　Ｍｅｔτｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌτｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ 　Ｇｌｙ　ＶａＬ　Ｐｒ。

入ＣＴ　ＧλＣＣ入Ａ　Ａｃｅ　ＧＴＣ　ＡＴＴ　ＧＴＣ　ＡＴＣ　ＡＧＡ　Ａ ＣＴ　ＣＣＡ　ＡＣＣ　ＡＧＴ　Ｇ入Ａ　ＧＧＴ　ＣＴＡ　X６０ 丁ｈｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　工１＠　ｖａｎ　）Ｌｍ　Ａｒｇ　 τｈｒ　Ｐｒｏ　丁ｈｒ　Ｓ＠ｒ　ＧＬｕ　Ｇｌｙ　ＬｅｕＡ丁Ｃ　ＡＧＣ　Ａ ＣＣ　ＡＣＣ　ＡＣＴ　ＧＡＡ　ＣＣＡ　ＴＣＧ　ＡＣＴ　ＧＧＣ　ＡＣＴ　Ｔ ＴＣ　ＡＣｒ　ＴＣＧ　ＡＣＴ　ＴＣＣ@１００８ 工１１！　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＧＬｕ　Ｐｒｏ　τｒｐ　Ｔｈｒ 　ＧＬｙ　τｈｒ　ｉ’ｈｅ　τｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓ■■ ＡＣＴ　ＧＡＧ　Ｇττ＾ＣＣ　ＡＣＣ　ＡＴＣ　＾ＣＴ　ＧＧＡ　ＡＣＣ　入 ＡＣ　ＧＧＴ　Ｃ入入Ｃｃ入ＡＣτＧＡＣ　Ｇ入Ａ　１０５U 丁ｈｒ　Ｇｌｕ　Ｖａ１　τｈｒ　Ｔｈｒ　工ｌｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　 Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｇ工ｎ　Ｐｒｏ　？ｈｒ　八ｓｐ　ＧｌｕＡＣ’ｒ　ＧＴＧ　 ＡＴＴ　Ｇτ丁　Ａ丁Ｃ　ＡＧＡ　ＡＣＴ　ＣＣＡ　ＡＣＣ　ＡＧＴ　ＧＡＡ　 ＧＧＴ　ＣＴＡ　ＡＴＣ　ＡＧＣ　＾Ｃb　１１０４ τｈｒ　Ｖａ１　工１ｅ　Ｖａｌ　ＸＬｅ　Ａｒｇτｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｓ ａｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｌ＠ｕ　工ｌａ　５ｅｒ　ＴｈｒＡｃｅ　ＡＣＴ　ＧＭ 　ＣＣｋ　ＴＧＧ　ＡＣＴ　ＧＯＴ　ＡＣＴ　Ｔ’ＴＣ　ＡＣＴ　？ＣＴ　入Ｃ Ａ　τＣＴ　ＡＣＴ　ＧＡＡ　ＡＴ（G　１１５２ Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　 Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　ＭｅセＡＣＣ　Ａｃｅ　Ｇ ＴＣ　ＡＣＣ　ＧＧＴ　ｋｃＴ　ＡＡＣ　ＧＧＴ　ＣＡＡ　ＣＣＡ　＾ＣＴ　Ｇ ＡＣ　Ｇ入入　ＡＣＣ　ＧＴＧ　ＡＴｒ@１２００ Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ｖａｌ　τｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　入ｓｎ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　 Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　工１ｅＧＴＴ　＾τＣ　Ａ ＧＡ　ＡＣＴ　ＣＣＡ　ＡＣＣＡＧＴＧ入ＡＧＧττＴＧＧ丁Ｔ＾ＣＡ　ＡＣＣ 　Ａｃｅ　ＡＣτＧ入入　１２４８Ｖａｌ　工１ｅ　入ｒ９　丁ｈｒ　Ｐｒｏ　 Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｔｈｔ　Ｔｈｒ　 Ｔｈｒ　ＧｌｕＣＣＡ　ＴＧＧ　ＡＣＴ　ＧＧＴ　ｋＣτ　ＴＴｒ　ＡＣｒ　Ｔ ＣＧ　ＡＣＴ　ＴＣＣ　ＡＣＴ　ＧＡＡ　ＡＴＧ　ＴＣＴ　ＡＣ？　ＧＴＣ@１ ２９６ Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈ＊　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　 Ｓｅｒ　τｈｒ　Ｇｌｕ　Ｍｅセ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ＾ＣＴ　ＧＧＡ　ｋ ＣＣ　ＡＡＴ　ＧＧＣ　ＴＴＧ　ＣＣＡ　ＡＣＴ　ＧＡＴ　ＧＡＡ　ＡＣＴ　Ｇ τＣ　ＡＴＴ　ＧＴＴ　ＧＴＣ　入入Ａ@１３４４ τｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｇｎ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｐｒｏτｈｒ　Ａｓｐ　Ｇ ｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｚｌｅ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　ＬＹＩＩｋＣｒ　ＣＣｋ　八 ＣＴ　ＡＣＴ　ＧＣＣ　Ａ丁Ｃ　ＴＣＡ　ＴＣ（：　ＡＧＴ　ＴＴＧ　ＴＣＡ　 ＴＣＡ　ＴＣＡ　ＴＣＴ　ＴＣＡ　（：i；Ａ　１３９２ τｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　工１ｅ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　５ｅｒ　ＧｌｙＣＡＡ　ＡτＣ　Ａ ＣＣ　ＡＧＣ　τＣＴ　八ＴＣ　＾ＣＧ　ＴＣＴ　ＴＣＧ　ＣＧＴ　ＣＣＡ　Ａ ＴＴ　ＡＴＴ　ＡＣＣ　ＣＣＡ　ＴＴＣ@１４４０ Ｇｉｎ　工１ｅ　τｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　 Ａｒｇ　Ｐｒｏ　工ｌｅ　ＸＬｅ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｐｈｅ４６５　４７０　’ 　４７５　４８０ 丁ＡＴ　ＣＣ’Ｔ　ＡＧＣ　ＡＡＴ　ＧＧｋ　ｋＣＴ　Ｔ（Ｔ　ＧＴＧ　ｋＴＴ 　ＴＣＴ　ＴＣＣ　ＴＣＡ　ＧＴＡ　ＡＴＴ　ＴＣＴ　ＴＣb　１４８８ Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ｘｉｓ　 Ｓ＠ｒ　Ｓｅｒ　Ｓ＠ｒ　Ｖａｌ　Ｉｌ＠Ｓ＠ｒ　Ｓｉｒ４Ｂ５　４９０　４ｇ ５ ＴＣＡ　ＧＴＣ　ＡＣＴ　ＴＣＴ　ＴＣＴ　Ｃ？Ａ　ＴＴｃ　ＡＣＴ−πτコＣ ＣＡ　ＧτＣ　ＡＴＴ　ＴＣＴ　ＴＣＣτＣＡ　１５３６ｓｅｒ　ＶａＩ　Ｔｈ ｒ　５＠ｒ　Ｓｅｒ　Ｌａｕ　Ｐｈｅ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｓｇｓｒ　Ｐｒｏ　Ｖ ａｌ　Ｘ１ｅ　Ｓｅｒ　５＊ｒ　Ｓｅ■ ５００　ＳＯＳ　５１０ ＧＴＣ　ｋＴＴ　ＴＣＴ　ＴＣＴ　ＴＣＴ　ＡＣＡ　ＡＣＡ　ＡＣＣ　ＴＣＣ　 ＡＣＴ　ＴＣＴ　ＡＴＡ　ＴＴＴ　ＴＣＴ　ＧＡＡ　ＴＣＡ@１５１１４ ＶａＬ　工ｌｍ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　 ？ｈｒ　５ｅｒ　Ｉｌｅ　Ｐｈａ　Ｓｅｒ　（；ｌｕ　Ｓａ■ Ｔ（Ｔ　ＡＡＡ　ＴＣＸ　τＣＣ　ＧＴＣ　ＡＴｒ　ＣＣＡ　ＡＣＣ　ＡＧＴ　 ＡＣτ　τＣＣ　ＡＣＣ　ＴＣＴ　ＧＩＪ　ＴＣＴ　ＴＣτ@１６３２ Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｓａｒ　Ｖａｌ　工１ｅ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　 ５＠ｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓ＠ｒ　ＳｅｔF ＧＡＧ　ＡＧＣ　ＣＡＡ　ＡＣＧ　ＡＣＴ　ＴＣＡ　ＧＣＴ　ＧＧＴ　ＴＣＴ　 ＧＴＣ　ＴＣＴ　ＴＣＴ　ＴＣＣ　ＴＣｒ　ＴＴｒ　ＡＴＣ@１６ＢＯ Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　ＧＬｕ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ＾ｌａ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｖ ａｌ　５ｅｒ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｐｈｅ工１ｅＴＣＴ　ＴＣＴ　（ＪＡ 　ＴＣＡ　ＴＣＡ　Ａ＾＾　丁ＣＴ　ＣＣＴ　＾Ｃ＾　τＡＴ　丁Ｃτ　ＴＣＴ 　ＴＣＡ　τＣ入ττＡ　ＣＣＡ　P７２１１ Ｓｅｔ：　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｓｅ１：　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈ ｒ　Ｔｙｒ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｐ窒■ ＣＴＴ　−ＧＴＴ　八ＣＣ　ＡＣＴ　ＧＣＧ　ＡＣｋ　ＡＣＡ　ＡＧＣ　ＣＡＧ 　ＧＡＡ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　τＣτ　丁ＣＡ　ＴＴＡ　ＣＣO　１フフ６ Ｌｅｕ　ＶａＬ　τｈｒ　Ｓｅｒ　Ａｌａ　τｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　ＧＬｎ　 Ｇｌｕ　丁ｈｒ　＾Ｌａｔ　ｓｅｒ　ｓｅｒ　Ｌｅｕ　ｐｒ■ ＳＥＩＯ　５１１５　５９０ ｃｃ”ｒ　ｃｃ’ｒ　八ＣＣ　ＡＣ？　ＡＣＡ　ＡＡＡ　ＡＣＧ　ＡＧＣ　ＧＡ Ａ　ＣＡＡ　ＡＣＣ　ＡＣＴ　ＴＴＧ　ＧＴＴ　ＡＣＣ　ＧsＧ　１８２４ Ｐｒｏ　Ａｌａτｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇ ｉｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　ＶａＬτｈｒ　ＶａＬＡＣＡ　ＴＣＣ　ＴＧＣ 　ＧＡＧ　ＴＣＴ　ｅＡＴ　ＧＴＧ　ＴＧＣ　八ＣＴＧ入＾　τＣＣ　ＡＴＣ　 ＴＣＣ　ＣＣＴ　ＧＣＧ　ＡＴＴ　奄撃鴻t２ τｈｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｓｅｒ　｝Ｉｉｓ　Ｖａｌ　Ｃｙｓτｈｒ　 Ｇｌｕ　５ｅｒ工１＠Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　ＡＬａ　ＩｌｅＧＴＴ　ＴＣＣ　ＡＣＡ 　ＧＣＴ　ＪＩＩＣＴ　ＧＴＴ　Ａｌ？Ｔ　ＧＴＴ　ＡＧＣ　ＧＧＣ　ＣＴＣ　 ｋｃｋ　ＡＣＡ　ＧＡＣ　ＴＡＴ　OＣＣ　１９２０ Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　八ｌａ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　τｈｒ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　 Ｇｌｙ　ｖａｌ　τｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　ＴｈｒＡＣＡ　ＴＧＧ　Ｔ ＧＣ　ＣＣＴ　ＡＴＴ　ＴＣＴ　ＡＣＴ　ＡＣＡ　ＧＡＧ　ＡＣＡ　ＡＣＡ　Ａ ＡＧ　ＣＡＡ　Ａｃｅ　入ＡＡ　ＧＣＧ@１９６８ τｈ＝　Ｔｒｐ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｉｌｅ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ’Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　 Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　ＧｌｙＡＴＴ　ＴＣＴ　Ｔ ＣＴ　ＴＧＴ　ＧＭ　ＴＣＴ　ＧＡＣ　ＧＴＡ　ＴＧＣ　ＴＣτ　ＡＡＧ　ＡＣ Ｔ　ＧＣＴ　ＴＣＴ　ＣＣＡ　ＧＣＣ　Q０６４ １１ｅ　Ｂａｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　５ｅｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　 ５ｅｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　５ｅｒ　Ｐｒｏ　ＡｌａＡＴＴ　ＧＴＡ　Ｔ ＣＴ　ＡＣＡ　Ａ（；Ｃ　ＡＣＴ　ＧＣＴ　ＡＣＴ　ＡＴＴ　入ＡＣ　ＧＧＣ　 ＧＴＴ　Ａ（１”ｒ　ＡＣＡ　ＧＡＡ　sＡＣ　２ユ１２ ＡＣＡ　ＡＣＡ　ＴＧＧ　τＧＴ　ｅＣｒ　Ａ丁τ　ＴＣＣ　Ａｃｅ　ＡＣＡ　 Ｃ入Ａ丁ＣＧ　入ＧＧ　ＣＡＡ　ＣＡＡ　ＡＣＡ　ＡｃＧ　Qユ６ｏ 丁ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｒｐ　（’ｙｓ　Ｐｒｏ　工１ｅ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ 　Ｇｌｕ　５ｅｒ　入ｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈ■ ＣＴＡ　ＧＴＴ　ＡＣＴ　ＧＴＴ　ＡＣＴ　ＴＣＣ　Ｔ（；Ｃ　Ｇ入Ａ　ＴＣＴ 　ＧＧＴ　ＧＴＧ　ＴＧＴ　ＴＣＣ　ＧＡＡ　ＡＣＴ　（；bＴ　２２０８ Ｌｅｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　５ｅｒ　 Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　５ｅｒ　Ｇｌｕ　τｈｒ　入１ａフ２５　７３０　７ ３５ τＣＡ　ＣＣＴ　ＧＣＣ　ＡＴＴ　ＧＴ？　ＴＣＧ　ｋｃＧ　ＧＣＣ　ＡｃＧ　 Ｇｃｒ　ＡＣＴ　ＧＴ（；　入ＡＴ　ＧＡＴ　ＧＴＴ　ＧＴs　２２５６ ｓｅｒ　ｐｒｏ　ｋＬ＆　工１ｅ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　丁ｈｒ　 八１＆　τｈｒ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ａａｐ　Ｖａｌ　ＶａＬ７４０　フ４５　７ ５０ 八ＣＧ　ＣＴＣ　ＴＡＴ　ＣＣＴ　Ａ（Ｊ　ＴＧＧ　ＡＧＧ　ＣＣＡ　ＣＡＧ　 ＡＣＴ　ＧＣＧ　ＡＡＴ　ＧＭ　ＧＡＧ　Ｔｃｒ　ＧＴＣ　Qコ。４ τｈｒ　Ｖａｌτｙｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｔ ｈｒ　Ａｌａ　Ａｇｎ　ＧＬｕ　Ｇｌｕ　５ｅｒ　ＶａｌＡＧＣ　ＴＣＴ　ＭＡ 　ＡＴ（；　ＡＡＣ　ＡＧＴ　（；ＣＴ　ＡＣＣ　ＧＧＴ　ＧＡＧ　八ＣＡ　Ａ ＣＡ　Ａｃｅ　ＡＡＴ　Ａ（Ｔ　ＴＴ`　２３５２ Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｍｅセ　ｘｓｎ　５ｅｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　 ＧＬｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｔ　Ｌｅｕ（；ＣＴ　ＧｃＴ　 （；ＡＡ　ＡＣＧ　ＡＣＴ　ＡＣＣ　ＡＡＴ　ＡＣＴ　ＧＴＡ　ＧＣＴ　ＧＣＴ 　ＧＡＧ　ｋＣＧ　ＡＴＴ　ＡＣＣ　Ａ`Ｔ　２４００ Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ｋｓｎ　Ｔｈｒ　Ｖａｎ　 Ａｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　τｈｒ　ＸＬｅ　丁ｈｒ　Ａｓｎ７８５　７９０　７ ９５　Ｂｏｏ ＡＣＴ　ＧＧＡ　ＧＣＴ　ＧＣＴ　ＧＡＧ　ＡＣＧ　ＡＡＡ　ＡＣＡ　ＧＴＡ　 Ｇ丁Ｃ　ＡＣＣ　ＴＣＴ　τＣＧ　ｃτ丁　ＴＣＡ　ＡＧＡ@２４４８ Ｔｈｒ　ＧＬｙ　Ａｌａ　Ａｌａ　ＧＬｕ　Ｔｈｒ　Ｌ＋７ｓτｈｒ　Ｖａｌ　 Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　ＡｒｇＳＯＳ　８１０　８ ユ５ ＴＣＴ　Ｉ’Ｊ’＋Ｔ　ＣｋＣ　ＧＣＴ　ＧＡＡ　ＡＣＡ　ＣＡＧ　ＡＣＧ　Ｇ ＣＴ　ＴＣＣ　ＧＣＧ　ＡＣＣ　ＧＡＴ　ＧＴＧ　ＡＴＴ　fＧＴ　２４９６ Ｓｅｗ　ｘｓｎ　Ｈｉｓ　八ｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　τｈｒ　八ｌａ　 Ｓｅｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　工１ｅ　ＣｌｙＥ１２０　８２５　 ８３０ ＣＡＣ　ＡＧＣ　ＡＧＴ　ＡＣＴ　ＧＴＴ　ＧＴＴ　ＴＣ’Ｔ　ＧＴＡτＣｃＧ ＡＡ　ＡＣＴ　ＧＧＣ　ＡＡＣ　ＡＣＣ　ＡＡＧ　ｋＧτ　Q５４４ Ｈｉｓ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　ｓａｒ　Ｖａｌ　Ｖａｎ　Ｓｅｒ　Ｖａｔ　５ａｒ　 Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　＾ａｎ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　ＳｅｒＣＴＡ　ＡＣＡ　Ａ ＣＴ　丁ＣＣ　ＧＧＧ　ＴＴＧ　ＡＧＴ　ＡＣＴ　ＡＴＧ　ＴＣＧ　（：ＡＡ　 ＣＸＧ　ＣｃＴ　ＣＧＴ　ＡＧＣ　ＡＣ`　２５９２ Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　５ｅｒ　Ｇｌｙ　Ｌｅｕ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｍｅｔ　 ５＠！″　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　丁ｈ■ ＣＣＡ　ＧＣｋ　ＡＧＣ　ＡＧＣ　ＡＴＣ　ＧＴＡ　ＧＧＡ　ＴＡＴ　ＡＧＴ　 ＡＣＡ　ＧＣＴ　ＴＣＴ　ＴＴＡ　ＧＡＡ　ＡＴＴ　ＴＣＡ@２６４０ Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓ＠ｒ　Ｓ＠１：　Ｍｅｔ　Ｖａｌ　ＧＬｙ　Ｔｙｒ　Ｓ＠ｒ 　Ｔｈｒ　ＡＬａ　５ｅｒ　Ｌａｕ　ＧＬｕ　Ｉｌ＊　Ｓｓ■ １１６５　１１７０　８７５　８８ｏ ｋＣＧ　ＴＡＴ　ＧＣＴ　ＧＧＣ　ｋＧテ　ＧＣＡ　ＡＣＡ　ＧＣＴ　Ｔ＾Ｃ　 丁ＧＯ　ＣＣＧ　Ｇτ入ＧＴＣ　ＧτＴ　丁入Ａ　２６８６Ｔｈｒ　？ｙｒ　入 １ａ　ＧＬｙ　Ｓｅｒ　入１ａ　Ｔｈｒ　λｌａ　？ｙｒ　丁ｒｐ　Ｐｒｏ　Ｖ ａｌ　Ｖａｌ　Ｖａｌ配列番号＝２２ 配列の長さ＝８９４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列： Ｍｅｔ：　τｈｒ　Ｍｅｔ　Ｐｒｏ　｝Ｉｔｓ　入ｒｇ　Ｔｙｒ　Ｍｅｔ　Ｐｈ ｅ　Ｌｅｕ　入１ａ　ＶａＬ　！’ｈｅ　Ｔｈｒ　Ｌｅｕ　kｅｕ Ａｌａ　Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　Ａｌａ　 Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｃｙ＊　Ｌ＠ｕ　Ｐｒｏ　ＡｌａＧｌｙ　Ｇｉｎ　Ａ ｒｇ　Ｌｙｓ　Ｓｅｒ　Ｃｌｙ　ＭｅセＡｓｎ　Ｉｌａ　Ａｓｎ　Ｐｈａ　Ｔｙ ｒ　Ｇｉｎ　Ｔｙｔ　５ａｒ　Ｌｅｕ３５　４０　’　４５ Ｌｙｓ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ａｌａ　 Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｍｅｔ　Ａｌａ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　ＴｙｒＳｏ　５５　６０ ＡＬａ　Ｓｅｘ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　 （；ｌｙ　Ｇｌｙ　（；ｉｎ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ工ｌ＊　５ｅ■ ＩＩｓ　八ｇｐ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　ｍｌｅ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　Ｖａｌ　Ｓｅｒ　 ５ｅｒ　Ｓａｒ　Ｇｌｙ　τｈｒ　Ｐｈｓ　Ｐｒｏ　ＣｙｓＰｒｏ　Ｇｉｎ　Ｇ ｌｕ　Ａｓｐ　Ｓｅｒ　Ｔｙｒ　Ｇｌｙ　Ａｍｎ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　ＣＹＳ　Ｌ ｙｅ　Ｃ１ｙ　Ｓａｔ　Ｇｌｙ　入１晶Ｚｏｏ　１０５　１１０ Ｃｙｓ　５ａｒ　Ａｓｎ　５＠ｒ　Ｇｉｎ　Ｇｌｙ　工１＠　Ａｌａ　Ｔｙｒ　 Ｔｒｐ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　ｋｓｐ　Ｌａｕ　Ｐｈｅ　Ｇｌｙ１１５　１２０　、 　１２５ Ｐｈ＊　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｘ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　ＶａＩ　Ｔｈｒ　 Ｌａｕ　Ｇｌｕ　Ｍｔセ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｐｈ＊Ｌａｕ　Ｐｒｏ　Ｐ ｒｏ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　５ａｒ　Ｔｙｒ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　Ｌｙｓ　Ｐ ｈ・Ａｌａτｈｒ　Ｖａｌ　ＡｓｐＡｓｐ　Ｓｉｒ　ＡＬａ　Ｘｉ＠Ｌ＠ｕ　５ ＠ｒ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　＾１＆τｈｒ　ＡＬａ　Ｐｈ５ｌ　入ｓｎ　Ｃ ｙｓ　Ｃｙｓ＾１ａ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｘｉｓ　Ｔｈ ｒ　５ａｒ　Ｔｈｘ　ｈｓｎ　Ｐｈ＠Ｔｈｒ工ｌａ　Ａｓｐ　Ｇｌｙ１８０　１ ＋ｉ＋５　１９０ １１＊　Ｌｙｅ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ　Ｇｌｙ　５＠ｒ　Ｌ＠ｕ　Ｐｒｏ　 Ｐｒｏ　Ａｓｎ工ｉｓ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｖａ１Ｔｙｒ　Ｈｇａｔ　Ｔ ｙｒ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｍｔ　Ｌｙｅ　Ｖａ ｌ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｓａｔ　＾５ｎ＾１ａ　Ｖａｔ　Ｓａｔ　Ｔｒｐ　Ｇｌｙ 　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　工ｌａ　５ｅｒ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　Ｌ＠ｕ　Ｐｒｏ 　Ａｓｐ　Ｇｌｙτｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ａｇｐ　Ｐｈ＠Ｇ ｌｕ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｓｉｒ　Ｐｈ＠＾ｓｐ　Ａｓｐ＾ｓｐ 　Ｌ＠ｕ　Ｓｉｒ　Ｇｉｎ　５＠ｒ　Ａｓｎ　Ｃｙｍ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ 　Ａｇｐ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　入ｓｎ　Ｔｙｒ　＾１ａｖａｌ　ｓｓｒ　Ｔｈｒτ ｈｒ　Ｔｈｒτｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌ ｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　ＴｈｒＳｅｒ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒτｈｒ　Ｇｌｕ　Ｍｔ　Ｔ ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌτｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｐｒ 。

Ｔｈｒ　Ａｇｐ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　１１ｍ　Ｖａｌ　工ｉｓ　Ａｒｇ　 Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇ、ｌｕ　Ｇｌｙ　Ｌａ■ ３０５　３１０　コｉｓ　３２０ ＩＬｅ　Ｓｓｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　１）ｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ 　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈａ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　５ｅ■ τｈｒ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｉｌｅ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　 Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｍｐ　Ｇｌｕ３４０　コ４５　３５ ０ τｈｔ　Ｖａｌ　！ｌ＠　Ｖａｌ　工１ｅ　入ｒｇ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　 Ｓｉｒ　Ｇｌｕ　ＧＬｙ　Ｌａｕ　工ｌｅ　５ｅｒ　Ｔｈｒ３５５　３６０　、 　３６５ τｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈｅ　 Ｔｈｒ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　ＭｅｔＴｈｒ　Ｔｈｒ　Ｖ ａｌ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｍｎ　Ｇｌｙ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｓ ｐ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　工１＠３ＢＳ　３９０　３９５　４００ Ｖａｌ　Ｘｉｓ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｙ：　Ｓｅｒ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ 　Ｌｅｕ　Ｖａｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌ■ Ｐｒｏ　Ｔｒｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈｒ　Ｐｈａ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　 Ｓａｔ　Ｔｈｒ　Ｃ１ｕ　ＨｓＲＳａｒ　Ｔｈｒ　Ｖａ１Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　Ｔｈ ｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｙ　Ｌｓｕ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　ＧＬｕ　Ｔｈｒ　Ｖａ ｌ　Ｘｉ＠　Ｖａｌ　ＶＪＩＩ　ＬＹ■ Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＡＬａ　Ａｌａ　Ｓａｔ　Ｓｅｒ　Ｓａｔ　 Ｌ＠ｕ　Ｓｉｒ　Ｓａｔ　Ｓａｒ　５ｅｒ　Ｓａｒ　ＧｌｙＧｉｎ　！ｌ＠τｈ ｒ　Ｓｉｒ　Ｓｅｒ　Ｉｌ＠τｈｒ　Ｓａｒ　５ａｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｉｌａ 　ＩＩｓτｈｒ　Ｐｒｏ　Ｐｈ５Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　５ｅｒ　Ａｍｎ　Ｇｌｙ　Ｔ ｈｒ　Ｓａｔ　Ｖａｌ　Ｉｌａ　Ｓａｒ　Ｓａｒ　Ｓｅｒ　Ｖａｌ　工１ｅ　Ｓ ｅｒ　５ａｒ５ｅｒ　ＶａＬ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｓａｒ　Ｌ＠ｕ　Ｐｈｓ　Ｔｈ ｒ　Ｓａｔ　Ｓａｔ　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｘ１峨Ｓｅｘ　Ｓａｒ　５ｅｔ５００　 ＳＯ５５１０ ｖａｌ　ｌ＠　Ｓａｒ　Ｓａｔ　Ｓａｔ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｓａｔ　丁 ｈｗ　Ｓａｒ　Ｉｌｅ　Ｐｈｅ　５ｅｒ　Ｇｌｕ　５ｉｒＳｅｒ　Ｌｙｓ　５＠ ｒ　５＠ｒ　Ｖａｌ　１１ｍ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　５ｔａｒ　Ｓａｙ：　 Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｇｌｙ　Ｓｅｒ　５≠■ Ｇｌｕ　Ｓａｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｓａｔ　Ｓａｔ　Ａｌａ　Ｇｌｙ　Ｓａｔ　 Ｖａｌ　Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｓａｔ　Ｓａｔ　Ｐｈａ　Ｘ１ｓＳ＠ｒ　Ｓａｔ　Ｇ ｌｕ　Ｓａｔ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｓｓｒ　Ｐｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｙｒ　Ｓａｔ　５ ＊ｒ　Ｓｅｒ　Ｓｉｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒ。

Ｌｓｕ　Ｖａｌ　丁ｈｒ　５ｓｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ｊａｒ　Ｇｉｎ　 Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　５ｅｒ　５＊ｒ　Ｌｅｕ　Ｐｒ口τｈｒ　Ｓｅｒ　Ｃ ｙｓ　Ｇｌｕ　５ｅｒ　ＨＬｍ　Ｖａｌ　Ｃｙｓ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｓｍ！＋　 ＸＬａ　Ｓｅｒ　Ｐｒｏ　入１ａ　Ｉｌ■ ｖａｌ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　５ｅｒ　 Ｇｌｙ　ＶａＩ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　ＧＬｕ　Ｔｙｒ　τｈｒ６２Ｓ　６コ０　Ｂ ３５　６４０ τｈｒ　Ｔｒｐ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ工ｌｅ　５ｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔ ｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎτｈｒ　Ｌｙｓ　ＧｌｙＴｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ 　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　（：ｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｇｉｎ　Ｔｈ ｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｔｈ■ Ｉｌｓ　Ｓａｔ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ　Ｓｉｒ　Ａｓｐ　ＶａｌＣｙｍ　Ｓ ｓｒ　Ｌｙｓτｈｒ　Ａｌａ　Ｓｉｒ　Ｐｒｏ　Ａｌａ！ｌａ　Ｖａｌ　５ｅｒ 　Ｔｈｒ　Ｓｅｒ　Ｔｈｒ　ＡＬａ　丁ｈｒ　工１＠　Ａｍｎ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ 　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　Ｔｙｒτｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｒｐ　Ｃｙｓ　Ｐｒｏ工 ｌｅ　ｓｅｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｇｌｕ　ｓｅｒ　Ａｒｇ　Ｇｉｎ　Ｇｉｎ　Ｔ ｈｒ　ＴｈｒＬｅｕ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｖａｌτｈｒ　Ｓｅｒ　Ｃｙｓ　Ｇｌｕ 　Ｓｉｒ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　ＣｙＩＩＳｅｒ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　ＡｌａＳｅｒ　 Ｐｒｏ　Ａｌａ　工ｉｓ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｔｈｒ　入１ａ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　 Ｔｈｒ　Ｖａｌ　入ａｎ　Ａｇｐ　Ｖａｌ　Ｖａ１Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｐ ｒｏ　Ｔｈｒ　Ｔｒｐ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ａｌａ　Ａｍｎ　Ｇ ｌｕ　Ｇｌｕ　Ｓａｔ　Ｖａ１Ｓｅｒ　Ｓｅｒ　Ｌｙｓ　Ｍｔセ　Ｍｎ　Ｓａｒ 　Ｊｕａ　丁ｈｒ　Ｇｌｙ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ 　ＬｅｕＡｌａ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｔｈｒτｈｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｖ ａｌ　Ａｌａ＾ｌａ　にｌｕ　Ｔｈｒ　Ｉｌ＠τｈｒλ５ｎ７８ｓ　７９０　７ ９５　８００ τｈｒ　ｃｌｙ　Ａ１１ｌ　ＡＬａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｌｙｓ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ 　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｓｓｒ　Ｓａｔ　Ｌｅｕ　５ｅｒ　Ａｒ■ ８ｏ５　８ユ０　８１５ Ｓａｒ　Ａｓｎ　Ｈ１ｓ＾ｌａ　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　ＧＬｎ　Ｔｈｅ＾ｌａ　Ｓａ ｔ　Ａｌａ　Ｔｈｒ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　！ｌ・Ｇｌｙ８２０　Ｂ２５　８３０ Ｈｉｓ　Ｓｉｒ　Ｓａｔ　５ｅｓｒ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｓａｔ　Ｖａｌ　Ｓａｔ 　Ｇｌｕ　Ｔｈｒ　Ｇｌｙ　入ｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌｙｅ　５ｅ■ Ｌｅｕ　Ｔｈｒ　Ｓａｔ　Ｓｉｒ　Ｇｌｙ　Ｌ＠ｕ　５＠ｒ　Ｔｈｒ　Ｍｔ　Ｓ ａｔ　Ｇｌｎ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　Ａｒ９　ｊａｒ　τｈｒｓｓｏ　ａｓｓ　ａｓ 。

Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｓａｔ　Ｓｉｒ　ｏａｔ　ＶａＩＧｌｙ　Ｔｙｒ　Ｓａｔテｈ ｘ　Ａｌａ　Ｓｉｒシ＋ｕ　Ｇｌｕ　Ｘｉｓ　５ｅｘ８Ｇ５　１１７０　８７５ 　８８０ τｈｒ　’ｒｙｒλｌａＧ工ｙ　Ｓｅｒ＾ｌａ　Ｔｈｒ＾ｌａ　Ｔｙｒ　Ｔｒｐ 　Ｐｒｏ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｖａｌ配列番号＝２３ 配列の長さ＝３０ 配列の型：核酸 鎖の数ニ一本鎖 トポロジー：直鎮状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名ニプライマーｐｃｒｆｌｏｌ配列： ＧＡＡＴＴＣＧＣＴＡ　ＧＣＡＡＴＴＡＴＧＣＴＧＴＣＡＧＴＡＣＣＢ０配列番 号＝２４ 配列の長さ＝２４ 配列の型：核酸 鎖の数ニ一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名：部分非コーディング配列ＦＬＯＩ配列： ＾ＧＴＧＧＴＡＣＴＧ　ＡＣＡＧＣＡＴＡＡＴ　ＴＴＧＡ　２４配列番号：２５ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鏑の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン８二部分コーディング配列ＦＬＯＩ配列・ ＡＡＴＡＡＡＡＴＴＣＧＣＧＴＴＣＴＴＴＴ　ＴＡＣＧ　２４配列番号：２６ 配列の長さ＝３１ 配列の型：核酸 鎖の数ニー重鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：　Ｇｅｎｏｍｉｃ　ＤＮＡ直接の起源 クローン名、プライマーｐｃｒｆｌｏ２配列： ＧＡＧＣＴＣＡＡＧＣＴＴＣＧＴＡＡ＾＾Ａ　ＧＡＡＣＧＣＧＡＡＴ　Ｔ　３１ 三ｍＧ”ＪＲＥ　Ｌ、二／′→ ａ−アグルチニンのＤＮＡ配列： 三二；ＵＲ三　二、　二・′４ １６０１　ＴＡＣＧＡＡＡＴＧＴ　ＣＴＡＧＣＣＴＧＡＧ　ＴＡＧＡＧＡＴＧλ ＣＴＣＣＣＴλｒ：’ｒｃＡ１６４１　ＡＴＡＡＡＡＧＡＡＧ　ＡＡ−ＴＩＡＣ ＧＴＴＴ　ＣＴＴＡＡＴＡＣＴＡ　ＡＡＡＡＴＴＧＴＡＡ−１６８１ＴＴＣＡＧ ＧＣＧＧＣＴＴＡＴＣＴＡＡＣＡ　ＡＡＧＣＴＡＴＴＡＣＡＧＡＧＴＴ−’ＡＧ ＡＴ１７２１　ＡＧＣＴＴＴＴＣＧＧ　ＣＴＡＧＡＧＴＴＴＣＴＴＴＧＡＴＧＡ ＣＧ　ＴＣＡＡＣＡＴλ−’１．Ｔ三二Ｇ″７Ｒ三　二、３／４ 三二’：ＵＲ三　二２−１／→ ５１６１　ＧＡＧＡＡＡＣＴＣＣＴＴＡＡＡＴＴＣＣＴ　ＴＣＴＧＣＡＧＣＡＧ 　ＣＡＡＡＣＡＧＣＣＡｐｓｙ１３を保有するＭＴ３０２／ｌｃのａ−ガラクト シダーゼ活性ｐｓＹ１３を保有するＭＴ３０２／Ｉｃの、−ガラクトシダーゼ活 性＋　Ｕ　（結合）　／Ｃ［１５３０→←Ｕ　（ａｌｌ）　１００５３０ｐＵＲ ２９６９を保有するＭＴ３０２／ｌｃのα−ガラクトシダーゼ活性時間（ｈｌ −〇〇　＋　結合α−ＧＡＬ　十遊離α−ＧＡＬｐＵＲ２９６９を保有するＭＴ ３０２／ｌｃのα−ガラクトシダーゼ活性Ａ　８ Ｗ　、　１．　・ 、−＝１．ロス二　二、　上／ｌ Ｉ　ＡＡ、ＴＴＣＧＧＣＡＣＧＡＧＡＴＴＣＣＴＴ　ＴＧＡ−ＴＴＴＧＣＡＡ　 ＣＴＧＴＴＡ、ＡＴＣＡ４１　ＴＧＧＴＴＴＣＣＡＡ　ＡＡＧＣＴＴＴＴＴＴ　 ＴＴＧＧＣＴＧＣＧＧ　ＣＧＣＴＣＡＡＣＧＴ８１　ＡＧＴＧＧＧＣＡＣＣＴＴ ＧＧＣＣＣＡＧＧ　ＣＣＣＣＣＡ−ＣＧＧＣＣＧＴＴＣＴＴ、Ａ−ＡＴＬ２１　 ＧＧＣＡＡＣＧＡＧＧ　ＴＣＡＴＣＴＣＴＧＧ　ＴＧＴＣＣＴＴＧＡＧ　ＧＧＣ Ａ−ＡＧＧＴＴＧ１６１　ＡＴＡｃｃｒｒｃＡＡＧＧＧＭＴＣＣＣＡ　ＴＴＴａ ｃｒａＡｃｃ　ＣＴＣＣＴＧＴＴＧＧ２０１　ＴＧＡＣＴＴＧＣＧＧ　ＴＴＣＡ ＡＧＣＡＣＣＣＣＣ’ＡＧＣＣＴＴＴ　ＣＡＣＴＧＧＡＴＣＣ８８１ＧＴＣＣＣ ＧＡＧＡＧ　ＴＧＣＣＴＡＣＡＧＣＡＧＡＴＴＴＧＣＴＣＡＧＴＡＴＧＣＣＧＧ ９２１　ＡＴＧＴＧＡＣＡＣＣＡＧＴＧＣＣＡＧＴＧ　ＡＴＡＡＴＧＡＣＡＣＴ ＣＴＧＧＣＴＴＧＴ９６１　ＣＴＣＣＧＣＡＧＣＡ　ＡＧＴＣＣＡＧＣＧＡ　Ｔ ＧＴＣＴＴＧＣＡＣＡＧＴＧＣＧＣＡＧＡｌｏｏｌ　ＡＣＴＣＧＴＡＴＧＡ　Ｔ ＣＴＴＭＧＧＡＣＣＴＧＴＴＴＧＧＴＣＴＧＣＴＣＣＣＴＣＡ１０４１　ＡＴＴ ＣＣＴＴＧＧＡ　ＴＴＴＧＧＴＣＣＣＡ　ＧＡＣＣＣＧＡＣＧＧ　ＣＡＡＣＡＴ ＴＡＴＴ１０８１　ＣＣＣＧＡＴＧＣＣＧ　ＣＴＴＡＴＧＡＧＣＴ　ＣＴＡＣＣ ＧＣＡＧＣＧＧＴＡＧＡＴＡＣＧ１１２１　ＣＣＡＡＧＧＴＴＣＣＣＴＡＣＡＴ ＴＡＣＴ　ＧＧＣＡＡＣＣＡＧＧ　ＡＧＧＡＴＧＡＧＧＧ１１６１　ＴＡＣＴＡ ＴＴＣＴＴ　ＧＣＣＣＣＣＧＴＴＧ　ＣＴＡＴＴＭＴＧＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣＴ １２０１　ＣＣＣＣＡＴＧＴＴＡ　ＡＧＡＡＧＴＧＧＴＴ　ＧＡＡＧＴＡＣＡＴ Ｔ　ＴＧＴＡＧＣＣＡＧＧ１２４１　ＣＴＴＣＴＧＡＣＧＣＴＴＣＧＣＴＴＧＡ Ｔ　ＣＧＴＧＴＴＴＴＧＴ　ＣＧＣＴＣＴＡＣＣＣ１２８１ＣＧＧＣＴＣＴＴＧ Ｇ　ＴＣＧＧＡＧＧＧＴＴ　ＣＡＣＣＡＴＴＣＣＧ　ＣＡＣＴＧＧＴＡＴＴ１３ ２１　ＣＴＴＡＡＴＧＣＴＣＴＴＡＣＣＣＣＴＣＡ　ＧＴＴＣＡＡＧＣＧＣＡＴ ＴＧＣＴＧＣＣＡ：Ｌ３６１　ＴＴＴＴＣＡＣＴＧＡ　ＴＴＴＧＣＴＧＴＴＣＣ ＡＧＴＣＴＣＣＴＣＧＴＣＧＴＧＴＴＡＴ１４０１　ＧＣＴＴＡＡＣＧＣＴ　Ａ ＣＣＡＡＧＧＡＣＧ　ＴＣＡＡＣＣＧＣＴＧ　ＧＡＣＴＴＡＣＣＴＴ１４４１　 ＧＣＣＡＣＣＣＡＧＣＴＣＣＡＴＡＡＣＣＴ　ＣＧＴＴＣＣＡＴＴＴ　ＴＴＧＧ ＧＴＡＣＴＴ１４８１　ＴＣＣＡＴＧＧＣＡＧ　ＴＧＡＴＣＴＴＣＴＴ　ＴＴＴ ＣＡＡＴＡＣＴ　ＡＣＧＴＧＧＡＣＣＴｉｓ２１　ＴＧＧＣＣＣＡＴＣＴ　ＴＣ ＴＧＣＴＴＡＣＣＧＣＣＧＣＴＡＣＴＴ　ＴＡＴＣＴＣＧＴＴＴ１５６１　ＧＣ ＣＡＡＣＣＡＣＣＡＣＧＡＣＣＣＣＡＡ　ＣＧＴＴＧＧＴＡＣＣＭＣＣＴＣＣＡ ＡＣ三工ＧＵＲ三　８．　二／２ ご工ＩＪＵ氏二　−−５二ノ′二 Ｆ＝・こＵＲＥ　１’：＝、２／２ １６０１　ＴＴＣＣＡＡＣＣＡＧ　ＴＡＧＴＴＣＣＡＣＣＴＣＴＧＧＴＴＣＴＴ 　ＣＴＧＡＧＡＧＣＧＡ１６４１　ＡＡＣＧＡＧＴＴＣＡ　ＧＣＴＧＧＴＴＣＴ Ｇ　ＴＣＴＣＴＴＣＴＴＣＣＴＣＴＴＴＴ−；！−ＴＣ１６８１ＴＣＴＴＣＴＧ ＡＡＴ　ＣＡＴＣＡＡＡＡＴＣＴＣＣＴＡＣＡＴＡＴ　ＴＣＴＴＣＴ”、ＣλＴ １７２１　ＣＡＴＴＡＣＣＡＣＴ　ＴＧＴＴＡＣＣＡＧＴ　ＧＣＧＡＣＡＡＣＭ 　ＧＣＣＡＧＧＡＭＣ１７６；Ｉ　ＴＧＣＴＴＣＴＴＣＡ　ＴＴＡＣＣＡＣＣＴ Ｇ　ＣＴＡＣＣＡＣＴＡＣんυ弘ＡＣＧＡＧＣ１８０１ＧＡＡＣＡＡＡＣＣＡ　 ＣＴＴＴＧＧＴＴＡＣＣＧＴＧＡＣＡＴＣＣＴＧＣＧＡＧＴＣＴＣ１８４１ＡＴ ＧＴＧＴＧＣＡＣＴＧＭＴＣＣＡＴＣＴＣＣＣＣＴＧＣＧＡ　ＴＴＧＴＴＴＣＣ ＡＣ２０４１ＴＧＣＴＣＴＡＡＧＡ　ＣＴＧＣＴＴＣＴＣＣＡＧＣＣＡＴＴＧＴ Ａ　ＴＣＴＡＣＡＡＧＣＡ２２０１　ＡＡＡＣＴＧＣＴＴＣＡＣＣＴＧＣＣＡＴ Ｔ　ＧＴＴＴＣＧＡＣＧＧ　ＣＣＡＣＧＧＣＴＡＣ２５６１ＴＧＡＧＴＡＣＴＡ Ｔ　ＧＴＣＧＣＡＡＣＡＧ　ＣＣＴＣＧＴＡＧＣＡ　ＣＡＣＣＡＧＣＡＡＧ２６ ８１　ＴＴＴＭ　２６８５ ｐＵＲ２９９０の構築 １９５０ｂｐ断片単離 補正書の写しく翻訳力提出書（特許法第１８４条の８）ＩＺａ７′ｆ″１１９−

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. １．酵素を固定化する方法であって、組み換え体ＤＮＡ技術を用いて酵素または 酵素の機能部を宿主細胞、好ましくは徴生物細胞の細胞壁に結合することを含み 、その際酵素または酵素の機能性フラグメントを細胞壁の外側に位置させること を特徴とする前記方法。
2. ２．酵素または酵素の機能部を、細胞壁への固定を保証するタンパク質のＣ末端 部に結合することによって固定化することを特徴とする請求項１に記載の方法。
3. ３．触媒活性を具えたタンパク質をコードする構造遺伝子と、真核または原核細 胞の細胞壁に固定し得るタンパク質をコードする遺伝子の少なくとも一部分とを 含み、前記一部分は前記固定タンパク質の少なくともＣ末端部をコードする組み 換え体ポリヌクレオチド。
4. ４．ポリヌクレオチドの発現産物の分泌を保証するシグナルペプチドをコードす る配列を更に含むことを特徴とする請求項３に記載のポリヌクレオチド。
5. ５．シグナルペプチドがグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）アン カータンパク質、α因子、α−アグルチニン、インべルターゼまたはイヌリナー ゼ、ＢａｃｉｌＩＵＳ属のα−アミラーゼ、及び乳酸菌のプロテイナーゼの中か ら選択されたタンパク質に由来することを特徴とする請求項４に記載のポリヌク レオチド。
6. ６．細胞壁に固定し得るタンパク質がα−アグルチニン、ＡＧＡ１、ＦＬＯ１、 下等真核生物の主要細胞壁タンパク質、及び乳酸菌のプロテイナーゼの中から選 択されることを特徴とする請求項３から５のいずれか１項に記載のポリヌクレオ チド。
7. ７．プロモーター、好ましくは誘導可能なプロモーターに作動的に連結されてい ることを特徴とする請求項３から６のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
8. ８．触媒活性を具えたタンパク質が加水分解酵素、例えばリパーゼであることを 特徴とする請求項３から７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチド。
9. ９．触媒活性を具えたタンパク質がオキシドレダクターゼ、例えばオキシダーゼ であることを特徴とする請求項３から７のいずれか１項に記載のポリヌクレオチ ド。
10. １０．請求項３から９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドを含む組み換え 体ペクター。
11. １１．触媒活性を具えたタンパク質がマルチマー形態で存在する時にその触媒活 性を呈示し、その際触媒活性を具えた同じタンパク質をコードする構造遺伝子を 含む第二のポリヌクレオチドもこの第二のポリヌクレオチドの発現産物の分泌を 保証するシグナルペプチドをコードする配列と組み合わせて含み、前記第二のポ リヌクレオチドは調節可能なプロモーター、好ましくは誘導または抑制可能なプ ロモーターに作動的に連結されていることを特徴とする請求項１０に記載のベク ター。
12. １２．請求項３から９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドによってコード されたキメラタンパク質。
13. １３．請求項３から９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１ ０もしくは１１に記載のベクターを保持する宿主細胞、好ましくは微生物。
14. １４．請求項３から９のいずれか１項に記載のポリヌクレオチドまたは請求項１ ０に記載のベクターを保持する宿主細胞、好ましくは微生物であって、触媒活性 を具えたタンパク質がマルチマー形態で存在する時にその触媒活性を呈示し、そ の際触媒活性を具えた同じタンパク質をコードする構造遺伝子を含む第二のポリ ヌクレオチドもこの第二のポリヌクレオチドの発現産物の分泌を保証するシグナ ルペプチドをコードする配列と組み合わせて保持し、前記第二のポリヌクレオチ ドは調節可能なプロモーター、好ましくは誘導または抑制可能なプロモーターに 作動的に連結されており、かつ別のベクター中にか、または徴生物の染色体中に 存在する前記宿主細胞または徴生物。
15. １５．前記ポリヌクレオチドのうちの少なくとも一つが染色体中に組み込まれて いることを特徴とする請求項１３または１４に記載の宿主細胞または微生物。
16. １６．請求項１２に記載のタンパク質が細胞壁に固定化された宿主細胞、好まし くは徴生物。
17. １７．下等真核生物、特に酵母であることを特徴とする請求項１３から１６のい ずれか１項に記載の宿主細胞または微生物。
18. １８．固定化した触媒活性タンパク質を用いて酵素処理を行なう方法であって、 前記触媒活性タンパク質の基質を請求項１３から１７のいずれか１項に記載の宿 主細胞または微生物と接触させる前記方法。