JPH0776594A

JPH0776594A - 糖カルボン酸の製造法及び新規糖カルボン酸

Info

Publication number: JPH0776594A
Application number: JP28828493A
Authority: JP
Inventors: Toshihiro Ishiguro; 敏弘石黒; Masahide Oka; 正秀岡; Takamasa Yamaguchi; 高正山口; Ikuo Nogami; ▲いく▼雄野上
Original assignee: Takeda Chemical Industries Ltd
Current assignee: Takeda Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1992-11-27
Filing date: 1993-11-17
Publication date: 1995-03-20
Anticipated expiration: 2019-08-18
Also published as: JP3556690B2

Abstract

(57)【要約】（修正有）【構成】ヒドロキシメチル基及び／又はヘミアセタール
水酸基をもつ炭素原子を有する糖類又はその誘導体に、
該ヒドロキシメチル基及び／又はヘミアセタール水酸基
をもつ炭素原子をカルボキシル基に酸化する能力を有す
るシュードグルコノバクター属に属する微生物又はその
処理物を作用させ、対応するカルボン酸を生成、蓄積せ
しめ、これを採取することを特徴とする糖カルボン酸又
はその塩の製造法及び該製造法により得られる新規糖カ
ルボン酸。【効果】巾広い糖類からヒドロキシメチル基及び／又は
ヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子がカルボキシル基
に特異的に酸化された糖カルボン酸が、高選択的に高収
率で製造できる。得られたカルボン酸は、酵素に対する
安定性がすぐれ、水に対する溶解性が向上する等のすぐ
れた特性を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規糖カルボン酸又はそ
の塩および新規糖カルボン酸の製造法に関する。詳しく
は、１級水酸基（ヒドロキシメチル基）をもつ糖類から
シュードグルコノバクター（Pseudogluconobacter）属
の菌又はその処理物を用いて、効率的に対応するカルボ
ン酸を製造する方法、糖類の有するヒドロキシメチル基
がカルボキシル基に酸化された形の新規糖カルボン酸、
ヘミアセタール水酸基をもつ糖類の該ヘミアセタール水
酸基を有する炭素原子を同じくシュードグルコノバクタ
ー属の菌又はその処理物を用いて、カルボキシル基に酸
化して対応するカルボン酸を製造する方法及びヘミアセ
タール水酸基を有する炭素原子がカルボキシル基に酸化
された形の新規糖カルボン酸に関する。

【０００２】

【従来の技術】ヒドロキシメチル基のカルボキシル基へ
の酸化を触媒する微生物については、例えばアセトバク
ター属細菌〔アグリカルチュラル・バイオロジカル・ケ
ミストリー（Agric. Biol. Chem.），第４２巻，２３３
１項(１９７８)〕，グルコノバクター属細菌〔アグリカ
ルチュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Agric. B
iol. Chem.），第４２巻，２０４５項(１９７８)〕ある
いはシュードモナス属細菌等のアルコール脱水素酵素
〔例えば、バイオケミカル・ジャーナル（Biochem.J.
），第２２３巻，９２１項(１９８４)〕，メタノール
細菌のメタノール脱水素酵素〔アグリカルチュラル・バ
イオロジカル・ケミストリー（Agric. Biol. Chem.）、
第５４巻、３１２３項(１９９０)〕等が知られている
が、これらはいずれもその基質特異性が限られておりメ
タノール、エタノール等のアルコール類以外に作用する
という報告はない。

【０００３】又、Ｄ−ソルビトール、Ｌ−ソルボース
（以下、これを単にソルボースと称することがある）等
の糖類に作用してそのヒドロキシメチル基のカルボキシ
ル基への酸化を触媒する微生物としてはグルコノバクタ
ー属細菌のＤ−ソルビトール脱水素酵素〔アグリカルチ
ュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Agric. Biol.
Chem.）、第４６巻、１３５項(１９８２)〕、ソルボー
ス脱水素酵素〔アグリカルチュラル・バイオロジカル・
ケミストリー（Agric. Biol. Chem.）、第５５巻、３６
３項(１９９１)〕、グルコース脱水素酵素〔アグリカル
チュラル・バイオロジカル・ケミストリー（Agric. Bio
l. Chem.）、第４４巻、１５０５項(１９８０)〕等が知
られているが、これらは、いずれも、その基質特異性が
限られており、汎用性という面からは不十分である。ま
た、既にシュードグルコノバクター・サッカロケトゲネ
スと名付けた土壌分離細菌がＬ−ソルボースから著量の
２−ケト−Ｌ−グロン酸を（特開昭６２−２２８２８
８，特開昭６４−８５０８８参照）、又、Ｄ−グルコー
ス等から２−ケト−Ｄ−グルカル酸を（特開昭６２−２
２８２８７号参照）生成することを見いだしている。

【０００４】一方、多糖類のうち、例えばデキストラン
は乳酸菌に属するロイコノストックメセンテロイド（Le
uconostoc mesenteroides）などによって、シュークロ
ースから生成するα１→６結合を主体とする高分子グル
カンの総称であり、従来より化学修飾法が種々試みられ
ているが、一般に使用される化学反応では位置選択的に
高い反応率で、生成物を得ることが難しく、多数の副反
応生成物を与えてしまう。このように、デキストランを
はじめとする多くの多糖類は、このような分子量の異な
る各種高分子の同族体で構成されるので、化学修飾で
は、いろいろの副反応が起こり生成物が複雑化し成績体
の実体も明確化できない例が多い。〔“バイオトランス
フォーメーションズインプリパラティブオーガニ
ックケミストリー”（Biotransformations in Prepar
ative Organic Chemistry H. G.Davis et al, Academic
Press）参照〕特に、従来よりデキストランと次亜鉛素
酸ナトリウム、亜臭素酸ナトリウム，塩素，臭素，ヨウ
素などの酸化剤により化学酸化することが試みられてい
るが、その成績体について構造が必ずしも明確にされて
いないか、十分な裏付けがなされていない。例えばデキ
ストランの化学酸化については例えばトスニ、コエルホ
およびパテルによる日本出願（特許公開昭６１−２３
３００１）等に記載されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】上記のごとく、従来、
微生物を用いた、ヒドロキシメチル基をもつ糖類などの
化合物のカルボン酸への酸化は、その基質特異性から単
糖類など、ごく限られたものであった。又、糖類とりわ
け少糖類や多糖類のヘミアセタール水酸基部分やヒドロ
キシメチル基の化学酸化は上述の如く副反応が多く精製
工程の煩雑化が避けられないことからより選択性の高い
効率的酸化反応の技術が求められていた。かくして、本
発明の目的は産業的、工業的に有用な物質を製造するた
め広い基質特異性を有する微生物を用いて、高収率、高
選択的にヒドロキシメチル基及び／又はヘミアセタール
水酸基をもつ炭素原子を酸化することによる糖カルボン
酸の製造法を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記目的を
達成すべく、各種微生物について鋭意研究を重ねた結
果、シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス
が、ヒドロキシメチル基（−ＣＨ₂ＯＨ）及び／又はヘ
ミアセタールＯＨをもつ炭素原子をもつ幅広い糖ならび
にその誘導体のこれらの基を特異的に酸化し容易に高収
率、高選択的に糖カルボン酸に酸化することを見い出し
た。また、これらの菌は驚くべきことに、極めて基質特
異性が広く、かつ、極めて汎用性のある菌であることを
見い出し、さらに検討を重ねて本発明を完成した。すな
わち本発明は、１) ヒドロキシメチル基及び／又はヘミアセタール水酸
基を有する単糖類誘導体，少糖類又はその誘導体，多糖
類又はその誘導体に、該ヒドロキシメチル基及び／又は
ヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子をカルボキシル基
に酸化する能力を有するシュードグルコノバクター属に
属する微生物又はその処理物を作用させ、対応するカル
ボン酸を生成、蓄積せしめ、これを採取することを特徴
とする糖カルボン酸又はその塩の製造法、及び２）糖類及びその誘導体の有するヒドロキシメチル基及
び／又はヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子の少なく
とも１つがカルボキシル基に酸化された新規糖カルボン
酸類に関する。

【０００７】本発明で使用できるシュードグルコノバク
ター属に属する微生物としては、糖類のヒドロキシメチ
ル基及び／又はヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子を
カルボキシル基に酸化する能力を有するシュードグルコ
ノバクター属に属する微生物であればいずれでもよく、
通常の変異誘発操作、例えばニトロソグアニジン等の変
異剤処理、紫外線照射処理等あるいは、遺伝子組換え等
により得られる変異株も含まれる。とりわけシュードグ
ルコノバクター・サッカロケトゲネスの菌が好ましい。
より具体的には、例えば、ヨーロッパ特許公開第２２
１，７０７号に記載されている下記の菌株が代表例とし
て挙げられる。シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＫ５９
１ｓ株：ＦＥＲＭＢＰ−１１３０，ＩＦＯ１４４６
４シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−
５株：ＦＥＲＭＢＰ−１１２９，ＩＦＯ１４４６５シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネスＴＨ
１４−８６株：ＦＥＲＭＢＰ−１１２８，ＩＦＯ１
４４６６シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−
１５株：ＦＥＲＭＢＰ−１１３２，ＩＦＯ１４４８
２シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス１２−
４株：ＦＥＲＭＢＰ−１１３１，ＩＦＯ１４４８３シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス２２−
３株：ＦＥＲＭＢＰ−１１３３，ＩＦＯ１１４８
４。

【０００８】本発明の方法においては、シュードグルコ
ノバクター属の微生物の菌体自体を作用させてもよく、
あるいはその処理物を用いてもよい。処理物としては例
えばこれらの微生物の培養液を用いることができる。更
にこれらの微生物が産生する酵素を用いてもよい。但
し、本発明のシュードグルコノバクター属の微生物の場
合、通常酵素は菌体内に蓄積される。通常、菌体自身を
用い、これを原料糖類に接触・作用させカルボン酸を生
成せしめるのが好都合である。とりわけ、休止菌体を用
いるのが好ましい。菌体またはその培養液は例えば、特
開昭６４−８５０８８に記載の方法に従って製造するこ
とができる。すなわち、スラントからシード培養を行
い、ついで本培養を行い、醗酵ブロースを得るととも
に、必要に応じて、この醗酵ブロースを遠心分離し、沈
澱物を集め、ついで、食塩水溶液で数回洗浄し、得られ
た沈澱を菌体反応に供することができる。また該微生物
は好気的条件下で、該菌株が利用しうる栄養源、すなわ
ち炭素源（グルコース，蔗糖，スターチ等の炭水化物ま
たはペプトン，イーストエキス等の有機物），窒素源
（アンモニウム塩類，尿素やコーンスティープリカー，
ペプトン等の無機、有機の窒素化合物），無機塩類（カ
リウム，ナトリウム，カルシウム，マグネシウム，鉄，
マンガン，コバルト，銅リン酸，チオ硫酸等の塩類），
および微量栄養素としてＣoＡ，パントテン酸，ビオチ
ン，チアミン，リボフラビン，ＦＭＮ（フラビンモノヌ
クレオシド）等のビタミン・補酵素類またはＬ−システ
イン，Ｌ−グルタミン酸等のアミノ酸またはそれらを含
む天然物を含む液体培地で培養することができ、このよ
うにして得られる培養液を本発明方法に用いてもよい。
培養はｐＨ４〜９、好ましくはｐＨ６〜８で行うことが
出来る。

【０００９】培養時間は使用する微生物および培地の組
成等によって種々異なるが、好ましくは、１０〜１００
時間である。培養を行うのに好適な温度範囲は、１０〜
４０℃，好ましくは、２５〜３５℃である。培養に際
し、培地に希土類元素を添加することにより、より効率
的に目的物を生成せしめることができる。培地に添加さ
れる希土類元素としては、スカンジュウム（Ｓc），イ
ットリウム（Ｙ），ランタン（Ｌa），セリウム（Ｃ
e），プラセオジウム（Ｐr），ネオジウム（Ｎd），サ
マリウム（Ｓm），ユウロピウム（Ｅu），ガドリニウム
（Ｇd），テルビウム（Ｔb），ジスプロシウム（Ｄ
y），ホルミニウム（Ｈo），エルビウム（Ｅr），ツリ
ウム（Ｔm），イッテルビウム（Ｙb）およびルテチウム
（Ｌu）などが挙げられる。これらの希土類元素は金属
末または金属片として添加してもよいし、塩化物，炭酸
塩，硫酸塩，硝酸塩，酸化物あるいはシュウ酸塩のよう
な化合物としても用いられる。それらは単独で用いても
よいし、二種類以上の希土類元素例えば、炭酸セリウム
と塩化ランタンとを同時に使用することもできる。さら
には諸元素の分離精製過程で得られる粗製物等も用いる
ことができる。培地に添加される希土類元素の量は、用
いる微生物の生育を抑制しない範囲で選択すればよく、
通常０.０００００１〜０.１％（Ｗ／Ｖ），好ましくは
０.０００１〜０.０５％（Ｗ／Ｖ）の範囲が効果的であ
る。培地への添加法としては、予め培地に添加しておく
のもよいが、培養途中に間欠的に添加しても、または連
続的に添加してもよい。

【００１０】本発明を実施するにあたり、反応に供する
糖類を水または、水と混和できる溶媒、例えば、メタノ
ール，アセトン，ポリエチレングリコールなどに溶解又
は懸濁したものを用いて微生物と接触してもよい。使用
する溶媒量は反応を遅延させない範囲で選択すればよ
く、基質濃度として、通常０.１〜２０％（Ｗ／Ｖ），
好ましくは、１〜５％の範囲が効果的である。本発明の
微生物による酸化反応を行うのに好適な温度範囲は、１
０〜４０℃，好ましくは２５〜３５℃である。また反応
は好気的条件下で行うのが好ましく、例えば、空気を
０.１〜５リットル／分で通気しながら、必要に応じ
て、５０〜２０００回転で撹拌することもできる。反応
時間は、反応に供する糖類に置換する１級水酸基及び／
又はヘミアセタール水酸基の性質により異るが、５分〜
３日間，通常、１時間〜２４時間である。この反応はｐ
Ｈを調整するのが好ましい。通常ｐＨ４〜９，好ましく
はｐＨ６〜８の範囲で行うのが効果的である。ｐＨ調整
に用いる塩基は、反応を阻害しないものなら、使うこと
ができる。例えば、水酸ナトリウム，水酸化カリウム，
炭酸カルシウム，水酸化マグネシウム，水酸化第１鉄な
どの無機塩，モルホリノエタンスルホン酸ナトリウム，
モルホリノエタンスルホン酸カルシウムなどの有機塩な
ども使用することができる。また、所望により陰イオン
交換樹脂を添加することにより、ｐＨを調整するための
上記した、アルカリ金属塩などの中和剤を加える必要が
なく、かつ反応を選択的に制御することができる。とり
わけ選択的に反応させ１当量酸化体を得る場合に、この
陰イオン交換樹脂を添加する方法は好適である。こゝで
使用する陰イオン交換樹脂としては、生成したカルボン
酸を吸着するものなら、陰イオン交換樹脂はいずれでも
よい。とりわけスチレン系及びアクリル系陰イオン交換
樹脂が好ましい。具体的には、例えばアンバーライト
（商品名，オルガノ社）ＩＲＡ−４００，ＩＲＡ−４０
１，ＩＲＡ−４０２，ＩＲＡ−４１０，ＩＲＡ−９０
０，ＩＲＡ−９１０，ＩＲＡ−３５，ＩＲＡ−６８，Ｉ
ＲＡ−９４Ｓなど、ダイヤイオン（商品名，三菱化成）
ＳＡ−１０Ａ，ＳＡ−２０Ａ，ＰＡ−３０６，ＰＡ−３
０８，ＰＡ−４０６，ＷＡ−１０，ＷＡ−１１，ＷＡ−
２０，ＷＡ−３０などが挙げられる。これら陰イオン交
換樹脂は基質として加えた糖類（ヒドロキシメチル基及
び／又はヘミアセタール水酸基を有する単糖類誘導体、
少糖類又はその誘導体、多糖類又はその誘導体）が、反
応液中に消失したところで、撹拌を停止し、反応液と陰
イオン交換樹脂を分離し、陰イオン交換樹脂を適当な溶
離剤を加え、溶出し、目的物を得るものである。溶離剤
として、食塩，アルカリ金属塩などの水溶液、あるい
は、塩酸，硫酸，リン酸，クエン酸などの酸性水溶液な
どが挙げられる。このようにして溶離、蓄積された糖カ
ルボン酸は公知の手段又はそれに準じる方法により採
取、精製することができる。

【００１１】本発明の方法により、１級水酸基（ヒドロ
キシメチル基）が特異的に酸化され、対応する糖カルボ
ン酸を与える糖類として、Ｄ−グルコース，Ｄ−フラク
トール，Ｄ−ガラクトース，Ｄ−リボース，Ｄ−マンノ
ース，Ｌ−ソルボースなどの単糖類の誘導体〔例、Ｄ−
グルコサミン，Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン，Ｎ−
アセチル−キトビオース，トリ−Ｎ−アセチル−キトト
リオース等のアミノ糖類，グルコシール−Ｌ−アスコル
ビン酸，Ｌ−アスコルビン酸などのアスコルビン酸関連
化合物，イノシン，アデノシン，ウリジン，グアノシ
ン，シチジン，チミジン，２−デオキシイノシン，２−
デオキシアデノシン，２−デオキシウリジン，２−デオ
キシグアノシン，２−デオキシシチジン，２−デオキシ
チミジンなどの核酸関連化合物などならびにストレプト
ゾトシン（ストレプトゾシン）〕，シュークロース，ラ
クトース，パラチノース，ラフィノース，ラクトシュー
クロース，グルコシルシュークロース，ガラクトシルシ
ュークロース，キシロビオースなどの少糖類、マルトト
リオース，マルトテトラオース，イソマルトトリオー
ス，パノース，マルチトールなどのデンプン系糖類、バ
リダマイシンＡなどのアミノ糖類，セロビオース，セロ
トリオース，セロヘキサオースなどのセロオリゴ糖類、
ステビオシド，レバウディオシド−Ａ，レバウディオシ
ド−Ｃ，レバウディオシド−Ｄ，レバウディオシド−
Ｅ，ズルコシド−Ａ，ルブソシド〔下記式（II）におい
てＲ₁＝β−Ｇlc, Ｒ₂＝−β−Ｇlc の化合物〕などの
ステビオール配糖体，モグロシド等の少糖類又はその誘
導体及びシクロデキストリン，可溶性デンプン，デキス
トリン，デキストラン，β−１,３−グルカン等多糖類
又はその誘導体が挙げられる。尚、少糖類及び多糖類の
誘導体としては、下記する本発明方法により少糖類、多
糖類のヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子がカルボキ
シル基に酸化された糖カルボン酸も含まれる。

【００１２】本発明の方法により、ヘミアセタール水酸
基部位が特異的に酸化されて糖カルボン酸を与える糖類
としてデキストラン，セルロース，キチン，アミロー
ス，アミロペクチン，マルトトリオース，パノース，イ
ソマルトース，セロビオース，ラクトース，マルトース
等が挙げられる。尚、少糖類及び多糖類の誘導体として
は、例えばデキストラニルグルクロン酸のような上記し
た本発明方法により少糖類、多糖類の１級水酸基のヒド
ロキシメチル基がカルボキシル基に酸化された糖カルボ
ン酸も含まれる。これらの糖類から得られる糖カルボン
酸のうち、例えばパラチノースの有するヒドロキシメチ
ル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖
カルボン酸、シュークロースの有するヒドロキシメチル
基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖カ
ルボン酸、Ｄ−トレハロースの有するヒドロキシメチル
基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖カ
ルボン酸、マルトシル−β−シクロデキストリンの有す
るヒドロキシメチル基の少なくとも１つがカルボキシル
基に酸化された糖カルボン酸、２−Ｏ−α−Ｄ−グルコ
ピラノシル−Ｌ−アスコルビン酸の有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸、ストレプトゾトシンの有するヒドロキシ
メチル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化され
た糖カルボン酸、ヘプチュロースのヒドロキシメチル基
がカルボキシル基に酸化された糖カルボン酸、式（Ｉ）

【化４】で表わされるマルトデキストリンの有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸、式（II）

【００１３】

【化５】で表わされるステビオール配糖体の有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸、式（III）

【化６】で表わされるバリダマイシンＡの有するヒドロキシメチ
ル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖
カルボン酸、モグロシドの有するヒドロキシメチル基の
少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖カルボ
ン酸並びにそれらの塩、デキストランの有するヒドロキ
シメチル基がカルボキシル基に酸化された式（VIII）

【化７】（但し、式中、ｎ＝１〜５０，好ましくは１０〜１５）
で表わされる糖カルボン酸〔すなわち、デキストラニル
グルクロン酸（グルクロニルデキストリン、デキストラ
ン−グルクロン酸とも称される）〕、その塩、又はそれ
らと金属塩との錯体あるいは複合体（以下単に複合体と
称する）及びデキストラニルグルクロン酸（デキストラ
ン−グルクロン酸と称されることもある）が有するヘミ
アセタール水酸基を有する炭素原子がカルボキシル基に
酸化された式（IX）

【化８】（式中、ｎ＝１〜５０，好ましくは１０〜１５）で表わ
される糖カルボン酸（すなわち、グルクロニルデキスト
ラニルグルコン酸）、その塩又はそれらと金属塩との複
合体等は産業上有用な新規化合物である。

【００１４】上記の出発物質の糖類を、上記したシュー
ドグルコノバクター属に属する菌体もしくはその処理物
と接触させることにより酸化反応を行う際、該糖類は、
１級水酸基やヘミアセタール水酸基の数やその性質を反
映して、位置選択的、かつ段階的に酸化され、対応する
糖カルボン酸を特異的に与えることも、このシュードグ
ルコノバクター属に属する菌体あるいは処理物による酸
化反応の特徴である。目的物の分離が容易な場合等には、上記したシュードグ
ルコノバクター属の微生物を、上記糖類含有培地中で培
養してもよい。この場合の培養条件としては上記培養液
を得る方法と同様な条件で行うことができる。このよう
にして生成蓄積された糖カルボン酸は公知の手段又はそ
れに準じる方法により採取、精製することができる。例
えば濾過、遠心分離、活性炭や吸着体処理、溶媒抽出、
クロマトグラフィー、沈澱、塩析等の手段を単独で又は
適宜組み合わせて適用して、目的物を単離、生成するこ
とができる。上述のように、陰イオン交換樹脂の存在下
で酸化を行なう場合、反応液と陰イオン交換樹脂を静地
する方法，遠心分離法等により分離し、陰イオン交換樹
脂を、溶離剤を用いて溶出処理し、目的物を含む溶出画
分を集め、これを上記公知の手段又はそれに準じる方法
に付し、目的とする糖カルボン酸を単離、精製する。

【００１５】デキストランカルボン酸と鉄塩との複合体
は通常、デキストランと鉄塩との複合体を製造する公知
方法又はそれに準じて製造することができる。例えば、
デキストランカルボン酸と水酸化第二鉄等鉄塩のゾルと
を反応させることにより製造することもできる。より好
ましくは透析により、脱塩、精製した水酸化鉄ゾルにデ
キストランカルボン酸を加えついでｐＨ８.０〜１０
で、加温された温度条件たとえば１００℃〜１２０℃に
おけるオートクレーブなどで、３０分間加熱処理するこ
とにより、コロイド溶液または懸濁液が得られる。この
方法により、鉄は塩形成、キレート形成水和化などのプ
ロセスなどにより、デキストランカルボン酸誘導体鉄塩
複合体が形成される。後述するように、この水相中コロ
イド懸濁鉄塩複合体の元素鉄含有量は溶液状態の約５０
〜２５０mg／mlであり、所望により蒸発、濃縮などの操
作により、低鉄分含有品から高鉄分含有鉄塩複合体を調
製することもできる。このようにして得られた、高鉄分
含有鉄塩複合体はそれ自体長期間極めて安定であり、特
に水相中でそのコロイド状態が安定に保持される特性を
有している。このようにして得られたデキストランカル
ボン酸と水酸化第２鉄等の鉄塩との複合体は、注射用蒸
留水、生理食塩水等で希釈して注射剤として非経口的に
動物に投与してもよく、又、公知の製剤学的製造法に準
じ、所望により製剤学的に許容される希釈剤、賦型剤を
用い、錠剤、粉剤、顆粒剤、カプセル剤、乳剤、液剤、
プレミックス剤、シロップ剤等として経口的に投与する
ことができる。又、一剤とした後直接又は担体に分散さ
せたものと飼料、飲水等に混ぜて用いることができる。
さらにそれぞれの物質を別途所望により製剤原料に許容
される希釈剤、賦型剤等を用い、製剤化し用時希釈剤等
を用いて一剤とした後、飼料、飲水等の中に混ぜて投与
することもできる。さらに上記したようにそれぞれ別途
製剤化したものを、別個に同時にまたは時間差をおい
て、同一対象に対して同一経路または異なった経路で投
与することもできる。本発明の方法によりカルボン酸を
遊離体で得ても、塩で得てもよく、塩で得られた場合
は、慣用方法により遊離体に、又、塩で得られた場合は
遊離体に変換できることはいうまでもない。又培地に
鉄、リチウム、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金
属、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属を
存在せしめることにより糖カルボン酸を生成蓄積しなが
らその塩を生成することもできる。更に、得られた生成
物は、元素分析、融点、比旋光度、赤外線吸収スペクト
ル、ＮＭＲスペクトル、クロマトグラフィー等の慣用手
段により同定できる。

【００１６】このようにして得られた本発明の糖カルボ
ン酸には、種々の用途、特性が認められる。例えば前記
ステビオール配糖体としては例えば次のような化合物が
あげられ、これらを酸化して得られるグルクロン酸型ス
テビオール配糖体誘導体はいずれも新規物質である。

【表１】これらを含む各種ステビオール配糖体の糖カルボン酸誘
導体は、甘味質が改善され強甘味とさわやかな味質が認
められた。低カロリー性、抗う蝕性、酵素に安定な高甘
味食品素材として菓子類、清涼飲料水、漬物、冷菓等に
従来の甘味料に準じて用いることができる。さらに易溶
解性、低毒性、崩壊性、分解性等の点でもすぐれている
ので、味の改善が可能で矯味剤として用いることができ
る。例えば、錠剤、散剤等の製剤に、常法に従い添加、
配合して用いることができる。またβ−マルトシル−β
−シクロデキストリンの糖カルボン酸誘導体は、シクロ
デキストリン類での初めてのカルボン酸誘導体で、水に
対する溶解性が、著しく改善された（溶解度＞２００ｇ
／１００ml、水、２５℃）。従って、例えば、プロスタ
グランジン，ステロイド，バルビトール酸等の難溶性医
薬品を本発明のシクロデキストリンの糖カルボン酸類で
包接化することにより水溶性が向上し、注射剤として適
用できる。このように糖カルボン酸類を包接剤として用
いる場合、従来知られている包接剤と同様な方法で用い
ることができる。また、シュークロースを反応させて得
られるβ−Ｄ−フラクトシル−（２→１）−α−Ｄ−グ
ルクロン酸や、α−Ｄ−グルクロニル−（１→２）−β
−Ｄ−６−フラクチュロン酸は、甘味のない新たな砂糖
誘導体で、かつ、グルコシダーゼ，ペクチナーゼ，グル
クロニダーゼ，インベルターゼにより分解されないこと
が判明した。シュークロースより酵素分解しにくい糖誘
導体である。従って、難消化性，低カロリー性砂糖誘導
体として菓子、ケーキ、冷菓等の食品素材として有用で
ある。またそのカルシウム塩，マグネシウム塩，鉄塩は
それら金属イオンの吸収改善剤として有用である。従っ
て、ビスケット等の菓子類、清涼飲料水等に添加し、骨
粗しょう症予防の飲食品を得るのに用いることができ
る。

【００１７】また、パラチノースを反応させて得られる
β−Ｄ−フラクトシル−（６→１）−α−Ｄ−グルク
ロン酸，α−Ｄ−グルクロニル−（６→１）−α−Ｄ−
フラクチュロン酸は、難消化性，低カロリー性の抗う触
剤として用いられる。従って、チューイングガム等の菓
子類をはじめとする各種食品に通常の甘味料、調味料と
同様にして用いることができる。さらに、Ｄ−トレハロ
ースを反応させて得られる α−Ｄ−グルクロニル−
（１→１）−α−Ｄ−グルクロン酸は、難消化性保湿
剤，抗体製剤の安定化剤として有用である。またＤ−グ
ルコサミンを反応して得られる β−アミノ−２−デオ
キシ−Ｄ−グルクロン酸は保湿性のすぐれた化粧品の基
材として有用である。一方、イノシンなどのヌクレオシ
ドを反応して得られる核酸誘導体のうち、特に、５′−
カルボキシ−イノシン，５′−カルボキシ−アデノシン
は、すぐれた呈味性を有し、かつ、酵素的に安定な呈味
剤として有用であり、食品・調味料の成分として、とり
わけ保存食品の調味に利用できる。また２，７−アンヒ
ドロ−β−Ｄ−アルトロ−ヘプチューロースを反応させ
て得られる１−カルボキシ−２，７−アンヒドロ−β
−Ｄ−アルトロ−ヘプチュロースは、弱い甘味を有する
鉄、カルシウム，マグネシウムの溶解補助剤としてビス
ケット等の菓子類、清涼飲料水等に用いることができ
る。ストレプトゾトシンの糖カルボン酸は、酵素に対し
て安定な抗菌剤，抗ガン剤として用いられる。又その抗
菌作用を利用して、そのまま又は水等溶媒で希釈して病
室や、手足の消毒・殺菌に用いることができる。モグロ
シドの糖カルボン酸誘導体は高甘味剤として有用であ
り、清涼飲料水、菓子等に利用できる。

【００１８】マルトデキストリンを酸化して得られる糖
カルボン酸は、難消化性、低カロリー食品素材として、
菓子、ケーキ、冷菓等に常法により添加、配合して用い
られる。また、デキストランのヒドロキシメチル基をカ
ルボキシル基に酸化して得られるデキストラニルグルク
ロン酸は、それ自体デキストランと同様なあるいはより
安定でより機能的医薬品添加剤として有用であるばかり
でなく、水酸化第２鉄ゾルの安定化剤として、優れた特
性を発揮する。又、デキストラニルグルコン酸の有する
ヒドロキシメチル基がカルボキシル基に酸化されるかあ
るいはデキストラニルグルクロン酸の有するヘミアセタ
ール水酸基をもつ炭素原子がカルボキシル基に酸化され
たグルクロニルデキストラニルグルコン酸またはその塩
は医薬用製剤素材として有用であり、又食品の粘性保持
剤等として、デキストランと同様な使い方で使用でき
る。又、デキストラニルグルクロン酸及びグルクロニル
デキストラニルグルコン酸又はこれらの塩と金属塩との
複合体を作る金属塩としては例えば、第１価、第２価又
は第３価の金属の塩が含まれ、例えば、カルシウム，マ
グネシウム，鉄，ナトリウム，リチウム，カリウム等の
金属との塩が挙げられる。特に水酸化第二鉄等の鉄化合
物との複合体は鉄の補給剤として動物の鉄欠乏性貧血に
対し、抗貧血剤としてデキストランと鉄との複合剤と同
様な方法で用いることができる。またバリダマイシンＡ
は前記式（III）で表わされる化合物でイネ紋枯病など
に対する殺菌活性を有する化合物で本菌体反応による酸
化体も、菌のグルコシダーゼに対して抵抗性を有し、作
用持続型バリダマイシン誘導体が期待され、改善された
持続性を有する農業用殺菌剤として有用である。アスコ
ルビン酸誘導体の糖カルボン酸誘導体も酵素分解に対し
安定性が改善されるので、酵素に対して安定な酸化防止
剤として用いられる。酸化防止剤としては、アスコルビ
ン酸と同様な方法で鉄食品等に添加、配合して用いるこ
とができる。このように、種々の糖のヒドロキシメチル
基及び／又はヘミアセタール水酸基を有する炭素原子を
酸化して得られる本発明の糖カルボン酸は、それぞれ原
料の糖が有しない特性が付与され従来になかった有用性
を有する。

【００１９】本発明で得られるヒドロキシメチル基がカ
ルボキシル基に酸化された糖カルボン酸誘導体は、一般
に、基質であるヒドロキシメチル体と比較し、酵素的に
安定でかつ、水に対する溶解性が向上し、かつ、所望に
より、金属塩にすることができ、食品用途などでは、難
消化，カロリーになりにくい、などのダィエット食の素
材、金属の吸収改善効果などが期待される。また、ステ
ビオール配糖体（ステビオシド，レバウオシド，ルブソ
シド等）のカルボン酸は、驚くべきことに、ステビオシ
ドやルブソシドが示す、にがみや後味の悪さがなくな
り、清涼感のある甘味質で、砂糖の１００〜２５０倍の
甘味を示し、実質的なカロリーのない、甘味剤として有
用である。また本発明のヒドロキシメチル基がカルボキ
シル基に酸化されたシクロデキストリン誘導体のカルボ
ン酸は、易溶解性，低毒性，崩壊性，分解性などの点で
すぐれた特長を有するので、油溶性薬物，脂肪酸，塩基
性薬物等の包摂化が可能である。このような包摂化によ
って活性成分の可溶化、安定化，味の改善が達成できる
ので矯味、矯臭剤として用いられる。また酵素分解性の
特性を利用した製剤基剤としても有用である。より具体
的には、例えば錠剤，カプセル剤，丸剤，散剤，顆粒
剤，軟膏剤，注射剤，シロップ剤，懸濁剤，点鼻剤など
の製剤用のより機能的な基剤としての利用が挙げられ
る。このように本発明は、巾広い糖類のヒドロキシメチ
ル基のカルボキシル基への酸化反応を可能にし、種々の
新規糖カルボン酸を提供するものである。又、本発明で
得られるヘミアセタール水酸基がカルボキシル基に酸化
された糖カルボン酸は基質であるヘミアセタール水酸基
をもつ糖類と比較し、酵素的に安定で、かつ水に対する
溶解性が向上し、かつ、所望により、金属塩にすること
ができ、食品用途では難消化、カロリーになりにくいな
どのダイエット食の素材、金属の吸収改善効果などが期
待される。また医薬品製剤用途では、活性成分の安定
化、酵素分解性の特性を利用した腸溶剤などとして有用
である。

【００２０】

【発明の効果】本発明は巾広い糖類からヒドロキシメチ
ル基及び／又はヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子が
カルボキシル基に特異的に酸化された糖カルボン酸が、
高選択的に高収率で製造できる。得られたカルボン酸
は、酵素に対する安定性がすぐれ、水に対する溶解性が
向上する等のすぐれた特性を有する。

【００２１】

【実施例】次に、実施例により、本発明をより具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもので
はない。実施例１ β−Ｄ−フラクトシル−（２→１）−α−Ｄ
−グルクロン酸ナトリウム塩の製造シュードグルコノバクター・サッカロケトゲネス（Pseu
dogluconobacter saccharoketogenes）ＴＨ１４−８６
菌液の調製；シュードグルコノバクター・サッカロケト
ゲネス（Pseudogluconobacter saccharoketogenes）Ｔ
Ｈ１４−８６株スラントを２０mlの下記培地に対して１
白金耳加え、これを２００mlのスムースフラスコで３０
℃，１日間，回転振盪機を用いて、撹拌下培養する。つ
いで、２０mlの培地当り前記培養液１mlをとり、これを
３０℃，２日間，振盪培養を行い、種培養とした。一
方、Bacillus megaterium ＩＦＯ１２１０８株のスラ
ントを２０mlの培地（下記）当り、１白耳，２００mlの
スムースフラスコに加え、３０℃，２日間振盪培養を行
う。次に、以下の本培養を行った。上記ＴＨ１４−８６
株の種培養（Seed 培地）１００mlおよび、Bacillus me
gaterium のSeed 培地１.５mlを９００mlの下記本培養
培地に加えついで、３０℃，約２０時間振盪培養し、Ps
eudogluconobactersaccharoketogenes ＴＨ１４−８６
の菌液とした。菌体反応；バイオット社製５リットルジャーファーメ
ンターに、シュークロース３０ｇを滅菌水２００mlにと
かした溶液を加え、これに前記のように調製した菌液１
リットルを加え、ついで滅菌水８００mlを加え、全量を
２リットルとした。３２℃，８００回転（rpm）で撹拌
しながら、空気を１リットル／分で通気し、１０％Ｎa
ＯＨ溶液でｐＨ＝６.３になるように、反応の進行にと
もない、自動的に滴加した。２時間で、モノカルボン酸
に変換した。

【００２２】分離，精製；上記反応液２リットルを８０
００回転で冷却遠心器で分離し、菌体を除き、上澄液を
活性炭（特製しらさぎクロマト炭，４００ｇ）カラムク
ロマトに付し、水で洗浄（１.２リットル）後、さらに
水３リットルで溶出し、目的物の画分を集め、減圧濃縮
し、β−Ｄ−フラクトシル−（２→１）−α−Ｄ−グル
クロン酸ナトリウム塩１９.７０ｇの白色粉末を得た。Ｎa−塩；in Ｄ₂Ｏ（９０ＭＨz）δppm 61.39, 62.84,
71.48, 72.42, 73.09, 73.65, 74.65, 76.88, 82.01, 9
2.70, 104.18, 176.49. β−Ｄ−フラクトシル−（２→１）−α−Ｄ−グルクロ
ン酸のマグネシウム塩の製造 β−Ｄ−フラクトシル−（２→１）−α−Ｄ−グルクロ
ン酸のナトリウム塩１.８９ｇを水１０mlにとかし、つ
いで、１Ｒ−１２０（Ｈ⁺型）column（５０ml）に通導
し、通過液に酸化マグネシウム０.１０３ｇを加え、１
０分間撹拌した。ついでミリポアフィルター（Ｔype Ｇ
Ｓ０.２２μm）で濾過し、濾液を濃縮し、得られた粘
稠なシロップをエタノール・アセトンで白色粉末のβ−
Ｄ−フラクトシル−（２→１）−α−Ｄ−グルクロン酸
のマグネシウム塩１.４５ｇを得た。元素分析Ｃ₂₄Ｈ₃₈Ｏ₂₄Ｍg・６Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ，３４.２０；Ｈ，５.９８実測値Ｃ，３４.３３；Ｈ，５.８２

【００２３】培地組成〔ＴＨ１４−８６株用〕 Seed 培地（１回目、２回目共通）ラクトース１％酵母エキス（プロディベル）１ (ＮＨ₄)₂ＳＯ₄ ０.３コーン・スティープ・リカー３ＣaＣＯ₃（スーパー）２ＣaＣＯ₃ 投入前ｐＨ＝７.０バチリスメガトリウム株用〔Seed 培地〕シュークロース４％プロフロ［N源，トレイダス・プロテイン(T&P)社］４Ｋ₂ＨＰＯ₄ ０.６５ＫＨ₂ＰＯ₄ ０.５５ＮaＣl ０.０５ (ＮＨ₄)₂ＳＯ₄ ０.０５ＭgＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ０.００５パントテン酸カルシウム０.０２５滅菌前ｐＨ＝７.０〔Ｍain 培地〕シュークロース０.０５％別滅菌コーン・スティープ・リカー２別滅菌 (ＮＨ₄)₂ＳＯ₄ ０.３別滅菌ＦeＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ０.１別滅菌Ｖ. Ｂ₂ １mg／Ｌ滅菌前ｐＨ＝７.０ソルボース１０％別滅菌ＬaＣl₃ ０.０１％別滅菌ＣaＣＯ₃（スーパー）４％別滅菌

【００２４】実施例２ α−Ｄ−グルクロニル−（１→
２）−β−Ｄ−６−フラクチュロン酸の製造実施例１と同様な方法でα−Ｄ−グルクロニル−（１→
２）−β−Ｄ−フラクチュロン酸のナトリウム塩，マグ
ネシウム塩，カルシウム塩を得た。ナトリウム塩；白色粉末¹³ Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）ppm：61.98, 71.96, 73.02, 73.
35；73.69, 76.37, 77.03, 79.82, 93.97, 105.80, 17
5.03, 175.70. マグネシウム塩；白色粉末元素分析Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｏ₁₃Ｍg・５Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ，２９.８６；Ｈ，５.４３実測値Ｃ，２９.７６；Ｈ，５.５１カルシウム塩；白色粉末元素分析Ｃ₁₂Ｈ₁₆Ｏ₁₃Ｃa・３Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ，３１.１７；Ｈ，４.８０実測値Ｃ，３１.２６；Ｈ，４.９９

【００２５】実施例３実施例１に記載したシュードグルコノバクター・サッカ
ロケトゲネス（Pseudogluconobacter saccharoketogene
s）菌液１リットルにパラチノース３０ｇ，滅菌水１リ
ットルを加え、３２℃，８００回転で、空気を１.６リ
ットル／分で通気しながら、１時間反応させ、ついでこ
の反応液を８０００回転で冷却遠心器で分離し、菌体を
除き、上澄液を活性炭（特製しらさぎクロマト炭４０
０ｇ）カラムクロマトに付し、水で洗浄（２リットル）
ついで、１０％メタノール水溶液（４リットル）で溶
出、さらに５０％メタノール水溶液（４リットル）で溶
出される画分を集め、濃縮し、凍結乾燥し、β−Ｄ−フ
ラクトシル−（６→１）−α−Ｄ−グルクロン酸のナト
リウム塩３５.８ｇを得た。このナトリウム塩をＩＲ１
２０（Ｈ型）カラムに通導し、通過液を濃縮してβ−Ｄ
−フラクトシル−（６→１）−α−Ｄ−グルクロン酸を
得た。¹³ Ｃ−ＮＭＲ(Ｄ₂Ｏ)ppm：63.35, 68.60, 71.78, 72.5
2, 72.77, 73.45, 75.14,75.99, 79.53, 98.81, 102.2
1, 176.93. 元素分析Ｃ₁₂Ｈ₂₀Ｏ₁₂・４.５Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ，３２.９６；Ｈ，６.６８実測値Ｃ，３３.１７；Ｈ，５.８４

【００２６】実施例４実施例３と同様な方法で、以下の出発原料〔（）内に
記載〕を用いて、対応する糖カルボン酸を得た。

【００２７】

【表２】

【００２８】

【表３】

【００２９】

【表４】

【００３０】

【表５】

【００３１】

【表６】

【００３２】実施例５実施例１に記載したシュードグルコノバクターサッカ
ロケトゲネス（Pseudogluconobacter saccharoketogene
s）菌液１リットルに、ステビア抽出物（ステビオシド
を主成分とするステビオール配糖体）３０ｇをバイオッ
ト社製５リットルのジャーファーメンターに入れ、つい
で滅菌水１リットルを加えて反応液とした。これを３２
℃，８００回転で撹拌しながら、空気を１.６リットル
／分で通気し、１０％ＮaＯＨ溶液でｐＨ＝６.３にな
るように、反応の進行にともない、自動的に滴加した。
１.５時間で、基質の消失が認められたので、反応を止
め、ついで、反応液２リットルを８０００回転で冷却遠
心器で分離し、菌体を除き、上澄液をＨＰ−２０（芳香
族系合成吸着剤、三菱化成）カラム（１. ８リットル）
に通導し、Ｈ₂Ｏ（８リットル）で洗浄後、５０％ＥtＯ
Ｈ（５リットル）で溶出される画分より、グルクロン酸
型ステビオール配糖体混合物が得られた。濃縮後、凍結
乾燥により、白色粉末１９.２８ｇを得た。本品は強い
甘味とさわやかな味質が認められた。

【００３３】本品を下記条件でＨＰＬＣに付した。ＨＰＬＣ：カラムＯＤＰ展開液：ＣＨ₃ＣＮ：Ｈ₂Ｏ＝３：７この溶液にトリフ
ルオロ酢酸０.１％を添加流速；１.０ml／分温度；３５℃ 検出器：ＲＩおよびＵＶＨＰＬＣパターン（ＲＩ検出）を図１に示す。ＴＬＣ：シリカゲルメルクキーゼルゲル(Kieselgel)
６０Ｆ₂₅₄ No 5715 展開溶媒：ＣＨＣl₃：ＭeＯＨ：Ｈ₂Ｏ（６：４：１）発色：硫酸：ＭeＯＨ（１：１）１１０〜１２０℃，１０分、加熱Ｒｆ＝２.６を示した。本品の¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）ppm：177.87(ester), 17
1.84(COO^-)に、カルボニル炭素のシグナルが認められ、
カルボキシ基に基づく、炭素の新生を認めた。ＨＰＬＣ
の知見から、本品は、ステビオシドのＣ₁₉位に結合する
グルコースと、Ｃ₁₃位に結合するグルコースがグルクロ
ン酸型に変換した化合物を主成分とすることが判った。

【００３４】実施例６実施例５と同様の方法で、ステビア抽出物（ステビオシ
ドを主成分とするステビオール配糖体）３０ｇに、シュ
ードグルコノバクターサッカロケトゲネス菌液１リッ
トル、３２℃，８００回転、空気を１．６リットル／分
で通気する条件で、酸化反応させ、５％ＮaＯＨ溶液５
９ml（約２当量の酸化に相当）を滴下によって加えたと
ころで、反応を停止した。所要酸化反応時間は２１時間
であった。反応終了後、反応液を遠心濾過し、菌体を除
去したあと、上清液（１８５０ml）を精製（実施例５と
同様の方法）し、白色粉末のグルクロン酸型ステビオー
ル配糖体混合物のＮa 塩１３．０ｇを得た。本品は強い
甘味とさわやかな味質が認められた。ＨＰＬＣ；カラムＯＤＰ，温度３５℃ 移動層；ＣＨ₃ＣＮ：Ｈ₂Ｏ＝３：７の溶液にトリフロロ
酢酸を０．１％添加流速；１ml／分ＨＰＣＬパターン（ＲＩ検出）を〔図２〕に示した。

【００３５】実施例７実施例５と同様の方法で、ステビオシド３０ｇを基質と
して、シュードグルコノバクターサッカロケトゲネス
菌による酸化を行った。５％水酸化ナトリウム３０mlを
消費し、その反応時間は９０分であった。反応液を、精
製し白色粉末２０ｇを得た。本品は高甘味かつ、清涼感
のある甘味を呈した。本品のＨＰＣＬパターン（ＲＩ検
出）を〔図３〕に示した。この白色粉末４００mgを逆相
系カラムＯＤＰ−５０カラム（φ２１．５×３００mm
旭化成）と０．１％トリフロロ酢酸を含む水／アセトニ
トリル（７２：２８）の溶離液系を用い、主要成分を分
取し、ついで凍結乾燥により白色粉末１２４mgを得た。
本品はメタノール：水＝９：１の混合溶媒から再結晶
し、無色針状晶が得られた。融点２２６−２３０℃（分解）．ＩＲ（ＫＢr）cm-¹：3500〜3250，1715，1605，1080−1
010，890.

【表７】元素分析Ｃ₃₈Ｈ₅₇Ｏ₁₉Ｎa・１.５Ｈ₂Ｏ計算値Ｃ，５２.５９；Ｈ，６.９７実測値Ｃ，５２.５６；Ｈ，７.１５以上から、本反応で得られた主要酸化生成物は前記式
（II）においてＲ₁＝−β−Ｇlc−２−β−Ｇlc，Ｒ₂＝
−β−Ｇlc ＵＡの化合物のナトリウム塩つまり下記式
（IV）で表わされる１３−Ｏ−β−ソホロシル，１９
−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニルステビオールナトリウム
塩であると結論した。

【化９】

【００３６】実施例８実施例５と同様の方法で，ステビオシド３０ｇを基質と
してシュードグルコノバクターサッカロケトゲネス菌
による酸化を行った。８０分間で、５％水酸化ナトリウ
ム溶液を６７ml消費した、反応液を精製し白色粉末３２
ｇを得た。本品は高甘味でかつ清涼感のある甘味を呈し
た。本品のＨＰＣＬパターン（ＲＩ検出）を〔図４〕に
示した。この白色粉末１ｇから、逆相系カラムＯＤＰ−
５０（φ２１．５×３００mm 旭化成）と２％酢酸／ア
セトニトリルのグラディエント系を用いたＨＰＣＬの手
法を用いて、主要酸化生成物を０．２２ｇを分取した。
本品の二次イオン質量分析（secondary ion mass spect
rometry. ＳＩ−ＭＳ）でm/z８６９（Ｍ＋２Ｈ₂０・
Ｈ⁺）のピークが観察できた。¹³ Ｃ−ＮＭＲ（ｄ₆−ピリジン）ppm：15.12, 18.95, 2
0.21, 21.69, 27.78, 37.91, 37.96, 39.33, 39.41, 4
0.35, 42.12, 43.58, 43.91, 47.23, 53.55, 56.86, 6
2.57, 70.07, 71.54, 72.49, 72.75, 75.75, 76.16, 7
6.79, 76.83, 77.51,77.72, 77.78, 86.00, 86.97, 95.
07, 97.60, 103.89, 103.94, 153.50, 171.26, 171.89,
176.23. 以上の知見から本品は前記式（II）において、Ｒ₁＝−
β−Ｇlc−２−β−Ｇlc ＵＡ，Ｒ₂＝−β−Ｇlc ＵＡ
の化合物のナトリウム塩つまり下記式（V）で表される
１３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニル−β−Ｄ−グルコシ
ル，１９−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニルステビオール２
ナトリウム塩と結論した。

【化１０】

【００３７】実施例９実施例５の方法に従って、ステビオシド３０ｇをバイオ
ット社製５リットルのジャーファーメンターに入れ、つ
いで滅菌水１.６リットルを加えて反応液とした。これ
を３２℃，８００回転で撹拌しながら、空気を１リット
ル／分で通気し、炭酸カルシウム２０ｇを加え、４時間
反応させた。ついで、反応液２リットルを８０００回転
で冷却遠心器で分離し、菌体を除き、上澄液をＨＰ−２
０（芳香族系合成吸着剤、三菱化成）カラム（１．８リ
ットル）に通導し、Ｈ₂Ｏ（８リットル）で洗浄後、５
０％エタノール（５リットル）で溶出される画分より、
ウロン酸型ステビオシドのカルシウム塩が得られた。濃
縮後、凍結乾燥により、白色粉末１２．９８ｇを得た。
これをメタノールから再結晶し無色粉末状晶を得た。本
品は弱い甘味が認められた。本品の¹³Ｃ−ＮＭＲ（ｄ₆−ピリジン）ppm；15.93, 19.
74, 20.92, 21.00, 28.58, 38.66, 38.71, 40.06, 41.0
4, 41.86, 42.00, 42.91, 44.33, 48.19, 54.50, 57.6
3, 73.11, 73.30, 73.45, 73.97, 74.08, 76.53, 77.7
2, 77.86, 77.89,78.34, 78.39, 84.79, 86.79, 95.84,
98.21, 105.46, 107.02, 153.70, 171.93, 172.18, 17
2.95, 176.78. 以上の知見から、本品は前記式（II）において、Ｒ₁＝
−β−Ｇlc ＵＡ−２−β−Ｇlc ＵＡ，Ｒ₂＝−β−Ｇl
c ＵＡの化合物のカルシウム塩つまり下記式（VI）で表
される１３−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニル−β−Ｄ−グル
クロニル−１９−Ｏ−β−Ｄ−グルクロニルステビオー
ルカルシウム塩と結論した。

【化１１】

【００３８】実施例１０実施例５と同様の方法で、レバウディオシドーＡ１０ｇ
を基質として、シュードグルコノバクターサッカロケ
トゲネス菌体１５．８ｇ、滅菌水２０００mlを加え３２
℃，８００回転、空気１．６リットル／分の条件で撹拌
しながら行い、反応は２％ＮaＯＨ溶液を加え、ｐＨ
６．３にコントロールした。２％ＮaＯＨ２３mlを消費
したところで反応を停止し、遠心分離を行い上清を分離
した。反応時間は１３５分を要した。上清液を実施例５
と同様な精製法により、処理し、白色粉末１０．１６ｇ
を得た。本品のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検出）を〔図
５〕に示した。ＩＲ（ＫＢr）cm^-1：3340, 1720, 1610, 1410, 1070 ま
た本品は高甘味で、清涼感のあるすぐれた甘味質であ
る。

【００３９】実施例１１実施例１に記載したシュードグルコノバクターサッカ
ロケトゲネス菌液１リットルにステビオシド３０ｇをバ
イオット社５リットルのジャーファーメンターに入れ、
ついで滅菌水１リットルを加え、さらに、アンバーライ
トＩＲＡ−６８（以下単にＩＲＡ−６８と略す）２０
０ミリリットルを加えて反応液とした。これを３２℃，
８００回転で撹拌しながら、空気１．６リットル／分で
通気した。２時間で、上澄液にステビオシドが認められ
なくなったので、反応を停止し、遠心分離により、上清
とＩＲＡ−６８とを分け、ＩＲＡ−６８は、カラム（φ
４×２４cm）につめ、ついで、２Ｎ−食塩水２リットル
で溶出し、溶出画分をＨＰ−２０のカラム（０．５リッ
トル）に通導した。水１リットルで洗浄後、５０％メタ
ノール０．８リットルで溶出し、濃縮乾涸し、白色粉末
９．２０ｇを得た。本品をメタノール：水＝９：１の混
合溶媒から再結晶し無色針状晶を得た。ｍｐ．２２６−２３０℃（分解）本品は実施例７に示した、１３−Ｏ−β−ソホロシル−
１９−Ｏ−β−グルクロニルステビオールナトリウム
塩（IV）と認定した。

【００４０】実施例１２実施例１１に記載した方法に順じて、シュードグルコノ
バクターサッカロケトゲネス菌液１リットルにステビ
ア抽出物（少なくとも６種のステビオール配糖体混合
物）３０ｇをバイオット社５リットルのジャーファーメ
ンターに入れ、ついで滅菌水１リットルを加え、さらに
ＩＲＡ−６８２００ミリリットルを加えて反応液とし
た。これを３２℃，８００回転で撹拌しながら、空気を
１．６リットル／分で通気した。２時間で、上清液にス
テビオシドが認められなくなったので反応を停止し、遠
心分離により、上清とＩＲＡ−６８とを分け、ＩＲＡ−
６８はカラム（φ４×２５cm）につめ、ついで２Ｎ−Ｎ
aＣl １リットルで溶出し、溶出画分をＨＰ−２０カラ
ム（０．５リットル）に通導した。水１リットルで洗浄
後５０％メタノール１リットルで溶出し濃縮乾涸し白色
粉末８．９ｇを得た。本品のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検
出）を〔図６〕に示す。ＩＲ（ＫＢr）cm^-1：3500〜3200, 1720, 1705, 1610, 1
400 を示した。

【００４１】実施例１３糖転移ステビア配糖体（ＳＫスィート、山陽国策パルプ
(株)製造）３０ｇを実施例６と同様の方法で、酸化し、
精製処理し、白色粉末２８．３ｇを得た。本品の¹³Ｃ−
ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）で、カルボニル炭素の領域に８本のシ
グナル（179.50,179.46, 179.40, 179.37, 179.32, 17
9.26, 177.10, 177.07 ppm）が観察されたことから、少
なくとも糖の１級酸基の１つ以上がカルボン酸に変換し
たことが認められた。本品は、清涼感のあるさわやかな
甘味を呈した。

【００４２】実施例１４羅漢果の果実に含まれる高甘味配糖体モグロシドＶ、２
００mgを実施例１１に記載した方法に順じて、シュード
グルコノバクターサッカロケトゲネス菌１０ml分
（０．３２ｇ）を水３mlに懸濁して加え、ついでＩＲＡ
−６８５mlを加えた。この混合液を、３０℃，２２９
回転で５時間半撹拌した。反応液を静置して、上清を除
いたあと、ＩＲＡ−６８をカラムにつめ、水洗（５０m
l）後、０．０１ＮＨＣlで溶出、溶出画分を集め、凍
結乾燥し、白色粉末（３２mg）を得た。本品はＩＲ（Ｋ
Ｂr）cm^-1：3300, 1600, 1410, 1060-1000 であること
から、糖鎖がグルクロン酸型に変換されたものと確認し
た。本品は砂糖のような甘味を呈した。

【００４３】実施例１５ルブソシド１．０ｇを滅菌水６０mlにとかし、これに、
ＩＲＡ−６８１３mlを加え、ついで、実施例１に記載
したシュードグルコノバクターサッカロケトゲネス
（Psuedoglconobacter saccharoketogenes）菌液３０ml
を加え、３２℃，６００回転／分で撹拌しながら、空気
を６０リットル／分で通気し、２４０分間撹拌しながら
反応させた。反応液から、ＩＲＡ−６８をとり出し、カ
ラムに充填し、水１５mlで水洗したあと、２Ｎ−ＮaＣl
溶液をＳＶ０．５で２００mlを用いて溶出し、溶出液を
ＨＰ−２０カラム（２０ml）に吸着し、水１５０mlで洗
った後、５０％ＭeＯＨ溶液（１００ml）で、ＳＶ０．
５で溶出、溶出液を濃縮乾固し、析出物をメタノールか
ら再結晶し、無色粒状晶０．４８ｇを得た。 m.p. １８４−１８８℃（分解）元素分析Ｃ₃₂Ｈ₄₇Ｏ₁₄Ｎa・５Ｈ₂Ｏ理論値Ｃ，４９．９９；Ｈ，７．４７実測値Ｃ，５０．０５；Ｈ，７．５４

【表８】以上のデータから、その構造を（VII）と表わされると
結論した。

【化１２】また本品（VII）は、にがみのない、砂糖のような良好
な高甘味物質であった。

【００４４】実施例１６塩酸フルスルチアミン１０mg ビタミンＢ₂ ２mg タウリン１０００mg 安息香酸３０mg パラオキシ安息香酸ブチル２.５mg グルクロン酸型ステビオシドナトリウム塩（IV）５０mg クエン酸１００mg グリシン５００mg 上記組成に従い、下記方法によりドリンク剤を得た。す
なわち約７０℃に加温した水約３０mlにパラオキシ安息
香酸ブチル、安息香酸を溶解し、約２５℃まで冷却後、
塩酸フルスルチアミン，ビタミンＢ₂，タウリン，甘味
料としてのグルクロン酸型ステビオシド，クエン酸，グ
リシンを溶解し、１Ｎ−かせいソーダを添加し、ｐＨを
３．５としたのち、水を加えて全量５０mlとする。

【００４５】実施例１７沈降炭酸カルシウム３０ｇ，炭酸マグネシウム５ｇ，乳
糖５８．５ｇ，ヒドロキシプロピルセルロース６ｇを均
一に混合し、水３００mlを加え、上記の混合物を造粒す
る。得られた顆粒を乾燥した後粉砕する。得られた粉末
と矯味剤としてのグルクロン酸型ステビオシド０．０５
ｇ及びステアリン酸マグネシウム０．５ｇを添加して混
合し、常法に従って打錠することによって、直径８．５
mmで１錠２００mgの錠剤を得た。

【００４６】実施例１８実施例１に記載したシュードグルコノバクターサッカ
ロケトゲネス（Pseudogluconobacter saccharoketogene
s）菌液１．５リットルにデキストラン−４（分子量：
４０００〜６０００；エキストラシンテーゼ社（仏国）
製）３０ｇをバイオット社製５リットルのジャーファン
メンターに入れ、ついで滅菌水１．７リットルを加え反
応液とした。これを３２℃，６００回転／分で撹拌しな
がら、空気を１．６リットル／分で通気し、０．５％Ｎ
aＯＨ溶液でｐＨ＝６．３になるように反応の進行にと
もない自動的に滴加した。３時間で反応を止めついで、
反応液１２．０リットルを８０００回転で冷却遠心器で
分離し、菌体を除き、上澄液１．９８リットルを得た。
この上澄液をセルロースアセテートメンブランフィルタ
ー（φ０．２〜μm）で濾過し、再度除菌化した濾液
を、アンバーライトＩＲＡ−６８（ＯＨ型）カラム（５
０ml）に通導し、少量の水（１００ml）で洗い、通過液
２リットルを得た。この通過液をＨＰ−２０カラム（９
００ml）に通導した。ついで、水２リットルで溶離し、
初めの通過液７００mlはすて、ついで溶出される液３．
３リットルを集め、これに濃塩酸１３．８mlを加え、酸
性とし、これを、セルロースアセテートメンブランフィ
ルター（φ０．２μm）で濾過し、濾液をセファビーズ
（商品名）ＳＰ２０５（三菱化成社製）１０００mlに通
導した。ついで、０．０５Ｍ塩酸７００ml，水２リット
ルで洗浄後、２０％ＭeＯＨ溶液２リットルで溶出し、
目的物の画分を得た。これを減圧濃縮し、デキストラニ
ル−グルクロン酸の白色粉末１４ｇを得た。本品のＨＰ
ＬＣ（条件：アサヒパックＧＳ３２０（φ７．６mm×５
０mm；旭化成社製）、移動相；水１ml／min，検出；Ｒ
Ｉ（ウォータース４１０）及び２００nm（東ソーＵＶ
−８０２０）サンプル０．５％水溶液２０μl 注入）で
Ｒt＝８．４８に単一のピークを示した。（原料のデキ
ストラン４のＲt＝１０．８３であった）本品の構造確認のため、酵素消化処理実験を行った。本
品の１．５％水溶液１００μl にグルコアミラーゼ（和
光純薬製）溶液（４mg／ml）１００μl を加え、３０
℃，１昼夜インキュベーションを行い、この酵素処理液
をＨＰＬＣで検討を行った。対象実験として、デキスト
ラン−４も同様にグルコアミラーゼ処理を行った。その
結果、本品はグルコアミラーゼ消化を受けないことが分
った。一方デキストラン−４は、グルコアミラーゼ消化
を受け、基質は消失し、グルコースが新生した。このこ
とから、本品は、上記式（VIII）（但し、式中、ｎ＝１
５）で示されるデキストラニルグルクロン酸と確認し
た。

【００４７】実施例１９実施例１に準じて、シュードグルコノバクターサッカ
ロケトゲネス（Pseudogluconobacter Saccharoketogene
s）Ｋ５９１Ｓ菌株をバクトペプトン１％，イーストエ
キス１％からなるペプトンイースト培地（ＰＹ）培地を
用いて、３０℃、２３０回転の振とう下ｐＨ７．５で３
日間培養を行った。ついで、メイン培養に移し、ペプト
ンイースト培地（ＰＹ培地）で、０．１％の塩化カルシ
ウムを添加し、３０℃、２３０rpm で振とうしながら、
４８時間培養した。ついで、培養液を１００００回転
で、１０分間遠心分離し、集菌し、ついで水５００mlで
洗菌し、ブロース１リットル当り、７．５９ｇの菌体を
得た。ついで、デキストラン−４（分子量４０００〜６
０００；エキストラシンテーゼ社（仏国）製）３０ｇを
水１リットルにとかし、ついで湿菌体５６ｇを水１リッ
トルに懸濁した液を加え、３２℃、８００rpm で撹拌し
ながら、空気を１分間６０mlで通気し、０．１％ＮaＯ
Ｈ溶液でｐＨ６．３に制御しながら６．５時間反応させ
た。反応液を遠心分離し、上清２リットルを分取し、メ
ンブランフィルターで濾過除菌し、ＨＰ−２０カラム
（９００ml）に通導し、水２０００mlで溶出した。通過
液に最終濃度０．０５Ｍになるように、濃塩酸を加え、
酸性とし、メンブランフィルターで濾過したあと、濾液
をＳＰ−２０５カラム（１００ml）に通導し、初め、
０．０５ＭＨＣl（１０００ml）、ついで水（２０００
ml）で洗浄後、２０％ＭeＯＨ（２０００ml）で溶出さ
れる画分を集め、濃縮後、凍結乾燥し、１４ｇの白色粉
末のデキストラニルグルコン酸を得た。本品のＨＰＬＣ
〔条件：アサヒパックＧＳ３２０（φ７．６mm×５０m
m：旭化成社製）、移動相：水１ml／min，ＲＩ（ウォー
タース４１０）及び２００nm（東ソーＵＶ−８０２
０）、サンプル０．５％％水溶液２０μl 注入〕でＲｔ
＝８．７０に単一のピークを示した。本品を前記した条
件でグルコアミラーゼ消化を行ったところ、容易に消化
され、グルコースとグルコシルグルコン酸を検出するこ
とができた。従って、本化合物をデキストラニルグルコ
ン酸と確認した。

【００４８】実施例２０実施例１９と同様にして、シュードグルコノバクター
サッカロケトゲネス（Pseudogluconobacter Saccharoke
togenes）菌を培養しこの菌体（湿菌体）５０ｇをデキ
ストラニルグルクロン酸（実施例１８で記載の方法で調
製した）３０ｇを水１リットルに溶解させた溶液に加
え、３２℃、８００rpm で撹拌しながら、空気を１分間
６０mlで通気し、０．１％ＮaＯＨ溶液でｐＨ６．３に
制御しながら、２１時間反応させた。反応液を遠心分離
し、上清２リットルを分取し、メンブランフィルターで
濾過除菌し、ＨＰ−２０カラム（９００ml）に通導し、
水１．５リットルで溶出し、目的画分を集め、濃縮後凍
結乾燥し１５ｇの上記式（IX）で表わされるグルクロニ
ルデキストラニルグルコン酸のナトリウム塩の白色粉末
１２ｇを得た。ＨＰＬＣ：Ｒt＝９．１２１ピークＨＰＬＣ条件；カラム：ＧＳ−３２０移動相：Ｈ₂Ｏ，流速１ml／分検出：ＲＩ¹³ Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）δppm： 179.554, 178.119, 17
2.434 に観察され、その強度が１：０．５：０．５で、
その帰属は、グルクロン酸部のカルボニル炭素を179.55
4 とし、他はグルコン酸部（１部ラクトン型を想定）の
カルボニル炭素とした。

【００４９】実施例２１塩化第２鉄・６水和物の５０％水溶液５０mlを３０℃に
加温し、ついで２４％Ｎa₂ＣＯ₃溶液５０mlを１分間
０．４mlの速度でよく撹拌しながら滴加する。ついで、
実施例１８で得たデキストラニルグルクロン酸を用いた
１０％デキストラニルグルクロン酸溶液５０mlを、３ml
／分の速度で滴加し、１６％Ｎa₂ＣＯ₃溶液を０．４ml
／分の速度で加え、ｐＨ４．３に調整した。次に、エタ
ノール２００mlを加え、強く撹拌しスラリー状にし、遠
心分離（５０００rpm）し、沈殿を集めついで、水４０m
lに溶かし、６０mlのエタノールでよくかくはんし、遠
心分離し可溶物を除き、沈殿物に水２０mlを加え、よく
分散させ、減圧下、エバポレーターでよくエタノールを
除き、１０％ＮaＯＨ溶液で０．２ml／分で速度でよく
撹拌しながら加え、ｐＨ５〜６に調整し、１００℃，２
０分間加熱し、ついで、フェノールを４mg／mlになるよ
うに加え、デキストラニルグルクロン酸水酸化鉄ゾル溶
液２２mlを得た。本品の１mlの幼若ブタへの筋肉内投与
により貧血症状を著しく改善する効果が認められた。デ
キストラニルグルコン酸水酸化鉄ゾルも同様な方法で製
造することができ、また幼若ブタの貧血を著しく改善す
る効果が認められた。

【００５０】実施例２２デキストラニルグルコン酸の水酸化鉄ゾルの製造法塩
化第２鉄（ＦeＣl₃・６Ｈ₂Ｏ）１００ｇを１００mlの水
に溶解させ、この溶液をBranson Ｂ−２２０で超音波処
理を１時間行い、充分溶解させる。ついで、水を加え、
２００mlとし、５００mlのビーカーに溶液を移す。つい
で２４％炭酸ソーダ溶液２００mlをよく撹拌しながら３
０℃，０．８ml／分の速度で添加し淡黄褐色の水酸化鉄
ゾルを調製した。このようにして調製した水酸化鉄ゾル
１００mlを分取し、３００mlのビーカーに移し、３０℃
でよく撹拌しながら、１０％デキストラニルグルコン酸
溶液５０mlを徐々に加える。ついで、１６％ＮaＣＯ₃溶
液を、極めてゆっくり、０．１〜０．２ml／分の速度で
加え、ｐＨを４．３に調整した。ついで、エタノール２
００mlを撹拌しながら加え、生じた沈澱を遠心分離し、
上清と分け、沈澱を水８０mlを加え、よく懸濁させたあ
と、エタノール１２０mlを加え、再沈澱させ、沈澱物を
遠心分離し、分取する。この操作をさらにもう一回繰り
返して得た沈澱物を水２０mlで懸濁、よく撹拌し１０％
ＮaＯＨ溶液を０．１〜０．２ml／分の速度で加え、ｐ
Ｈを６．０になるまで加えた。この溶液を１２０℃１０
分間、オートクレーブ処理し、防腐剤としてフェノール
（１％含となるように）を加え、ついで、エバポレータ
ーで濃縮し、デキストラニルグルコン酸の水酸化鉄ゾル
溶液を調整した。本品は、安定した水酸化鉄ゾルを形成
した。その性状を分析したところ、以下のとおりであっ
た。総鉄塩濃度：２００mg／ml，粘度；３２cＰ，電導度４
７mＳ／cmであった。

【００５１】実施例２３デキストラニルグルクロン酸の透析法による鉄塩化塩
化第２鉄・６水和物の５０％水溶液５０mlを３０℃に加
温し、ついで２４％Ｎa₂ＣＯ₃溶液５０mlを１分間０．
３０mlの速度でよく撹拌しながら滴加し、やや黒味がか
った黄土色の水酸化鉄ゾル（ｐＨ１．５４）を得た。こ
の水酸化鉄ゾルを、透析膜（dialyses tube）に移し、
超純水中で一夜透析した。透析後の水酸鉄ゾルは約１７
０ml、ｐＨ４．４７黒褐色を呈した。ついで、この透析
処理した水酸鉄ゾルに、実施例１８で得たデキストラニ
ルグルクロン酸の１０％水溶液５０mlを加え、よく撹拌
し、１６％Ｎa₂ＣＯ₃溶液でｐＨ４．３に調整した。こ
れを１００℃、３０分間オートクレーブ処理した後、１
０％ＮaＯＨ溶液を加え、ｐＨ１２に調整し、再度１２
１℃、２０分間オートクレーブ処理をし、完全溶解さ
せ、黒褐色のデキストラニルグルクロン酸の水酸化第２
鉄塩複合体が得られた。次いでこれを透析膜で一夜透析
後濃縮しこれに、フェノールを４mg／mlになるように加
え、デキストラニルグルクロン酸水酸化第２鉄塩複合体
の注射剤２２mlを得た。本品は安定したゾル溶液であ
り、その性状を分析したところ以下のとおりであった。総鉄塩濃度：２０１mg／ml，粘度２３．９cＰ，電導度
３.７mＳ／cmであった。本品の１mlの幼若ブタへの筋肉
内投与により貧血症状を著しく改善する効果が認められ
た。デキストラニルグルクロン酸水酸化第２鉄塩複合体
も同様な方法で製造することができ、また幼若ブタの貧
血を著しく改善する効果が認められた。

【００５２】実施例２４実施例１１と同様にして、シュードグルコノバクター
サッカロケトゲネス菌液１リットルにレバウディオシド
−Ａ３０ｇをバイオット社製５リットルのジャーファー
メンターに入れ、ついで滅菌水１．５リットルを加え、
さらにＩＲＡ−６８４００mlを加えて、反応液とし
た。これを３２℃、６００回転で撹拌しながら、空気
１．６リットル／分で通気した。１時間で、上澄液にレ
バウディオシド−Ａが認められなくなったので、反応を
停止し、遠心分離により上清とＩＲＡ−６８とを分け、
ＩＲＡ−６８はカラム（φ４×４０cm）につめ、ついで
２Ｎ−食塩水（８．１リットル）で溶出し、溶出画分を
ＨＰ−２０（１リットル）カラムに通導、吸着せしめ、
水洗（８リットル）後、１０％〜５０％エタノールで溶
出することにより、目的とするグルクロン酸型レバウデ
ィオシド−Ａのナトリウム塩が得られた。濃縮後、凍結
乾燥することにより、無色粉末１９．６ｇを得た。これ
をＭeＯＨ−Ｈ₂Ｏから再結晶することにより、無色針状
晶１０．６ｇを得た。m.p.２２０℃（分解）本品のＨＰ
ＬＣ（ＯＤＰカラム，アセトニトリル：水＝３０：７
０）はＲt＝９．７０に１本のピークを与えた。本品の
¹³Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）ppm：18.06, 21.52, 22.91, 24.
19, 30.89, 39.51, 40.15, 42.02, 43.01, 43.73, 44.5
8, 46.69, 46.79, 49.89, 56.17, 59.64, 63.51, 63.7
1, 64.37, 71.36, 72.43, 73.14, 74.40, 74.67, 76.2
9, 76.99, 78.12, 78.70, 78.72,78.81, 78.93, 79.27,
79.38, 81.49, 87.99, 90.31, 96.64, 98.70, 104.87,
105.06, 107.32, 155.99, 177.79, 181.64 以上の知見から、本品は、前記式（II）において、

【化１３】の化合物のナトリウム塩つまり下記式（X）で表わされ
ると結論した。

【化１４】

【００５３】試験例実施例４で得た６−Ｏ−α−Ｄ−グルクロニル（１→
４）−α−Ｄ−グルコシル−β−シクロデキストリンＮ
a 塩（１）の各種酵素に対する安定性試験を下記方法に
より行った。比較対照として、６−Ｏ−α−マルトシル
−β−シクロデキストリンを用いた。試験方法１０mＭの供試シクロデキストリン水溶液に、下記酵素
の所定量をそれぞれ加えた後、３７℃の温浴中で静置す
る。５００μl ずつサンプルを分取し、１００℃で１５
分間加熱することにより酵素を失活させた後、遠心分離
（１５，０００r.p.m. ５分）する。さらにミリポアＵ
ＳＹ−１（分画分子量１０，０００）で濾過する。１０
倍に希釈して下記条件によりＨＰＬＣ分析に付した。ＨＰＬＣ分析条件；カラム；ＮＨ２Ｐ−５０（Asahipak）移動相；ＣＨ₃ＣＮ：Ｈ₂Ｏ＝４８：５２にＰＩＣ試薬
０．００５Ｍを添加した。流速；０．８ml／分検出；ＲＩ上記操作で得られた各試料のＨＰＩＣから、１２０分ま
での時間ごとのシクロデキストリンの残存率を求めた。

【００５４】使用酵素と酵素濃度；

【表９】結果６−Ｏ−α−Ｄ−グルクロニル（１→４）−α−Ｄ−グ
ルコシル−β−シクロデキストリンＮa 塩（１）のおよ
び６−Ｏ−α−マルトシル−β−シクロデキストリンの
各酵素による残存率の経時変化を〔図１１〕〜〔図１
４〕に示す。（１）は、α−アミラーゼ，グルコアミラ
ーゼ，プルラナーゼの酵素処理に対して、対照とした６
−Ｏ−α−マルトシル−β−シクロデキストリンに比
し、安定であることが判明した。一方プルラナーゼの酵
素処理に対する検討では、対照とした６−Ｏ−α−マル
トシル−β−シクロデキストリンが約６０％分解される
のに対して、（１）は、安定であった。

【図面の簡単な説明】

【図１】は実施例５で得られたグルクロン酸型ステビオ
ール配糖体混合物のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検出）を示
す。

【図２】は実施例６で得られたグルクロン酸型ステビオ
ール配糖体混合物のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検出）を示
す。

【図３】は実施例７で得られたグルクロン酸型ステビオ
ール配糖体ナトリウム塩のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検
出）を示す。

【図４】は実施例８で得られたグルクロン酸型ステビオ
ール配糖体２ナトリウム塩のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検
出）を示す。

【図５】は実施例１０で得られたレバウディオシド−Ａ
の１当量酸化体のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検出）を示
す。

【図６】は実施例１２で得られたグルクロン酸型ステビ
オール配糖体混合物のＨＰＬＣパターン（ＲＩ検出）を
示す。

【図７】は実施例４で得られた６−Ｏ−（２−カルボキ
シエチル）−β−シクロデキストリンＮa 塩と６，６−
ジ−Ｏ−（２−カルボキシエチル）−β−シクロデキス
トリンの¹³Ｃ−ＮＭＲ（２７０ＭＨz，Ｄ₂Ｏ）δppm の
チャートを示す。

【図８】は実施例４で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−グルク
ロニル−（１→４）−α−Ｄ−グルコシル−α−シクロ
デキストリンの¹³Ｃ−ＮＭＲ（２７０ＭＨz，Ｄ₂Ｏ）δ
ppm のチャートを示す。

【図９】は実施例４で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−グルク
ロニル−β−シクロデキストリンの¹³Ｃ−ＮＭＲ（２７
０ＭＨz，Ｄ₂Ｏ）δppm のチャートを示す。

【図１０】は実施例４で得られた６−Ｏ−（２−カルボ
キシ２−ハイドロキシエチル）−β−シクロデキストリ
ンＮa 塩と６，６−ジ−Ｏ−（２−カルボキシ２−ハイ
ドロキシエチル）−β−シクロデキストリンＮa 塩の¹³
Ｃ−ＮＭＲ（２７０ＭＨz，Ｄ₂Ｏ）δppm のチャートを
示す。

【図１１】は試験例で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−グルク
ロニル（１→４）−α−Ｄ−グルコシル−β−シクロデ
キストリンＮa塩及び対照の６−Ｏ−α−マルトシル−
β−シクロデキストリンのα−アミラーゼに対する安定
性試験の結果を示し、両化合物をα−アミラーゼ処理し
た場合の残存率の経時変化を示す。

【図１２】は試験例で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−グルク
ロニル（１→４）−α−Ｄ−グルコシル−β−シクロデ
キストリンＮa塩及び対照の６−Ｏ−α−マルトシル−
β−シクロデキストリンのグルコアミラーゼに対する安
定性試験の結果を示し、両化合物をグルコアミラーゼ処
理した場合の残存率の経時変化を示す。

【図１３】は試験例で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−グルク
ロニル（１→４）−α−Ｄ−グルコシル−β−シクロデ
キストリンＮa塩及び対照の６−Ｏ−α−マルトシル−
β−シクロデキストリンのプルラナーゼに対する安定性
試験の結果を示し、両化合物をプルラナーゼ処理した場
合の残存率の経時変化を示す。

【図１４】は試験例で得られた６−Ｏ−α−Ｄ−グルク
ロニル（１→４）−α−Ｄ−グルコシル−β−シクロデ
キストリンＮa塩及び対照の６−Ｏ−α−マルトシル−
β−シクロデキストリンのβ−グルクロニダーゼに対す
る安定性試験の結果を示し、両化合物をβ−グルクロニ
ダーゼ処理した場合の残存率の経時変化を示す。

【符号の説明】

〔図１１〕〜〔図１４〕において、●は６−Ｏ−α−マ
ルトシル−シクロデキストリンを、▲は６−Ｏ−α−Ｄ
−グルクロニル（１→４）−α−Ｄ−シクロデキストリ
ンＮａ塩を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｐ 19/56 7432−4Ｂ //(Ｃ１２Ｐ 19/00 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 19/56 Ｃ１２Ｒ 1:01）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】ヒドロキシメチル基及び／又はヘミアセタ
ール水酸基を有する単糖類誘導体，少糖類又はその誘導
体，多糖類又はその誘導体に、該ヒドロキシメチル基及
び／又はヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子をカルボ
キシル基に酸化する能力を有するシュードグルコノバク
ター属に属する微生物又はその処理物を作用させ、対応
するカルボン酸を生成、蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする糖カルボン酸又はその塩の製造法。
【請求項２】ヒドロキシメチル基を有する単糖類誘導
体，少糖類又はその誘導体，多糖類又はその誘導体に、
該ヒドロキシメチル基をカルボキシル基に酸化する能力
を有するシュードグルコノバクター属に属する微生物又
はその処理物を作用させ、対応するカルボン酸を生成、
蓄積せしめ、これを採取することを特徴とする糖カルボ
ン酸又はその塩の製造法。
【請求項３】シュードグルコノバクター属の微生物の菌
体自体を作用させる請求項１又は２記載の製造法。
【請求項４】パラチノースの有するヒドロキシメチル基
の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖カル
ボン酸又はその塩。
【請求項５】Ｄ−トレハロースの有するヒドロキシメチ
ル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖
カルボン酸又はその塩。
【請求項６】マルトシル−β−シクロデキストリンの有
するヒドロキシメチル基の少なくとも１つがカルボキシ
ル基に酸化された糖カルボン酸又はその塩。
【請求項７】２−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−Ｌ−
アスコルビン酸の有するヒドロキシメチル基の少なくと
も１つがカルボキシル基に酸化された糖カルボン酸又は
その塩。
【請求項８】ストレプトゾトシンの有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸又はその塩。
【請求項９】ヘプチュロースのヒドロキシメチル基がカ
ルボキシル基に酸化された糖カルボン酸又はその塩。
【請求項１０】式（Ｉ）【化１】で表わされるマルトデキストリンの有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸又はその塩。
【請求項１１】式（II）【化２】で表わされるステビオール配糖体の有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸又はその塩。
【請求項１２】ステビオール配糖体が式（II）において
Ｒ₁＝−β−Ｇlc−２−β−Ｇlc，Ｒ₂＝−β−Ｇlc で
あるステビオシドである請求項１１に記載の糖カルボン
酸又はその塩。
【請求項１３】ステビオール配糖体が式（II）において【化３】であるレバウディオシド−Ａである請求項１１に記載の
糖カルボン酸又はその塩。
【請求項１４】バリダマイシンＡの有するヒドロキシメ
チル基の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された
糖カルボン酸又はその塩。
【請求項１５】モグロシドの有するヒドロキシメチル基
の少なくとも１つがカルボキシル基に酸化された糖カル
ボン酸又はその塩。
【請求項１６】デキストランの有するヒドロキシメチル
基の少くとも１つがカルボキシル基に酸化された糖カル
ボン酸又はその塩。
【請求項１７】請求項１６記載の糖カルボン酸又はその
塩と金属塩との複合体。
【請求項１８】ヘミアセタール水酸基を有する単糖類誘
導体，少糖類又はその誘導体，多糖類又はその誘導体
に、該ヘミアセタール水酸基を有する炭素原子をカルボ
キシル基に酸化する能力を有するシュードグルコノバク
ター属に属する微生物又はその処理物を作用させ、対応
するカルボン酸を生成、蓄積せしめ、これを採取するこ
とを特徴とする糖カルボン酸又はその塩の製造法。
【請求項１９】シュードグルコノバクター属の微生物の
菌体自体を作用させる請求項１８記載の製造法。
【請求項２０】ヘミアセタール水酸基を有する多糖類が
デキストランである請求項１８記載の製造法。
【請求項２１】ヘミアセタール水酸基を有する多糖類の
誘導体がデキストラニルグルクロン酸である請求項１８
記載の製造法。
【請求項２２】デキストラニルグルクロン酸の有する少
なくとも１つのヘミアセタール水酸基をもつ炭素原子が
カルボキシル基に酸化された糖カルボン酸又はその塩。
【請求項２３】請求項２２記載の糖カルボン酸又はその
塩と金属塩との複合体。
【請求項２４】デキストラニルグルクロン酸と水酸化第
２鉄ゾルを反応させることを特徴とするデキストラニル
グルクロン酸と水酸化第二鉄との複合体の製造法。
【請求項２５】ヒドロキシメチル基を有する少糖類がシ
ュークロースである請求項１記載の製造法。