JPH0782169A

JPH0782169A - 創傷治療剤

Info

Publication number: JPH0782169A
Application number: JP5227385A
Authority: JP
Inventors: Tsunaharu Matsushima; 綱治松島; Masanobu Naruto; 昌信成戸
Original assignee: Toray Industries Inc
Current assignee: Toray Industries Inc
Priority date: 1993-09-13
Filing date: 1993-09-13
Publication date: 1995-03-28
Also published as: US5646117A; CA2149323A1; EP0669134A4; EP0669134A1; WO1995007710A1

Abstract

(57)【要約】【構成】単球走化性活性化因子を有効成分とする創傷
治療剤である。【効果】創傷すなわち、傷や、痔疾、潰瘍の強力な治
療効果を有する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は新規な創傷治療剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】単球走化性活性化因子は単球に対して走
化性および活性化作用を有する因子である。その中でＭ
ＣＡＦ（monocyte chemotactic and activating facto
r) は、ＭＣＰ−１（Monocyte chemoatractant protein
-1 ）やＧＤＣＦ(glioma-derived monocyte chemotacti
c factor)とも称され、アミノ酸７６個からなる蛋白質
であり、４個のシステイン基を持つ。これらは単球に対
して強力な走化性および活性化作用を有することが知ら
れている。

【０００３】ＭＣＡＦとＭＣＰ−１およびＧＤＣＦにつ
いてはその同定と遺伝子クローニングが次の論文に、 1) K. Matsushima et al., J. Exp. Med., 169, 1485-1
490, 1989. 2) Y. Furutani et al.,Biochem. Biophys. Res. Commu
n., 159, 249-255, 1989. 3) E.A. Robinson et al., Proc. Natl. Acad. Sci. US
A, 86, 1850-1854, 1989. 4) T. Yoshimura et al., FEBS Letters, 244, 487-49
3, 1989. また、総説が次の文献に記載されている。 5) N.Mukaida et al., Microbiol. Immunol. 36, 773-7
89, 1992 文献３）、４）に記載されたＭＣＰ−１、ＧＤＣＦは、
文献１）、２）に記載されたＭＣＡＦと同一であること
から、ＭＣＰ−１、ＧＤＣＦおよびＭＣＡＦは同じ物質
であることがわかる。

【０００４】ＭＣＡＦが単球に対して強力な走化性およ
び活性化の作用を有することは知られており、免疫活性
化作用や抗腫瘍作用への用途が前記文献などに示唆され
ている。しかしＭＣＡＦが創傷の治療を促進する作用を
有することについては知られていない。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】幾つかの蛋白性成長因
子が創傷の治療を促進する作用を有することが知られて
いる。例えば線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、上皮成長
因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧ
Ｆ−α、ＴＧＦ−β）、血小板由来成長因子（ＰＤＧ
Ｆ）、内皮細胞成長因子（ＥＣＧＦ）、ケラチノサイト
成長因子、などの成長因子は創傷治療効果を持つことが
期待されている（文献６）。 6) T.A. Mustoe et al., J. Clin. Invest., 87, 694-7
03(1991). 最近インターロイキン１（ＩＬ−１）が創傷治療効果を
持つことがＵＳＰ５２０２１１８に記載されている。

【０００６】本発明の目的はこれら成長因子や成長因子
誘発性の蛋白質を使用するのではなく、これらの物質と
まったく異なる性質と作用をもち、かつ強力な治療効果
を有する創傷治療剤を提供することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】前記目的は以下の本発明
により達成される。すなわち本発明は、単球走化性活性
化因子を有効成分とする創傷治療剤である。

【０００８】本発明の単球走化性活性化因子は、単球に
対して走化性および活性化作用を有するものであれば特
に限定されず、好ましくはＭＣＡＦが使用される。ＭＣ
ＡＦは、７６個のアミノ酸配列を実質的に有し、単球走
化作用もしくは活性化作用を有する蛋白質であり、具体
的には上記文献、１）〜５）に示されるものである。上
記のアミノ酸配列を実質的に有するＭＣＡＦとは、ＭＣ
ＡＦおよび、その生物活性を失わない範囲でアミノ酸配
列が自然もしくは人工的に欠失、追加、置換されたもの
（ＭＣＡＦ変異体と称する）、あるいはそれらのＭＣＡ
ＦおよびＭＣＡＦ変異体を化学的または生化学的に変換
したＭＣＡＦ誘導体を含有する。

【０００９】本発明の実施例では、タンパク質であるＭ
ＣＡＦ自体が創傷の治療を促進することにおいて有効で
あることを示した。ＭＣＡＦと同様に、単球（モノサイ
ト）やマクロファージに対して走化性もしくは活性化作
用をもつ生体内物質や人工物質もまた創傷治療剤として
有用であることが当然期待できる。ＭＣＡＦにはそのア
ミノ酸数とシステイン残基の配置が類似した、ＭＣＡＦ
類縁体が知られている。ヒトではＲＡＮＴＥＳ、ＬＤ７
８、ＡＣＴ２、Ｉ−３０９、マウスではＪＥ、ＭＩＰ−
１α、ＭＩＰ−１β、ＴＣＡ−３などがＭＣＡＦの構造
的類縁体として知られている（上記の文献４、５）。こ
れらの中で単球（モノサイト）やマクロファージに対し
て走化性もしくは活性化作用をもつ物質は本発明に含ま
れる。ＲＡＮＴＥＳ、ＪＥは単球（モノサイト）やマク
ロファージに対して走化性を示すことが既に示されてい
る（前記文献５）。

【００１０】また生体内におけるＭＣＡＦもしくはそれ
と同等の生体内物質の産生を促進するものもまた創傷治
療に同様の有用性を示すことが本発明の結果から当然期
待できる。

【００１１】本発明で使用するＭＣＡＦにはとくに制限
はなく、既知の方法で得られるＭＣＡＦが好適に使用さ
れる。例えば前述の文献２）、もしくは４）に記述され
たｃＤＮＡを適切な発現制御領域遺伝子すなわちＳＶ４
０やサイトメガロウイルスのプロモーター、バキュロウ
イルスのプロモーター、アミノ酸合成代謝遺伝子のプロ
モーター、糖合成代謝遺伝子のプロモーターなどの下流
に連結して得られた発現ベクターを動物細胞や、昆虫細
胞、真核単細胞、原核細胞などに導入してＭＣＡＦを産
生させ、親和性担体、イオン交換担体、疎水性担体ある
いは抗体担持担体などのカラムクロマトグラフィーを組
み合わせた適切な精製手段によって精製ＭＣＡＦが得ら
れる。遺伝子組換え手法による物質の生産は現在多用な
方法が知られており、現時点で知られた方法の組み合わ
せで本発明のＭＣＡＦを生産することができる。

【００１２】またＭＣＡＦを本来的に、またはなんらか
の刺激により産生する細胞、すなわち単核白血球（ＭＮ
Ｌ）、線維芽細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、平滑筋
細胞、アストロサイト、あるいはＴＨＰ−１（ミエロモ
ノサイト）、Ｕ−１０５ＭＧ（グリオーマ）などの株化
細胞を培養し、そのままもしくは必要なら適当な刺激に
よってＭＣＡＦを産生させ、続いて上記精製手段で精製
することによっても生産することができる。ＭＣＡＦの
産生細胞とその刺激条件については、前記文献４）およ
び５）に記載されている。

【００１３】本発明で言う創傷は、皮膚や粘膜を含む組
織の損傷を意味する。具体的には創傷は各種の傷や潰瘍
である。傷や潰瘍のなかには切り傷、擦り傷、褥瘡（床
ずれ）、火傷、痔疾、皮膚の潰瘍、粘膜部位の潰瘍、消
化管（胃、十二指腸など）の潰瘍などが含まれる。実施
例には、ウサギの創傷モデルで、本発明の有効性が明確
に示されている。実施例に示した創傷における顕著な有
効性から、容易にＭＣＡＦが創傷、痔疾、あるいは潰瘍
に対して有効である事が結論できる。

【００１４】本発明の目的である創傷を治療するために
は、ＭＣＡＦに代表される単球走化性活性化因子を有効
成分とし、これに医薬的に許容しうる担体に配合して得
られる組成物を生体に投与する。投与対象としての創傷
は、各種の傷や潰瘍であり、傷や潰瘍のなかには切り
傷、擦り傷、褥瘡（床ずれ）、痔疾、皮膚の潰瘍、粘膜
部位の潰瘍、消化管の潰瘍などが含まれる。

【００１５】配合する他の成分としては、水や有機溶剤
の他に、医薬的に許容しうる一般的な医薬添加物が選ば
れる。もちろん添加物が無くとも本発明の目的は達成さ
れる。そのような医薬添加物としては、コラ−ゲン、ポ
リビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、カルボキ
シビニルポリマー、カルボキシメチルセルロースナトリ
ウム、ポリアクリル酸ナトリウム、アルギン酸ナトリウ
ム、水溶性デキストラン、カルボキシメチルスターチナ
トリウム、ペクチン、メチルセルロース、エチルセルロ
ース、キサンタンガム、アラビアゴム、カゼイン、ゼラ
チン、寒天、ポリエチレングリコール、ジグリセリン、
グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリ
コール、ワセリン、パラフィン、ステアリルアルコー
ル、ステアリン酸、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、マ
ンニト−ル、ソルビト−ル、ラクト−ス、医薬添加物と
して許容され得る界面活性剤などがあげられる。実際の
添加物は本発明治療剤の剤形に応じて上記の中から適宜
あるいは組み合わせて選ばれるが、もちろんこれらに限
定するものではない。

【００１６】本発明はまた、単球走化性活性化因子と他
の薬剤、生物学的製剤や合成医薬製剤などとの、同時も
しくは逐次的併用投与をも包含する。他の薬剤として
は、抗炎症作用、末梢循環改善作用、血栓生成抑制作
用、組織修復作用を有するもの、消化管潰瘍に対して治
療効果の知られたもの、ヘパリン、あるいは本発明の目
的である活性を増強もしくは補助するような創傷、痔
疾、潰瘍治療剤の中から選ばれる。

【００１７】投与方法としては、特に限定するものでは
ないが、本発明の目的から局所投与が望ましい。局所投
与形態として外用剤、座剤、注射剤あるいは、消化管の
潰瘍に対する処置としての経口投与が好適に実施し得
る。外用剤としては、軟膏、ゲル、クリ−ム、乳液、液
剤などの塗布剤、テープ剤、パッチ剤などの貼付剤、あ
るいはスプレー剤、粉剤などの噴霧剤から選択される。

【００１８】有効投与量としては、１日につき創傷１部
位当たり０．００１μｇから１００ｍｇの範囲で選ばれ
る。好適には創傷１部位当たり０．０１μｇから１ｍｇ
の範囲で選ばれる。前述の投与量は創傷部位の大きさや
症状によっても異なり、これらの値に限定されるもので
は勿論ない。外用剤として使用する場合、製剤中の有効
成分量としては０．０００００１重量％から１０重量
％、好ましくは０．００００１重量％から０．１重量％
の範囲から選ばれる。投与回数としては創傷時に１回、
あるいは１日１ないし数回、もしくは２ないし数日に１
回の範囲で選ばれるがこれに限定されるものではない。

【００１９】

【実施例】以下に本発明を実施例によって、より詳細
に、より具体的に説明するが、もちろんこれによって本
発明が制限されるものではない。

【００２０】実施例１ウサギ創傷に対するＭＣＡＦの効果：１）試験方法ウサギはＮＺＷ（ニュージーランドホワイト）を用い、
１群４羽とした。

【００２１】各７５ｍｇのペントバルビタールで麻酔
後、背部に５か所５ｃｍ長の切り傷を与えた。単球走化
性活性化因子としては、ペプロテク社(Pepro tech, In
c.,RockyHill, New Jersey 08553, USA)から購入した遺
伝子組換えにより調製されたヒトＭＣＡＦを使用した。

【００２２】局部に次の配合剤（薬剤および対照薬剤）
を、１ケ所の創傷部位につき合計１mlを０．１mlずつ複
数に分けて局所注射した。（１）ＰＢＳ（１ｍｌ）（２）ＰＢＳ（１ｍｌ）＋牛コラーゲン（１ｍｇ）（３）ＰＢＳ（１ｍｌ）＋牛コラーゲン（１ｍｇ）＋Ｉ
Ｌ−８（５μｇ）（４）ＰＢＳ（１ｍｌ）＋牛コラーゲン（１ｍｇ）＋Ｉ
Ｌ−１（５μｇ）（５）ＰＢＳ（１ｍｌ）＋牛コラーゲン（１ｍｇ）＋Ｍ
ＣＡＦ（５μｇ）

【００２３】７日後、および１４日後にウサギを屠殺し
た。次いで、背部皮膚全面を剥がし、切傷部を直角に含
んだ幅１．５ｃｍのテープ状にサンプルを調製し、引っ
張り強度を測定した。引っ張り強度測定には島津制作
所、Autograph Tension Testerを用い、Watanabe, Y. e
t al., Surg. Res. Comm., 10, 267-277, 1991に記載さ
れた方法によった。

【００２４】２）試験結果７日後の結果を表１と図１に、１４日後の結果を表２と
図２に示す。

【表１】

【００２５】

【表２】

【００２６】表１は７日後のサンプル皮膚の引っ張り強
度実測値を、表２は１４日後のサンプル皮膚の引っ張り
強度実測値をそれぞれグラムで表示したものである。実
測値として示した各４個の値はそれぞれ左からウサギ４
匹の個体別に対応するものである。平均値と標準偏差
（ＳＤ）を右端に示した。

【００２７】表１、図１、表２、および図２から、ＭＣ
ＡＦを投与したものにおいて、明らかに引っ張り強度の
増加が認められ、ＭＣＡＦが創傷治療剤として有効であ
ることが結論される。表１について統計処理（スチュー
デントｔ検定）を行ったところ、ＭＣＡＦ投与群すなわ
ち上記剤型（５）投与群は、対照群としてのＰＢＳのみ
投与群すなわち上記剤型（１）投与群、およびコラーゲ
ン投与群すなわち上記剤型（２）投与群に対して０．０
５以下の危険率で有意差を示した。群内の例数の関係
で、他の値および表２の値の間では、本統計処理で有意
差は見られなかったが、表１および表２のウサギ個体別
の実測値を詳細に比較すると明らかに、ＭＣＡＦ投与群
に引っ張り強度の増加が認められる。

【００２８】

【発明の効果】本発明によって、強力な創傷すなわち、
傷や、痔疾、潰瘍の治療を促進する有用な創傷治療剤が
提供された。

【図面の簡単な説明】

【図１】７日後のサンプル皮膚の引っ張り強度を図示
したものである。縦軸は引っ張り強度をグラムで表示、
横軸は投与薬剤（実施例１の配合剤（１）から（５）に
示した）を示す。黒丸は平均値を、棒線はＳＤ（ｎ＝４
での標準偏差）を示す。

【図２】１４日後のサンプル皮膚の引っ張り強度を図
示したものである。縦軸は引っ張り強度をグラムで表
示、横軸は投与薬剤（実施例１の配合剤（１）から
（５）に示した）を示す。黒丸は平均値を、棒線はＳＤ
（ｎ＝４での標準偏差）を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ０７Ｋ 14/52 8318−4ＨＡ６１Ｋ 37/02 ＡＣＬ

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】単球走化性活性化因子を有効成分とする
創傷治療剤。
【請求項２】単球走化性活性化因子が、ＭＣＡＦ、そ
の変異体もしくはその誘導体である請求項１記載の創傷
治療剤。