JPH08109182A - 化合物ｒｐ−１５５１類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 抗菌活性を有する新規生理活性物質を提供す
る。 【解決手段】 式（Ｉ） （式中、Ｒ¹ は水素等を表し、Ｒ² は２−ヒドロキシ−
４−オキソペンチル等を表す）で表される化合物ＲＰ−
１５５１類。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ペニシリウム(Pen
icillium) 属に属する微生物により生産され、抗菌作用
を有する化合物ＲＰ−１５５１類に関する。

【０００２】

【従来の技術】後述するＲＰ−１５５１類に類似した構
造を有する物質としては、式（ＶＩ）または式（ＶＩ
Ｉ）

【０００３】

【化６】

【０００４】でそれぞれ表されるイソクロモフィロンＩ
（Isochromophilone I）またはイソクロモフィロンＩＩ
（Isochromophilone II ）が、ジャーナル・オブ・アン
チビオチックス［(Journal of Antibiotics), 46, 1908
-1911 (1993)］に、ヒト免疫不全症ウイルス（ＨＩＶ）
のエンベロープ蛋白であるgp120 と表面抗原CD4 との結
合を阻害する物質として報告されている。

【０００５】式（ＶＩＩＩ）または式（ＩＸ）

【０００６】

【化７】

【０００７】でそれぞれ表されるケトビリジンＢ（Chae
toviridin B ）またはケトビリジンＣ（Chaetoviridin
C ）がケミカル・ファーマシューティカル・ブレチン
［(Chemical & Pharmaceutical Bulletin), 38, 625-62
8 (1990)］に色素として報告されている。式（Ｘ）

【０００８】

【化８】

【０００９】で表されるＴＬ−３およびＴＬ−４が第35
回天然有機化合物討論会（1993年10月11〜13日、京都；
講演要旨集 pp290〜297 ）において色素として報告され
ている。上記化合物のうち、ＴＬ−３およびＴＬ−４は
Ｒ¹ およびＲ² が一体となって式（ＩＩ）を表す化合物
（ＲＰ−１５５１−１）と同一の平面構造を有するが、
8 位に対する 2' 位および5'位の相対立体配置に関し両
者は異なっている。

【００１０】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、抗菌
活性を有する新規生理活性物質を提供することにある。

【００１１】

【課題を解決するための手段】本発明は、式（Ｉ）

【００１２】

【化９】

【００１３】｛式中、Ｒ¹ およびＲ² は、（１）一体と
なって式（ＩＩ）

【００１４】

【化１０】

【００１５】（式中、２’位水素および５’位水素は８
位水素とそれぞれａｎｔｉ配置の関係にある）を表す
か、（２）Ｒ¹ が水素を表し、Ｒ² が式（ＩＩＩ）

【００１６】

【化１１】

【００１７】を表すか、（３）一体となって式（ＩＶ）

【００１８】

【化１２】

【００１９】を表すか、または（４）一体となって式
（Ｖ）

【００２０】

【化１３】

【００２１】を表す｝で表される化合物ＲＰ−１５５１
類に関する。該化合物はペニシリウム属に属する微生物
を培養することにより得ることができる。

【００２２】

【発明の実施の形態】式（Ｉ）で表される化合物のう
ち、Ｒ¹ およびＲ² が一体となって式（ＩＩ）を表す化
合物をＲＰ−１５５１−１、Ｒ¹ が水素を表し、Ｒ² が
式（ＩＩＩ）を表す化合物をＲＰ−１５５１−２、Ｒ¹
およびＲ² が一体となって式（ＩＶ）を表す化合物をＲ
Ｐ−１５５１−３、Ｒ¹ およびＲ² が一体となって式
（Ｖ）を表す化合物をＲＰ−１５５１−４とそれぞれ称
する。また、これらの化合物をＲＰ−１５５１類と総称
する。

【００２３】ＲＰ−１５５１類は全て、側鎖の三置換オ
レフィンの立体配置に関する２種の幾何異性体（Ｅ体お
よびＺ体）の平衡混合物である。その平衡は速やかであ
り、両異性体を純粋な形で単離することはできない。同
様の平衡は上述の類似構造を有する化合物イソクロモフ
ィロン類についても報告されている。ＲＰ−１５５１〜
４のいずれの化合物においても通常Ｅ体が主成分、Ｚ体
がマイナー成分であるが、両者の相対的比率は生産法、
単離精製法や保存条件によって変化し一定ではない。

【００２４】以下にＲＰ−１５５１類の理化学的性質を
示すが、これらは全て後述の実施例に示す方法により取
得された E体および Z体の混合物サンプルに関するもの
である。なお、¹³C および ¹H-NMR スペクトルに限り、
E 体、Z 体のシグナルを区別して観測、帰属することが
可能であったので、それぞれを区別して記す。化合物Ｒ
Ｐ−１５５１類の理化学的性質を以下に示す。

【００２５】ＲＰ−１５５１−１の物理化学的データ
（E 体：Z 体＝約 3.5：1 ） 性状：黄色粉末 融点：124.0 〜128.0 ℃ 比旋光度：［α]_D ²⁵ = -135 °（c=0.12, CH₃OH ） 分子式：C₂₅H₂₉O₆Cl FAB マススペクトル：m/z 461 (M+H)⁺ 高分解能FAB マススペクトル：m/z 461.1738 (M+H)⁺ 紫外部吸収スペクトル：λ_max (CH₃OH) nm ( ε) 458
(sh 8,700), 430 (22,300), 409 (28,300), 391 (sh 2
4,900), 355 (22,300), 341 (sh 20,400), 251 (18,90
0) 赤外部吸収スペクトル：ν_max (KBr) cm^-1 3425, 173
4, 1628, 1558, 1522, 1236, 1111, 843¹³ C-NMR スペクトル（100MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（多重
度） 1) E異性体 189.17(s), 172.44(s), 158.42(s), 147.83(d), 147.02
(d), 142.21(d), 140.83(s), 131.93(s), 116.43(d), 1
15.35(s), 109.78(s), 105.38(d), 102.53(s), 84.12
(s), 73.49(d), 57.21(d), 47.41(d), 44.88(t), 35.05
(d), 30.10(t),24.11(q), 20.59(q), 20.24(q), 12.38
(q), 11.92(q) 2) Z異性体 189.25(s), 172.44(s), 158.15(s), 147.02(d), 145.36
(d), 140.68(s), 133.86(d), 129.92(s), 118.81(d), 1
15.35(s), 110.1(s), 106.06(d), 102.53(s), 84.12
(s), 73.49(d), 57.15(d), 47.47(d), 44.88(t), 34.09
(d), 30.29(t),24.06(q), 20.97(q), 20.59(q), 20.07
(q), 11.97(q)¹ H-NMRスペクトル（400MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（積分,
多重度, 結合定数 J(Hz)） 1) E異性体 7.71(1H,s), 7.06(1H,d,15.8), 6.58(1H,s), 6.07(1H,
d,15.8), 5.66(1H,d,10.0), 4.62(1H,m), 3.36(1H,d,9.
0), 2.99(1H,d,9.0), 2.47(1H,m), 2.39(1H,d,14.3),
1.87(1H,dd,14.3,11.5), 1.84(3H,d,1.0), 1.45(1H,m),
1.42(3H,d,6.4), 1.41(3H,s), 1.34(1H,m), 1.01(3H,
d,6.6), 0.86(3H,t,7.4) 2) Z異性体 7.75(1H,s), 7.45(1H,d,15.6), 6.60(1H,s), 6.16(1H,
d,15.6), 5.51(1H,d,10.0), 4.62(1H,m), 3.37(1H,d,9.
0), 3.00(1H,d,9.0), 2.64(1H,m), 2.39(1H,d,14.3),
1.91(3H,d,1.2), 1.87(1H,dd,14.3,11.5), 1.45(1H,m),
1.42(3H,d,6.4), 1.41(3H,s), 1.34(1H,m), 1.01(3H,
d,6.6), 0.86(3H,t,7.4)

【００２６】ＲＰ−１５５１−２の物理化学的データ
（E 体：Z 体＝約 3.3：1 ） 性状：黄色粉末 融点：54.0〜55.0℃ 比旋光度：［α]_D ²⁹= +24.5 °（c=0.50, CH₃OH ） 分子式：C₂₄H₃₁O₅Cl FAB マススペクトル：m/z 435 (M+H)⁺ 高分解能FAB マススペクトル：m/z 435.1909 (M+H)⁺ 紫外部吸収スペクトル：λ_max (CH₃OH) nm ( ε) 460
(sh 10,400), 432 (sh26,500), 409 (33,100), 391 (s
h 28,600), 356 (25,500), 340 (sh 22,600), 319 (sh
15,600), 250 (22,300) 赤外部吸収スペクトル：ν_max (KBr) cm^-1 3431, 170
9, 1624, 1558, 1520, 1213, 964, 850¹³ C-NMR スペクトル（100MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（多重
度） 1) E異性体 209.84(s), 191.45(s), 158.25(s), 147.89(d), 145.30
(d), 142.28(d), 141.58(s), 131.96(s), 119.22(s), 1
16.40(d), 106.57(s), 105.02(d), 74.11(s), 63.82
(d), 51.20(t), 41.64(t), 40.26(d), 35.06(d), 30.12
(t), 26.75(q),22.43(q), 20.26(q), 12.39(q), 11.93
(q) 2) Z異性体 209.87(s), 191.45(s), 157.97(s), 145.41(d), 145.34
(d), 141.43(s), 133.86(d), 129.89(s), 118.83(d), 1
10.47(s), 106.88(s), 105.71(d), 74.11(s), 63.82
(d), 51.17(t), 41.58(t), 40.26(d), 34.11(d), 30.30
(t), 26.73(q),22.43(q), 20.98(q), 20.10(q), 11.99
(q)¹ H-NMRスペクトル（400MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（積分,
多重度, 結合定数 J(Hz)） 1) E異性体 7.41(1H,s), 7.03(1H,d,15.6), 6.50(1H,s), 6.04(1H,
d,15.6), 5.65(1H,d,9.5), 4.17(1H,m), 3.43(1H,dd,9.
5,3.5), 3.09(1H,dd,18.1,3.5), 2.48(1H,m),2.46(1H,
m), 2.45(1H,m), 2.34(1H,dd,18.1,9.5), 1.82(3H,d,1.
2), 1.42(1H,m), 1.31(3H,s), 1.26(1H,m), 1.15(3H,d,
6.4), 1.00(3H,d,6.5), 0.85(3H,t,7.5) 2) Z異性体 7.45(1H,s), 7.42(1H,d,15.6), 6.52(1H,s), 6.13(1H,
d,15.6), 5.50(1H,d,10.7), 4.17(1H,m), 3.44(1H,dd,
9.5,3.4), 3.10(1H,dd,18.1,3.4), 2.63(1H,m), 2.48(1
H,m), 2.46(1H,m), 2.35(1H,dd,18.1,9.5), 1.90(3H,d,
1.2), 1.42(1H,m), 1.31(3H,s), 1.26(1H,m), 1.16(3H,
d,6.3), 1.01(3H,d,6.8), 0.86(3H,t,7.5)

【００２７】ＲＰ−１５５１−３の物理化学的データ
（E 体：Z 体＝約 2.8：1 ） 性状：黄色粉末 融点：91.0〜93.0℃ 比旋光度：［α]_D ³⁰ = -335 °（c=0.066, CH₃OH） 分子式：C₂₅H₂₇O₅Cl FAB マススペクトル：m/z 443 (M+H)⁺ 高分解能FAB マススペクトル：m/z 443.1612 (M+H)⁺ 紫外部吸収スペクトル：λ_max (CH₃OH) nm ( ε) 462
(sh 11,100), 433 (27,100), 412 (31,800), 391 (sh
25,800), 360 (21,700), 342 (sh 19,400), 241(22,30
0) 赤外部吸収スペクトル：ν_max (KBr) cm^-1 3444, 178
4, 1693, 1668, 1631,1558, 1520, 1431, 1242, 1090,
962, 847¹³ C-NMR スペクトル（100MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（多重
度） 1) E異性体 90.06(s), 184.31(s), 168.38(s), 158.79(s), 148.44
(d), 147.89(d), 146.22(d), 142.78(d), 140.65(s), 1
31.94(s), 130.44(d), 116.14(d), 113.51(s), 109.31
(s), 105.11(d), 83.58(s), 54.56(d), 42.71(d), 35.1
0(d), 30.09(t), 23.38(q), 20.22(q), 18.73(q), 12.3
9(q), 11.92(q) 2) Z異性体 190.01(s), 184.31(s), 168.35(s), 158.51(s), 147.89
(d), 146.22(d), 145.89(d), 140.51(s), 134.34(d), 1
30.40(t), 129.89(s), 118.54(d), 113.51(s), 109.60
(s), 105.79(d), 83.55(s), 54.56(d), 42.71(d), 35.1
0(d), 30.27(t), 23.38(q), 20.95(q), 20.05(q), 18.7
3(q), 11.99(q)¹ H-NMRスペクトル（400MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（積分,
多重度, 結合定数 J(Hz)） 1) E異性体 7.41(1H,s), 7.03(1H,d,15.6), 7.01(1H,dq,15.7,6.9),
6.55(1H,s), 6.43(1H,dq,15.7,1.7), 6.05(1H,d,15.
6), 5.66(1H,d,9.8), 4.01(1H,s), 4.00(1H,s), 2.47(1
H,m), 1.97(3H,dd,6.9,1.7), 1.83(3H,d,1.2), 1.63(3
H,s), 1.42(1H,m), 1.3(1H,m), 1.01(3H,d,6.6), 0.86
(3H,t,7.5) 2) Z異性体 7.46(1H,s), 7.43(1H,d,15.6), 7.01(1H,dq,15.7,6.9),
6.52(1H,s), 6.43(1H,dq,15.7,1.7), 6.14(1H,d,15.
6), 5.52(1H,d,10.0), 4.01(1H,s), 4.01(1H,s), 2.62
(1H,m), 1.97(3H,dd,6.9,1.7), 1.90(3H,d,1.2), 1.63
(3H,s), 1.42(1H,m), 1.30(1H,m), 1.00(3H,d,6.6), 0.
85(3H,t,7.5)

【００２８】ＲＰ−１５５１−４の物理化学的データ
（E 体：Z 体＝約 2.4：1 ） 性状：黄色粉末 融点：82.0〜84.0℃ 比旋光度：［α]_D ²⁴ = -306 °（c=0.20, CH₃OH ） 分子式：C₂₅H₂₉O₆Cl FAB マススペクトル：m/z 461 (M+H)⁺ 高分解能FAB マススペクトル：m/z 461.1717 (M+H)⁺ 紫外部吸収スペクトル：λ_max (CH₃OH) nm ( ε) 461
(sh 26,100), 433 (59,300), 413 (70,700), 392 (sh
57,900), 359 (48,700), 342 (sh 42,000), 253(28,00
0) 赤外部吸収スペクトル：ν_max (KBr) cm^-1 3444, 177
8, 1716, 1626, 1556, 1516, 1433, 1244, 1093, 849,
681¹³ C-NMR スペクトル（100MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（多重
度） 1) E異性体 202.19(s), 183.97(s), 168.22(s), 158.79(s), 148.58
(d), 146.45(d), 142.93(d), 140.66(s), 131.95(s), 1
16.10(d), 113.28(s), 109.30(s), 105.14(d), 83.62
(s), 64.13(d), 56.95(d), 50.81(t), 42.46(d), 35.13
(d), 30.11(t),23.40(q), 22.96(q), 20.23(q), 12.39
(q), 11.93(q) 2) Z異性体 202.19(s), 184.07(s), 168.20(s), 158.51(s), 146.48
(d), 146.01(d), 140.51(s), 134.47(d), 129.89(s), 1
18.51(d), 113.28(s), 109.58(s), 105.82(d), 83.62
(s), 64.13(d), 56.91(d), 50.76(t), 42.46(d), 34.20
(d), 30.28(t),23.40(q), 22.96(q), 20.97(q), 20.07
(q), 12.00(q)¹ H-NMRスペクトル（400MHz, CDCl₃ ）：δ ppm（積分,
多重度, 結合定数 J(Hz)） 1) E異性体 7.44(1H,s), 7.05(1H,d,15.7), 6.55(1H,s), 6.06(1H,
d,15.7), 5.68(1H,d,9.8), 4.28(1H,m), 3.888(2H,s),
3.115(1H,dd,17.4,8.6), 2.80(1H,dd,17.4,3.2), 2.47
(1H,m), 1.83(3H,d,1.0), 1.62(3H,s), 1.42(1H,m), 1.
30(1H,m), 1.24(3H,d,6.1), 1.01(3H,d,6.6), 0.855(3
H,t,7.5) 2) Z異性体 7.480(1H,s), 7.45(1H,d,15.6), 6.570(1H,s), 6.15(1
H,d,15.6), 5.53(1H,d,9.8), 4.28(1H,m), 3.892(2H,
s), 3.121(1H,dd,17.4,8.6), 2.81(1H,dd,17.4,3.2),
2.62(1H,m), 1.91(3H,d,1.2), 1.62(3H,s), 1.42(1H,
m), 1.30(1H,m), 1.25(3H,d,6.4), 1.01(3H,d,6.6), 0.
860(3H,t,7.5) 上記化合物のうち、ＲＰ−１５５１−１はＴＬ−３およ
びＴＬ−４と同一の平面構造を有するが、8 位に対する
2' 位および5'位の相対立体配置に関し両者は異なって
いる。ＴＬ−３およびＴＬ−４に関しては 7位メチル基
と 8位水素、8位水素と 2' 位水素、2'位水素と 5' 位
水素がいずれも synの配置である。これに対しＲＰ−１
５５１−１では7 位メチル基と 8位水素、および 2' 位
水素と 5' 位水素はいずれも同様に synの配置である
が、8 位水素と 2' 位水素は antiの配置である。この
ことは、NMR スペクトルにおけるNOESY 実験および差 N
OE実験で、7 位メチル基と 8位水素、および2'位水素と
5' 位水素の間にはそれぞれNOEが観測されるのに対
し、8 位水素と2'位水素の間にはNOE が観測されないこ
とから決定された。従って、ＲＰ−１５５１−１がＴＬ
−３またはＴＬ−４と異なる物質であることは明らかで
ある。

【００２９】以上のデータより化合物ＲＰ−１５５１類
は新規化合物であることが判明した。各種細菌に対する
化合物ＲＰ−１５５１類の生物活性を以下に示す。

【００３０】試験例１ 各種細菌に対する抗菌活性 抗菌活性は、バクトトリプトン（Difco 社製）3g/L、肉
エキス3g/L、酵母エキス 1g/L 、グルコース1g/L、寒天
16g/L の組成からなる培地（pH7.0)を用いて寒天希釈法
により測定した。各種細菌に対する最小生育阻止濃度(M
IC) を第１表に示す。

【００３１】

【表１】

【００３２】化合物ＲＰ−１５５１類は、ペニシリウム
属に属し、化合物ＲＰ−１５５１類生産能を有する微生
物を培地に培養し、培養物中に化合物ＲＰ−１５５１類
を生成蓄積させ、該培養物から化合物ＲＰ−１５５１類
を採取することによって製造される。化合物ＲＰ−１５
５１類生産能を有する微生物としては、ペニシリウム属
に属し、化合物ＲＰ−１５５１類生産能を有する菌株で
あればいずれの菌株でも用いることができる。また、こ
れらの菌株を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ
線照射、変異誘発剤処理などによって変異させた変異株
あるいは自然的に変異した変異株などでも化合物ＲＰ−
１５５１類生産能を有していれば本発明に用いることが
できる。

【００３３】具体的に好適な例としては、ペニシリウム
・エスピー( Penicillium sp.)ＳＰＣ−２１６０９株が
あげられる。ペニシリウム・エスピー( Penicillium s
p.)ＳＰＣ−２１６０９株の菌学的性質は次のとおりで
ある。 肉眼的観察 麦芽エキス寒天培地を用いて、２４℃で培養したとき、
集落の直径は培養７日目で２３〜２４ｍｍ、培養１４日
目で約４３ｍｍに達する。培養７日目の集落中央部はオ
レンジ色で、周囲は白色を呈し、その裏面は、暗オレン
ジ色を呈し、黄色の可溶性色素を培地中に出す。

【００３４】バレイショ・ブドウ糖寒天培地を用いて、
２５℃で培養したとき、集落の直径は培養７日目で約２
４ｍｍ、培養１４日目で約４０ｍｍに達する。培養７日
目の集落の様子は麦芽エキス寒天培地上と同様である。
本菌株の至適生育温度は１５〜３６℃であり、２８℃前
後で最も良好に生育する。生育し得るpHは２〜８で、至
適生育pHは５〜６である。 光学顕微鏡的観察 麦芽エキス寒天培地上で培養したときの本菌株の光学顕
微鏡による観察結果は以下のとおりである。

【００３５】菌糸は隔壁を有し、無色から黄褐色あるい
は赤褐色を呈し、平滑でよく分岐する。分生子柄は束状
になることはなく、菌糸から単生して立ち上がる。分生
子柄は、平滑、無色から淡黄褐色を呈し、長さ約２００
μｍに達し、幅約３μｍである。分生子柄の先端に３〜
５本のメトレが形成され、そのメトレの先端に３〜５個
のフィアライドが形成される。また、分生子柄とメトレ
の間にラミーを形成する場合もある。メトレは円筒形
で、長さ６〜１４μｍ、幅１．５〜３．５μｍを呈す
る。フィアライドはトックリ形を呈し、長さ９〜１２μ
ｍ、幅は最も広い部位において２〜３．５μｍを呈す
る。ラミーは円筒形で、長さ約２０μｍ、幅約２μｍを
呈する。分生子の個体発生様式は内生出芽型のフィアロ
型であり、分生子はフィアライド先端より形成し、連鎖
状となる。フィアロ型分生子は、単細胞、無色、楕円形
あるいは亜球形で、長さ２〜３μｍ、幅１．５〜２μ
ｍ、表面は平滑を呈する。本菌株は、上述したアナモル
フ（anamorph）のみ観察され、テレオモルフ（teleomor
ph）は観察されない。

【００３６】以上の菌学的性質から、本菌の分類学上の
位置を「ザ・ジェネラ・オブ・ファンジャイ・スポルレ
イティング・イン・ピュア・カルチャー第２版（The Ge
neraof Fungi Sporulating in Pure Culture, 2nd ed.
Cramer, Vaduz, J. A. vonArx, 1974 ）」に従って検索
した結果、本菌株は、ペニシリウム (Penicillium) 属
に属すると同定された。

【００３７】本菌株は、ペニシリウム・スピーシーズ
(Penicillium sp.)ＳＰＣ−２１６０９と命名され、ブ
ダペスト条約に基づいて平成６年８月４日付けで、工業
技術院生命工学工業技術研究所にFERM BP-4768として寄
託してある。本発明の化合物ＲＰ−１５５１−１生産菌
の培養に際しては、糸状菌の培養に用いられる通常の培
養方法が適用される。用いられる培地は、菌の資化し得
る炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培地で
あれば天然培地、合成培地いずれでも用いられる。

【００３８】炭素源としては、グルコース、シュークロ
ース、澱粉、デキストリン、マンノース、マルトース、
糖蜜、マッシュポテトの素などの炭水化物、クエン酸、
リンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノー
ル、エタノールなどのアルコール、メタン、エタン、プ
ロパン、ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタミン酸
などのアミノ酸あるいはグリセロールなどが用いられ
る。

【００３９】窒素源としては、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などのアンモニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、
シスチン、アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、
肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、麦芽エキス、コーン
・スチープ・リカー、大豆粉、ソルブル・ベジタブル・
プロテイン、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファ
ーマメディア、野菜ジュースなどが用いられる。

【００４０】無機物としては、リン酸一水素カリウム、
リン酸二水素カリウム、リン酸二水素ナトリウム、リン
酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、硫酸
マンガン、硫酸銅、硫酸コバルト、硫酸亜鉛、パントテ
ン酸カルシウム、モリブデン酸アンモニウム、硫酸アル
ミニウムカリウム、炭酸バリウム、炭酸カルシウム、塩
化コバルト、食塩などが用いられる。

【００４１】その他必要に応じて、培地にビタミン、サ
イアミンなど菌体の増殖あるいは化合物ＲＰ−１５５１
類の生産を促進する物質を加える。また、用いる微生物
が特定の物質を要求する場合は、該物質を加える。培養
は振盪培養法、通気撹拌培養法などにより、１５〜３５
℃の温度で、中性付近のpHで行われる。通常３〜１５日
の培養によって、化合物ＲＰ−１５５１類の蓄積は最大
に達する。

【００４２】培養液中に蓄積した化合物ＲＰ−１５５１
類を培養液から単離採取するに際しては、培養液から生
理活性物質を採取する通常の方法が適用される。すなわ
ち、アセトン、メタノールなどの有機溶媒による菌体成
分の抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除去、吸着樹
脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、逆相シリカ
ゲル、酸化アルミニウム、セルロース、ケイ藻土、ケイ
酸マグネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂などを用
いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層クロマトグ
ラフィーによる活性物質の吸脱着処理もしくは、適当な
溶媒系による分配などによって化合物ＲＰ−１５５１類
は単離される。

【００４３】上記精製工程中の化合物ＲＰ−１５５１類
の検出は、蛍光剤入りシリカゲル（キーゼルゲルＦ254
、メルク社製）を用いた薄層クロマトグラフィーに付
し、ヨウ素反応または２５３．７nmの紫外線照射法によ
り行うことができる。以下に本発明の実施例を示す。

【００４４】

【実施例】

【００４５】実施例１ 種菌として、ペニシリウム・エスピー（Penicillium s
p.)ＳＰＣ−２１６０９株(FERM BP-4768)を用い、第一
種培地としてマッシュポテトの素（雪印乳業社製）３g
／dL、グルコース１０g ／dL、酵母エキス０．５g ／dL
（ｐＨ６．５）の組成からなる培地を用いた。種菌一白
金耳を太型試験管に入れた上記第一種培地１０mLに植菌
し、２５℃で５日間振盪培養した（第一種培養）。

【００４６】第一種培養により得られた培養液（第一種
培養液）１０mLを３００mL三角フラスコに入った５０mL
の第二種培地に植菌した。第二種培地の組成は第一種培
地の組成と同じである。第二種培養は２８℃で２日間行
った。得られた第二種培養液１０mLを３００mL三角フラ
スコに入った５０mLの主発酵培地に植菌した。主発酵培
地として、シュークロース３g ／dL、可溶性澱粉２g／d
L、乾燥酵母（アサヒビール社製）０．５g ／dL、麦芽
エキス１g ／dL、コーン・スチープ・リカー０．５g ／
dL、野菜ジュース（Campbell社製）２０mL／dL、炭酸カ
ルシウム１．５g ／dL（pH６．５）の組成からなる培地
を用いた。主発酵培養は２５℃で７日間振盪培養するこ
とにより行った。

【００４７】得られた発酵培養液８００mLをろ過し、分
別した菌体に８００mLのメタノールを加え撹拌後ろ過し
た。ろ液に８００mLの脱イオン水を添加し、脱イオン水
を用いて充填した８０mLのダイヤイオンＨＰ−２０ss
（三菱化成社製：登録商標）カラムに通塔した。カラム
を５０％メタノール水溶液３００mLで洗浄後、３００mL
のメタノール／アセトン混合溶媒（７：３）で溶出し
た。溶出液を減圧下で濃縮して、７９４mgの黄色油状物
質を得た。この物質を少量の１０％の２−ブタノンを含
むクロロホルム溶液に溶解し、同じ組成の溶媒を用いて
充填した１００mLのシリカゲル（メルク社製、Art.773
4）カラムの上端にのせ、同じ組成の溶媒を用いて活性
物質を溶出した。溶出液を２０mLずつ分取すると、化合
物ＲＰ−１５５１−１は画分番号１６〜３２に溶出され
た。これらの画分を集めた後、減圧下で濃縮乾固して１
３４mgの黄色固体を得た。この物質を少量の７０％アセ
トニトリル水溶液に溶解し、同じ組成の溶媒を用いて充
填した１５０mLの逆相シリカゲル（ＹＭＣ社製、ＯＤＳ
−ＡＱＳ５０）カラムの上端にのせ、同じ組成の溶媒で
溶出した。溶出液を２０mLずつ分取すると、化合物ＲＰ
−１５５１−１は画分番号２９〜３２に溶出された。こ
れらの画分を集めた後、減圧下で濃縮乾固し、化合物Ｒ
Ｐ−１５５１−１を５２mg得た。

【００４８】実施例２ 種菌として、ペニシリウム・エスピー（Penicillium s
p.)ＳＰＣ−２１６０９株(FERM BP-4768)を用い、第一
種培地としてマッシュポテトの素（雪印乳業社製）３g
／dL、グルコース１０g ／dL、酵母エキス０．５g ／dL
（ｐＨ６．５）の組成からなる培地を用いた。種菌一白
金耳を太型試験管に入れた上記第一種培地１０mLに植菌
し、２５℃で７日間振盪培養した（第一種培養）。

【００４９】第一種培養により得られた培養液（第一種
培養液）５mLを３００mL三角フラスコに入った５０mLの
第二種培地に植菌した。第二種培地の組成は第一種培地
の組成と同じである。第二種培養は２５℃で３日間行っ
た。得られた第二種培養液５０mLを２L 三角フラスコに
入った４００mLの主発酵培地に植菌した。主発酵培地と
して、シュークロース３g ／dL、可溶性澱粉２g ／dL、
乾燥酵母（アサヒビール社製）０．５g ／dL、麦芽エキ
ス１g ／dL、コーン・スチープ・リカー０．５g ／dL、
野菜ジュース（Campbell社製）２０mL/dL 、炭酸カルシ
ウム１．５g ／dL（pH６．５）の組成からなる培地を用
いた。主発酵培養は２５℃で７日間振盪培養することに
より行った。

【００５０】得られた発酵培養液８L をろ過し、分別し
た菌体に８L のメタノールを加え撹拌後ろ過した。ろ液
に８L の脱イオン水を添加し、脱イオン水を用いて充填
した３L のダイヤイオンＨＰ−２０ss（三菱化成社製：
登録商標）カラムに通塔した。カラムを５０％メタノー
ル水溶液９L で洗浄後、９L のメタノール／アセトン混
合溶媒（７：３）で溶出した。溶出液を減圧下で濃縮し
て、８．３g の黄色油状物質を得た。この物質を少量の
クロロホルム溶液に溶解し、同じ組成の溶媒を用いて充
填した１L のシリカゲル（メルク社製、Art.7734）カラ
ムの上端にのせ、３L のクロロホルム、３L の１０％の
２−ブタノンを含むクロロホルム、９Lの２０％の２−
ブタノンを含むクロロホルムおよび３L のメタノールで
順次溶出し、溶出液を１L ずつ分取した。画分番号４お
よび画分番号７〜１５をそれぞれ減圧下で乾固し、黄色
油状物質をそれぞれ３８２mgおよび１．８g 得た。画分
番号４より得られた油状物質を少量のクロロホルムに溶
解し、シリカゲル（メルク社製、Lichroprep Si60 ）カ
ラムの上端にのせ、クロロホルムで溶出した。溶出容量
１８０mL〜３７０mLの間にＲＰ−１５５１−３が溶出さ
れた。溶出液を減圧下で乾固し、ＲＰ−１５５１−３の
粗精製標品を６６mg得た。得られた粗精製標品を８５％
メタノール水溶液に溶解し、同じ組成の溶媒で平衡化し
たカラム（ＹＭＣ社製、Ｄ−ＯＤＳ−５ＡＱ、２ｃｍφ
×２５ｃｍ）の上端にのせ、８５％メタノール水溶液を
毎分１０mLの流速で流すことによりＲＰ−１５５１−３
を溶出した。ＲＰ−１５５１−３は保持時間２３分に溶
出され、溶出液を集め減圧下で乾固することにより、Ｒ
Ｐ−１５５１−３の粉末を２２mg得た。

【００５１】前述の画分番号７〜１５を濃縮乾固して得
られた油状物質を少量の８５％メタノール水溶液に溶解
し、同じ組成の溶媒で平衡化した逆相シリカゲル（ＹＭ
Ｃ社製、ＯＤＳ ＡＱ−Ｓ５０）カラム１５０mLの上端
にのせ、同じ組成の溶媒を用いて溶出した。溶出液を１
４mLずつ分画するとＲＰ−１５５１−４は画分番号１９
〜２２に、ＲＰ−１５５１−２は画分番号２３〜２７
に、ＲＰ−１５５１−１は画分番号２９〜３４に溶出さ
れた。各画分をそれぞれまとめて減圧下で濃縮乾固し、
ＲＰ−１５５１−４の粗精製標品を１１１mg、ＲＰ−１
５５１−２の粗精製標品を１６９mg、ＲＰ−１５５１−
１を７８７mg得た。ＲＰ−１５５１−４の粗精製標品を
少量の８５％メタノール水溶液に溶解し、ＨＰＬＣカラ
ム（ＹＭＣ社製、Ｄ−ＯＤＳ−５ＡＱ、２ｃｍφ×２５
ｃｍ）に通塔した。カラムを８５％メタノール水溶液を
用いて、１０mL／分の流速で溶出すると、ＲＰ−１５５
１−４は保持時間１６〜１８分に溶出された。溶出液を
まとめ、減圧下で濃縮乾固しＲＰ−１５５１−４を３７
mg得た。

【００５２】ＲＰ−１５５１−２の粗精製標品を少量の
８５％メタノール水溶液に溶解し、ＲＰ−１５５１−４
の精製過程と同条件での分画を行った。ＲＰ−１５５１
−２は保持時間１８．５〜２０．５分に溶出され、溶出
液を集めて減圧下で濃縮乾固することにより、ＲＰ−１
５５１−２を４７mg得た。

【００５３】

【発明の効果】本発明によれば、抗菌活性を有する化合
物ＲＰ−１５５１類を提供することができる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｐ 17/06 7432−4Ｂ 17/18 Ｄ 7432−4Ｂ (Ｃ１２Ｐ 17/06 Ｃ１２Ｒ 1:80） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:80） (72)発明者 安藤 勝彦 東京都町田市旭町１−17−８ (72)発明者 松田 譲 東京都小金井市貫井南町１−22−７ (72)発明者 北 克則 静岡県駿東郡長泉町竹原255−７ (72)発明者 鈴木 保博 静岡県沼津市下香貫浜田2978−18 (72)発明者 見原 明 東京都町田市木曽町1079−22

Claims (5)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 式（Ｉ） 【化１】 ｛式中、Ｒ¹ およびＲ² は、（１）一体となって式（Ｉ
   Ｉ） 【化２】 （式中、２’位水素および５’位水素は８位水素とそれ
   ぞれａｎｔｉ配置の関係にある）を表すか、（２）Ｒ¹
   が水素を表し、Ｒ² が式（ＩＩＩ） 【化３】 を表すか、（３）一体となって式（ＩＶ） 【化４】 を表すか、または（４）一体となって式（Ｖ） 【化５】 を表す｝で表される化合物ＲＰ−１５５１類。
2. 【請求項２】 Ｒ¹ およびＲ² が一体となって式（Ｉ
   Ｉ）を表す請求項１記載の化合物。
3. 【請求項３】 Ｒ¹ が水素を表し、Ｒ² が式（ＩＩＩ）
   を表す請求項１記載の化合物。
4. 【請求項４】 Ｒ¹ およびＲ² が一体となって式（Ｉ
   Ｖ）を表す請求項１記載の化合物。
5. 【請求項５】 Ｒ¹ およびＲ² が一体となって式（Ｖ）
   を表す請求項１記載の化合物。