JPH08500081A

JPH08500081A - ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤

Info

Publication number: JPH08500081A
Application number: JP5505594A
Authority: JP
Inventors: デアナ，アルバート・エイ; デイソルムズ，エス・ジエーン; グラハム，サミユエル・エル; スミス，ロバート・エル
Original assignee: メルクエンドカンパニーインコーポレーテッド
Priority date: 1992-06-26
Filing date: 1993-06-22
Publication date: 1996-01-09
Also published as: CA2137455A1; US5352705A; EP0664789A4; EP0664789A1; US5504115A; AU4645593A; WO1994000419A1

Abstract

(57)【要約】本発明は、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ（FTase）を阻害して発癌遺伝子蛋白質Rasのファルネシル化を防止する化合物に関する。本発明はさらに、本発明の化合物を含む化学療法剤組成物、並びにファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ及び発癌遺伝子蛋白質Rasのファルネシル化を阻害する方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤発明の背景結腸直腸癌、外分泌性膵臓癌及び骨髄性白血病を含む多くのヒトの癌においてRas遺伝子が活性化することが知られている。Ras活動の生物学的及び生化学的研究によると、RasはＧ調節蛋白質のように機能することが示された。その理由は、Rasが細胞を形質転換するために形質膜に位置し、GTPに結合するはずだからである〔Gibbs,J.ら、Microb-iol.Rev.53:171-286（1989）〕。癌細胞中のRas遺伝子の形状は変異していて、正常細胞中のRas蛋白質と区別することができる。 Rasが形質膜に位置するまでには、少なくとも３種の翻訳後修飾が含まれており、３種の修飾全てはRas（７）Ｃ末端で起こる。RasのＣ末端には、「CAAX」、即ち「Cys-Aaa¹-Aaa²-Xaa」ボックス〔Aaaは脂肪族アミノ酸であり、Xaaはいずれのアミノ酸でもよい〕と称される部分配列が含まれる〔Willumsenら、Nature 310:583-586（1984）〕。この部分（motif）を有する他の蛋白質には、Rho、真菌性交配因子、核ラミン及びトランスデューシンのγサブユニットのようなRas関連GTP結合蛋白質が含まれている。イソプレノイドファルネシルピロ燐酸（FPP）によるRasのファルネシル化は、生体内でシステイン部分に起こり、チオエーテル結合を生成する〔Hancockら、C ell 57:1167（1989）； Caseyら、Proc. Natl.Acad.Sci.USA 86:8323（1989）〕。さらに、Ha-Ras及びN-Rasは、Ｃ末端のCysファルネシル受容体近くのCys残基にチオエステルを形成することによりパルミトイル化する〔Gutierrezら、EMB O J .8:1093-1098 （1989）； Hancockら、Cell 57:1167-1177 （1989）〕。Ki -Rasは、パルミテート受容体Cysを欠いている。RasＣ末端の最後の３個のアミノ酸は蛋白質分解により除去され、新たなＣ末端にメチルエステル化が起こる〔Ha ncockら、前出〕。真菌性交配因子や哺乳類核ラミンにも同様な修飾段階がある〔Andereggら、J. Biol.Chem. 263:18236 （1988）; Farnsworthら、同誌264:20 422（1989）〕。 Rasのファルネシル化がロバスタチン〔Merck & Co., Rahway, ニュージャージ一州〕及びコンパクチン〔Hancockら、前出； Caseyら、前出； Schaferら、Science 245:379 （1989）〕により生体内で阻害されることが実証された。これらの薬剤は、ポリイソプレノイド及びファルネシルピロ燐酸前駆体生成の律速酵素であるHMG-CoA リダクターゼを阻害する。ファルネシルピロ燐酸を前駆体として用いるファルネシル蛋白質トランスフェラーゼが、Rasファルネシル化をもたらすことが示された〔Reissら、Cell 62:81-88（1990）； Schaberら、J.Biol.Chem.265:14701-14 704（1990）； Schaferら、Science 249:1133-1139（1990）; Manneら、Proc.Nat l.Acad.Sci.USA 87:7541-7545（1990）〕。ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼが阻害され、それによりRas蛋白質のファルネシル化が防止されると、Rasが正常細胞を癌細胞に形質転換する能力が失われる。本発明の化合物は、Rasのファルネシル化を阻害し、それによって可溶性Rasが生成し、後述のように、これがRas機能の優性負阻害剤としての働きをすることが可能になる。癌細胞中の可溶性Rasは優性負阻害剤となり得るが、正常細胞中の可溶性Rasは阻害剤とはなり得ない。（Cys-Aaa^l-Aaa²-Xaaボックス膜領域のない）シトソル所在の、及び活性化形態（GTPase活性が損なわれ、GTPに結合している）のRasは、膜結合型のRas機能の優勢負Ras阻害剤として作用する〔G ibbsら、Proc. Natl. Acad.Sci.USA 86:6630-6634（1989）〕。 GTPase活性が正常であるシトソル所在型のRasは阻害剤として作用しない。前出のGibbsらは、この効果をXenopus oocytes及び哺乳類細胞において実証した。 Rasのファルネシル化を阻害するために本発明の化合物を投与すると、膜内Ras 量が減少するばかりでなく、Rasのシトソル集中が生ずる。活性化Rasを有する腫瘍細胞では、このシトソル集中は膜結合Ras機能の他のアンタゴニストとして働く。正常なRasを有する正常細胞にあっては、Rasのシトソル集中がアンタゴニストとして働くことはない。ファルネシル化が完全に阻止されない場合には、他のファルネシル化蛋白質がその機能を持続することが可能である。ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ活性は、化合物の投与量を調整することにより低減又は完全に阻害することが可能である。ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ酵素活性を化合物の投与量を調整して低減させると、該酵素を利用する他の代謝反応の妨害により引き起こされ得る好ましからざる副作用を避けるのに役立つ。これらの化合物及びその同族体は、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼの阻害剤である。ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼは、ファルネシルピロ燐酸を用いて、RasのCAAXボックスのCysチオール基をファルネシル基で共有結合により修飾する。HMG-CoAリダクターゼ阻害によりファルネシルピロ燐酸生合成を阻止すると、生体内でRasの膜局在ができなくなり、Rasの機能が阻害される。ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼの阻害は、一般的なイソプレン生合成阻害剤に比べてより特異的であり且つ副作用が少ない。過去に、CAAX配列を有するアミノ酸末端残基としてシステインを含むテトラペプチドがRasファルネシル化を阻害するとされたことがある〔Schaberら、前出； Reissら、前出； Reissら、PNAS 88:732-736（1991）〕。そのような阻害剤は、阻害し且つRasファルネシルトランスフェラーゼ酵素用の代替基質としても作用するか、又は純粋に競合的な阻害剤であり得る〔国際特許公開W091/16340,Uni versity of Texas〕。本発明の化合物は、Rasファルネシルトランスフェラーゼの有効な阻害剤であるジペプチドベースのアミドである。従って本発明は、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害し、それによって発癌遺伝子蛋白質Rasのファルネシル化を防止するジペプチドベースのアミド化合物を提供することを目的とする。本発明の他の目的は、本発明の化合物を含む化学療法剤組成物を提供すること及び本発明の化合物の製造法を提供することにある。発明の要旨本発明は、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害し、それによって発癌遺伝子蛋白質Rasがファルネシル化するのを防止するジペプチドベースの化合物、本発明の化合物を含む化学療法剤組成物及び本発明の化合物の製造法を含む。本発明の化合物は、下記の式で示される：発明の詳細な説明本発明のジペプチドベースアミド化合物は、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼの阻害及び発癌遺伝子蛋白質Rasのファルネシル化の防止に有用である。本発明の化合物は、式：〔式中、Ｘ及びＹは独立にＨ₂又はＯであり；Ｒ¹は、アルキル基、水素、アシル基、アルキルスルホニル基又はアリールスルホニル基であり、その場合、アルキル基及びアシル基は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝鎖の炭化水素を含むか、あるいは該炭化水素はアリール基で置換されていてもよく；Ｒ²は、天然に産生するアミノ酸の側鎖であるか、あるいは置換若しくは未置換の脂肪族、芳香族、又は複素環式基、例えば、アリル、シクロヘキシル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル若しくは２〜８個の炭素原子を有する分枝鎖若しくは非分枝鎖てあってよい飽和鎖であってよく、その場合、脂肪族置換基は芳香族若しくはヘテロ芳香族環で置換されていてよく；Ｒ³は、芳香族若しくはヘテロ芳香族環、あるいはアルキル基又はアリール若しくはヘテロアリール置換アルカンであり、その場合芳香族環は、置換されていないか又はアルキル、ハロ、アルコキシ、トリフルオロメチル若しくはスルファモイル基であってよい１種以上の基で置換されており且つ多環式であってよい〕によって表される化合物又は医薬上許容可能なその塩である。本発明の好ましい化合物は下記の通りである：Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンフェニルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンベンジルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−３ −メチルブチルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−３ −フェニルプロピルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシル−Ｌ −フェニルアラニノール；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−Ｎ ′−メチルベンジルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４−メトキシベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４ −ジクロロベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４−トリフルオロメチルベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジクロロフェネチル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２−ベンズイミダゾリルメチル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ −イソロイシン−（１−インダニル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジメチルベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，３−ジクロロベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４−スルファモイルベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンアニリド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンー（２，４ −ジメチルフェニル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，３−ジメチルフェニル）アミド；Ｌ−システイニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド；Ｎ−［２（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ］−３ −メチルペンチル］フェネチルアミン；Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−アラニンベンジルアミド；Ｎ−ベンジル−［２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３メルカプトプロピル）アミノ］ブチルアミド；Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−ノルロイシンベンジルアミド、又はＮ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−ノルバリンベンジルアミド。本発明の最も好ましい化合物は下記の通りである：Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−３− クロロフェネチルアミドＮ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ −イソロイシン−２，３−ジクロロベンジルアミドＮ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−ＬイソロイシンアニリドＮ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−２，３−ジメチルフェニルアミド本発明において、開示されているアミノ酸は下記に示されているような慣用の３文字及び１文字の略称により同定される：本発明の化合物の医薬上許容可能な塩には、例えば、非毒性の無機若しくは有機酸から形成されるような本発明の化合物の慣用の非毒性塩が含まれる。例えば、このような慣用の非毒性塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などのような無機酸由来の塩、酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモ酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息番酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸などのような有機酸から調製された塩が挙げられる。本発明の化合物の医薬上許容可能な塩は、慣用の化学的な方法により、塩基性部分を含む本発明の化合物から合成することができる。これらの塩は一般的に、遊離塩基を、適切な溶媒若しくは種々の溶媒の組み合わせ中で所望の塩を形成する化学量論的量若しくは過剰量の無機又は有機酸と反応させて調製する。本発明の化合物は、慣用のペプチド合成技術及び下記のような付加法によりその構成アミノ酸から合成することができる。標準的なペプチド合成法が、例えば下記の論文に開示されている：Schroederら、“The Peptides”、第１巻、Acade mic Press 1965、又は、Bodanszkyら、“Peptide Synthesis”、Interscience P ublishers，1966、又は、McOmie（編）、“Protective Groups in Organic Chem istry”、Plenum Press、1973、又はBaranyら、“The Peptides： Analysis， S ynthesis， Biology”第２巻、第１章、Academic Press、1980、又は、Stewart ら、“Solid Phase Peptide Synthesis”、第２版、Pierce Chemical Company、 1984。これらの論文の教示は本願明細書中に引用文献として組み込まれている。本発明の化合物は、以下の反応図式に従い調製する：（式中、ＸはＯＨ又はエステルである）第１の反応図式において、保護アミノ酸と適切なアミンとの結合はを標準ペプチド結合条件下に行う。得られたアミノ酸アミドを脱保護し、シアノホウ水素化ナトリウム又はトリアセトキシホウ水素化ナトリウムを用いて、保護システイン由来のアルデヒドにより第１級アミンを還元的にアルキル化する。最後に保護基を除去して目的化合物を得る。第２の図式には異なる合成法が記載されている。アミノ酸の還元的アルキル化により保護ジペプチド相当物を得る。アミノ酸エステルの還元的アルキル化及びそれに続く鹸化によっても同様な汎用中間体を得ることができる。この中間体は、標準ペプチド合成条件を用いて多数のアミンと結合可能である。脱保護して活性ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤を得る。該図式に示されている保護基の選択は特有のものではなく、これらの合成に利用される化学反応は一般的にペプチド合成に用いられる他のアミン及び硫黄保護基に応用可能である。本発明の化合物は、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害し、それによって発癌遺伝子蛋白質Rasのファルネシル化を防止する。これらの化合物は、哺乳類、特にヒト用の薬剤として有用である。これらの化合物を癌の治療用に患者に投与してよい。本発明の化合物で治療し得る癌の種類の例には、結腸直腸癌腫、外分泌性脾臓癌腫及び骨髄性白血病が含まれるが、それらには限定されない。標準的な医薬慣行に従って、本発明の化合物を、単独で、又は医薬上許容可能な担体又は希釈剤と組み合わせて、哺乳類、好ましくはヒトに投与してよい。その際、場合により薬剤組成物中にミョウバンのような公知のアジュバントを加えてもよい。該化合物を、経口投与するか、又は非経口投与、例えば、静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸内及び局所的に投与することが可能である。本発明の化学療法剤化合物の経口使用に際しては、選択された化合物を、例えば、錠剤もしくはカプセル剤の形態で、又は、水溶液若しくは水性懸濁液として投与してよい。経口使用のための錠剤の場合には、一般的に用いられる担体としては、通常、ラクトース、コーンスターチ、及びステアリン酸マグネシウムのような潤滑剤が含まれる。カプセル形態での経口投与の場合に有用な希釈剤にはラクトース及び乾燥コーンスターチが含まれる。経口使用のために水性懸濁液を必要とする場合には、有効成分を乳化剤及び懸濁化剤と配合する。所望なら、特定の甘味剤及び／又は着香剤を加えてもよい。筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内に使用する場合には、通常、有効成分の滅菌溶液を調製するが、該溶液のｐＨを適宜に調節し且つ緩衝化する必要がある。静脈内使用の際には、調製物を等張にするために溶質の総濃度を調節しなければならない。さらに本発明は、医薬上許容可能な担体又は希釈剤を含むか又は含まない、治療上有効量の本発明の化合物を投与することを含む、癌の治療に有用な医薬組成物を包含する。本発明の好適な組成物には、本発明の化合物及び医薬上許容可能な担体、例えば、ｐＨ値が例えば7.4の生理的食塩水を含む水溶液が含まれる。この溶液は、局所的凝縮塊注射により患者の筋肉内の血流中に導入することが可能である。本発明の化合物をヒト被験者に投与する場合、一般的に一日当たりの用量は、概して、個々の患者の年令、体重及び感受性、並びに患者の症状の重度により変動する用量に応じ、処方する医師が決定する。一つの応用例においては、適切な量の化合物を癌の治療を受けているヒトの患者に投与する。投与は、一日当たり、哺乳類の体重１kgにつき約0.1mg〜約20mg の範囲、好ましくは、一日当たり、哺乳類の体重１kgにつき0.5mg〜約10mgの範囲の量で行われる。実施例下記の実施例は、本発明を更によく理解する助けとなるように意図されている。用いられている特定の物質、種及び条件は、本発明を更に詳しく例示するものであっても、その正当な範囲を限定するものではない。実施例１Ｎ‐［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド段階Ａ２（Ｒ）−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３− トリフェニルメチルメルカプトプロパナールロイシンアルデヒドの調製についてGoelら〔Organic Syntheses，67，69（198 8）〕により記載されている方法にわずかな修正を加えて標記アルデヒドを合成した。修正は下記の通りである：引用例に用いられているクロロギ酸イソブチルをクロロギ酸メチルに置換する；さらに10％クエン酸を希塩酸溶液に置換する。白色泡状物としてアルデヒドを得る。¹ H NMR（CDCl₃）δ9.64（s，1H），7.42（m，6H），7.28（m，9H），2.45（m，2 H），2.38（m，2H）。段階ＢＮ−［２（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンメチルエステルＬ−イソロイシンメチルエステルヒドロクロリド（1.82g，0.01mol）及び２（Ｒ）−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロパナール（4.48g，0.01mol）をＥｔＯＨ（100mol）に溶解した。３Å分子ふるい（6g）及び固体のシアノホウ水素化ナトリウム（0.31g，0.005mol）を加え、混合物を周囲温度で２４時間撹拌した。反応混合物を濾過、濃縮乾涸し、ＣＨＣｌ₃；ＭｅＯＨ，９９：１を用いるクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂）にかけて、標記化合物1.63g（28％）を得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.4-7.2（m，15H），4.6-4.7（m，1H），3.70（s，3H），2.9 -3.0（m，1H），2.6-2.7（m，1H），2.3-2.45（m，2H），1.5-1.7（m，2H），1. 43（s，9H），1.05-2.0（m，1H），0.8-1.0（m，6H）。質量スペクトル（FAB）5 77（M+1）。段階ＣＮ−［２（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンＮ−［２（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンメチルエステル（1.63g，0.0028mol ）をＭｅＯＨ（50ml）に溶解し、１ＮのＮａＯＨ溶液（11.23ml，0.0112mol）を撹拌しながら周囲温度で添加した。４時間後、固体のＮａＯＨ（2.0g）を加え、さらに１６時間撹拌を継続した。反応混合物を濃縮してＭｅＯＨを除去し、ＥｔＯＡｃ（２×100ml）で抽出した。抽出物を塩水で洗浄し、脱水（Ｎａ₂ＳＯ₄）した。濾過、濃縮乾涸して、標記化合物1.6gを得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.2-7.4（m，15H），5.02（brs，1H），3.6-3.7（m，1H），3 .18（brs，1H），2.7-2.9（m，2H），2.3-2.6（m，2H），1.8-1.9（m，1H），1. 2-1.6（m，2H），1.40（s，9H），0.8-0.95（m，6H）。段階ＤＮ−［２（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド段階Ｃの生成物（0.108g，0.2mmol）、１−（３−ジメチルアミノプロピル） −３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（0.042g，0.22mmol）及び３，４−ジヒドロ−３−ヒドロキシ−４−オキソ−１，２，３−ベンゾトリアジン（ＨＯＯＢＴ）（0.036g，0.22mmol）を４mlの１：１ＥｔＯＡｃ／ＣＨＣｌ₃に溶解し、周囲温度で0.5時間撹拌した。この黄色溶液に、フェネチルアミン（0.028ml，0.22 mmol）及びジイソプロピルエチルアミン（0.038ml，0.22mmol）を加え、さらに48時間撹拌を継続した。溶液を濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃとＨ₂Ｏに分配した。有機層を水、水性飽和ＮａＨＣＯ₃及び塩水で洗浄、脱水（Ｎａ₂ＳＯ₄）した。濾過、濃縮し、次いでクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂，ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：３）にかけて、標記化合物0.09g（69％）を得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.1-7.4（m，20H），4.5-4.55（m，1H），3.56-3.68（m，1H ），3.43-3.55（m，2H），2.7-2.9（m，3H），2.4-2.5（m，1H），2.2-2.4（m， 3H），1.6-1.75（m，1H），1.44（s，9H），1.0-1.1（m，6H）。段階ＥＮ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド段階Ｄの生成物（O.O9g，0.14mmol）をＣＨ₂Ｃｌ₂中25％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）４mlに周囲温度で溶解、トリエチルシラン（0.089ml，0.56mmol）を加え、溶液を３時間撹拌した。反応混合物を濃縮し、ＥｔＯＡｃと水性飽和ＮａＨＣＯ₃溶液に分配した。有機層を塩水で洗浄、脱水（Ｎａ₂ＳＯ₄）した。濾過、濃縮し、ヘキサンですり砕いて、標記化合物0.02 g（44％）（融点69-73℃）を得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.2-7.4（m，5H），7.07（t，1H，J=4Hz），3.5-3.6（m，2H ），3.0-3.1（m，1H），2.75-2.9（m，4H），2.4-2.65（m，3H），1.7-1.8（m， 1H），1.4-1.5（m，1H），1.0-1.2（m，1H），0.8-0.95（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）324（Ｍ＋１）。Ｃ₁₇Ｈ₂₉Ｎ₃ＯＳの元素分析：計算値：Ｃ，63.1 2；Ｈ，9.04；Ｎ，12.99；実測値：Ｃ，62.86；Ｈ，9.42；Ｎ，12.71。実施例１に記載の方法を用いて下記の化合物を調製した：Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌイソロイシンベンジルアミドビストリフルオロアセテト塩（融点：70-75℃）。¹ H NMR（DMSO）δ8.7-8.95（m，1H），7.2-7.4（m，5H），4.27-4.45（m，2H），3.25-3.5（m，2H），2.65-3.1（m，4H），1.68-1.82（m，1H），1.5-1.68（m ，1H），1.05-1.22（m，1H），0.8-0.95（m，6H）。Ｃ₁₆Ｈ₂₇Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ ＣＯ₂Ｈ・0.75Ｈ₂ Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，43.59；Ｈ，5.58；Ｎ，7.63；実測値：Ｃ，43.40；Ｈ，5.45；Ｎ，7.62。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌイソロイシン−３−メチルブチルアミドビストリフロオロアセテー卜塩（融点：53-56℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ3.42-3.75（m，1H），2.8-3.4（m，6H），1.55-1.85（m，3H ），1.44（q，2H，J=6Hz），1.15-1.32（m，1H），0.83-1.08（m，12H）。Ｃ₁₄ Ｈ₃₁Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.5Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，41.06；Ｈ， 6.51；Ｎ，7.98；実測値：Ｃ，41.14；Ｈ，6.27；Ｎ，8.25。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−３− フェニルプロピルアミドビストリフルオロアセテ一卜塩（融点：62-65℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.15-7.35（m，5H），4.8-5.14（m，2H），3.48-3.6（m，1H ），2.95-3.42（m，5H），2.9（t，2H，J=6Hz），2.65-2.75（m，2H），1.65-1. 95（m，4H），1.2-1.38（m，1H），0.9-1.08（m，6H）。Ｃ₁₈Ｈ₃₁Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.5 Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，45.98；Ｈ，5.96；Ｎ，7.31；実測値：Ｃ，45.9 0；Ｈ，5.90；Ｎ，7.48。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌイソロイシル−Ｌ−フェニルアラニノールビストリフルオロアセテー卜塩（融点：55-60℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.15-7.32（m，5H），4.2-4.35（m，1H），3.56（d，2H，J=6 Hz），3.23-3.35（m，1H），3.14（d，1H，J=6Hz），2.95-3.04（dd，1H，J=12 ，6Hz），2.6-2.8（m，4H），2.49-2.6（dd，1H，J=6，15Hz），1.55-1.78（m， 2H），1.1-1.25（m，1H），0.8-1.04（m，6H）。Ｃ₁₈Ｈ₃₁Ｎ₃Ｏ₂Ｓ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・1.7Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，43.16；Ｈ，5.99；Ｎ，6.86；実測値：Ｃ，42.95；Ｈ，5.60；Ｎ，7.16。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−Ｎ′ −メチルベンジルアミドビストリフルオロアセテー卜塩（融点：68-73℃）。Ｃ₁₇Ｈ₂₉Ｎ₃ＯＳ・2.25ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，44.52；Ｈ，5.43 ；Ｎ，7.24；実測値：Ｃ，44.48；Ｈ，5.19；Ｎ，7.26。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.18-7.45（m，5H），4.68(q，2H），3.5-3.78（m，2H），2. 9-3.2（m，6H），2.69-2.70（m，1H），1.6-1.8（m，2H），1.1-1.28（m，1H），0.85-1.18（m，6H）。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４ −メトキシベンジル）アミドビストリフルオロアセテー卜塩。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.24（d，2H，J=9Hz），6.88（d，2H，J=9Hz），4.35（q，2H ），3.77（s，3H），3.32-3.4（m，1H），3.15（d，1H，J=6Hz），2.99（dd，1H ，J=4.5，13.5Hz），2.74-2.86（m，3H），1.6-1.76（m，2H），1.14-1.24（m， 1H），0.88-0.94（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）340（Ｍ＋１）。Ｃ₁₇Ｈ₂ ₉ Ｎ₃Ｏ₂Ｓ・2.1ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，43.98；Ｈ，5.41；Ｎ，7 .26；実測値：Ｃ，43.80；Ｈ，5.35；Ｎ，7.44。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジクロロベンジル）アミドビストリフルオロアセテー卜塩。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.49（d，1H，J=3Hz），7.42（d，1H，J=9Hz），7.32（dd，1 H，J=3，9Hz），4.49（q，2H），3.32-3.38（m，1H），3.14（d，1H，J=6Hz）， 2.98（dd，1H，J=4.5，13.5Hz），2.85（dd，1H，J=6，15Hz），2.78（dd，1H， J=6，15Hz），2.76-2.8（m，1H），1.6-1.74（m，2H），1.14-1.24（m，1H），0 .89-0.95（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）378（Ｍ＋１）。Ｃ₁₆Ｈ₂₅Ｃｌ₂ Ｎ₃ＯＳ・2.2ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，38.94；Ｈ，4.36；Ｎ，6.6 8；実測値：Ｃ，38.63；Ｈ，3.98；Ｎ，6.81。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌイソロイシン−（４− トリフルオロメチルベンジル）アミドビストリフルオロアセテー卜塩。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.64（d，2H，J=7.5Hz），7.51（d，2H，J=7.5Hz），4.5（q ，2H），3.32-3.37（m，1H），3.13（d，1H，J=6Hz），2.98（dd，1H，J=5，13. 5Hz），2.85（dd，1H，J=6，15Hz），2.77（dd，1H，J=6，15Hz），2.75-2.8（m ，1H），1.61-1.76（m，2H），1.16-1.26（m，1H），0.90-0.96（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）378（Ｍ＋１）。Ｃ₁₇Ｈ₂₆Ｆ₃Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，41.65；Ｈ，4.66；Ｎ，6.94；実測値：Ｃ，42.27；Ｈ，4.53；Ｎ， 7.12。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジクロロフェネチル）アミドビストリフルオロアセテー卜塩。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.48（d，1H，J=2Hz），7.3-7.4（m，2H），3.5-3.63（m，2H ），2.7-3.1（m，8H），1.55-1.75（m，2H），1.1−1.25（m，1H），0.9-1.0（m ，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）392（Ｍ＋１）。Ｃ₁₇Ｈ₂₇Ｃｌ₂Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，40.65；Ｈ，4.71；Ｎ，6.77；実測値：Ｃ，40.90；Ｈ，4.74；Ｎ，6.89。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌイソロイシン−（２− ベンズイミダゾリルメチル）アミドビストリフルオロアセテー卜塩。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.75-7.8（m，2H），7.5-7.6（m，2H），4.85（q，2H），3.2 5-3.4（m，1H），3.19（d，1H，J=6Hz），2.97（d d，1H，J=4.5，9Hz），2.7-2.9（m，3H），1.65-1.8（m，1H），1.5-1.6（m，1H ），1.1-1.3（m，1H），0.85-1.0（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）350（Ｍ＋１）。Ｃ₁₇Ｈ₂₇Ｎ₅ＯＳ・３ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，38 .93；Ｈ，4.55；Ｎ，9.87；実測値：Ｃ，38.74；Ｈ，4.33；Ｎ，9.89。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（１ −インダニル）アミド（融点：68-71℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.15-7.35（m，4H），5.4-5.5（m，1H），2.7-3.1（m，8H），2.45-2.6（m，1H），1.85-2.0（m，1H），1.55-1.7（m，2H），1.0-1.3（m，2 H），0.9-1.05（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）336（Ｍ＋１）。Ｃ₁₈Ｈ₂₉ Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，46.89；Ｈ，5.54；Ｎ，7.46 ；実測値：Ｃ，46.64；Ｈ，5.39；Ｎ，7.69。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジメチルベンジル）アミド（融点：68-73℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.15（d，1H,J=7Hz），6.95-7.1（m，2H），4.4（q，2H），3 .4-3.5（m，1H），3.1（dd，1H，J=5，12Hz），2.75-3.0（m，3H），2.35（s，3 H），2.25（s，3H），1.55-1.85（m，2H），1.1-1.3（m，1H），0.85-1.0（m，6 H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）338（Ｍ＋１）。Ｃ₁₈Ｈ₃₁Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂ Ｈ・Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，45.27；Ｈ；6.05；Ｎ，7.20；実測値：Ｃ，45.23；Ｈ，5.74；Ｎ，7.21。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，３−ジクロロベンジル）アミド（融点：70-74℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.5（dd，1H，J=1，7Hz），7.4（dd，1H，J=1，7Hz），7.3（ t，1H，J=7Hz），4.55（s，2H），3.35-3.5（m，1H），3.05（dd，1H，J=6，13H z），2.75-2.95（m，3H），1.55-1.85（m，2H），1.1-1.3（m，1H），0.85-1.05 （m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）378（Ｍ＋１）。Ｃ₁₆Ｈ₂₅Ｎ₃ＯＣl₂Ｓ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.5Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，39.03；Ｈ，4.59；Ｎ，6.8 3；実測値：Ｃ，39.08；Ｈ，4.49；Ｎ，6.76。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４ −スルファモイルベンジル）アミド（融点：65-70℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.85（d，2H，J=8Hz），7.5（d，2H，J=8Hz），4.5（q，2H），3.4-3.5（m，1H），3.1（dd，1H，J=6，13Hz），2.75-3.0（m，3H），1.55-1. 9（m，2H），1.15-1.3（m，1H），0.85-1.05（m，6H）。質量スペクトル（ＦＡＢ）389（Ｍ＋１）。Ｃ₁₆Ｈ₂₈Ｎ₄Ｏ₃Ｓ₂・2.5ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・1.5Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，36.00；Ｈ，4.82；Ｎ，8.00；実測値：Ｃ，35.96；Ｈ，4.51；Ｎ，8.18。実施例２Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ −イソロイシンアニリド段階ＡＮ−［２（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンアニリドＣＨ₂Ｃｌ₂（3ml）中のアニリン（0.015g，0.16mmol）及びジイソプロピルエチルアミン（0.42g，0.32mmol）溶液に、Ｎ−［２（Ｒ）−（ｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン（0.84g，0.15mmol）及びビス（２−オキソ−３−オキサゾリジニル）ホスフィン酸クロリド（ＢＯＰ−Ｃｌ）（0.42g，0.165mmol）をアルゴン下に周囲温度で撹拌しながら加えた。20時間撹拌後、溶液をＥｔＯＡｃで希釈、水性クエン酸溶液、水性飽和ＮａＨＣＯ₃溶液及び塩水で洗浄した。溶液を脱水（ＮａＳＯ₄ ）、濾過、濃縮して、残渣をクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂）（15％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけて精製して、薄黄色のゴム状物として標記化合物0.72g（76 ％）を得た。質量スペクトル（ＦＡＢ）638（Ｍ＋１）。段階ＢＮ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンアニリド実施例１の段階Ｅの方法を用いて、段階Ａの生成物（0.07g，0.11mmol）を脱保護して、標記化合物0.04g（61％）を得た。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.56-7.6（m，2H），7.3-7.6（m，2H），7.1-7.16（m，1H），3.4-3.48（m，1H），3.08（dd，1H，J=5，14Hz），2.79-2.92（m，3H），1.72 -1.86（m，2H），1.24-1.31 （m，1H），1.03（d，3H，J=7Hz），0.96（t，3H ，J=7Hz）。質量スペクトル（ＦＡＢ）296（Ｍ＋１）。Ｃ₁₅Ｈ₂₅Ｎ₃ＯＳ・2.6 ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，40.99；Ｈ，4.70；Ｎ，7.10；実測値：Ｃ，40.65；Ｈ，4.51；Ｎ，7.07。実施例２に記載の方法を用いて下記の化合物を調製した：Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンー（２，４−ジメチルフェニル）アミド（融点：74-76℃、焼結：63℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.0-7.2（m，3H），3.35-3.45（m，1H），3.2 -3.3（m，1H），3.10（dd，1H，J=6，12Hz），2.8-2.95（m，2H），2.30（s，3H ），2.25（，3H），1.7-1.9（m，2H），1.25-1.4（m，2H），1.07（d，3H，J=7H z），1.00（t，3H，J=7Hz）。質量スペクトル（ＦＡＢ）645（Ｍ＋１）。Ｃ₃₄Ｈ₅₆ Ｎ₆Ｏ₂Ｓ₂・４ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・２Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，44.36；Ｈ，5 .67；Ｎ，7.39；実測値：Ｃ，44.32；Ｈ，5.56；Ｎ，7.34。Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，３−ジメチルフェニル）アミド（融点：89-93℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.05-7.15（m，3H），3.15-3.4（m，2H），3.1（dd，1H，J=5 ，13Hz），2.75-2.95（m，3H），2.3（s，3H），2.15（s，3H），1.7-1.9（m，2 H），1.25-1.4（m，1H），1.1（d，3H，J=7Hz），0.95（t，3H，J=7Hz）。質量スペクトル（ＦＡＢ）324（Ｍ＋１）。Ｃ₁₇Ｈ₂₉Ｎ₃ＯＳ・ 2.5ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，42.17；Ｈ，5.39；Ｎ，6.71；実測値：Ｃ，42.2 2；Ｈ，5.18；Ｎ，6.68。実施例３Ｌ−システイニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド段階ＡＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミドＤＭＦ（20ml）中のｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−イソロイシン（2.31g，0.0 1mol）に、ＥＤＣ（2.11g，0.011mo1）、ＨＯＢＴ（1.49g，0.011mol）及びフェネチルアミン（1.38ml，0.011mol）を周囲温度で撹拌しながら加えた。トリエチルアミン（1.53ml，0.011mol）を加えて、混合物のｐＨを6.5に調整した。４時間後、ＤＭＦを減圧下に除去して、残渣をＥｔＯＡｃ（50ml）と水（50ml）に分配した。水性層をＥｔＯＡｃ（２×50ml）で抽出した。合わせた有機層を10％クエン酸溶液、水性飽和ＮａＨＣＯ₃溶液及び塩水で洗浄した。溶液を脱水（Ｎａ₂ ＳＯ₄）、濾過、濃縮して、標記化合物3.12g（93％）を得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.2-7.4（m，5H），6.02（brs，1H），5.03（brs，1H），3.8 7（dd，1H，J=6，9Hz），3.45-3.7（m，2H）2.8，4（t，2H，J=7Hz），1.8-1.9 （m，1H），1.45（s，9H），0.9-1.1 （m，2H），0.87-0.9（m，6H）。段階ＢＬ−イソロイシンフェネチルアミドヒドロクロリドドライアイス−アセトン浴中−20℃で、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド（3.lg，9.3mmol）のＥｔＯＡｃ（200ml）溶液中に塩化水素ガスを、ＴＬＣ（ＥｔＯＡｃ：へキサン、１：３）により出発物質が完全に消費されたことが表示されるまで発泡させた。溶液を濃縮乾涸して、標記化合物2.5g（100％）を得、さらに精製することなく用いた。段階ＣＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｓ−トリフェニルメチル）−Ｌ−システイニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミドＥＤＣ（0.011g，0.55mmol）、ＨＯＢＴ（0.074g，0.55mmol）及びＬ−イソロイシンフェネチルアミドヒドロクロリド（0.135g，0.5mmol）と共に、Ｎ−（ｔ −ブトキシカルボニル）−Ｓ−トリフェニルメチル）−Ｌ−システイン（0.26g，0.55mmol）をＤＭＦ（3ml）に周囲温度で溶解した。トリエチルアミン（0.15ml，1.05mmol）を用いて溶液のｐＨを6.5に調整した。16時間撹拌後、溶媒を蒸発させ、残渣をＥｔＯＡｃ（20ml）とＨ₂Ｏ（20ml）に分配した。水性層をＥｔＯＡｃ（2×20ml）で抽出した。合わせた有機抽出物を10％クエン酸溶液、水性飽和ＮａＨＣＯ₃溶液及び塩水で洗浄、脱水（Ｎａ₂ＳＯ₄）した。濾過、濃縮し、クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂，ＥｔＯＡｃ：ヘキサン、１：２）にかけて、標記化合物0.285g（87％）を得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.1-7.5（m，20H），6.3-6.4（m，2H），4.7-4.76（m，1H），4.1-4.25（m，1H），3.65-3.75（m，1H），3.35-3.5（m，2H），2.6-2.85（m ，5H），1.42（s，9H），0.9-1.0（m，1H），0.84-0.9（m，6H）。段階ＤＬ−システイニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド実施例１の段階Ｅの方法を用いて、段階Ｃの生成物（0.285g，0.43mmol）を脱保護して、トリフルオロアセテート塩として標記化合物0.145g（75％）を得た（融点：156-159℃）。¹ H NMR（CD₃OD）δ8.17-8.26（m，1H），7.15-7.35（m，5H），4.19（d，1H，J= 7Hz），4.08（t，1H，J=6Hz），3.35-3.55（m，2H），3.00（d，2H，J=6Hz），2 .82（t，2H，J=7Hz），1.7-1.85（m，1H），1.4-1.6（m，1H），1.1-1.25（m，1 H），0.9-0.95（m，6H）。Ｃ₁₇Ｈ₂₇Ｎ₃Ｏ₂Ｓ・ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，50.54；Ｈ，6.25；Ｎ，9.31；実測値：Ｃ，50.75；Ｈ，6.12；Ｎ，8.81。実施例４Ｎ−［２（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ］−３− メチルペンチル］フェネチルアミン段階ＡＮ−［２（Ｓ）−（２（Ｒ）−ｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−トリフェニルメチルメルカプトプロピルアミノ）−３−メチルペンチル］フェネチルアミンＴＨＦ（1Oml）中のＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）− Ｓ−トリフェニルメチル）−Ｌ−システイニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド（0.33g， 0.5mmol）をＴＨＦ（10ml）中の水素化リチウムアルミニウム（ 0.044g，1.2mmol）懸濁液に、アルゴン下に周囲温度で滴下し、混合物を18時間加熱還流した。冷却後、10％酒石酸カリウムナトリウム溶液（10ml）を用いて反応を停止させ、４時間撹拌した。混合物を濾過、濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃとＨ₂ Ｏに分配した。有機層を分離し、水性飽和ＮａＨＣＯ₃溶液及び塩水で洗浄した。溶液を脱水（Ｎａ₂ＳＯ₄）、濾過、濃縮し、クロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、ＣＨ₂Ｃｌ₂／ＭｅＯＨ、９：１）にかけて、標記化合物0.1g（31％）を得た。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.2-7.45（m，20H），3.5-3.6（m，1H），3.15-3.3（m，2H），3.0-3.1（m，2H），2.5-2.7（m，3H），2.3-2.4（m，2H），2.15-2.25（m，1H ），1.6-1.7（m，1H），1.48（s，9H），1.2-1.4（m，2H），0.9-1.0（m，1H），0.97（t，3H，J=7Hz），0.83（d，3H，J=7Hz）。質量スペクトル（ＦＡＢ）65 2（Ｍ＋１）。段階ＢＮ−［２（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピルアミノ］−３−メチルペンチル］フェネチルアミン実施例１の段階Ｅの方法を用いて、段階Ａの生成物（0.1g，0.16mmol）を脱保護した。生成物をヘキサンと0.1％ＴＦＡを含むＨ₂Ｏに分配して精製した。水性層を分離、凍結乾燥して、二硫化物として標記化合物0.062g（66％）を得た。¹ H NMR（CD₃OD）δ7.2-7.4（m，10H），3.6-3.7（m，2H），2.9-3.3（m，8H）， 2.75-2.9（m，6H），1.75-1.9（m，2H），1.2-1.5（m，4H），1.00（t，6H，J=7 Hz），0.89（d，6H，J=7Hz）。質量スペクトル（ＦＡＢ）617（Ｍ＋１）。Ｃ₃₄ Ｈ₆₀Ｎ₆Ｓ₂・５ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈの元素分析：計算値：Ｃ，44.52；Ｈ，5.52；Ｎ，7 .08；実測値：Ｃ，44.16；Ｈ，5.64；Ｎ，7.32。実施例５Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−アラニンベンジルアミドトリフルオロアセテート塩の調製段階ＡＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニンベンジルアミドＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−アラニン（377mg，2.0mmol）、ＨＯＢＴ（ 283mg，2.1mmol）及びＥＤＣヒドロクロリド（420mg， 2.2mmol）をＤＭＦ5ml に溶解した。先ずベンジルアミン（230μｌ， 2.1mmol）、次いでトリエチルアミン（280μｌ，1.9mmol）を添加した。混合物を一晩撹拌し、溶媒を蒸発させた。残渣を酢酸エチルと10％クエン酸に分配し、有機層を順次10％重炭酸ナトリウム及び塩水で洗浄した。溶液を脱水、蒸発させて、ろう状固体498mgを得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.3（m，5H），6.54（brs，1H），5.00（brs，1H），4.44（m ，2H），4.18（m，1H），1.41（s，9H），1.38（d，3H，J=7Hz）。段階ＢＬ−アラニンベンジルアミドヒドロクロリドの調製段階Ａの生成物を酢酸エチルに溶解し、-50℃に冷却、溶液をＨＣｌガスで飽和させた。ＴＬＣ分析により出発物質が完全に消費されたことが示されるまで、混合物を撹拌した。溶媒を室温で蒸発させて、固体ヒドロクロリドを得た。段階ＣＮ−（３−トリフェニルメチルメルカプト−２（Ｒ）−ｔ−ブトキシカルボニルアミノプロピル）−Ｌ−アラニンベンジルアミド段階Ｂの生成物（183mg，0.85mmol）及び３−トリフェニルメチルメルカプト −２−ｔ−ブトキシカルボニルアミノプロパナール（229mg，0.57mmol）をメタノール3mlに溶解した。シアノホウ水素化ナトリウム（95％，18.8mg，0.28mmol ）を加え、混合物を一晩撹拌した。溶媒を蒸発させ、混合物を水と酢酸エチルに分配した。有機層を重炭酸ナトリウムと塩水で洗浄した。溶液を脱水、蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（塩化メチレン中２％メタノール）にかけた。重さ106mgの泡状固体を得た。¹ H NMR（CDCl₃）δ7.3（m，20H），4.8（brs，1H），4.4（m，2H），3.65（brs ，1H），2.8（brs，2H），2.4（m，2H），1.5（m，12H）。段階ＤＮ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−アラニンベンジルアミドトリフルオロアセテート塩段階Ｃの生成物（103mg,0.18mmo1）を塩化メチレン中25％ＴＦＡ6m1に溶解し、トリエチルシラン（73μl,0.45mmol）を加えた。１時間後、溶媒を蒸発させ、残渣をヘキサンですり砕いた。ヘキサン不溶生成物を逆相ＨＰＬＣ（Waters C-1 8, 93:7:0.1 水／アセトニトリル／ＴＦＡ）により精製した。重さ43mgの凍結乾燥生成物（融点：61-68℃）を得た。¹ H NMR(CD₃OD)δ7.3(m,5H),4.42(s,2H),3.78(q,J=3.6Hz,1H),3.55(m,1H),3.22(d d,J=13,6Hz,1H),3.12(dd,J=13,6Hz,1H),2.90(m,2H),1.48(d,J=7Hz,3H)。C₁₃Ｈ₂₁ Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.57Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，40.38；Ｈ，4.8 1；Ｎ，8.31；実測値：Ｃ，40.34；Ｈ，4.77；Ｎ，8.43。実施例５に記載の方法を用いて、下記の化合物を調製した：Ｎ−ベンジル−［２（Ｓ）−２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）アミノ］ブチルアミドトリフルオロアセテート塩（融点：62-66℃）。Ｃ₁₄Ｈ₂₃Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.5Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，41.70；Ｈ，5.05；Ｎ，8.10；実測値：Ｃ，41.68；Ｈ，5.03；Ｎ，8.15。Ｎ−（３−メルカプト−２（Ｒ）−アミノプロピル）−Ｌ−ノルロイシンベンジルアミドトリフルオロアセテート塩（融点：60-67℃）。Ｃ₁₆Ｈ₂₇Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.84Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，43.47 ；Ｈ，5.60；Ｎ，7.60；実測値：Ｃ，43.46；Ｈ，5.50；Ｎ，7.54。Ｎ−（３−メルカプト−２（Ｒ）−アミノプロピル）−Ｌノルバリンベンジルアミドトリフルオロアセテート塩（融点：60-67℃）。Ｃ₁₆Ｈ₂₇Ｎ₃ＯＳ・２ＣＦ₃ＣＯ₂Ｈ・0.84Ｈ₂Ｏの元素分析：計算値：Ｃ，42.37 ；Ｈ，5.37；Ｎ，7.80；実測値：Ｃ， 42.42；Ｈ，5.21；Ｎ，7.45。実施例６ Rasファルネシルトランスフェラーゼの生体外阻害ウシ脳からのファルネシル蛋白質トランスフェラーゼ（Ftase）をＤＥＡＥ− セファセル（DEAE-Sephacel）（Pharmacia，0→0.8M NaCl傾斜溶出）、Ｎ−オクチルアガロース（N-octyl agarose）（Sigma，0→0.6M NaCl傾斜溶出）及びモノＱＨＰＬＣカラム（Pharmacia、0→0.3M NaCl傾斜溶出）のクロマトグラフィーにかけた。3.5μMのRas-ＣＶＬＳ、0.25μMの［³Ｈ］ＦＰＰ、及び被験化合物をこの部分精製された酵素調製物と共にインキュベートした。下記に示すFtaseデータは、試験化合物の生体外ＲＡＳファルネシル化阻害能力の測定である。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年７月２７日【補正内容】請求の範囲１．式：〔式中、Ｘ及びＹは独立にＨ₂又はＯであり；Ｒ¹ルキル基、水素、アシル基、アルキルスルホニル基又はアリールスルホニル基であり、その場合、アルキル基及びアシル基は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝鎖の炭化水素を含むか、あるいは該炭化水素はアリール基で置換されていてもよく；Ｒ²は、天然に産生するアミノ酸の側鎖であるか、あるいは置換若しくは未置換の脂肪族、芳香族、又は複素環式環、例えば、アリル、シクロヘキシル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル若しくは２〜８個の炭素原子を有する分枝鎖若しくは非分枝鎖であってよい飽和鎖であってよく、その場合、脂肪族置換基は芳香族若しくはヘテロ芳香族環で置換されてよく；Ｒ³は、芳香族若しくはヘテロ芳香族環、あるいはアルキル基又はアリール若しくはヘテロアリール置換アルカンであり、その場合、芳香族環は、置換されていないか、又はアルキル、ハロ、アルコキシ、トリフルオロメチル若しくはスルファモイル基であってよい１種以上の基で置換されてよく、且つ多環式であってよい〕を有する、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害する化合物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/165 ＡＥＤ 31/415 9454−4ＣＣ０７Ｃ 323/25 7419−4Ｈ 323/60 7419−4ＨＣ０７Ｄ 235/24 7019−4Ｃ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ (72)発明者デイソルムズ，エス・ジエーンアメリカ合衆国、ペンシルバニア・19403、ノーリスタウン、ポート・インデイアン・ロード・735 (72)発明者グラハム，サミユエル・エルアメリカ合衆国、ペンシルバニア・19473、シユウエンクスビル、ウイドルンド・ドライブ・325 (72)発明者スミス，ロバート・エルアメリカ合衆国、ペンシルバニア・19446、ランズデール、ピツクウイツク・レーン・ 1355

Claims

【特許請求の範囲】１．式：〔式中、Ｘ及びＹは独立にＨ₂又はＯであり；Ｒ¹は、アルキル基、水素、アシル基、アルキルスルホニル基又はアリールスルホニル基であり、その場合、アルキル基及びアシル基は１〜６個の炭素原子を有する直鎖若しくは分枝鎖の炭化水素を含むか、あるいは該炭化水素はアリール基で置換されていてもよく；Ｒ²は、天然に産生するアミノ酸の側鎖であるか、あるいは置換若しくは未置換の脂肪族、芳香族、又は複素環式環、例えば、アリル、シクロヘキシル、フェニル、ピリジル、イミダゾリル若しくは２〜８個の炭素原子を有する分枝鎖若しくは非分枝鎖であってよい飽和鎖であってよく、その場合、脂肪族置換基は芳香族若しくはヘテロ芳香族環で置換されてよく；Ｒ³は、芳香族若しくはヘテロ芳香族環、あるいはアルキル基又はアリール若しくはヘテロアリール置換アルカンであり、その場合、芳香族環は、置換されていないか、又はアルキル、ハロ、アルコキシ、トリフルオロメチル若しくはスルファモイル基であってよい１種以上の基で置換されてよく、且つ多環式であってよい〕を有する、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害する化合物。２．Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンベンジルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−３ −メチルブチルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−３ −フェニルプロピルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシル−Ｌ −フェニルアラニノール；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ −イソロイシン−Ｎ′−メチルベンジルアミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４−メトキシベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジクロロベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４−トリフルオロメチルベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジクロロフェネチル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２−ベンズイミダゾリルメチル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（１−インダニル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジメチルベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，３−ジクロロベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（４−スルファモイルベンジル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンアニリド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，４−ジメチルフェニル）アミド；Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン−（２，３−ジメチルフェニル）アミド；Ｌ−システイニル−Ｌ−イソロイシンフェネチルアミド；Ｎ−［２（Ｓ）−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプ卜プロピルアミノ］−３ −メチルフェニル］−フェネチルアミン；Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−アラニンベンジルアミド；Ｎ−ベンジル−［２（Ｓ）−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）アミノ］ブチルアミド；Ｎ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）−Ｌ−ノルロイシンベンジルアミド、又はＮ−（２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル）Ｌ−ノルバリンベンジルアミドであるファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害する請求項１に記載の化合物。３．Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン− ３−クロロフェネチルアミドである請求項１に記載の化合物。４．Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン− ２，３−ジクロロベンジルアミドである請求項１に記載の化合物。５．Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシンアニリドである請求項１に記載の化合物。６．Ｎ−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−Ｌ−イソロイシン− ２，３−ジメチルフェニルアミドである請求項１に記載の化合物。７．医薬担体及び該担体中に分散された治療上有効量の請求項１の化合物を含む医薬組成物。８．医薬担体及び該担体中に分散された治療上有効量の請求項２の化合物を含む医薬組成物。９．医薬担体及び該担体中に分散された治療上有効量の請求項３の化合物を含む医薬組成物。１０．医薬担体及び該担体中に分散された治療上有効量の請求項４の化合物を含む医薬組成物。１１．医薬担体及び該担体中に分散された治療上有効量の請求項５の化合物を含む医薬組成物。１２．医薬担体及び該担体中に分散された治療上有効量の請求項６の化合物を含む医薬組成物。１３．治療上有効量の請求項１、２、３、４、５又は６の化合物と医薬的に許容可能な担体とを含む、ファルネシル蛋白質トランスフェラーゼを阻害するための医薬組成物。１４．治療上有効量の請求項１、２、３、４、５又は６の化合物と医薬的に許容可能な担体とを含む、癌治療のための医薬組成物。