JPH08504426A - 新規の二環式ピリミジン化合物、それらの製造方法、およびそれらを含有する医薬組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 薬として使用するための、式（Ｉ）を有する新規の二環式ピリミジン化合物。

Description

【発明の詳細な説明】 新規の二環式ピリミジン化合物、それらの製造方法、およびそれらを含有する 医薬組成物技術分野 本発明は、二環式ピリミジン化合物、それらの製造方法、およびそれらを含有 する医薬組成物に関する。従来の技術 医薬分野における従来の技術は、ヨーロッパ特許出願発行番号０４９５９８２ および０５１４５４０により特に例を挙げて説明され、それらはそれぞれの次の 式： および の化合物に関係があるが、これらの式は、ピリミジン核の置換置−Ｙ′−Ｚ′お よびＹ″−Ｚ″の意味、およびそれらの薬学的活性において本発明の化合物と本 質的に相違する。従来の技術の前記の生成物は、呼吸障害と連合した血中酸素減 少に対して活性的であるが、一方本発明の化合物は、抗癌剤に対する腫瘍細胞の 耐性を一部または完全に反対にする。発明の陳述 本発明は、式Ｉ： 〔式中、 −ＴとＵは、同一または異なり、おのおのピリミジン基と、プリン、ピラゾロ〔 ３，４−ｄ〕ピリミジン、ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジンおよび１，２，３− トリアゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジンから選ばれるヘテロ環を形成するような− CH−基または窒素原子を表わし； −ＲとＲ′は、同一または異なり、おのおの直鎖または分技鎖の、炭素数１〜５ のアルキル基または炭素数２〜５のアルケニル基を表わし； −Ａは、次の式： （式中、 −Ｂは、次の式： （式中、Ｒ″は、水素原子あるいは直鎖または分枝鎖の炭素数１〜５のアル キル基であり、そして −ｔは、１〜３の整数である） の基を表わす） のヘテロ単環式基を表わし； −Ｐは、０または１であり； −ＸとＹは、同一または異なり、おのおの水素原子、ハロゲン原子、あるいは直 鎖または分枝鎖の炭素数１〜５のアルキルまたはアルコキシ基を表わし； −ｍとｎは、同一または異なり、おのおの１〜３の整数を表わし； −Ｒ₁とＲ₂は、同一または異なり、おのおの水素原子あるいは直鎖または分枝鎖 のアルキル基を表わし、あるいはともに単結合、酸素または硫黄原子、基−（CH₂ ）ｒ−（式中、ｒは１〜３の整数を表わす）、基−CH＝CH−、−Ｏ−CH₂−、− Ｓ−CH₂−、−SO₂−CH₂−、−CO−CH₂−、 その末端CH₂は隣り合ったベンゼンの最近接炭素に結合し、その結果全体： が次の式： のヘテロ環式基を形成する基を表わし；そして −Ｒ₃は、水素原子またはフェニル基を表わす〕の二環式ピリミジン化合物、並 びにキラル化合物およびそれらの鏡像異性体に特に関するものである。 本発明はまた、式ＩＩ： （式中、Ｔ、ＵおよびＲ′は、上記に定義されたとおりである）の塩素化化合物 が、どちらも６−位に結合することが望まれる、次の式： ＲＮＨ₂ （III） または （これらの式中、Ｒ、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｎ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、ＰおよびＡは上記に定 義されたとおりである）のアミンと縮合させられ、次いでそのようにして得られ た、関係した場合によって決まる、次の式： または の生成物が、２−位に結合することが望まれる式IIIまたはIVの他のアミンと縮 合させられることを特徴とする式Ｉの化合物の合成方法に関する。アミンと塩素 化化合物IIの反応性の次数は既知である〔Heterocyclic compounds Part II，Ed ．D．J．Brown，Willey−Interscience（１９７１），Chapter V，p．１６０参 照）。 これらの逐次縮合は、次のように特に好都合に行なわれる： ６−位に結合することが望まれる化合物IIとアミンとの反応は、反応の進行の 間に生成された水素酸に対する受容体の存在下に、約６０℃の温度で、例えば炭 素数が２〜５のアルコール、ジメチルホルムアミドまたはジメチルアセトアミド のような、極性溶媒中で行なわれる。その受容体は、たとえば、トリエチルアミ ンまたは反応に使用された過剰のアミンであってもよい。 このように得られた縮合生成物は、次いで前述の縮合に使用されたものと同じ 型の極性溶媒中で他のアミン（２−位に結合される）と縮合させられる。その縮 合は、反応の進行の間に生成された水素酸の受容体の存在下に、１３０−１５０ ℃の温度にてオートクレーブ中で行なわれる。受容体は、たとえば、トリエチル アミンまたは反応に使用された過剰のアミンであってもよい。 式IIの出発物質は、既知の二塩素化化合物、 たとえば： ２，４−ジクロピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン（ＲＯＢＩＮＳ Ｒ．Ｋ．et al.，ＪＡＣＳ（１９８４）１０６，６３７９参照）； ５，７−ジクロロトリアゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジン（ＢＩＴＴＥＲＬＩＰ ．，ＥＲＬＥＮＭＥＹＥＲ Ｈ．，Helv．Chem．Acta（１９５１）３４，８３５ 参照）、および ４，６−ジクロピラゾロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン（ＲＯＢＩＮＳ Ｒ．Ｋ． ，ＪＡＣＳ（１９５７）７９，６４０７参照） から合成される。 次の式： に対応するこれらの二塩素化化合物は、次いでM．IWAKAWA et al.，Can．J．Che m．（１９７８）５６，３２６およびTOYOTA A．et al.，Chem．Pharm．Bull．（ １９９２），４０，１０３９−から類推して、Mitsunobuの方法−Synthesis（１ ９９１）、１に従って、次の式： Ｒ′−ＯＨ （式中、Ｒ′は上文に定義したとおりである）のアルコールと反応させて式IIの 出発物質を得る。 ある特定の場合には、置換異性体が得られるかもしれないが、それはクロマト グラフィにより分離することができる。 式Ｉの化合物は、酸を使用して付加塩に転換させることができるが、その塩は 、本発明の一部を形成するような塩である。これらの塩の生成に使用できる酸と して、例えば、無機系の塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸およびリン酸、および有 機系の酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、シュウ酸、安息香 酸、メタンスルホン酸およびイセチオン酸を挙げることができる。 式Ｉの化合物は、塩基または塩の再結晶、クロマトグラフィ（特に、酢酸エチ ルまたは系CH₂Cl₂／メタノールまたはCH₂Cl₂／アセトンを使用して溶離される３ ５〜７０μのシリカ上のフラッシュクロマトグラフィ）のような物理的方法、ま たは酸を使用した付加塩の生成およびアルカリ性薬品によるこれらの塩の分解の ような化学的方法により精製できる。 式Ｉの化合物およびそれらの生理的に許容しうる付加塩は、価値のある薬学的 および治療力のある性質を有し、特に抗癌剤に対する腫瘍細胞の耐性を部分的に または完全に反対にし、抗癌剤に対する腫瘍細胞の耐性を減少または抑制する目 的をもって癌の治療に補助薬として使用することを可能にする。 本発明はまた、適当な製薬的賦形剤と混合してまたは共同して、活性成分とし て式Ｉの化合物またはそれらの生理的に許容しうる塩を含むことを特徴とする医 薬組成物に関する。 その結果得られた医薬組成物は、一般に投薬形状にて与えられ、０．１〜１０ ００mgの活性成分を含む。それらはたとえば、錠剤、糖衣錠、ゼラチンカプセル 、座薬あるいは注射可能なまたは飲用可能な溶液の形であり得て、経口、直腸ま たは非経目的経路により投与することができる。 投与量は、特に患者の年令および体重、投与の経路、不調および連合した治療 の性質に従って変化し、投与当り０．１〜１０００mgの活性成分の範囲に及ぶ。 次の実施例は本発明を説明する。融点は、毛細管（cap）またはコフラー（kof ler）熱板（Ｋ）を使用して測定した。 実施例１ ９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ −ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝ プリン ０．７５mlのアリルアミンをエタノール１５ml中の１．１５ｇの２，６−ジク ロロ−９−アリルプリンの溶液に添加し、混合物を室温で１時間撹拌し、次いで ５０℃にて３０分間加熱した。溶媒の蒸発後、混合物をCH₂Cl₂−H₂Oに溶解し、 デカントし、溶媒を蒸発させた。残留物をエタノールによって再結晶させた。 １１０〜１１２℃で溶融する、２−クロロ−６−アリルアミノ−９−アリルプ リン１ｇを得た。その化合物０．８５ｇをブタノール２０mlに溶解し、１．０４ ｇの４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン −５−イル）メチルアミノ〕ピペリジン（油）、０．５ｇのK₂CO₃および０．１ ｇのヨウ化カリウムを得られた溶液に添加し、混合物を還流にて１０時間加熱し た。 次いで反応混合物を濃縮して残留物をCH₂Cl₂−H₂Oに溶解した。 混合物をデカントし、次いで有機相を蒸発させ、残留物を溶離剤として酢酸エ チルを使用してクロマトグラフィに付した。 ０．６ｇの９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒ ドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピ ペリジノ｝プリンを、１４２〜１４４℃で溶融する（cap）結晶の形で単離した 。 出発物質として使用した９−アリル−２，６−ジクロロプリンを、Mitsunobu の方法によってテトラヒドロフラン中でアリルアルコールと２，６−ジクロロプ リンとを反応させて合成した。 出発物質として使用したアミンは、７８〜８１℃で溶融する対応するピペリジ ンの脱ベンジル化により調製した。なお、ピペリジン自身は、１−ベンジルピペ リドンと２７５〜２８０℃で溶融する（cap）（１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ− ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプタン−５−イル）メチルアミン塩酸塩の混合物の 、メタノール中での、NaBH₃CNによる還元性アルキル化により合成した。 実施例２ ９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ −ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝ プリン ４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン− ５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ〕ピペリジン３ｇを、エタノール２０mlの １．１５ｇの９−アリル２，６−ジクロロプリンの溶液に添加し、混合物を室温 で３時間、次いで５０℃で３０分間撹拌した。 次いで混合物を実施例１に記載したように処理した。 得られた残留物をエーテルによって再結晶させた。 １４６〜１４８℃溶融する（cap）白色の結晶１．８ｇを得た。 実施例１におけるように実施して、ブタノール２０mlに溶解し、アリルアミン ０．６mlの存在下に１５０℃まで加熱して得られた１．８ｇの２−クロロプリン から出発して、０．７ｇの９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（１０ ，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチ ルアミノ〕ピペリジノ｝プリンを、１９１−１９４℃で溶融する（cap）、エタ ノールによって再結晶させられた、二フマル酸塩の樹脂状生成物の形で得た。 実施例３〜２８ 次の化合物を、上記の実施例に記述した方法を適用して合成した。 ３）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔２，２−ビス（４−フルオロ フェニル）エチルアミノ〕ピペリジハプリン、融点（cap）：１４３〜１４５℃ 。 ４）９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔２，２−ビス（４−フルオロ フェニル）エチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応する二マレイン酸塩の融点 （cap）：１５１〜１５２℃。 ５）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（６，１１−ジヒドロジベン ゾ〔ｂ，ｅ〕オキセピン−１１−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対 応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：２４０℃。 ６）９−アリル−６−アリルアミノ−３−｛４−〔（５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕 シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応するフマ ル酸塩の融点（Ｋ）：２５０℃ ７）６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒトロ−５Ｈ−ジベンゾ 〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝−９−プロ ピルプリン、対応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：２３７℃。 ８）９−アリル−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ， ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プロピルアミノプ リン、対応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：２１３℃。 ９）１−アリル−４−アリルアミノ−６−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５ Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ ｝ピラゾロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、対応するフマル酸塩の融点（cap）：分 解を伴なって＞２３０℃。 10）７−アリル−４−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５ Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ ｝ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、対応するフマル酸塩の融点（cap）：１６ ０〜１６３℃。 11）３−アリル−７−アリルアミノ−５−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５ Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ ｝１，２，３−トリアゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジン、対応するフマル酸塩の融 点（cap）：１５９〜１６２℃。 12）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（２，２−ジフェニルエチル ）アミノ〕ピペリジノ｝プリン、融点（Ｋ）：１５０℃。 13）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（３−クロロ−６−メチル− ５，５−ジオキソ−６，１１−ジヒドロジベンゾ〔ｃ，ｆ〕〔１，２〕チアゼ ピン−１１−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応するフマル酸塩の 融点（Ｋ）：１７４℃。 14）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（２−メトキシ−１０，１１ −ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミ ノ〕ピペリジノ｝プリン、対応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：２０５℃。 15）（±）−（Ｒ）−または−（Ｓ）−９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛ ４−〔（３−クロロ−６−メチル−５，５−ジオキソ−６，１１−ジヒドロジベ ンゾ〔ｃ，ｆ〕〔１，２〕チアゼピン−１１−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリ ン、対応する二塩酸塩の融点（Ｋ）：１７４℃。 16）（−）−（Ｒ）−または−（Ｓ）−９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛ ４−〔（３−クロロ−６−メチル−５，５−ジオキソ−６，１１−ジヒドロジベ ンゾ〔ｃ，ｆ〕〔１，２〕チアゼピン−１１−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリ ン、対応する二塩酸塩の融点（Ｋ）：２１０℃。 17）９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（３−クロロ−６−メチル− ５，５−ジオキソ−６，１１−ジヒドロジベンゾ〔ｃ，ｆ〕〔１，２〕チアゼピ ン−１１−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応する二塩酸塩の融点（Ｋ） ：２１０℃。 18）９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（６，１１−ジヒドロジベン ゾ〔ｂ，ｅ〕オキセピン−１１−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対 応する二フマル酸塩の融点（Ｋ）：１８６℃。 19）９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（２−メトキシ−１０，１１ −ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテンーイル）メチルアミノ〕 ピペリジノ｝プリン、対応する二フマル酸塩の融点（Ｋ）：１８８℃。 20）９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕 シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応する二フ マル酸塩の融点（Ｋ）：２００℃。 21）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１１−メチル−１０，１０ −ジオキソ−５，１１−ジヒドロ−１０−チア−１１−アザジベンゾ〔ａ，ｄ〕 シクロヘプテン−５−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリン、融点（Ｋ）：１ ８２℃。 22）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１０−ジオキソ−１ １−プロピル−５，１１−ジヒドロ−１０−チア−１１−アザジベンゾ〔ａ，ｄ 〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、融点（Ｋ） ：１６５℃。 23）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（２，３，４−トリメトキシ −１０，１１−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル ）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：１７ ０℃。 24）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（６，１１−ジヒドロジベン ゾ〔ｂ，ｅ〕オキセピン−１１−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリン、対応する フマル酸塩の融点（Ｋ）：２３３℃。 25）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（５，１１−ジヒドロ−６− オキソジベンゾ〔ｂ，ｅ〕アゼピン−１１−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝ プリン、対応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：２４０℃。 26）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５ Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリ ン、融点（Ｋ）：１１４℃。 27）９−アリル−２−アリルアミノ−６−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ−５ Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）アミノ〕ピペリジノ｝プリ ン、対応するフマル酸塩の融点（Ｋ）：１７０℃。 28）９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（２，２，２−トリフェニル エチル）アミノ〕ピペリジノ｝プリン、融点（Ｋ）：１７５℃。 実施例２９：薬理学的研究 抗癌剤に対する耐性は、抗腫瘍薬の有効性に対する主要な障害である。いろい ろな型の耐性に関して、“マルチドラッグ耐性”（ＭＤＲ）は、それが固型腫瘍 （たとえば、アンスラサンクリン、ビンカマルカロイド、エピポドヒロトキシン ）に対して活性である天然起源の化合物により引き起こされ、そしてある特定の 癌（たとえば、結腸）において頻繁に起こるから、特に関心を持たれている。 腫瘍細胞がこれらの薬の１種類に試験管内でまたは生体内でさらされるとき、そ れらはこれらの化合物の全てに対して、さまざまな程度に、耐性になる。耐性現 象は、誘起可能な膜タンパク質、p-gP１７０の作用の結果であり、その役割は細 胞障害物質の流出を増加することであり、したがってその細胞内濃度を減少し、 そのことは薬物に対するこれらの細胞の感度の低下を生じる。 他の薬理学において使用される、いくつかの医薬が、その耐性を部分的にまた は完全に反対することが知られている。 （Tsuruo T.，Mechanisms of multidrug resistance and implications for the rapy．Int．J．Cancer Res.，79，285-296，1988；Rothenberg，M．and Ling V. ，Multidrug resistance：molecular biology and clinical relevance，J.N．C .I.，81，907-910，1989；Gottesman M．M．and Pastan，I.，Resistance to mu ltiple chemotherapeutic agents in human cancer cells,Trends Pharmacol．S ci.，9，54-58，1989；Endicott J．A．and Ling V.，The biochemistry of P-g lycoprotein-mediated multidrug resistance，Annu．Rev．Biochem.，58,137-1 71，1989）． 変調剤が細胞障害物質と同時に添加されるとき、ＭＤＲ型の耐性を減少または 完全に抑制する。ベラパミル、アミオダロンまたはシクロスポリンのような、あ る特定の医薬は、その耐性を克服するために臨床的に使用されてきたが、それら の固有の薬学的性質および毒性は、それらの使用をかなり制限する。このことは 、ＭＤＲ表現型を反対にするが他の薬学的性質を持たなくて非毒性である化合物 を捜し求めることに関心を引き起こす。 本発明の化合物の薬理学的研究は、先ず第一に耐性細胞について行なわれる試 験管内の評価から成り立っていた。 測定されるパラメーターは、逆転化合物の不存および存在下に定量される、抗 腫瘍薬の細胞毒性である。 さらに測定されるのは、細胞毒性物質の細胞内濃度に対する化合物の効果であ る。実際上、ＭＤＲを反対にするための既知の化合物は、細胞毒性物質の細胞内 濃度を増加することによって作用する。この効果は、薬物の流出の原因であるＰ −ｇＰ １７０の作用を阻害することの結果である。 この研究は、ヴィンクリスチン（Ｐ３８８／ＶＣＲ）に対し耐性的なねずみの 白血病を使用し、そしてヴィンクリスチンと組合せて化合物を使用する、生体内 の研究により完成された。材料および方法 ： １） 試験管内の活性 細胞毒性 ２種類の細胞系を使用した： −シナハムスター肺系、ＤＣ−３Ｆ／ＡＤ、その耐性はアクチノマイシンＤによ り引き起こされた。その耐性因子は１０，０００よりも大きく、したがって極端 に耐性の系統である。 −および口腔の表皮細胞癌からのヒト系統、ＫＢ−Ａ１、その耐性はアドリアマ イシン（ＡＤＲ）によって引き起こされる。その耐性因子は約３００である。 これら２系統はまたヴィンカアルカロイド（ヴィンクリスチンおよびヴィンブ ラスチン）に対して耐性的である。 細胞を、胎児の子牛血清１０％、グルタミン２mM、ペニシリン５０単位／ml、 ストレプトマイシン５０μｇ／ml、ヘペス１０mMを含有する、完全培地中で培養 した。 細胞をマイクロプレート上に分配して９種類の濃度（２×２系列の希釈）で細 胞毒性化合物（アクチノマイシンＤまたはアドリアマイシン）にさらした。ＭＤ Ｒを反対にするそれらの能力を試験される化合物を、細胞毒性物質と同時に添加 した。 次いで細胞を４日間インキュベートした。次いで生存細胞の数を比色定量検定 、Microculture Tetrazolium Assay（Carmichael J.，DeGraff W.G.，Gazdar A. F.，Minna J.D．and Mitchell J.R．Evaluatlon of atetrazolium-based semiau tomated colorimetric assay：assessment of chemosensitivity testing，Canc er Res.，４７，９３６−９４２，１９８７）によって定量した。結果をＩＣ₅₀ 、対照と比較して５０％だけ処理された細胞の増殖を阻害する細胞毒性物質の濃 度として表わした。結果を逆転因子（ＲＦ）： ＲＦ＝細胞毒性物質だけのＩＣ₅₀／逆転化合物の存在下の細胞毒性物質の ＩＣ₅₀ として表わした。 流動血球計算 アドリアマイシン（ＡＤＲ）のようなある特定の抗癌性化合物は、既知の波長 の光源による励起後に蛍光を発する性質を示す。 その蛍光を測定することによって、ＡＤＲの細胞内濃度の相対的な量を得るこ とができる。流動血球計算（ＦＣＭ）は、この種類の測定を行なう、そしてある 特定の活性化合物がＡＤＲの細胞内濃度を増加させることにより作動するときは 迅速に測定する、好ましい方法である。使用した耐性細胞系はＫＢ−Ａ１である 。 細胞（５００ｘ１０³／ml）を、一定濃度（５０μＭ）のＡＤＲとさまざまな 濃度の試験化合物とに同時にさらした。５時間後、ＡＤＲの細胞内蓄積をＦＣＭ によって評価した。分析は、６００mWの用量に対して４８８nmで最適化された２ ０２５アルゴンレーザー（SPECTRA-PHISICS-FRANCE）を備え付けた流動血球計算 器ＡＴＣ３０００（BRUKER-FRANCE）によって行った。各試料の分析は、１，０ ００細胞／秒の速度で総計１０，０００細胞について行った。 結果は、細胞内ＡＤＲ蛍光の線形ヒストグラムの形で提出した。 結果の表示：各ヒストグラムについて、チャンネル当りの平均蛍光（ＨＥＡＮ） を装置の情報系統により定量した。全実験に対して： −負の対照（ＡＤＲなしの細胞）を自動蛍光しきい値に定めた。 −正の対照（ＡＤＲを持つ細胞）はＭＥＡＮ値＝ＭＮ１を定量した。 −“試験”管（ＡＤＲおよび化合物を持つ細胞）は、各化合物および各濃度に ついて、ＭＥＡＮ値＝ＭＮ２を定量するために使用した。 結果は、正の対照について得られた平均蛍光（ＭＮＩ）に関する各“試験”管 について得られた平均蛍光（ＭＮ２）の変化量の形：ＶＡＲ−ＭＥＡＮ＝ＭＮ２ −ＭＮ１で表わした。表わされたパラメーターは、したがって試験化合物の存在 におけるＡＤＲ蛍光の増加である。 ２） 生体内の活性 抗腫瘍活性 感受性の親の系統Ｐ３８８（ねずみの白血病）およびヴィンクリスティンに耐 性的な副系統、Ｐ３８８／ＶＣＲを、ＮＣＩ（Frederick，ＵＳＡ）より提供し てもらった。腫瘍細胞（１０⁶細胞）を、体重１８〜２０ｇ（８〜１０動物群） の雌のＢ６Ｄ２Ｆ１マウス（Iffa Credo，France）の腹腔内へ０の日に接種した 。 試験される化合物の腹腔内投与の場合には、動物は１、５および９の日に下記 の投与を受けた： −試験される本発明の化合物の２５、５０または７５mg／kgの腹腔内法による 投与、次いで −３０〜６０分後、ヴィンクリスチン（参照抗腫瘍剤として使用された）の０ ．５０mg／kgの腹腔内法による投与。 試験される化合物の経口投与の場合には、動物は１、２、３および４の日に下 記の投与を受けた： −試験される本発明の化合物の１００mg／kgの経口法による投与、次いで−３ ０〜６０分後、ヴィンクリスチンの０．２５mg／kgの腹腔内法による投与。 抗腫瘍活性は次のように表わされる： Ｔ／Ｃ（％）＝（被処置動物の半生存時間／対照動物の半生存時間）×１００ 逆転化合物の活性は、Ｔ／Ｖとして表わされる： Ｔ／Ｖ＝（ＶＣＲと組合せた逆転化合物によって処置された動物の半生存時間／ ＶＣＲだけによって処置された対照動物の半生存時間）結果 ： １） 試験管内の活性 表１に、系統ＤＣ−３Ｆ／ＡＤについてさまざまな化合物によって得られた逆 転因子の数値、および系統ＫＢ−Ａ１についてさまざまな化合物によって得られ たＡＤＲ蛍光（ＶＡＲ−ＭＥＡＮ）の増加も示す。化合物は、参照化合物よりも はるかに活性が大きかった。 表２に、系統ＫＢ−Ａ１についてさまざまな化合物によって得られた逆転因子 の数値を示す。本発明の化合物は非常に活性的であり、それらのあるものは参照 化合物よりもはるかに活性が大きく、そしてアドリアマイシンに対するＫＢ−Ａ １（ヒト癌系）の耐性を完全に反対にする。 ２） 生体内の活性 表３に、本発明の２種類の代表的な化合物によって得られた生体内のヴィンク リスチンの抗腫瘍活性の増加を示す。 腹腔内投与された本発明の実施例１および２の化合物は、耐性腫瘍に対するヴ ィンクリスチンの抗腫瘍活性を実質的に増加させ、したがってヴィンクリスチン は感受性腫瘍に対するのと同じ活性を示した。 表４に、系統Ｐ３８８／ＶＣＲについて、経口投与された、本発明の化合物の 抗腫瘍活性を示す。 本発明の化合物は、経口法により投与されたときでさえ非常に活性的である。 最も活性的な化合物は、ヴィンクリスチンの抗腫瘍活性を完全に回復させる。 試験管内の活性 生体内の活性

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｄ 519/00 ３０１ 8415−4Ｃ (72)発明者 アタシ，ガネム フランス国エフ ― 92400 サン ― クル，リュ ジョセフィン，４ (72)発明者 ピエール，アレン フランス国エフ ― 78160 マルリィ ― ル ― ルワ，リュ ドゥ モントヴ ァル 52

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式Ｉ： 〔式中、 −ＴとＵは、同一または異なり、おのおのピリミジル基と、プリン、ピラゾロ〔 ３，４−ｄ〕ピリミジン、ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジンおよび１，２，３− トリアゾロ〔４，５−ｄ〕ピリミジンから選ばれるヘテロ環を形成するような− ＣＨ−基または窒素原子を表わし； −ＲとＲ′は、同一または異なり、おのおの直鎖または分技鎖の、炭素数１〜５ のアルキル基または炭素数２〜５のアルケニル基を表わし； −Ａは、式： （式中、 −Ｂは、式： （式中、Ｒ″は、水素原子あるいは直鎖または分枝鎖の炭素数１〜５のアル キル基であり、そして −ｔは、１〜３の整数である） の基を表わす） のヘテロ単環式基を表わし； −Ｐは、０または１であり； −ＸとＹは、同一または異なり、おのおの水素原子、ハロゲン原子、あるいは直 鎖または分枝鎖の炭素数１〜５のアルキルまたはアルコキシ基を表わし： −ｍとｎは、同一または異なり、おのおの１〜３の整数を表わし； −Ｒ₁とＲ₂は、同一または異なり、おのおの水素原子あるいは直鎖または分枝 鎖のアルキル基を表わし、あるいはともに単結合、酸素または硫黄原子、基 −（ＣＨ₂）_r−（式中、ｒは１〜３の整数を表わす）、基−ＣＨ＝ＣＨ−、 −Ｏ−ＣＨ₂−、−Ｓ−ＣＨ₂−、−ＳＯ₂−ＣＨ₂−、−ＣＯ−ＣＨ₂−、 鎖または分枝鎖の炭素数１〜５のアルキル基を表わす）、またはＲ₁とＲ²は、と もに基を表わし、その末端ＣＨ₂は隣り合ったベンゼンの最近接炭素に結合し、 その結果全体： が式： のヘテロ環式基を形成する基を表わし；そして −Ｒ₃は、水素原子またはフェニル基を表わす〕の二環式ピリミジン化合物、並 びにキラル化合物およびそれらの鏡像異性体、並びに適当な酸との生理的に許容 しうる塩。 ２．９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ− ５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプタン−５−イル）−メチルアミノ〕ピペリ ジノ｝プリンである、請求項１記載の化合物。 ３．９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔２，２−ビス（４−フルオ ロフェニル）エチルアミノ〕ピペリジノ｝−プリンである、請求項１記載の化合 物。 ４．９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（６，１１−ジヒドロジベ ンゾ〔ｂ，ｅ〕オキセピン−１１−イル）メチルアミノ〕−ピペリジノ｝プリン 、およびその対応するフマル酸塩である、請求項１記載の化合物。 ５．９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ 〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジノ｝プリン、およびその 対応するフマル酸塩である、請求項１記載の化合物。 ６．１−アリル−４−アリルアミノ−６−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ− ５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジ ノ｝ピラゾロ〔３，４−ｄ〕ピリミジン、およびその対応するフマル酸塩である 、請求項１記載の化合物。 ７．７−アリル−４−アリルアミノ−２−｛４−〔（１０，１１−ジヒドロ− ５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルアミノ〕ピペリジ ノ｝ピロロ〔２，３−ｄ〕ピリミジン、およびその対応するフマル酸塩である、 請求項１記載の化合物。 ８．９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（２，２−ジフェニルエチ ル）アミノ〕ピペリジノ｝プリンである、請求項１記載の化合物。 ９．９−アリル−６−アリルアミノ−２−｛４−〔（２−メトキシ−１０，１ １−ジヒドロ−５Ｈ−ジベンゾ〔ａ，ｄ〕シクロヘプテン−５−イル）メチルア ミノ〕ピペリジノ｝プリン、およびその対応するフマル酸塩である、請求項１記 載の化合物。 10．式II： （式中、Ｔ、ＵおよびＲ′は、請求項１に定義されたとおりである）の塩素化化 合物が、どちらも６−位に結合することが望まれる、式： ＲＮＨ₂ （III） または （これらの式中、Ｒ、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｎ、Ｒ₁、Ｒ₂、Ｒ₃、ＰおよびＡは請求項１ に定義されたとおりである）のアミンと縮合させられ、次いでそのようにして得 られた、関係した場合によって決まる、式： または の生成物が、２−位に結合することが望まれる式IIIまたはIVの他のアミンと縮 合させられる（これらの式中、Ｔ、Ｕ、Ｒ、Ｒ′、Ａ、Ｐ、Ｘ、Ｙ、ｍ、ｎ、Ｒ₁ 、Ｒ₂およびＲ₃は、請求項１に定義されたとおりである）ことを特徴とする、 請求項１記載の化合物の合成方法。 11．１種類またはそれ以上の適当な製薬的賦形剤と一緒に請求項１〜９の任意 の１項に記載の化合物を活性成分として含むことを特徴とする、抗癌剤に対する 腫瘍細胞の耐性を抑制するために使用できる医薬組成物。 12．関係している哺乳動物に抑制をもたらすために必要とされる効力のある投 与量の請求項１の化合物を前記哺乳動物に投与することを特徴とする、抗癌剤に 対する腫瘍細胞の耐性の抑制を必要とする状態の哺乳動物を治療する方法。