JPH08509000A

JPH08509000A - チョウザメの魚精の低分子デオキシリボ核酸（ｄｎａ）、そのｄｎａの抽出方法及びそのｄｎａに基づく医薬製剤

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Publication number: JPH08509000A
Application number: JP7500517A
Authority: JP
Inventors: アレクサンドルヴィレノヴィッチアサフォフ; ウャチェスラフウラディミロヴィッチベジュレフ; イディアグリゴリエヴナアナソーヴァ; アレクサンドルアンドレエヴィッチコナレフ; イーゴルニコラエヴィッチカルポフ; マリナガヴリロヴナコチェトコヴァ; イワンドミトリエヴィッチトレシャリン; ドミトリーアレクサンドロヴィッチボドヤギン; エレーナミハイロヴナトレシャリナ; エレオノーララファイロヴナペレヴェルゼーヴァ; アナトリーボリソヴィッチシルキン; ヴィクトルウラディミロヴィッチイルヤシェンコ; ナターリャアレクサンドロヴナススレヴァ; レヴアブラモヴィッチデュルノフ; オルガボリソヴナゾボヴァ; イリーナラザレフナカザロヴァ; ネリーボリソヴナコロレヴァ; ステパンヴァズゲノヴィッチキラコシアン; リディアヴァシリエヴナシモノヴァ; リュードミラヴァシリエヴナシモノヴァ
Original assignee: ナウチノプロイズヴォドストヴェンノエプレドプリヤティエ “ファルメク”
Priority date: 1993-05-24
Filing date: 1994-04-14
Publication date: 1996-09-24
Anticipated expiration: 2013-07-02
Also published as: DE69429812T2; ES2171450T3; EP0712936A4; WO1994028153A2; AU6584994A; EP0712936B1; EP0712936A1; JP2772140B2; DE69429812D1; ATE212848T1; WO1994028153A3

Abstract

(57)【要約】本発明は、チョウザメの魚精から抽出した低分子ＤＮＡ及びそれに基づく医薬製剤に関する。また、本発明は、チョウザメの魚精から低分子ＤＮＡを調製する方法を開示する。血液調整剤、ウイルス活性、特にＨＩＶ感染の阻害剤としての使用及び種々の病因の粘膜の損傷を治療するための使用のための、低分子ＤＮＡに基づく新規な製剤が記載される。また、万能化粧用添加剤としての低分子ＤＮＡの使用が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】チョウザメの魚精の低分子デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、そのＤＮＡの抽出方法及びそのＤＮＡに基づく医薬製剤本発明は、バイオテクノロジー、医薬品及び化粧品に関し、チョウザメの魚精から抽出した低分子ＤＮＡ、それに基づく新規な製剤及び前記ＤＮＡの抽出方法に関する。本発明の製剤は、広範囲の生物活性を有し、生体調整剤、人に対するウイルス活性、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）感染及び種々の病因の粘膜損傷の阻害剤として使用することができる。また、本製剤は、ローション、クリーム、歯みがき水等に万能化粧用添加剤として有効である。静細胞療法、腫瘍の薬剤治療の主力が治療用量でさえしばしば造血を抑制することになることは周知である［１］。その場合、毒性骨髄機能低下が白血球減少症、血小板減少症、更に貧血として末梢血液に示される［２］。化学療法及び化学放射線療法に付随する骨髄機能抑制は、治療可能性を制限し、細菌感染症及び死に至る危険を生じる［１,２］。造血機能低下の場合に用いられる手段の範囲は十分に広い［３,４］。骨髄移植、ロイコマス、コロニー剌激因子及びスプレニン、ロイコジーン、ペントキシル、エイモサン及び種々の群のビタミンのような製剤の導入を含む［５〜７］。しかしながら、骨髄移植は更に外傷の介在を伴い、ロイコマスの導入は免疫反応を引き起こすことがある。医薬製剤は、ほとんど効果がなく、化学療法の中止が必要である。新規な生物学的に活性な製剤を探索するに当たり、核酸の白血球剌激作用が発見された［８〜１０］。ラットの胸腺及び脾臓から生成された高分子ＤＮＡに基づく製剤の白血球剌激作用が生体内で証明された［８,１０］。しかしながら、その製剤は、多くの実質的な欠点、例えば、白血球反応の発現が遅い及び骨髄造血剌激の欠如を示すものである。白血球減少症及び無顆粒症の場合に注射された血液調整剤は、酵母から加水分解によって生成されたリボ核酸のナトリウム塩であった［９］。この製剤は、注射の苦痛のほかに同様の欠点を有する。即ち、白血球形成のみ剌激し、効果が小さく、一連の化学療法の中止が必要である。白血病及び血小板減少症の場合にニシンの魚精から抽出した高分子ＤＮＡをダウノルビセンと組合わせて含む製剤の効率が証明された［１１］。チョウザメの魚精から生成されこれまで用いられなかった低分子ＤＮＡのナトリウム塩は、骨髄造血を含む白血球形成の効果的な剌激、種々の位置及び病因の粘膜損傷を治癒する剌激、ウイルス及び微生物活性、特にＨＩＶ感染の阻害のような予想されない生物活性の特徴を示すものである。本発明の以前には、ＨＩＶ感染は、ヌクレオチド類縁体、例えば、ＡＺＴ（３ −アジ−３−デスオキシチミジン）によって抑制された［１２,１３］。しかしながら、この製剤は、治療用量でさえ疾患の初期の段階でのみ有効であり、臨床使用においては合併症（頭痛、貧血、胃腸障害）を生じる毒性が高く、もって、投与が制限される［１４,１５］。ＨＩＶ感染を治療する従来技術においては、二フッ化ヌクレオシド［１６］の投与が既知であるが、ほとんど効果がない。本発明の製剤は、ＨＩＶ感染の阻害に対して非常に効率がよく、毒性が低い特徴を示すものである。ＤＮＡの効率は、実験胃潰瘍の治療用動物モデルで証明された［１７］。チョウザメの魚精から得られた低分子ＤＮＡに基づく製剤は、抗生物質、重金属製剤及び細胞分裂抑制剤の投与から生じるものを含む種々の病因の口腔及び咽頭粘膜の損傷に対して予想外に高い効率を示した。チョウザメの魚精からＤＮＡを生成する方法は、ソビエト発明者証第1410494 号，1986，CO74221（04）に開示された。この方法は、魚精を標準クエン酸塩バッファー中でホモジェナイズする工程、遠心により細胞核を分離する工程、ドデシル硫酸ナトリウム溶液で約５５℃の温度でホモジェナイズ及び除タンパク質する工程を含む。その冷却した混合液をキーゼルグール（１５.５％）と激しく混合し、ろ過する。１：１の割合のアルコールで標的ＤＮＡを沈澱する。高分子ＤＮＡを溶解し、磁気ひずみ計による音響効果にかけ、ろ過し、１／１０標準クエン酸塩バッファー中０.６％ＤＮＡを生成する。また、魚精をホモジェナイズし、それを生理的溶液で洗浄し、ＤＮＡ−タンパク質複合体をプロトサブチリンバシラス・サチリス（Bacillus subtilis）で除タンパクすることによるチョウザメの魚精からＤＮＡを生成する方法も既知である（ソビエト発明者証第780444号，CO7H21 /04）。従来の技術において、魚精を標準クエン酸バッファー（０.８７％ＮａＣｌ、０.５４％クエン酸ナトリウム）中でホモジェナイズする工程、遠心する工程、ドデシル硫酸ナトリウムの存在下に６０℃で１.５時間除タンパクする工程を含むチョウザメの魚精からＤＮＡを生成する方法も既知である。次いで、その懸濁液をＮａＣｌ及びクエン酸ナトリウムで最終濃度各々１４. ６％及び２４％まで処理し、６０℃で１.５時間加熱する。タンパク質を分離するために、その冷却した溶液をキーゼルグールを含むカラムに通過させ、ＤＮＡ溶液を生成する（Chemo-Pharmaceutical Journal，1982，No．7，p．835-838）。しかしながら、上記で引用した方法は全て多糖混合物でないＤＮＡナトリウム塩を生成することができない。医薬用のＤＮＡ製剤中に多糖が少量でさえ存在すると、発熱作用を生じるので好ましくない。多糖混合物でないＤＮＡナトリウム塩を生成することによるこの実質的な欠点を取り除くほかに、本方法は、標的物質を種々の医薬形態の製剤の貯蔵及び調製に極めて便利な粉末状で生成する。１．本発明によるＤＮＡの抽出方法チョウザメの魚精からＤＮＡを抽出する本方法は、凍結魚精をクエン酸塩溶液中でホモジェナイズする工程、ＤＮＡを除タンパクする工程、タンパク質を変性する工程、ＤＮＡを分解する工程、それを特定の混合液から分離する工程及び標的生成物を抽出する工程を含み、ＤＮＡ分解段階の前に電気透析及び／又は限外ろ過段階を含むことを特徴とする。好適実施態様においては、チョウザメの魚精を０.８７％塩化ナトリウム及び０.５４％クエン酸ナトリウムを含む標準クエン酸塩バッファー中でホモジェナイズする。そのホモジェネートをドデシル硫酸ナトリウムの存在下に５５〜６０ ℃で１.５時間加熱する（最終濃度９６％）。次いで、この混合液をＮａＣｌ溶液で最終濃度１４.６％に処理し、５５〜６０℃で１.５時間加熱する。生成した混合液をキーゼルグールで処理し、ろ過する。得られたＤＮＡ溶液を電気透析装置及び／又は限外ろ過プラントに通過させる。得られた溶液を超音波で処理し、ろ過し、必要であれば濃縮し、アルコールで沈澱し、その沈澱を９６％アルコールで洗浄し、４０℃の乾燥キャビネットで乾燥し、ＤＮＡを乾燥粉末状で生成する。上記の方法で得られたＤＮＡの塩は、次の性質の特徴を示す。チョウザメの魚精から生成された低分子ＤＮＡの未変性ナトリウム塩を少なくとも８０重量％含み、タンパク質が１.５重量％を超えず、水分が１７重量％を超えない白色粉末である。ＤＮＡナトリウム塩の分子量が１２ｋＤを超えず、濃色効果が３７％より下でない。本方法に従って調製された生成物は、医薬用に適する（市販名ポリダン(Polyd an)）。２．製剤形態本発明の製剤は、種々の目的に種々の形態で用いることができる。血液調整のためには、ＤＮＡのナトリウム塩の溶液が注射剤として用いられる。希釈剤は、蒸留水及び生理的溶液を含む任意の薬学的に許容しうる希釈剤である。注射用製剤は、血液剌激作用を示すのに必要とされる量のＤＮＡを含有する。注射用製剤の好ましいＤＮＡ含量は、この濃度が最適薬理作用を確実にするので、１〜２％で変動する。本製剤は、伝統的容量重量法による工場条件で製造される［１７］。ＤＮＡ粉末のある重量を必要な容量の溶液まで希釈剤で処理する。次いで、その溶液をろ過し、滅菌し、バイアルに注入する。希釈剤は、蒸留水又は生理的溶液が好ましい。得られた溶液は、透明な液体であり、機械的な又は他の不純物を含まない。安定であり、長い貯蔵寿命を特徴とする。種々の病因の口及びのどの粘膜損傷の場合に有効な溶液は、それらを治癒するのに十分な量でＤＮＡを含む。溶液中の好ましいＤＮＡ濃度は０.２〜２.０％である。希釈剤は、生理的溶液及び水のほかに、他の薬学的に許容しうる希釈剤であってもよい。ＨＩＶ感染を阻害するために、ＤＮＡは多価金属（亜鉛、ニッケル、コバルト、鉄）と組合わせて１：１〜１：１０００の割合で用いられる。その金属系は、成分をある一定の割合で種々の温度で混合することにより生成される。多目的生物学的添加剤として化粧品に用いられる本発明のＤＮＡは、種々の形で使用することができる。化粧クリームのファンデーションは、グリセリンステアレート、蒸留したモノグリセリド、又はその十分な置換体、エマルジョンワックス、化粧用ステアリン、トリエタノールアミン、グリセリン、芳香油、保存剤、芳香化剤及び水を含有する。ヘヤローションは、エチルアルコール、可溶化剤、ゲル化成分、グリセリン、１,２−プロピレングリコール、芳香化剤及び水に基づくものである。ローションは、そのゲル化成分を水と混合し、次に残りの成分を加えることにより調製される。クリームは、伝統的な方法（１８）、即ち、油相と水相を混合することにより調製される。ＤＮＡは、ある種の条件下（温度、ｐＨ、添加順序）でそのクリーム塊に添加される。歯みがき水の基本成分は、エチルアルコール、蒸留したグリセリン、芳香化剤、食用染料である。その歯みがき水は、伝統的な方法（１８,１９）、即ち、成分を混合することにより調製される。３．本製剤の毒性及び変異原活性の検討３.１．変異原活性を３試験系で検討した： −ミクロソームのエイムス試験における指示菌（Salmonella）による、Ames等，PNAS，1973，V．70，p．2281； −変更した（A.M．Malashenko 1977 & G.N．Zolotarevら，1978）、試験製剤に起因する骨髄細胞に染色体異常を示すことによる（Ford C.，Stain Technol； 1956，v．31，p．247）； −マウスの胎児細胞に本製剤によって誘発された優性致死突然変異を示すことによる（Ehling U.H.，Arch．Toxicol.，1978，v．39，p．173-185）。第１試験系における製剤濃度は、０.１；１.０；１０；１００及び１０００mk g/mlとした。実験の第２実験系においては、実験製剤の溶液を投与直前に調製した。その製剤を０.２mlのＮａＣｌ溶液として５mg／kg動物の体重（５毒性用量）及び１００mg／kg体重（１００毒性用量）の用量で皮下注射した。対照グループに同量の希釈剤を同様の方法で注射した。第３実験系において同一用量を用いた。得られた結果の分析により、実験製剤が用量試験範囲（治療用量未満から１００毒性用量まで）において変異原性作用を表さないことが示された。３.２．ＤＮＡ製剤の毒性の検討既製品の製剤（１.５％溶液）を、２４時間間隔で１回又は５回動物に皮下又は静脈内投与した。雄ラットF₁（SVA×C₅₇）とSVA、雄及び雌ラットWistarとF（ AMSY & Wistar）、モルモット、イングリッシュビーグル犬及びチンチラウサギで試験を行った。一連の製剤投与の終わった後の１ヵ月以内に動物の状態及び行動を観察した。このときまでに、血液の生化学及び臨床分析、尿の臨床分析を行い、心臓血管系等の機能状態を検討した。毒性用量をLitgfield & Wilkokson法で算出し、１ヵ月後に動物を殺し、死後実験に供した。未変性製剤を１０００、５００及び２５０mg/kgの用量で体重１８〜２０ｇの雄マウスF₁（SVA×C₅₇VC）に皮下注射した。１匹の動物が死ななかった。皮下注射されると、上記用量の製剤は全て局所剌激作用を示さなかった。動物は本製剤によく耐え、体重増加分は対照と違わなかった。解剖により、臓器の顕微鏡変化は見出されなかった。本製剤を同系のマウスに６００、３００及び１５０mg／kgの用量で静脈内注射した（容量は１マウス当たり各々０.３、０.１５及び０.０７mlであった）。結果を表１に纏める。上記の表から、６００mg/kgの用量（人に対する６００治療用量に等しい）が動物を殺さないことが導かれる。生存動物の体重増加分は対照と違わなかった。上述の多価金属とのＤＮＡ複合体の毒性は、５、１０、２０、３５及び５０、７５mg/kg用量で皮下、腹腔内及び脳内注射することにより体重６〜７ｇの非直線的マウスについて検討した。ＬＤ₅₀を算出した２週間後に動物を観察した。実験結果は、試験した製剤が全て投与方法に関係なく５〜７５mg/gの用量の範囲内で非毒性であったことを示した。体重が平均２２０〜２５０ｇの雄マウスF₁（AMSU×Wistar）で試験を行った。結果を表２に示す。他の試験は、末梢血液の指数（臨床及び生化学分析）の検討を含み、心電図を取り、ラットの毎日の利尿を求め、尿の組成を調べた。実験の間中毎日動物の体重を測定した。実験の完了した１４日後と３０日後に断頭で各グループから５匹の動物を殺すことにより病理形態学的試験を行った。次いで、動物を解剖し、内蔵の重量を量り、重量係数を求めた。臓器片を１０％ホルマリン溶液に固定し、ヘマトキシリン−エオシンで着色し、光学顕微鏡に供した。試験により、本製剤が動物によって容易に耐えられることが示された。動物の行動及び状態の異常はなかった。本製剤の投与は、疼痛症候群を伴わなかった。正常に体重の増加した動物及びそれらの臓器の重量係数は、生理的標準の限度内で変動した。末梢血液の試験は、実質的な変化を示さなかった。試験グループの赤血球、ヘモグロビン、白血球及び血小板数は、生理的正常値の限度内で変動した。ＥＣＧに基づく心臓血管系の試験は、本製剤が心筋における機能及び電気プロセスに病理作用を及ぼさないことを示した。尿の臨床分析に基づく腎臓機能試験により、本製剤が腎毒性作用を有しないことがわかった。実験の結果により、本製剤が多量でも非毒性であり、動物によって十分許容されるという結論が導かれる。４．血液調整剤としての製剤の投与４.１実験的試験静細胞剤に起因する実験白血球減少症の症状のもとでの動物（マウス、イヌ）について、本製剤の血液調整性を開示した。第１実験系においては、体重１１.５〜１５.６kgのイングリッシュビーグル犬を用いた。血液遺伝組織の形成不全は、ミエロサンを１回の用量１５mg/kgで経口投与することによった。ミエロサンを注射した３日後及び７日後にＤＮＡのナトリウム塩を１回の用量１０mg/kg及び２５mg/kgで２回皮下に投与した。ＤＮＡの累積用量は、各々２０mg/kg及び５０mg/kgであった。対照グループのイヌに同じ日に生理的溶液を各々１０ml投与した。実験の開始から３、７、１４、２１、２８、４２及び４９日後に、末梢血液中の白血球数及び胸骨点の骨髄のカリオサイト含量を求めた。表の結果から、ミエロサンの投与が末梢血液中の白血球含量及び骨髄中のカリオサイトの急激な減少を引き起こしたことがわかる。対照動物の白血球とカオリサイトの含量は、実験の２８日目まで低いままであり、４２日後に徐々に戻り始めたが、４９日目の観察の終わりまで開始レベルに達することができなかった。ＤＮＡのナトリウム塩を導入すると、静細胞剤の毒性作用の像に実質的な変化を生じ、骨髄細胞と白血球の含量の速やかな回復を促進した。即ち、ＤＮＡのナトリウム塩を累積用量２０及び５０mg/kgで投与した後、両グループの白血球減少症はそれほど深くないことがわかった。末梢血液に白血球数が回復する傾向は、実験の２１日目に既に観察され、観察期間の終わりまでに白血球レベルが初期値までほとんど戻った。骨髄におけるカリオサイト含量の回復に同様の像が観察された。即ち、このイヌについての実験系において、累積用量２０mg/kg、最も特徴的には５０mg/kg用量でのＤＮＡナトリウム塩は、静細胞剤ミエロサンに起因する造血抑制の場合に造血指数の速やかな回復に寄与することが示された。第２実験系は、体重１８〜２０ｇの雄雑種マウスF₁（CBA×S₅₇BS）について行った。血球減少症は、シクロホスファンを１回の投与量２００及び２７５mg/kg で腹腔内に投与することによった。ＤＮＡナトリウム塩を１５０及び３０mg/kg の用量でシクロホスファンを注射した３、５及び７日後に１回皮下注射した。１、３、５、７、１０、１２、１４、１７、２１及び２５日目に末梢血液中の全白血球数をGoryaev室で求めた。実験の結果を表４に纏める。表４から、シクロホスファンを導入した後の最大血球減少効果は３日目に生じ、細胞数が７〜９日目に回復することがわかる。しかしながら、１２〜１３日目に白血球数のそれほど深くない２回目の減少が生じる。１５０mg/kgのＤＮＡを３、５及び７日目に投与すると、最大剌激効果が得られる。１回目のＤＮＡ注射の２〜３日後に、細胞数はミエロサン導入前のバックグラウンドレベルに戻り、７〜１０日目に、細胞数は前記レベルを超える最大に達する。他の調整剤と異なり、ＤＮＡは血液剌激の後に相殺する細胞数の減少を生じないことは留意されなければならない。全体として、実験物質の分析により次の結論が導かれる。酵母ＲＮＡを含む既知の製剤と異なるように、本製剤を投与すると、末梢血液中の白血球数の回復の速度を早めかつ骨髄中のカリオサイト数を増加する。１回のＤＮＡ製剤注射が刺激作用を生じるのに十分であり、ＲＮＡ酵母を使用すると１０日間の治療の後にのみ所望の効果が得られる。ＲＮＡ酵母と異なり、本製剤は、血液剌激後に相殺する細胞数の減少を生じない。４.２．臨床試験本製剤の臨床試験は、化学放射線療法による造血阻害に関する腫瘍患者で行った。観察グループは、リンパ肉腫、リンパ芽球性白血病等に罹患している６〜１４才グループの範囲で３０人の患者から構成された。静細胞剤及び放射線で治療すると白血球減少の発症を引き起こした（血液１cm³当たり１００〜１５００）。一連の治療は、チョウザメの魚精から生成された低分子ＤＮＡの０.５〜２.５溶液の好ましい使用が含まれた。注射の投与量及び回数は、主症状の経過に従って変動した。１又は２回注射した後、白血球が３〜５倍増加する７〜３５mg/kg の投与量が最適である。実験結果を表５に示す。患者の観察グループにおける骨髄像の分析により、白血球剌激作用だけでなく巨核球造血の標準化に顕著な影響が示された（表６）。これにより、本製剤は、既知の製剤よりはるかに強い白血球剌激作用を示すだけでなくこれまで不明の骨髄造血を剌激する能力も示すものである。更に、従来技術レベルの製剤と異なり、血液剌激の後に細胞量の相殺減少相のないことを発見したことは予想外であった。本発明の製剤の重要な利点は、主治療過程の臨床上の持続の可能性にある。即ち、悪性腫瘍疾患を治療するのに制御因子である化学放射線療法を中止する必要がない。化学放射線療法で用いられる既知の製剤と本製剤との比較を表７に示す。酵母の加水分解により生成された核酸ナトリウムのＮａ（核酸のナトリウム塩）は、白血球減少症の場合に血液調整剤として用いられる。顆粒球及びマクロファージコロニーを剌激する因子は、化学放射線療法に起因する白血球減少症において最も頻繁に用いられる血液調整剤である。前記製剤の双方の使用は、一連の主制がん療法を中止することを含む。動物モデルについてラットの胸腺及び脾臓からの高分子ＤＮＡに基づく製剤と本製剤の白血球剌激作用の比較を表８に示す。実験データ及び臨床試験から、化学放射線療法による腫瘍患者の血球減少の場合だけでなく放射線療法、放射線宿酔及び血液組成のずれを伴う他の場合にも広範囲の適応症に血液調整剤として臨床使用に非常に適する本製剤の非常に効果的な血液剌激作用がその非毒性及び非変異原性と共に明らかである。５．本製剤のＨＩＶ感染阻害剤としての投与本発明の以前には、核酸の抗ウイルス活性についての情報がなかった。本発明によれば、チョウザメの魚精から生成されたＤＮＡのナトリウム塩により多価金属（亜鉛、ニッケル、コバルト、鉄）と組合わせて１：１〜１：１０００の比でＨＩＶ感染を阻害することができる。本製剤は、疾患の形によって皮下、腹腔内及び鼻内方法で又は脊髄中心管に治療上等価な投与量で投与することができる。本製剤の種々の投与形態で得られた抗ウイルス作用は、エイズ−中枢神経系に対する障害を有する肺及び胃腸の種々の臨床形態に不可欠である［１４］。ＨＩＶ感染を阻害する際の本発明の製剤の高い効率を次の実験で発見した。細胞培養系におけるＨＩＶは、ＤＮＡと亜鉛、コバルト、ニッケル及び鉄との種々の成分濃度の複合体で阻害された。Welcome社で製造されたアジドチミジンを比較のために使用した。製剤のウイルス活性は、世界保健機構によりそのために推奨された方法で評価した［２０,２１］。そのために接種細胞系ＳＥＭ及びＭＴ−４の培養物を用いた。仔ウシの１０％胎児血清、３００mg/mlのグルタミン、１００mg/mlのヘプタミシンを含むＰＰＭ１の１ml当たり（０.０３〜０.０５）×１０⁶の濃度で細胞を培養し、浮遊液として増殖した。０.４％トリパンブルー溶液で呈色することにより細胞のウイルス活性を調べた。ウイルス源は、ＨＩＶ／ＩＶＳ及びＨＩＶ−１ＨＴＬＶ／ＩＩＩＢ株とした。細胞浮遊液を２４穴のボードに入れ、種々の用量の製剤で処理し、ＨＩＶに感染させた。感染多重度は、０.０１ＴＣＤ₅₀／細胞とした。次いで、５％ＣＯ₂を含む雰囲気中３７℃含湿度９８％で５〜７日間培養物をインキュベートした後、細胞培養上のウイルスの細胞変性作用を求めた。免疫発酵分析により、ウイルス抗原の形成を評価した。結果を表９に示す。表から、ＤＮＡ−金属複合体を培養基に導入すると、ＨＩＶ感染の阻害を伴うことがわかる。最適ＤＮＡ−金属の関係は、１：１〜１：１０００で変動する。静ウイルス作用と低細胞毒性とがある。本方法と異なるように、培養基をＡＺＴ製剤で処理すると、中程度の抗ウイルス作用と共に高い細胞毒性が引き起こされる。次に、本発明の製剤の毒性を実験動物で実験した。試験は、全４種類の製剤を５、１０、２０、３５及び５０mg/kg用量でアジドチミジンと比べて同時に行った。４種類の製剤及びアジドチミジンの毒性試験は、体重６〜７ｇの非直線的ホワイトマウスで行い、製剤で種々の投与量で皮下、鼻内、腹腔内及び脳内注射として投与した。マウスを２週間観察下に置き、Curb er 法で算出した。動物の５０％が死をきたす製剤の用量としてＬＤ₅₀を求めた。これらの製剤の毒性試験の結果を表１０に纏める。表において、全５種類の製剤が、皮下、鼻内及び腹内投与の場合に用量に関係なく体重５〜７ｇのホワイトマウスに非毒性であることがわかる（観察期間２週間）。同時に、ＤＮＡの用量が５０mg/kgを超えるとマウスの５０％が死亡した。また、アジドチミジンは、１０〜５０mg/kgマウスの体重で変動する用量で脳内導入した後にマウスの５０％の死亡率を生じた。試験した製剤複合体は、どのような投与方法でも抗ウイルス活性を保持し、ＡＺＴの場合には、脳内、皮下及び腹内注射の場合に特徴的であることは留意しなければならない。実験データの分析により、本製剤の顕著な抗ＨＩＶ活性及びその低毒性は注射方法に関係なく明らかである。６．また、ＤＮＡ−金属複合体の抗体ウイルス活性を、常法を用いてインフルエンザウイルス、アデノウイルス及びヘルペスウイルスについて試験した（Mc． Canley J.，Biochem.J．1983，v．224，p．281；Wigand R.等，Entevirology，1 982，v．18，p．169；Allen G.P.，Aust.J．Vet．Res．1983，v．44，p．263）。得られたデータを表１１に示す。この表は、複合体の抗ウイルス作用が十分であり、ヘルペスウイルスで最も特徴的であることを示すものである。７．粘膜損傷の剌激療法口及び咽頭の損傷を治療するのに核酸の効率はこれまで不明であった。本製剤は、その口及び咽頭粘膜の種々の病因の損傷の治療を剌激する可能性を示す。抗生物質、重金属製剤及び静細胞剤の局所及び非経口投与後の頻繁な合併症である口腔及び咽頭腔の粘膜損傷を治療する課題が今日最も重要である［２２−２４］。広範囲の濃度（０.２〜２.０％）内で本発明のＤＮＡを試験すると、実験した濃度全てにおいてほとんど合併症がなくその製剤の効率が示された。口腔及び咽頭腔の粘膜に対する薬物性損傷の変化に関するＤＮＡナトリウム塩溶液の影響の臨床試験の結果を表１１に示す。４８人の観察された腫瘍患者の主疾患は、リンパ肉腫、組織球肉腫、急性白血病、リンパ肉芽腫であった。患者をメタトレキサート、ビンクリスジン、プレドニゾロン等の化学療法剤で治療した。多種化学療法治療の３〜５日目に、患者の口腔及び咽頭腔に口内炎及び歯肉炎の症状が見られた。診察により、口腔内の粘膜の充血及び浮腫、白い斑点で覆われたアフタ症の多数の発疹及び急性疼痛がわかった。液状食を取ることは困難であり、固形食を取ることは不可能であった。ある患者は間欠熱に罹った。全ての患者にポリダン溶液を隆起の程度によって１日６〜８回５〜６日連続適用した。全ての患者の一連の多種化学療法の連続は中断されなかった。この表は、治療の２日目に痛みが消失したのと同じくらい早く２〜３日目に食事がとれ、４日目に固形食がとれた。アフタの出血は２〜４日目に止まり、充血は４〜８日目に止まった。しかしながら、残りの充血は肉芽隆起の回復を伴い、アフタ性発疹の速い上皮形成をもたらすものである。観察された全ての場合において、隆起は６〜１０日目に完全に阻止された。そして口内炎の治療が６日目に、歯肉−口内炎の治療が７〜８日目に歯肉炎の治癒が９日目に現れたことは留意しなければならない。最長治療期間は、隆起の咽頭位置の場合であった。ここでは、１０日目にのみ隆起が抑制された。臨床データの分析により、ポリダン溶液を適用すると口腔及び咽頭腔の粘膜の薬物性損傷の有効な停止が確実であることが明らかである（口内炎、歯肉口内炎、咽頭−口内炎）。この溶液の重要な利点は、治療の連続が基本的多種化学療法を中止することも投与量を減少させることさえも必要としないことにある。表１３において、ポリダンの投与が主疾患の変化に有益な一連の化学療法を継続することを可能にすることは明らかである。伝統的治療中に化学療法を継続する試みは、粘膜上の隆起の悪化を生じ、潰瘍−壊死までの変化さえ生じ、しばしば潰瘍−壊疸状態のときがあった。粘膜損傷の治療における本製剤の効率は、医薬として幅広い利用に役立つものである。８．美容効果本発明の製剤は、効率のよい美容効果を示す。そのＤＮＡが生物学的に活性な化粧用添加剤としてこれまで用いられてこなかったことは記憶に留めなければならない。８.１．ＤＮＡナトリウム塩添加剤を含む化粧クリームの治効活性及び予防活性を実験しつつ多目的生物学的添加剤としての本製剤の効率を証明した。これらの試験は、常法で行われた［２５−２６］。前記クリームは、皮膚の増殖プロセスをいかなる剌激及びアレルギー作用もなく活性化することが見出された。皮膚の生化学特性に関する前記クリームの効果の試験により、前記クリームが全可溶性タンパク質とＤＮＡ及び全脂質の含量を増加することが証明された。実験動物についての試験により、皮膚障壁を介してＣ₁₄チミジンで標識したＤＮＡの効率のよい浸透がわかった。また、抗酸化性、光防御性及び水分の補給性も発見された。製造されたクリームは、においのよい薄い黄色ががった又は白色エマルジョンである。皮膚によく吸収され、皮膜が残らない。実験的臨床試験の結果を表１４に纏める。これらのデータから、生物学的に活性な添加剤−ＤＮＡナトリウム塩−を化粧クリームの組成物に導入すると、その生物学的活性の範囲をアレルギー及び他の副作用なしに拡大した事実が明らかである。８.２．ＤＮＡナトリウム塩として生物学的に活性な添加剤を含むヘヤローションの治効性及び予防性の試験本実験は、臨床試験で行われた。実験は、飼養場の標準配給で飼っている青年期の動物で行った。体重３５０〜４００ｇの２０匹の白モルモット及び体重２. ５〜３.０ｇの５匹のウサギで試験した。毒性は、Gatsuro法で試験した［２７］。剌激作用は、ウサギの目の粘膜に本製剤を塗布することにより評価した。また、試験ローションを２×２cmの大きさの皮膚面に２１日間毎日塗布した。毛髪の直線的成長に関するローションの影響をモルモットで実験した。それのために、モルモットの毛をある一定の面積から刈り取り、前記面積を０.５ｇのローョンで２１日間処理した。７日目、１４日目及び２１日目にその毛を引き抜き、その長さを測定した。毛の組織を調べ、結果を対照と比較した。本製剤の毒性を２１日間実験した。他に、全身状態、食欲、体重増加分、皮膚の状態、毛及び浮腫の存在も観察した。皮膚及び内蔵の生検を肉眼で及び病理形態学的に試験した。臨床試験は、脂漏及び毛髪の広範な脱落の症状のある両方の性別の年齢１４〜６２才の患者で行った。ローションを２１日間毎日すり込んだ。一連の治療の前に、皮膚弁試料を２４時間包帯で閉じておいた。臨床試験の結果：ローションは非毒性であり、剌激作用及びアレルギー作用を示さない。顕微鏡分析により、表皮細胞の再生、皮膚内のＲＮＡ量の増加、真皮における組織球及びマスト細胞の機能活性の強化が示された。毛組織、その毛嚢、皮質及び毛根鞘の強化に確実な影響を与えた。臨床上、本製剤は良好な感覚感受性を特徴を示し、毛で覆われた部分に簡単に塗布することができ、アレルギー作用がない。脂漏の場合の観察は、２１日連続の後に毛髪が軟らかくなり、少量のフケが落ちたことを示した。形成された皮膜は、天候の作用（光防御作用）に対して効率よく防御する。毛髪の脱落は、抗酸化作用のために減少する。得られたデータから、生物学的に活性な添加剤−ＤＮＡのナトリウム塩−をヘヤローションに加えると、脂漏の発生を減じ、毛髪への栄養作用があり、光防御作用を示すことが証明される。８.３生物学的に活性な添加剤としてＤＮＡナトリウム塩を含む歯みがき水の治効活性及び予防活性の試験。臨床試験において、歯みがき水が抗炎症作用の特徴を示し、損傷粘膜の治癒の速度を早めることがわかった。微生物試験により、歯みがき水の消毒活性が現れた。臨床試験により、歯みがき水の優れた味、洗浄作用及び歯周への確実な影響が現れた。即ち、本発明のＤＮＡのナトリウム塩は、歯みがき水に対して抗炎症活性、消毒活性及び抗歯周炎活性を付与する。全ての化粧品の常法によるアレルギー試験［２６］により、アレルギー性のないことがわかった。得られた結果は、ＤＮＡナトリウム塩が化粧品の治効及び予防効率を促進する万能化粧用添加剤であるという結論に対する根拠である。即ち、本発明のＤＮＡは、化粧品への万能添加剤であり、アレルギー及び他の副作用を引き起こさずに顕著な治効性及び予防性の特徴を示し、皮膚及び内蔵の正常組織に悪影響を及ぼさず、化粧品の有効成分と適合する。これにより、化粧品への添加剤として本発明のＤＮＡ塩の多くの使用に幅広い機会が提供される。下記の実施例で本発明を具体的に説明する。実施例１化学放射線療法による骨髄機能抑制に関して入院した患者K.に５mlの１.５％ＤＮＡナトリウム塩溶液を投与した。この製剤を投与する前、白血球減少は血液１mm³当たり白血球１００〜３００であったが、投与後に白血球数の漸次増加が観察された。即ち、注射後１日目は７００/mm³血液、２日目１０００、３日目４２００及び５日目５１００であった。また、他の固有の特徴は全顆粒球腫脹細胞の確実な変化であり、その数が４７％から５２.５％に増加した（正常値は５７％である）。本製剤で治療する前のエリスロカリオサイトの成熟指数は０であるが、治療後は０.８であった（正常値は０.７〜０.９である）。全身状態の合併症は観察されず、注射面の剌激又は痛みもなかった。実施例２患者A.１３は1992年７月13日に小児腫瘍科に入院した。診断は、急性リンパ芽球性白血病であった。シクロホスファン、ビンクリスチン、ルボマイシン及びプレドニゾロンによる一連の化学療法を投与した。結果は、白血球減少が強くなった。1992年11月25日に白血球数は２５００、1992年11月27日に４００、1992年11 月28日に３００及び11月29日に１００であった。1992年11月30日に、患者に５ml の１.５％ポリダン溶液を注射した。結果は、白血球数が増加した。即ち、1992年12月２日に白血球数は７００、12月７日に４２００、12月10日に５０００であった。同時に、骨髄像を標準化した：骨髄造血剌激の証拠である骨髄球、エリスロカリオサイト、多染性正常赤血球の数が増加した。造血調整の結果として、一連の化学療法を中断しなかった。続いての治療中に、白血球数の減少はなかった。ポリダン溶液の注射は、副作用を生じなかった。実施例３接種細胞の培養物、ＣＥＭＳＳ及びＭＴ−４系を実験に用いた。１０％仔ウシ胎児血清、３００mg/mlのグルタミン、１００mkg/mlのヘンタマイシンを含むPPM J 1640培養液１ml当たり０.０３×０.０５×１０⁶細胞の濃度で細胞を培養し、浮遊液として増殖した。０.４％トリパンブルー溶液で呈色することにより、細胞の生体活性を調べた。ＨＩＶ／ＩＶＳ及びＨＩＶ−１ＨＴＬＶ／ＩＩＩＢ株をウイルス源に用いた。その細胞浮遊液を２４穴プレートに入れ、ＤＮＡ−金属比１：１、４：９、３：１０、０.５：３５０、１：１０００の、種々の用量のＤＮＡ−Ｚｎ複合体で処理し、ＨＩＶに感染させた。感染多重度は、０.０１ＴＣＤ₅ ₀ ／細胞であった。次いで、培養物をＣＯ５％を含む雰囲気中３７℃含湿度９８％で５〜７日間インキュベートした後、細胞培養物についてウイルスの細胞変性作用を求めた。免疫発酵分析により、ウイルス抗原の形成を評価した。実験は、シンシチウム数、ＤＮＡ−金属比３：１０でのウイルス制御％が生存可能細胞６９％で２５％；０.５：３５０の比で生存可能細胞８１.２％で３５％；１：１０００の比で生存可能細胞８４.３％で７０％；及び１：１４００の比で生存可能細胞８６.２％で１００％であったことを示した。実施例４実施例３のように実験を行った。種々の用量の実施例１と同じ成分比のＤＮＡ−Ｎｉ複合体で細胞浮遊液を処理した。実験は、シンシチウム数、ＤＮＡ：Ｎｉ比３：１０、０.５：３５０のウイルス制御％が細胞の生存度８１及び９０％で０であり；１：１０００の比で生存可能細胞８４.３％で６８％であり、１：１１００の比で生存可能細胞８７.５％で１００％であったことを示した。実施例５実施例３のように実験を行った。種々の用量の実施例１と同じ成分比のＤＮＡ−Ｎｉ複合体で細胞浮遊液を処理した。実験は、シンシチウム数、ＤＮＡ：Ｃｏ比３：１０のウイルス制御％が生存可能細胞７８.４％で１０％であり；０.５：３５０の比で生存可能細胞８７. １％で１５％であり、１：１０００の比で生存可能細胞７６.３％で６６％であり、１：１１００の比で各々８２.１％であったことを示した。実施例６実施例１のように実験を行った。種々の用量の実施例１と同じ成分比のＤＮＡ−Ｆｅ複合体で細胞浮遊液を処理した。実験は、シンシチウム数、ＤＮＡ−Ｆｅ比３：１０及び０.５：３５０のウイルス制御％が各々細胞生存度７９.３％及び８２.１％で０であったことを示した。ＤＮＡ−Ｆｅ比１：１０００のシンシチウム数は、細胞生存度８１.７％で６１％であり、１：１１００の比では細胞生存度８４.５％で１００％であった。実施例７患者P.は主診断の肉腫ＩＶ度で入院した。メタトレキサートを５０ml/m²の用量で投与した。５日目に口内炎の症状が現れ、口腔が鋭い痛みのある浮腫とアフタ性発疹で充血した。食事をとることは不可能であった。患者に０.２５％ポリダン溶液を１日目に２時間おきに８回；２〜６日目に毎日８回；７日目に６回及び８日目に３回投与した。口内炎の臨床症状の変化は次の通りであった。２日目に粘膜を治療した後、痛みが消え、アフタ性症状が安定し、出血が止まった。３〜４日目に痛みが消え、アフタ性発疹が消え、患者は食事をとることを始めた。５日目に痛みがなく、充血が消えた。６日目に隆起が完全に阻止され、口腔の粘膜はきれいであり、浮腫及び充血がなかった。口内炎は、化学療法を中断せずに治療された。実施例８患者K.は、主診断のリンパ肉腫、ＩＶ度で入院した。メタトレキサート５００ ml/m²とプレドニゾロン２mg/kgを投与した。多種化学療法の開始後４日目に歯肉口内炎の症状が現れた。診察により口腔に充血と浮腫、頬と歯肉の粘膜に出血アフタ性発疹がわかった。粘膜に触れ食事をとると鋭い痛みがある。患者に０.５％ポリダン溶液を投与した：１〜４日目に１日８回（２〜３時間毎）；５〜８日目に１日６回。歯肉口内炎の臨床症状の変化は次の通りであった。粘膜の治療後２日目に痛みが弱まった；３日目に痛みが消え、出血が止まり、食事をとることが可能であった；４〜５日目に粘膜の充血が小さくなり、８日目に隆起が完全に阻止された。９日目に口腔及び歯肉の粘膜がきれいになり、薄いピンク色を呈し、浮腫及び充血の徴候がなかった。歯肉口内炎は、多種化学療法を中断せずに治療された。実施例９患者K.は、主診断の急性白血病で入院し、メタトレキサート５００mg/m²で治療した。化学療法の開始後４日目に食道口内炎の症状が見られた。診察により、口腔及び咽頭腔の粘膜に充血及び浮腫、触診でアフタ性発疹の出血がわかった。粘膜は鋭い痛みがある。食事、特に固形食をとることが強く妨げられる。１.５％ポリダン溶液を次のプログラムで投与した：最初の７日間毎日８回（２時間毎）；８〜９日目に６回；１０日目に４回。薬物性咽頭口内炎の変化は次の通りであった。３日目に痛みが薄らぎ、患者は食事をとり始め、４日目に出血やアフタの数が減り、５〜６日目に発疹が残ったが少数であり、７〜８日目には充血が残った。１０日目に隆起が完全に止まった。口腔及び咽頭腔の粘膜はきれいになり、ピンク色を呈し、浮腫のないことがわかった。食道口内炎は、化学療法を中断せずに治療された。即ち、上記実施例により、口及び咽頭の粘膜の薬物性損傷を治療するためのポリダン溶液の効率が確認される。実施例１０多目的添加剤を用いて化粧クリームを製造する。原料成分を量り分けた後、油相と水相を調製する。水相を調製するために、０.１（重量％）のトリエタノールアミン、２.０（重量％）のグリセリン及び水を７５〜８０℃に加熱する。油相を０.５（重量％）のラノリン、１.０（重量％）の蒸留したモノグリセリド、０.５（重量％）の化粧用ステアリン、２.０（重量％）の香油及び１.０（重量％）のエマルジョンワックスを８５℃まで加熱することにより調製する。次に、油相と水相を一緒に混合する。そのクリーム塊にＤＮＡと保存剤をある一定の条件下（温度、媒体のｐＨ、添加順序）で加える。得られたクリームは、においのよい白色又は薄黄色の均一なエマルジョンである。製造されたクリームの薬理試験は、抗酸化性、光防御性、水分補給性、増殖性及び抗炎症性を有することを示した。アレルギー合併症及び剌激作用は見られなかった。クリームは、皮膚障壁を介して効率よく浸透する。実施例１１ＤＮＡナトリウム塩を添加してローションを調製する。２.０（重量％）のゲル形成成分を水と０.２０（重量％）のグリセリンとを混合する。ゲルを調製した後、次の成分を連続して導入する：７.０（重量％）のエチルアルコール、０.２（重量％）の可溶化剤、０.２５（重量％）のＤＮＡナトリウム塩及び０.２（重量％）の芳香化剤。ローションは、においのよいゲル状液体である。製造されたローションの実験的臨床試験は、抗脂漏作用、光防御作用及び栄養作用が特徴であることを示した。副作用及びアレルギー作用は見い出されなかった。実施例１２生物学的に活性な添加剤としてＤＮＡナトリウム塩を含む歯みがき水を調製する。容器に３５.０（重量％）のエチルアルコール、５.０（重量％）のグリセリン、蒸留水、０.２５（重量％）のＤＮＡ、０.００５（重量％）の食品用染料（インジゴカルミンブルー及びイエロータートラシン）及び１.０（重量％）の芳香化剤を充填する。全成分を混合する。得られた歯みがき水は、におい及び味のよい青色がかった液体である。臨床試験は、アレルギー及び他の合併症のない、抗炎症作用、傷癒合作用及び消毒作用を示した。即ち、上記実施例は、万能化粧用添加剤、多目的化粧用添加剤として用いられたＤＮＡの好ましい性質を示すものである。実施例１３原料成分を量り分けた後に、油相及び水相を調製する。水相を調製するために、３.０（重量％）のグリセリン又は１.２（重量％）のプロピレン及び０.１５（重量％）のトリエタノールアミンを７５〜８０℃に加熱する。次に、１.０（重量％）の無水ラノリン、１.０（重量％）の蒸留したモノグリセリド又はグリセリンモノステアレート又はＤＥＧステアレート、２.０（重量％）の化粧用ステアリン、２.０（重量％）の香油又はブチルステアレート又はイソプロピルパルミテート又はプロピルミリステート、１.０（重量％）のミツロウ、２.０（重量％）のポリエチレングリコール−４００とステアレートのモノ及びジエステルの混合物を８０〜８５℃に溶融することにより、油相を調製する。次に、油相と水相を混合し、３.３３（重量％）の保存剤、０.２５（重量％）のＤＮＡナトリウム塩及び０. ４（重量％）の芳香化剤を添加する。得られたクリームは、においのよい均一で濃厚な白色の塊である。得られたクリームの薬理試験は、水分補給性、光防御性、抗酸化性及び抗炎症性が存在することを示した。アレルギー合併症は見られなかった。このクリームは、皮膚障壁を介して容易に浸透することがわかった。実施例１４原料成分を量り分けた後に、３.０（重量％）のグリセリン又は１.２（重量％）のプロピレングリコール、０.２（重量％）のアクリル酸とペンタエリスリトールのポリアリルエーテルのコポリマー又はアクリル酸のコポリマーのナトリウム塩を用い、７５〜８０℃に加熱することにより水相を調製する。０.５（重量％）のオキシエチル化ラノリン、１.０（重量％）の蒸留したモノグリセリド又はグリセリンモノステアレート又はステアレートＤＥＧ、１.０（重量％）のミツロウ、３.０（重量％）の香油又はブチルステアレート又はイソプロピルパルミネート、３.０（重量％）のポリエチレングルコール−４００とステアリンのモノ及びジエステルの混合物、２.０（重量％）のオレイン酸とポリエチレングリコール−４００のモノ及びジエステルの混合物、０.５（重量％）のアルコール、Ｃ₁₇−Ｃ₁₈留分を用い、８０〜８５℃に加熱することにより油相を調製する。次に、水相と油相を混合し、３.３３（重量％）の複合保存剤、０.２５（重量％）のＤＮＡナトリウム塩及び０.２（重量％）の芳香化剤を添加する。得られたクリームは、においのよい白色又は薄黄色の均一エマルジョンである。製造されたクリームの薬理試験は、抗酸化性、光防御性、水分補給性、増殖性及び抗炎症性の存在することがわかった。アレルギー合併症及び剌激作用はなかった。このクリームは、皮膚障壁を介して効率よく浸透する。参考文献１．S.M．Slinchak，腫瘍学，Kiev“Vysshaya Shkola”，1982，p．199-204．２．M.L．Gershanovich，悪性腫瘍の化学ホルモン療法の合併症，Moscow，“Med itsina”，1982，p．98-142．３．M.D．Mashkovsky，医薬品，Moscow,“Meditsina”，1985，p．172，vol．2. ４．ソビエトの登録医薬品，Moscow,“Interfarmkhim”，1933，p．603．５．M.Bregni 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【手続補正書】【提出日】１９９６年３月１２日【補正内容】請求の範囲１．ＤＮＡのナトリウム塩を少なくとも８０重量％含み、分子量が１２.０ＭＤを超えず、濃色効果が３７％より下でなく、タンパク質が１.５重量％を超えず、水分が１７重量％を超えない、チョウザメの魚精から生成された低分子ＤＮＡの化合物。２．前記ＤＮＡを多価金属と組合わせることを特徴とする請求項１記載の化合物。３．該金属がＺｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｆｅ、Ｐｄ及びＰｔを含む群より選ばれることを特徴とする請求項２記載の化合物。４．請求項１記載のチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含むことを特徴とする、白血球増殖刺激作用を有する医薬製剤。５．請求項２記載の多価金属と組合わせたチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含むことを特徴とする、白血球増殖刺激作用を有する医薬製剤。６．溶液の形であることを特徴とする請求項４記載の医薬製剤。７．注射剤として投与されることを特徴とする請求項６記載の医薬製剤。８．外用に企図されることを特徴とする請求項６記載の医薬製剤。９．ＤＮＡ含量が０.５〜２.５％であることを特徴とする請求項７記載の医薬製剤。 10．前記ＤＮＡの含量が０.２〜２％であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤。 11．ＤＮＡと多価金属の比が１：１〜１：１０００であることを特徴とする請求項５記載の医薬製剤。 12．請求項１記載のチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含むことを特徴とする、抗ウイルス作用を有する医薬製剤。 13．請求項２記載の多価金属と組合わせたチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含むことを特徴とする、抗ウイルス作用を有する医薬製剤。 14．請求項１記載のチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含むことを特徴とする、粘膜損傷治癒刺激作用を有する医薬製剤。 15．請求項２記載の多価金属と組合わせたチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含むことを特徴とする、粘膜損傷治癒刺激作用を有する医薬製剤。 16．薬学的に許容しうる担体、充填剤、添加剤と組合わせて化粧品として用いられることを特徴とする請求項１記載の化合物。 17．歯みがき水又は練り歯みがきであることを特徴とする請求項１６記載の化合物。 18．ローションであることを特徴とする請求項１６記載の化合物。 19．クリーム又はゲルの形であることを特徴とする請求項１６記載の化合物。 20．凍結魚精をクエン酸塩バッファー中でホモジェナイズする工程、ＤＮＡを界面活性剤で脱タンパクする工程、タンパク質を変性及び分離する工程、引き続きＤＮＡを分解する工程、それを特定の混合液から分離する工程及び標的生成物を分離する工程を含むチョウザメの魚精から低分子ＤＮＡを抽出する方法であって、ＤＮＡの分解の前に電気透析及び／又は限外ろ過段階を含み、標的生成物がエチルアルコールで塩溶液から粉末として沈澱することを特徴とする方法。 21．限外ろ過濃縮が２０〜２４℃の温度及び２〜３kg/cm²の圧力で行われることを特徴とする請求項２０記載の方法。 22．電気透析が１５〜２０℃の温度及び１.０〜１.５A/cm²の電流密度で行われることを特徴とする請求項２０記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号９３０２６４７２ (32)優先日 1993年６月10日 (33)優先権主張国ロシア（ＲＵ） (31)優先権主張番号９３０４６３２６ (32)優先日 1993年10月11日 (33)優先権主張国ロシア（ＲＵ） (31)優先権主張番号９３０４６３２７ (32)優先日 1993年10月11日 (33)優先権主張国ロシア（ＲＵ） (31)優先権主張番号９３０４６３２８ (32)優先日 1993年10月11日 (33)優先権主張国ロシア（ＲＵ） (31)優先権主張番号９３０４６３２９ (32)優先日 1993年10月11日 (33)優先権主張国ロシア（ＲＵ） (31)優先権主張番号９３０５１６００ (32)優先日 1993年11月19日 (33)優先権主張国ロシア（ＲＵ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＹ，ＣＺ，ＤＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＪＰ，ＫＺ，ＭＤ，ＮＬ，ＮＯ，ＰＬ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ (72)発明者ベジュレフウャチェスラフウラディミロヴィッチロシア連邦 115528 モスコウシピロフスキプロエズド 63 コルプス１ケーヴィ 490 (72)発明者アナソーヴァイディアグリゴリエヴナロシア連邦 141400 モスコフスカヤオブラストヒムキウリッサジュビレイナヤ 88 ケーヴィ 22 (72)発明者コナレフアレクサンドルアンドレエヴィッチロシア連邦 141700 モスコフスカヤオブラストドルゴプルドニプロスペクトパパエヴァ 14 ケーヴィ 105 (72)発明者カルポフイーゴルニコラエヴィッチロシア連邦 125422 モスコウドミトロフスキプロエズド４ケーヴィ 120 (72)発明者コチェトコヴァマリナガヴリロヴナロシア連邦 141400 モスコフスカヤオブラストヒムキプロスペクトドルズービー４ケーヴィ 44 (72)発明者トレシャリンイワンドミトリエヴィッチロシア連邦 115446 モスコウウリッサアカデミカミリオンシコヴァ 18 ケーヴィ 394 (72)発明者ボドヤギンドミトリーアレクサンドロヴィッチロシア連邦 115142 モスコウコロメンスカヤナベレズナヤ６コルプス１ケーヴィ 689 (72)発明者トレシャリナエレーナミハイロヴナロシア連邦 115446 モスコウウリッサアカデミカミリオンシコヴァ 18 ケーヴィ 394 (72)発明者ペレヴェルゼーヴァエレオノーララファイロヴナロシア連邦 119285 モスコウウリッサピリエヴァ５アケーヴィ 117 (72)発明者シルキンアナトリーボリソヴィッチロシア連邦 115547 モスコウビルユレフスカヤウリッサ 52 ケーヴィ９ (72)発明者イルヤシェンコヴィクトルウラディミロヴィッチロシア連邦 109542 モスコウリャザンスキプロスペクト 70 コルプス３ケーヴィ 125 (72)発明者ススレヴァナターリャアレクサンドロヴナロシア連邦 115446 モスコウウリッサアカデミカミリオンシコヴァ 31 ケーヴィ 386 (72)発明者デュルノフレヴアブラモヴィッチロシア連邦 113054 モスコウストレミャニーペレウロク 21 ケーヴィ 30 (72)発明者ゾボヴァオルガボリソヴナロシア連邦 103220 モスコウウリッサポルタフスカヤ６ケーヴィ 39 (72)発明者カザロヴァイリーナラザレフナロシア連邦 103055 モスコウノヴォレスナヤウリッサ７コルプス２ケーヴィ 37 (72)発明者コロレヴァネリーボリソヴナロシア連邦 125047 モスコウウリッサファデエヴァ６ケーヴィ 172 (72)発明者キラコシアンステパンヴァズゲノヴィッチロシア連邦 121158 モスコウウリッサアカデミカチャロメーヤ６コルプス１ケーヴィ 22 (72)発明者シモノヴァリディアヴァシリエヴナロシア連邦 123367 モスコウポレススキプロエズド６コルプス２ケーヴィ 31 (72)発明者シモノヴァリュードミラヴァシリエヴナロシア連邦 125083 モスコウウリッサ８マルタ６ケーヴィ 35 (72)発明者タラソヴァラリサアレクサンドロヴナロシア連邦 125414 モスコウウリッサオネズスカヤ 53 コルプス３ケーヴィ 373

Claims

【特許請求の範囲】１．ＤＮＡのナトリウム塩を少なくとも８０重量％含み、分子量が１２.０ＭＤを超えず、濃色効果が３７％より下でなく、タンパク質が１.５重量％を超えず、水分が１７重量％を超えない、チョウザメの魚精から生成された低分子ＤＮＡの化合物。２．前記ＤＮＡを多価金属と組合わせることを特徴とする請求項１記載の化合物。３．該金属がＺｎ、Ｃｏ、Ｎｉ、Ｆｅ、Ｐｄ及びＰｔを含む群より選ばれることを特徴とする請求項２記載の化合物。４．請求項１記載のチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含む医薬製剤。５．請求項２記載の多価金属と組合わせたチョウザメの魚精の低分子ＤＮＡとしての有効成分の有効量及び薬学的に許容しうる添加剤、希釈剤又は充填剤を含む医薬製剤。６．溶液の形であることを特徴とする請求項４記載の医薬製剤。７．注射剤として投与されることを特徴とする請求項６記載の医薬製剤。８．外用に企図されることを特徴とする請求項６記載の医薬製剤。９．好ましいＤＮＡ含量が０.５〜２.５％であることを特徴とする請求項７記載の医薬製剤。 10．前記ＤＮＡの好ましい含量が０.２〜２％であることを特徴とする請求項８記載の医薬製剤。 11．ＤＮＡと多価金属の比が１：１〜１：１０００であることを特徴とする請求項５記載の医薬製剤。 12．薬学的に許容しうる担体、充填剤、添加剤と組合わせて化粧品として用いられることを特徴とする請求項１記載の化合物。 13．歯みがき水又は練り歯みがきであることを特徴とする請求項１２記載の化合物。 14．ローションであることを特徴とする請求項１２記載の化合物。 15．クリーム又はゲルの形であることを特徴とする請求項１２記載の化合物。 16．凍結魚精をクエン酸塩バッファー中でホモジェナイズする工程、ＤＮＡを界面活性剤で脱タンパクする工程、タンパク質を変性及び分離する工程、引き続きＤＮＡを分解する工程、それを特定の混合液から分離する工程及び標的生成物を分離する工程を含むチョウザメの魚精から低分子ＤＮＡを抽出する方法であって、ＤＮＡの分解の前に電気透析及び／又は限外ろ過段階を含み、標的生成物がエチルアルコールで塩溶液から粉末として沈澱することを特徴とする方法。 17．限外ろ過濃縮が２０〜２４℃の温度及び２〜３kg/cm²の圧力で行われることを特徴とする請求項１６記載の方法。 18．電気透析が１５〜２０℃の温度及び１.０〜１.５A/cm²の電流密度で行われることを特徴とする請求項１６記載の方法。