JPH08511784A

JPH08511784A - エイズを撲滅する医薬品を製造するためのノナペプチドおよびデカペプチドの使用

Info

Publication number: JPH08511784A
Application number: JP7502363A
Authority: JP
Inventors: エンゲル，ユールゲン; クッチャー，ベルンハルト; ベルント，ミヒャエル; ニーマイアー，ウルフ
Original assignee: アスタメディカアクチエンゲゼルシャフト
Priority date: 1993-06-18
Filing date: 1994-04-02
Publication date: 1996-12-10
Also published as: HUT73673A; UA41938C2; NO954996L; US5985834A; CN1136915C; PT703786E; SG52240A1; IL110045A0; WO1995000168A1; CN1125400A; TW370532B; PL312219A1; PL175580B1; AU6564794A; BR9406893A; CZ308995A3; HU9503605D0; IL110045A; ES2172533T3; FI956014L

Abstract

(57)【要約】ＬＨＲＨ拮抗作用およびボンベシン拮抗作用を有するノナペプチドおよびデカペプチドは、エイズおよびＡＲＣを撲滅する医薬品の製造、ならびに免疫刺激作用する医薬品の製造に適当である。

Description

【発明の詳細な説明】エイズを撲滅する医薬品を製造するためのノナペプチドおよびデカペプチドの使用１９８１年以降、ニューヨークおよびサンフランシスコの同性愛男性の間に、多数の、それまでは希な不治の感染が観察された。全ての患者において免疫保護の重い不全が見出された。その後まもなくパスツール研究所のリュック・モンタニエによって新しいウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus，HIV）が発見された。現在、エイズの治療にはジデスオキシヌクレオシド−類似体３’−アジド−３ ’−デスオキシチミジン（ＡＺＴ）またはジドブジン（ＩＮＮ）だけが認められている。この化合物は症候を緩和し、かつエイズ患者の平均余命を引伸ばすことができる（欧州特許出願公開第２０６４９７号明細書）。ＡＺＴ治療下では、抵抗性のウイルス菌株の形成、および骨髄上への重大な副作用が引き起こされる。他の薬剤は臨床試験中である。即ち、ドイツ連邦共和国特許出願公開第３９３５５８０号明細書は、ＨＩＶ感染を抑制する薬剤を製造するための１−オクタデシル−２−メチル−グリセロ−３−ホスホコリンの使用を記載している。欧州特許出願公開第４９３３７８号明細書は、同一の目的のための２’−３’−デデオキシグアノシンの使用または２’−３’−デデオキシグアノシンのモノホスフェートまたは三リン酸塩の使用を記載している。全てこれらの物質はまだ臨床開発中であり、市場性にはまだ達していなかった。抗ウイルス化学療法の分野に使用される薬剤は、目下望ましい選択性を有していない。即ち、病気の進展を抑制するだけでなく、ウイルスの増殖を妨害し、その上患者の不全となった免疫系を安定化させることができるような、良好に認容性で、高活性の薬剤への高い要求がある。さて、驚くべきことにＣＥＭ−ＩＷ−細胞でのエイズ・スクリーニング試験で、式ＩＩ〜ＶＩＩＩによるＬＨＲＨ−類似デカペプチドは、抗ＨＩＶ作用、ならびに細胞培養に対する成長刺激作用を有することが見い出された。本発明の対象は、ペプチド性ＬＨＲＨ−拮抗薬およびボンベシン拮抗薬を基礎とする薬剤の製造である。この化合物は最大に使用される処方の場合でも、毒性が僅かである。ＬＨＲＨのアミノ酸配列は次の通りである：ＬＨＲＨ＝ｐ−Ｇｌｕ¹−Ｈｉｓ²−Ｔｒｐ³−Ｓｅｒ⁴−Ｔｙｒ⁵−Ｇｌｙ⁶−Ｌｅｕ⁷ −Ａｒｇ⁸−Ｐｒｏ⁹−Ｇｌｙ¹⁰−ＮＨ ² 一般式Ｉは本発明によるペプチドを表わす：Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）−Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）−ｘｘｘ−Ａ−Ｂ５−ｙｙｙ− ｚｚｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂ 式Ｉこの場合、次のものがあてはまる：ｘｘｘ＝Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）ｙｙｙ＝Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｒ）、Ｄ−ＨｃｉＲは（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アシルまたは（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）−アルキルを表わしてよい。ｚｚｚ＝Ｌ−Ｌｅｕ、ＮＬｅ、Ｎｖａ、ｔ−ＬｅｕＡ＝Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（糖）糖はグルコース、ガラクトース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドースまたはタロースを意味してよいＢ＝Ｔｙｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｍｏｐボンベシンは次のアミノ酸配列を有する：ボンベシン＝ｐ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ａｒｇ−Ｌｅｕ− Ｇｌｙ−Ａｓｎ⁶−Ｇｌｎ⁷−Ｔｒｐ⁸ −Ａｌａ⁹−Ｖａｌ¹⁰−Ｇｌｙ¹¹−Ｈｉｓ¹²−Ｌｅｕ¹³−Ｍｅｔ¹⁴−ＮＨ₂ 式ＩＸ式Ｘによるボンベシン類似ペプチドは次の構造を有する：［Ｄ−Ｔｐｉ⁶、Ｌｅｕ−Ｐｓｉ−Ｌｅｕ¹³−¹⁴］ＢＮ（６〜１４）式Ｘさらにエイズ治療のため一般式ＸＩによるボンベシン拮抗薬が使用されてよい：Ｘ−Ａ¹−Ａ²−Ａ³−Ａ⁴−Ａ⁵−Ａ⁶−Ａ⁷−Ａ⁸−ｐｓｉ−Ａ⁹−Ｑ式ＸＩこの場合、次のことがあてはまる：Ｑは−ＮＨ₂または−ＯＱ¹を表わし、但し、Ｑ¹は：水素、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）−アルキル、フェニルを表わすか、または炭素原子７〜１０個を有するアルキル基によって１回または数回置換されているフェニルを表わし、Ｘは：水素を表わすか、または基Ａ²との単結合、炭素原子１〜６個を有する有機酸のアシル基または基：を表わし、但し、１．）Ｒ¹は上記のＱ¹で挙げられた意味を表わしてよいか、またははを表わしてよく、この場合、Ｒ²およびＲ³は同一かまたは異なっていてよく、かつ水素またはメチルを表わしてよく、さらにＲ²は炭素原子１〜１０個を有するアルキル基、フェニル基を表わすか、炭素原子１〜１０個を有する１つまたは複数のアルキル基によって置換されたフェニル基を表わすか、１つまたは複数のハロゲン原子、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素によって置換されているフェニル基を表わす。Ａ¹は：Ｄ−、Ｌ−、またはＤ、Ｌ−ｐ−Ｇｌｕ、Ｎａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｈｉ、Ｔｙｒ、Ｈｃａ、Ｔｐｉ、Ｈｐｐ、Ｍｐｐ、Ｔｒｐ、またはベンゼン環で置換されたＴｒｐを表わし、この場合、１つまたは複数の置換基はハロゲン、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂、−ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₃−アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₃−アルコキシの群から選択されており、およびハロゲンはフッ素、塩素または臭素を表わしてよく、Ａ²は：Ａｓｐ、Ｄｐａ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、ＭｅｔＨｉｓ、Ｈｉｓ（Ｂｚ）、Ｈｉｓ（ｚ）を表わすか、またはＤｐａ（ｘ）、Ａｓｐ（ｙ）、Ｇｌｕ［−］およびＧｌｕ［ｙ］の群からの式を表わし、この場合、Ｘはアシル基、アルキル基（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）または１つの単結合を表わし、および −ＯＲ⁵を表わし、またはＹはを表わし、この場合、Ｒ⁵およびＲ⁶は同一かまたは異なっていてよく、かつＲ⁵は水素、Ｃ₁〜Ｃ₃−アルキルまたはフェニルを表わし、Ｒ⁶は水素またはＣ₁ 〜Ｃ₃−アルキルまたはを表わし、および［−］はＸが単結合である場合には、カルボキシル基とα −アミノ基とを結合する単結合であり、Ａ³はＮａｌ、Ｐａｌ、Ｔｐｉ、Ｔｒｐ、ＭｅＴｒｐ、Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）または置換されたベンゼン環を有するＴｒｐを表わし、この場合、ベンゼン環はハロゲン、Ｎｏ₂、ＮＨ₂、ＯＨ、メチル、エチルまたはＣ₁〜Ｃ₃−アルコキシの群からの１員または複数員によって置換されており、この場合、ハロゲンはフッ素、塩素および臭素を表わしてよく、Ａ⁴はＡｌａを表わし、Ａ⁵はＶａｌまたはＭｅＶａｌを表わし、Ａ⁶はＧｌｙ、Ｐｈｅ、またはＤ−Ａｌａを表わし、Ａ⁷はＨｉｓ、ＭｅＨｉｓ、Ｈｉｓ（Ｂｚ）、Ｈｉｓ（Ｚ）、Ｌｙｓ（Ｚ）またはＰａｌを表わし、Ａ⁸はＬｅｕまたはＰｈｅの還元同配体を表わし、Ａ⁹はＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｔｐｉまたは置換されたＴｐｉを表わし、但し、ベンゼン環はＡ³の場合と同一の置換基によって置換されており、およびＴｒｐのベンゼン環は同一の置換基によって置換されており、ならびに薬学的に受容可能なペプチドの塩、例えば塩酸塩、トリフルオルアセテート、酢酸塩、硫酸塩、リン酸塩、メシラートまたはトシラートを表わす。アミノ酸、ペプチドおよびこれらの誘導体に使用可能な略記は、生化学命名法のためのＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ−委員会から推奨されている。（European J．Biochem．1984，138，9-37）あまり使用されないアミノ酸の略記：Ｄｐａは２，３−ジアミノプロピオン酸を表わし、Ｎａｌは３−（２−ナフチル）−アラニンを表わし、Ｔｈｉはβ−２’−チエニルアラニンを表わし、ＴＰｉは２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド−［３，４−ｂ］−インドール−３−カルボン酸を表わし、Ｎｉｃはニコチオニルを表わし、ＭｏＰは４−（モルポリノメチル）−フェニルアラニンを表わす。一般式Ｉによる特に有利な化合物は、次のアミノ酸配列を表わす：式ＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｎｌｅ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］ −ＬＨＲＨ式ＩＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、ＤＰａｌ（３）³、Ｄ− Ｃｉｔ⁶、Ｎｖａ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］− ＬＨＲＨ式ＩＶ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｔｒｐ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨ式Ｖ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨ式ＶＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −ＨＣｉ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨ式ＶＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、ｔ−Ｌｅｕ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］− ＬＨＲＨ式ＶＩＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ａｌａ⁹、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］ＬＨＲＨ本発明によるオリゴペプチドは、文献に公知の常法により合成される。この場合に該当する方法の要点記載は、例えば“M.Bodanszky、Principles of Peptide Synthesis，シュプリンガー社（Springer-Verlag）、ベルリン、ハイデルベルク、ニューヨーク 1984”に見られる。ポリペプチドの固体相合成の原則は、例えばJ.M.StewartおよびJ.D.Youngによる綱要書、Solid Phase Peptide Synthesis Pierce Chem．Co.，Rockford，II、 1984（第２版）中、およびL．Barany他による概要論文、Int．J．Peptide Prote in Res．30，705〜739（1987）中に説明されている。式ＩＩ〜ＶＩＩＩによるペプチドの合成はAdvance d Chem．Tech/Louisville（Kentucky）社、米国、のメチル−ベンズヒドリルアミン樹脂（塩酸塩−市販型）での構成図により達成され、この構成図はそれぞれジクロルメタン中に１０％のトリエチルアミン（Ｖ／Ｖ）によってＣ−末端Ｂｏｃ−Ｄ−アラニンを結合する前に、遊離塩基へと移行された。全ての引続くＮα−Ｂｏｃ−被保護アミノ酸は３倍のモル過剰量で、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の存在下にＣＨ₂Ｃｌ₂／ＤＭＦ中で９０分で結合され、組成８０／２０（Ｖ／Ｖ）のジクロルメタン／ジメチルホルムアミド−混合物とＢｏｃ−保護基へと、ジクロルメタン中に５０％のトリフルオル酢酸（ＴＦＡ）を半時間作用させることによって分離された。残りの遊離アミノ官能基はアセチルイミダゾールの５倍の過剰量でアセチル化されることによって、ジクロルメタン中で遮断された。樹脂でのペプチド構造の一連の反応工程は構成図から判明する。樹脂に結合したペプチドの分離のため、固体相合成のその都度の最終生成物は真空中で乾燥され、かつＨＦ／アニソール１０：１（Ｖ／Ｖ）の５００倍の過剰量中で０℃で４５〜６０分間処理された。ＨＦとアニソールとが真空中で留去された後、白色の固形物としての無水エチルエーテルを用いて撹拌することによって、全ての粗製ペプチドアミドが沈澱し、一緒に沈澱したポリマー担体の分離は５０％（Ｖ／Ｖ）の水性酢酸を用いて洗浄することによって行なわれた。真空中で酢酸溶液を注意深く蒸発濃縮することによって、それぞれのペプチドは、無水エーテルの添加後、冷時に漸次白色固形物へと変化するような高粘性油として得られることができた。粗製ペプチドは単離され、半融ガラス原料上で無水エーテルで洗浄され、真空中で乾燥された。製取実験の洗浄は、下記の条件下に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて行なわれた：製取実験のＨＰＬＣのためのパラメーター装置：ポンプシマズ（Shimadzu）ＬＣ−８Ａ検出器シマズ（Shimadzu）ＳＰＤ−６Ａ積分器シマズ（Shimadzu）Ｃ−Ｒ４Ａ制御器シマズ（Shimadzu）ＳＣＬ−６Ａ試薬：アセトニトリル Lichrosolv Merck Art.3 0 トリフルオル酢酸 Fluka No.91700 最純水（Seralpur−装置）移動相Ａ：水９７０ｍｌ（ＶＥ水最純）アセトニトリル＋３０ｍｌトリフルオル酢酸＋１ｍｌ移動相Ｂ：水３００ｍｌ（ＶＥ水、最純）アセトニトリル＋７００ｍｌトリフルオル酢酸＋１ｍｌ流量：４０ｍｌ／ｍｉｎ圧力：１４バール製取実験の平均経過時間：約３０〜４０分全ての合成ペプチドの正確な同一性は、ＨＰＬＣ清浄化の後、アミノ酸分析、質量分析および¹Ｈ−ＮＭＲ−分光器検査によって証明された。ＬＨ−ＲＨ−ペプチドを固定相合成するための構成図：固定相合成の繰り返す作業工程を次の図式にまとめた；工程１から１７はそれぞれ１つのアミノ酸を結合するための一連の必要な作業工程を記載している：前述の構成図に、よる合成生成物：Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）−Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）−Ｘｘｘ−Ａ−Ｂ−Ｙｙｙ−Ｚｚｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂ （式Ｉによる）合成の完全性をTh．Christensen; Acta Chem．Scand，B 33，763（1979）によるクロラニル試験およびStewart，Youngによるカイザーのニンヒドリン試験を用いて試験した。本発明は、ウイルス感染の治療、有利にエイズの処置のための薬剤を製造する方法に関する。さらに、非ウイルス治療に使用される新規のペプチドおよびこのペプチドの合成が記載される。このペプチドは最大に使用される配量の場合でさえ毒性が僅かである。一緒に試験した基準化合物アジドチミジンと比較して、ＮＣＩ試験の場合のＥＣ₅₀値は試験したペプチドの場合、５．９×１０^-7モル／リットルから２．０×１０^-5モル／リットルの間である。一緒に処理した基準化合物ＡＺＴ（アジドチミジン）は、例えば３．１０× １０^-9モル／ｌのＥＣ５０値を有した。全化合物は１０^-4〜１０^-8モル／ｌの範囲内で処方した。したがって、常法により挙げられたＩＣ５０値（非感染培養液中で細胞５０％が死滅するような、阻害的濃度）は、最大の処方量よりも大きい。処理した感染培養液は、４．５×１０^-5モル／ｌのＥＣ５０値を有する。処理した非感染培養液の数値はＩＣ５０値にまで減少しないので、ＩＣ５０値には最大の処方量に対する数値だけが記載されてよく、即ちＩＣ５０＝＞３．３×１０^-5 モル／ｌである。この場合、治療係数（ＴＩ５０＝ＩＣ５０／ＥＣ５０）は７．３０を上回る。抗ＨＩＶ活性に対するスクリーニング法の記述この方法は、ウイルス増殖周期の全相中で有効な作用物質を見つけ出すために適当である。試験原理は、ＨＩＶウイルスによるＴ４−リンパ球の破壊である。少量のＨＩＶウイルスを細胞培養液に添加する。Ｔ４−リンパ球を死滅させ、かつその結果を利用することができるようにするため、少なくとも２つの完全なウイルス再生産周期が必要である。作用物質がビリオン（Virion）（ウイルス粒子）、細胞またはウイルス遺伝子の生成物と反応し、その結果、ウイルス活性と相互作用し、従ってウイルスの増殖を遮断し、細胞を死滅前および細胞溶解前に保持することになる。ウイルスで感染した多数の細胞を試験できるようにするため、試験体系を自動化した。しかし、縮退し、変性しまたは急速に変形される化合物は、試験構成を用いて確実には発見されることができない。試験のプラス制御としては、ＡＺＴ（アジドチミジン）およびＤＤＣが使用される。試験法１．Ｔ４−リンパ球（ＣＥＭ−細胞系列）を微量滴定板中にウイルス：細胞約１：０．０５の割合でウイルスを添加する。２．試験すべき物質は、他に記載がない場合には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解され、かつ１：２００（重量部）の割合で希釈される。他の希釈を半対数工程の場合にＤＭＳＯを用いて行ない、次に感染細胞培養液ならびに非感染細胞培養液上に添加する。３．培養液を３７℃で６〜７日間５％のＣＯ₂雰囲気中で培養する。４．テトラゾリウム塩ＸＴＴを細胞培養液に添加し、細胞培養液をさらに培養し、その結果、フェナジンメトスルホネート（ＰＭＳ）と結合させることによって、残生細胞を通してホルマザン呈色反応を進行させることができる。５．個々の細胞培養液を分光測光により分析し、顕微鏡により残生細胞を試験し、その結果、保護効果を確認する。６．処理されたウイルス感染細胞を、処理された非感染細胞と比較する。その他の比較（未処理の感染細胞および未処理非感染細胞、作用物質含有で細胞不含の凹所）を同一の板上で行なった。７．試験された化合物の活性を測定する。他の実験に基づく詳細はWeislow，J.Nat.Canc.Inst．81(8)，577頁（1989）から知ることができる。それによって、本発明によるペプチドは薬剤の製造、エイズの抑制、および免疫不全ウイルスを有する感染と関連した病気（エイズ関連症候群、ＡＲＣ）の抑制に適当である。投薬指示：本発明による薬剤の投薬は、毎日の投与の場合０．０１ｍｇ〜１０ｍｇである。例１式ＩＩによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４３１ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．６５〜７．１；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２．１４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９５ｍ、ＮＨＣＯＮＨ₂Ｃｉｔ；４．８〜４．１、多数の多重線、Ｃ_dＨ；３．７５および３．５、多重線２；脂肪族Ｈ；３．２〜２．６５、多数の多重線、ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．３、多数の多重線、残留脂肪族Ｈ；１、７８０、ｄ、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２０、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８０、ｍ、Ｎｌｅ例２式ＩＩＩによるペプチド：ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ⁶、２５０ＭＨｚ）δ：８．６５〜７．１；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９ｍ、ＮＨＣＯＮＨ₂、Ｃｉｔ；４．８〜４．１、多数の多重線、Ｃ₂Ｈ；３．７５および３．５、多重線２；脂肪族Ｈ；３．２〜２．６５、多数の多重線、Ｃβ Ｈ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．２５、多数の多重線、残留脂肪族Ｈ；１、７０、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２０、ｄ、３Ｈ、Ｃβ Ｈ、Ａｌａ；０．８５、ｍ３Ｈ、Ｎｖａ質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４１７例３式ＩＶによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４６９ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．２〜６．５；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；５．８および５．４、２ｍ３Ｈ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ₂ シトロリア（Citrollia）、４．５、４．３、４．２および４．０、多重線Ｃ_dＨ；３．８〜２．６、多数の多重線、脂肪族ＣβＨおよび芳香族ＣβＨ；２．０〜１．９、多数の多重線、残留脂肪族プロトン；１、６、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．１、ｄ、２Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．７、ｄ、６ＨＣδＨｌｅｕ例４式ｖによるペプチド、ＩＮＮ：セトロレリックス（Cetrorelix）質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４３１ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．７〜７．２、多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０５および６．６５、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．８５、ｍＮＨＣＯＮＨ₂Ｃｉｔ；４．８〜４．１、多数の多重線、ＣａＨ；３．８および３．５５、２ｍ、脂肪族Ｈ；３．３〜２．７ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．３、多数の多重線、残留脂肪族信号；１、７、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８５２ｄ、６ＨＣδＨｌｅｕ例５式ＶＩによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４４４ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．６〜７．１、多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；４．８〜４．０、多数の多重線、Ｃ αＨ；３．７および３．５、２ｍ、４Ｈ；３．２〜２．７、多数の多重線ＣαＨ；３．７および３．５、２ｍ、４Ｈ；３．２〜２．７、多数の多重線、ＣβＨ芳香族アミノ酸および脂肪族アミノ酸；２．０〜１．０、多数の多重線、残留脂肪族信号；１、７、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ；１．２、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８、ｄｄ、６Ｈ、ＣδＨｌｅｕ例６式ＶＩＩによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４３１ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．６〜７．１、多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９ｍＮＨＣＯＮＨ₂、Ｃｉｔ；４．８〜４．０、多数の多重線、ＣαＨ；３．８５および３．５、多重線２、脂肪族Ｈ；３．１〜２．７多数の多重線ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．３、多数の多重線、残留脂肪族Ｈ；１、７、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２０、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８５、５、９Ｈ、ｔ−ブチル、Ｔｌｅ例７式ＶＩＩＩによるペプチド質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４０５ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆ 、２５０ＭＨｚ）δ：９．１〜７．３；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．２１、ｄｄ、４Ｈ、芳香族Ｈｐ−ｃｌ−Ｐｈｅ；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９および５．４、２ｍ、３Ｈ、ＮＨＣＯＮＨ₂ Ｃｉｔ；４．７〜４．１、多数の多重線、ＣαＨ；３．５５〜２．８、多数の多重線、Ｃ βＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；１、７０、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．５５および１．４５、２ｍ脂肪族信号ＡｒｇおよびＬｅｕ；０．８０、ｄｄ、６Ｈ、ＣδＨＬｅｕ

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９５年７月１２日【補正内容】明細書エイズを撲滅する医薬品を製造するためのノナペプチドおよびデカペプチドの使用１９８１年以降、ニューヨークおよびサンフランシスコの同性愛男性の間に、多数の、それまでは希な不治の感染が観察された。全ての患者において免疫保護の重い不全が見出された。その後まもなくパスツール研究所のリュック・モンタニエによって新しいウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（human immunodeficiency virus，HIV）が発見された。現在、エイズの治療にはジデスオキシヌクレオシド−類似体３’−アジド−３ ’−デスオキシチミジン（ＡＺＴ）またはジドブジン（ＩＮＮ）だけが認められている。この化合物は症候を緩和し、かつエイズ患者の平均余命を引伸ばすことができる（欧州特許出願公開第２０６４９７号明細書）。ＡＺＴ治療下では、抵抗性のウイルス菌株の形成、および骨髄上への重大な副作用が引き起こされる。他の薬剤は臨床試験中である。即ち、ドイツ連邦共和国特許出願公開第３９３５５８０号明細書は、ＨＩＶ感染を抑制する薬剤を製造するための１−オクタデシル−２−メチル−グリセロ−３−ホスホコリンの使用を記載している。欧州特許出願公開第４９３３７８号明細書は、同一の目的のための２’−３’−デデオキシグアノシンの使用または２’-３’-デデオキシグアノシンのモノホスフェートまたは三リン酸塩の使用を記載している。全てこれらの物質はまだ臨床開発中であり、市場性にはまだ達していなかった。抗ウイルス化学療法の分野に使用される薬剤は、目下望ましい選択性を有していない。即ち、病気の進展を抑制するだけでなく、ウイルスの増殖を妨害し、その上患者の不全となった免疫系を安定化させることができるような、良好に認容性で、高活性の薬剤への高い要求がある。さて、驚くべきことにＣＥＭ−ＩＷ−細胞でのエイズ・スクリーニング試験で、式ＩＩ〜ＶＩＩＩによるＬＨＲＨ−類似デカペプチドは、抗ＨＩＶ作用、ならびに細胞培養に対する成長刺激作用を有することが見い出された。本発明の対象は、ペプチド性ＬＨＲＨ−拮抗薬を基礎とする薬剤の製造である。この化合物は最大に使用される処方の場合でも、毒性が僅かである。ＬＨＲＨのアミノ酸配列は次の通りである：ＬＨＲＨ＝ｐ−Ｇｌｕ¹−Ｈｉｓ²−Ｔｒｐ³-Ｓｅｒ⁴−Ｔｙｒ⁵−Ｇｌｙ⁶-Ｌｅｕ⁷ −Ａｒｇ⁸−Ｐｒｏ⁹−Ｇｌｙ¹⁰−ＮＨ ² 一般式Ｉは本発明によるペプチドを表わす：Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）−Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）−ｘｘｘ−Ａ−Ｂ５−ｙｙｙ− ｚｚｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂ 式Ｉこの場合、次のものがあてはまる：ｘｘｘ＝Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）ｙｙｙ＝Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｌｙｓ（Ｒ）、Ｄ−ＨｃｉＲは（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アシルまたは（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）−アルキルを表わしてよい。ｚｚｚ＝Ｌ−Ｌｅｕ、ＮＬｅ、Ｎｖａ、ｔ−ＬｅｕＡ＝Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（糖）糖はグルコース、ガラクトース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドースまたはタロースを意味してよいＢ＝Ｔｙｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｍｏｐならびに薬学的に受容可能なペプチドの塩、例えば塩化水素酸塩、トリフルオルアセテート、酢酸塩、硫酸塩、リン酸塩、メシラートまたはトシラートを使用することができる。アミノ酸、ペプチドおよびこれらの誘導体に使用可能な略記は、生化学命名法のためのＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ−委員会から推奨されている。（European J．Bioc hem．1984，138，9-37）比較的常用されないアミノ酸の略記：Ｄｐａは２，３−ジアミノプロピオン酸を表わし、Ｎａｌは３−（２−ナフチル）−アラニンを表わし、Ｔｈｉはβ−２’−チエニルアラニンを表わし、Ｔｐｉは２，３，４，９−テトラヒドロ−１Ｈ−ピリド−［３，４−ｂ］−インドール−３−カルボン酸を表わし、Ｎｉｃはニコチオニルを表わし、Ｍｏｐは４−（モルポリノメチル）−フェニルアラニンを表わす。一般式Ｉによる特に有利な化合物は、次のアミノ酸配列を表わす：式ＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｎｌｅ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］ −ＬＨＲＨ式ＩＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、ＤＰａｌ（３）³、Ｄ− Ｃｉｔ⁶、Ｎｖａ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］− ＬＨＲＨ式ＩＶ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｔｒｐ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨ式Ｖ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨ式ＶＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −ＨＣｉ？、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨ式ＶＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、ｔ−Ｌｅｕ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］− ＬＨＲＨ式ＶＩＩＩ＝［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ａｌａ⁹、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］ −ＬＨＲＨ本発明によるオリゴペプチドは、文献に公知の常法により合成される。この場合に該当する方法の要点記載は、例えば“M.Bodanszky、Principles of Peptide Synthesis，シュプリンガー社(Springer-Verlag)、ベルリン、ハイデルベルク、ニューヨーク 1984”に見られる。ポリペプチドの固体相合成の原則は、例えばJ.M.StewartおよびJ.D.Youngによる綱要書、Solid Phase Peptide Synthesis Pierce Chem．Co.，Rockford，II、 1984（第２版）中、およびL．Barany他による概要論文、Int．J．Peptide Prote in Res．30，705〜739（1987）中に説明されている。式ＩＩ〜ＶＩＩＩによるペプチドの合成はAdvanced Chem．Tech/Louisville（ Kentucky）社、米国、のメチル−ベンズヒドリルアミン樹脂（塩酸塩−市販型）での構成図により達成され、この構成図はそれぞれジクロルメタン中に１０％のトリエチルアミン（Ｖ／Ｖ）によってＣ−末端Ｂｏｃ−Ｄ−アラニンを結合する前に、遊離塩基へと移行された。全ての引続くＮα−Ｂｏｃ−被保護アミノ酸は３倍のモル過剰量で、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＣ）および１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の存在下にＣＨ₂Ｃｌ₂／ＤＭＦ中で９０分で結合され、組成８０／２０（Ｖ／Ｖ）のジクロルメタン／ジメチルホルムアミド−混合物とＢｏｃ−保護基へと、ジクロルメタン中に５０％のトリフルオル酢酸（ＴＦＡ）を半時間作用させることによって分離された。残りの遊離アミノ官能基はアセチルイミダゾールの５倍の過剰量でアセチル化されることによって、ジクロルメタン中で遮断された。樹脂でのペプチド構造の一連の反応工程は構成図から判明する。樹脂に結合したペプチドの分離のため、固体相合成のその都度の最終生成物は真空中で乾燥され、かつＨＦ／アニソール１０：１（Ｖ／Ｖ）の５００倍の過剰量中で０℃で４５〜６０分間処理された。ＨＦとアニソールとが真空中で留去された後、白色の固形物としての無水エチルエーテルを用いて撹拌することによって、全ての粗製ペプチドアミドが沈澱し、一緒に沈澱したポリマー担体の分離は５０％（Ｖ／Ｖ）の水性酢酸を用いて洗浄することによって行なわれた。真空中で酢酸溶液を注意深く蒸発濃縮することによって、それぞれのペプチドは、無水エーテルの添加後、冷時に漸次白色固形物へと変化するような高粘性油として得られることができた。粗製ペプチドは単離され、半融ガラス原料上で無水エーテルで洗浄され、真空中で乾燥された。製取実験の洗浄は、下記の条件下に高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いて行なわれた：製取実験のＨＰＬＣのためのパラメーター装置：ポンプシマズ（Shimadzu）ＬＣ−８Ａ検出器シマズ（Shimadzu）ＳＰＤ−６Ａ積分器シマズ（Shimadzu）Ｃ−Ｒ４Ａ制御器シマズ（Shimadzu）ＳＣＬ−６Ａ試薬：アセトニトリル Lichrosolv Merck Art.3 0 トリフルオル酢酸 Fluka No.91700 最純水（Seralpur−装置）移動相Ａ：水９７０ｍｌ（ＶＥ水最純）アセトニトリル＋３０ｍｌトリフルオル酢酸＋１ｍｌ移動相Ｂ：水３００ｍｌ（ＶＥ水、最純）アセトニトリル＋７００ｍｌトリフルオル酢酸＋１ｍｌ流量：４０ｍｌ／ｍｉｎ圧力：１４バール製取実験の平均経過時間：約３０〜４０分全ての合成ペプチドの正確な同一性は、ＨＰＬＣ清浄化の後、アミノ酸分析、質量分析および¹Ｈ−ＮＭＲ−分光器検査によって証明された。ＬＨ−ＲＨ−ペプチドを固定相合成するための構成図：固定相合成の繰り返す作業工程を次の図式にまとめた；工程１から１７はそれぞれ１つのアミノ酸を結合するための一連の必要な作業工程を記載している：前述の構成図による合成生成物：Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）−Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）−Ｘｘｘ−Ａ−Ｂ−Ｙｙｙ−Ｚｚｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂ （式Ｉによる）合成の完全性をTh．Christensen; Acta Chem．Scand，B 33，763（1979）によるクロラニル試験およびStewart，Youngによるカイザーのニンヒドリン試験を用いて試験した。本発明は、ウイルス感染の治療、有利にエイズの処置のための薬剤を製造する方法に関する。さらに、非ウイルス治療に使用される新規のペプチドおよびこのペプチドの合成が記載される。このペプチドは最大に使用される配量の場合でさえ毒性が僅かである。一緒に試験した基準化合物のアジドチミジンと比較して、ＮＣＩ試験の場合のＥＣ₅₀値は試験したペプチドの場合、５．９×１０^-7モル／リットルから２．０×１０^-5 モル／リットルの間である。一緒に処理した基準化合物ＡＺＴ（アジドチミジン）は、例えば３．１０× １０^-9モル／ｌのＥＣ５０値を有した。全化合物は１０^-4〜１０^-8モル／ｌの範囲内で処方した。したがって、常法により挙げられたＩＣ５０値（非感染培養液中で細胞５０％が死滅するような、阻害的濃度）は、最大の処方量よりも大きい。処理した感染培養液は、４．５×１０^-5モル／ｌのＥＣ５０値を有する。処理した非感染培養液の数値はＩＣ５０値にまで減少しないので、ＩＣ５０値には最大の処方量に対する数値だけが記載されてよく、即ちＩＣ５０＝＞３．３×１０^-5モル／ｌである。この場合、治療係数（ＴＩ５０＝ＩＣ５０／ＥＣ５０）は７．３０を上回る。抗ＨＩＶ活性に対するスクリーニング法の記述この方法は、ウイルス増殖周期の全相中で有効な作用物質を見つけ出すために適当である。試験原理は、ＨＩＶウイルスによるＴ４−リンパ球の破壊である。少量のＨＩＶウイルスを細胞培養液に添加する。Ｔ４−リンパ球を死滅させ、かつその結果を利用することができるようにするため、少なくとも２つの完全なウイルス再生産周期が必要である。作用物質がウイリオン（Virion）（ウイルス様の粒子）、細胞またはウイルス遺伝子の生成物と反応し、その結果、ウイルス活性と相互作用し、従ってウイルスの増殖を遮断し、細胞を死滅前および細胞溶解前に保持することになる。ウイルスで感染した多数の細胞を試験できるようにするため、試験体系を自動化した。しかし、縮退し、変性しまたは急速に変形される化合物は、試験構成を用いて確実には発見されることができない。試験のプラス制御としては、ＡＺＴ（アジドチミジン）およびＤＤＣが使用される。試験法１．Ｔ４−リンパ球（ＣＥＭ−細胞線）を微量滴定板中にウイルス：細胞約１：０．０５の割合でウイルスを添加する。２．試験すべき物質は、他に記載がない場合には、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中に溶解され、かつ１：２００（重量部）の割合で希釈される。他の希釈を半対数工程の場合にＤＭＳＯを用いて行ない、次に感染細胞培養液ならびに非感染細胞培養液上に添加する。３．培養液を３７℃で６〜７日間５％−ＣＯ₂雰囲気中で培養する。４．テトラゾリウム塩ＸＴＴを細胞培養液に添加し、細胞培養液をさらに培養し、その結果、フェナジンメトスルホネート（ＰＭＳ）と結合させることによって、残生細胞を通してホルマザン呈色反応を進行させることができる。５．個々の細胞培養液を分光光度計により分析し、顕微鏡により残生細胞を試験し、その結果、保護効果を確認する。６．処理されたウイルス感染細胞を、処理された非感染細胞と比較する。その他の比較（未処理の感染細胞および未処理非感染細胞、作用物質含有で細胞不含の凹所）を同一の板上で行なった。７．試験された化合物の活性を測定する。他の実験に基づく詳細はWeislow，J.Nat.Canc.Inst．81(8)，577頁（1989）から引用される。それによって、本発明によるペプチドは薬剤の製造、エイズの抑制、および免疫不全ウイルスを有する感染と関連した病気（エイズ関連症候群、ＡＲＣ）の抑制に適当である。投薬指示：本発明による薬剤の投薬は、毎日の投与の場合０．０１ｍｇ〜１０ｍｇである。例１式ＩＩによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］=１４３１ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．６５〜７．１；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２．１４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９５ｍ、ＮＨＣＯＮＨ₂ Ｃｉｔ；４．８〜４．１、多数の多重線、Ｃ_dＨ；３．７５および３．５、多重線２；脂肪族Ｈ；３．２〜２．６５、多数の多重線、ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．３、多数の多重線、残留脂肪族Ｈ；１、７８０、ｄ、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２０、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８０，ｍ、Ｎｌｅ例２式ＩＩＩによるペプチド：ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．６５〜７．１；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９ｍ、ＮＨＣＯＮＨ₂、Ｃｉｔ；４．８〜４．１、多数の多重線、Ｃ₂Ｈ；３．７５および３．５、多重線２；脂肪族Ｈ；３．２〜２．６５、多数の多重線、ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．２５、多数の多重線、残留脂肪族Ｈ；１、７０、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２０、ｄ、３Ｈ、ＣβＨ、Ａｌａ；０．８５、ｍ３Ｈ、Ｎｖａ質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］=１４１７例３式ＩＶによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］=１４６９ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．２〜６．５；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；５．８および５．４、２ｍ３Ｈ、ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ₂ シトロリア(Citrollia)、４．５、４．３、４．２および４．０、多重線Ｃ_dＨ；３．８〜２．６、多数の多重線、脂肪族ＣβＨおよび芳香族ＣβＨ；２．０〜１．９、多数の多重線、残留脂肪族プロトン；１、６、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．１、ｄ、２Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．７、ｄ、６ＨＣδＨｌｅｕ例４式Ｖによるペプチド、ＩＮＮ：セトロレリックス（cetrorelix）質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］＝１４３１ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ ８．７〜７．２、多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０５および６．６５、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．８５、ｍＮＨＣＯＮＨ₂ Ｃｉｔ；４．８〜４．１、多数の多重線、ＣαＨ；３．８および３．５５、２ｍ、脂肪族Ｈ；３．３〜２．７ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．３、多数の多重線、残留脂肪族信号；１、７、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８５２ｄ、６ＨＣδＨｌｅｕ例５式ＶＩによるペプチド質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］=１４４４ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ ８．６〜７．１、多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；４．８〜４．０、多数の多重線、ＣαＨ；３．７および３．５、２ｍ、４Ｈ；３．２〜２．７、多数の多重線ＣαＨ；３．７および３．５、２ｍ、４Ｈ；３．２〜２．７、多数の多重線、ＣβＨ芳香族アミノ酸および脂肪族アミノ酸；２．０〜１．０、多数の多重線、残留脂肪族信号；１、７、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ；１．２、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８、ｄｄ、６Ｈ、ＣβＨｌｅｕ例６式ＶＩＩによるペプチド：質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］=１４３１ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：８．６〜７．１、多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９ｍＮＨＣＯＮＨ₂、Ｃｉｔ；４．８〜４．０、多数の多重線、ＣαＨ；３．８５および３．５、多重線２、脂肪族Ｈ；３．１〜２．７多数の多重線ＣβＨ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；２．１〜１．３、多数の多重線、残留脂肪族Ｈ；１、７、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．２０、ｄ、３Ｈ、ＣβＨＡｌａ；０．８５、５、９Ｈ、ｔ−ブチル、Ｔｌｅ例７式ＶＩＩＩよるペプチド質量スペクトル：［Ｍ＋Ｈ⁺］=１４０５ｐｐｍでの¹Ｈ−ＮＭＲ−スペクトル（ＤＭＳＯ−ｄ₆、２５０ＭＨｚ）δ：９．１〜７．３；多数の多重線、芳香族信号およびＮＨ−信号；７．２１、ｄｄ、４Ｈ、芳香族Ｈｐ−ｃｌ−Ｐｈｅ；７．０および６．６、２ｄ、４Ｈ、芳香族ＨＴｙｒ；５．９および５．４、２ｍ、３Ｈ、ＮＨＣＯＮＨ₂ Ｃｉｔ；４．７〜４．１、多数の多重線、ＣαＨ；３．５５〜２．８、多数の多重線、Ｃβ Ｈ脂肪族アミノ酸および芳香族アミノ酸；１、７０、５、３Ｈ、ＣＨ₃ＣＯ^-；１．５５および１．４５、２ｍ脂肪族信号ＡｒｇおよびＬｅｕ；０．８０、ｄｄ、６Ｈ、ＣδＨＬｅｕ請求の範囲１．一般式Ｉの少なくとも１つの化合物ならびに製薬学的に受容可能なペプチド塩、例えば塩酸塩、トリフルオルアセテート、酢酸塩、硫酸塩、リン酸塩、メシラートまたはトシラートを含有する、エイズを撲滅する医薬品式Ｉ：Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）−Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）−ｘｘｘ−Ａ−Ｂ−ｙｙｙ- ｚｚｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂ この場合、次のものがあてはまる：ｘｘｘ＝Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）ｙｙｙ＝Ｄ−Ｃｉｔ，Ｄ−Ｌｙｓ（Ｒ）、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−ＨｃｉＲは（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アシルまたは（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）−アルキルを表わしてよい。ｚｚｚ＝Ｌ−Ｌｅｕ、ＮＬｅ、Ｎｖａ、ｔ−ＬｅｕＡ＝Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（糖）糖はグルコース、ガラクトース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドースまたはタロースを意味してよい。Ｂ＝Ｔｙｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｍｏｐ。２．式ＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）² 、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、Ｎｌｅ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。３．式ＩＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｎｖａ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。４．式ＩＶ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｃｉｔ⁶ 、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。５．式Ｖ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。６．式ＶＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −ＨＣｉ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。７．式ＶＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、ｔ−Ｌｅｕ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。８．式ＶＩＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ａｌａ⁹、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩を含有する、エイズを撲滅するための医薬品。９．エイズを撲滅する医薬品を製造するための式Ｉ〜ＶＩＩＩの化合物の使用。１０．式ＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｎｌｅ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］ −ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。１１．式ＩＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、ＤＰａｌ（３）³、Ｄ− Ｃｉｔ⁶、Ｎｖａ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］− ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。１２．式ＶＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、ｔ−Ｌｅｕ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］− ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。１３．式ＶＩＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ａｌａ⁹、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］ −ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ベルント，ミヒャエルドイツ連邦共和国Ｄ―60316 フランクフルトアムマインギュンタースブルクアレー 52 (72)発明者ニーマイアー，ウルフドイツ連邦共和国Ｄ―63067 オッフェンバッハベルリナーシュトラーセ 236

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｉまたは式ＸＩの少なくとも１つの化合物、ならびに製薬学的に受容可能なペプチド塩、例えば塩酸塩、トリフルオルアセテート、酢酸塩、硫酸塩、リン酸塩、メシラートまたはトシラートを含有する医薬品式Ｉ：Ａｃ−Ｄ−Ｎａｌ（２）−Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）−ｘｘｘ−Ａ−Ｂ−ｙｙｙ− ｚｚｚ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ｄ−Ａｌａ−ＮＨ₂ この場合、次のものがあてはまる：ｘｘｘ＝Ｄ−Ｐａｌ（３）、Ｄ−Ｐｈｅ（４Ｃｌ）ｙｙｙ＝Ｄ−Ｃｉｔ、Ｄ−Ｌｙｓ(Ｒ)、Ｄ−Ａｒｇ、Ｄ−ＨｃｉＲは（Ｃ₁〜Ｃ₄）−アシルまたは（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）−アルキルを表わしてよい。ｚｚｚ＝Ｌ−Ｌｅｕ、ＮＬｅ、Ｎｖａ、ｔ−ＬｅｕＡ＝Ｓｅｒ、Ｓｅｒ（糖）糖はグルコース、ガラクトース、アロース、アルトロース、マンノース、グロース、イドースまたはタロースを意味してよい。Ｂ＝Ｔｙｒ、Ｌｙｓ（Ｎｉｃ）、Ｍｏｐ式ＸＩ：ｘ−Ａ¹−Ａ²−Ａ³−Ａ⁴−Ａ⁵−Ａ⁶−Ａ⁷ −Ａ⁸−ｐｓｉＡ⁹−Ｑこの場合、次のことがあてはまる：Ｑは−ＮＨ₂または−ＯＱ¹を表わし、この場合、Ｑ¹は：水素、（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）−アルキル、フェニルまたは、炭素原子７〜１０個を有するアルキル基によって１回または数回置換されているフェニルを表わし、Ｘは：水素を表わすか、または基Ａ²との単一結合、炭素原子１〜６個を有する有機酸のアシル基または基：を表わし、但し、１．）Ｒ¹は上記のＱ¹で挙げられた意味を表わしてよいか、またははを表わしてよく、この場合、Ｒ²およびＲ³は同一かまたは異なっていてよく、かつ水素またはメチルを表わしてよく、さらにＲ²は炭素原子１〜１０個を有するアルキル基、フェニル基を表わすか、炭素原子１〜１０個を有する１つまたは複数のアルキル基によって置換されたフェニル基を表わすか、１つまたは複数のハロゲン原子、例えばフッ素、塩素、臭素またはヨウ素によって置換されているフェニル基を表わす。Ａ¹は：Ｄ−、Ｌ−またはＤ、Ｌ−ｐ−Ｇｌｕ、Ｎａｌ、Ｐｈｅ、Ｔｈｉ、Ｔｙｒ、Ｈｃａ、Ｔｐｉ、Ｈｐｐ、Ｍｐｐ、Ｔｒｐ、またはベンゼン環で置換されたＴｒｐを表わし、この場合、１つまたは複数の置換基はハロゲン、−ＮＯ₂、−ＮＨ₂ 、−ＯＨ、Ｃ₁〜Ｃ₃−アルキル、Ｃ₁〜Ｃ₃−アルコキシの群から選択されており、およびハロゲンはフッ素、塩素または臭素を表わしてよく、Ａ²は：Ａｓｐ、Ｄｐａ、Ｇｌｎ、Ｈｉｓ、ＭｅｔＨｉｓ、Ｈｉｓ（Ｂｚ）、Ｈｉｓ（ｚ）を表わすか、またはＤｐａ（ｘ）、Ａｓｐ（ｙ）、Ｇｌｕ［ −］およびＧｌｕ［ｙ］の群からの式を表わし、この場合、Ｘはアシル基、アルキル基（Ｃ₁〜Ｃ₁₀）または１つの単結合を表わし、および −ＯＲ⁵を表わし、またはＹはを表わし、この場合、Ｒ⁵およびＲ⁶は同一かまたは異なっており、かつＲ⁵は水素、Ｃ₁〜Ｃ−アルキルまたはフェニルを表わし、Ｒ⁶は水素またはＣ₁〜Ｃ₃− アルキルまたはを表わし、および［−］はＸが単結合である場合には、カルボキシル基とα −アミノ基とを結合する単結合であり、Ａ³はＮａｌ、Ｐａｌ、Ｔｐｉ、Ｔｒｐ、ＭｅＴｒｐ、Ｔｒｐ（Ｆｏｒ）または置換されたベンゼン環を有するＴｒｐを表わし、この場合、ベンゼン環はハロゲン、ＮＯ₂、ＮＨ₂、ＯＨ、メチル、エチルまたはＣ₁〜Ｃ₃−アルコキシの群からの１員または複数員によって置換されており、この場合、ハロゲンはフッ素、塩素および臭素を表わしてよく、Ａ⁴はＡｌａを表わし、Ａ⁵はＶａｌまたはＭｅＶａｌを表わし、Ａ⁶はＧｌｙ、Ｐｈｅ、またはＤ−Ａｌａを表わし、Ａ⁷はＨｉｓ、ＭｅＨｉｓ、Ｈｉｓ（Ｂｚ）、Ｈｉｓ（Ｚ）、Ｌｙｓ（Ｚ）またはＰａｌを表わし、Ａ⁸はＬｅｕまたはＰｈｅの還元イソスターを表わし、Ａ⁹はＬｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、ＴＰｉまたは置換されたＴＰｉを表わし、但し、ベンゼン環はＡ³の場合と同一の置換基によって置換されており、およびＴｒｐのベンゼン環は同一の置換基によって置換されている。ならびに薬学的に受容可能なペプチドの塩、例えば塩化水素酸塩、トリフルオルアセテート、酢酸塩、硫酸塩、リン酸塩、メシラートまたはトシラートを表わす。２．式ＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ− Ｃｉｔ⁶、Ｎｌｅ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。３．式ＩＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｎｖａ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。４．式ＩＶ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｔｒｐ、Ｄ−Ｃｉｔ⁶ 、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。５．式Ｖ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。６．式ＶＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ−ＨＣｉ⁶、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。７．式ＶＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ³、Ｄ−Ｃｉｔ⁶、ｔ−Ｌｅｕ⁷、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩：８．式ＶＩＩＩ：［Ａｃ−ＤＮａｌ（２）¹、Ｄ−Ｐｈｅ（ｐＣｌ）²、Ｄ−Ｐａｌ（３）³、Ｄ −Ｃｉｔ⁶、Ａｌａ⁹、Ｄ−Ａｌａ¹⁰］−ＬＨＲＨで示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。９．式Ｘ：［Ｄ−Ｔｐｉ⁶、Ｌｅｕ−ｐｓｉ−Ｌｅｕ^13-14］ＢＮ（６−１４）で示されるアミノ酸配列を有するペプチドまたは製薬学的に使用可能な塩。１０．エイズおよびＡＲＣを撲滅する医薬品の製造のための請求項１から９までのいずれか１項に記載のペプチドの使用。１１．免疫刺激作用する医薬品の製造のための、請求項１から９までのいずれか１項に記載のペプチドの使用。１２．エイズおよびＡＲＣを撲滅する医薬品を製造する方法において、請求項１から９までのいずれか１項に記載のペプチドと、常用の担持剤、希釈剤および助剤とを混合し、医薬品として調製することを特徴とする、エイズおよびＡＲＣを撲滅するための医薬品の製造法。