JPH09508105A - モノマージオールおよびそれらから形成されるホスフェート結合オリゴマー - Google Patents

モノマージオールおよびそれらから形成されるホスフェート結合オリゴマー

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JPH09508105A JP7518700A JP51870095A JPH09508105A JP H09508105 A JPH09508105 A JP H09508105A JP 7518700 A JP7518700 A JP 7518700A JP 51870095 A JP51870095 A JP 51870095A JP H09508105 A JPH09508105 A JP H09508105A
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Abstract

(57)【要約】 種々の官能基を有する新規なエチレングリコール化合物を用いて、オリゴマー構造を製造する。エチレングリコールモノマーは、ホスホロチオエート、ホスホジエステル、およびホスホルアミデート連結を含む標準的なホスフェート連結を介して結合させることができる。有用な官能基には、核塩基ならびに極性基、疎水基、イオン性基、芳香族性基、および／または水素結合を形成する基が含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】 モノマージオールおよびそれらから形成されるホスフェート結合オリゴマー関連出願 本出願は１９９４年１月１１日に出願された米国特許出願第０８／１７９，９ ７０号の一部継続出願であり、その内容はすべてここに引例として含まれる。発明の分野 本発明はアルキレングリコールモノマーユニットおよびこれらのユニットから 構築されたオリゴマーに関する。オリゴマーはモノマーユニットをランダムなま たは前もって決められた配列を持つように合成でき、ホスホロチオエート、ホス ホジエステルおよびホスホルアミダイト結合を含むホスフェート結合を通して連 結できる。モノマーユニットの各々は蛋白質、核酸および他の生物学的標的へオ リゴマー構造を結合させるための化学基をその上に持つことができる。好適な実 施態様において、本発明の化合物はホスホリパーゼＡ2のような酵素の阻害剤と して働き、アトピー性皮膚炎および炎症性腸疾患を含む炎症性の疾患の処置に使 用される。背景技術 ホスホリパーゼＡ2（ＰＬＡ2）は膜リン脂質のｓｎ−２エステル結合を加水分 解する酵素のファミリーであり、遊離脂肪酸およびリゾリン脂質の放出を起こす （Dennis,E.A.,The Enzymes,Vol.16,pp307-353,Boyer,P.D.,ed.,Academic Press ,New york,1983参照）。タイプIIＰＬＡ2レベルの上昇は多くのヒト炎症性疾患 と関連している。ＰＬＡ2触媒反応は多くのプロ炎症性仲介物の放出の律速段階 である。アラキドン酸（ｓｎ−２位に共通して結合されている脂肪酸）はロイコ トリエン、プロスタグランジン、リポキシンおよびトロンボキサンの前駆体とし て働いている。リゾリン脂質は血小板活性化因子の前駆体でありうる。ＰＬＡ2 はプロ炎症性サイトカインにより制御されており、炎症カスケードの中心的位置 を占めている（例えば、Dennis,上記文献;Glaser,et al.,Tips Reviews 1992,14 ,9 2;およびPruzanski,et al.,Inflammation 1992,16,451を参照されたい）。 これまで評価されたすべての哺乳類組織はＰＬＡ2活性を示した。少なくとも 三つの異なった型のＰＬＡ2がヒトにおいて観察されている：膵臓性（タイプＩ ）、滑液性（タイプII）および細胞質性。さらなるイソ酵素が存在していること が研究により示唆されている。タイプＩおよびタイプII（ＰＬＡ2の分泌型）は 蛇毒から単離されたホスホリパーゼと強い類似性を共有している。ＰＬＡ2酵素 は消化、細胞膜リモデリングおよび修復、および炎症性応答の仲介を含む正常な 機能のために重要である。細胞質性およびタイプII酵素の両方とも治療的標的と して興味をひかれる。タイプIIＰＬＡ2レベルの上昇は慢性関節リュウマチ、骨 関節炎、炎症性腸疾患および敗血病性ショックを含む種々の炎症性障害と関連し ており、この酵素の阻害剤は治療的有用性を持っているようであることを示唆し ている。ある種の慢性炎症性障害で病理生理学的に観察されたＰＬＡ2の役割を さらに支持する観察とは、ラットの足しょ内へ（Vishwanath,et al.,Inflammati on 1988,12,549）またはウサギの関節空間へ（Bomalaski,et al.,J.Immunol.199 1,146,3904）タイプIIＰＬＡ2を注射すると炎症性応答が得られたことである。 注射前に蛋白質を変性させた場合は炎症性応答は得られなかった。 滑液からのタイプIIＰＬＡ2酵素は比較的小さな分子であり（約１４ｋＤ）、 配列およびそのジスルフィド結合のパターンによりタイプＩ酵素（例えば膵臓性 ）と区別できる。酵素の両方の型とも活性にカルシウムを必要とする。蛇毒およ び膵臓性ＰＬＡ2からの分泌ＰＬＡ2酵素の結晶構造（阻害剤とおよび阻害剤なし で）が報告されている（Scott,et al.,Science 1990,250,1541）。最近、ヒト滑 液からのＰＬＡ2の結晶構造が解読された（Wery,et al.,Nature 1991,352,79） 。その構造は触媒におけるカルシウムおよびアミノ酸残基の役割を明らかにした 。カルシウムはルイス酸として働いて切れ易いエステルカルボニルを活性化し、 脂質を結合し、Ｈｉｓ−Ａｓｐ側鎖の二個群が一般塩基触媒として働いて水分子 求核試薬を活性化する。このことはアシル酵素中間体が存在しないことと一致し 、セリンプロテアーゼの触媒機構にも匹敵する。触媒残基およびカルシウムイオ ンは酵素中の深い裂け目（約１４Å）の末端に存在する。この裂け目の壁はリン 脂質の炭化水素と接触し、疎水性および芳香族性残基からなっている。正に荷電 した アミノ末端ヘリックスは疎水性裂け目の開口部に位置している。いくつかの証拠 の系列はＮ−末端部分は界面結合部位であることを示唆している（例えば、Acha ri,et al.,Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.1987,52,441;Cho,et al.,J.Bi ol.Chem .1988,263,11237;Yang,et al.,Biochem.J.1989,262,855;およびNoelet a l.,J.Am.Chem.Soc.1990,112,3704を参照されたい）。 近年、ＰＬＡ2触媒によるリン脂質の加水分解の機構および特性の研究につい て多くの仕事が報告されている。インビトロアッセイにおいて、ＰＬＡ2は遅延 状態を示し、この間に酵素は基質二重層に吸着し、界面活性化と称される過程が 起こる。この活性化には酵素／脂質の界面の脱溶媒和、または裂け目開口部の周 辺の脂質の物理的状態の変化が関与しているのであろう。この仮説を裏付ける証 拠はＰＬＡ2活性の急速な変化が膜プローブの蛍光の変化と同時に起こることを 明らかにした研究からきている（Burack,et al.,Biochemistry 1993,32,583）。 このことは界面活性化過程の間に脂質の再配置が起こっていることを示唆してい る。ＰＬＡ2活性は脂質の融解温度周辺（ゲルおよび液晶脂質が共存している領 域）で最大である。このことはまたＰＬＡ2活性が温度および基質の組成（両方 とも境界領域により分離されている構造的に明瞭な脂質配置を導く）に感受性が あることとも矛盾しない。触媒反応中の脂質の物理的状態および酵素の位置を同 時に同定するために蛍光顕微鏡が使用された（Grainger,et al.,FEBS Lett.1989 ,252,73）。これらの研究はＰＬＡ2は液相および固相脂質の間の境界領域のみに 結合していることを明瞭に示している。 酵素により触媒される１，２−ジアシルグリセロリン脂質の二級エステル結合 の加水分解が比較的単純である一方、機構的および動力学的な様子は酵素−基質 相互作用が複雑であるためはっきりしない。ＰＬＡ2の顕著な特徴は、最大の触 媒活性は凝集している基質（すなわち、その臨界ミセル濃度より高い濃度のリン 脂質）に対して観察され、一方、モノマー基質に対しては低いレベルの活性しか 観察されないことである。その結果、ＰＬＡ2の競合阻害剤は酵素が基質二重層 に結合するまたは膜内へ分配される前に酵素の活性部位に対する高い親和性を持 ち、およびリン脂質と活性部位を競合している。多くの阻害剤が生化学的アッセ イにおいてＰＬＡ2の阻害を約束しているようにみえるが（例えば、Yuan,et al. , J.Am.Chem.Soc .1987,109,8071;Lombardo,et al.,J.Biol.Chem.1985,260,7234;Ca mpbell,et al.,J.Chem.Soc.,Chem.Commun.1988,1560;およびDavidson,et al.,Bi oche.Biophys.Res.Commun .1986,137,587参照）、インビボ活性を記載している報 告は少ない（例えば、Miyake,et al.,J.Pharmacol.Exp.Ther.1992,263,1302参照 ）。 伝統的な構造活性相関薬剤開発は明白な生成物を与えるが、多くの個々の試験 候補の製造が必要とされる。各々の構造の製造には著しく多くの時間と物質が必 要とされる。別の薬剤開発法、酵素構造の高度な解析に基づいて初めから活性化 合物を設計することは一般的に成功していない。さらに別の方法では所望の生物 学的活性について複雑な発酵ブロスおよび植物抽出物がスクリーニングされる。 生物起源の混合物をスクリーニングする利点は多量の化合物を同時にスクリーニ ングできることであり、ある場合には予期できなかった活性を持つ新規で複雑な 天然の生成物の発見を導くことがある。一つの欠点は多くの異なった試料をスク リーニングせねばならないこと、およびしばしば痕跡量しか存在しない活性化合 物の同定に多くの精製過程を実施しなければならないことである。 各々の古典的方法の利点を最大にするために、いくつかのグループにより組み 合わせ非ランダム化のための新しい方法を開発された。選択技術がペプチド（例 えば、Geysen,et al.,J.Immun.Meth.1987,102,259;Houghten,et al.,Nature 199 1,354,84;およびOwens,et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.1991,181,402参照 ）および核酸（例えば、Wyatt,et al.，（印刷中）Proc.Natl.Acad.Sci.USA;お よびEcker,et al.,Nucleic Acids Res.1993,21,1853）のライブラリーに使用さ れた。これらの選択技術は反復合成およびだんだん単純化されたオリゴマーのサ ブセットのスクリーニングを含む。これらの選択技術を用いると、細胞ベースの アッセイ、または精製された蛋白質標的との結合または阻害に対してサブセット の活性がアッセイされる。 ＳＵＲＦ（ランダム化された断片の合成的非ランダム化）と称される一つの技 術（例えば、Ecker,et al.,上記文献を参照）では、一つの固定されたモノマー 位置に既知の残基を含み、かつすべての他の位置に等モルの残基の混合物を含む オリゴマーのサブセットが合成される。三つのモノマーを含む（Ａ、Ｂ、Ｃ）四 残基長のオリゴマーのライブラリーに対して、三つのサブセットが合成されるで あろう（ＮＮＡＮ、ＮＮＢＮ、ＮＮＣＮ）式中Ｎは三つのモノマーの各々の等し い取り込みを表している）。各々のサブセットは次に機能性アッセイでスクリー ニングされ、最良のサブセットが同定される（例えば、ＮＮＡＮ）。ライブラリ ーの第二の組が合成されスクリーニングされるが、ここで各々は前ラウンドから の固定化残基および第二の固定化残基を含んでいる（例えば、ＡＮＡＮ、ＢＮＡ Ｎ、ＣＮＡＮ）。スクリーニングおよび合成の連続的ラウンドを通して、アッセ イで活性を持つ特異的配列が同定できる。発明の目的 新規なアルカングリコールモノマーユニットを提供するのが本発明の目的であ る。 新規なオリゴマー構造内へ取り込ませることができる新規なアルカングリコー ルモノマーユニットを提供するのが本発明の別の目的である。 リン含有主鎖を通して一緒に結合できる新規なアルカングリコールモノマーユ ニットを提供するのが本発明の別の目的である。 問題とする生物学的部位への結合のために、多様な機能的部分を含むオリゴマ ーに基づく新規なアルカングリコールを提供するのが本発明の別の目的である。発明の簡単な説明 本発明の化合物は構造Ｉのモノマー化合物を含む： ［式中： ＸはＨ、ホスフェート基、活性化ホスフェート基、活性化ホスファイト基、ま たは固体支持体であり； ＹはＨまたはヒドロキシル保護基であり； ＺはＬ1、Ｌ1−Ｇ1、Ｌ2、Ｌ2−Ｇ2、ＮＲ3Ｒ4、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； Ｌ1は１から約２０の炭素原子を持つアルキル、２から約２０の炭素原子を持 つアルケニル、または２から約２０の炭素原子を持つアルキニルであり； Ｌ2は６から約１４の炭素原子を持つアリールまたは７から約１５の炭素原子 を持つアラルキルであり； Ｇ1はハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＮＨＣ（ ＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ ）ＯＲ5）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、金属配位基、またはホスフェート基であり； Ｇ2はハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、またはＮＲ3Ｒ4であり； Ｒ1はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはヒドロキシル保護基 であり； Ｒ2はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはチオール保護基であ り； Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはア ミン保護基であり； Ｒ5はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、または酸保護基であり； ＱはＬ1、Ｇ3、Ｌ1−Ｇ3、またはＧ3−Ｌ1−Ｇ3であり； Ｇ3はＮＲ3、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｃ（ Ｓ）−Ｏ、Ｃ（Ｓ）−ＮＨまたはＳ（Ｏ）2、ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ3Ｃ（＝Ｓ ）、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＲ3Ｃ（Ｓ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（ Ｓ）−ＮＨまたはＮＲ3Ｓ（Ｏ）2であり； ｎは０または１であり；および ｊは１から６であり； ただし、ｎが０でありかつＺがＮＨ2、アデニン、グアニン、シトシン、ウラ シルまたはチミンであり、ＸまたはＹの一つが５Ｈである場合、ＸまたはＹの他 方はＨではなく；および ｎが０でありかつＱがアルキル−ＮＨである場合、Ｚはビオチンまたはホスホ チロシニルではない］。 好適な実施態様において、Ｙはトリチル、メトキシトリチル、ジメトキシトリ チルまたはトリメトキシトリチルのような酸不安定性ヒドロキシル保護基である 。Ｘは好適にはＨ、ホスホルアミダイトのような活性化ホスファイト基または活 性化ホスフェートまたは固体支持体である。ある好適な実施態様において、ｎは １であり、Ｑはアシル連結基、アルキル連結基、アミノ連結基または二官能性連 結基である。好適なアシル基にはカルボニル、チオカルボニル、カルボキシ、ア セチル、アミド、スクシニル、カルバモイル、チオカルバモイル、ウレイド、チ オウレイド、およびスルホンアミド基が含まれる。 一つの好適な化合物の群において、Ｚはイミダゾールまたはカルバゾール環の ような窒素含有複素環を含んでいる。さらに好適な基において、Ｚはプリンまた はピリミジン核塩基を含んでいる。特に好適であるのは、Ｘが活性化ホスファイ トであり、Ｙが酸不安定性ヒドロキシル保護基であり、およびＺがアデニン、グ アニン、シトシン、ウリジンまたはチミンである化合物である。 別の好適な化合物の群において、Ｚは２から約２０の炭素原子を持つ非置換ま たはアミノ置換アルキル基、６から約２０の炭素原子を持つアリール基、または ７から約１５の炭素原子を持つアラルキル基を含んでいる。さらに別の化合物の 群において、Ｚはフルオレニルメチル、フェニル、ベンジル、ポリエチレングリ コール、グルタミル、またはＮＲ1Ｒ2基を含んでいる。 本発明の別の化合物は構造IIのオリゴマー化合物を含んでいる： 式中： ＸはＨ、ホスフェート基、活性化ホスフェート基、活性化ホスファイト基、固 体支持体、コンジュゲート基またはオリゴヌクレオチドであり； ＹはＨ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基またはオリゴヌクレオチドで あり； ＥはＯまたはＳであり； ＥＥはＯ-またはＮ（Ｙ0）T0であり； Ｙ0はＨまたは［Ｑ2］jj−Ｚ2であり； Ｔ0は［Ｑ1］kk−Ｚ1であるかまたはＹ0およびＴ0は一緒に窒素複素環内に連 結されており； Ｑ1およびＱ2は独立して、Ｃ2−Ｃ10アルキル、Ｃ2−Ｃ10アルケニル、Ｃ2− Ｃ10アルキニル、Ｃ4−Ｃ7炭素環式アルキルまたはアルケニル、複素環、２から １０の炭素原子および１から４の酸素または硫黄原子を持つエーテル、ポリアル キルグリコールまたはＣ7−Ｃ14アラルキルであり； ｊｊおよびｋｋは独立して０または１であり； Ｚ1およびＺ2は独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ2アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニル、Ｃ2 −Ｃ20アルキニル、Ｃ6−Ｃ14アリール、Ｃ7−Ｃ15アラルキル、ハロゲン、ＣＨ ＝Ｏ、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）、Ｎ ＨＣ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ（ＮＨ2）Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4 、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、金属配位基、レポーター基、窒素含有複素環、プリン、ピ リ ミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基で あり； ＺはＬ1、Ｌ1−Ｇ1、Ｌ2、Ｌ2−Ｇ2、ＮＲ3Ｒ4、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； Ｌ1は１から約２０の炭素原子を持つアルキル、２から約２０の炭素原子を持 つアルケニル、または２から約２０の炭素原子を持つアルキニルであり； Ｌ2は６から約１４の炭素原子を持つアリールまたは７から約１５の炭素原子 を持つアラルキルであり； Ｇ1はハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＮＨＣ（ ＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ ）ＯＲ5）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、金属配位基、またはホスフェート基であり； Ｇ2はハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、またはＮＲ3Ｒ4であり； Ｒ1はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはヒドロキシル保護基 であり； Ｒ2はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはチオール保護基であ り； Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはア ミン保護基であり； Ｒ5はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、または酸保護基であり； ＱはＬ1、Ｇ3、Ｌ1−Ｇ3、またはＧ3−Ｌ1−Ｇ3であり； Ｇ3はＮＲ3、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｃ（ Ｓ）−Ｏ、Ｃ（Ｓ）−ＮＨまたはＳ（Ｏ）2、ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ3Ｃ（＝Ｓ ）、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＲ3Ｃ（Ｓ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（ Ｓ）−ＮＨまたはＮＲ3Ｓ（Ｏ）2であり； ｎは０または１であり； ｊは１から６であり；および ｍは１から５０である。 オリゴマー化合物において、Ｘ、Ｙ、Ｚ、Ｑ、Ｒ1、Ｒ2、ｊおよびｎは上に定義 した通りであり、およびｍは１から約２５である。 本発明の別の化合物は上記モノマーまたはオリゴマー構造を含む隣接領域間の 空間に置かれたホスホジエステルまたはホスホロチオエートオリゴデオキシヌク レオチドからなる中心領域を持つキメラオリゴマー化合物を含んでいる。 本発明はさらに上記のようなモノマーの群を選択し、前記群のモノマーの少な くとも二つを共有結合で結合する工程を含むランダム化されたオリゴマー化合物 を製造する工程を含んでいる。好適な方法において、前記群の少なくとも一つの モノマーのＺ部分は前記群の他のモノマーのＺ部分と異なっている。この方法に より製造された化合物は、好適には２から５０のモノマー、より好適には２から 約２５のモノマーを持つランダム化されたオリゴマー化合物である。 本発明の化合物はホスホリパーゼＡ2酵素を含む種々の酵素の阻害剤として使 用できる。ホスホリパーゼＡ2の阻害剤として、本化合物はアトピー性皮膚炎お よび炎症性腸疾患を含む炎症性疾患の処置に有用である。本発明のオリゴマー化 合物は、疾患の病因論において興味をひく核酸へ特異的にハイブリッド形成でき るので、診断にも使用できる。本発明の化合物はまた、特に酵素生化学および蛋 白−核酸相互作用の研究のための研究プローブおよびプライマーとしても使用で きる。図面の簡単な説明 本発明の多くの目的および利点は付随する図を参照することにより当業者には より良く理解されるであろう： 図１−４は本発明による活性化モノマーの合成方法を記載している。発明の詳細な説明 本発明のモノマー化合物は同定の目的のためには、アルカン部分が２から７の 炭素原子を持つ置換アルカングリコール（即ち、置換アルカンジオール）である と考えられる。好適な実施態様において、アルカングリコールのヒドロキシル基 は隣接するモノマーを連結し、オリゴマー構造を形成するのに使用される。オリ ゴマー合成の間、グリコールヒドロキシル基の一つは典型的には保護基によりブ ロックされており、他のヒドロキシル基をβ−シアノエチルホスホルアミダイト 基のような活性化ホスフェート基と反応させる。本明細書で使用する場合、術語 活性化ホスフェート基とはその求核試薬との反応性を促進させるための化学的修 飾を持つホスフェート基を表していることを意味している。同様に、術語活性化 ホスファイト基とはその求核試薬との反応性を促進させるための化学的修飾を持 つホスファイト基を表している。多くのそのような修飾が本分野で知られている 。 本発明のモノマー化合物は好適にはホスフェート結合を通して共有結合で結合 されている。このことは、液相かまたは固相化学による結合を可能にする。代表 的液相技術は１９９３年５月１１日に開示され、本発明と共通して譲渡されてい る米国特許第５，２１０，２６４号に記載されている。代表的固相技術は標準ホ スホルアミダイト化学（例えば、Protocols For Oligonucleotides And Analogs ,Agrawal,S.,ed.,Humana Press,Totowa,NJ,1993参照）を利用したＤＮＡおよび ＲＮＡ合成に用いられるようなものである。好適な固相合成は活性化ホスフェー トとしてホスホルアミダイトを利用する。ホスホルアミダイトはＰ（III）化学 を利用している。中間体ホスファイト化合物は続いて既知の方法によりＰ（Ｖ） 状態に酸化される。このことにより選択された酸化状態に依存して好適なホスホ ジエステルまたはホスホロチオエートホスフェート結合の合成が可能である。他 のホスフェート結合を発生させることも可能である。これらには、ホスホロジチ オエート、ホスホトリエステル、アルキルホスホネート、ホスホロセレネート、 およびホスホアミデートが含まれる。 アルカングリコール部分は種々の官能基により置換できる。モノマー化合物が 互いに連結された時、これらの官能基は生じるオリゴマー化合物に多様な性質（ ”多様性”）を提供できる。官能基には水素結合供与体および受容体、イオン性 部分、極性部分、疎水性部分、芳香族中心および電子供与体および受容体が含ま れる。個々のモノマーの性質は一緒になって、それらが見いだされるオリゴマー の特性に寄与する。従って、そのようなオリゴマーのライブラリーは無数の性質 を持っているであろう（即ち、”多様性”）。一緒になってオリゴマーを形成 する個々のモノマーの性質は集合的にそのようなオリゴマーの特異性に寄与し、 細胞、酵素または核酸標的部位と相互作用するためのある種の特性を与える。官 能基はモノマーユニットのアルカングリコール”コア”または”主鎖”に直接的 に結合できるし、または適当なつなぎ基（テザー）を通して連結することもでき る。認識されるように、モノマーユニットのコア部分はエチレングリコール部分 のようなアルカングリコール部分から形成されている。そのため、本発明のオリ ゴマー化合物は官能基を持つ多数のアルカングリコールユニット（例えば、エチ レングリコールユニット）から形成され、ホスフェート結合を通して一緒に連結 される。 本発明の化合物を合成するための好適な方法において、アルカングリコールコ アはエポキシド化合物の環開裂により発生される。好適な化合物は上記構造Ｉに おいて変数ｊが１であるものである。好適であるのは、ｊ＝１である立体特異的 モノマー化合物が製造でき、オリゴマー構造に取り込まれた場合、それらの立体 特異性を維持しているという事実による。これらの系統の他のもの（例えば、ｊ ＝２から６）はｊ＝１である化合物を製造するために使用された方法と類似の方 法により製造される。より大きな同族体は一般的により不安定であるので、それ らは好適にはその場で製造され使用される。そのような製造および使用はKo,et al.,J.Org.Chem．1986，51,413;Ko,etal.,J.Org.Chem．1987,52,667;およびKlun der,et al.,J.Org.Chem．1989，54,1295の方法により一般的に達成される。従っ て、３，４−エポキシ−１−ブタノール、４，５−エポキシ−１−ペンタノール 、５，６−エポキシ−１−ヘキサノール、６，７−エポキシ−１−ヘプタノール 、および７，８−エポキシ−１−オクタノールが各々ｊ＝２、３、４、５および ６の構造Ｉの化合物を提供するためにその場で製造および使用できる。グリシド ール（２，３−エポキシ−１−プロパノールまたはオキシランメタノール）はｊ ＝１である化合物の製造に特に適しており、それは環開裂により本発明のオリゴ マー化合物中のホスフェート結合に含ませることができる第１ヒドロキシル基お よび第２ヒドロキシル基の両方を供給できるからである。第１ヒドロキシル基は グリシドールのアルカノール（即ち、−ＣＨ2ＯＨ）部分から誘導され、一方第 ２ヒドロキシル基はグリシドールのエポキシド環の開裂により発生する。 本発明のモノマー化合物はエポキシド環含有出発物質への官能基（またはその ような官能基のつなぎ基）の求核的付加により製造できる。一般的に、この付加 は、図１に示したように、適当な溶媒中、触媒存在下で達成される。必要な場合 には、反応性官能基を保護するために一時的保護基が使用される。 エポキシド環への求核付加はＳn２反応であり、独占的にＣ−１炭素上に起き る。ｊ＝１である構造Ｉの化合物においてはラセミ体または非ラセミ体グリシド ールが出発原料として使用できる。非ラセミ体（即ち、キラル）グリシドールが 使用された場合、生成物もまた非ラセミ体である（Hanson,ChemicalReviews,199 1,91,437参照）。この方法は光学活性モノマーならびにそのようなモノマーを取 り込んだオリゴマーを得る簡単な方法である。 名称を割り当てる目的のためには、本発明の構造Ｉの化合物は置換アルカン化 合物と考えられる。例えば、ｊ＝１の場合、得られる化合物は置換プロパン化合 物と考えることができる。官能基またはつなぎ基の求核付加によるエポキシド環 の開裂によりアルカン部分のＣ１炭素に結合された官能基またはつなぎ基を持つ 置換ジオール化合物、例えば１−置換−２，３−ジオールプロパンが得られる。 １−置換プロパン ２，３−ジオールは第１ヒドロキシル基（即ち、Ｃ３炭素に 結合されたヒドロキシル基、グリシドール部分のヒドロキシメチル基）および第 ２ヒドロキシル基（グリシドールのエポキシド環の開裂により生じたＣ２炭素に 結合されたヒドロキシル基）の両方を持っている。 ｊ＝１の構造IIを持つ本発明の化合物はモノマーレベルではプロパン化合物と 考えられるが、モノマープロパンユニットの三つの炭素原子の二つのみがオリゴ マー主鎖に含まれているのでオリゴマーレベルでは置換エチレングリコール化合 物と考えられる。拡張すると、ブタノールモノマー化合物（ｊ＝２）は置換プロ ピレングリコールオリゴマー化合物となり、より長い類似体でも同様である。従 って、プロパンジオールモノマーが本発明のオリゴマー化合物に取り込まれると 、プロパンジオール部分のＣ２およびＣ３炭素はオリゴマーエチレングリコール コアの一部となり、一方、プロパン部分のＣ１炭素はコアから伸びるつなぎまた は官能基の一部に組み込まれた部分となる。 本発明のホスフェート連結オリゴマー化合物内への組み込みを容易にするため 、 官能基を持つアルカンジオール含有モノマーは活性化ホスファイトかまたは活性 ホスフェートで活性化される。第２ヒドロキシル基（例えば、ｊ＝１の場合、Ｃ ２プロパンジオールヒドロキシル基）のホスフィチル化（ｐｈｏｓｐｈｉｔｙｌ ａｔｉｏｎ）に先だって、第１ヒドロキシル基（例えば、ｊ＝１の場合、Ｃ３プ ロパンジオールヒドロキシル基）が保護される。第１ヒドロキシルの保護はエポ キシド環の環開裂の前または後に実施される。グリシドールのメチルヒドロキシ ル基への保護基の付加はそのエポキシド環の無触媒求核付加に対する反応性を低 くするので、そのような環開裂後の保護において問題がなければ、第１ヒドロキ シル基の保護は通常開環後に達成されるであろう。第１ヒドロキシル基と反応し うる求核剤を用いる場合、環開裂前に（”前環開裂”）ヒドロキシル基の保護が 達成される。そのような前環開裂保護は例えば、グリニャール試薬および他の類 似の試薬の付加に利用される。 トリチルファミリーの一員のような酸不安定性保護基が、環開裂前または後に 第１ヒドロキシル基の保護に好適に使用できる。トリチルファミリーには少なく ともトリチル、モノメトキシトリチル、ジメトキシトリチルおよびトリメトキシ トリチルが含まれる。ジメトキシトリチル基が好適であり、第１ヒドロキシル基 と４，４’−ジメトキシトリチルクロリドを反応させることにより付加できる。 Beaucage et al.,Tetrahedron 1992,48,2223に記載されているような他のヒドロ キシル保護基も使用できる。 本発明の別の態様においては、ＢＯＣ−型保護基のような、ＤＭＴ除去に使用 されるトリクロロ酢酸処理に安定な酸不安定性基が使用される。それらは拡張Ｔ ＣＡ処理に安定であるが、トリフルオロ酢酸溶液（例えば、５％ＣＨ2Ｃｌ2溶液 ）により除去される。この方法論に合致する別の保護基の群はアリルである。こ れらの保護基は、遷移金属触媒を用いて切断する。この型の保護基は、オリゴマ ーが依然として固体支持体に結合されている間に、特定の官能基の選択的脱保護 が望まれ、新しい反応部位が覆われていないようにする場合に特に有用である。 別の保護基を用いる戦略も可能である：例えば、光不安定性保護基もまたこの方 法論に合致する。 第１ヒドロキシル基の保護および環開裂（順序はどちらでも良い）に続いて、 第２ヒドロキシル基が活性化リン部分基、好適には活性化ホスファイト部分に変 換される。ホスフィチル化はクロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロ ピルアミノホスフィンのような適当な試薬により達成される。ホスフィチル化に より活性化ホスファイト部分かまたは活性化ホスフェート部分を持ち、本発明の ホスフェート結合オリゴマー化合物内への組み込みに適した保護されたモノマー が得られる。 本発明のオリゴマー化合物は図１−４に示した方法により合成できる。示され た合成法は固定された中間体上に広範囲に異なった官能基を簡単に取り込ませる ことができることに重点を置いている。活性化ホスフエートまたは活性化ホスフ ァイトとしてのモノマーは、例えばＤＮＡ合成機による標準オリゴヌクレオチド 型合成法を用いての前もって計画された配列か、または例えば上記のＳＵＲＦ技 術のような組み合わせ技術を用いるランダム配列でオリゴマー化される。 保護または非保護官能基を持つモノマーユニットは以下の実施例に記載されて いるように製造できる。もし官能基がホスフィチル化またはオリゴマー化の間に 他の部分または試薬と反応するようであれば、官能基は保護基、好適にはオリゴ マー合成の完了後に除去される塩基不安定性保護基で保護できる。 本発明の好適なモノマー化合物の第一の群は、グリシドールへの活性窒素含有 複素環の求核付加により製造される。本特許出願の目的のためには、窒素含有複 素環は少なくとも一つの窒素原子を含む単または多環式化合物である。複素環は 窒素原子以外の複素原子を含むことができる。そのような他の複素原子には酸素 および硫黄が含まれるがそれらに制限されるわけではない。特に好適な複素環の 群は合成および天然のプリンおよびピリミジン核塩基、例えば、アデニン、グア ニン、シトシン、ウリジン、チミン、キサンチン、ヒポキサンチン、２−アミノ アデニン、アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体、ア デニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体、５−ハロウラ シルおよびシトシン、６−アザウラシル、シトシンおよびチミン、５−ウラシル （プソイドウラシル）、４−チオウラシル、８−ハロ、アミノ、チオール、チオ アルキル、ヒドロキシルおよび他の８置換アデニンおよびグアニン、５−トリフ ルオロメチルおよび他の５置換ウラシルおよびシトシンおよび７−メチルグアニ ンである。米国特許第３，６８７，８０８号、Concise Encyclopedia of Polyme r Science And Engineering ,J.I.Kroschwitz,Ed.John Wiley & Sons，1990，858 -859およびEnglisch,et al.,Angewandte Chemie,International Edition 1991，30 ,613に記載されているような他のプリンおよびピリミジンも含まれる。 そのような窒素含有複素環は図２に示したように、適した溶媒中、炭酸カリウ ムのような触媒の存在下グリシドールかまたはＲ−（＋）−グリシドールに付加 できる。必要な場合、窒素複素環上の環外官能基は一時的保護により保護される 。特に有用な核塩基環外官能基のための一時的保護基はクロロトリメチルシラン 、塩化ベンゾイルおよび塩化イソブチリルである。保護化合物は次にその第１ヒ ドロキシル基を保護するためにピリジン中、４，４’−ジメトキシトリチルクロ リドでトリチル化される。テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中、クロロ−β−シア ノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンおよびジイソプロピルエ チルアミンによるホスフィチル化で対応するホスホルアミダイトモノマーが得ら れ、それは本発明のオリゴマー化合物内へ組み込むことができる。 官能基として使用できる他の窒素含有複素環にはイミダゾール、ピロール、イ ミダゾリル、ピラゾール、インドール、１Ｈ−インダゾール、β−カルボリン、 カルバゾール、フェノチアジンおよびフェノキサジンが含まれる。窒素複素環の より好適な群にはイミダゾール、ピロールまたはカルバゾールが含まれる。イミ ダゾールが特に好適である。 そのような複素環を含むモノマー化合物の製造において、塩基不安定性保護基 による環外官能基の保護は上記のような核塩基で達成され、得られた化合物は４ ，４’−ジメトキシトリチルクロリドでトリチル化され、クロロ−β−シアノエ トキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンによりホスフィチル化されて 所望のモノマー化合物が得られる。 本発明の別の好適なモノマー化合物は、エポキシド環含有出発物質へ（例えば グリシドールの２，３−エポキシ環へ）アルキル、アルケニルまたはアリール有 機金属を添加することにより製造できる。このことは図３に示されている。その ような化合物の製造のためには、出発物質の第１ヒドロキシル基（例えば、グリ シドールのメチルヒドロキシル基）がエポキシド環の開環に先だって酸不安定性 保護基で保護される。上記のように、保護基として適しているものはトリチルフ ァミリー保護基の一つである。従って、例えば適当な溶媒中、ジリチウムテトラ クロロ銅酸の存在下に１−Ｏ−ジメトキシトリチルグリシドールへ有機マグネシ ウム試薬を添加することにより達成できる。続いてクロロ−β−シアノエトキシ −Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンによるホスフィチル化によりモノマ ー化合物がホスホルアミダイトとして得られる。 本発明のさらに別の好適なモノマー化合物はグリシドールへのアンモニアの求 核的付加により製造できる。このことは図４に示されている。この反応の生成物 、１−アミノ−２，３−プロパンジオールは塩化ベンゾイルで保護でき、保護さ れた化合物はオリゴマーへの取り込みのためにＤＭＴ−ホスホルアミダイトへ変 換される。もしくは、１−アミノ−２，３−プロパンジオールのアミノ基はさら に官能化できる。アルキル化かまたはアシル化により官能基を窒素へ直接的にま たはつなぎ基を通して結合できる。官能化後、４，４’−ジメトキシトリチルク ロリドで保護し、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ ホスフィンによりホスフィチル化を実施して、本発明のオリゴマー化合物内への 取り込みのためのホスホルアミダイトモノマーが得られる。 アルカンジオールへつなぎ基を連結するための点として上記の１−アミノアル カンジオール化合物のアミノ基を用いる場合、アシル化かまたはアルキル化によ りアミノ基を反応させることができる。そのような反応の一つにおいて、アミノ 基は二官能性連結基、即ち、アルカングリコールモノマー化合物への結合のため の第一の反応性基およびアルカングリコールモノマー化合物へ結合されている官 能基へ結合するための第二の反応性基を持つ化合物と反応させる。特に好適な二 官能性連結基またはつなぎ基の一つの群は無水コハク酸、無水マレイン酸、無水 グルタール酸を含む環状無水物である。従って、例えば上記の１−アミノ−２， ３−プロパンジオールを無水コハク酸と反応させてプロパンジオールおよびコハ ク酸つなぎ基の間でアミド結合を形成することができる。コハク酸つなぎ基の他 の末端は続いて例えば所望の官能基を持つものとのエステルまたはアミド結合の 形成により官能化できる。続いて、４，４’−ジメトキシトリチルクロリド、次 にクロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンと反 応させ、本発明のオリゴマー化合物内への取り込みのためのホスホルアミダイト モノマーが得られる。 上記１−アミノ−２，３−プロパンジオールへのつなぎの基を結合するために はアミドアシル基に加えて他のアシル基も使用できる。そのような他の基による １−アミノ基のアシル化により、カルバモイル、チオカルバモイル、ウレイド、 チオウレイドおよびスルホンアミド結合が形成される。カルバメートおよびチオ カルバメートは適当なクロロホルメートまたはチオクロロホルメート化合物と１ −アミノ−２，３−プロパンジオールのアミノ基との反応により形成される。ウ レアはアミノ−２，３−プロパンジオールとイソシアネートまたはチオイソシア ネートとの反応により形成され、スルホンアミドは１−アミノ−２，３−プロパ ンジオールと塩化スルホニルとの反応により形成される。つなぎ基の他の末端（ 即ち、アミンへのつなぎ基の結合に使用されなかった末端）はモノマーユニット へ結合されている官能基と反応するように選択される。エステル、アミド、カル バメート、ウレアなどを含むアシル結合はこの結合にもまた有用である。 特に有用な二官能性結合基またはつなぎ基の別の群はＰｉｅｒｃｅ（Ｒｏｃｋ ｆｏｒｄ ＩＩ）から入手可能なある種のヘテロ二官能性またはホモ二官能性連 結基である。これらには種々のジ−イミデート、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド エステルおよびスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルが含まれる。代 表的なジ−イミデートには、ジメチル アジピミデート、ジメチル ピメリミデ ート、ジメチル スベリミデートなどが含まれる。代表的なＮ−ヒドロキシスク シンイミドエステルおよびスルホ−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルには ジスクシンイミジルスベレート、ビス（スルホスクシンイミジル）スベレートな どが含まれる。 つなぎ化合物の別の好適な基にはアルキル、アルケニルおよびアリール化合物 が含まれる。これらは１−アミノアルカンジオール化合物のアミノ基をアルキル 化するのに使用できる。もしくは、これらは、例えば適当な出発物質のエポキシ ド環へアルキル、アルケニルまたはアリール有機金属試薬を添加することにより 直接アルカンジオール化合物に付加することができる。つなぎ基は次に官能基で さらに官能化できる。 好適な官能基は：随意に一つまたはそれ以上のハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ1、ＮＲ1 Ｒ2、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ1Ｒ2、ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＲ1Ｒ2、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ ）ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ1Ｒ2、ＣＨ（ＮＨ2）（Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）で置換された アルキル、アルケニルおよびアルキニル基；随意に一つまたはそれ以上のハロゲ ン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、ＮＲ1Ｒ2で置換されたアリールまたはアラルキル基 ；アダマンチル；ＮＲ1Ｒ2；複素環；プリン；ピリミジン；ホスフェート；ポリ エーテル；ポリエチレングリコールまたは金属配位基である。 本発明に従ったアルキル、アルケニルおよびアルキニル基には、メチル、エチ ル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デ シル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキ サデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、ノナデシル、エイコシルおよび他の高 級炭素アルキル基を含む置換および無置換直鎖、分岐鎖および脂環式炭化水素が 含まれるがそれらに制限されるわけではない。さらなる例としては２−メチルプ ロピル、２−メチル−４−エチルブチル、２，４−ジエチルプロピル、３−プロ ピルブチル、２，８−ジブチルデシル、６，６−ジメチルオクチル、６−プロピ ル−６−ブチルオクチル、２−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチル ペンチル、２−エチルヘキシルおよび他の分岐鎖基、アリル、クロチル、プロパ ルギル、２−ペンテニルおよびその他の不飽和基、シクロヘキサン、シクロペン タン、アダマンタンならびに他の脂環式基、３−ペンテン−２−オン、３−メチ ル−２−ブタノール、２−シアノオクチル、３−メトキシ−４−ヘプタナール、 ３−ニトロブチル、４−イソプロポキシドデシル、４−アジド−２−ニトロデシ ル、５−メルカプトノニル、４−アミノ−１−ペンテニルならびに他の置換基が 挙げられる。 本発明に従ったアリール基にはフェニルおよびナフチル基のような置換および 無置換芳香族炭化水素基が含まれるがそれらに制限されるわけではない。アラル キル基にはベンジルおよびキシリル基のようなアリールおよびアルキル官能性の 両方を持った基が含まれるがそれらに制限されるわけではない。 本発明に従った金属配位基にはヒドロキサム酸、カテコールアミド、アセチル アセトン、２，２’−ビピリジン、１，１０−フェナントロリン、二酢酸、ピリ ジン−２−カルボキサミド、イソアルキルジアミン、チオカルバメート、オキザ レート、グリシル、ヒスチジルおよびテルピリジルが含まれるがそれらに制限さ れるわけではない。他の金属配位基も知られている；例えば、Mellor,D.P.,Chem istry of Chelation and Chelating Agents in International Encyclopedia of Pharmacology and Therapeutics ,Section 70,The Chelation of Heavy Metals, Levine,W.G.Ed.,Pergamon Press,Elmford,N.Y.,1979を参照されたい。 本発明に従った固体支持体には制御孔ガラス（ＣＰＧ）、オキザリル制御孔ガ ラス（例えば、Alul，et al.,Nucleic Acids Research 1991,19,1527を参照され たい）、ＴｅｎｔａＧｅｌ支持体−−アミノポリエチレングリコール誘導化支持 体（例えば、Wright,et al.,Tetrahedron Letters 1993,34,3373を参照されたい ）またはＰｏｒｏｓ−−ポリスチレン／ジビニルベンゼンの共重合体が含まれる 。 多くの置換基が本発明の化合物内へ保護された（ブロックされた）形で導入で き、後で脱保護されて最終的な所望の化合物を生成する。一般に、保護基は特定 の反応条件に対して化学官能性を不活性にし、分子の残りの部分には実質的に損 傷を与えることなく付加でき、除去できる。例えば、Green and Wuts,Protectiv e Groups in Organic Synthesis,2d edition,John Wiley & Sons,New York,1991 を参照されたい。例えば、アミノ基はフタルイミド基としてまたは９−フルオレ ニルメトキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基として保護でき、カルボキシル基はフル オレニルメチル基として保護できる。代表的ヒドロキシル保護基はBeaucage,et al.,Tetrahedron 1992,48,2223に記載されている。 本発明に従った置換基にはハロゲン（Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ）、ヒドロキシル（ＯＨ ）、チオール（ＳＨ）、ケト（Ｃ＝Ｏ）、カルボキシル（ＣＯＯＨ）、エーテル 、チオエーテル、アミジン（Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4）、グアニジン（ＮＨＣ（＝ ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4）、グルタミル（ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5）、ニト レート（ＯＮＯ2）、ニトロ（ＮＯ2）、ニトリル（ＣＮ）、トリフルオロメチル （ＣＦ3）、トリフルオロメトキシ（ＯＣＦ3）、Ｏ−アルキル、Ｓ−アルキル、 ＮＨ−アルキル、Ｎ−ジアルキル、Ｏ−アラルキル、Ｓ−アラルキル、ＮＨ−ア ラルキル、アミノ（ＮＨ2）、アジド（Ｎ3）、ヒドラジノ（ＮＨＮＨ2）、ヒド ロキシルアミノ（ＯＮＨ2）、スルホキシド（ＳＯ）、スルホン（ＳＯ2）スルフ ィド（Ｓ−）、ジスルフィド（Ｓ−Ｓ）、シリル、複素環式、脂環式および炭素 環式基が含まれるがそれらに制限されるわけではない。好適な置換基にはハロゲ ン、アルコールおよびエーテル（ＯＲ1）、チオールおよびチオエーテル（ＳＲ2 ）、アミン（ＮＲ3Ｒ4）、アミジン（Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4）、グアニジン（Ｎ ＨＣ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4）、アルデヒド（ＣＨ＝Ｏ）、酸（Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ）、 エステル（Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5）、アミド（Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4）およびグリシン （ＣＨ（ＮＨ2）（Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ））が含まれる。 本発明に従った特に好適な官能基には少なくとも以下の特定の官能部分を持つ モノマーユニットを含んでいる：チミン、ウラシル、アデニン、グアニン、シト シン、イミダゾール、カルバゾール、アミノエチル、カルボキシエチル、フェニ ル、短鎖および長鎖アルキルおよびグリシン。他の好適な官能基にはアミノ、ベ ンジルおよびテトラエチレングリコール基が含まれる。 本発明の化合物は第１または第２ヒドロキシル基に共有結合で結合されたコン ジュゲート基を含むことができる。本発明のコンジュゲート基には、インターカ レーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール 、ポリエーテル、オリゴマーの薬動学特性を促進する基およびオリゴマーの薬力 学特性を促進する基が含まれる。典型的なコンジュゲート基にはコレステロール 、リン脂質、ビオチン、フェナントロリン、フェナジン、フェナントリジン、ア ントラキノン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリンおよび色素 が含まれる。本発明の文脈において薬動学的特性を促進する基には、オリゴマー 取り込みを促進し、オリゴマーの分解に対する耐性を改良しおよび／またはＲＮ Ａとの配列特異的ハイブリッド形成を強化する基が含まれる。本発明の文脈にお いて薬力学的特性を促進する基には、オリゴマー取り込み、分布、代謝または排 泄を改良する基が含まれる。代表的コンジュゲート基は１９９２年１０月２３日 に出願された国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０９１９６、１９９３年９月３日 に出願された米国特許出願第１１６，８０１号および米国特許第５，２１８，１ ０５号に開示されている。上記の各々は本出願と共通して譲渡されている。各々 の全開示はここに引例として含まれている。 本発明のモノマー化合物は前もって選択された配列かまたは組み合わせ法によ り決定される配列のいずれかをもつオリゴマー化合物の製造に使用できる。一つ の有用な組み合わせ法は上述のＳＵＲＦ法であり、それは１９９１年８月２３日 に出願された米国特許出願第７４９，０００号、１９９２年８月２１日に出願さ れたＰＣＴ出願ＵＳ／０７１２１、１９９４年１２月１６日に出願された米国特 許出願第３５７，３９６号（これらのすべては本出願と共通して譲渡されている ）に開示および特許請求されている。各々の全開示はここに引例として含まれて いる。 広い範囲の化学的多様性を持つ組み合わせライブラリーを合成することが本発 明の重要な観点である。一つのレベルでは、化学的多様性はリン結合の性質を変 化させることにより導入される。本発明に従うリン結合にはホスホジエステル（ ＯＰＯ）、ホスホロチオエート（ＯＰＳ）、ホスホルアミデート（ＯＰＮ）、ホ スホロチオアミデート（ＳＰＮ）およびアルキルホスホネート（ＯＰＣ）が含ま れる。組み合わせライブラリーは単一の型のリン結合でも、またはオリゴマーの 各々の位置で異なった結合でも製造できる。例えば、単一ＯＰＳ結合はＯＰＯオ リゴマーの任意の位置に選択的に導入できる。実際、ＯＰＯ、ＯＰＳ、ＯＰＮ、 ＳＰＮおよびＯＰＣ結合のすべての可能な組み合わせがオリゴマー内に選択的に 導入できる。オリゴマーの特定の位置での結合の型の存在または不在は分子の性 質に絶大な影響を持っているであろう。 ホスホルアミデート結合ライブラリーの場合、ＯＰＮ結合の窒素原子上に置換 基を持つことができるためさらなるレベルの多様性が可能である。従って、オリ ゴマーにＯＰＮが存在するそれぞれに広範囲のアミンを導入することが可能であ る。各々のＯＰＮ結合に同一のアミン置換基または各々の位置に異なったアミン を持つことが可能である。 前に議論したように、ＳＵＲＦライブラリーにいくつかのレベルで化学的多様 性を発生させることができる。前に多くのモノマーの製造について説明した。こ れらのモノマーは化学的多様性の二つの特色を研究するために製造された：第一 に化学的性質の範囲をカバーする多くの官能基が利用できる。第二に、これらの 官能基は、異なった結合位置で提示されるようにまたは異なった様式での間隔で 存在するように結合させ、柔軟性を変えることが可能である。以下の節では多様 性の第三のレベル、残基間結合それ自体について説明する。結合型の導入に使用 されるいかなる方法も両立することは理解されなければならない。特に、適当な 条件を使用することにより、オリゴマーの配列に関係なく随意にオリゴマーの任 意の位置にＯＰＯ、ＯＰＳ、ＯＰＮ、ＳＰＮおよびＯＰＣ結合を含むホスフェー ト結合を導入することが可能である。このことは、結合の性質を決定する化学反 応は固体支持体上の反応性基（連結基にせよまたは前のモノマーにせよ）へのモ ノマーの結合とは別であるために可能である。特に、ホスホルアミダイトモノマ ーがテトラゾールで処理され、遊離ヒドロキシル基を持つ固体支持体へ加えられ た場合、ホスファイトトリエステルが得られる。このホスファイトトリエステル は次にヨウ素（自動化合成機でのＤＮＡ合成と同様な方法で処方された）で処理 でき、アンモニア脱保護後にホスホジエステルが得られる。もしくは、ホスファ イトトリエステルをベンゾジチオール−３−オン−１，１−ジオキシドで処理し て対応するホスホロチオエートを得ることができる。 水素ホスホネート化学はオリゴマー内へ導入されるべきさらなる化学修飾を可 能にする利点を持っている。オリゴヌクレオチドホスホジエステルおよびホスホ ロチオエートはこの方法を用いて製造され（Froehler,B.C.,Matteucci,M.D.Tetr ahedron Lett .1986,27,469-472参照）、同様にオリゴヌクレオチド ホスホルア ミデートはFroehler,B.C.Tetrahedron Lett.1986,27,5575-5579、Letsinger,R.L .,Sigman,C.N.,Histand,G.,Salunkhe,M.J.Am.Chem.Soc.1988,110,4470-4471を参 照されたい。ホスホジエステルおよびホスホルアミデートの両方を含むオリゴマ ーの合成、並びにホスホルアミダイトの合成に関係したホスホルアミダイト化学 の使用は報告されている（Jung,P.M.,Histand,G.,Letsinger,R.L.Nucleosides & Nucleotides ,1994,13,1597-1605参照）。この後者の研究では、交互にホスホジ エステルおよびホスホルアミデートを持つオリゴマーが、オリゴマーの伸長にホ スホルアミダイトおよびＨ−ホスホネートを結合させ、続いての適当な酸化工程 により製造されている。しかしながら、一般に記載したすべての例において、オ リゴマーのすべてのホスホルアミデート結合に同一のアミン置換基が取り込まれ ている。これらの研究は多様な官能基の取り込みのための追加的部位としてのホ スホルアミデート結合の使用の可能性を示している。広範囲のアミンが酸化工程 で使用でき、本発明のモノマーは必要な化学的性質を支持する。従って、ホスホ ルアミデート結合を取り込む組み合わせライブラリーの製造には、本発明のモノ マーは対応するＨ−ホスホネートモノエステルに変換される。本発明の一つの態 様では、このことはホスフィチル化剤としてＰＣｌ3およびイミダゾールを使用 することにより達成された（Garegg,P.J.,Regberg,T.,Stawinski,J.Stromberg,R .Chem.Scr.1986,26,59-62参照）。これらのＨ−ホスホネートモノマーは塩化ピ バロイル、塩化アダマントイルまたは他の適当な活性化剤で活性化することによ り固体支持体上でオリゴマー化される。中間体Ｈ−ホスホネートジエステルは水 性ピリジン中でのヨウ素を用いて高収率でホスフェートジエステルに酸化される 。これによりＨ−ホスホネートとホスホルアミダイト法のカップリング効率を比 較することが可能である。本質的には両方の方法論で同じカップリング効率が達 成された。Ｈ−ホスホネートジエステルはピリジン／ＣＣｌ4（１：１）中、適 当なアミンの１０％溶液を用いることによりホスホルアミデートへ変換された。 これらの条件下、Ｈ−ホスホネートジエステルはＡｒｂｕｚｏｖ反応を経て塩化 ホスホリルにより酸化され、続いて第１または第２アミンにより塩素が置換され た。第二の工程は非常に一般的であることが証明されており、広範囲のアミンで 満足すべき収率が得られる。さらに、ホスホルアミデートの収率はホスホジエス テルの収率と同程度であった。 いくつかの型のライブラリーがこの方法論により得られた。最も単純な種類の ライブラリーは、リンが単一のアミンで置換されている２から１０またはそれ以 上のモノマーユニットの長さの本発明の一組のモノマー（４から１６またはそれ 以上のモノマーの組が典型的には使用された）から作製されるライブラリーであ る。これらのライブラリーは、ホスホルアミダイト化学ではなくＨ−ホスホネー ト合成プロトコールにしたがって、スプリットビーズ合成により製造される。中 間体Ｈ−ホスホネートジエステルは最終工程までそのまま残される。その時点で オリゴマーライブラリープールは適当な第１または第２アミンを１０％含むＣＣ ｌ4／ピリジンで酸化される。これによりすべての残基間結合がホスホルアミデ ートへ変換される。従って、このライブラリーは一定のホスホルアミデート結合 によって一緒に結合され、固定された位置のユニークなサブセットに分離された モノマーのすべての可能な配列から構成されている。ライブラリーの最終的性質 は酸化工程で使用されたアミンの選択により決定されるであろうことは明かであ る。従って、ライブラリー成分の水溶解性、薬力学、薬動学をアミンの選択によ り変えることができる。中間の酸化工程を行うことにより混合された結合を持つ オリゴマーライブラリーを製造することも可能である（Gryaznov,S.M.,Sokolova ,N.I.Tetrahedron Lett.1990,31,3205-3208;Gryaznov,S.M.,Potapov,V.K.Tetrah edron Lett .1991,32,3715-3718;Farooqui,F.,Sarin,P.S.,Sun,D.,Letsinger,R.L .Bioconjugate Chem.,1991,2,422-426;Iso,Y.,Yoneda,F.,Ikeda,H.,Tanaka,K.,F uji,K.Tetrahedron Lett.1992,33,503-506参照）。従って、オリゴマーライブラ リーの一部はＨ−ホスホネート化学により合成され、それはＲ2ＮＨ、ＣＣｌ4／ ＰｙまたはＳ８、ＣＳ2／ＴＥＡまたはＨ2Ｏ、ＣＣｌ4／Ｐｙで酸化でき、およ びライブラリーの第二の部分が合成され、試薬の第二の組で酸化される。これに よりキメラライブラリーが創造され、ここでは各々のサブセット中のランダムオ リゴマーの区分は分子の残りの部分と異なった結合を持っている。この方法論を 拡張し、各々のモノマー結合後に異なった酸化工程を行うことによりオリゴマー ライブラリーの各々の位置に異なった結合を取り込ませることが可能である。Ｈ −ホスホネートジエステル結合固体支持体の一部へ別々の酸化を実施し、続いて モノマー位置がランダム化されるように同様の方法でサブセットをプールする事 により結合が組み合わせ化できる。従って、各々のモノマーおよびそれらの間の 結合はスプリット合成法によりランダム化できる。 ＳＵＲＦ法の例は下記の表Ｉに示されている２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレオ チドライブラリーである（Ecker et.al.、上記文献）。表ＩはＲＮＡヘアピンに 対する結合での２’−Ｏ−メチルオリゴヌクレオチドの選択を記載する。ＫD’ すなわち結合定数はゲルシフトにより決定された。”Ｘ”は変化させた位置を示 すのに用いられ、下線はＳＵＲＦ法の連続的な反復の間に固定された位置を示す のに用いられる。 このＳＵＲＦ法はモノマーユニットとして天然に存在するヌクレオチドをホスホ ジエステルまたはホスホロチオエートとして用いるライブラリーを除いて、ライ ブラリーに対しては用いられていない。他の組み合わせ法はモノマーユニットと してアミノ酸を用いるライブラリーについてのみ用いられてきた。 本発明の一つの態様は上記ＳＵＲＦ法に構造Ｉを持つモノマー化合物を包含さ せることである。自動化ホスホルアミダイトオリゴマー合成の利点を保持しなが らこれらのモノマー化合物に付加された官能基をライブラリー内へ取り込ませる ことができる。これらの官能基は以下の型の相互作用に影響を及ぼすことができ る：水素結合供与体および受容体、イオン性、極性、疎水性、芳香族および電子 供与体および受容体。好適な官能基にはアミノエチル、カルボキシエチル、アデ ニルメチル、チミニルメチル、イミダゾリルメチル、ベンジル、ミリスチル、イ ソプロピルおよびテトラエチレングリコール基が含まれる。 本発明の一つの利点は、本発明のモノマー化合物の簡単な設計が合理的薬剤設 計と何千もの化合物に対するスクリーニング機構との組み合わせを可能にするこ とである。このことは本発明の化合物をＳＵＲＦ法のような組み合わせ技術で使 用することにより達成できる。 一つの好適な実施態様において、本発明のモノマー化合物に付加された官能基 は酵素ＰＬＡ2との相互作用の能力（好適には阻害）で選択される。従って、本 発明の化合物はアトピー性皮膚炎および炎症性腸疾患を含む炎症性疾患の局所的 および／または全身的処置に使用できる。官能基の選択において、ＰＬＡ2が両 性イオンベシクルより陰性イオンベシクルを好むことが利用できる。これらの官 能基を持つ主鎖の選択においては、ＰＬＡ2の天然の基質がホスフェート基を含 んでいるという事実がさらに利用できる。従って、ホスホジエステルまたはホス ホロチオエートおよび他のホスフェート結合オリゴマーが好適に選択され、ＰＬ Ａ2の正に荷電した界面結合部位と結合するための負に荷電した化合物が提供さ れる。 本発明のある種の化合物はＰＬＡ2酵素の裂け目への結合を容易にするために 芳香族官能基を含んでいる（Oinuma,et al.,J.Med.Chem.1991,34,2260;Marki,et al.,Agents Actions 1993,38,202;およびTanaka,et al.,J.Antibiotics 1992,4 5 ,1071参照）。ベンジルおよび４−ヘキシルベンジル基が好適な芳香族基である 。本発明の化合物はさらにテトラエチレングリコール基のような疎水性官能基を 含むことができる。ＰＬＡ2酵素は疎水性チャンネルを持っているので、疎水性 はこの酵素の阻害剤の重要な性質と信じられている。 本発明のある実施態様では、構造Ｉを持つホスホルアミダイトモノマー化合物 がオリゴマー化合物のライブラリー内へ組み込まれ、連続的スクリーニングによ り上記ＳＵＲＦ技術のような組み合わせスクリーニング技術でオリゴマーのより 複雑でないサブセットが同定される。一つの好適な実施態様において、アミノエ チル、カルボキシエチル、アデニルメチル、チミニルメチル、テトラエチレング リコール、イミダゾリルメチル、ベンジル、イソプロピル、ミリスチル、または ４−ヘキシルベンジル基で官能化されたオリゴマー化合物のライブラリーが製造 され、ＰＬＡ2活性の阻害がアッセイされた。ＰＬＡ2アッセイはＳＵＲＦ法のよ うな組み合わせスクリーニング法を用いて実施できる。このアッセイでは、オリ ゴマーライブラリーはヒトII型ＰＬＡ2酵素活性の阻害でスクリーニングされた 。典型的には、これらのライブラリーは約８０００の異なった化合物を含んでい る。ＳＵＲＦ技術の連続的反復がライブラリーからユニークなオリゴマーを選択 するために行われる。ライブラリーは阻害のさらなる機構を決定するために他の インビトロアッセイでもさらにスクリーニングできる。 スクリーニングの第一段階でのオリゴマーの同定後、オリゴマーライブラリー の内容物にさらなる修飾がなされる。例えば、もし第一のスクリーニングの反復 でベンジル基を含む活性化合物が得られたら、続いてのスクリーニングの連続的 反復ではこの芳香族残基を変更して置換ベンジル基を用いることができる。この 方法で段階的に構造活性が同定され、酵素活性の強力な阻害剤が決定される。 組み合わせ法によるＰＬＡ2の強い結合オリゴマー阻害剤の同定を最大にする ため、典型的にはランダムライブラリーは官能基のアレイを含む。正常ヌクレオ チド構造がより多様な化学基により置き換えられているモノマー、ホスホルアミ デートユニットをカップリングさせることによりヌクレオチド合成と類似の方法 でオリゴマーを組み立てる。モノマーユニットのいくつかにおいて、ヌクレオチ ドの核塩基は保持されている。他のものでは、核塩基は、核塩基により提供され る相互作用とは異なったリガンドーリガンド相互作用を提供するように選択され た他の官能基で置き換えられている。正常ヌクレオチドの糖部分は、例えばエチ レングリコールのようなアルキレングリコールユニットにより置き換えられてお り、特異的主鎖が形成されている。この方法論は多くの種類の官能基を持つたく さんのモノマーの収斂的製造を供給する。必要な場合には、合成完了後のオリゴ マーの一工程脱保護を可能にするように、官能基は塩基不安定性保護基で保護さ れる。 前に示したように、構造Ｉを持つモノマー化合物は互いに連結できてホモポリ マー構造を形成でき、またはヌクレオチドおよび／または他の部分と連結できて ヘテロポリマー構造を形成できる。例えば、天然に存在するまたは合成オリゴヌ クレオチドの一つまたはそれ以上の領域または”ストレッチ”またはペプチド、 ペプトイド、ペプチド核酸、オリゴおよび／またはポリサッカライドのような他 の合成または天然オリゴマー化合物へ連結された本発明のモノマーユニットの一 つまたはそれ以上の領域または”ストレッチ”を含むキメラ構造が形成できる。 さらに、構造IIを持つオリゴマー化合物は、代理人ドケットＩＳＩＳ−１０１４ が付けられ”窒素含有結合を持つオリゴヌクレオチド模倣物”と題された特許出 願および代理人ドケットＩＳＩＳ−１２３７が付けられ”ピロリジン含有モノマ ーおよびオリゴマー”と題された特許出願に開示されている化合物と共にキメラ 構造の中へ取り込ませることができる。前記特許出願はこの出願と同時に出願さ れ、共通して譲渡されており、ここに引例として包含されている。 本発明のオリゴマー化合物の組み合わせ合成において、モノマーはライブラリ ー（ＰＬＡ2阻害のスクリーニングに適したライブラリーを含む）内へ組み込ま れる。本ライブラリーは興味深い他の標的に対してのスクリーニングにも有用で ある。本発明のオリゴマー化合物の非組み合わせ合成においては、モノマーユニ ットはオリゴヌクレオチド合成に使用される標準条件を用いて前もって決定され ている配列に結合される。 組み合わせ技術により発生された活性配列を検出するため、選択されたアッセ イの感度内で分子が検出できるように十分大きく活性分子の濃度が選択される。 認識されるように、組み合わせ技術により生成されるサブセット内のユニークな オリゴマーの数は、オリゴマーの長さおよび使用された異なったモノマーの数に 依存している。配列の数は、モノマーの数をランダムな位置の数に等しい大きさ まで高めることにより決定できる。このことは表IIに示されている。表IIはまた 、サブセット濃度が１００μＭ（典型的な高試験濃度）である場合の各々の配列 の濃度も示している。モノマーの数およびその長さが、最終的なオリゴマー化合 物に望まれる予測ＩＣ50（すなわち、５０％の酵素活性が阻害される濃度）の見 積に基づくことができることが見いだされた。１００ｎＭの予測ＩＣ50に対して は、 表IIに示された複雑さは受容可能であり、すなわち、表IIに示されたライブラリ ーは約１００ｎＭまたはそれ未満のＩＣ50の特異的配列の検出を可能とする複雑 さを持っている。 ライブラリーのために５モノマーが選択されたら、ライブラリーは５モノマー ユニット、ＸＮＮＮＮ（式中、Ｎはモノマーユニットの等モル混合物であり、Ｘ は５サブセット各々の異なったモノマーユニットである）の長さをもつであろう 。 合成を容易にするため、固定位置を分子の右端に選択できる。下記のようにＰＬ Ａ2活性をアッセイした後、位置Ｘを最も大きな阻害を与える残基で固定し、続 いて次のサブセットを合成しスクリーニングする。非ランダム化法のように、固 定位置を左端に向かって移行させる。ユニークな阻害剤を決定するには５回の合 成およびスクリーニングが必要とされる。 本発明のモノマーユニットはオリゴヌクレオチドの標準合成に使用される標準 ホスホルアミダイト化学を用いて連結されオリゴマー化合物を形成する。官能化 アルキレングリコールモノマーのカップリング速度は異なっているが、個々のモ ノマーの反応性を各々のランダム化された位置での各々のモノマーの取り込みが 等モルになるように調整できる。モノマーの反応性の調整は下記の実施例のよう に達成できる。そのような調整を達成する別の技術は、代理人ドケットＩＳＩＳ −１００９が付けられた”ランダムオリゴヌクレオチドライブラリーおよびこれ を作製する方法”と題された米国特許出願に開示されている。前記特許出願はこ の出願と同時に出願され、共通して譲渡されており、ここに引例として包含され ている。 ＳＵＲＦスクリーニング法において、オリゴマーの量は最初の回のスクリーニ ングでの各々のサブセットの濃度が比較的高くなるように（約１００μＭ）選択 される。現在のところＤＮＡ合成機を使用してオリゴマーを合成するのが好適で ある。そのような合成機では、オリゴマーは１から４μｍｏｌのスケールで最も 都合よく合成される。ライブラリーのサブセットの濃度を約１００μＭとすると 、アッセイは約２００μＬ未満の少容量で好適に実施される。 本発明の化合物の例を以下の実施例に示すが、本発明はこれらに限定されるも のではない。 実施例１ １−（１−チミン）−２，３−プロパンジオール 乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，３０ｍｌ）中のチミン（４．２ｇ，３３ ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、Ｒ−（＋）−グリシドール（２．２ｇ，３０ｍｍｏｌ ）および炭酸カリウム（５０ｍｇ，０．３６ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を８０ ℃に５時間加熱し、次に蒸発させた。生成物をメタノール（２５ｍｌ）で希釈し 、濾過した。濾液を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーによ り精製した。酢酸エチル：メタノール（９：１，ｖ／ｖ）で溶出し、適当な画分 をプールし、蒸発させて、Ｎ（１），Ｎ（３）二置換物質を含まないＮ（１）置 換物質３．０８ｇ（６０％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ，１． ８（ｓ，３，ＣＨ3）；３．３５（ｂｍ，３，ＣＨＯＨＣＨ 2ＯＨ）；３．７およ び３．９（２ｍ，２，ＮＣＨ2）；４．７（ｂｓ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換 ）；５．０（ｂｓ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；７．４（ｓ，１，Ｈ−６） ；１１．２（ｂｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。元素分析：計算値Ｃ8Ｈ12Ｎ2Ｏ4 （２００．１９３）：４７．９９％ Ｃ，６．０４％ Ｈ，１３．９９％ Ｎ； 実測値：４７．３５％ Ｃ，６．１０％ Ｈ，１３．６７％ Ｎ。 実施例２ １−（１−チミン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール 乾燥ピリジン（３０ｍｌ）中の１−（１−チミン）−２，３−プロパンジオー ル（２．０７９ｇ，１２．４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に、塩化４，４’−ジメトキ シトリチル（４．４ｇ，１３ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を室温で４時間撹拌し た。反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより 精製した。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（３／２／１，ｖ／ｖ／％ ）で溶出して、適当な画分をプールし、蒸発させて、３．３９ｇ（５４％）を得 た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ，１．８（ｓ，３，ＣＨ3）；２．９（ ｍ， ２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．８（ｓ，６，ＯＣＨ3）；３．９（ｍ，２，ＮＣＨ2 ）；５．３（ｄ，１，ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；６．９（ｍ，４，トリチル）；７ ．３（ｍ，９，トリチル）；１１．２（ｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。 実施例３ １−（１−チミン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイ ソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 乾燥ＴＨＦ（３５ｍｌ）中の１−（１−チミン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチ ル−２−プロパノール（３．３９ｇ，６．７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプ ロピルエチルアミン（２．４ｍｌ，１４ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を氷浴中で１０℃ に冷却した。クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホス フィン（１．５ｍｌ，６．７ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４時間撹拌した後、反 応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し た。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（１：１：１，ｖ／ｖ／％）で溶 出し、適当な画分をプールし、蒸発させて、２．７８ｇ（６１％）を得た。1Ｈ −ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）：δ，１．２（ｍ，１２，６ＣＨ3）；１．７５（ｄ，３ ，ＣＨ3）；２．４５および２．６（２ｔ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．８（ｄ， ６，ＯＣＨ3）；６．９および７．３（２ｍ，１４，トリチル）；９．３（ｂｓ ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１５０．１９お よび１５０．６６。元素分析：計算値Ｃ38Ｈ47Ｎ4Ｏ7Ｐ（７０２．７８６）：６ ４．９４％ Ｃ，６．７４％ Ｈ，７．９７％ Ｎ；実測値：６４．６０％ Ｃ ，６．９１％ Ｈ，７．８０％ Ｎ。 実施例４ １−（１−イミダゾール）−２，３−プロパンジオール ＤＭＦ（２５０ｍＬ）中の速く撹拌したイミダゾール（１３．６ｇ，０．２ｍ ｏｌｅ）の溶液を、粉末炭酸カリウム（１２ｇ）で処理し、７０℃に３０分間加 熱した。この溶液に、グリシドール（１４．８ｇ，０．２ｍｏｌｅ）を一度に加 え、混合物をこの温度で３６時間撹拌した。得られた黄色懸濁液を濾過し、濾液 を回転蒸留して、透明赤色シロップを得た。シロップをアセトニトリル（１００ ｍＬ）とともに共蒸発させ、次に１０．５×１０ｃｍシリカゲルカラム上でフラ ッシュクロマトグラフィーを行った。酢酸エチル−メタノール（９：１，２Ｌ、 次に４：１，２Ｌ）で段階的勾配溶出して、イミダゾール生成物を非晶質固体と して得た。１６ｇ（５６％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ，７．５５， ７．１０および６．８４（３ｓ，３，イミダゾール）；５．０８（ｄ，１，ＣＨ ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；４．８５（ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；４．０ ５および３．８３（２ｄｄ，２，ＣＨ2）；３．５５（ｍ，１，メチン）；３． ３０および３．１８（２ｍ，２，ＣＨ 2ＯＨ）。元素分析：計算値Ｃ6Ｈ10Ｎ2Ｏ2 （１４２．１５７）：５０．６９％ Ｃ，７．０９％ Ｈ，１９．７１％ Ｎ； 実測値：５０．５９％ Ｃ，７．０７％ Ｈ，１９．５９％ Ｎ。 実施例５ １−（１−イミダゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール 乾燥ピリジン（１５ｍｌ）および乾燥ＤＭＦ（１５ｍｌ）中の１−（１−イミ ダゾール）−２，３−プロパンジオール（１．０ｇ，７．０ｍｍｏｌ）の撹拌溶 液に、塩化４，４’−ジメトキシトリチル（２．６１ｇ，７．７ｍｍｏｌ）を加 えた。懸濁液を室温で４時間撹拌した。追加の等量のトリチル化合物（２．６１ ｇ，７．７ｍｍｏｌ）を加えた。さらに２３時間撹拌を継続し、混合物を蒸発さ せた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。メタノール ：酢酸エチル：トリエチルアミン（１／１９／１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当 な画分をプールし、蒸発させて、４３２ｍｇ（１４％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ，２．７８，２．９５（２ｍ，１，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３． ７（ｓ，６，２０ＣＨ3）；３．８５（ｂｍ，１，ＣＨＯＨ）；３．９５および ４．１（２ｍ，２，ＮＣＨ2）；５．２５（ｄ，１，ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；６． ７から７．５（ｍ，１３／３，ＤＭＴ／イミダゾール）。 実施例６ １−（１−イミダゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 乾燥ＤＭＦ（３５ｍｌ）中の１−（１−イミダゾール）−３−Ｏ−ジメトキシ トリチル−２−プロパノール（４３２ｍｇ，０．９７ｍｍｏｌ）およびＮ−Ｎ− ジイソプロピルエチルアミン（２５２ｍｇ，３．５ｍｍｏｌ）の溶液を氷浴中で ５℃に冷却した。クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ ホスフィン（２３３ｍｇ，１．１ｍｍｏｌ）を加え、反応混合物を室温で３０分 間撹拌した。反応混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ ーにより精製した。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（７／３／１，ｖ ／ｖ／％）で溶出し、適当な画分をプールし、蒸発させて、４９８ｍｇ（８０％ ）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，０．９から１．２（ｍ，１２，ＣＨ3 ）；３．８（ｄ，６，ＯＣＨ3）；６．７５から７．５（Ｍ，１３／３，ＯＤＭ Ｔ／イミダゾール）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１４９．８３および１ ５０．６８。 実施例７ １−（１−カルバゾール）−２，３−プロパンジオール 無水ＤＭＦ（３００ｍＬ）中のカルバゾール（１４ｇ，８３ｍｏｌｅ）および Ｒ−（＋）−グリシドール（６．２０ｇ／８３ｍｍｏｌ）の速く撹拌した溶液を 、粉末炭酸カリウム（２．３ｇ）で処理し、混合物を７０℃で１８時間加熱した 。得られた黄色懸濁液を濾過し、次に回転蒸留させて、黄色シロップを得た。シ ロップをアセトニトリル（１００ｍＬ）とともに共蒸発させ、次に１０．５×１ ０ｃｍシリカゲルカラム上でフラッシュクロマトグラフィーを行った。酢酸エチ ルで溶出して、カルバゾール生成物を非晶質固体として得た。８．２５ｇ（４１ ％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ，８．１３，７．６０，７．２３およ び７．１０（４ｍ，８，カルバゾール）；５．０３および４．９０（２ｓ，２， ヒドロキシル，Ｄ2Ｏと交換）；４．４７および４．２７（２ｄｄ，２，ＣＨ2） ；３．９０（ｍ，１，メチン）；３．４０（ｍ，２，ＣＨ 2ＯＨ）。元素分析： 計算値Ｃ15Ｈ15ＮＯ2（２４１．２８９）：７４．６６％ Ｃ，６．２７％ Ｈ ，５．８０％ Ｎ；実測値：７４．３２％ Ｃ，６．２５％ Ｈ，５．７６％ Ｎ。 実施例８ １−（１−カルバゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール 乾燥ピリジン（４０ｍｌ）中の１−（１−カルバゾール）−２，３−プロパン ジオール（１．１ｇ，４．５ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化４，４’−ジメトキシト リチル（１．５４ｇ，４．５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で３時間撹 拌し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した 。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（１／９／１，ｖ／ｖ／％）で溶出 し、適当な画分をプールし、蒸発させて、９７６ｍｇ（３９％）を得た。1Ｈ− ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，２．９から３．１（２ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ） ；３．７（ｓ，６，２ＯＣＨ3）；４．１（ｍ，１，ＣＨＯＨ）；４．３から４ ．５（２ｍ，２，ＮＣＨ2）；５．２（ｄ，１，ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；６．８か ら８．２（ｍ，２１，カルバゾールおよびトリチル）。元素分析：計算値Ｃ36Ｈ33 ＮＯ4（５４３．６６１）：７９．５３％ Ｃ，６．１２％ Ｈ，２．５８％ Ｎ；実測値：７９．２８％ Ｃ，６．３４％ Ｈ，２．７０％ Ｎ。 実施例９ １−（１−カルバゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（４ ０３ｍｇ，１．７ｍｍｏｌ）を、５℃において、乾燥ＴＨＦ（４０ｍｌ）中の１ −（１−カルバゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール（９ １６ｍｇ，１．７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４４ ５ｍｇ，３．４ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。４時間後、反応混合物を蒸発させ、 残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。酢酸エチル：ヘキ サン：トリエチルアミン（１／１９／１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当な画分を プールし、蒸発させて、８５０ｍｇ（６８％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ ）；δ，０．７から１．０５（３ｄ，１２，ＣＨ3）；３．７５（ｄ，６，ＯＣ Ｈ3）；６．７から８．１（ｍ，２１，カルバゾールおよびトリチル）。31Ｐ− ＮＭＲ （ＣＤ3ＣＮ）；δ，１４９．１および１４９．５。元素分析：計算値Ｃ45Ｈ50 Ｎ3Ｏ5Ｐ（７４３．８８１）：７２．６６％ Ｃ，６．７７％ Ｈ，５．６５％ Ｎ；実測値：７２．６２％ Ｃ，６．７６％ Ｈ，５．６１％ Ｎ。 実施例１０ １−（１−ウラシル）−２，３−プロパンジオール ウラシル（２１．５６ｇ，１９２ｍｍｏｌ）を加熱しながら乾燥ＤＭＦ（５０ ０ｍｌ）に溶解し、Ｒ−（＋）−グリシドール（１５．１ｇ，２０３ｍｍｏｌ） を加えた。懸濁液を７０℃に加熱した。４時間後、反応液を蒸発させ、残渣をシ リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。酢酸エチル：メタノール（ １９／１，ｖ／ｖ）で溶出し、適当な分画をプールし、蒸発させて、１５．６２ ｇ（４４％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，３．３５（ｍ，３， ＣＨＯＨＣＨ 2ＯＨ）；３．７および３．９（２ｍ，２，ＮＣＨ2）；５．５（ｍ ，１，Ｈ−５）；７．５（ｄ，１，Ｈ−６）；１１．２（ｂｓ，１，ＮＨ）。 実施例１１ １−（１−ウラシル）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール 塩化ジメトキシトリチル（２９．８ｇ，８８ｍｍｏｌ）を、乾燥ピリジン（１ ５０ｍｌ）中の１−（１−ウラシル）−２，３−プロパンジオール（１５．６２ ｇ，８４ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。反応混合物を室温で２２時間撹拌し、蒸発 させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。酢酸エチ ル：ヘキサン：トリエチルアミン（３／２／１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当な 画分をプールし、蒸発させて、１．１ｇ（４％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳ Ｏ−ｄ6）；δ，２．８から３．０（２ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．７（ｓ， ６，２ＯＣＨ3）；３．８５（ｍ，１，ＣＨＯＨ）；３．９５（ｍ，２，ＮＣＨ2 ）；５．３（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；５．４１（ｄ，１，Ｈ−５） ；６．８５（ｄ，４，トリチル）；７．３および７．４（２ｍ，１０，Ｈ−６お よびトリチル）；１１．２（ｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。 実施例１２ １−（１−ウラシル）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジ イソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 乾燥ＴＨＦ（３５ｍｌ）中の１−（１−ウラシル）−３−Ｏ−ジメトキシトリ チル−２−プロパノール（５９８ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソ プロピルエチルアミン（１５８ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を氷浴中で１０℃に冷却 した。クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン （２８６ｍｇ，１．２ｍｍｏｌ）を加えた。室温で４時間撹拌した後、反応混合 物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。酢 酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（１：１：１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、 適当な画分をプールし、蒸発させて、３６８ｍｇ（４２％）を得た。1Ｈ−ＮＭ Ｒ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１．２（ｍ，１２，ＣＨ3）；２．４５および２．６（２ ｔ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．８（ｄ，６，ＯＣＨ3）；６．９および７．３（ ２ｍ，１５，トリチルおよびＨ−６）；９．３（ｂｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換 ）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１５４．８８および１５５．２。 実施例１３ １−［９−（Ｎ６−ベンゾイル）アデニン］−２，３−プロパンジオール 乾燥ＤＭＦ（５００ｍｌ）中のアデニン（３０．０ｇ，０．２２ｍｏｌ）の撹 拌溶液に、Ｒ−（＋）−グリシドール（２２．０ｍｌ，０．３３ｍｏｌ）および 炭酸カリウム（７．６ｇ，５５ｍｍｏｌ）を加えた。懸濁液を８５℃で２０時間 加熱し、次に濃縮した。残渣をメタノールからの結晶化により精製して、１８． １ｇ（３９％）の中間体１−（９−アデニン）−２，３−プロパンジオールを得 た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，３．３から３．４（ｍ，２，ＣＨ 2Ｏ Ｈ）；３．８から３．９（ｍ，１，ＣＨＯＨ）；３．９から４．１および４．３ から４．４（２ｍ，２，ＮＣＨ2）；４．８から４．９（ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2 Ｏと交換）；５．１から５．２（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；７．３（ ｓ，２，ＮＨ2，Ｄ2Ｏと交換）；８．０および８．１（２ｓ，２，Ｃ（２）−Ｈ ，Ｃ（８）−Ｈ）。元素分析：計算値Ｃ8Ｈ11Ｎ5Ｏ2（２０９．２０７）：４ ５．９３％ Ｃ，５．３０％ Ｈ，３３．４８％ Ｎ；実測値：４５．８１％ Ｃ，５．４２％ Ｈ，３２．９３％ Ｎ。 １−（９−アデニン）−２，３−プロパンジオール（１８．０ｇ，８６．０ｍ ｍｏｌ）の懸濁液に、０℃でクロロトリメチルシラン（３２．７ｍｌ，２５７ｍ ｍｏｌ）を加えた。１５分後、塩化ベンゾイル（３０．０ｍｌ，２５９ｍｍｏｌ ）を加え、混合物を室温で３時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、冷水１００ ｍｌを加えた。１５分後、冷濃水酸化アンモニウム１００ｍｌを加えた。室温で １時間撹拌した後、混合物を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフ ィーにより精製した。メタノール：酢酸エチル（１／１０，ｖ／ｖ）で溶出し、 適当な画分をプールし、蒸発させて、４．１ｇ（１４．８％）を得た。1Ｈ−Ｎ ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ，３．３から３．５（ｍ，２，ＣＨ 2ＯＨ）；３．８ から４．０（ｍ，１，ＣＨＯＨ）；４．１から４．２および４．４から４．５（ ２ｍ，２，ＮＣＨ2）；４．９から５．０（ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換） ；５．２から５．３（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；７．４から８．２（ ２ｍ，５，ベンゾイル）；８．４から８．８（２ｓ，２，Ｃ（２）−Ｈ，Ｃ（８ ）−Ｈ）；１１．２（ｂｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。元素分析：計算値Ｃ15 Ｈ15Ｎ5Ｏ3（３１３．３１５）：５７．５０％ Ｃ，４．８２％ Ｈ，２２．３ ５％ Ｎ；実測値：５７．２４％ Ｃ，４．８１％ Ｈ，２１．９７％ Ｎ。 実施例１４ １−［９−（Ｎ６−ベンゾイル）アデニン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２ −プロパノール 無水ピリジン（５０ｍｌ）中の１−［９−（Ｎ６−ベンゾイル）アデニン］− ２，３−プロパンジオール（４．０ｇ，１３ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化４，４’ −ジメトキシトリチル（４．７ｇ，１４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４ 時間撹拌した。メタノール（５ｍｌ）を加え、混合物を蒸発させた。残渣をシリ カゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。ヘキサン／酢酸エチル／トリ エチルアミン（２／８／１，ｖ／ｖ／ｖ）で溶出し、適当な画分をプールし、蒸 発させて、４．２ｇ（５３％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ， ２．９から３．１（２ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．７から３．８（ｓ，６， ＯＣＨ3）；４．１から４．６（ｍ，３，ＮＣＨ2ＣＨＯＨ）；５．４から５．５ （ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；６．８から８．２（４ｍ，１８，トリチ ル，ベンゾイル）；８．３から８．８（２ｓ，２，Ｃ（２）−Ｈ，Ｃ（８）−Ｈ ）；１１．２（ｂｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。 実施例１５ １−［９−（Ｎ６−ベンゾイル）アデニン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２ −Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト ］プロパン 無水ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の１−［９−（Ｎ６−ベンゾイル）アデニン］−３ −Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール（４．２ｇ，６．８ｍｍｏｌ）の 溶液に、ジイソプロピルエチルアミン（２．９ｍｌ）およびクロロ−β−シアノ エトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（１．５ｍｌ，６．７ｍｍ ｏｌ）を加えた。混合物を室温で２０時間撹拌した。残渣を蒸発させ、シリカゲ ルカラムクロマトグラフィーにより精製した。ヘキサン／酢酸エチル／トリエチ ルアミン（２／８／．１，ｖ／ｖ／ｖ）で溶出し、適当な分画をプールし、蒸発 させて、４．５４ｇ（８２％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，０．９ −１．１（ｍ，１２，ＣＨ3）；２．４から２．６（ｍ，２，ＣＨ2ＣＮ）；３か ら３．２（ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．４から３．７（ｍ，３，ＯＣＨ 2ＣＨ2 ＣＮ，（ＣＨ3）2ＣＨ）；３．７から３．８（ｄ，６，ＯＣＨ3）；４．３から ４．６（ｍ，３，ＮＣＨ 2ＣＨＯＨ）；６．８から７．７（３ｍ，１８，トリチ ル，ベンゾイル）；７．９から８．８（２ｄ，２，Ｃ（２）−Ｈ，Ｃ（８）−Ｈ ）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１４９．８０および１５０．７５。 実施例１６ １−［９−（２−アミノ−６−クロロ）プリン］−２，３−プロパンジオール 無水ＴＨＦ２００ｍｌ中の２−アミノ−６−クロロプリン（２１．３ｇ，１２ ５ｍｍｏｌ）の溶液に、Ｒ−（＋）−グリシドール（１４．０ｇ，１８７ｍｍｏ ｌ）および炭酸カリウム（３．５ｇ，２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応液を８５℃ で３時間撹拌した。反応混合物を濾過した。濾液を蒸発させ、残渣をシリカゲル カラムクロマトグラフィーにより精製した。酢酸エチル／メタノール（９／１， ｖ／ｖ）で溶出し、適当な分画をプールし、蒸発させて、１１．７４ｇ（３８％ ）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，３．２から３．５（ｍ，２，ＣＨ 2 ＯＨ）；３．７から５．３（２ｍ，３，ＮＣＨ 2ＣＨＯＨ）；４．８から４． ９（ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；５．２から５．３（ｄ，１，ＣＨＯＨ ，Ｄ2Ｏと交換）；６．８から６．９（ｓ，２，ＮＨ2，Ｄ2Ｏと交換）８．０（ ｓ，１，Ｃ（８）Ｈ）。元素分析：計算値Ｃ8Ｈ10Ｎ5Ｏ2Ｃｌ（２４３．６５２ ）：３９．４４％ Ｃ，４．１４％ Ｈ，２８．７４％ Ｎ；実測値：３９．４ １％ Ｃ，４．１２％ Ｈ，２８．４５％ Ｎ。 実施例１７ １−（９−グアニン）−２，３−プロパンジオール １−［９−（２−アミノ−６−クロロ）プリン］−２，３−プロパンジオール （２．６２ｇ，１１ｍｍｏｌ）を１Ｎ ＨＣｌ（ａｑ，１００ｍｌ）中で８５℃ で３時間撹拌した。反応混合物を氷浴中で冷却し、濃縮水酸化アンモニウムでｐ Ｈ１０の塩基性とした。生成物を結晶質固体として濾別した。収量２．０４ｇ（ ８４％）。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，３．２から３．４（ｍ，２，ＣＨ 2 ＯＨ）；３．７から４．２（Ｍ，３，ＮＣＨ 2ＣＨＯＨ）；４．７から４．９ （ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；５．１から５．２（ｄ，１，ＣＨＯＨ， Ｄ2Ｏと交換）；６．６（ｓ，２，ＮＨ2，Ｄ2Ｏと交換）；７．７（ｓ，１，Ｃ （８）−Ｈ）；１０．７（ｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。元素分析：計算値Ｃ8 Ｈ11Ｎ5Ｏ3（２２５．２０７）：４２．６７％ Ｃ，４．９２％ Ｈ，３１．１ ０％ Ｎ；実測値：４２．２８％ Ｃ，４．８８％ Ｈ，３０．８５％ Ｎ。 実施例１８ １−［９−（Ｎ２−イソブチリル）グアニン］−２，３−プロパンジオール ピリジン（４００ｍｌ）中の１−（９−グアニン）−２，３−プロパンジオー ル（１７．０ｇ，７５．５ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃においてクロロトリメチル シラン（２８．６ｍｌ，２２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を０℃で１５分 間撹拌し、次に室温で３０分間撹拌した。混合物を再び０℃に冷却し、塩化イソ ブチリル（２３．７ｍｌ，２２６ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で２時間撹 拌した。反応液を０℃に冷却し、氷冷水１００ｍｌを加え、１５分後に氷冷水酸 化アンモニウム１００ｍｌを加えた。反応液を室温で３０分間撹拌し、ほぼ乾燥 するまで蒸発させ、メタノールを加えて、不要の副生成物を析出させて濾過した 。濾液を蒸発させ、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した 。酢酸エチル／メタノール（９／１，ｖ／ｖ）で溶出し、適当な画分をプールし 、蒸発させて、１３．８ｇ（６２％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）； δ，１から１．２（ｄ，６，ＣＨ3）；２．７から２．９（ｍ，１，ＣＯＣＨ） ；３．３から３．５（ｍ，２，ＣＨ 2ＯＨ）；３．８から３．９（ｍ，１，ＣＨ ＯＨ）；３．９から４．３（２ｍ，２，ＮＣＨ2）；４．８から４．９（ｔ，１ ，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；５．１から５．２（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと 交換）；７．９（ｓ，１，Ｃ（８）−Ｈ）；１１．６から１２．２（２ｓ，２， ＮＨ，ＣＯＮＨ，いずれもＤ2Ｏと交換）。元素分析：計算値Ｃ12Ｈ17Ｎ5Ｏ4（ ２９５．２９７）：４８．８１％ Ｃ，５．８０％ Ｈ，２３．７２％ Ｎ；実 測値：４８．３６％ Ｃ，５．６２％ Ｈ，２３．１０％ Ｎ。 実施例１９ １−［９−（Ｎ２−イソブチリル）グアニン−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２ −プロパノール ピリジン（１００ｍｌ）中の１−［９−（Ｎ２−イソブチリル）グアニン］− ２，３−プロパンジオール（５．３ｇ，１８ｍｍｏｌ）の溶液に、塩化４，４’ −ジメトキシトリチル（６．６９ｇ，２０ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室 温で４時間撹拌した。メタノールで急冷した後、混合物を蒸発させた。残渣をシ リカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。メタノール：酢酸エチル： トリエチルアミン（５／９５／１，％／％／％）で溶出し、適当な画分をプール し、蒸発させて、４．９ｇ（４５％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）； δ，１．１から１．２（ｄ，６，ＣＨ3）；２．７から３．１（ｍ，３，ＣＨ2Ｏ ＤＭＴ，ＣＯＣＨ）；３．７から３．９（ｓ，６，ＯＣＨ3）；４．１から４． ３（ｍ，３，ＮＣＨ 2ＣＨＯＨ）；５．４から５．５（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏ と交換）；６．７から８．０（ｍ，１４，トリチル，Ｃ（８）−Ｈ）；１１．５ から１２（２ｂｓ，２，ＮＨ，ＣＯＮＨ，いずれもＤ2Ｏと交換）。 実施例２０ １−［９−（Ｎ−イソブチリル）グアニン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２ −Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト ］プロパン ＴＨＦ（２００ｍｌ）中の１−［９−（Ｎ２−イソブチリル）グアニン］−３ −Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール（１３．１２ｇ，２２ｍｍｏｌ） およびジイソプロピルエチルアミン（１０ｍｌ）の溶液に、０℃においてクロロ −β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（５．６ｍｌ ，２５ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を室温で２０時間撹拌した。反応液を濃 縮し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。１％トリエ チルアミンを含む酢酸エチルで溶出し、適当な画分をプールし、蒸発させて、８ ．６２ｇ（４９％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１．０から１．２ （ｍ，１８，ＣＨ3）；２．４から２．８（ｍ，２，ＣＨ2ＣＮ）；２．８から３ ．０（ｍ，１，ＣＯＣＨ）；３．１から３．３（ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３ ．４から３．８（ｍ，９，ＯＣＨ 2ＣＨ2ＣＮ，（ＣＨ3）2ＣＨ，ＯＣＨ3）；４ ．２から４．４（ｍ，３，ＮＣＨ2ＣＨＯ）；６．７から７．７（ｍ，１４，ト リチル，Ｃ（８）−Ｈ）；１２．３（ＢＳ，２，ＮＨ，ＣＯＮＨ，いずれもＤ2 Ｏと交換）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；ｄ，１５０．１５および１５０．４ ８。 実施例２１ １−（１−シトシン）−２，３−プロパンジオール シトシン（１１．０ｇ，９９ｍｍｏｌ），Ｒ−（＋）−グリシドール（８．９ ｇ，１２０ｍｍｏｌ），および炭酸カリウム（６．９ｇ，５０ｍｍｏｌ）の溶液 をＤＭＦ（３００ｍｌ）中で８５℃で２２時間撹拌した。粗反応混合物を濾過し 、濾液を蒸発させた。この残渣をメタノールから結晶化させて、１０．５ｇ（５ ７％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，３．２から３．５（ｍ，３ ，ＣＨＯＨＣＨ 2ＯＨ）；３．６から３．７（ｍ，１，ＮＣＨ2）；３．８から４ ．０（ｄｄ，１，ＮＣＨ2）；４．７から４．８（ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと 交換）；４．９から５．１（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；５．６から５ ．７（ｄ，１，Ｃ（５）−Ｈ）；７．０から７．１（ｂｓ，２，ＮＨ2，Ｄ2Ｏと 交換）；７．４から７．５（ｄ，１，Ｃ（６）−Ｈ）。 実施例２２ １−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］−２，３−プロパンジオール ピリジン（４００ｍｌ）中の１−（１−シトシン）−２，３−プロパンジオー ル（１１．１１ｇ，６０ｍｍｏｌ）の氷冷懸濁液に、クロロトリメチルシランを 加えた。この混合物を氷浴温度で３０分間撹拌した。塩化ベンゾイルを加え、混 合物を室温で２時間撹拌した。混合物を０℃に冷却し、氷冷水（１００ｍｌ）を 加えた。１５分間撹拌した後、氷冷水酸化アンモニウム（１００ｍｌ）を加えた 。反応混合物を１５分間撹拌し、濃縮した。水（４００ｍｌ）を加え、混合物を ほぼ沸騰するまで加熱した。所望の生成物を固体として濾過した。乾燥後、収量 は１５．３１ｇ（８８％）であった。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，３． ３から３．６（ｍ，３，ＣＨＯＨＣＨ 2ＯＨ）；３．７から３．９（ｂｓ，１， ＮＣＨ2）；４．１から４．３（ｄ，１，ＮＣＨ 2）；４．７から４．９（ｔ，１ ，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；５．１（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；７ ．２から７．３（ｄ，１，Ｃ（５）−Ｈ）；７．５から７．７（ｍ，３，ベンゾ イル）；８．０から８．１（ｄ，３，Ｃ（６）−Ｈ，ベンゾイル）；１０．５か ら１１（ｂｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。 実施例２３ １−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２ −プロパノール ピリジン（１００ｍｌ）中の１−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］−２ ，３−プロパンジオール（７．０ｇ，２４ｍｍｏｌ）および塩化４，４’−ジメ トキシトリチル（９．８４ｇ，２９ｍｍｏｌ）の溶液を室温で２４時間撹拌した 。反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグ ラフィーにより精製した。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（６／４／ １，ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当な画分をプールし、蒸発させて、５２％の収率 を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，２．９から３．１（ｍ，２，ＣＨ 2 ＯＤＭＴ）；３．６から３．９（ｍ，７，ＯＣＨ3，ＣＨＯＨ）；４から４．３ （２ｍ，２，ＮＣＨ2）；５．３から５．４（ｄ，１，ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；６ ．８から８．２（３ｍ，２０，トリチル，ベンゾイル，Ｃ（５）−Ｈ，Ｃ（６） −Ｈ）；１１．２（ｓ，１，ＮＨ，Ｄ2Ｏと交換）。 実施例２４ １−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２ −Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト ］プロパン ＴＨＦ（５０ｍｌ）中の１−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］−３−Ｏ −ジメトキシトリチル−２−プロパノール（７．４８ｇ，１３ｍｍｏｌ）および ジイソプロピルエチルアミン（５．５ｍｌ）の溶液に、クロロ−β−シアノエト キシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（３．２ｍｌ，１４ｍｍｏｌ） を加えた。混合物を室温で２時間撹拌した。混合物を濾過し、濾液をシリカゲル カラムクロマトグラフィーにより精製した。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチル アミン（１／１／１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当な画分をプールし、蒸発させ て、５．７ｇ（５７％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１から１．２ （ｍ，１２，ＣＨ3）；２．４から２．７（２ｔ，２，ＣＨ2ＣＮ）；３．１から ３．３（ｍ，２，ＣＨ 2ＯＤＭＴ）；３．５から４．０（ｍ，１１，ＯＣＨ 2ＣＨ2 ＣＮ，ＣＨＣＨ3）2，ＯＣＨ3，ＮＣＨ2ＣＨ）；４．１から４．４（ｍ，２， ＮＣＨ2）；６．６から８．０（ｍ，２０，トリチル，ベンゾイル，Ｃ（５）− Ｈ，Ｃ（６）−Ｈ）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤ3ＣＮ）；δ，１５４．５および１５ ５．１。 実施例２５ １−Ｏ−ジメトキシトリチルグリシドール グリシドール（４．４ｍｌ，６７ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１９ｍ ｌ，１３６ｍｍｏｌ）を無水ジクロロメタン１２０ｍｌ中で撹拌した。塩化ジメ トキシトリチル（２２．７ｇ，６７ｍｍｏｌ）を加え、混合物を室温で８時間撹 拌した。混合物を濾過し、濾液を蒸発させた。残渣をジクロロメタンに溶解し、 水、つづいてブラインで洗浄した。粗粒シリカゲルを加え、この物質を蒸発させ た。この物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。ヘキサン ：酢酸エチル：トリエチルアミン（１９／１／１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当 な分画をプールし、蒸発させて、１６．６ｇ（６５％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ，２．６から２．９（２ｔ，２，環ＣＨ2）；３．１から３ ．２（ｍ，１，ＣＨ）；３．２から３．４（２ｍ，２，ＣＨ2）；３．７（ｓ， １，ＯＣＨ3）；６．８から７．４（３ｍ，１３，トリチル）。 実施例２６ １−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−フェニル−２−ブタノール 塩化ベンジルマグネシウム（５５ｍｌ，２Ｍ溶液，１１０ｍｍｏｌ）を−７８ ℃に冷却し、ＴＨＦ（２００ｍｌ）中のジリチウムテトラクロロ銅酸塩（１１ｍ ｌ，０．１Ｍ溶液，１２ｍｍｏｌ）の溶液に−７８℃で加えた。この混合物に、 ＴＨＦ（２０ｍｌ）中の１−Ｏ−ジメトキシトリチルグリシドール（８．２８ｇ ，２２ｍｍｏｌ）を−７８℃で加えた。混合物を室温で1８時間撹拌した。混合 物を０℃に冷却し、濃塩化アンモニウム（１０ｍｌ）をゆっくり加えた。混合物 を水で希釈し、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を硫酸マグネシウムで 乾燥し、濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製 した。酢酸エチル：ヘキサン（１：９，ｖ／ｖ）で溶出し、適当な画分をプール し、濃縮して、１．３７ｇ（１７％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；δ， １．６から１．８（ｍ，２，Ｃ6Ｈ5ＣＨ2）；２．３から２．４（ｄ，１，ＯＨ ，Ｄ2 Ｏと交換）；２．５から２．８（ｍ，２，ＣＨ 2ＣＨＯＨ）；３．０から３．２ （ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．８（ｓ，６，ＯＣＨ3）；６．８から７．５（ ｍ，１８，トリチルおよびフェニル）。 実施例２７ １−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）− ２−シアノエトキシホスファイト］−４−フェニルブタン １−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−フェニル−２−ブタノール（１．３７ｇ， ２．９ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（１．５ｍｌ，８．６ｍｍ ｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍｌ）中で撹拌し、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノホスフィン（０．６５ｍｌ，２．９ｍｍｏｌ）を加えた 。混合物を室温で１０時間撹拌し、濾過した。この物質をシリカ粗粒ゲル上に濃 縮し、乾燥した。この物質をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製し た。酢酸エチル：ヘキサン：トリエチルアミン（１：９：１，ｖ／ｖ／％）で溶 出し、適当な画分をプールし、蒸発させて、０．９４ｇ（４９％）を得た。1Ｈ −ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；δ，１．０から１．３（ｍ，１２，ＣＨ3）；１．８か ら２．１（ｍ，２，Ｃ6Ｈ5ＣＨ 2）；２．３から２．８（２ｍ，４，ＣＨ2ＣＮ， Ｃ6Ｈ5ＣＨ2ＣＨ 2）；３．０から３．３（２ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３．５ から３．９（ｍ，１０，ＣＨ（ＣＨ3）2，ＰＯＣＨ2，ＯＣＨ3）；３．９から４ ．２（ｍ，１，ＣＨ2ＣＨ）６．８から７．５（３ｍ，１８，フェニルおよびト リチル）。31Ｐ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；δ，１４８．４８および１４８．６９ 。 実施例２８ １−ジメトキシトリチル−２−ウンデカノール 塩化オクチルマグネシウム（９．４ｍｌ，２Ｍ溶液，１８．８ｍｍｏｌ）を、 無水ＴＨＦ（１５ｍｌ）中のジリチウムテトラクロロ銅酸塩（１．９ｍｌ，０． １Ｍ溶液，０．１１ｍｍｏｌ）の溶液に−７８℃において加えた。１−Ｏ−ジメ トキシトリチルグリシドールを加え、混合物を室温まで暖まらせ、２時間撹拌し た。混合物を０℃に冷却し、飽和塩化アンモニウムを加えた。水を加え、混合物 を酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル抽出物を合わせ、硫酸マグネシウムで乾燥 した。この物質を濾過し、濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ ーにより精製した。酢酸エチル／ヘキサン／トリエチルアミン（５／９５／１， ｖ／ｖ／％）で溶出し、適当な画分をプールし、蒸発させて、１．１ｇ（６０％ ）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）；δ，０．８から０．９（ｔ，３，ＣＨ3 ）；１．２から１．４（ｍ，１６，（ＣＨ2）7ＣＨ2）；２．３から２．４（ｄ ，１，ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；３．０から３．２（ｍ，２，ＣＨ2ＯＤＭＴ）；３ ．７から３．９（ｓ，７，ＯＣＨ3，ＣＨＯＨ）；６．８から７．５（ｍ，１４ ，ＤＭＴ）。 実施例２９ １−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２− シアノエトキシホスファイト］ウンデカン ＴＨＦ（５０ｍｌ）中のＨＰＬＣ精製１−ジメトキシトリチル−２−ウンデカ ノール（１．０６ｇ，２．２ｍｍｏｌ）、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノホスフィン（０．５ｍｌ，２．２ｍｍｏｌ）およびトリ エチルアミン（１．０ｍｌ，５．７ｍｍｏｌ）の混合物を室温で２０時間撹拌し た。混合物を濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。酢 酸エチル／ヘキサン／トリエチルアミン（１／９／１，ｖ／ｖ／％）で溶出し、 適当な画分をプールし、蒸発させて、表題化合物を得た。 実施例３０ フルオレニルコハク酸半エステル ジクロロメタン（２５ｍｌ）中の９−フルオレニルメタノール（３．９２ｇ， ２０ｍｍｏｌ）、無水コハク酸（２．２０ｇ，２２ｍｍｏｌ），および４−ジメ チルアミノピリジン（０．２５ｇ，２ｍｍｏｌ）の溶液に、トリエチルアミン（ ３ｍｌ）を加えた。混合物を室温で４時間撹拌した。反応液をジクロロメタン（ ５０ｍｌ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウムで抽出した（３×５０ｍｌ）。合 わせた抽出物を酢酸エチルで逆抽出した。得られた炭酸水素ナトリウム溶液を ３Ｎ ＨＣｌで酸性とし、冷蔵した。溶液から析出物が沈殿し、乾燥後、表題化 合物３．０５ｇ（５６％）を得た。 実施例３１ フルオレニル−［Ｎ−（アミノ−２，３−プロパンジオール）］スクシンイミド 半エステル ＤＭＦ（５０ｍｌ）中のフルオレニルコハク酸半エステル（３．０５ｇ，１１ ．２４ｍｍｏｌ）の懸濁液に、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２．２８ｇ ，１６．８６ｍｍｏｌ）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチ ルカルボジイミド−ＨＣｌ（３．２３ｇ，１６．８４ｍｍｏｌ）を順番に加えた 。混合物を室温で２時間撹拌し、カニューレを通して１−アミノ−２，３−プロ パンジオール（１．０２ｇ，１１．２４ｍｍｏｌ）を含むフラスコに移した。反 応液を室温で３時間撹拌した。混合物を濃縮し、酢酸エチル（１００ｍｌ）と水 （５０ｍｌ）との間に分配した。層を分離し、水性層を酢酸エチル（３×５０ｍ ｌ）で抽出した。酢酸エチル抽出物を合わせ、硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し 、濃縮した。1Ｈ−ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）；δ，７．８−７．２ ６（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），４．４３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨＣＨ 2Ｏ ＣＯ），４．２３（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５Ｈｚ，ＣＨＣＨ2ＯＣＯ），２．７０ （４Ｈ，ｓ，ＯＣＯＣＨ 2ＣＨ 2ＣＯＯ）。 実施例３２ フルオレニル−［Ｎ−（１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパ ノール）スクシンイミド］半エステル ピリジン（２０ｍｌ）中のフルオレニル−［Ｎ−（２，３−プロパンジオール ）］スクシンイミド半エステル（０．７４ｇ，２．０ｍｍｏｌ）の溶液を塩化４ ，４’−ジメトキシトリチル（０．６８ｇ，２．０ｍｍｏｌ）で処理した。混合 物を室温で一夜撹拌した。精製物の薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）分析は、 より高い移動スポットに完全に変換したことを示した。これはメタノール中１０ ％硫酸でスプレーして加熱したときに特徴的な赤色を与える。 実施例３３ フルオレニル−Ｎ−｛３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイ ソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン｝スクシンイ ミドエステル 表題ホスホルアミダイトは、フルオレニル−［Ｎ−（３−Ｏ−ジメトキシトリ チル−２−プロパノール）］スクシンイミド半エステルから、実施例２７の方法 を用いて製造した。 実施例３４ １−［（Ｎ−ベンゾイル）アミノ］−２，３−プロパンジオール Ｒ−（＋）−グリシドール（１０ｍｌ，０．１５ｍｏｌ）およびアンモニアで 飽和したイソプロピルアルコール（７０ｍｌ）をボンベ中に密封し、室温で５日 間撹拌した。ボンベを冷却し、開封した。溶液を蒸発させ、残渣をピリジン（１ ００ｍｌ）に溶解した。この溶液を塩化ベンゾイル（４７ｍｌ，０．４ｍｏｌ） で３０分間処理し、濾過した。濾液を蒸発させ、メタノール（４００ｍｌ）に溶 解し、次に水酸化アンモニウム（１００ｍｌ）で処理した。混合物を４時間撹拌 し、蒸発させた。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製した。 酢酸エチル：メタノール（１９／１，ｖ／ｖ）で溶出し、適当な画分をプールし 、蒸発させて、９．９ｇ（３４％）を得た。1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）；δ ，３．１から３．５（ｍ，４，ＣＨ 2ＣＨＯＨＣＨ 2ＯＨ）；３．６から３．７（ ｍ，１，ＣＨＯＨ）；４．６から４．７（ｔ，１，ＣＨ2ＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）； ４．８から４．９（ｄ，１，ＣＨＯＨ，Ｄ2Ｏと交換）；７．４から７．６およ び７．８から７．９（ｍ，５，ベンゾイル）；８．４から８．５（ｔ，１，ＮＨ ）。 実施例３５ １−［（Ｎ−ベンゾイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［ （Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパ ン １−［（Ｎ−ベンゾイル）アミノ］−２，３−プロパンジオールを、実施例５ の方法にしたがってピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して、１−［（ Ｎ−ベンゾイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを 得た。得られた１−［（Ｎ−ベンゾイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチ ル−２−プロパノールを、さらに実施例６にしたがってクロロ−β−シアノエト キシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して、表題化 合物を得た。 実施例３６ １−（１−ピロール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジ イソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン ピロールを、実施例４にしたがって炭酸カリウムの存在下でグリシドールで処 理して、１−（１Ｈ−ピロール）−２，３−プロパンジオールを得た。得られた １−（１−ピロール）−２，３−プロパンジオールを、さらに実施例５の方法に したがってピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して、１−（１−ピロ− ル）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得た。得られた１−（ １−ピロール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを、さらに実 施例６にしたがってクロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミ ノホスフィンでホスフィチル化して、表題化合物を得た。 実施例３７ １−（１０−フェノキサジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン フェノキサジンを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシド ールで処理して１−（１−フェノキサジン）−２，３−プロパンジオールを得る 。得られた１−（１−フェノキサジン）−２，３−プロパンジオールを、実施例 ５の手順に従い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（１−フ ェノキサジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。得ら れた１−（１−フェノキサジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノ ールを、実施例６の手順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソ プロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例３８ １−（１−ピラゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン ピラゾールを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシドール で処理して１−（１−ピラゾール）−２，３−プロパンジオールを得る。得られ た１−（１−ピラゾール）−２，３−プロパンジオールを、実施例５の手順に従 い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（１−ピラゾール）− ３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。得られた１−（１−ピ ラゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを、実施例６の手 順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフ ィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例３９ １−（１−インドール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン インドールを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシドール で処理して１−（１−インドール）−２，３−プロパンジオールを得る。得られ た１−（１−インドール）−２，３−プロパンジオールを、実施例５の手順に従 い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（１−インドール）− ３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。得られた１−（１−イ ンドール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを、実施例６の手 順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフ ィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４０ １−（１−インダゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン １Ｈ−インダゾールを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリ シドールで処理して１−（１Ｈ−インダゾール）−２，３−プロパンジオールを 得る。得られた１−（１Ｈ−インダゾール）−２，３−プロパンジオールを、実 施例５の手順に従い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（１ −インダゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。得 られた１−（１−インダゾール）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノ ールを、実施例６の手順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソ プロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４１ １−（９−プリン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイ ソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン プリンを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシドールで処 理して１−（９−プリン）−２，３−プロパンジオールを得る。得られた１−（ ９−プリン）−２，３−プロパンジオールを、実施例５の手順に従い、ピリジン 中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（９−プリン）−３−Ｏ−ジメトキ シトリチル−２−プロパノールを得る。得られた１−（９−プリン）−３−Ｏ− ジメトキシトリチル−２−プロパノールを、実施例６の手順に従い、クロロ−β −シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル 化して表題化合物を得る。 実施例４２ １−（１０−フェノチアジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン フェノチアジンを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシド ールで処理して１−（１０−フェノチアジン）−２，３−プロパンジオールを得 る。得られた１−（１０−フェノチアジン）−２，３−プロパンジオールを、実 施例５の手順に従い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（１ ０−フェノチアジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る 。得られた１−（１０−フェノチアジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２− プロパノールを、実施例６の手順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４３ １−（９−β−カルボリン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ， Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン β−カルボリンを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシド ールで処理して１−（９−β−カルボリン）−２，３−プロパンジオールを得る 。得られた１−（９−β−カルボリン）−２，３−プロパンジオールを、実施例 ５の手順に従い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（９−β −カルボリン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。得ら れた１−（９−β−カルボリン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノ ールを、実施例６の手順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソ プロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４４ １−（１０−フェノチアジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン フェノチアジンを、実施例４の手順に従い、炭酸カリウムの存在下、グリシド ールで処理して１−（１０−フェノチアジン）−２，３−プロパンジオールを得 る。得られた１−（１０−フェノチアジン）−２，３−プロパンジオールを、実 施例５の手順に従い、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（１ ０−フェノチアジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る 。得られた１−（１０−フェノチアジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２− プロパノールを、実施例６の手順に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４５ １−［１−（５−プロピニル）ウラシル−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ −［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プ ロパン ５−プロピニルウラシルを、実施例９の手順のように、炭酸カリウムの存在下 、グリシドールで処理して１−［１−（５−プロピニル）ウラシル］−２，３− プロパンジオールを得る。得られた１−［１−（５−プロピニル）ウラシル］− ２，３−プロパンジオールを、実施例１０のように、ピリジン中の塩化ジメトキ シトリチルで処理して１−［１−（５−プロピニル）ウラシル］−３−Ｏ−ジメ トキシトリチル−２−プロパノールを得る。得られた１−［１−（５−プロピニ ル）ウラシル］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを、実施例１ １に従って、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホス フィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４６ １−［１−（６−アザ）チミン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（ Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン ６−アザチミンを、実施例１の手順のように、炭酸カリウムの存在下、グリシ ドールで処理して１−［１−（６−アザ）チミン］−２，３−プロパンジオール を得る。得られた１−［１−（６−アザ）チミン］−２，３−プロパンジオール を、実施例２のように、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−［ １−（６−アザ）チミン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを 得る。得られた１−［１−（６−アザ）チミン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル −２−プロパノールを、実施例３に従って、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ， Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４７ １−（９−ヒポキサンチン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ， Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン ヒポキサンチンを、実施例１の手順のように、炭酸カリウムの存在下、グリシ ドールで処理して１−（ヒポキサンチン−９−イル）−２，３−プロパンジオー ルを得る。得られた１−（９−ヒポキサンチン）−２，３−プロパンジオールを 、実施例２のように、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−（９ −ヒポキサンチン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。 得られた１−（９−ヒポキサンチン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロ パノールを、実施例３に従って、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソ プロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例４８ １−［９−（２，６−ジアミノ）プリン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２− Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］ プロパン ２，６−ジアミノプリンを、実施例１６の手順のように、炭酸カリウムの存在 下、グリシドールで処理して１−［９−（２，６−ジアミノ）プリン］−２，３ −プロパンジオールを得る。得られた１−［９−（２，６−ジアミノ）プリン］ −２，３−プロパンジオールを、実施例１８のように、クロロトリメチルシラン および塩化イソブチリルで処理して１−［９−（Ｎ２，Ｎ６−ジイソブチリル− ２，６−ジアミノ）プリン］−２，３−プロパンジオールを得る。得られた１− ［９−（Ｎ２，Ｎ６−ジイソブチリル−２，６−ジアミノ）プリン］−２，３− プロパンジオールを、実施例１９のように、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチ ルで処理して１−［９−（Ｎ２，Ｎ６−ジイソブチリル−２，６−ジアミノ）プ リン］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを得る。次に、得られ た１−［９−（Ｎ２，Ｎ６−ジイソブチリル−２，６−ジアミノ）プリン］−３ −Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールを、実施例２４に従って、クロロ −β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチ ル化して表題化合物を得る。 実施例４９ １−［９−（７−メチルグアニン）］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ− ［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロ パン ７−メチルグアニンを、実施例１６の手順のように、炭酸カリウムの存在下、 グリシドールで処理して１−［９−（７−メチルグアニン）］−２，３−プロパ ンジオールを得る。得られた１−［９−（７−メチルグアニン）］−２，３−プ ロパンジオールを、実施例１８のように、クロロトリメチルシランおよび塩化イ ソブチリルで処理して１−［９−（Ｎ２−ジイソブチリル）−（７−メチルグア ニン）］−２，３−プロパンジオールを得る。得られた１−［９−（Ｎ２−ジイ ソブチリル）−（７−メチルグアニン）］−２，３−プロパンジオールを、実施 例１９のように、ピリジン中の塩化ジメトキシトリチルで処理して１−［９−（ Ｎ２−ジイソブチリル）−（７−メチルグアニン）］−３−Ｏ−ジメトキシトリ チル−２−プロパノールを得る。次に、得られた１−［９−（Ｎ２−ジイソブチ リル）−（７−メチルグアニン）］−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパ ノールを、実施例２０に従って、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソ プロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例５０ Ｎ−（α−Ｆｍｏｃ）−Ｎ’−（アミノ−２，３−プロパンジオール）グリシン アミド Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−グリシン−ペンタフルオロフェニルエステル（４．０ｇ、 ８．６mmol）を含む乾燥ジメチルフォルムアミドの溶液を、アルゴン雰囲気下、 １−アミノ−２，３−プロパンジオール（０．７８ｇ、８．６mmol）で処理した 。混合物を室温で６時間撹拌し、溶媒を減圧下で蒸発させた。得られたシロップ を一晩真空下に保ち、次に、４０ｍｌの熱酢酸エチルに溶解した。熱溶液を濾過 し、濾液を−２０℃に冷却し、氷の中に一晩保った。結晶化した物質を濾過し、 冷酢酸エチルで洗浄し、濾液をできるだけ少ない体積に蒸発させた。この温度で の第２のインキュベーションで結晶の第２の回収物を得た。得られた白色結晶は ２．２ｇ（６９％）である。1Ｈ ＮＭＲ（ジメチルスルホキシド−ｄ6）：８． ０−７．２（ｍ，８，芳香族）；５．０−４．５（ｍ，４，Ｎ−ＨおよびＯＨ， Ｄ2Ｏで交換可能）；４．３（ｍ，３，Ｆｍｏｃ）；３．７（ｍ，２，グリシン ）；３．５−３．０（ｍ，５，プロパン）。 実施例５１ Ｎ−（α−Ｆｍｏｃ）−Ｎ’−｛３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］アミノプロ パン｝グリシンアミド Ｎ−（α−Ｆｍｏｃ）−Ｎ’−（アミノ−２，３−プロパンジオール）グリシ ンアミド（２．０mmol）を含むピリジン（２０ｍｌ）の溶液を、実施例３２の手 順に従い、塩化４，４’−ジメトキシトリチル（０．６８ｇ、２．０mmol）で処 理する。混合物を一晩室温で撹拌して、Ｎ−（α−Ｆｍｏｃ）−Ｎ’−（１−ア ミノ−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール）グリシンアミドを得、 これをシリカゲルクロマトグラフィーによって単離する。得られたＮ−（α−Ｆ ｍｏｃ）−Ｎ’−（１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノー ル）グリシンアミドを実施例２７の手順に従って処理して表題化合物を得る。 実施例５２ １−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２− シアノエトキシホスファイト］ヘプタデカン 臭化ドデシルをエチルエーテル中の金属マグネシウムと反応させて、臭化ドデ シルマグネシウムを得る。臭化ドデシルマグネシウムを、テトラクロロ銅酸ジリ チウムの存在下、ＴＨＦ中の１−Ｏ−ジメトキシトリチルグリシドール（実施例 ２５参照）と反応させて１−ジメトキシトリチル−２−ヘプタデカノールを得る 。得られた１−ジメトキシトリチル−２−ヘプタデカノールを、ＴＨＦ中のジイ ソプロピルエチルアミンの存在下、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイ ソプロピルアミノホスフィンと反応させて表題化合物を得る。 実施例５３ １−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール １−Ｏ−ジメトキシトリチルグリシドール（実施例２５から、１０ｍｌ、０． １５mol）およびアンモニアで飽和したイソプロピルアルコール（７０ｍｌ）を ボンベに密閉し、室温で５日間撹拌した。ボンベを冷却し、開き、溶液を蒸発さ せて粗生成物を得る。 実施例５４ １−［（Ｎ−パルミトイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２ −Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト ］プロパン １−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノール（実施例５３か ら）を５ｍｌの乾燥ピリジンに溶解し、クロロトリメチルシラン（０．２２７ｍ ｌ、１９４ｍｇ、１．７９mmol）を加え、１時間撹拌した。パルミチン酸（３５ ９ｍｇ、１．４０mmol）、ヒドロキシベンゾチアゾール（２０９ｍｇ、１．５５ mmol）およびジメチルアミノプロピルエチルカルボジイミド（ＥＤＣ）（２８１ ｍｇ、１．８０mmol）を５ｍｌのＤＭＦに溶解し（必要ならば、５ｍｌのＣＨ2 Ｃｌ2補助溶媒を加える）、１時間撹拌する。次に、この溶液を粗１−アミノ− ３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−プロパノールのピリジン溶液に加え、出発物 質が完全になくなるまで溶液を撹拌する。５ｍｌの飽和ＮａＨＣＯ3を加えるこ とによって反応を停止し、１５分後に溶液を水（１００ｍｌ）で希釈し、酢酸エ チル（２×７５ｍｌ）で抽出し、ＮａＨＣＯ3、ブラインで洗浄し、乾燥、蒸発 させる。残留物をシリカゲルクロマトグラフィーで精製して１−［（Ｎ1−パル ミトイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２−プロパンジオー ルを得る。得られた１−［（Ｎ1−パルミトイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキ シトリチルメチル−２−プロパンジオールをクロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ， Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンで実施例２０に従ってホスフィチル化して 表題化合物を得る。 実施例５５ １−［（Ｎ−イソブチロイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル− ２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイ ト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従って、イソ酪酸をカルボン酸成分として用 いることによって製造する。 実施例５６ １−［（Ｎ−フェニルアセチル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル −２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファ イト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従って、フェニル酢酸をカルボン酸成分とし て用いることによって製造する。 実施例５７ グルタル酸モノフルオレニルメチルエステル フルオレニルメタノール（０．９０ｇ、４．５mmol）およびジメチルアミノピ リジン（５０ｍｇ）を１０ｍｌの乾燥ピリジンに溶解する。無水グルタル酸（５ ．０mmol）を加え、溶液を一晩撹拌する。溶媒を減圧下で除去し、炭酸水素ナト リウム（５０ｍｌ）を加え、溶液を酢酸エチル（５０ｍｌ）で抽出し、有機層を 廃 棄する。水性層はｐＨ２の酸性にし、酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、 ブラインで洗浄し、溶媒を減圧下で除去する。残留物をフラッシュクロマトグラ フィーで精製して生成物を得る。 実施例５８ １−［（Ｎ−フルオレニルメチルグルタロイル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシ トリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエ トキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い、グルタル酸モノフルオレニルメチルエ ステル（実施例５７）をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例５９ ２−（１−チミン）酢酸 ブロモ酢酸メチル（２５．５ｇ、１５．２ｍｌ、１６０mmol）を、Ｋ2ＣＯ3（ ４４．２ｇ、３２０mmol）およびチミジン（２０．２ｇ、１６０mmol）を５００ ｍｌの乾燥ＤＭＦに懸濁させた懸濁液に加え、一晩撹拌した。懸濁液を濾過し、 溶媒を減圧下で除去した。残留物を１２０ｍｌのＨ2Ｏおよび３０ｍｌの４Ｎ ＨＣｌに懸濁させ、３０分間撹拌し、再び濾過した。固体を２５０ｍｌのＨ2Ｏ に懸濁させ、これに１００ｍｌの２．５Ｍ ＮａＯＨを加えた。溶液を加熱して 沸騰させ、冷却し、濃ＨＣｌでｐＨ１の酸性にした。沈殿物を真空中で乾燥して 、１３．６ｇ（７３．６mmol、４６％）の純粋な生成物を得た。1Ｈ ＮＭＲ： （ＤＭＳＯ−ｄ6、２００ＭＨｚ）δ７．４８（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），４．３７（ ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）、１．７６（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）。 実施例６０ １−｛Ｎ−［２−（１−チミジン）アセチル］アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキシト リチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエト キシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，チミジン−２−酢酸をカルボン酸成分 として用いて製造する。 実施例６１ Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオン酸 炭酸水素ナトリウム（２．５２ｇ、３０mmol）および３−アミノプロピオン酸 （１．００ｇ、１１．２mmol）を５０ｍｌの水に溶解し、５０ｍｌのジオキサン を加えた。クロロギ酸フルオレニルメチル（３．１０ｇ、１２．０mmol）を含む ５０ｍｌのジオキサンの溶液を撹拌しながら滴加した。６時間後、溶液を水（１ ００ｍｌ）および飽和炭酸塩溶液（５０ｍｌ）で希釈し、ジエチルエーテルで１ 回抽出し、水性層を濃ＨＣｌでｐＨ２の酸性にした。曇った溶液を酢酸エチル（ ２×１００ｍｌ）で抽出し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥した。蒸発さ せた後、表題生成物およびペプチド２量体の混合物を得た。純粋な生成物はフラ ッシュクロマトグラフィーによって得た。1Ｈ ＮＭＲ：（ＣＤＣｌ3、２００Ｍ Ｈｚ）δ７．９５−７．２６（８Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），７．４０−７．１５（３Ｈ ，ｍ，ＣＨＣＨ 2Ｏ），３．２０（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＣＨ 2Ｎ），２．４０ （２Ｈ，ｔ，Ｊ＝８Ｈｚ，ＨＯＯＣＣＨ 2）。 実施例６２ １−［Ｎ−（Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオノイル）アミノ］−３−Ｏ−ジ メトキシトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２− シアノエトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，Ｎ−Ｆｍｏｃ−３−アミノプロピオン 酸をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例６３ ２−（Ｎ−イミダゾリル）酢酸 イミダゾール（３．７ｇ、５４mmol）を、水素化ナトリウム（油中の６０％懸 濁液２．６ｇ、６０mmol）を５０ｍｌの乾燥ＴＨＦに懸濁させた懸濁液に加えた 。次に、ブロモ酢酸（３．４ｇ、２４mmol）を加え、混合物を一晩撹拌した。次 に、 水（１ｍｌ）を加え、溶媒を減圧下で除去した。残留物を水（５０ｍｌ、ｐＨ＞ １０）に取り、エーテルで抽出し、有機層を廃棄した。水性層を濃ＨＣｌでｐＨ １の酸性にし、再びエーテルで抽出した。水性層を蒸発させて乾燥した。油状残 留物を無水エタノール（ＥｔＯＨ）に溶解して、ＮａＣｌを沈殿させ、アセトン ／メタノールから再結晶して、１．２２ｇ（７．５mmol、３０％）の純粋な生成 物を塩酸塩として得た。1Ｈ ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ6、２００ＭＨｚ）δ９． ２０（ｓ，Ｈ２），７．７６（ｄ，Ｊ＝１．５Ｈｚ），７．６９（ｄ，Ｊ＝１． ５Ｈｚ），５．２０（ｓ，ＣＨ2）。０ 実施例６４ １−｛Ｎ−［２−（Ｎ−イミダゾリル）アセチル］アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキ シトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノ エトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，Ｎ−イミダゾリル−２−酢酸をカルボ ン酸成分として用いて製造する。 実施例６５ ２−（９−アデニン）酢酸エチルエステル 水素化ナトリウム（油中６０％８．２０ｇ、２０５mmol）を、アデニン（２５ ．０、１８５mmol）を５００ｍｌのＤＭＦに懸濁させた懸濁液に加えた。激しい 機械撹拌を２時間行った後、Ｈ2の発生は止み、粘稠なスラリーが得られた。ブ ロモ酢酸エチル（５５．６ｇ、３６．９ｍｌ、３３３mmol）を３時間にわたって 滴加し、さらに１時間撹拌を続けた。水（１０ｍｌ）およびＨ2ＳＯ4を加えてｐ Ｈ４にした。溶媒を蒸発させ、残留物を５００ｍｌのＨ2Ｏに懸濁させ、濾過し 、水で洗浄した。残留物を４００ｍｌのエタノールから再結晶して、２３．８ｇ （１０８mmol、５８％）の純粋な生成物を得た。 実施例６６ ２−［９−（Ｎ２−ベンゾイル）アデニン］酢酸 ２−（９−アデニン）酢酸エチルエステル（６．０６ｇ、２７．４mmol）を懸 濁させた２５０ｍｌの乾燥ピリジンに、塩化ベンゾイル（９．６０ｍｌ、１１． ６ｇ、８２mmol）を加え、溶液を４時間、室温で撹拌した。メタノール（２５ｍ ｌ）を加え、溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチル（２×２５０ｍｌ）に溶解 し、０．１Ｎ ＨＣｌ、飽和ＮａＨＣＯ3、ブラインで洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾 燥した。有機抽出物を蒸発させ、固体残留物を０℃の２５０ｍｌのＴＨＦに再溶 解し、これに１００ｍｌの１Ｍ ＮａＯＨを加えた。溶液を０℃で１時間撹拌し 、濃ＨＣｌでｐＨ１の酸性にし、水性部分をエーテルで１回抽出した。ほとんど ただちに結晶化し始める生成物を濾過によって集め、４．９６ｇ（６１％）を得 た。1Ｈ ＮＭＲ：（ＤＭＳＯ−ｄ6、２００ＭＨｚ）δ８．８６、８．８４（ｄ ，Ｈ２，Ｈ８）、８．１（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，ＡｒＨ），７．６９−７ ．５８（ｍ，３Ｈ，Ａｒ−Ｈ），５．２２（ｓ，２Ｈ，ＣＨ2）。 実施例６７ １−｛｛Ｎ−｛２−［９−（Ｎ２−ベンゾイル）アデニン］アセチル｝アミノ｝ ｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピル アミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，２−［９−（Ｎ２−ベンゾイル）アデ ニン］酢酸をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例６８ ２−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］酢酸 シトシン０．５水和物（１２．０ｇ、１００mmol）をピリジンとの同時蒸発に よって乾燥し、乾燥ピリジン（２５０ｍｌ）に再溶解し、塩化ベンゾイル（７０ ．３ｇ、５００mmol）を冷却しながら滴加した。溶液を一晩撹拌し、水を加え、 そして溶媒を真空中で除去した。残留物を、５５ｇのＮａＯＨを含有する７００ ｍｌのＨ2Ｏに溶解した。完全に溶解したら、撹拌を１時間続けた。次に、溶液 をｐＨ４の酸性にし、白色沈殿物を集め、１リットルのエタノール中で沸騰させ 、再び濾過して１６．１ｇのベンゾイルシトシンを得た。この１５ｇを、９．７ ｇ （７０mmol）のＫ2ＣＯ3およびブロモ酢酸メチル（１０．７ｇ、７０mmol）を含 む５００ｍｌのＤＭＦに懸濁させた。懸濁液を３日間撹拌し、濾過し、溶媒を除 去した。水（１００ｍｌ）および１０ｍｌの４Ｎ ＨＣｌを加えた。懸濁液を１ ５分間撹拌し、濾過した。固体を、４．８ｇのＮａＯＨを含有する２００ｍｌの Ｈ2Ｏに再懸濁させた。全ての固体が溶解するまで、懸濁液を４５分撹拌した。 次に、溶液をｐＨ２の酸性にし、固体を濾過によって集め、乾燥して１０．６ｇ （４３％）の生成物を得た。生成物はＮＭＲで確認した。 実施例６９ １−｛｛Ｎ−｛２−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シトシン］アセチル｝アミノ｝ ｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−１−アミノ−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジ イソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，２−［１−（Ｎ４−ベンゾイル）シト シン］酢酸をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例７０ ２−［９−（Ｎ２−イソプチロイル）グアニン］酢酸 ２−アミノ−６−クロロプリン（１０mmol）およびＫ2ＣＯ3（１５mmol）を懸 濁させたＤＭＦ（２５ｍｌ）の懸濁液に、ブロモ酢酸エチル（１０mmol）を加え る。混合物を２４時間激しく撹拌し、濾過し、溶媒を蒸発させる。残留物を２５ ｍｌのピリジンに再懸濁させ、塩化イソブチロイル（２０mmol）を加える。１８ 時間撹拌した後、水を加え、溶媒を除去する。残留物を１ＮのＨＣｌに懸濁させ て、１時間還流加熱する。次に、懸濁液を０℃に冷却し、ＮａＯＨを加えてｐＨ １２にし、懸濁液を１時間撹拌する。溶液をｐＨ３の酸性にし、生成物を濾過に よって集める。 実施例７１ １−｛｛Ｎ−｛２−［９−（Ｎ２−イソブチロイル）グアニン］アセチル｝アミ ノ｝｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−１−アミノ−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，２−［９−（Ｎ２−イソブチロイル） グアニン］酢酸をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例７２ ３，６，９，１２−テトラオキサトリデカン酸ベンジル トリエチレングリコールモノメチルエーテル（１０mmol）およびブロモ酢酸ベ ンジル（１１mmol）を、無水Ｋ2ＣＯ3（１５mmol）を懸濁させた５０ｍｌの無水 ＤＭＦの懸濁液に加える。懸濁液を室温で一晩撹拌する。水を加え、そしてエマ ルジョンを酢酸エチル（３×２００ｍｌ）で抽出し、水、ブラインで洗浄し、Ｍ ｇＳＯ4で乾燥する。溶媒を蒸発させ、残留油をフラッシュクロマトグラフィー で精製して表題化合物を得る。 実施例７３ ３，６，９，１２−テトラオキサトリデカン酸 ３，６，９，１２−テトラオキサトリデカン酸ベンジル（５mmol）をメタノー ル（５０ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム担持炭素（１００ｍｇ触媒／mmol） を加える。出発物質がなくなるまで、懸濁液を３０ｐｓｉのＨ2下で振盪する。 懸濁液をセライトの短いパッドに通して濾過し、メタノールで十分に洗浄し、溶 媒を蒸発させる。生成物は精製することなく、直接使用する。 実施例７４ １−［Ｎ−（３，６，９，１２−テトラオキサトリデカノイル）アミノ］−３− Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ） −２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，３，６，９，１２−テトラオキサトリ デカン酸をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例７５ ビス−［（２−ピリジル）−２−エチル］アミノ酢酸ベンジル Ｋ2ＣＯ3（１５mmol）を懸濁させた２５ｍｌのＤＭＦの懸濁液に、２，２’− ビス（２−ピリジルエチル）アミン（１０mmol）、次いでブロモ酢酸ベンジル（ １２mmol）を加えた。懸濁液を４時間室温で撹拌した。次に、水を加え、懸濁液 を酢酸エチル（２×１００ｍｌ）で抽出し、５％Ｎａ2ＣＯ3、水、ブラインで洗 浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、溶媒を除去した。生成物は油として定量的収量で得 られた。生成物はＮＭＲで確認した。 実施例７６ ビス−（２−（２−ピリジル）エチル）アミノ酢酸 ビス−［（２−ピリジル）−２−エチル］アミノ酢酸ベンジル（５mmol）をメ タノール（５０ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム担持炭素（１０ｍｇ触媒／mm ol）を加える。出発物質がなくなるまで、懸濁液を３０ｐｓｉのＨ2下で振盪す る。懸濁液をセライトの短いパッドに通して濾過し、メタノールで十分に洗浄し 、溶媒を蒸発させる。生成物は精製することなく、直接使用する。 実施例７７ １−｛｛Ｎ−｛ビス−［２−（２−ピリジル）エチル］アミノアセチル｝アミノ ｝｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピ ルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン この化合物は実施例５４の手順に従い，ビス−（２−（２−ピリジル）エチル ）アミノ酢酸をカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例７８ １−［Ｎ−（トルエンスルホニル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチ ル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスフ ァイト］プロパン クロロトリメチルシラン（６．０mmol）を、１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシ トリチル−２−プロパノール（５．０mmol）を含む２５ｍｌの乾燥ピリジンの溶 液に滴加する。１時間撹拌した後、塩化トルエンスルホニル（６．０mmol）を分 けて加え、撹拌を２時間続ける。反応を飽和水性ＮａＨＣＯ3で急冷し、シリル エーテルが加水分解するまで、混合物を撹拌する。溶媒を真空中で除去し、残留 物を水と酢酸エチルとの間で分配する。有機層をＮａＨＣＯ3、水、ブラインで 洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4乾燥する。溶媒を除去し、得られた油を、ＣＨＣｌ3中のメ タノールの勾配を用いて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製する。得ら れる１−［Ｎ−（トルエンスルホニル）アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチル メチル−２−プロパノールを、実施例２０に従って、クロロ−β−シアノエトキ シ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物 を得る。 実施例７９ １−［Ｎ−（トリフルオロメタンスルホニル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシト リチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエト キシホスファイト］プロパン クロロトリメチルシラン（６．０mmol）を、１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシ トリチル−２−プロパノール（５．０mmol）およびトリエチルアミン（１５mmol ）を含む５０ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2の溶液に滴加する。１時間後、溶液を−７８ ℃に冷却し、無水トリフルオロメタンスルホン酸（５．５mmol）を滴加する。冷 却浴を取り除き、混合物を室温に温める。粗生成物をピリジンに溶解し、ＮａＨ ＣＯ3溶液を加えて、ＴＭＳエーテルを加水分解する。溶媒を蒸発させ、残留物 を酢酸エチルと水との間で分配し、ＮａＨＣＯ3、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4 で乾燥する。残留物を、ＣＨＣｌ3中のメタノールの勾配を用いて、フラッシュ クロマトグラフィーにより精製する。得られる１−［Ｎ−（トリフルオロメタン スルホニル）アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−１−アミノ−２− プロパノールを、実施例２０に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジ イソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る。 実施例８０ １−［Ｎ−（ベンジル）アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２−Ｏ −［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プ ロパン クロロトリメチルシラン（６．０mmol）を、１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシ トリチル−２−プロパノール（５．０mmol）、イミダゾール（５mmol）およびト リエチルアミン（１５mmol）を含む２５ｍｌの乾燥ＤＭＦの溶液に滴加する。１ 時間撹拌した後、溶媒を真空中で除去し、残留物をアセトニトリル（２５ｍｌ） およびトリエチルアミン（１０mmol）に再溶解する。臭化ベンジル（６．０mmol ）を加え、撹拌を一晩続ける。反応を飽和水性ＮａＨＣＯ3で急冷し、シリルエ ーテルが加水分解するまで、混合物を撹拌する。溶媒を真空中で除去し、残留物 を水と酢酸エチルとの間で分配する。有機層をＮａＨＣＯ3、水、ブラインで洗 浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥する。溶媒を除去し、得られる残留油を、ＣＨＣｌ3中 のメタノールの勾配を用いて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製する。 得られる１−［Ｎ−（ベンジル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル −１−アミノ−２−プロパノールを、実施例２０に従い、クロロ−β−シアノエ トキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化 合物を得る。 実施例８１ １−［Ｎ−（アミノカルボニル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル −２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファ イト］プロパン クロロトリメチルシラン（６．０mmol）を、１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシ トリチル−２−プロパノール（５．０mmol）およびトリエチルアミン（１５mmol ）を含む５０ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2の溶液に滴加する。１時間後、ジメチルアミ ノピリジン（１mmol）、次いでトリメチルシリルイソシアネート（５．５mmol） を加える。出発物質がなくなるまで、溶液を撹拌する。溶媒を真空中で除去し、 粗生成物をピリジンおよびＮａＨＣＯ3溶液に再溶解して、ＴＭＳエーテルを加 水分解する。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルと水との間で分配し、ＮａＨ Ｃ Ｏ3、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥する。残留物を、ＣＨＣｌ3中のメタ ノールの勾配を用いて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製する。得られ る１−［Ｎ−（アミノカルボニル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチ ル−２−プロパノールを、実施例２０に従い、クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題化合物を得る 。 実施例８２ １−［Ｎ−（メチルアミノチオカルボニル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリ チルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキ シホスファイト］プロパン クロロトリメチルシラン（６．０mmol）を、１−アミノ−３−Ｏ−ジメトキシ トリチル−２−プロパノール（５．０mmol）およびトリエチルアミン（１５mmol ）を含む５０ｍｌの乾燥ＣＨ2Ｃｌ2の溶液に滴加する。１時間後、ジメチルアミ ノピリジン（１mmol）、次いでメチルイソチオシアネート（５．５mmol）を加え る。出発物質がなくなるまで、溶液を撹拌する。溶媒を真空中で除去し、そして 粗生成物をピリジンおよびＮａＨＣＯ3溶液に再溶解して、ＴＭＳエーテルを加 水分解する。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルと水との間で分配し、ＮａＨ ＣＯ3、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥する。残留物を、ＣＨＣｌ3中のメ タノールの勾配を用いて、フラッシュクロマトグラフィーにより精製する。得ら れる１−［Ｎ−（メチルアミノチオカルボニル）アミノ］−３−Ｏ−ジメトキシ トリチルメチル−２−プロパノールを、実施例２０に従い、クロロ−β−シアノ エトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンでホスフィチル化して表題 化合物を得る。 実施例８３ Ｎ−α−（ＦＭＯＣ）−グルタミン酸γ−ベンジルエステル グルタミン酸γ−ベンジル（１０mmol）を含む５０ｍｌのジオキサンおよび５ ０ｍｌの水の溶液に、トリエチルアミン（２５mmol）、次いでクロロギ酸フルオ レニルメチル（１１mmol）を含む５０ｍｌのジオキサンの溶液を加える。出発物 質がなくなるまで、混合物を激しく撹拌する。溶液を濃ＨＣｌでｐＨ２の酸性に し、酢酸エチル（２×２５０ｍｌ）で抽出し、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ4で 乾燥し、蒸発させる。生成物は精製することなく使用する。 実施例８４ Ｎ−α−（ＦＭＯＣ）−γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸フルオレニルメチルエ ステル Ｎ−α−（ＦＭＯＣ）−グルタミン酸γ−ベンジルエステル（５mmol）、フル オレニルメタノール（５．５mmol）およびジメチルアミノピリジン（０．５mmol ）を、５０ｍｌのＣＨ2Ｃｌ2に溶解する。ジメチルアミノプロピルエチルカルボ ジイミド（ＥＤＣ）６．０mmol）を加え、溶液を室温で撹拌する。出発物質が完 全になくなった後、溶液をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、１％ＨＣｌ、水およびブライン で洗浄し、ＭｇＳＯ4で乾燥し、蒸発させる。残留物は酢酸エチルおよびヘキサ ンを溶離剤として用いるフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。 実施例８５ Ｎ−α−（ＦＭＯＣ）−Ｌ−グルタミン酸α−フルオレニルメチルエステル Ｎ−α−（ＦＭＯＣ）−γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸フルオレニルメチル エステル（５mmol）を、メタノール（５０ｍｌ）に溶解し、１０％パラジウム担 持炭素（１００ｍｇ触媒／mmol）を加える。出発物質がなくなるまで、懸濁液を ３０ｐｓｉのＨ2下で振盪する。懸濁液をセライトの短いパッドに通して濾過し 、メタノールで十分に洗浄し、溶媒を蒸発させる。生成物は精製することなく、 直接使用する。 実施例８６ １−［Ｎ−（Ｎ−α−Ｆｍｏｃ−α−フルオレニルメチル−γ−グルタミル）ア ミノ］−３−Ｏ−ジメトキシトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロ ピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，Ｎ−α−（ＦＭＯＣ）−Ｌ−グルタミ ン酸α−フルオレニルメチルエステルをカルボン酸成分として用いて製造する。 実施例８７ ２−（Ｎ−カルバゾリル）酢酸 表題化合物は実施例６３の手順に従い，カルバゾールを出発複素環として用い て製造する。 実施例８８ １−｛Ｎ−［２−（Ｎ−カルバゾリル）アセチル］アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキ シトリチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノ エトキシホスファイト］プロパン 表題化合物は実施例５４の手順に従い，Ｎ−カルバゾリル−２−酢酸をカルボ ン酸成分として用いて製造する。 実施例８９ Ｎ−ピロリル−２−酢酸 表題化合物は実施例６３の手順に従い，ピロールを出発複素環として用いて製 造する。 実施例９０ １−｛Ｎ−［２−（Ｎ−ピロリル）アセチル］アミノ｝−３−Ｏ−ジメトキシト リチルメチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエト キシホスファイト］プロパン 化合物は実施例５４の手順に従い，Ｎ−ピロリル−２−酢酸をカルボン酸成分 として用いて製造する。 実施例９１ １−（１−イミダゾール）−５−ジメトキシトリチル−２−ペンタノール １−ブテン−４−オールをＫｌｕｎｄｅｒ等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９８ ６、５１、３７１０の手順に従って処理して、４，５−エポキシ−１−ペンタノ ールを得る。グリコールは単離しないが、その場で乾燥ＤＭＦ中で粉末炭酸カリ ウムおよびイミダゾールで実施例４の手順に従って処理し、次いで塩化ジメトキ シトリチルで実施例５の手順に従って処理して、表題化合物を得る。 実施例９２ １−（１−イミダゾール）−５−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］ペンタン １−（１−イミダゾール）−４−ジメトキシトリチル−２−ペンタノールを実 施例６の手順に従って処理して表題化合物を得る。 実施例９３ １−（１−カルバゾール）−８−ジメトキシトリチル−２−オクタノール １−オクテン−８−オールをＫｌｕｎｄｅｒ等、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９ ８６、５１、３７１０の手順に従って処理して、４，５−エポキシ−１−オクタ ノールを得る。グリコールは単離しないが、その場で乾燥ＤＭＦ中で粉末炭酸カ リウムおよびイミダゾールで実施例４の手順に従って処理し、次いで塩化ジメト キシトリチルで実施例５の手順に従って処理して、表題化合物を得る。 実施例９４ １−（１−カルバゾール）−８−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ −ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］オクタン １−（１−カルバゾール）−４−ジメトキシトリチル−２−ペンタノールを実 施例６の手順に従って処理して表題化合物を得る。 実施例９５ １−（Ｎ−モルホリノ）−２，３−プロパンジオール 再蒸留したモルホリン（４．３ｇ、５０mmol）およびＲ−（＋）−グリシドー ル（３．７ｇ、５０mmol）を含む無水メチルアルコール（５０ｍｌ）の急速撹拌 溶液を１８時間還流加熱した。得られた溶液を冷却し、回転蒸発させて、淡黄色 シロップを得た。このシロップを真空下に３時間保って、定量的収量のプロパン ジオール（８．０ｇ）を得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，４．５（ｍ ，２，ヒドロキシル）；３．５−３．３（ｍ，７）；２．４−２．１（ｍ，６） 。 実施例９６ １−（Ｎ−モルホリノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２，３−プロパンジオ ール １−（Ｎ−モルホリノ）−２，３−プロパンジオール（８．０ｇ、５０mmol） を含む無水ピリジン（１５０ｍｌ）およびトリエチルアミン（１０ｍｌ）の氷冷 溶液に、粉末塩化ジメトキシトリチル（１７ｇ、５０mmol）を５分間かけて加え た。無水状態に維持しながら、この混合物を室温で一晩撹拌した。得られた溶液 を回転蒸発させ、次に、酢酸エチル／メチルアルコール／トリエチルアミン（９ ０／９．５／０．５）を溶離剤として用い、７．５×５ｃｍカラムでクロマトグ ラフィーを行った。こはく色の固体フォーム１６ｇ（６９％）を得た。1Ｈ Ｎ ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，７．５−６．８（ｍ，１３，芳香族）；３．９（ ｓ，６，メトキシ）；１０．４および５．７（２ｍ，１，ヒドロキシル）；４． ２−２．８（３ｍ，１３，脂肪族）。 実施例９７ １−（Ｎ−モルホリノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］−２，３−プロパ ンジオール クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（２ ．４ｇ、１mmol）を、１−（Ｎ−モルホリノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル− ２，３−プロパンジオール（４．３ｇ、１mmol）を含む無水テトラヒドロフラン （５０ｍｌ）およびジイソプロピルエチルアミン（５ｍｌ）の氷冷溶液に加えた 。溶液を室温で３時間撹拌し、次に、回転蒸発させた。得られたガムを、酢酸エ チル／メチルアルコール／トリエチルアミン（９５／４．５／０．５）を溶離剤 とし て用い、５．５×１０ｃｍシリカゲルカラムでクロマトグラフィーを行った。適 当なフラクションを蒸発させてアミダイトを得た。 実施例９８ １−（Ｎ−ピペリジン）−２，３−プロパンジオール ピペリジン（４．３ｇ、５０mmol）およびＲ−（＋）−グリシドールを含む無 水メタノール（５０ｍｌ）の急速撹拌溶液を１８時間還流加熱した。混合物を回 転蒸発させて、透明なシロップを得、これを真空下に３時間保って、定量的収量 のプロパンジオール（８ｇ）を得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，４． ６および４．３（２ｍ，２，ヒドロキシル）；３．６（ｍ，１，メチン）；３． ３および２．３（２ｍ，４，プロパン）；１．４（ｍ，１０）ピペリジン）。 実施例９９ １−（Ｎ−ピペリジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２，３−プロパンジオ ール １−（Ｎ−ピペリジン）−２，３−プロパンジオール（６．８ｇ、４３mmol） を含むピリジン（７５ｍｌ）およびトリエチルアミン（１５ｍｌ）の氷冷溶液に 、塩化ジメトキシトリチル（１４．４ｇ、４３mmol）を５分間かけて加えた。無 水状態に維持しながら、この混合物を室温で一晩撹拌した。得られた溶液を回転 蒸発させ、酢酸エチル、次いで酢酸エチル／メチルアルコール／トリエチルアミ ン（９０／９．５／０．５）を溶離剤として用い、１１．５×５ｃｍカラムでク ロマトグラフィーを行った。黄色の固体フォーム１１ｇ（５６％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，７．４−６．８（ｍ，１３，芳香族）；４． ５（ｍ，１，ヒドロキシル）；３．８（ｓ，６，メトキシ）；２．９（ｄ，１， ヒドロキシル）；２．２および１．４（２ｍ，１４，プロパンおよびピペリジン ）。 実施例１００ １−（Ｎ−ピペリジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホスファイト］−２，３−プロパ ンジオール クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（２ ．４ｇ、１mmol）を、１−（Ｎ−ピペリジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル− ２，３−プロパンジオール（４．６ｇ、１mmol）およびジイソプロピル−エチル アミン（５ｍｌ）の氷冷溶液に加えた。反応混合物を室温で３時間撹拌し、次に 、回転蒸発させて、無色のシロップを得た。このシロップを酢酸エチル／メチル アルコール／トリエチルアミン（９５／４．５／０．５）を溶離剤として用い、 ５．５×１０ｃｍカラムでクロマトグラフィーを行ってアミダイトを得た。 実施例１０１ １−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−ヘキセン−１，２−ジオール 室温の、３−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｒ−（＋）−グリシドール（８．０ｇ 、 ２１mmol）を含む無水テトラヒドロフラン（８０ｍｌ）の溶液に、テトラクロロ 銅酸リチウム（５０ｍｌ、ＴＨＦ中の０．１Ｍ溶液、アルドリッチ社）、すぐ後 に臭化アリルマグネシウム（７０ｍｌ、ＴＨＦ中の０．１Ｍ溶液、アルドリッチ 社）を加えた。混合物をアルゴンガス雰囲気下で一晩撹拌し、次に、塩化アンモ ニウムの飽和水溶液（約２０ｍｌ）をゆっくりと加えて急冷した。さらに、混合 物を３０分間撹拌し、次に、セライトに通して濾過した。フィルター床を追加の ＴＨＦで洗浄し、濾液を蒸発させた。得られた黒ずんだ油をヘキサン／酢酸エチ ル／トリエチルアミン（９０／９．５／０．５）、次いで（８０／１９．５／０ ．５）を溶離剤として用い、５．５×１０ｃｍシリカゲルカラムでクロマトグラ フィーを行った。適当なフラクションを蒸発させて、ジオールを無色の油（８． ０ｇ、９０％）として得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ、７．５−６． ８（ｍ，１３，芳香族）；５．８および５．０（２ｍ，３，アルケン）；４．７ （ｄ，１，ヒドロキシル）；３．７（ｓ，６，メトキシ）；３．６（ｍ，１，メ チン）；２．９（ｍ，２，アリル）；２．１および１．６（２ｍ，４，メチレン ）。 実施例１０２ １−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）− ２−シアノエトキシホスファイト］−５−ヘキセン−１，２−ジオール クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィン（２ ．４ｇ、１mmol）を、１−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−ヘキセン−１，２−ジ オール（４．２ｇ、１mmol）を含むテトラヒドロフラン（８０ｍｌ）およびジイ ソプロピル−エチルアミン（５ｍｌ）の氷冷溶液に加えた。混合物を室温で３時 間撹拌し、次に、回転蒸発させた。得られた油をヘキサン／酢酸エチル／トリエ チルアミンを溶離剤として用い、５．５×１０ｃｍシリカゲルカラムでクロマト グラフィーを行った。適当なフラクションを蒸発させてアミダイトを得た。 実施例１０３ ２−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−ヘキセン−１，２−ジオ ール １−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−ヘキセン−１，２−ジオール（２．０ｇ、 ４．８mmol）を含む無水ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）の溶液に、６０％水 素化ナトリウム（０．２８ｇ、ヘキサンで洗浄した）、すぐ後に臭化ベンジル（ ０．８２ｇ、４．８mmol）を加えた。混合物をアルゴン雰囲気下、室温で１時間 撹拌し、次に回転蒸発させた。得られた油をジクロロメタン（１５０ｍｌ）と冷 飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍｌ）との間で分配した。有機層をさらに水 、ブラインで洗浄し、次に硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、回転蒸発させて透 明な黄色油を得た。この物質を酢酸エチル／ヘキサン（４／１）を用いて焼結ガ ラス漏斗上のシリカゲルの短い床に通して濾過して、無色の油２．０ｇ（８２％ ）を得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，７．５−６．８（ｍ，１８，芳 香族）；５．８および４．９（２ｍ，３，アルケン）；４．６（ｑ，２，ベンジ ル）；３．８（ｓ，６，メトキシ）；３．５（ｍ，１，メチン）；３．１，２． ０および１．６（３ｍ，６，メチレン）。 実施例１０４ ２−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−ヘキサン−１，２，６− トリオール ２−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−５−ヘキセン−１，２−ジ オール（１．６ｇ、３．１mmol）を含む無水テトラヒドロフラン（２５ｍｌ）の 溶液を、室温でジボラン／ＴＨＦ複合体（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液６．３ｍｌ）で処 理した。泡立ちが鎮まった（ジボランの添加から１０分）後に、混合物をさらに アルゴン下で１５分間撹拌した。混合物をメタノール（１０ｍｌ）で処理し、３ ０分間室温で撹拌し、次にＮａＯＨ溶液（１０ｍｌ、１Ｎ）で処理し、さらに３ ０分間撹拌した。混合物を回転蒸発させてできるだけ少ない体積にし、得られた 残留物をテトラヒドロフラン（５０ｍｌ）に再溶解し、次に３０％過酸化水素（ ６ｍｌ）で処理した。３０分後、２層溶液をジクロロメタン（１００ｍｌ）で希 釈し、有機層を冷水、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液およびブラインで洗浄した 。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、蒸発させた。この物質をヘキサ ン／酢酸エチル／トリエチルアミン（６０／３９．５／０．５）を溶離剤として 用いて、３．５×１５ｃｍシリカゲルカラムでクロマトグラフィーした。適当な フラクションを回転蒸発させて、無色の油０．７ｇ（４２％）を得た。1Ｈ Ｎ ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，７．５−６．８（ｍ，１８，芳香族）；４．６（ ｑ，２，ベンジル）；４．３（ｔ，１，ヒドロキシル）；３．８（ｓ，６，メト キシ）；３．５（ｍ，１，メチン）；３．３，３．１および１．３（３ｍ，１０ ，メチレン）。 実施例１０５ ６−Ｏ−ベンゾイル−２−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−１，２ ，６−ヘキサントリオール ２−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−１，２，６−ヘキサントリ オール（０．６０ｇ、１．１４mmol）を含む無水ピリジンの溶液を塩化ベンゾイ ル（０．２４ｇ、１．７１mmol）で処理し、混合物をアルゴン雰囲気下、一晩撹 拌した。反応混合物を数ミリリットルのメチルアルコールで処理し、回転蒸発さ せた。得られた油をジクロロメタン（５０ｍｌ）と冷飽和炭酸水素ナトリウム溶 液（２５ｍｌ）との間で分配した。有機層をさらに冷水およびブラインで洗浄し 、次に硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、回転蒸発させた。得られた物質をヘキ サン／酢酸エチル／トリエチルアミン（８０／１９．５／０．５）を溶離剤とし て用いて、３．５×１５ｃｍシリカゲルカラムでクロマトグラフィーした。適当 なフラクションを蒸発させて、無色の油０．５７ｇ（８０％）を得た。1Ｈ Ｎ ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，８．１−６．７（３ｍ，２３Ｈ，芳香族）；４． ６（ｑ，２，ベンジル）；４．３（ｔ，２，メチレン）；３．８（ｓ，６，メト キシ）；３．６（ｍ，１，メチン）；３．２（ｍ，２，メチレン）；１．７（ｍ ，６，メチレン）。 実施例１０６ ６−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−１，２，６−ヘキサントリ オール ６−Ｏ−ベンゾイル−２−Ｏ−ベンジル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−１， ２，６−ヘキサントリオール（０．５ｇ、０．８mmol）を含むテトラヒドロフラ ンの溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ触媒（０．１５ｇ）を加え、混合物を水素ガス（２〜 ３ボンド／インチ2）のバルーン下に３日間置いた。バルーンを再び満たし、当 量部の触媒を１日目および２日目の終わりに合計約０．５ｇ加えた。混合物をセ ライトに通して濾過し、床を追加のＴＨＦで洗浄し、回転蒸発させた。得られた 残留物をヘキサン／酢酸エチル／トリエチルアミン（８０／１９．５／０．５） を溶離剤として用いて、３．５×１５ｃｍシリカゲルカラムでクロマトグラフィ ーした。適当なフラクションを蒸発させて、無色のガラスとしてトリオールを０ ．４ｇ（３２％）を得た。1Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：ｄ，８．１（ｄ，２，芳 香族）；７．６−６．２（ｍ，１２，芳香族）；６．８（ｄ，４，芳香族）；４ ．３（ｔ，２，ｂｚ−Ｏ−ＣＨ2−）；３．８（ｓ，６，メトキシ）；３．２（ ｄｄｄ，２，ＣＨ 2−Ｏ−ＤＭＴ）；２．４（ｄ，１，ヒドロキシル）；１．９ −１．４（ｍ，６，ＣＨ2）。 実施例１０７ ６−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−１，２，６−ヘキサントリ オール−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−シアノエトキシホ スファイト］−１，２，６−ヘキサントリオール クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンを、 ６−Ｏ−ベンゾイル−１−Ｏ−ジメトキシトリチル−１，２，６−ヘキサントリ オールを含むテトラヒドロフランおよびジイソプロピルエチルアミンの氷冷溶液 に加えた。混合物を室温で３時間撹拌し、次に、回転蒸発させた。得られた油を ヘキサン／酢酸エチル／トリエチルアミンを溶離剤として用い、５．５×１０ｃ ｍシリカゲルカラムでクロマトグラフィーを行った。適当なフラクションを蒸発 させてアミダイトを得た。 実施例１０８ １−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−メチルペンタン−１，２−ジオール 臭化イソプロピルマグネシウム（ＴＨＦ中の２Ｍ溶液５０ｍｌ、アルドリッチ 社）およびテトラクロロ銅酸ジリチウム（ＴＨＦ中の０．１Ｍ溶液１０ｍｌ、ア ルドリッチ社）の混合物をアルゴン雰囲気下、−６８℃に冷却した。この温度に 維持するように、混合物を３−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｒ−（＋）−グリシド ール（７．３ｇ、２０mmol、３０ｍｌのＴＨＦ中）の溶液で滴加処理した。こは く色の溶液を室温に温め、次に一晩撹拌した。混合物を冷飽和塩化アンモニウム 溶液（約３０ｍｌ）で処理し、セライトに通して濾過した。セライト床を追加の テトラヒドロフランで数回洗浄し、濾液を回転蒸発させた。得られた黄色シロッ プをヘキサン／酢酸エチル／トリエチルアミンを溶離剤として用い、５．５×１ ５ｃｍシリカゲルカラムでクロマトグラフィーを行った。適当なフラクションを 蒸発させて、５．２ｇ（ ）のジオールを無色のガムとして得た。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，７．５−６．８（ｍ，１３，芳香族）；４．６（ｄ， １，ヒドロキシル）；３．７（ｓ，６，メトキシ）；３．７（ｍ，１，Ｃ−２メ チン）；２．９（２ｍ，２，メチレン）；１．７（ｍ，１，Ｃ−４ メチン）； １．２（ｔ，２，メチレン）；１．９（２ｄ，６，メチル）。 実施例１０９ １−Ｏ−ジメトキシトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）− ２−Ｏ−シアノエトキシホスファイト］−４−メチルペンタン−１，２−ジオー ル Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピル−２−シアノエチルジホスホアミダ イト（３．３ｇ、１０．８mmol）を、１−Ｏ−ジメトキシトリチル−４−メチル ペンタン−１，２−ジオール（３．８ｇ、９mmol）およびジイソプロピルアンモ ニウムテトラゾリド（１．２ｇ、４．５mmol）を含む無水アセトニトリル（４０ ｍｌ）の氷冷溶液に加えた。この混合物をアルゴン雰囲気下、室温で一晩撹拌し た。反応混合物をできるだけ少ない体積に蒸発させ、残留物をジクロロメタン（ １００ｍｌ）と冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍｌ）との間で分配した。 有機層はさらに冷水およびブラインで洗浄し、次に硫酸ナトリウムで乾燥し、濾 過し、回転蒸発させた。得られたシロップをヘキサン／酢酸エチル／トリエチル アミン（８０：１９．５：０．５）を溶離剤として用い、５．５×１５ｃｍシリ カゲルカラムでクロマトグラフィーを行った。適当なフラクションを回転蒸発さ せて、無色ガラスとしてアミダイト５．４ｇ（８０％）を得た。31Ｐ ＮＭＲ（ ＣＤ3ＯＤ）：１５３．３、１５２．９ｐｐｍ。 実施例１１０ １−（Ｎ，Ｎ−ビス−シアノエチルアミノ）−２，３−プロパンジオール Ｒ−（＋）−グリシドール（０．５ｇ、６．７mmol）を含む無水アセトニトリ ル（３０ｍｌ）およびトリエチルアミン（０．５ｍｌ）の溶液を、３，３’−イ ミノジプロピオニトリル（０．８２５ｇ、６．７mmol）で処理した。混合物を５ ０℃に加熱し、アルゴン雰囲気下で１８時間撹拌した。混合物を真空ポンプの下 で回転蒸発させて、１．０ｇ（７６％）の明るい無色の油を得た。1Ｈ ＮＭＲ （ＤＭＳＯ−ｄ6）：ｄ，４．９（ｔ，１，１°ヒドロキシル）；４．７（ｄ， １，２°ヒドロキシル）；３．７−３．２（ｍ，５，プロパン）；２．７および ２．６（２ｔ，８，エチレン）。 実施例１１１ １−（［Ｎ，Ｎ−ビス−シアノエチル］アミノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル −プロパン−２，３−ジオール １−（［Ｎ，Ｎ−ビス−シアノエチル］アミノ）−２，３−プロパンジオール を含む無水ピリジンの溶液を、塩化ジメトキシトリチルで処理し、混合物を無水 条件下で１８時間撹拌した。混合物を数ミリリットルの無水メタノールで処理し 、次に回転蒸発させた。得られた油をトルエンと同時蒸発させ、そしてシリカゲ ルカラムでクロマトグラフィーしてトリチル化化合物を得た。 実施例１１２ １−（［Ｎ，Ｎ−ビス−シアノエチル］アミノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル −２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−Ｏ−シアノエトキシホス ファイト］−プロパン−２，３−ジオール クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンを、 １−（［Ｎ，Ｎ−ビス−シアノエチル］アミノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル −プロパン−２，３−ジオールおよびジイソプロピルエチルアミンを含む無水テ トラヒドロフランの氷冷溶液に加えた。反応混合物を室温でアルゴン雰囲気下、 ３時間撹拌し、次に、回転蒸発させた。得られた混合物をシリカゲルカラムでク ロマトグラフィーを行い、適当なフラクションを集め、回転蒸発させてホスホア ミダイトを得た。 実施例１１３ １−（Ｎ，Ｎ’−ビス−カルボキサミドエチルアミノ）−３−Ｏ−ジメトキシト リチル−プロパン−２，３−ジオール テトラヒドロフラン中の１−（［Ｎ，Ｎ−ビス−シアノエチル］アミノ）−３ −Ｏ−ジメトキシトリチル−プロパン−２，３−ジオールの溶液を、室温で水性 １Ｍ水酸化ナトリウム溶液で処理した。２相混合物に３０％過酸化水素を加え、 次に室温で一夜撹拌した。得られた混合物をジクロロメタンで希釈し、さらに有 機層を冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水およびブラインで洗浄した。有機層を 回転蒸発させ、得られた油状物を焼結ガラス漏斗上で短ベッドシリカゲルを通し て濾過し、ビス−カルボキサミドを得た。 実施例１１４ １−（［Ｎ，Ｎ’−ビス−カルボキサミドエチル］アミノ）−３−Ｏ−ジメトキ シトリチル−２−Ｏ−［（Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノ）−２−Ｏ−シアノエ トキシホスファイト］−プロパン−２，３−ジオール クロロ−β−シアノエトキシ−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルアミノホスフィンを無 水テトラヒドロフランおよびジイソプロピルエチルアミン中の１−（［Ｎ，Ｎ’ −ビス−カルボキサミドエチル］アミノ）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−プロ パン−２，３−ジオールの氷冷溶液に加えた。得られた混合物を室温でアルゴン 雰囲気下で３時間撹拌し、次に回転蒸発させた。得られた混合物をシリカゲルカ ラム上でクロマトグラフィーを行い、適当な画分を回収し、回転蒸発させて、ホ スホルアミダイトを得た。 実施例１１５ 標準的ＤＮＡ合成プロトコールを用いる標準オリゴマーカップリングサイクル 本発明のオリゴマー性高分子は、標準的オリゴヌクレオチドと同様に、自動化 ＤＮＡ合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ｍｏｄｅｌ ３８０Ｂ ）で、標準的ホスホルアミデート化学を用いて、ヨウ素で酸化して合成した（Ｏ ｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ａ ｐｒａｃｔｉｃａｌ ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ．Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓ ｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９９０ を参照 のこと）。ホスホロチオエートオリゴマーについては、ホスファイト結合の段階 的チオ化のために、標準的な酸化ボトルをアセトニトリル中の３Ｈ−１，２−ベ ンゾジチオール−３−オン１，１−ジオキシドの０．２Ｍ溶液で置き換えた。チ オ化の待機時間を６８秒に増加し、続いてキャッピング段階を実施した。ＣＰＧ カラムからの切断および水酸化アンモニウム中５５℃における脱ブロッキング（ １８時間）の後、オリゴマーを２．５容量のエタノールで０．５ＭＮａＣｌ溶液 から２回析出させて精製した。分析ゲル電気泳動は、２０％アクリルアミド、８ Ｍ尿素、４５４ｍＭトリスホウ酸緩衝液（ｐＨ＝７．０）で実施した。ホスホジ エステルおよびホスホロチオエートオリゴマーは、ポリアクリルアミドゲル電気 泳動でその長さを判定した。 実施例１１６ ホスホジエステル結合を有する配列特異的エチレングリコールオリゴマーの合成 ”Ａｆｏｒｖｉｒｓｅｎ”は、次の核塩基配列を有する抗パピローマ剤である ： ＴＴＧ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＣＴ ＴＣＣ ＴＣＧ ＴＣ あらかじめ選択されたこの配列のエチレングリコールホスホジエステル結合オリ ゴマーを、それぞれ実施例３、１５、２４および２０からのＴ、Ａ、ＣおよびＧ 試薬を用いて、酸化試薬としてヨウ素を用いて、実施例１１５の方法により製造 し、”Ａｆｏｒｖｉｒｓｅｎ”配列を有するホスホジエステル結合オリゴマー性 化合物を得た。 実施例１１７ ホスホロチオエート結合を有する配列特異的エチレングリコールオリゴマーの合 成 ”Ａｆｏｒｖｉｒｓｅｎ”は、次の核塩基配列を有する抗パピローマ剤である ： ＴＴＧ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＣＴ ＴＣＣ ＴＣＧ ＴＣ あらかじめ選択されたこの配列のエチレングリコールホスホロチオエート結合オ リゴマーを、それぞれ実施例３、１５、２４および２０からのＴ、Ａ、Ｃおよび Ｇ試薬を用いて、酸化試薬として３Ｈ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン１ ，１−ジオキシドを用いて、実施例１１５の方法により製造し、ホスホロチオエ ート結合オリゴマー性化合物を得た。 実施例１１８ 水素ホスホネートカップリング：一般的方法（Ｆｒｏｅｈｌｅｒ，Ｂ．Ｃ．，Ｍ ｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ２０：Ｐｒ ｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏｒ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ａｎａ ｌｏｇｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｓ．Ｅｄ．；Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ：Ｔｏｔｏ ｗａ，１９９３，６３−８０） コハク酸リンカー（１μｍｏｌ）を介して結合したＤＭＴ保護アルコールで誘 導化した固体支持体（ＣＰＧまたは他のポリマー性支持体、例えばＴｅｎｔａＧ ｅｌ）の一部をＤＮＡ合成カラムに充填し、次の機能を実施するようにプログラ ムされた自動化ＤＮＡ合成機に取り付けた。 １） ジクロロメタンで洗浄 ２） ジクロロメタン中３％トリクロロ酢酸でＤＭＴ基を除去 ３） ジクロロメタンおよびＣＨ3ＣＮ／ピリジン（１：１）で洗浄 ４） カップリング：ＣＨ3ＣＮ／Ｐｙ（１：１）中の０．２Ｍ塩化アダマント イルまたは塩化ピバロイル、およびＣＨ3ＣＮ／Ｐｙ（１：１）中の０．０５Ｍ Ｈ−ホスホネートモノマーを１分間で交互に添加 ５） ＣＨ3ＣＮ／ピリジン（１：１）で洗浄 ６） 完全な配列が完成するまで、工程１から５を繰り返す。 この一連の反応の生成物は、Ｈ−ホスホネートジエステルであり、これを以下 に記載するものを含むいくつかの方法の１つにより酸化する。 酸化方法１：ホスホジエステル 固体支持体結合−Ｈ−ホスホネートジエステルを、等容量の溶液Ａ（０．２Ｍ Ｉ2／ＴＨＦ）および溶液Ｂ（Ｎ−メチルモルホリン／Ｈ2Ｏ／ＴＨＦ １：１： ８）で５分間処理（手動または自動）し、次に、等容量の溶液Ａおよび溶液Ｃ（ ＴＥＡ／Ｈ2Ｏ／ＴＨＦ １：１：８）で５分間処理し、次にＣＨ3ＣＮ／Ｐｙ（ １：１）で洗浄する。 酸化方法２：ホスホロチオエート 固体支持体結合−Ｈ−ホスホネートジエステルを、ＣＳ2／ルチジン中のＳ8の 溶液で３０分間処理（手動または自動）する。次に、固体支持体をＣＨ3ＣＮ／ Ｐｙ（１：１）で洗浄する。 酸化方法３：ホスホルアミデート 固体支持体結合−Ｈ−ホスホネートジエステルを、ＣＣｌ4／ピリジン（１： １）中の所望のアミンの溶液（１０％Ｖ／Ｖ）で１５−３０分間処理（手動また は自動）する。次に、固体支持体をＣＨ3ＣＮ／Ｐｙ（１：１）で洗浄する。 均一なＰＮ置換を有するホスホルアミデートライブラリの合成；ＸPN（ＮPN）n Ｎ ライブラリは、エチレングリコールＣＰＧまたはユニバーサル支持体ＣＰＧ（ Ｚｅｎｅｃａ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）上で、自動化ＤＮＡ合成機を用いて 合成した。固体支持体を、用いたモノマーの数と等しい数の部分に分離した。そ れぞれのモノマーをＨホスホネートカップリングの一般的方法を用いて、支持体 にカップリングさせた。部分を混合し、次のカップリングのために再び分割した 。このようにして、ランダムオリゴマーを、固定した位置に達するまで合成した 。再び支持体を部分に分割し、それぞれのモノマーをカップリングさせた。個々 のプールにカップリングを行うことにより、固定位置の後に追加のモノマーを付 加することができる。さらにそれぞれのプールを分割し、カップリング後に再び 合わせることにより、追加のランダム位置をオリゴマーに付加することができる 。ただし、異なる固定位置のプールを混合しないように注意する。オリゴマー の組み立てが完了した後、一般方法３にしたがって、個々のサブセット中のＨ− ホスホネート結合を酸化する必要がある。この結果、ライブラリ中のそれぞれの 残基の間に同一のホスホルアミデート結合が形成される。あるいは、酸化の一般 方法１または２にしたがうと、全ホスホジエステルまたは全ホスホロチオエート ライブラリが生成する。次にライブラリのプールを固体支持体から切断し、精製 し、先に記載したように活性についてアッセイする。 固定したＰＮ置換を有するホスホルアミデートライブラリの合成；ＸPN1−ＮPN2 −（ＮpNn）m−Ｎ ２−置換−ＤＭＴ−エチレングリコール−Ｈ−ホスホネートモノマー（Ｐ−ア ミデート：ＥＧＰ，種々のアミン、ＸpN1−ＮpN2−（ＮpNn）m−Ｎ）を用いるホ スホルアミデートライブラリの合成。ライブラリは、エチレングリコールＣＰＧ またはユニバーサル支持体ＣＰＧ（Ｚｅｎｅｃａ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ） 上で、自動化ＤＮＡ合成機を用いて合成した。固体支持体を、用いたモノマーの 数（Ｘ）と等しい数の部分に分割した。それぞれのモノマーを、Ｈ−ホスホネー トカップリングの一般方法を用いて支持体にカップリングさせた。部分を再び合 わせ、酸化方法３を用いて、Ｈ−ホスホネートジエステル結合をホスホルアミデ ートに変換した。これらの工程（分割、カップリング、合体）を繰り返し、続い て、オリゴマーのそれぞれのランダム化位置について異なるアミンを用いて酸化 方法３を実施した。固定位置において、支持体を分割し、モノマーをカップリン グさせた。ただしサブセットは酸化工程のために分離したままにした。切断およ び後処理の後、ランダム化モノマーおよびそれぞれのホスホルアミデート結合に おいて異なる置換基を有するライブラリが得られる。適当な酸化方法に置き換え ることにより、ホスホジエステルおよびホスホロチオエート結合をオリゴマーラ イブラリ中の任意の位置に導入することも可能である。 種々のＰＮ置換を有するホスホルアミデートライブラリの合成；ＸpNn−（ＮpNn ）m−Ｎ ライブラリは、エチレングリコールＣＰＧまたはユニバーサル支持体ＣＰＧ （Ｚｅｎｅｃａ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）上で、自動化ＤＮＡ合成機を用い て合成した。固体支持体を、用いたモノマーの数に等しい数の部分に分離した。 Ｈ−ホスホネートカップリングの一般方法を用いて、それぞれのモノマーを支持 体にカップリングさせた。部分を再び合わせ、混合し、部分に分離した。酸化方 法３にしたがってそれぞれの部分を異なるアミンで酸化し、次に支持体を合わせ て混合した。これらの工程（分割、カップリング、混合、分割、酸化、混合）を 固定位置まで繰り返した。次に支持体を部分に分割し、モノマーをカップリング させ、樹脂部分を再び分割して、方法３にしたがって酸化した。後処理の後、そ れぞれのサブセットは、ユニークなモノマー残基およびホスホルアミデート結合 、およびランダムな位置に等モル量のそれぞれのモノマーおよびアミンを有する 。方法１または２にしたがってそれぞれのＨ−ホスホネートジエステルの部分を 酸化することにより、ホスホジエステルおよびホスホルアミデート結合をオリゴ マー中にランダムに導入することも可能である。 実施例１１９ ３−オクチル−プロパン−１，２−ジオール−ホスホジエステル−チミジン−ホ スホジエステル−チミジントリマーの製造 チミジンの３’−５’ホスホジエステル結合ダイマーで誘導化した制御孔ガラ ス樹脂［５’−Ｄｍｔ−Ｏ−Ｔ−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｔ−ＣＰＧ］を、標準的 方法により合成した。ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸を用いて樹脂（２ ５．６ｍｇ，４７．５ｍｍｏｌｅ／ｇ樹脂）を脱トリチル化し、次に、無水アセ トニトリルおよびピリジンで順番に洗浄した。樹脂を塩化アダマントイル（５０ ｍＭ）およびピリジン中の３−オクチル−１−Ｏ−ジメトキシトリチルプロパン ジオール−２−Ｈ−ホスホネート（２５ｍＭ）の溶液とともに５分間激しく撹拌 した。次に、樹脂を無水ピリジンで繰り返し洗浄し、アルゴンガスでブロー乾燥 した。カラムに１ｍＬのヨウ素／ピリジン／水（２／９０／８）溶液を加え、カ ラムを激しく撹拌した。カラムをピリジンおよびアセトニトリルで順番に洗浄し 、次にアルゴンガスでブロー乾燥した。生成物は、１ｍＬの濃水酸化アンモニウ ムで３０分間処理することによりＣＰＧから切断した。アンモニア溶液を蒸発さ せ て乾固させ、次に８０％酢酸／水で３０分間処理してトリチル基を除去した。溶 液のアリコートは、ＨＰＬＣ分析（Ｖｙａｄｅｃ Ｃ−１８カラム，２６０ｎｍ でモニター，酢酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ７）−アセトニトリル，０−７５％ アセトニトリルの直線勾配、５２分間）により、２６．３分に単一ピークを示し 、これはホスホジエステルトリマーに対応する。 実施例１２０ ３−オクチル−プロパン−１，２−ジオール−モルホリノホスホルアミデート− チミジン−ホスホジエステル−チミジントリマーの製造 実施例１１８および１１９に記載のようにして製造した１−Ｏ−ジメトキシト リチル−３−オクチル−プロパンジオール−２−Ｏ−Ｐ（Ｈ）−Ｏ−Ｔ−Ｏ−Ｐ （＝Ｏ）−Ｏ−Ｔ−ＣＰＧ樹脂を、モルホリン／四塩化炭素／ピリジン（１／５ ／５）の溶液１ｍｌとともに３０分間激しく振盪した。樹脂を、ピリジン、続い てアセトニトリルで順番に洗浄し、アルゴンガスでブロー乾燥した。生成物は、 濃水酸化アンモニウム１ｍｌで３０分間処理することによりＣＰＧから切断した 。アンモニア溶液を蒸発して乾固させ、次に、８０％酢酸／水で３０分間処理す ることによりトリチル基を除去した。この溶液のアリコートを、得られたモルホ リノホスホルアミデートトリマーのＨＰＬＣ分析に用いた。 実施例１２１ ３−（Ｎ−ピペリジン）−プロパン−１，２−ジオール−ホスホジエステル−チ ミジン−ホスホジエステル−チミジントリマーの製造 チミジンの３’−５’ホスホジエステル結合ダイマーで誘導化した制御孔ガラ ス樹脂［５’−Ｄｍｔ−Ｏ−Ｔ−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｔ−ＣＰＧ］を、標準的 方法により合成した。ジクロロメタン中の３％トリクロロ酢酸を用いて樹脂（２ ４．６ｍｇ，４７．５ｍｍｏｌｅ／ｇ樹脂）を脱トリチル化し、次に無水アセト ニトリルおよびピリジンで順番に洗浄した。樹脂を塩化アダマントイル（５０ｍ Ｍ）およびピリジン中の１−（Ｎ−ピペリジン）−３−Ｏ−ジメトキシトリチル プロパンジオール−２−Ｈ−ホスホネート（２５ｍＭ）の溶液１ｍｌとともに５ 分間激しく撹拌した。次に、樹脂を無水ピリジンで繰り返し洗浄し、アルゴンガ スでブロー乾燥した。カラムにヨウ素／ピリジン／水（２／９０／８）溶液１ｍ ｌを加え、激しく撹拌した。次に、カラムをピリジンおよびアセトニトリルで洗 浄し、次にアルゴンガスでブロー乾燥した。生成物は、濃水酸化アンモニウム１ ｍｌで３０分間処理することによりＣＰＧから切断した。アンモニア溶液を蒸発 して乾固させ、次に８０％酢酸／水で３０分間処理してトリチル基を除去した。 溶液のアリコートは、上述の条件下でのＨＰＬＣ分析により、１２．４ｍｉｎに 単一ピークを示した。 実施例１２２ １−Ｎ−ピペリジン−３−Ｏ−ジメトキシトリチル−プロパンジオール−２−モ ルホリノホスホルアミデート−チミジン−ホスホジエステル−チミジントリマー の製造 実施例１１８および１１９に記載のようにして製造した３−Ｏ−ジメトキシト リチル−１−Ｎ−ピペリジン−プロパンジオール−２−Ｏ−Ｐ（Ｈ）−Ｏ−Ｔ− Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）−Ｏ−Ｔ−ＣＰＧ樹脂を、モルホリン／四塩化炭素／ピリジン（ １／５／５）の溶液１ｍｌとともに３０分間激しく振盪した。樹脂を、ピリジン 、続いてアセトニトリルで順番に洗浄し、アルゴンガスでブロー乾燥した。生成 物を濃水酸化アンモニウム１ｍｌで３０分間処理することによりＣＰＧから切断 した。アンモニア溶液を蒸発させて乾固させ、次に、８０％酢酸／水で３０分間 処理することによりトリチル基を除去した。この溶液のアリコートを得られたモ ルホリノホスホルアミデートトリマーのＨＰＬＣ分析に用いた。 実施例１２３ 組み合わせ技術を用いるオリゴマー性構造中へのモノマー単位の取り込み−一般 的方法 固体支持体（ユニバーサル支持体、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｂｉｌｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を等重量の部分に分離した。部分の数は、組み合わ せライブラリ中のモノマーの数と等しい。それぞれの部分を、触媒としてテトラ ゾールを用いて所望のアミダイトの１つと反応させ、次に、実施例１１５の標準 的カップリングサイクルにしたがってホスファイトトリエステルを酸化してホス フェートとした。ＣＨ2Ｃｌ2中のトリクロロ酢酸を用いてＤＭＴエーテルを切断 し、延長されたオリゴマーの末端にヒドロキシル基を生成した。アミダイト濃度 および総等量およびカップリング時間を変更することにより、カップリング反応 の程度を最適化して９０％以上とした。カップリング後、個々のカップリング反 応からの支持体を十分に混合し、次に等量に分割し、再びアミダイトを個々に支 持体の部分と反応させた。このサイクルを、「固定」位置に達するまで、それぞ れのランダム位置について繰り返した。 オリゴマーの「固定」位置においては、それぞれのアミダイトを支持体の部分 と個々に反応させるが、部分は混合しない。そのかわり、それぞれのサブセット をさらにモノマーの数に対応する数の部分に分割する。次に、支持体のそれぞれ の部分を異なるアミダイトと反応させ、上述のように混合した。支持体の異なる サブセットのそれぞれについてこのサイクルを繰り返し、配列中の固定位置の後 の位置をランダム化した。得られるサブセットは、固定位置においてのみユニー クである。 オリゴマー合成が完了したとき、濃アンモニア中で室温で１−２時間インキュ ベートすることにより、オリゴマーを固体支持体から切断し、ホスフェート保護 基を除去した。次に、オリゴマーを含む上清をシリカから取り除き、５５℃で６ −１６時間インキュベートして残基から保護基を切断した。オリゴマーを脱塩し 、ＨＰＬＣサイズ排除クロマトグラフィーにより保護基を除去した。 実施例１２４ ホスホルアミダイトモノマーのカップリング効率の評価 以下の方法を用いて、エチレングリコールホスホルアミダイトまたは他のホス ホルアミダイトについて、ランダム配列固相オリゴマー合成において用いるため の適合性を評価した。内部対照を含む固相合成支持体を用いてカップリング効率 を決定して、消光計数を見積もり、試験ホスホルアミダイトモノマーのカップリ ング生成物の質を以下のようにして評価した。 試験モノマー−支持体を内部標準として選択した。チミジンについてはｄＴ， デオキシシチジンについてはｄＣの略記を用い、他の略号は以下に記載する。示 される試験システムにおいては、試験モノマー−支持体としてＣＰＧに結合した チミジン（ｄＴ−ＣＰＧ）を用い、ＣＰＧに結合した５’−Ｏ−アセチルキャッ プ化シトシン（５’−Ａｃ−ｄＣ−ＣＰＧ）を内部標準として用いた。 反応性ｄＴ−ＣＰＧを、より少ないモル等量の非反応性５’−Ａｃ−ｄＣ−Ｃ ＰＧと混合した。非反応性５’−Ａｃ−ｄＣ−ＣＰＧ内部標準により、カップリ ング反応の前および後に存在する未反応ｄＴを正確に決定することができる。 ｄＴのピーク面積をＡTと表し、ｄＣのピーク面積をＡcと表すことができる。 ｄＴとｄＣのピーク面積の初期比、すなわち（ＡT／ＡC）Oは、ＣＰＧ混合物の アリコートの切断、脱保護およびＨＰＬＣ分析により決定した。測定は波長２６ ０ｎｍで実施した。ｄＣの相対モルはＣと表し、ｄＴの相対モルはＴと表すこと ができる。これらは、既知の消光計数：Ｃ＝ＡC／εCおよびＴ＝ＡT／εTを用い て、それぞれピーク面積ＡCおよびＡTから計算した。すなわち、初期に存在した ｄＴの相対ピーク面積またはモル量は、常にｄＣのピーク面積から計算すること ができる。 ＡTO ＝（ＡC）［（ＡT／ＡC）O］ ＝（Ｃ）［（Ｔ／Ｃ）O］ また、 （Ｃ）（Ｔ／Ｃ） ＝（ＡC／εC）［（ＡT／εT）／（ＡC／εC）］ ＝（ＡC／εC）（ＡT／ＡC））（εC／εT） したがって、 （Ｃ）［（Ｔ／Ｃ）O］＝（ＡC／εC）［（ＡT／ＡC）O］（εC／εT） ＝（ＡC／εT）［（ＡT／ＡC）O］ 所望のアミダイトモノマー（Ｘとして表される）をＣＰＧ混合物のアリコート と反応させた。反応したＣＰＧをアンモニアで切断および脱保護し、次にＨＰＬ Ｃで分析して、以下のものを決定した：ｄＣのピークの下の面積，ＡC；未反応 ｄＴのピークの下の面積，ＡTur；およびＸ−Ｔダイマーのピークの下の面積， ＡXT。これらの値を用いて、カップリング効率Ｃ．Ｅ．およびＸ−Ｔダイマーの 消光計数εXTを計算した。 カップリング効率Ｃ．Ｅ．は、総ｄＴ（ＴO）に対する反応したｄＴ（Ｔr）の 比率により定義される。したがって、Ｃ．Ｅ．＝Ｔr／ＴOである。カップリング 効率は、Ｘとのカップリングの前（ＴO）および後（Ｔur）に存在した未反応ｄ Ｔの相対モルから決定することができる。これらの３つの値は次の式の関係を有 する： ＴO＝Ｔr＋Ｔur Ｃ．Ｅ．は無単位値であるため、相対的モル量のかわりにＨＰＬＣピーク面積 を用いて計算を行うことができる： Ｃ．Ｅ． ＝ （Ｔｒ／ＴO） ＝ （ＴO／ＴO）−（Ｔur／ＴO） ＝ １−（Ｔur／ＴO） ＝ １−（ＡTur／εT）／（ＡTO／εT） ＝ １−（ＡTur／ＡTO） ＝ １−（ＡTur）／［（ＡC）［（ＡT／ＡC）O］］ 上述はすべて測定可能な量である。 ＸについてのＣ．Ｅ．およびＨＰＬＣピークの相対的面積から、あるＨＰＬＣ 溶媒系におけるＸについての消光計数ε、すなわちεX-Tを決定した。Ｘ−Ｔの 量は、反応したＴの量と等しい。ダイマーＸ−Ｔについてのεは、ピーク面積ＡXT を存在するダイマーＸ−Ｔのモル数ＸＴで割ったものとして定義され、以下の ように計算される： ＸＴ ＝ Ｔr ＝ （Ｃ．Ｅ．）（ＴO） εXT ＝ （ＡXT／ＸＴ） ＝ （ＡXT）／（Ｃ．Ｅ．）（ＴO） ＝ （ＡXT）／（Ｃ．Ｅ．）（Ｃ）［（Ｔ／Ｃ）O］ ＝ （ＡXT）／（Ｃ．Ｅ．）（ＡC／εT）［（ＡT／ＡC）O］ 上述はすべて測定可能な量である。 最後に、ＨＰＬＣクロマトグラムの出現からカップリング生成物Ｘ−Ｔの質を 評価することができる。予期されたもの以外の顕著なピーク（生成物ピーク面積 の１０％を越える積算を有するもの）も処理する。これらはしばしば保護基を保 持する所望のＸ−Ｔダイマーである。これらのピークが延長したアンモニア処理 により消滅すれば、モノマーが標準的な時間を越える延長したアンモニア脱保護 を必要とすることが確認される。他の場合には、追加のピークは望まれない副生 成物として同定される可能性があり、または場合によってはこれらは同定するこ とができない。一般に、約９０％より低いカップリング効率、数日を越える時間 を要するアンモニア脱保護時間、または１０％を越える量の（ＵＶ吸収により） 副生成物の生成は、ランダムオリゴマー性化合物の生成において用いられる特定 のアミダイトのセットにおける使用についての考慮からアミダイトを排除する可 能性を判定する初期ガイドラインとして選択することができる。 実施例１２５ 例示的エチレングリコールホスホルアミダイトモノマーのカップリング効率の評 価 エチレングリコールホスホルアミダイトをｄＴ−ＣＰＧ固相合成支持体にカッ プリングさせて、ダイマーおよびトリマーを形成した。カップリングは、実施例 １２４の一般的方法にしたがって実施した。ダイマーおよびトリマーの合成は、 ＡＢＩ３９４ ＤＮＡ合成機（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ，Ｆｏｓ ｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）で、標準的ＤＮＡ合成試薬および合成プロトコールを 用いて実施した。ただし、合成サイクルに延長した（５分間）カップリング時間 を追加した。濃アンモニアで４℃で３日間処理することにより、オリゴマーを固 体支持体から切断した。支持体から上清を除去し、密封バイアル中で５５℃で８ 時間加熱した。この溶液を冷却し、蒸発によりアンモニアを除去した。オリゴマ ーは、逆相ＨＰＬＣカラム（Ｗａｔｅｒｓ Ｎｏｖａ−Ｐａｋ Ｐｈｅｎｙｌ， Ｃａｔ．＃１０６５６；Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．，Ｍｉｌｆｏｒｄ，Ｍ Ａ））で、０．１Ｍ酢酸アンモニウム（ｐＨ７）中の１％から７５％アセトニト リルの５０分間の勾配を用いて直接分析した。ＨＰＬＣ系は、９９１検出機、６ ２５ＬＣポンプおよび７１４ＷＩＳＰ自動注入器を備えたＷａｔｅｒｓである。 計算は、２６０ｎｍで収集したデータを用いて実施した。 実施例１２６ エチレングリコールホスフェートオリゴマーライブラリの合成 エチレングリコールホスフェートオリゴマー（ＥＧＰ）は、標準的なＤＮＡホ スホルアミダイト化学を用いて合成した。次の６つのＥＧＰホスホルアミダイト をオリゴマーライブラリに取り込ませた：アデニン、グアニン、シトシン、チミ ン、カルバゾールおよびイミダゾール。ＥＧＰホスホルアミダイトを無水アセト ニトリル（ＣＨ3ＣＮ）に溶解して０．２Ｍとした。ただし、ＥＧＰグアニン（ ”ｅｇＧ”）は、最初に無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）に溶解して２Ｍと し、次にＣＨ3ＣＮで０．２Ｍに希釈した。ＡＢＩ３９４ ＤＮＡ合成機で、１ μｍｏｌスケールのシアノエチルホスホルアミダイト合成の標準的ＡＢＩサイク ルを用いて、カップリング待機時間を５分間に増加して、ＥＧＰホスホルアミダ イトを１−２μｍｏｌの制御孔ガラス（ＣＰＧ）支持体にカップリングさせた。 ヨウ素酸化溶液をアセトニトリル中のＨ−１，２−ベンゾジチオール−３−オン １，１−ジオキシド（Ｂｅａｕｃａｇｅ）の０．１Ｍ溶液で置き換えることによ り、ホスホロチオエートオリゴマーも合成した。５’ＥＧＰ残基で終わるオリゴ マーの５’ジメトキシトリチル基（ＤＭＴ）は、オリゴマーをＣＰＧ支持体から 切断する前には除去しなかった。水酸化アンモニウム（ＮＨ4ＯＨ）中での切断 の前に５’ヒドロキシルを脱トリチル化すると、５’ＥＧＰは加水分解されて環 ホスフェートとなる。 １ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨで室温で１時間、ＥＧＰオリゴマーをＣＰＧから切 断した。切断したオリゴマーを、ＮＨ4ＯＨ中で５５℃で一夜（典型的には１２ −１８時間）脱保護した。次に、Ｓａｖａｎｔスピードバック中で蒸発させるこ とにより、ＮＨ4ＯＨをオリゴマーから除去した。１ｍｌの８０％酢酸（ＨＯＡ ｃ）中で１時間、オリゴマーからＤＭＴを切断することにより５’ヒドロキシル を脱保護した。次に、スピードバック中で蒸発させることにより、ＨＯＡｃをオ リゴマーから除去した。 オリゴマーをＨ2Ｏに再懸濁し、実施例１２７の３つの方法の１つまたはそれ 以上によりさらに精製した。 実施例１２７ 一般的オリゴマー精製方法 方法Ａ−逆相ＨＰＬＣクロマトグラフィー 逆相クロマトグラフィーによりオリゴマーを脱塩するために、オリゴマーを約 １００ｍＭの酢酸アンモニウム（ＮＨ4ＯＡｃ）または酢酸ナトリウム（ＮａＯ Ａｃ）中で逆相カラムに負荷した。カラムをカラム容量の数倍（１０−２０）の Ｈ2Ｏで洗浄して脱塩した。オリゴマーは、０％から１００％のメタノールの勾 配で溶出した。 方法Ｂ−サイズ排除クロマトグラフィー サイズ排除により脱塩するために、オリゴマーをＨＰＬＣに接続したサイズ排 除カラム（典型的にはＳｅｐｈａｄｅｘＧ１０またはＧ２５ １．６×５０ｃｍ ）に負荷し、Ｈ2Ｏで流速０．５ｍｌ／ｍｉｎで溶出した。オリゴマーは、約２ −３時間でカラムから溶出し、次に塩および保護基が溶出した。 方法Ｃ−酢酸エチル抽出 オリゴマーはまた、酢酸エチル抽出により保護基から精製することができる。 しかし、この方法はオリゴマーを脱塩しない。ＨＯＡｃでＤＭＴを切断した後、 乾燥オリゴマーを１−２ｍｌのＨ2Ｏに再懸濁した。酢酸エチル（１ｍｌ）をオ リゴマーに加え、ボルテックスして層を混合した。Ｈ2Ｏおよび酢酸エチル層が 分離した後、上の層（ＤＭＴおよびベンズアミド保護基を含む酢酸エチル層）を 、オリゴマーを含むＨ2Ｏ層から除去した。酢酸エチルによる３回の抽出が、オ リゴマーからＤＭＴおよびベンズアミドを除去するのに十分であった。 クロマトグラフィーまたは抽出による精製の後、スピードバック中で蒸発させ ることによりオリゴマーを乾燥した。オリゴマーをＨ2Ｏに再懸濁し（典型的に は０．５−２ｍＭ）、−２０℃以下で保存した。 実施例１２８ （ｄＧ）4（ｅｇＣＢ）4（ｄＧ）4および（ｄＧ）4（ｅｇＩＭ）4（ｄＧ）4ホス ホジエステルオリゴマーの合成 ＥＧＰカルバゾールホスホルアミダイト（ｅｇＣＢ）およびＥＧＰイミダゾー ルホスホルアミダイト（ｅｇＩＭ）をデオキシグアノシン（ｄＧ）ホスホルアミ ダイト（ＡＢＩ Ｃａｔ＃４００３２７）とともに取り込ませることにより、２ つの合成を実施した。オリゴマー（ｄＧ）4（ｅｇＣＢ）4（ｄＧ）4および（ｄ Ｇ）4（ｅｇＩＭ）4（ｄＧ）4は、２つの１μｍｏｌ ５００Å Ｇ−ＣＰＧ合 成カラム（Ｃｒｕｃｈａｃｈｅｍ，Ｃａｔ＃１９−７８２１−８０）上で合成し た。アミダイトを無水アセトニトリル（ＡｌｄｒｉｃｈＣａｔ＃２７，１００− ４）で０．２Ｍに希釈した。アミダイトｄＧ、ｅｇＣＢおよびｅｇＩＭを、ＡＢ １３９４ ＤＮＡ合成機のアミダイト位置（位置１−８）の３つに配置した。用 いた合成サイクルは、カップリング待機時間を５分間に増加するように変更した ＡＢＩ標準１μｍｏｌスケールサイクルであった。それぞれの合成ラウンドの後 、５’ＤＭＴを除去した。 デュアルシリンジ法を用いて、オリゴマーを１ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨ中で１ 時間切断した。それぞれのカラムについて、１ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨを３ｍｌ スリップ先端ポリプロピレンシリンジ中に入れた。満たしたシリンジの先端を合 成カラムの一端に配置し、第２の空のシリンジを他の端に配置した。シリンジを 用いてＮＨ4ＯＨをカラムを通して押し出し、１時間反応させた。ＮＨ4ＯＨ中の 切断されたオリゴマーをカラムから除き、Ｗｈｅａｔｏｎの４ｍｌガラスネジ蓋 バイアルに入れ、Ｗｈｅａｔｏｎテフロンライニングキャップできつく蓋した。 オリゴマーをＶＷＲ５５℃加熱ブロック中に１６時間おいて、塩基から保護基を 除去した。バイアルを氷浴中に約１５分間おいて冷却した。バイアルを注意深く 開封してＮＨ4ＯＨを流し出した後、オリゴマーを１．５ｍｌのＢｉｏｓｔｏｒ ネジ蓋ポリプロピレンマイクロチューブに移した。バイアルをＳａｖａｎｔスピ ードバック中に置き、オリゴマーから過剰のＮＨ4ＯＨを蒸発させた。 オリゴマーを約５００μｌのＨ2Ｏに再懸濁し、ボルテックスした。Ｄｅｌｔ ａ−Ｐａｋカートリッジ５μｍ Ｃ１８ ３００Å ３．９×１５０ｍｍ逆相カ ラム（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｃａｔ＃０１１７９３）でそれぞれのオリゴマーを 別々に精製して脱塩した。カラムを１２５ｍＭ ＮＨ4ＯＡｃで１ｍｌ／ｍｉｎ で２０分間平衡化した。オリゴマーをカラムに注入した。カラムを１２５ｍＭ ＮＨ4ＯＡｃで５分間洗浄した。次にカラムをＨ2Ｏで３６分間洗浄してオリゴマ ーを脱塩し、ベンズアミドを除去した。オリゴマーを７５％メタノールで６分間 溶出し、続いて１００％メタノールで６分間洗浄した。７５％−１００％メタノ ール洗浄の間に溶出した画分をポリプロピレン遠心管にプールした。スピードバ ックで過剰の溶媒をオリゴマーから蒸発させた。オリゴマーをＨ2Ｏに再懸濁し て約１ｍＭ濃度とし、−２０℃で凍結保存した。 実施例１２９ ホスホジエステルライブラリＧ4ＸＮ3Ｇ4の合成 ２つのＥＧＰホスホルアミダイト（カルバゾール（ｅｇＣＢ）およびイミダゾ ール（ｅｇＩＭ））を、４つのＤＮＡ（ｄＡ，ｄＣ，ｄＧ，およびｄＴ）ホスホ ルアミダイトとともに取り込ませて、オリゴマーのライブラリを製造した。ライ ブラリは配列Ｇ4ＸＮ3Ｇ4の６つのサブセットからなる。６つのサブセットのそ れぞれについて、位置ＸをｄＡ，ｄＣ，ｄＧ，ｄＴ，ｅｇＣＢ，またはｅｇＩＭ として固定した。Ｎは、ｄＡ，ｄＣ，ｄＧ，ｄＴ，ｅｇＣＢ，およびｅｇＩＭを 等しく取り込んだランダム化位置である。このライブラリを２μｍｏｌスケール で合成した。６つの空の１μｍｏｌスケールのＳｎａｐ合成カラム（ＡＢＩ）に ２μｍｏｌのｄＧ−ＣＰＧ（ＣＰＧ Ｉｎｃ．Ｃａｔ＃ＤＧ２００５０３）（２ μｍｏｌ＝４５ｍｇの４４．５μｍｏｌ／ｇ Ｇ−ｃｐｇ）を充填した。アミダ イトを無水アセトニトリル（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃａｔ＃２７，１００−４）で０ ．２Ｍに希釈した。アミダイトｄＡ，ｄＧ，ｄＣ，ｄＴ，ｅｇＣＢおよびｅｇＩ ＭをそれぞれＡＢＩ３９４ ＤＮＡ合成機のボトル位置１−６に配置した。 異なるアミダイトのカップリング速度はさまざまである。それぞれのランダム 化位置Ｎが６つの残基すべてを等しく取り込むことを確実にするために、混合Ｃ ＰＧ合成スキームを用いた。それぞれのランダム化位置において、それぞれのホ スホルアミダイトをＣＰＧの等しい部分に個々にカップリングさせ、脱トリチル した。次にＣＰＧをカラムからテフロンライニングキャップを有する４ｍｌガラ スネジ蓋バイアルに移し、倒立させることにより１５分間混合し、次のカップリ ングのために６つのカラムに再分配した。固定位置Ｘをカップリングさせた後は 、ライブラリの６つのサブセットを別々に保持した。用いた合成サイクルは、カ ップリング待機時間を５分間に増加させるように変更したＡＢＩ標準１μｍｏｌ スケールサイクルである。それぞれの合成ラウンドの後、５’ＤＭＴを除去した 。 デュアルシリンジ法を用いて、オリゴマーを１ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨ中で１ 時間切断した。オリゴマーを５５℃で１６時間保持し、塩基を脱保護した。次に 、オリゴマーをＳａｖａｎｔスピードバック中に置き、過剰のＮＨ4ＯＨを蒸発 させた。 オリゴマーを約５００μｌのＨ2Ｏに再懸濁し、ボルテックスした。Ｒａｄｉ ａｌ−Ｐａｋtmカートリッジ８×１００ｍｍ Ｄｅｌｔａ−ＰａｋtmＣ１８ ３ ００Å １５μｍ逆相カラム（Ｗａｔｅｒｓ，Ｃａｔ＃ＷＡＴ０２５８４５）で それぞれのオリゴマーを別々に精製し脱塩した。カラムを１２５ｍＭ ＮＨ4Ｏ Ａｃで３ｍｌ／ｍｉｎで２０分間平衡化した。オリゴマーをカラムに注入した。 カラムを１２５ｍＭ ＮＨ4ＯＡｃで５分間洗浄した。次にカラムをＨ2Ｏで３５ 分間洗浄してオリゴマーを脱塩し、ベンズアミドを除去した。オリゴマーを７５ ％メタノールで１０分間溶出し、続いて１００％メタノールで１０分間洗浄した 。７５％メタノール洗浄の間に溶出した画分をポリプロピレン遠心管にプールし 、スピードバックで過剰の溶媒をオリゴマーから蒸発させた。オリゴマーを１ｍ ｌのＨ2Ｏに再懸濁して１．５ｍｌのＢｉｏｓｔｏｒネジ蓋マイクロチューブに 移し、スピードバックで蒸発させることにより乾燥した。オリゴマーをＨ2Ｏに 再懸濁して約２ｍＭ濃度とし、−２０℃で凍結保存した。 ライブラリは、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ ＳＲＩ）において、急性ＨＩＶアッセイでスクリーニングした。ＸがｅｇＣＢに 固定されたオリゴマーのサブセット（すなわちＧ4（ｅｇＣＢ）Ｎ3Ｇ4）は、３ μＭのＩＣ50を有し、６つのサブセットの中で最も活性が高かった。 このライブラリについての次の合成ラウンド（Ｇ4（ｅｇＣＢ）ＸＮ2Ｇ4）を 、上述した混合ＣＰＧ法を用いて２μｍｏｌスケールで合成した。用いた合成サ イクルは、カップリング待機時間を５分間に増加させるように変更したＡＢＩ標 準１μｍｏｌスケールサイクルである。それぞれの合成ラウンドの後、５’ＤＭ Ｔを除去した。 デュアルシリンジ法を用いて、オリゴマーを１ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨ中で１ 時間切断し、５５℃で１６時間加熱して、塩基から保護基を除去した。オリゴマ ーをＳａｖａｎｔスピードバック中に置き、過剰のＮＨ4ＯＨをオリゴマーから 蒸発させた。 オリゴマーを約５００μｌのＨ2Ｏに再懸濁し、ボルテックスした。Ｓｅｐｈ ａｄｅｘＧ２５樹脂（Ｃａｔ＃１７−０５７２−０１）を充填したＰｈａｒｍａ ｃｉａ１６／５０ＨＲカラム（Ｃａｔ＃１８−１４６０−０１）でそれぞれのオ リゴマーを別々に精製し脱塩した。カラムを充填し、Ｈ2Ｏで１−２ｍｌ／ｍｉ ｎで平衡化した。オリゴマーをカラムに注入し、流速を０．５ｍｌ／ｍｉｎに低 下させた。オリゴマーはカラムから２時間で溶出された。次に流速を１−２ｍｌ ／ｍｉｎに上昇させて、塩および保護基を速やかに溶出させ、カラムを再び平衡 化した。オリゴマーを含む画分をポリプロピレン遠心管にプールし、スピードバ ックで過剰のＨ2Ｏをオリゴマーから蒸発させた。オリゴマーを１ｍｌのＨ2Ｏに 再懸濁して１．５ｍｌのＢｉｏｓｔｏｒネジ蓋マイクロチューブに移し、スピー ドバック中で蒸発させることにより乾燥した。オリゴマーをＨ2Ｏに再懸濁して 約１−２ｍＭ濃度とし、−２０℃で凍結保存した。 実施例１３０ Ｇ4ＸＮ3Ｇ4ホスホロチオエートライブラリの合成 ホスホロチオエートでの同一のライブラリＧ4ＸＮ3Ｇ4を、上述の混合モード 法および合成スキームを用いて、２μｍｏｌスケールで合成した。それぞれの合 成ラウンドの後に５’−ＤＭＴを除去した。用いた合成サイクルは、カップリン グ待機時間を５分間に増加させることにより変更したＡＢＩ標準１μｍｏｌスケ ールサイクルである。さらに、ヨウ素およびＨ2Ｏの溶液を用いる酸化工程を、 硫化工程で置き換えた。アセトニトリル中の０．１Ｍ Ｂｅａｕｃａｇｅ溶液を 合成機の位置＃１０に配置した。カップリング工程の後にＢｅａｕｃａｇｅ溶液 をカラムに送達するようにサイクルを変更した。３０秒の待機時間の後に、カラ ムをアセトニトリルですすぎ、次にキャッピング工程を実施した。 オリゴマーは、デュアルシリンジ方法を用いて１ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨ中で １時間切断し、５５℃で１６時間加熱して、塩基から保護基を除去した。オリゴ マーは、上述のように、Ｇ−２５サイズ排除クロマトグラフィーで脱塩し、Ｈ2 Ｏ中１ｍＭで冷凍保存した。 実施例１３１ ＸＮ5Ｔホスホジエステルライブラリの合成 ６つのＥＧＰホスホルアミダイト：アデニン（ｅｇＡ），グアニン（ｅｇＧ） ，シトシン（ｅｇＣ），チミン（ｅｇＴ），カルバゾール（ｅｇＣＢ）およびイ ミダゾール（ｅｇＩＭ）ホスホルアミダイトを取り込んだオリゴマーのライブラ リを製造した。ライブラリは、配列ＸＮ5Ｔの６つのサブセットからなる。６つ のサブセットのそれぞれについて、位置ＸをｅｇＡ，ｅｇＣ，ｅｇＧ，ｅｇＴ， ｅｇＣＢ，またはｅｇＩＭで固定した。ＮはｅｇＡ，ｅｇＣ，ｅｇＧ，ｅｇＴ， ｅｇＣＢおよびｅｇＩＭを等しく取り込んだランダム化位置である。このライブ ラリを２μｍｏｌスケールで合成した。６つの空の１μｍｏｌスケールのＳｎａ ｐ合成カラム（ＡＢＩ）に２μｍｏｌのｄＴ−ＣＰＧ（ＣＰＧ Ｉｎｃ．Ｃａｔ ＃ＤＴ０６Ｈ０１２）（２μｍｏｌ＝５１ｍｇの３９．２μｍｏｌ／ｇ ｄＴ− ＣＰＧ）を充填した。アミダイトを無水アセトニトリル（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃａ ｔ＃２７，１００−４）で０．２Ｍに希釈した。ただし、ｅｇＧは最初に無水Ｄ ＭＦに溶解して２μＭとし、次にＣＨ3ＣＮで０．２μＭに希釈した。アミダイ トｅｇＡ，ｅｇＧ，ｅｇＣ，ｅｇＴ，ｅｇＣＢおよびｅｇＩＭをそれぞれＡＢＩ ３９４ ＤＮＡ合成機のボトル位置１−６に配置した。このライブラリは、カ ップリング待機時間を５分間に増加させることにより変更したＡＢＩ標準１μｍ ｏｌスケールサイクルを用いて、上述の混合ＣＰＧ方法により合成した。合成セ グメント１−５の後に、５’−ＤＭＴを除去した。合成セグメント６の後には５ ’−ＤＭＴを除去しなかった。ＮＨ4ＯＨ中での切断の間に５’−ＥＧＰ残基が 加水分解するためである。 オリゴマーを、デュアルシリンジ法を用いて１ｍｌの３０％ＮＨ4ＯＨ中で１ 時間切断し、５５℃で１６時間加熱して塩基から保護基を除去した。オリゴマー を６ｍｌポリプロピレン試験管に移し、Ｓａｖａｎｔスピードバック中に置いて 過剰のＮＨ4ＯＨをオリゴマーから蒸発させた。８００μｌの８０％ＨＯＡｃを 乾燥オリゴマーに１時間加えて、５’−ヒドロキシルからＤＭＴ保護基を切断し た。スピードバック中で蒸発させることにより酸を除去した。 オリゴマーを１ｍｌのＨ2Ｏ中でボルテックスして再懸濁させ、酢酸エチル抽 出により、ベンズアミドおよびＤＭＴ保護基を粗合成物から除去した。酢酸エチ ル１ｍｌを粗オリゴマー中にピペットで入れた。試験官をボルテックスして、Ｈ2 Ｏと酢酸エチルとをよく混合した。層の形成後、これらの間に透明な溶媒フロ ントが現れ、上の酢酸エチル層をポリプロピレンピペットを用いて除去した。Ｈ2 Ｏ層を２×１ｍｌの酢酸エチルでさらに２回抽出した。オリゴマーを含むＨ2Ｏ 層を蒸発乾固させて残りの酢酸エチルを除去した。 オリゴマーをＨ2Ｏに再懸濁して約１−２ｍＭ濃度とし、−２０℃で凍結保存 した。 実施例１３２ ＰＬＡ2アッセイ ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）酵素は、膜リン脂質のｓｎ−２結合の加水分 解を行う。ＰＬＡ2触媒反応は、多くのプロ炎症媒介物の放出の律速段階であり 、タイプIIＰＬＡ2は、いくつかのヒト炎症性疾患の病因に関与する。タイプII ＰＬＡ2の活性の阻害についてライブラリサブセットをスクリーニングし、ユニ ークな阻害剤を同定した。 3Ｈ−オレイン酸で標識したＥ．ｃｏｌｉ細胞を基質として用いるアッセイに おいて、ＰＬＡ2の阻害についてオリゴマーライブラリをスクリーニングした（ Ｆｒａｎｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｌｉｐｉｄ Ｒｅｓ．１９７４，１５，３ ８０；およびＤａｖｉｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９ ８７，２６２，１６９８）。バキュロウイルス系で発現させ、部分精製したタイ プIIＰＬＡ2（もともとは滑液から単離された）を、酵素の源として用いた。 それぞれのオリゴマーのプールの希釈列（水中）を作成した。１０μｌのそれぞ れのオリゴマーを、１０μｌのＰＬＡ2、２０μｌの５×ＰＬＡ2緩衝液（５００ ｍＭ Ｔｒｉｓ，ｐＨ７．０−７．５，５ｍＭ ＣａＣｌ2）および５０μｌの 水の混合物とともに室温で５分間インキュベートした。それぞれのオリゴマー試 料は２重に試験した。この時点において、3Ｈ−標識Ｅ．ｃｏｌｉ細胞１０μｌ を加えた。この混合物を３７℃で１５分間インキュベートした。酵素反応は、５ ０μｌの２Ｍ ＨＣｌおよび５０μｌの脂肪酸フリーＢＳＡ（２０ｍｇ／ｍＬ ＰＢＳ）を加えることにより停止させ、５秒間ボルテックスし、高速で５分間遠 心分離した。次に、それぞれの上清の１６５μｌ部分を、６ｍｌのシンチラント （Ｓｃｉｎｔｉｖｅｒｓｅ）を含むシンチレーションバイアル中に入れ、Ｂｅｃ ｋｍａｎ液体シンチレーションカウンターでｃｐｍを測定した。対照として、オ リゴマーを含まない反応ならびにオリゴマーもＰＬＡ2酵素も含まないベースラ イン反応を他の反応の横に流した。それぞれの反応データポイントからベースラ インを差し引くことにより、ｃｐｍを補正した。結果を表III、IVおよびＶに示 す。 最初のラウンドにより、Ｇ4（ｅｇＣＢ）ＮＮＮＧ4が２５μＭのＩＣ50を有す る最良のオリゴマーとして同定された。次の位置は、２倍の活性の向上および１ ２μＭのＩＣ50を有するｅｇＣＢであると判定された。その結果、２ラウンドの 選択の後、Ｇ4（ｅｇＣＢ）2ＮＮＧ4がＰＬＡ2アッセイにおいて最良のオリゴマ ーであると同定された。 最初の２ラウンドは、オリゴマーの最初の２つのモノマー単位、すなわちｎｏ Ｃの決定に有用であった。次の２つの位置は、順番にｄＧおよびｄＴであると判 定され、最も高い活性を有するユニークなオリゴマーは２μＭのＩＣ50を有する （ｎｏＣ）（ｎｏＣ）（ｄＧ）（ｄＴ）（ｄＴ）であると同定された。 第１のラウンドでは、最も活性の高いサブセットとして、４０μＭのＩＣ50を 有する（ｅｇＯＣ）ＮＮＮＮｄＴが選択された。次のラウンドにより、活性の８ 倍の向上および５μＭのＩＣ50を有するオリゴマーの第２の位置におけるモノマ ー単位、すなわちｅｇｏＣが決定された。合成および選択の第３のラウンドによ り、さらに改良された１．５μＭのＩＣ50を有する（ｅｇＯＣ）（ｅｇＯＣ）（ ｅｇＯＣ）ＮＮｄＴが最も活性の高いサブセットとして同定された。さらなるラ ウンドを用いて、ＰＬＡ2アッセイにおいて最も高い活性を有するユニークなオ リゴマーを同定することができる。 実施例１３３ アッセイの検証 グアノシンヌクレオチドの１またはそれ以上のストリング（１ストリングあた り少なくとも３個）を有するホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを用いて、 実施例１３２のＰＬＡ2試験系を検証した。ＳＵＲＦのスクリーニング方法を用 いてこれらのオリゴヌクレオチドのライブラリを解離（ｄｅｃｏｎｖｏｌｕｔｅ ）し、ＰＬＡ2酵素に対して阻害効果を有することが示された。ホスホロチオエ ートオリゴヌクレオチドがいくぶんかの配列特異性をもってＰＬＡ2を阻害する ことが知られているため、４個の天然塩基からなる８ヌクレオチドのホスホロチ オエートライブラリを用いて、ＳＵＲＦスクリーニングとしての適合性について アッセイ系を試験した。このライブラリは、他の系のために合成されたものであ り、すべてのサブセットが入手可能ではなかった（以下の表IIIにおいてダッシ ュで示される）。ＳＵＲＦ法を用いて、グアノシンのストレッチがホスホロチオ エートオリゴヌクレオチドによるＰＬＡ2活性の阻害に必要でることが確認され た（以下の表VI）。 アッセイは、オリゴマーのサブセットの間を区別するのに十分に感度が高く正 確であったため、阻害配列を選択することができた。選択の最初の３ラウンドの それぞれにおいて、最も活性の高いサブセットが容易に決定された。５ラウンド の後、１つの列で少なくとも５つのＧを有するサブセットの活性にはほとんど相 違がなく、このことから、末端位置は阻害活性には重要ではないことが示唆され た。より多くの位置が固定されるほど、「勝者」のＩＣ50は改良された（酵素活 性は減少した）。アッセイの再現性の試験として、単一の配列（ＴＴＧＧＧＧＴ Ｔ）を有する８ヌクレオチドのホスホロチオエートオリゴヌクレオチドを試験の それぞれのラウンドでアッセイした。このオリゴヌクレオチドは、アッセイの正 確性の内部対照として作用した。それぞれのアッセイにおいてＩＣ50は８μＭで あった。 実施例１３４ エチレングリコールオリゴマー性化合物のライブラリのＰＬＡ2に対するアッセ イ エチレングリコールモノマーを含むライブラリを、タイプIIＰＬＡ2の阻害剤 の同定のために、ＰＬＡ2アッセイにおいて試験した。「勝者」の確認を行って 、オリゴマーが基質ではなく酵素に結合し、選択された任意のオリゴマーの阻害 が タイプIIＰＬＡ2に特異的であることを確認した。Ｅ．ｃｏｌｉ膜ではなく14Ｃ −ホスファチジルエタノールアミン（14Ｃ−ＰＥ）を基質として用いるアッセイ を用いて、基質ではなく酵素の特異性を確認した。14Ｃ−ＰＥとデオキシコール 酸とのミセルを酵素およびオリゴマーとともにインキュベートした。ＰＬＡ2に 触媒される加水分解の結果として放出された14Ｃ−標識アラキドン酸を薄層クロ マトグラフィーにより基質から分離し、放射活性生成物を定量化した。「勝者」 をヒトタイプIIＰＬＡ2の好ましい基質であるホスファチジルエタノールアミン と比較して、その活性を確認した。他の源からのＰＬＡ2（ヘビ毒、膵臓、蜂毒 ）およびホスホリパーゼＣ，ホスホリパーゼＤおよびリソホスホリパーゼを用い て、阻害がヒトタイプIIＰＬＡ2に特異的であることをさらに確認することがで きる。 組成：ＧＧＧＧＸＮＮＮＧＧＧＧ ［式中、それぞれのＸおよびＮ位置は、上述のエチレングリコールモノマーであ る］のホスホジエステルライブラリを用いたとき、最も協力な化合物は、Ｘモノ マーがカルバゾール官能基を有する化合物である。この化合物は２５μＭのＩＣ50 を有する。次に強力な化合物では、Ｘモノマーはアデニン官能基を有する。 同一の組成のホスホロチオエートライブラリを用いたときも、最も強力な化合 物は、Ｘモノマーがカルバゾール官能基を有する化合物である。しかし、このラ イブラリにおいては、次に最も強力な化合物では、Ｘモノマーはシトシン官能基 を有する。 実施例１３５ ＰＬＡ2に対するエチレングリコールおよびヌクレオチドオリゴマー性化合物の 混合ライブラリの製造 それぞれのＮ位置が本発明の新規なエチレングリコールモノマーまたはヌクレ オチドである組成”ＮＮＮＮＴ”の５ｍｅｒホスホジエステルライブラリを製造 した。合計１２個のモノマー（すべてオリゴマー化に適当なホスホルアミデート として）およびゼロ（ｎｕｌｌ）位置をライブラリの製造に用いた。モノマー性 単位は、それぞれ上述の実施例６および９のイミダゾールおよびカルバゾール− エチレングリコールモノマー性ホスホルアミデート、グアノシンおよびシチジン −デオキシヌクレオチドホスホルアミデート，２’−Ｏ−メチルアデノシンおよ びウリジンヌクレオチドホスホルアミデート，２’−Ｏ−ノニルシチジンヌクレ オチドホスホルアミデート，２’−Ｏ−ペンチルグアノシンヌクレオチドホスホ ルアミデート，Ｎ２，２’−Ｏ−ジメチルウリジンヌクレオチドホスホルアミデ ート，１−アミノ−プロパングリコールホスホルアミデート（実施例３５の１− ［Ｎ−ベンゾイルアミノ］プロパングリコールホスホルアミデートから、オリゴ マー合成の完了後、アミノ基を塩基で脱ブロックした後の生成物）およびベンゾ トリアゾールデオキシヌクレオチドホスホルアミデートを含んでいた。 実施例１３６ 生物学的試料中の特異的ｍＲＮＡの検出のためのハイブリダイゼーションプロー ブ 他の細胞成分からｍＲＮＡを精製することなく生物学的試料中の多種のｍＲＮ Ａの、信頼性のある、迅速な、同時定量化を行うために、適当な生物学的試料か らの問題のｍＲＮＡ（血液運搬性微生物、ならびに便、尿および同様の生物学的 試料中の細菌性病因生成物からのｍＲＮＡ）を標準的な微生物技術を用いて同定 する。このｍＲＮＡの核酸配列に相補的な本発明のオリゴマー性化合物を、上述 の実施例にしたがって製造する。Ｐｏｎ，Ｒ．Ｔ．，Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｆｏ ｒ ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ａｎｄ Ａｎａｌｏｇｓ，Ａｇｒａｗａ ｌ，Ｓ．，Ｅｄ．，ＨｕｍａｎａＰｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，１９９３， ｐ４６５−４９６の方法を用いて、オリゴマー性化合物を不溶性ＣＰＧ固体支持 体上に固定化する。ＰＣＴ出願ＷＯ９３／１５２２１の方法を用いて、調査すべ き既知の生物学的試料のアリコートを、オリゴマーを有する不溶性ＣＰＧ支持体 とともに、ｍＲＮＡがオリゴマーとハイブリダイズし、したがってｍＲＮＡがオ リゴマーを介して固体支持体に結合するのに十分な時間インキュベートする。こ のことにより、試料中に存在するｍＲＮＡはＣＰＧ支持体に固定化される。次に ＣＰＧ支持体を、生物学的試料とともに用いるのに適した洗浄媒体で洗浄して他 の非固定化物質および成分を洗い流す。支持体上のｍＲＮＡを、臭化エチジウム 、 ビオチンまたは市販の放射性ヌクレオチドで標識し、ＣＰＧ支持体に固定化され た標識の量を測定して、生物学的試料中に存在するｍＲＮＡの量を示す。 当業者は、本発明の好ましい態様に多くの変更および改変を行うことが可能で あること、およびそのような変更および改変は本発明の精神から逸脱することな くなしうることを理解するであろう。したがって、そのような等価変更物のすべ ては、本発明の真の精神および範囲に含まれるものとして特許請求の範囲に含ま れることを意図するものである。 実施例１３７ ロイコトリエンＢ4アッセイ ロイコトリエンＢ4（ＬＴＢ4）は、種々のヒト炎症性疾患に関与することが示 されており、その薬理学的効果は、その特異的表面細胞レセプターとの相互作用 に媒介される。ライブラリのサブセットを、放射性標識したＬＴＢ4のレセプタ ー調製物への結合の競合的阻害についてスクリーニングした。 ＮｅｎｑｕｅｓｔTM Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍ Ｋｉｔ （ＮＥＮ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）を用い て、ロイコトリエンＢ4（ＬＴＢ4）とモルモット脾臓膜調製物上のレセプターと の相互作用の阻害剤を選択した。放射性リガンド０．２５ｍｌにリガンド希釈剤 （ＮａＣｌ，ＭｇＣｌ2，ＥＤＴＡおよびバシトラシンを含むリン酸緩衝液，ｐ Ｈ７．２）５ｍｌを加えることにより、［3Ｈ］ロイコトリエンＢ4試薬を調製し た。レセプター調製物は、濃縮物を融解し、レセプターを均一に再懸濁するため にリガンド希釈剤３５ｍｌを加えて穏やかに渦巻かせることにより作製した。実 験の間、試薬は氷上に保持し、残りの部分は−２０℃に保存した。 ライブラリのサブセットを、リン酸緩衝液（１×ＰＢＳ，０．１％アジドおよ び０．１％ＢＳＡ，ｐＨ７．２）中で５μＭ，５０μＭおよび５００μＭに希釈 し、それぞれ最終試験濃度０．５μＭ，５μＭおよび５０μＭを得た。試料は２ 重にアッセイした。［3Ｈ］ＬＴＢ4（２５μＬ）を、２５μＬの適当に希釈した 標準（未標識ＬＴＢ4）またはライブラリサブセットのいずれかに加えた。それ ぞれのチューブにレセプター懸濁液（０．２ｍＬ）を加えた。試料を４℃で２時 間インキュベートした。対照は、レセプター懸濁液を含まない［3Ｈ］ＬＴＢ4（ 総カウントバイアル）およびライブラリ分子を含まないリガンドおよびレセプタ ーの試料（標準）であった。 インキュベーション時間の後、あらかじめ冷食塩水ですすいだＧＦ／Ｂ濾紙を 通して試料を濾過した。それぞれのチューブの内容物を濾紙上に吸引して、未結 合リガンドを膜調製物から除去し、チューブを冷食塩水（２×４ｍｌ）で洗浄し た。濾過ユニットから濾紙を取り除き、フィルターディスクをシンチレーション 計数のために適当なバイアル中に入れた。Ｆｌｕｏｒを加え、バイアルを振盪し 、計数の前に２−３時間室温においた。それぞれの試料から得られたカウント／ 分（ｃｐｍ）を、総カウントバイアルから得られたｃｐｍから差し引き、それぞ れの試料の正味ｃｐｍを決定した。それぞれのライブラリのサブセットについて の結合の阻害の程度を、標準（ライブラリ分子を含まないリガンドおよびレセプ ターの試料）に対して決定した。結果を表VII、VIIIおよびIXに示す。 スクリーニングの最初のラウンドにおいては、ｅｇＣＢを第１の位置に有する サブセット、すなわち（ｅｇＣＢ）ＮＮＮＮＮｄＴが最も高い活性を示した。第 ２ラウンドにおいては、サブセット（ｅｇＣＢ）（ｅｇＣＢ）ＮＮＮＮｄＴが最 も活性が高く、活性はラウンド１の１１μＭのＩＣ50から、ラウンド２の２μＭ に、約６倍増加した。ラウンド３のサブセットのアッセイにより、改良された活 性および０．７μＭのＩＣ50を有する（ｅｇＣＢ）（ｅｇＣＢ）（ｅｇＣＢ）Ｎ ＮＮｄＴが同定された。さらなるラウンドのサブセットの合成およびアッセイに より、ＬＴＢ4アッセイにおいて最高の活性を示すユニークなオリゴマーを同定 することができる。 スクリーニングの最初のラウンドにおいては、第１の位置にｅｇＣＢを有する サブセット、すなわち（ｅｇＣＢ）ＮＮＮｄＴが最も高い活性を示した。第２の ラウンドにおいては、サブセット（ｅｇＣＢ）（ｅｇＣＢ）ＮＮｄＴが最も活性 が高く、活性は、ラウンド１の４０μＭのＩＣ50からラウンド２の６μＭに増加 し、約７倍の向上を示した。ラウンド３および４からのサブセットのアッセイに より、最も低い０．７μＭのＩＣ50を有する最も活性の高いオリゴマー（ｅｇＣ Ｂ）（ｅｇＣＢ）（ＢＴＩ）（ｅｇＣＢ）ｄＴが得られた。 合成および選択の最初の２つのラウンドは、オリゴマーの最初の２つのモノマ ーユニット、すなわち７μＭのＩＣ50を有する（ｅｇＯＣ）（ｅｇＯＣ）ＮＮＮ ｄＴを決定するのに有用であった。次のラウンドにより、改良された２μｍのＩ Ｃ50を有するオリゴマーが選択された。さらなるラウンドを実施して、最高の活 性を有するユニークなオリゴマーを同定することができる。 実施例１３８ ヒト免疫不全ウイルスの阻害の検出のためのアッセイ インビトロＨＩＶ感染アッセイを用いて、組み合わせライブラリからＨＩＶ複 製の阻害剤を選択した（Ｂｕｃｋｈｅｉｔ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ．１９９３，２１，２４７）。ヒトＴ−リンパ芽球ＣＥＭ細胞株を１０ ％ウシ胎児血清、グルタミンおよび抗生物質を含むＲＰＭＩ１６４０中で対数増 殖期に維持した。アッセイの日、細胞を洗浄し、トリパンブルー排除により計数 した。これらの細胞（ＣＥＭ−ＩＩＩＢ）を、９６ウエルマイクロタイタープレ ートのそれぞれのウエルに、ウエルあたり５×１０3個で播種した。それぞれの ウエルに細胞を加えた後、ライブラリのサブセットを示された濃度および半対数 希釈系列で加えた。感染性ＨＩＶ−１IIIBを、感染後６日において完全な細胞殺 傷を与えるように決定した感染多重度でそれぞれのウエルに速やかに加えた。３ ７℃で６日間インキュベートした後、それぞれのウエルから上清のアリコートを 除去し、それぞれのウエルにテトラゾリウム染料ＸＴＴを加えた。ＸＴＴは、生 きた細胞では代謝されてホルマザンブルー生成物となり、これをＭｏｌｅｃｕｌ ａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｖｍａｘプレートリーダーで分光光度として定量的に測 定した。ＸＴＴアッセイは、試験化合物の添加の結果としてのＨＩＶ誘導性細胞 殺傷からの保護を測定する。上清アリコートを用いて、ＸＴＴアッセイにより決 定された活性を確認した。逆転写酵素アッセイおよびｐ２４ＥＬＩＳＡアッセイ を実施して、感染細胞から放出されたＨＩＶの量を測定した。殺傷からの保護に より、ＸＴＴアッセイにおける光学密度が増加し、ウイルス性逆転写酵素および ｐ２４コア蛋白質のレベルが減少する。結果を表Ｘに示す。 ２ラウンドの合成および選択により、サブセットＧ4（ｅｇＣＢ）（ｅｇＣＢ ）ＮＮＧ4が２μＭのＩＣ50を有する最良のサブセットであることが決定された 。追加のラウンドを実施して、さらに増加した活性を有するユニークなオリゴマ ーを同定することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 325/00 7106−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 325/00 327/20 7106−4Ｈ 327/20 327/38 7106−4Ｈ 327/38 333/02 7106−4Ｈ 333/02 Ｃ０７Ｄ 207/325 9159−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 207/325 209/08 9159−4Ｃ 209/08 233/60 １０３ 9551−4Ｃ 233/60 １０３ 239/26 8615−4Ｃ 239/26 239/42 8615−4Ｃ 239/42 Ｚ 239/54 9283−4Ｃ 279/18 279/18 9283−4Ｃ 295/08 Ｚ 295/08 9283−4Ｃ 471/04 １０３Ａ 471/04 １０３ 9450−4Ｈ Ｃ０７Ｆ 9/141 Ｃ０７Ｆ 9/141 9450−4Ｈ 9/143 9/143 9450−4Ｈ 9/572 Ｚ 9/572 9450−4Ｈ Ａ 9450−4Ｈ 9/6503 9/6503 9450−4Ｈ 9/6509 Ｚ 9/6509 9450−4Ｈ 9/6561 Ｚ 9/6561 8615−4Ｃ Ｃ０７Ｈ 21/00 Ｃ０７Ｈ 21/00 8619−4Ｊ Ｃ０８Ｇ 79/04 ＮＵＰ Ｃ０８Ｇ 79/04 ＮＵＰ Ａ６１Ｋ 31/40 // Ａ６１Ｋ 31/40 31/70 ＡＢＥ 31/70 ＡＢＥ ＡＣＪ ＡＣＪ ＡＤＡ ＡＤＡ 9051−4Ｃ ＡＥＤ ＡＥＤ 9271−4Ｃ Ｃ０７Ｄ 473/18 Ｃ０７Ｄ 473/18 9271−4Ｃ 473/34 473/34 8615−4Ｃ 239/54 Ｚ (72)発明者 デイヴィス，ピーター・ダブリュー アメリカ合衆国カリフォルニア州92008, カールズバッド，ハイランド・ドライブ 2202 (72)発明者 エッカー，デヴィッド・ジェイ アメリカ合衆国カリフォルニア州92024, ルーカディア，サキソニー・ロード 1041 (72)発明者 ハーバート，ノーマンド アメリカ合衆国カリフォルニア州92007, カーディフ，モンゴメリー・アベニュー 1861

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １．構造Ｉ： ［式中： ＸはＨ、ホスフェート基、活性化ホスフェート基、活性化ホスファイト基、ま たは固体支持体であり； ＹはＨまたはヒドロキシル保護基であり； ＺはＬ1、Ｌ1−Ｇ1、Ｌ2、Ｌ2−Ｇ2、ＮＲ3Ｒ4、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； Ｌ1は１から約２０の炭素原子を持つアルキル、２から約２０の炭素原子を持 つアルケニル、または２から約２０の炭素原子を持つアルキニルであり； Ｌ2は６から約１４の炭素原子を持つアリールまたは７から約１５の炭素原子 を持つアラルキルであり； Ｇ1はハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＮＨＣ（ ＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ ）ＯＲ5）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、金属配位基、またはホスフェート基であり； Ｇ2はハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、またはＮＲ3Ｒ4であり； Ｒ1はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはヒドロキシル保護基 であり； Ｒ2はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはチオール保護基であ り； Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはア ミン保護基であり； Ｒ5はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、または酸保護基であり； ＱはＬ1、Ｇ3、Ｌ1−Ｇ3、またはＧ3−Ｌ1−Ｇ3であり； Ｇ3はＮＲ3、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、 Ｃ （Ｓ）−Ｏ、Ｃ（Ｓ）−ＮＨまたはＳ（Ｏ）2、ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ3Ｃ（＝ Ｓ）、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＲ3Ｃ（Ｓ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ （Ｓ）−ＮＨまたはＮＲ3Ｓ（Ｏ）2であり； ｎは０または１であり；および ｊは１から６であり； ただし、ｎが０でありかつＺがＮＨ2、アデニン、グアニン、シトシン、ウラ シルまたはチミンであり、ＸまたはＹの一つが５Ｈである場合、ＸまたはＹの他 方はＨではなく；および ｎが０でありかつＱがアルキル−ＮＨである場合、Ｚはビオチンまたはホスホ チロシニルではない］ を有する化合物。 ２．Ｙがヒドロキシル保護基である、請求項１記載の化合物。 ３．Ｙがトリチル、メトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリメトキシ トリチルである、請求項２記載の化合物。 ４．ＸがＨ、活性化ホスファイト基または固体支持体である、請求項１記載の化 合物。 ５．Ｘがホスホルアミダイトである、請求項４記載の化合物。 ６．ｎが１であり、Ｑがカルボニル、チオカルボニル、カルボキシ、アセチル、 アミド、スクシニル、カルバモイル、チオカルバモイル、ウレイド、チオウレイ ド、またはスルホンアミドアシル基である、請求項１記載の化合物。 ７．Ｚが窒素含有複素環である、請求項１記載の化合物。 ８．前記窒素含有複素環がイミダゾール、ピロールまたはカルバゾールである、 請求項７記載の化合物。 ９．Ｚがイミダゾールまたはカルバゾールである、請求項８記載の化合物。 １０．Ｚがプリンまたはピリミジンである、請求項１記載の化合物。 １１．Ｘが活性化ホスファイト基であり、Ｙがヒドロキシル保護基であり、およ びＺがアデニン、グアニン、シトシン、ウリジンまたはチミンである、請求項１ ０記載の化合物。 １２．Ｚがポリエチレングリコールである、請求項１記載の化合物。 １３．Ｚが１から約２０の炭素原子を持つアルキルである、請求項１記載の化合 物。 １４．ＺがＣ1−Ｃ6アルキル−ＮＨ2である、請求項１記載の化合物。 １５．Ｚが６から約１４の炭素原子を持つアリール、または７から約１５の炭素 原子を持つアラルキルである、請求項１記載の化合物。 １６．Ｚがフルオレニルメチル、フェニルまたはベンジルである、請求項１５記 載の化合物。 １７．Ｚがグルタミルである、請求項１記載の化合物。 １８．構造II： 式中： ＸはＨ、ホスフェート基、活性化ホスフェート基、活性化ホスファイト基、固 体支持体、コンジュゲート基またはオリゴヌクレオチドであり； ＹはＨ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基またはオリゴヌクレオチドで あり； ＥはＯまたはＳであり； ＥＥはＯ-またはＮ（Ｙ0）Ｔ0であり； Ｙ0はＨまたは［Ｑ2］jj−Ｚ2であり； Ｔ0は［Ｑ1］kk−Ｚ1であるかまたはＹ0およびＴ0は一緒に窒素複素環内に連 結されており； Ｑ1およびＱ2は独立して、Ｃ2−Ｃ10アルキル、Ｃ2−Ｃ10アルケニル、Ｃ2− Ｃ10アルキニル、Ｃ4−Ｃ7炭素環式アルキルまたはアルケニル、複素環、２から １０の炭素原子および１から４の酸素または硫黄原子を持つエーテル、ポリアル キルグリコールまたはＣ7−Ｃ14アラルキルであり； ｊｊおよびｋｋは独立して０または１であり； Ｚ1およびＺ2は独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ2アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニル、Ｃ2 −Ｃ20アルキニル、Ｃ6−Ｃ14アリール、Ｃ7−Ｃ15アラルキル、ハロゲン、ＣＨ ＝Ｏ、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）、Ｎ ＨＣ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ（ＮＨ2）Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4 、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、金属配位基、レポーター基、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； ＺはＬ1、Ｌ1−Ｇ1、Ｌ2、Ｌ2−Ｇ2、ＮＲ3Ｒ4、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； Ｌ1は１から約２０の炭素原子を持つアルキル、２から約２０の炭素原子を持 つアルケニル、または２から約２０の炭素原子を持つアルキニルであり； Ｌ2は６から約１４の炭素原子を持つアリールまたは７から約１５の炭素原子 を持つアラルキルであり； Ｇ1はハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＮＨＣ（ ＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ ）ＯＲ5）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、金属配位基、またはホスフェート基であり； Ｇ2はハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、またはＮＲ3Ｒ4であり； Ｒ1はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはヒドロキシル保護基 であり； Ｒ2はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはチオール保護基であ り； Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはア ミン保護基であり； Ｒ5はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、または酸保護基であり； ＱはＬ1、Ｇ3、Ｌ1−Ｇ3、またはＧ3−Ｌ1−Ｇ3であり； Ｇ3はＮＲ3、Ｃ(＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｃ（ Ｓ）−Ｏ、Ｃ（Ｓ）−ＮＨまたはＳ（Ｏ）2、ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ3Ｃ（＝Ｓ ）、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＲ3Ｃ（Ｓ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（ Ｓ）−ＮＨまたはＮＲ3Ｓ（Ｏ）2であり； ｎは０または１であり； ｊは１から６であり；および ｍは１から５０である］ を有する化合物。 １９．Ｙがヒドロキシル保護基である、請求項１８記載の化合物。 ２０．Ｙがトリチル、メトキシトリチル、ジメトキシトリチルまたはトリメトキ シトリチルである、請求項１９記載の化合物。 ２１．ＸがＨ、活性化ホスファイト基または固体支持体である、請求項１８記載 の化合物。 ２２．Ｘがホスホルアミダイトである、請求項２１記載の化合物。 ２３．ｎが１であり、Ｑがカルボニル、チオカルボニル、カルボキシ、アセチル 、アミド、スクシニル、カルバモイル、チオカルバモイル、ウレイド、チオウレ イド、またはスルホンアミドアシル基である、請求項１８記載の化合物。 ２４．Ｚが窒素含有複素環である、請求項１８記載の化合物。 ２５．前記窒素含有複素環がイミダゾール、ピロールまたはカルバゾールである 、請求項２４記載の化合物。 ２６．Ｚがイミダゾールまたはカルバゾールである、請求項２５記載の化合物。 ２７．Ｚがプリンまたはピリミジンである、請求項１８記載の化合物。 ２８．Ｚがアデニン、グアニン、シトシン、ウリジンまたはチミンである、請求 項２７記載の化合物。 ２９．ｎが０である、請求項２８記載の化合物。 ３０．Ｚが１から約２０の炭素原子を持つアルキルである、請求項１８記載の化 合物。 ３１．ＺがＣ1−Ｃ6アルキル−ＮＨ2である、請求項１８記載の化合物。 ３２．Ｚが６から約１４の炭素原子を持つアリール、または７から約１５の炭素 原子を持つアラルキルである、請求項１８記載の化合物。 ３３．Ｚがカルバゾール、フェニルまたはベンジルである、請求項３２記載の化 合物。 ３４．Ｚがグルタミルである、請求項１８記載の化合物。 ３５．ｍが１から約２５である、請求項１８記載の化合物。 ３６．ＥがＯである、請求項１８記載の化合物。 ３７．ＥがＳである、請求項１８記載の化合物。 ３８．前記モノマーのそれぞれのＺ基が、あらかじめ定められた配列にある、請 求項１８記載の化合物。 ３９．前記モノマーのそれぞれのＺ基が、ランダム化配列にある、請求項１８記 載の化合物。 ４０．ランダム化オリゴマー化合物を製造する方法であって、構造Ｉ： ［式中： ＸはＨ、ホスフェート基、活性化ホスフェート基、活性化ホスファイト基、ま たは固体支持体であり； ＹはＨまたはヒドロキシル保護基であり； ＺはＬ1、Ｌ1−Ｇ1、Ｌ2、Ｌ2−Ｇ2、ＮＲ3Ｒ4、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； Ｌ1は１から約２０の炭素原子を持つアルキル、２から約２０の炭素原子を持 つアルケニル、または２から約２０の炭素原子を持つアルキニルであり； Ｌ2は６から約１４の炭素原子を持つアリールまたは７から約１５の炭素原子 を持つアラルキルであり； Ｇ1はハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＮＨＣ（ ＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ ）ＯＲ5）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、金属配位基、またはホスフェート基であり； Ｇ2はハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、またはＮＲ3Ｒ4であり； Ｒ1はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはヒドロキシル保護基 であり； Ｒ2はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはチオール保護基であ り； Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはア ミン保護基であり； Ｒ5はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、または酸保護基であり； ＱはＬ1、Ｇ3、Ｌ1−Ｇ3、またはＧ3−Ｌ1−Ｇ3であり； Ｇ3はＮＲ3、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｃ（ Ｓ）−Ｏ、Ｃ（Ｓ）−ＮＨまたはＳ（Ｏ）2、ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ3Ｃ（＝Ｓ ）、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＲ3Ｃ（Ｓ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（ Ｓ）−ＮＨまたはＮＲ3Ｓ（Ｏ）2であり； ｎは０または１であり；および ｊは１から６である］ を有するモノマーの群を選択し；そして 前記群の少なくとも２つのモノマーを共有結合させて、前記化合物を形成する； ことを含む方法。 ４１．前記群の少なくとも１つのモノマーのＺ成分が、前記群の他のモノマーの Ｚ成分と異なる、請求項４０記載の方法。 ４２．前記ランダム化オリゴマー化合物が、２から５０個の前記モノマーを含む 、請求項４０記載の方法。 ４３．請求項４０記載の方法により製造されたオリゴマー化合物であって、２か ら２５個の前記モノマーを含む化合物。 ４４．構造II： 式中： Ｘは、ホスフェート基、活性化ホスフェート基、活性化ホスファイト基、固体 支持体、コンジュゲート基またはオリゴヌクレオチドであり； ＹはＨ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基またはオリゴヌクレオチドで あり； ＥはＯまたはＳであり； ＥＥはＯ-またはＮ（Ｙ0）Ｔ0であり； Ｙ0はＨまたは［Ｑ2］jj−Ｚ2であり； Ｔ0は［Ｑ1］kk−Ｚ1であるかまたはＹ0およびＴ0は一緒に窒素複素環内に連 結されており； Ｑ1およびＱ2は独立して、Ｃ2−Ｃ10アルキル、Ｃ2−Ｃ10アルケニル、Ｃ2− Ｃ10アルキニル、Ｃ4−Ｃ7炭素環式アルキルまたはアルケニル、複素環、２から １０の炭素原子および１から４の酸素または硫黄原子を持つエーテル、ポリアル キルグリコールまたはＣ7−Ｃ14アラルキルであり； ｊｊおよびｋｋは独立して０または１であり； Ｚ1およびＺ2は独立して、Ｈ、Ｃ1−Ｃ2アルキル、Ｃ2−Ｃ20アルケニル、Ｃ2 −Ｃ20アルキニル、Ｃ6−Ｃ14アリール、Ｃ7−Ｃ15アラルキル、ハロゲン、ＣＨ ＝Ｏ、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）、Ｎ ＨＣ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ（ＮＨ2）Ｃ（＝Ｏ）ＯＨ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4 、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、金属配位基、レポーター基、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； ＺはＬ1、Ｌ1−Ｇ1、Ｌ2、Ｌ2−Ｇ2、ＮＲ3Ｒ4、窒素含有複素環、プリン、ピ リミジン、ホスフェート基、ポリエーテル基、またはポリエチレングリコール基 であり； Ｌ1は１から約２０の炭素原子を持つアルキル、２から約２０の炭素原子を持 つアルケニル、または２から約２０の炭素原子を持つアルキニルであり； Ｌ2は６から約１４の炭素原子を持つアリールまたは７から約１５の炭素原子 を持つアラルキルであり； Ｇ1はハロゲン、ＯＲ1、ＳＲ2、ＮＲ3Ｒ4、Ｃ（＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＮＨＣ（ ＝ＮＨ）ＮＲ3Ｒ4、ＣＨ＝Ｏ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＲ5、ＣＨ（ＮＲ3Ｒ4）（Ｃ（＝Ｏ ）ＯＲ5）、Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ3Ｒ4、金属配位基、またはホスフェート基であり； Ｇ2はハロゲン、ＯＨ、ＳＨ、ＳＣＨ3、またはＮＲ3Ｒ4であり； Ｒ1はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはヒドロキシル保護基 であり； Ｒ2はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはチオール保護基であ り； Ｒ3およびＲ4は独立してＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、またはア ミン保護基であり； Ｒ5はＨ、１から約６の炭素原子を持つアルキル、または酸保護基であり； ＱはＬ1、Ｇ3、Ｌ1−Ｇ3、またはＧ3−Ｌ1−Ｇ3であり； Ｇ3はＮＲ3、Ｃ（＝Ｏ）、Ｃ（＝Ｓ）、Ｃ（Ｏ）−Ｏ、Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、Ｃ（ Ｓ）−Ｏ、Ｃ（Ｓ）−ＮＨまたはＳ（Ｏ）2、ＮＲ3Ｃ（＝Ｏ）、ＮＲ3Ｃ（＝Ｓ ）、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）−ＮＨ、ＮＲ3Ｃ（Ｓ）−Ｏ、ＮＲ3Ｃ（ Ｓ）−ＮＨまたはＮＲ3Ｓ（Ｏ）2であり； ｎは０または１であり； ｊは１から６であり；および ｍは１から５０である］ を有するフランク領域の間におかれた、ホスホジエステルまたはホスホロチオエ ートオリゴヌクレオチドを含む中心領域を有する、キメラオリゴマー化合物。
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