JPH0980051A - 固相化免疫試薬の安定化溶液 - Google Patents
固相化免疫試薬の安定化溶液Info
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- JPH0980051A JPH0980051A JP26209495A JP26209495A JPH0980051A JP H0980051 A JPH0980051 A JP H0980051A JP 26209495 A JP26209495 A JP 26209495A JP 26209495 A JP26209495 A JP 26209495A JP H0980051 A JPH0980051 A JP H0980051A
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- Medicinal Preparation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】固相化免疫試薬の乾燥条件下での長期安定性向
上に適した固相化免疫試薬の安定化溶液を提供する。 【解決手段】固相化免疫試薬の安定化溶液にカゼイン及
び／又はホエイ蛋白又はカゼイン分解物のいずれか、ま
たはこれらの２種以上を含有させる。
上に適した固相化免疫試薬の安定化溶液を提供する。 【解決手段】固相化免疫試薬の安定化溶液にカゼイン及
び／又はホエイ蛋白又はカゼイン分解物のいずれか、ま
たはこれらの２種以上を含有させる。
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】固相化免疫試薬を乾燥状態で
長期間免疫活性を低下させることなく安定に保存する為
の安定化溶液に関する。
長期間免疫活性を低下させることなく安定に保存する為
の安定化溶液に関する。
【０００２】
【従来の技術】固相化免疫試薬とは免疫化学的測定に用
いる抗原または抗体を不溶性の固相担体に物理的または
化学的に結合させ不溶化した試薬をいう。通常これら固
相化免疫試薬は浸漬状態にて保存し免疫活性を保持して
いるが、取扱いを容易にする為に乾燥状態にする必要が
ある。固相化免疫試薬の安定化としては特開昭５４−１
２８３９６，特開昭６０−３５２６３の糖類や特開昭６
２−３４５０９のピロリドンカルボン酸塩類、デキスト
リンおよびポリビニルアルコールなどがある。一方、特
開平２−１９７６６にカゼイン分解物を免疫反応液に用
いて非特異的吸着を除去した記載があるが、これは免疫
反応系中で用いられており固相化免疫試薬の安定化での
使用とは別のものである。
いる抗原または抗体を不溶性の固相担体に物理的または
化学的に結合させ不溶化した試薬をいう。通常これら固
相化免疫試薬は浸漬状態にて保存し免疫活性を保持して
いるが、取扱いを容易にする為に乾燥状態にする必要が
ある。固相化免疫試薬の安定化としては特開昭５４−１
２８３９６，特開昭６０−３５２６３の糖類や特開昭６
２−３４５０９のピロリドンカルボン酸塩類、デキスト
リンおよびポリビニルアルコールなどがある。一方、特
開平２−１９７６６にカゼイン分解物を免疫反応液に用
いて非特異的吸着を除去した記載があるが、これは免疫
反応系中で用いられており固相化免疫試薬の安定化での
使用とは別のものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら従来の安
定化溶液では、固相化免疫試薬を乾燥状態で１年以上の
長期間免疫活性を維持できないという問題点があった。
定化溶液では、固相化免疫試薬を乾燥状態で１年以上の
長期間免疫活性を維持できないという問題点があった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、これら問
題点を解決すべく鋭意検討した結果、固相化免疫試薬を
乾燥状態で１年間以上の長期間安定に保存できるカゼイ
ン及び／又はホエイ蛋白又はカゼイン分解物からなる溶
液を見いだし本発明に到達した。
題点を解決すべく鋭意検討した結果、固相化免疫試薬を
乾燥状態で１年間以上の長期間安定に保存できるカゼイ
ン及び／又はホエイ蛋白又はカゼイン分解物からなる溶
液を見いだし本発明に到達した。
【０００５】すなわち、本発明はカゼイン及び／又はホ
エイ蛋白又はカゼイン分解物を含有する固相化免疫試薬
の安定化溶液である。
エイ蛋白又はカゼイン分解物を含有する固相化免疫試薬
の安定化溶液である。
【０００６】本発明で用いられている安定化溶液中のカ
ゼインとしては、牛乳中のカゼインがあげられる。例え
ば、「第五版食品添加物公定書解説書（廣川書店発
行）」記載のカゼインを用いることができる。具体的に
はα−カゼイン、β−カゼイン、γ−カゼイン、κ−カ
ゼイン、λ−カゼインをあげることができる。カゼイン
の濃度は通常０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、好ましくは
０．２〜２．０ｗ／ｖ％である。
ゼインとしては、牛乳中のカゼインがあげられる。例え
ば、「第五版食品添加物公定書解説書（廣川書店発
行）」記載のカゼインを用いることができる。具体的に
はα−カゼイン、β−カゼイン、γ−カゼイン、κ−カ
ゼイン、λ−カゼインをあげることができる。カゼイン
の濃度は通常０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、好ましくは
０．２〜２．０ｗ／ｖ％である。
【０００７】ホエイ蛋白としては、牛乳中のホエイ蛋白
があげられる。ホエイ蛋白としては、「食品衛生法 乳
及び乳製品の成分規格に関する省令」に記載されている
濃縮ホエイやホエイパウダーをあげることができる。ホ
エイ蛋白の濃度は通常０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、好ま
しくは０．２〜１．５ｗ／ｖ％である。
があげられる。ホエイ蛋白としては、「食品衛生法 乳
及び乳製品の成分規格に関する省令」に記載されている
濃縮ホエイやホエイパウダーをあげることができる。ホ
エイ蛋白の濃度は通常０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、好ま
しくは０．２〜１．５ｗ／ｖ％である。
【０００８】カゼイン分解物としては、特開平２−３６
３５３公報記載の酵素分解カゼインがあげられる。また
酸分解カゼインとしては、関東化学（株）製カゼイン−
酸加水分解物があげられる。カゼイン分解物の濃度は通
常０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、好ましくは０．５〜２．
０ｗ／ｖ％である。
３５３公報記載の酵素分解カゼインがあげられる。また
酸分解カゼインとしては、関東化学（株）製カゼイン−
酸加水分解物があげられる。カゼイン分解物の濃度は通
常０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、好ましくは０．５〜２．
０ｗ／ｖ％である。
【０００９】カゼインとホエイ蛋白を共存させた溶液を
用いることにより固相免疫試薬の乾燥状態での安定性を
さらに向上させることができる。このときの濃度は、カ
ゼイン０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、ホエイ蛋白０．０５
〜２．０％が好ましく、特に好ましくは、カゼイン０．
２〜２．０ｗ／ｖ％、ホエイ蛋白０．２〜１．５ｗ／ｖ
％である。
用いることにより固相免疫試薬の乾燥状態での安定性を
さらに向上させることができる。このときの濃度は、カ
ゼイン０．０５〜３．０ｗ／ｖ％、ホエイ蛋白０．０５
〜２．０％が好ましく、特に好ましくは、カゼイン０．
２〜２．０ｗ／ｖ％、ホエイ蛋白０．２〜１．５ｗ／ｖ
％である。
【００１０】固相化免疫試薬に用いられる不溶性担体と
しては免疫化学測定に用いることのできる全ての不溶性
担体例えば特開平２−２０５７７４号公報記載の不溶性
担体があげられる。これらのうち好ましくはポリスチレ
ン，ポリプロピレン，ポリエチレン，ポリ塩化ビニルな
どの合成高分子化合物，ガラス，アルミナ，シリカゲ
ル，金属，紙などである。また不溶性担体の形態として
は、チューブ，プレート，マイクロタイタープレート，
ボール，微粒子などが用いられる。
しては免疫化学測定に用いることのできる全ての不溶性
担体例えば特開平２−２０５７７４号公報記載の不溶性
担体があげられる。これらのうち好ましくはポリスチレ
ン，ポリプロピレン，ポリエチレン，ポリ塩化ビニルな
どの合成高分子化合物，ガラス，アルミナ，シリカゲ
ル，金属，紙などである。また不溶性担体の形態として
は、チューブ，プレート，マイクロタイタープレート，
ボール，微粒子などが用いられる。
【００１１】不溶性担体上に抗原または抗体を結合させ
る方法は、物理的吸着または化学的吸着のいずれでもよ
く、例えば特開平２−２０５７７４号公報記載の方法と
同様でよい。即ち、ガラスとモノクローナル抗体を結合
させる方法（例えば、米国特許第４２８０９９２号明細
書及び同第３６５２７６１号明細書）、及びプラスチッ
クに抗体を物理吸着させる方法（例えば、イー・エング
バール、ジェー・ジョンソン；バイオキム．バイオフィ
ス．アクタ(E.Engvall,J.Jonson,P.Parlmann;Biochim.B
iophys.Acta),251(1971)427〜434）がある。
る方法は、物理的吸着または化学的吸着のいずれでもよ
く、例えば特開平２−２０５７７４号公報記載の方法と
同様でよい。即ち、ガラスとモノクローナル抗体を結合
させる方法（例えば、米国特許第４２８０９９２号明細
書及び同第３６５２７６１号明細書）、及びプラスチッ
クに抗体を物理吸着させる方法（例えば、イー・エング
バール、ジェー・ジョンソン；バイオキム．バイオフィ
ス．アクタ(E.Engvall,J.Jonson,P.Parlmann;Biochim.B
iophys.Acta),251(1971)427〜434）がある。
【００１２】抗原または抗体を結合した固相化免疫試薬
の安定化溶液中での浸漬処理時間は、２時間〜２週間程
度であるが好ましくは１２〜２４時間である。また固相
化試薬浸漬処理後の乾燥条件は自然乾燥，通気乾燥，真
空乾燥，凍結乾燥のいずれの方法でもよい。
の安定化溶液中での浸漬処理時間は、２時間〜２週間程
度であるが好ましくは１２〜２４時間である。また固相
化試薬浸漬処理後の乾燥条件は自然乾燥，通気乾燥，真
空乾燥，凍結乾燥のいずれの方法でもよい。
【００１３】
【実施例】以下、実施例により本発明をさらに説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。
が、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１４】実施例１ 抗インシュリン抗体結合ガラスビーズの調製 抗インシュリン抗体（モルモット）を上記記載の所定の
結合法に準じて平均粒径６．８ｍｍのスリガラスビーズ
に結合させ固相化免疫試薬を調製した。
結合法に準じて平均粒径６．８ｍｍのスリガラスビーズ
に結合させ固相化免疫試薬を調製した。
【００１５】安定化溶液の調製 ０．８５ｗ／ｖ％塩化ナトリウム，０．５ｗ／ｖ％牛血
清アルブミン含有０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．０のリ
ン酸緩衝液（以下（ａ）と略す。）を調製する。次に
（ａ）に２．０ｗ／ｖ％カゼインを添加した安定化溶液
（ｂ），１．０ｗ／ｖ％ホエイ蛋白を添加した安定化溶
液（ｃ），２．０ｗ／ｖ％カゼイン−酸加水分解物を添
加した安定化溶液（ｄ），２．０ｗ／ｖ％カゼインおよ
び１．０ｗ／ｖ％ホエイ蛋白を添加した安定化溶液
（ｅ）を調製した。さらに比較対象として、（ａ）に
５．０ｗ／ｖ％ショ糖を添加した安定化溶液（ｆ），
５．０ｗ／ｖ％乳糖を添加した安定化溶液（ｇ），２．
０ｗ／ｖ％ピロリドンカルボン酸ナトリウムを添加した
安定化溶液（ｈ）を調製した。
清アルブミン含有０．０２ｍｏｌ／Ｌ，ｐＨ７．０のリ
ン酸緩衝液（以下（ａ）と略す。）を調製する。次に
（ａ）に２．０ｗ／ｖ％カゼインを添加した安定化溶液
（ｂ），１．０ｗ／ｖ％ホエイ蛋白を添加した安定化溶
液（ｃ），２．０ｗ／ｖ％カゼイン−酸加水分解物を添
加した安定化溶液（ｄ），２．０ｗ／ｖ％カゼインおよ
び１．０ｗ／ｖ％ホエイ蛋白を添加した安定化溶液
（ｅ）を調製した。さらに比較対象として、（ａ）に
５．０ｗ／ｖ％ショ糖を添加した安定化溶液（ｆ），
５．０ｗ／ｖ％乳糖を添加した安定化溶液（ｇ），２．
０ｗ／ｖ％ピロリドンカルボン酸ナトリウムを添加した
安定化溶液（ｈ）を調製した。
【００１６】乾燥化抗インシュリン抗体結合ガラスビー
ズの調製 （ａ）〜（ｈ）の各安定化溶液を用いて抗インシュリン
抗体結合ガラスビーズを２〜８℃で２４時間浸漬処理
後、安定化溶液を除去し真空乾燥にて乾燥し乾燥ビーズ
を調製した。
ズの調製 （ａ）〜（ｈ）の各安定化溶液を用いて抗インシュリン
抗体結合ガラスビーズを２〜８℃で２４時間浸漬処理
後、安定化溶液を除去し真空乾燥にて乾燥し乾燥ビーズ
を調製した。
【００１７】免疫反応用緩衝液（Ｒ１）の調製 １％牛血清アルブミン、０．９％塩化ナトリウム含有
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液を調製した。
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液を調製した。
【００１８】酵素標識抗体液（Ｒ２）の調製 １％牛血清アルブミン、０．９％塩化ナトリウム含有
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液にペルオキシダ
ーゼ標識抗インシュリン抗体（モルモット）を０．５μ
ｇ／ｍｌとなるように添加し調製した。
０．０２Ｍ，ｐＨ７．２のリン酸緩衝液にペルオキシダ
ーゼ標識抗インシュリン抗体（モルモット）を０．５μ
ｇ／ｍｌとなるように添加し調製した。
【００１９】ＥＩＡ−インシュリン測定法 アッセイ用試験管に被検サンプル（標準インシュリン液
他）−５０μｌにＲ１−３００μｌ加え、均一溶液とし
た後、抗インシュリン抗体（モルモット）結合ガラスビ
ーズを加え、３７℃で６０分間インキュベートする。反
応終了後、未反応物をアスピレーターで除去後、生理食
塩水各３ｍｌで３回吸引洗浄する。次にＲ２−３００μ
ｌを加え３７℃で６０分間インキュベートする。反応終
了後、未反応物をアスピレーターで除去後、生理食塩水
各３ｍｌで３回吸引洗浄する。その後０．３％ｏ−フェ
ニレンジアミン、０．０４％過酸化水素含有の基質溶液
を加え、３７℃で３０分間インキュベートする。１Ｎ硫
酸３ｍｌで反応を停止させた後、各々について４９２ｎ
ｍの吸光度を測定する。
他）−５０μｌにＲ１−３００μｌ加え、均一溶液とし
た後、抗インシュリン抗体（モルモット）結合ガラスビ
ーズを加え、３７℃で６０分間インキュベートする。反
応終了後、未反応物をアスピレーターで除去後、生理食
塩水各３ｍｌで３回吸引洗浄する。次にＲ２−３００μ
ｌを加え３７℃で６０分間インキュベートする。反応終
了後、未反応物をアスピレーターで除去後、生理食塩水
各３ｍｌで３回吸引洗浄する。その後０．３％ｏ−フェ
ニレンジアミン、０．０４％過酸化水素含有の基質溶液
を加え、３７℃で３０分間インキュベートする。１Ｎ硫
酸３ｍｌで反応を停止させた後、各々について４９２ｎ
ｍの吸光度を測定する。
【００２０】比較例１ 乾燥ガラスビーズの経日安定性評価 調製した各乾燥ガラスビーズを４，４０℃で所定期間放
置後、各乾燥ガラスビーズの免疫活性を２５０μＵ／ｍ
ｌの標準インシュリンのアッセイ吸光度より評価し経日
安定性を比較評価した。アッセイ吸光度はＥＩＡ−イン
シュリン測定法に準じて測定した。評価結果は表１に示
した。
置後、各乾燥ガラスビーズの免疫活性を２５０μＵ／ｍ
ｌの標準インシュリンのアッセイ吸光度より評価し経日
安定性を比較評価した。アッセイ吸光度はＥＩＡ−イン
シュリン測定法に準じて測定した。評価結果は表１に示
した。
【００２１】
【表１】
【００２２】安定化溶液（ｂ），（ｃ），（ｄ），
（ｅ）で浸漬処理したものは長期安定性および熱安定性
試験で良好な安定性を確認することができた。
（ｅ）で浸漬処理したものは長期安定性および熱安定性
試験で良好な安定性を確認することができた。
【００２３】実施例２ 抗インシュリン抗体結合ポリスチレンビーズの調製 抗インシュリン抗体（モルモット）を上記記載の所定の
結合法に準じて平均粒径６．４ｍｍのポリスチレンビー
ズに結合させ固相化免疫試薬を調製した。
結合法に準じて平均粒径６．４ｍｍのポリスチレンビー
ズに結合させ固相化免疫試薬を調製した。
【００２４】乾燥化抗インシュリン抗体結合ポリスチレ
ンビーズの調製 （ａ）〜（ｈ）の各安定化溶液を用いて抗インシュリン
抗体結合ポリスチレンビーズを２〜８℃で２４時間浸漬
処理後、安定化溶液を除去し真空乾燥にて乾燥し乾燥ビ
ーズを調製した。
ンビーズの調製 （ａ）〜（ｈ）の各安定化溶液を用いて抗インシュリン
抗体結合ポリスチレンビーズを２〜８℃で２４時間浸漬
処理後、安定化溶液を除去し真空乾燥にて乾燥し乾燥ビ
ーズを調製した。
【００２５】比較例２ 乾燥ポリスチレンビーズの経日安定性評価 調製した各乾燥ポリスチレンビーズを４，４０℃で所定
期間放置後、各乾燥ポリスチレンビーズの免疫活性を２
５０μＵ／ｍｌの標準インシュリンのアッセイ吸光度よ
り評価し経日安定性を比較評価した。アッセイ吸光度は
ＥＩＡ−インシュリン測定法に準じて測定した。評価結
果は表２に示した。
期間放置後、各乾燥ポリスチレンビーズの免疫活性を２
５０μＵ／ｍｌの標準インシュリンのアッセイ吸光度よ
り評価し経日安定性を比較評価した。アッセイ吸光度は
ＥＩＡ−インシュリン測定法に準じて測定した。評価結
果は表２に示した。
【００２６】
【表２】
【００２７】安定化溶液（ｂ），（ｃ），（ｄ），
（ｅ）で浸漬処理したものは長期安定性および熱安定性
試験で良好な安定性を確認することができた。
（ｅ）で浸漬処理したものは長期安定性および熱安定性
試験で良好な安定性を確認することができた。
【００２８】
【発明の効果】本発明により、固相化免疫試薬の乾燥に
よる免疫活性の安定性を向上させることができ、乾燥化
状態での長期保存、そのままでの使用が可能となった。
従って免疫測定法における操作性向上に好適である。
よる免疫活性の安定性を向上させることができ、乾燥化
状態での長期保存、そのままでの使用が可能となった。
従って免疫測定法における操作性向上に好適である。
Claims (3)
- 【請求項１】 カゼイン、ホエイ蛋白、カゼイン分解
物のいずれかを含有することを特徴とする固相化免疫試
薬の安定化溶液。 - 【請求項２】 カゼイン、ホエイ蛋白、カゼイン分解
物のいずれかを３．０ｗ／ｖ％を越えない量含有する請
求項１記載の安定化溶液。 - 【請求項３】 カゼイン及びホエイ蛋白の両蛋白を合
わせて５．０ｗ／ｖ％を越えない量含有する請求項１記
載の安定化溶液。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26209495A JPH0980051A (ja) | 1995-09-14 | 1995-09-14 | 固相化免疫試薬の安定化溶液 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26209495A JPH0980051A (ja) | 1995-09-14 | 1995-09-14 | 固相化免疫試薬の安定化溶液 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0980051A true JPH0980051A (ja) | 1997-03-28 |
Family
ID=17370958
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26209495A Pending JPH0980051A (ja) | 1995-09-14 | 1995-09-14 | 固相化免疫試薬の安定化溶液 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0980051A (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008149668A1 (ja) * | 2007-06-07 | 2008-12-11 | Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd. | タンパク質含有組成物 |
| JP2009180527A (ja) * | 2008-01-29 | 2009-08-13 | Sanyo Chem Ind Ltd | 抗原含有水溶液 |
| WO2013141122A1 (ja) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | 田中貴金属工業株式会社 | イムノクロマトグラフィー検出方法 |
| JP2018021903A (ja) * | 2016-07-26 | 2018-02-08 | 三洋化成工業株式会社 | 免疫測定用試薬、免疫測定用キット及び免疫測定方法 |
-
1995
- 1995-09-14 JP JP26209495A patent/JPH0980051A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008149668A1 (ja) * | 2007-06-07 | 2008-12-11 | Kobayashi Pharmaceutical Co., Ltd. | タンパク質含有組成物 |
| JP2008303176A (ja) * | 2007-06-07 | 2008-12-18 | Kobayashi Pharmaceut Co Ltd | タンパク質含有組成物 |
| JP2009180527A (ja) * | 2008-01-29 | 2009-08-13 | Sanyo Chem Ind Ltd | 抗原含有水溶液 |
| WO2013141122A1 (ja) | 2012-03-22 | 2013-09-26 | 田中貴金属工業株式会社 | イムノクロマトグラフィー検出方法 |
| JP2013195403A (ja) * | 2012-03-22 | 2013-09-30 | Tanaka Kikinzoku Kogyo Kk | イムノクロマトグラフィー検出方法 |
| US9863945B2 (en) | 2012-03-22 | 2018-01-09 | Tanaka Kikinzoku Kogyo K.K. | Immunochromatography detection method |
| JP2018021903A (ja) * | 2016-07-26 | 2018-02-08 | 三洋化成工業株式会社 | 免疫測定用試薬、免疫測定用キット及び免疫測定方法 |
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