JPH099954A - 新規乳酸菌株 - Google Patents
新規乳酸菌株Info
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- JPH099954A JPH099954A JP7168565A JP16856595A JPH099954A JP H099954 A JPH099954 A JP H099954A JP 7168565 A JP7168565 A JP 7168565A JP 16856595 A JP16856595 A JP 16856595A JP H099954 A JPH099954 A JP H099954A
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- JP
- Japan
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- lactis
- lactic acid
- strain
- lactococcus lactis
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 細胞膜結合性アデノシントリホスファターゼ
(ATPase)活性が低下している乳酸菌株を提供する。 【構成】 ラクトバチルス・ラクチス・サブスピーシズ
・ラクチス(Lactococcuslactis subsp. lactis) の親株
から、細胞膜結合性ATPase活性が低下している乳酸菌株
を選択して得る。 【効果】 この乳酸菌株は、培地のpHが低くなると生育
が低下し、乳酸生成量が減少するので、乳酸の生成が品
質の維持にとって好ましくないような発酵乳製品を製造
する際に使用することができる。
(ATPase)活性が低下している乳酸菌株を提供する。 【構成】 ラクトバチルス・ラクチス・サブスピーシズ
・ラクチス(Lactococcuslactis subsp. lactis) の親株
から、細胞膜結合性ATPase活性が低下している乳酸菌株
を選択して得る。 【効果】 この乳酸菌株は、培地のpHが低くなると生育
が低下し、乳酸生成量が減少するので、乳酸の生成が品
質の維持にとって好ましくないような発酵乳製品を製造
する際に使用することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、細胞膜結合性アデノシ
ントリホスファターゼ(ATPase)活性が低下しているラク
トコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lac
tococcus lactis subsp. lactis) の変異株に関する。
ントリホスファターゼ(ATPase)活性が低下しているラク
トコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lac
tococcus lactis subsp. lactis) の変異株に関する。
【０００２】
【従来の技術】ATPaseは、マグネシウムイオン又はカル
シウムイオンの存在下、アデノシン三リン酸のγ位のリ
ン酸を加水分解してアデノシン二リン酸と無機リン酸に
分解する酵素であるが、この加水分解反応の際に生成す
るエネルギーが生体にとって重要であることが知られて
いる。そして、乳酸菌のラクトコッカス・ラクチス・サ
ブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subsp.
lactis) には、大腸菌等と同様に細胞膜結合型ATPaseが
存在することが知られている。しかし、この細胞膜結合
型ATPaseがラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ
・ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) の糖
代謝やエネルギー生産に及ぼす影響については解明され
ていない。さらに、この細胞膜結合型ATPase活性が低下
しているラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・
ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) の菌株
は知られていない。
シウムイオンの存在下、アデノシン三リン酸のγ位のリ
ン酸を加水分解してアデノシン二リン酸と無機リン酸に
分解する酵素であるが、この加水分解反応の際に生成す
るエネルギーが生体にとって重要であることが知られて
いる。そして、乳酸菌のラクトコッカス・ラクチス・サ
ブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subsp.
lactis) には、大腸菌等と同様に細胞膜結合型ATPaseが
存在することが知られている。しかし、この細胞膜結合
型ATPaseがラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ
・ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) の糖
代謝やエネルギー生産に及ぼす影響については解明され
ていない。さらに、この細胞膜結合型ATPase活性が低下
しているラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・
ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) の菌株
は知られていない。
【０００３】一方、大腸菌K-12株のピルビン酸生産菌よ
り形質導入によって細胞膜結合型ATPase欠失変異株を誘
導し、その発酵パターンを親株と比較したところ、細胞
膜結合型ATPase欠失変異株では菌体のエネルギーレベル
が低下するため解糖系が活性化し、菌体当たりの糖消費
及びピルビン酸生産能が顕著に増大することが知られて
いる。
り形質導入によって細胞膜結合型ATPase欠失変異株を誘
導し、その発酵パターンを親株と比較したところ、細胞
膜結合型ATPase欠失変異株では菌体のエネルギーレベル
が低下するため解糖系が活性化し、菌体当たりの糖消費
及びピルビン酸生産能が顕著に増大することが知られて
いる。
【０００４】また、細胞膜結合型ATPase活性が低下して
いるラクトバチルス属菌株を選択して、この菌株を使用
して乳酸酸度の上昇を抑制した発酵乳製品が提案されて
いる[特開平7-123977号公報] 。
いるラクトバチルス属菌株を選択して、この菌株を使用
して乳酸酸度の上昇を抑制した発酵乳製品が提案されて
いる[特開平7-123977号公報] 。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ラクト
コッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lacto
coccus lactis subsp. lactis) に関し、種々研究を進
めていたところ、細胞膜結合型ATPase活性が低下したラ
クトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(L
actococcus lactis subsp. lactis) を見出した。した
がって本発明は、細胞膜結合性ATPase活性が低下してい
るラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチ
ス(Lactococcus lactis subsp. lactis) 変異株を提供
することを課題とする。
コッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lacto
coccus lactis subsp. lactis) に関し、種々研究を進
めていたところ、細胞膜結合型ATPase活性が低下したラ
クトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(L
actococcus lactis subsp. lactis) を見出した。した
がって本発明は、細胞膜結合性ATPase活性が低下してい
るラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチ
ス(Lactococcus lactis subsp. lactis) 変異株を提供
することを課題とする。
【０００６】本発明の細胞膜結合性ATPase活性が低下し
ているラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラ
クチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) 変異株
は、酸性側で急速に乳酸生成及び生育が低下するので、
チーズ等の発酵乳製品を製造する際に利用が可能であ
る。
ているラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラ
クチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) 変異株
は、酸性側で急速に乳酸生成及び生育が低下するので、
チーズ等の発酵乳製品を製造する際に利用が可能であ
る。
【０００７】
【課題を解決するするための手段】本発明の細胞膜結合
性ATPase活性が低下しているラクトコッカス・ラクチス
・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis sub
sp. lactis) 変異株は、以下のようにして得ることがで
きる。
性ATPase活性が低下しているラクトコッカス・ラクチス
・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis sub
sp. lactis) 変異株は、以下のようにして得ることがで
きる。
【０００８】ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシ
ズ・ラクチス(Lactococcus lactissubsp. lactis) 親
株からネオマイシン自然耐性株を取得し、このネオマイ
シン自然耐性株の中、親株よりも生育が低下した生育低
下株を得る。そして、この生育低下株のATPase活性を測
定し、親株のATPase活性と比較して30％以下にATPase活
性が低下したATPase活性低下株を得る。
ズ・ラクチス(Lactococcus lactissubsp. lactis) 親
株からネオマイシン自然耐性株を取得し、このネオマイ
シン自然耐性株の中、親株よりも生育が低下した生育低
下株を得る。そして、この生育低下株のATPase活性を測
定し、親株のATPase活性と比較して30％以下にATPase活
性が低下したATPase活性低下株を得る。
【０００９】このようにして得られたラクトコッカス・
ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus la
ctis subsp. lactis) のATPase活性低下株は、発酵過程
においてpHが低下するとその生育が抑制され、乳酸の生
成量が低下するので、経時的に乳酸の生成を抑制する必
要がある乳製品などの製造に利用することが可能であ
る。
ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus la
ctis subsp. lactis) のATPase活性低下株は、発酵過程
においてpHが低下するとその生育が抑制され、乳酸の生
成量が低下するので、経時的に乳酸の生成を抑制する必
要がある乳製品などの製造に利用することが可能であ
る。
【００１０】以下に実施例を示し、本発明を詳しく説明
する。
する。
（１）ネオマイシン耐性株の取得 L.Mackayより分譲を受けたラクトコッカス・ラクチス・
サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subs
p. lactis)C-2株を親株としてネオマイシン自然耐性株
を取得した。すなわち、親株を表１に組成を示したM17L
液体培地５ml中に接種し、30℃で一晩培養した後、 300
μg/ml濃度のネオマイシンを含むM17L平板培地に培養物
0.5mlをプレーティングし、30℃で２日間培養した。そ
して、生育したネオマイシン耐性株1500株を取得した。
サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subs
p. lactis)C-2株を親株としてネオマイシン自然耐性株
を取得した。すなわち、親株を表１に組成を示したM17L
液体培地５ml中に接種し、30℃で一晩培養した後、 300
μg/ml濃度のネオマイシンを含むM17L平板培地に培養物
0.5mlをプレーティングし、30℃で２日間培養した。そ
して、生育したネオマイシン耐性株1500株を取得した。
【００１１】
【表１】 ─────────────────────────
── Polypepton 5g(培地１リットル当たり) Phytone peptone 5g Beef extract 5g Yeast extract 2.5g Ascorbic acid 0.5g β-Disodium GP 19.0g 1.0M MgSO4・7H2O 1.0ml Lactose Monohydrate 5.26g ─────────────────────────
──
── Polypepton 5g(培地１リットル当たり) Phytone peptone 5g Beef extract 5g Yeast extract 2.5g Ascorbic acid 0.5g β-Disodium GP 19.0g 1.0M MgSO4・7H2O 1.0ml Lactose Monohydrate 5.26g ─────────────────────────
──
【００１２】（２）生育低下株の取得 上記のネオマイシン耐性株をM17L液体培地中で振盪培養
し、親株よりも生育が低下した生育低下株20株を取得し
た。
し、親株よりも生育が低下した生育低下株20株を取得し
た。
【００１３】（３）ATPase活性の測定 上記の生育低下株のATPase活性を測定した。なお、ATPa
se活性の測定は次のような方法により行った。
se活性の測定は次のような方法により行った。
【００１４】まず、M17L液体培地中に菌体を４％接種
し、30℃で３〜４時間培養した後、４℃で遠心分離(8,0
00×ｇ、10分間) して集菌した。この菌体を 100mMトリ
ス−塩酸緩衝液(pH 8)で２回洗浄した後、菌体1gを同様
のトリス−塩酸緩衝液５mlに懸濁して超音波処理し、４
℃で遠心分離 (20,000×ｇ、10分間) して上清を回収し
た。そして、この上清を４℃で超遠心分離(100,000×
ｇ、１時間) して沈澱を回収し、同様のトリス−塩酸緩
衝液に懸濁して粗酵素液とした。一方、 2.5mM塩化マグ
ネシウムを含む 100mMトリス−塩酸緩衝液(pH 8)に基質
として５mMアデノシントリリン酸ナトリウムを溶解して
基質溶液とした。
し、30℃で３〜４時間培養した後、４℃で遠心分離(8,0
00×ｇ、10分間) して集菌した。この菌体を 100mMトリ
ス−塩酸緩衝液(pH 8)で２回洗浄した後、菌体1gを同様
のトリス−塩酸緩衝液５mlに懸濁して超音波処理し、４
℃で遠心分離 (20,000×ｇ、10分間) して上清を回収し
た。そして、この上清を４℃で超遠心分離(100,000×
ｇ、１時間) して沈澱を回収し、同様のトリス−塩酸緩
衝液に懸濁して粗酵素液とした。一方、 2.5mM塩化マグ
ネシウムを含む 100mMトリス−塩酸緩衝液(pH 8)に基質
として５mMアデノシントリリン酸ナトリウムを溶解して
基質溶液とした。
【００１５】上記の基質溶液 550μl と粗酵素液50μl
を混合し、37℃で10分間反応させた後、氷冷した0.1N塩
酸 300μl を添加して反応を停止した。そして、表２に
示した組成の発色液 2.1mlを添加して18℃で10分間発色
させた後、3,000rpmで10分間遠心分離して沈澱を除去
し、 660nmでＯＤを測定した。
を混合し、37℃で10分間反応させた後、氷冷した0.1N塩
酸 300μl を添加して反応を停止した。そして、表２に
示した組成の発色液 2.1mlを添加して18℃で10分間発色
させた後、3,000rpmで10分間遠心分離して沈澱を除去
し、 660nmでＯＤを測定した。
【００１６】
【表２】 ────────────────────────────────── 5N硫酸 10ml 2.5%モリブデン酸アンモニウム 10ml 3%硫酸水素ナトリウム−1%パラメチルアミノフェノール硫酸 10ml 水 40ml ──────────────────────────────────
【００１７】（４）低ATPase活性株の取得 図１に示した通り、親株のATPase活性の30％以下のATPa
se活性を示した９株を取得した。なお、ATPase活性の最
も低い株は親株のATPase活性の12％であった。このATPa
se活性の最も低い株をラクトコッカス・ラクチス・サブ
スピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subsp. la
ctis) SBT 10439 として、工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託した (受託番号:FERM P-14940)。
se活性を示した９株を取得した。なお、ATPase活性の最
も低い株は親株のATPase活性の12％であった。このATPa
se活性の最も低い株をラクトコッカス・ラクチス・サブ
スピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subsp. la
ctis) SBT 10439 として、工業技術院生命工学工業技術
研究所に寄託した (受託番号:FERM P-14940)。
【００１８】なお、このラクトコッカス・ラクチス・サ
ブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subsp.
lactis)SBT 10439株は、親株のラクトコッカス・ラクチ
ス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis s
ubsp. lactis)C-2株と同様、表３に示す性質を有してい
たので、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・
ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) と同定
し得る。
ブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis subsp.
lactis)SBT 10439株は、親株のラクトコッカス・ラクチ
ス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis s
ubsp. lactis)C-2株と同様、表３に示す性質を有してい
たので、ラクトコッカス・ラクチス・サブスピーシズ・
ラクチス(Lactococcus lactis subsp. lactis) と同定
し得る。
【００１９】
【表３】 ─────────────────── 10℃での生育 ＋ 39.5℃での生育 ＋ 45℃での生育 − 2%NaClでの生育 ＋ 4%NaClでの生育 ＋ 6.5%NaClでの生育 − アルギニンの加水分解 ＋ クエン酸塩からのCO2 − pH 9.2での生育 ＋ 生成した乳酸の型 Ｌ（＋） グルコースからのCO2 − 運動性 − ───────────────────
【００２０】
【試験例】表４に示した培地を充填した 500ml容ジャー
ファーメンターに、親株であるラクトコッカス・ラクチ
ス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis s
ubsp. lactis)C-2株とATPase活性低下株としてラクトコ
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactoco
ccus lactis subsp. lactis)SBT 10439株をそれぞれ接
種し、撹拌速度100rpm、培養温度30℃で各pHに制御し、
ジャー培養により発酵特性を比較した。
ファーメンターに、親株であるラクトコッカス・ラクチ
ス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis s
ubsp. lactis)C-2株とATPase活性低下株としてラクトコ
ッカス・ラクチス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactoco
ccus lactis subsp. lactis)SBT 10439株をそれぞれ接
種し、撹拌速度100rpm、培養温度30℃で各pHに制御し、
ジャー培養により発酵特性を比較した。
【００２１】
【表４】 ───────────────────── Polypepton 8 (g/リットル) Yeast extract 5 KH2PO4 2 NaCl 0.1 MgSO4 ・7H2O 0.5 Glucose 50 ─────────────────────
【００２２】培養開始12時間後の各pHにおけるATPase活
性低下株の生育、乳酸生成量及び菌体当たりの乳酸生成
量を、その時の親株の値を 100とした場合のパーセンテ
ージで図２に示した。pHが上昇すると乳酸生成量及び生
育共に低下し、菌体当たりの乳酸生成量は常に親株の80
％以上を維持していたが、pHが低下すると生育及び乳酸
生成量共に減少し、特に乳酸生成量の減少が著しく、pH
4.5では菌体当たりの乳酸生成量が親株の60％にまで低
下した。
性低下株の生育、乳酸生成量及び菌体当たりの乳酸生成
量を、その時の親株の値を 100とした場合のパーセンテ
ージで図２に示した。pHが上昇すると乳酸生成量及び生
育共に低下し、菌体当たりの乳酸生成量は常に親株の80
％以上を維持していたが、pHが低下すると生育及び乳酸
生成量共に減少し、特に乳酸生成量の減少が著しく、pH
4.5では菌体当たりの乳酸生成量が親株の60％にまで低
下した。
【００２３】
【発明の効果】本発明のラクトコッカス・ラクチス・サ
ブスピーシズ・ラクチス(Lactococcuslactis subsp. la
ctis) のATPase活性低下株は、発酵過程においてpHが低
下するとその生育が抑制されるので、経時的に乳酸の生
成を抑制する必要がある乳製品などを製造する際に有用
である。
ブスピーシズ・ラクチス(Lactococcuslactis subsp. la
ctis) のATPase活性低下株は、発酵過程においてpHが低
下するとその生育が抑制されるので、経時的に乳酸の生
成を抑制する必要がある乳製品などを製造する際に有用
である。
【図１】親株のATPase活性に対する低ATPase活性株のAT
Pase活性を示す。
Pase活性を示す。
【図２】ATPase活性低下株の生育、乳酸生成量及び菌体
当たりの乳酸生成量を示す。
当たりの乳酸生成量を示す。
Claims (2)
- 【請求項１】 細胞膜結合性アデノシントリホスファタ
ーゼ(ATPase)活性が低下しているラクトコッカス・ラク
チス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis
subsp. lactis) 変異株。 - 【請求項２】 細胞膜結合性アデノシントリホスファタ
ーゼ(ATPase)活性が低下しているラクトコッカス・ラク
チス・サブスピーシズ・ラクチス(Lactococcus lactis
subsp. lactis) SBT 10439 (FERM P-14940)。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7168565A JPH099954A (ja) | 1995-07-04 | 1995-07-04 | 新規乳酸菌株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7168565A JPH099954A (ja) | 1995-07-04 | 1995-07-04 | 新規乳酸菌株 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH099954A true JPH099954A (ja) | 1997-01-14 |
Family
ID=15870400
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7168565A Pending JPH099954A (ja) | 1995-07-04 | 1995-07-04 | 新規乳酸菌株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH099954A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996001999A1 (en) * | 1994-07-12 | 1996-01-25 | Millipore Corporation | Rapid prediction and real time determination of total organic carbon in water supplies |
| JP2001095561A (ja) * | 1999-09-30 | 2001-04-10 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 新規乳酸菌株 |
| WO2023038073A1 (ja) | 2021-09-09 | 2023-03-16 | 株式会社明治 | 乳酸菌、乳酸菌スターター、発酵乳、発酵乳の製造方法、及び乳酸菌のスクリーニング方法 |
-
1995
- 1995-07-04 JP JP7168565A patent/JPH099954A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996001999A1 (en) * | 1994-07-12 | 1996-01-25 | Millipore Corporation | Rapid prediction and real time determination of total organic carbon in water supplies |
| JP2001095561A (ja) * | 1999-09-30 | 2001-04-10 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 新規乳酸菌株 |
| WO2023038073A1 (ja) | 2021-09-09 | 2023-03-16 | 株式会社明治 | 乳酸菌、乳酸菌スターター、発酵乳、発酵乳の製造方法、及び乳酸菌のスクリーニング方法 |
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