JPH10243789A - 薬剤結合タンパク質 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 アルツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡ
Ｔ）、サイトカインの異常調節または過剰に伴う疾患ま
たは症状の診断または治療に用いることのできるポリペ
プチドおよびポリヌクレオチドが望まれている。 【解決手段】 上記課題を解決する手段として、本発明
は、配列番号２のｐ３８β２ポリペプチドをコードする
ヌクレオチド配列に対してその全長にわたって少なくと
も８５％の同一性を有するヌクレオチド配列、あるいは
該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有し
てなる単離ポリヌクレオチドを提供するものである。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、そのポリヌクレオチドによりコード
されるポリペプチドに、かかるポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの使用、ならびにその製造に関する。さら
に詳しくは、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプ
チドはＣＳＢＰ／ｐ３８ＭＡＰキナーゼ科（以下、ｐ３
８β２と称する）に関する。本発明はまた、かかるポリ
ヌクレオチドおよびポリペプチドの作用を阻害または活
性化することに関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】サイ
トカインは炎症および他の免疫機能の間の細胞応答を制
御するにおいて重要な役割を果たす。特に興味のあるサ
イトカインは、インターロイキン−１（ＩＬ−１αおよ
びβ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦαおよびβ）であ
り、それは炎症応答カスケードの初期工程に関与する細
胞内タンパク質である（Araiら、Ann.Rev.Biochem. 5
9：783−836（1990））。かくして、最近では、炎症性
刺激に応答するＩＬ−１およびＴＮＦの産生を妨げよう
とする研究が実質的な範囲でなされている。ある治療方
法は、転写および／または翻訳および／または分泌のレ
ベルでＩＬ−１およびＴＮＦの産生を抑制するものであ
る。ある種のピリジニルイミダゾールに関与する活性
は、「ＣＳＡＩＤ」またはCytokine Suppressing Anti-
Inflammatory Drugsと称される一連の化合物に通じる。
転写ではより小さな作用が観察され、他の工程での作用
も除外できないが、これらの化合物は翻訳レベルで優先
的にＩＬ−１およびＴＮＦの発現を阻止するようであ
る。

【０００３】ピリジニルイミダゾール、５−（４−ピリ
ジル）−６−（４−フルオロフェニル）−２，３−ジヒ
ドロイミダゾ（２，１−ｂ）チアゾール（ＳＫ＆Ｆ ８
６００２）は原型ＣＳＡＩＤと同定された。その活性に
ついての基本事項は確立され、特徴付けられている（Le
eら、Int'l J.Immunopharm. 10（７）：835−843（198
8）；Agents and Actions 27（3／4）：277−279（198
9）およびInt'l J.Immunother. 6（1）：1−12（199
0））。ＳＡＲの研究は、ピリジニルイミダゾールのサ
イトカイン抑制作用が、エイコサノイドおよびロイコト
リエン産生に対するその阻害作用とは独立した、独特な
活性を示すことを示唆する。実質的にＣＳＡＩＤが新規
な抗炎症治療剤である可能性があるため、分子レベルで
の作用機構を特徴付けること、ならびに高度な選択性お
よび効能を有する化合物を得ることは非常に重要なこと
である。詳細には、ＣＳＡＩＤ分子標的の同定および特
徴付けは、炎症に関与する生物学的工程の理解を深め、
さらに強力な抗炎症薬の設計およびスクリーニングを助
けるであろう。本発明は、とりわけ、さらなるＣＳＡＩ
Ｄ結合タンパク質（ＣＳＢＰ）の精製および特徴付けを
開示する。

【０００４】ｐ３８β２はセリン−トレオニン・タンパ
ク質キナーゼのＣＳＢＰ／ｐ３８ＭＡＰキナーゼ科（Cy
tokine Suppressive Anti-inflammatory Drug（CSAID）
結合タンパク質科）のメンバーである（Marshall,C.
J.、Curr.Opinion Genet.Develop. 4、82−89（199
4））。ＭＡＰキナーゼ科のメンバーは、活性部位付近
の活性化ループにて「ＴｘＹ」アミノ酸モチーフ（Ｔ＝
トレオニン、Ｙ＝チロシンおよびｘ＝いずれかのアミノ
酸）を有することで特徴付けられる。適当な刺激に応答
してＭＡＰキナーゼキナーゼによりチロシンおよびトレ
オニンの両方がリン酸化されるには、ＭＡＰキナーゼ活
性の活性化が必要とされる。「ｘ」アミノ酸の特性およ
び活性化ループの大きさにより区別される3種のＭＡＰ
キナーゼがある（Cano,Ｅ.およびMahadevan,L.C. （199
5） Trends Biochem.Sci. 20、117−122）。かくして、
ｅｒｋはTEYを有し、ＪＮＫ／ＳＡＰＫはＴＰＹを有
し、ＣＳＢＰ／ｐ３８はＴＧＹを有する。これらの違い
は、活性化ＭＡＰキナーゼキナーゼ、および各ＭＡＰキ
ナーゼを活性化する細胞刺激における違いに反映してい
る。各科内において、活性化刺激は非常に似ているよう
である。したがって、ｅｒｋは主にミトゲン性刺激（例
えば、ＥＧＦ、ＰＤＧＦ）に応答するのに対して、ＪＮ
Ｋ／ＳＡＰＫおよびＣＳＢＰ／ｐ３８は数種の細胞性ス
トレス（例えば、ＵＶ、浸透性、熱または化学ストレ
ス、低酸素症、酸化剤など）およびプロ炎症性刺激（例
えば、ＬＰＳ、ＩＬ−１、ＴＮＦなど）に応答する。

【０００５】最近になって、新規な形態のｐ３８が数種
同定された。P３８の2種のスプライス変種、ＣＳＢＰ１
およびＣＳＢＰ２に加えて、核タンパク質Ｍａｘを用い
る酵母２−ハイブリッド相互反応スクリーンを介して、
さらなるスプライス化変種が同定された（Zervos,Ａ.
Ｓ.、Faccio,L.、Gatto,J.P.、Kyriakis,J.M.およびBre
nt,R. （1995） Proc.Natl.Acad.Sci. USA 92、10531−
10534）。最近になってまた、Ｐ３８科の特徴である
「ＴＧＹ」モチーフも保持している、有意なアミノ酸同
一性を有する２つの相同体が同定された：ｐ３８β（Ji
ang,Ｙ.、Chen,C.、Li,Z.、Guo,W.、Gegner,J.A.、Lin,
S.およびHan,J. （1996） J.Biol.Chem. 271、17920−1
7926）およびＥＲＫ６／ＳＡＰＫ３（Lechner,Ｃ.、Zah
alka,M.A.、Giot,J.-F.、Moller,N.P.H.およびUllrich,
A. （1996） Proc.Natl.Acad.Sci. USA 93、4355-435
9；Mertens,S.、Craxton,M.およびGoedert,M. （1996）
FEBS Lett.（In Press））。このことは、これらＣＳ
ＢＰ／ｐ３８ＭＡＰキナーゼが治療標的として確立かつ
証明された歴史を有することを意味する。限定するもの
ではないが、アルツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡ
Ｔ）、多発性硬化症、脳性マラリア、発作、頭部外傷お
よび脊髄損傷などの中枢神経系障害；再狭窄およびアテ
ローム性動脈硬化症などの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫
症候群（Adult Respiratory Disease Syndrome（ＡＲＤ
Ｓ）、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患
（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性疾患；お
よび骨粗鬆症、外科的または外傷性事象による敗血症、
慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免疫症状、
例えば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反応および
移植片対宿主疾患などのサイトカインの異常調節または
過剰に伴う他のかかる疾患または症状を含め、機能不全
または疾患の予防、改善または治癒するにおいて役割を
果たしうるＣＳＢＰ／ｐ３８ＭＡＰキナーゼ科のさらな
るメンバーを同定かつ特徴付ける必要があるのは明らか
である。

【０００６】

【課題を解決するための手段】一の態様において、本発
明は、ｐ３８β２ポリペプチドならびにその製造のため
の組み換え材料および方法に関する。本発明のもう一つ
の態様は、かかるｐ３８β２ポリペプチドおよびポリヌ
クレオチドの使用方法に関する。かかる使用は、とりわ
け、アルツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡＴ）、多
発性硬化症、脳性マラリア、発作、頭部外傷および脊髄
損傷などの中枢神経系障害；再狭窄およびアテローム性
動脈硬化症などの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫症候群
（ＡＲＤＳ）、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症
性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性
疾患；および骨粗鬆症、外科的または外傷性事象による
敗血症、慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免
疫症状、例えば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反
応および移植片対宿主疾患などのサイトカインの異常調
節または過剰に伴う他のかかる疾患または症状の治療を
包含する。さらに別の態様において、本発明は、本発明
により得られる物質を用いてアゴニストおよびアンタゴ
ニストを同定する方法、ならびに同定された化合物を用
いるｐ３８β２のバランス不良に関連する症状の治療方
法に関する。本発明のさらにもう一つ別の態様は、不適
当なｐ３８β２活性またはレベルに関連した疾患の診断
アッセイに関する。

【０００７】

【発明の実施の形態】

定義 以下の定義は本明細書で頻繁に使用される特定の用語の
理解を容易にするためのものである。「ｐ３８β２」
は、一般に、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有す
るポリペプチドまたはその対立遺伝子変種をいう。「ｐ
３８β２活性またはｐ３８β２ポリペプチド活性」また
は「ｐ３８β２またはｐ３８β２ポリペプチドの生物学
的活性」とは、上記ｐ３８β２の代謝的または生理学的
機能をいい、類似の活性または改善された活性または望
ましくない副作用を減じられたこれらの活性を包含す
る。上記ｐ３８β２の抗原的および免疫原的活性も包含
する。

【０００８】「ｐ３８β２遺伝子」とは、配列番号１に
示すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドまたは
その対立遺伝子変種および／またはそれらの相補物をい
う。本明細書で用いる「抗体」とは、ポリクローナルお
よびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、およびヒト
化抗体、ならびにＦａｂフラグメントを包含し、Ｆａｂ
または他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生成物を
包含する。「単離」とは、「人間の手により」天然の状
態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在す
る場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除く、
またはその両方を行ったことを意味する。例えばポリヌ
クレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で生存動
物に存在する場合は、「単離」されていないが、同一の
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共存す
る物質から分離されている場合は、本明細書に用いる用
語である、「単離」がなされている。

【０００９】「ポリヌクレオチド」とは、修飾されてい
ないＲＮＡもしくはDNA、または修飾されたＲＮＡもし
くはDNAであってよい、任意のポリリボヌクレオチドま
たはポリデオキシリボヌクレオチドを意味する。「ポリ
ヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖DNA、一本鎖お
よび二本鎖領域の混合物または一本鎖、二本鎖および三
本鎖領域の混合物であるDNA、一本鎖および二本鎖ＲＮ
Ａ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲ
ＮＡ、一本鎖もしくはより通常的には二本鎖もしくは三
本鎖、または一本鎖および二本鎖領域の混合物でよいDN
AおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を意味するが、
これに限定するものではない。さらに、本明細書で用い
る「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡもしくはDNAまたは
ＲＮＡとDNAの両方を含む三本鎖領域を意味する。本明
細書で用いる「ポリヌクレオチド」なる用語は、一つま
たはそれ以上の修飾した塩基を含有するDNAまたはＲＮ
Ａ、ならびに安定性またはその他の理由で修飾した骨格
を有するDNAまたはＲＮＡを包含する。「修飾された」
塩基は、例えば、トリチウム化された塩基およびイノシ
ンのごとき通常でない塩基を包含する。種々の修飾がDN
AおよびＲＮＡに対して行われている。よって、「ポリ
ヌクレオチド」は、典型的には天然において見いだされ
るような化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態
のポリヌクレオチド、ならびにウイルスおよび細胞に特
徴的なDNAおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。ま
た、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオ
チドと称する短いポリヌクレオチドを包含する。

【００１０】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾したペプチド結合により互いに結合している２個ま
たはそれ以上のアミノ酸を含む任意のペプチドまたはタ
ンパク質を意味する。「ポリペプチド」は、通常、例え
ばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称す
る短鎖、および一般的にタンパク質と称する長鎖の両方
を意味する。ポリペプチドは２０種の遺伝子によりコー
ドされたアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有できる。
「ポリペプチド」には、プロセッシングおよびその他の
翻訳後修飾のような天然の工程により修飾されたものが
含まれるが、当業者に周知の化学修飾技術によっても修
飾される。このような修飾は基礎的な参考書およびさら
に詳細な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載さ
れている。同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの
部位で、同一または異なる程度で存在し得ることは理解
されよう。また、該ポリペプチドは多くの型の修飾をも
含み得る。ポリペプチドはウビキチネーションの結果で
あってもよく、環状であってもよく、分岐があってもな
くてもよい。環状、分岐および分岐環状ポリペプチドは
翻訳後の天然ポロセスにより生じたものであってもよ
く、合成法により製造されたものであってもよい。修飾
は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカ
ルボキシル末端等のポリペプチドの任意の部位で起こり
うる。修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボ
シル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共
有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有
結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジル
イノシトールの共有結合、交差架橋、環化、ジスルフィ
ド結合形成、脱メチル化、交差架橋共有結合形成、シス
テイン形成、ピログルタメート形成、ホルミル化、ガン
マ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形
成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸
化、タンパク質加水分解プロセッシング、リン酸化、プ
レニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質結合、硫酸
化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、水酸
化およびＡＤＰリボシル化、セレノイル化、硫酸化、ア
ルギニル化のようなトランスファーＲＮＡ媒介のタンパ
ク質へのアミノ酸の添加、ならびにユビキチネーション
などがある。例えば、Proteins-Structure and Molecul
ar Properties、第２版、T.E.Creighton、W.H.Freeman
and Company、ニューヨーク（1993）およびPosttransla
tional Covalent Modification of Proteins、B.C.John
son編、アカデミックプレス、ニューヨーク（1983）のW
old,F.,PosttranslationalProtein Modifications ：Pe
rspective and Prospects、1〜12頁；Seifterら、Meth.
Enzymol.182:626-646（1990）およびRattanら、Protein
Synthesis：Posttranslational Modifications and Ag
ing，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48-62（1992）参照。

【００１１】本明細書で用いる「変種」なる用語は、対
照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なる
ポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的
な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変
種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列
が異なる。変種のヌクレオチド配列の差異は、対照ポリ
ヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ
酸配列を変化させるものであってもよく、変化させない
ものであってもよい。ヌクレオチドの変化は結果的に、
以下に論じるように、対照配列によりコードされるポリ
ペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合およ
び末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別
の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的
に差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、全体
的に非常に類似しており、多くの領域で同一であるよう
に限定される。変種および対照ポリペプチドは、１また
はそれ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起
こることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換また
は挿入したアミノ酸残基は、遺伝的コードによりコード
されたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチド
またはポリペプチドの変種は例えば対立遺伝子変種のよ
うな天然発生のものでよいか、または天然に発生するこ
とが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチドおよ
びポリペプチドの非天然発生変種は、突然変異技術、直
接的合成、および当業者に既知のその他の組換え技術に
より製造できる。

【００１２】「同一性」とは、当該分野に周知であるよ
うに、二つもしくはそれ以上のポリペプチド配列また二
つもしくはそれ以上のポリヌクレオチド配列間の関係で
あり、配列を比較して決定する。当該分野において、
「同一性」とは、場合によってはこのような配列の鎖の
適合性により決定できる、ポリペプチドまたはポリヌク
レオチド配列の配列関連性の程度をも意味する。「同一
性」および「類似性」は共に既知の方法により容易に算
出できる（Computational Molecular Biology，Lesk,A.
M.編、オックスフォード・ユニバーシティー・プレス、
ニューヨーク、1988年；Biocomputing：Informatics an
d Genome Projects，Smith,D.W.編、アカデミック・プ
レス、ニューヨーク、1993年；Computer Analysis of S
equence Data，パートＩ，Griffin,A.M.およびGriffin,
H.G.編、ヒューマン・プレス、ニュージャージー、1994
年；Sequence Analysis in Molecular Biology，von He
inje,G.、アカデミック・プレス、1987年；およびSeque
nce Analysis Primer，Gribskov,M.およびDevereux,J.
編、Ｍストックトン・プレス、ニューヨーク、1991
年）。二つの配列の同一性および類似性を測定する方法
は多くあるが、両用語共当業者に周知である（Sequence
Analysis in Molecular Biology，von Heinje,G.、ア
カデミック・プレス、1987年；Sequence Analysis Prim
er，Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン
・プレス、ニューヨーク、1991年；ならびにCarillo,H.
およびLipman,D.，SIAM J.Applied Math.，48:1073（19
88））。配列間の同一性または類似性を測定するために
通常用いられる方法はCarillo,H.およびLipman,D.，SIA
M J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示されてい
るが、これらに限定するものではない。同一性を決定す
るための好ましい方法は、試験する配列間で最も良く適
合するように設計される。同一性および類似性を決定す
る方法は、コンピュータープログラムに集成されてい
る。二つの配列間の同一性および類似性を測定する好ま
しいコンピュータープログラム法には、ＧＣＧプログラ
ムパッケージ（Devereux,J.ら、Nucleic Acids Researc
h 12(1):387（1984）、BLASTP、BLASTN、およびFASTA
（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol.215:403-410（199
0）））等があるが、これらに限定するものではない。

【００１３】本発明のポリペプチド 一の態様において、本発明は、ｐ３８β２ポリペプチド
に関する。そのｐ３８β２ポリぺプチドは、配列番号２
のポリペプチド、ならびに配列番号２のアミノ酸配列か
らなるポリペプチド、および配列番号２のアミノ酸配列
とその全長にわたって少なくとも８０％の同一性、さら
に好ましくは配列番号２に対して少なくとも９０％の同
一性、その上さらに好ましくは少なくとも９５％の同一
性を有するアミノ酸配列からなるポリペプチドを包含す
る。配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドと
その全長にわたって少なくとも８０％の同一性、さらに
好ましくは配列番号２に対して少なくとも９０％の同一
性、その上さらに好ましくは少なくとも９５％の同一性
を有するアミノ酸配列を有するポリペプチドもまた、ｐ
３８β２ポリペプチドに含まれる。好ましくは、ｐ３２
β２ポリペプチドはｐ３２β２の少なくとも１つの生物
学的活性を示す。

【００１４】ｐ３８β２ポリペプチドは「成熟」タンパ
ク質の形態であってもよく、あるいは融合タンパク質の
ごとき大型のタンパク質の一部であってもよい。分泌ま
たはリーダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基の
ごとき精製を促進する配列、または組み換え法を行って
いる間の安定性のためのさらなる配列を含むさらなるア
ミノ酸配列を含んでいることがしばしば有利である。

【００１５】ｐ３８β２ポリペプチドの生物学的に活性
なフラグメントも本発明に含まれる。フラグメントは、
前述のｐ３８β２ポリペプチドのアミノ酸配列のすべて
ではなく一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有
するポリペプチドである。ｐ３８β２ポリペプチドで
は、フラグメントは「自立している」であるか、または
一部分もしくは領域を形成するより大きなポリペプチド
内に含まれていてもよく、最も好ましくは単一の連続し
た領域として、単一のより大きなポリペプチドに含まれ
る。本発明のポリペプチドフラグメントの典型例は、例
えば、ｐ３８β２ポリペプチドのアミノ酸番号約１〜２
０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１０
０および１０１から末端までからなるフラグメントを包
含する。この意味において、「約」とは、片方の端また
は両端において、示された数よりも数個、５個、４個、
３個、２個または１個多いかまたは少ない範囲を含む。

【００１６】好ましいフラグメントは、例えば、アミノ
末端を含む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末端を
含む一連の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端でも
う一方がカルボキシ末端を含む２種の一連の残基が欠失
していること以外はｐ３８β２ポリペプチドのアミノ酸
配列を有する末端切断ポリペプチドを包含する。また、
構造的または機能的属性により特徴づけられたフラグメ
ント、例えばアルファーヘリックスおよびアルファーヘ
リックス形成領域、ベータシートおよびベータシート形
成領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコ
イル形成領域、親水領域、疎水領域、アルファー両親媒
性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領
域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含むフラ
グメントなども好ましい。生物学的に活性なフラグメン
トは、類似活性または改善活性を有する、あるいは望ま
しくない活性を減じたものを含め、ｐ３８β２活性を媒
介する、フラグメントを包含する。動物、とりわけヒト
において抗原的または免疫原的なフラグメントもまた含
まれる。

【００１７】好ましくは、これらのポリペプチドフラグ
メントはすべて、抗原的活性を含め、ｐ３８β２の生物
学的活性を保持する。定義した配列の変種およびフラグ
メントもこの群に含まれる。好ましい変種は、保存的ア
ミノ酸置換により変化したものであり、すなわち、同様
の特徴を有するアミノ酸によち置換されているものであ
る。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕお
よびＩｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈｒ間；ＡｓｐおよびＧ
ｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならびに塩基性残基Ｌ
ｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基Ｐｈｅおよび
Ｔｙｒ間におけるものである。数個、５ないし１０個、
１ないし５個、または１ないし２個のアミノ酸がいずれ
かの組み合わせで置換、欠失または付加されている変種
が特に好ましい。いずれか適当な方法にて本発明ｐ３８
β２ポリペプチドを製造することができる。かかるポリ
ペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法
によるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、また
はこれらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含
する。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野におい
てよく知られている。

【００１８】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つ別の態様は、ｐ３８β２ポリヌクレオ
チドに関する。ｐ３８β２ポリヌクレオチドは、ｐ３８
β２ポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドお
よびフラグメント、ならびにそのポリヌクレオチドに密
接に関連するポリヌクレオチドを包含する。さらに詳し
くは、本発明のｐ３８β２ポリヌクレオチドは、配列番
号２のｐ３８β２ポリペプチドをコードする配列番号１
に示されるヌクレオチド配列を有してなるポリヌクレオ
チド、および配列番号１の特定の配列を有するポリヌク
レオチドを包含する。ｐ３８β２ポリヌクレオチドはさ
らに、配列番号２のｐ３８β２ポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列とその全長にわたって少なくとも８
０％の同一性を有するヌクレオチド配列からなるポリヌ
クレオチド、および配列番号１を有するポリヌクレオチ
ドとその全長にわたって少なくとも８０％同一であるポ
リヌクレオチドを包含する。この点にて、少なくとも９
０％同一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、少な
くとも９５％同一であるものがとりわけ好ましい。さら
には、少なくとも９７％同一であるものが極めて好まし
く、少なくとも９８−９９％同一であるものがさらに好
ましく、少なくとも９９％同一であるものが最も好まし
い。ｐ３８β２ポリヌクレオチドには、増幅用に、また
はプローブもしくはマーカーとして用いるために利用す
ることのできる条件下で、ハイブリダイズするのに、配
列番号１に含まれるヌクレオチド配列に対して十分な同
一性を有するヌクレオチド配列が含まれる。本発明はま
た、かかるｐ３８β２ポリヌクレオチドに相同的なポリ
ヌクレオチドを提供する。

【００１９】ヒトｐ３８β２をコードするｃDNAの配列
決定の結果から明らかなように、本発明のｐ３８β２
は、ＣＳＢＰ／ｐ３８ＭＡＰキナーゼの他のタンパク質
に構造的に関連付けられる。ｃDNA配列は、３６４個の
アミノ酸のポリペプチドをコードする読み枠を含んでい
る。図１（配列番号２）の配列のアミノ酸は、ｐ３８β
と３６４個のアミノ酸残基にて約８７.４％の同一性を
有する（Ｙ. Ziangら、J.Biol.Chem. 271：17920−1792
6（1996））。さらには、ｐ３８β２はＣＳＢＰ／ｐ３
８と３５１個のアミノ酸残基にわたって７５.５％同一
である（Ｊ.Ｃ.Leeら、Nature 372：739−746（199
4））。図1（配列番号１）のヌクレオチド配列はｐ３８
βと１０７３個のヌクレオチド残基にて約８４.１％の
同一性（FASTAの使用）を有する（Ｙ. Ziangら、J.Bio
l.Chem. 271：17920−17926（1996））。さらには、ｐ
３８β２はＣＳＢＰ／ｐ３８と１０３２個のヌクレオチ
ド残基にわたって６９.６％同一である（Ｊ.Ｃ.Leeら、
Nature 372：739−746（1994））。

【００２０】標準的クローニングおよびスクリーニング
を用い、ヒト脳、心臓および骨格筋の細胞中のｍRNAか
ら由来のｃDNAライブラリーから、発現配列タグ（ＥＳ
Ｔ）分析（Adams,M.D.ら、Science(1991)252:1651-165
6;Adams,M.D.ら、Nature(1992)355:632-634;Adams,M.D.
ら、Nature(1995)377 Supp:3-174）を用いて、ｐ３８β
２をコードしている本発明の１のポリヌクレオチドを得
てもよい。ゲノムDNAライブラリーのごとき天然起源か
ら本発明のポリヌクレオチドを得ることもでき、あるい
はよく知られ市販されている方法を用いて合成すること
もできる。

【００２１】配列番号２のｐ３８β２ポリペプチドをコ
ードするヌクレオチド配列は、その全長にわたって図1
（配列番号１）に示されるコード配列と同一とすること
ができ、あるいは配列番号2のポリペプチドをコードす
るこのヌクレオチド配列の縮重形であり；または配列番
号2のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列と略
同一とすることができる。好ましくは、本発明のポリヌ
クレオチドは、ｐ３８β２ポリペプチドをコードするヌ
クレオチド配列と略同一の、好ましくは８０％同一であ
るか、またはｐ３８β２ポリペプチドをコードする図1
（配列番号１）に含まれる配列と少なくとも８０％同一
であるか、または配列番号2のポリペプチドをコードす
るヌクレオチド配列と少なくとも８０％同一であるヌク
レオチド配列を有する。

【００２２】本発明のポリヌクレオチドをｐ３８β２ポ
リペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレオ
チドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグメ
ントのコーディング配列を含むものであってもよく；あ
るいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟ポ
リペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を含
むものであってもよい。他のコーディング配列として
は、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、もしくは
プロ、もしくはプレプロタンパク質配列をコードするコ
ーディング配列、または他の融合ペプチド部分が挙げら
れる。例えば、融合ポリペプチドの精製を促進するマー
カー配列をコードすることもできる。本発明のこの態様
の特に好ましい具体例において、マーカー配列は、ｐＱ
Ｅベクター（Qiagen,Inc.）に提供されるようなヘキサ
−ヒスチジンペプチド（Gentzら、Proc.Natl.Acad.Sc
i.,USA，86:821-824（1989）に記載される）またはＨＡ
タグである。ポリヌクレオチドはまた、転写された非翻
訳配列、スプライスおよびポリアデニル化シグナル、リ
ボソーム結合部位およびmRNAを安定化する配列などの非
コーディング５’および３’配列を含有していてもよ
い。

【００２３】さらなる好ましい具体例は、図1（配列番
号２）のｐ３８β２ポリペプチドのアミノ酸配列を有
し、数個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３
個、１ないし２個または１個のアミノ酸残基がいずれか
の組み合わせで置換、欠失または付加されているｐ３８
?２変種をコードするポリヌクレオチドである。本発明
は、さらには、本明細書において前記した配列にハイブ
リダイゼーションするポリヌクレオチドにも関する。こ
の点において、本発明は、特に、本明細書においてすで
に述べたポリヌクレオチドにストリンジェントな条件下
でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関す
る。本明細書で用いる用語の「ストリンジェントな条
件」とは、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少な
くとも９７％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼ
ーションが起こることを意味する。

【００２４】本発明ポリヌクレオチドは、配列番号１に
含まれるヌクレオチド配列に対して同一であるか、また
は十分に同一であり、ｃDNAおよびゲノムDNA用のハイブ
リダイゼーションプローブとして用いてｐ３８β２ポリ
ペプチドをコードしている全長のｃDNAおよびゲノムク
ローンを単離し、ｐ３８β２遺伝子に対して高配列類似
性を有する他の遺伝子のｃDNAおよびゲノムクローンを
単離することができる。かかるハイブリダイゼーション
法は当業者に知られている。典型的には、これらのヌク
レオチド配列は、対照配列に対して７０％、好ましくは
８０％、より好ましくは９０％同一である。一般的に
は、プローブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含む
であろう。好ましくは、かかるプローブは少なくとも３
０ヌクレオチドを有し、少なくとも５０ヌクレオチドを
有していてもよい。特に好ましいプローブは３０ないし
５０ヌクレオチドの範囲である。

【００２５】一の具体例において、ｐ３８β２をコード
するポリヌクレオチドは、ストリンジェントなハイブリ
ダイゼーション条件下、配列番号１のヌクレオチド配列
またはそのフラグメントを有する標識化プローブで適当
なライブラリーをスクリーニングし、該ポリヌクレオチ
ド配列を有する完全長のｃDNAおよびゲノムクローンを
単離する工程により得られる。ストリンジェントな条件
とは、前記と同意義であるか、または５０％ホルムアミ
ド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ ＮａＣｌ、１５ｍＭ クエ
ン酸ナトリウム）、５０ｍＭ リン酸ナトリウム（ｐＨ
７.６）、５ｘDenhardt溶液、１０％硫酸デキストラン
および２０マイクログラム／ｍｌ、変性、切断サケ精子
DNAを有する溶液中、４２℃で一夜インキュベーション
し、つづいてそのフィルターを０.１ｘＳＳＣ中、６５
℃で洗浄する条件をいう。研究試薬ならびに動物および
ヒトの疾病の治療および診断を見いだすための材料とし
て本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを用いて
もよい。

【００２６】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌ
クレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子
操作する宿主細胞および組換え技法による本発明のポリ
ペプチドの製造にも関する。無細胞翻訳系を用い、本発
明のDNA構築物由来のＲＮＡを用いてかかるタンパク質
を製造できる。組換え体を製造するために、宿主細胞を
遺伝子操作して、本発明のポリヌクレオチドについての
発現系もしくはそれらの一部を組み込むことができる。
ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、Davi
sら、Basic Methods in Molecular Biology（1986）；S
ambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory Manua
l、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラボラ
トリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニ
ューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実験マニ
ュアルに記載される方法により行うことができ、例えば
リン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デ
キストラン媒介トランスフェクション、トランスベクシ
ョン、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介ト
ランスフェクション、エレクトロポレーション、トラン
スダクション、スクレープ負荷、バリスティック導入ま
たは感染等がある。

【００２７】適当な宿主の代表的なものとして、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（streptococci）、ブドウ球菌属
（staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セスおよび枯草菌（Bacillus subtiis）細胞；真菌細
胞、例えば酵母細胞およびアスペルギルス属（Aspergil
lus）細胞；昆虫細胞、例えばドロソフィラＳ２（Droso
phila S2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf
9）細胞；動物細胞、例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬ
ａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ
（Bows）黒色腫細胞；ならびに植物細胞が挙げられる。

【００２８】多種の発現系を用いることができる。この
ような系として、染色体、エピソームおよびウイルス由
来のベクター、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオ
ファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由
来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、
例えばバキュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ
４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイ
ルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウ
イルス由来のベクター、ならびにそれらを組み合わせた
物に由来するベクター、例えばプラスミドおよびバクテ
リオファージ遺伝的エレメント由来のベクター、例えば
コスミドおよびファージミドが挙げられる。発現系は発
現を制御および引き起こす調節領域を含有していてもよ
い。一般に、ポリヌクレオチドを保持、伸長または発現
させ、宿主にてポリペプチドを産生するのに適した系ま
たはベクターを使用できる。種々の周知かつ慣用的な技
法、例えば、Sambrookら、Molecular Cloning，A Labor
atory Manual（前掲）に記載されている技法により、適
当なヌクレオチド配列を発現系に挿入できる。

【００２９】翻訳タンパク質を、小胞体内腔、周辺腔ま
たは細胞外環境へ分泌させるために、適当な分泌シグナ
ルを所望のポリペプチドに組み込むことができる。これ
らのシグナルはポリペプチドに本来的なものであっても
く、あるいは異種性のシグナルでもよい。ｐ３８β２ポ
リペプチドをスクリーニングアッセイにて用いるために
発現させる場合、一般に、そのポリペプチドを細胞表面
で生成させることが好ましい。この場合、スクリーニン
グアッセイに使用する前に細胞を集めてもよい。ｐ３８
β２ポリペプチドが培地中に分泌されるならば、培地を
回収してポリペプチドを回収し精製することができる。
細胞内に生成されるならば、まず細胞を溶解し、次い
で、ポリペプチドを回収しなければならない。ｐ３８β
２ポリペプチドは、硫酸アンモニウムまたはエタノール
沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグ
ラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水
相互作用クロマトグラフィー、アフィニティークロマト
グラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィ
ーおよびレクチンクロマトグラフィーを含め、周知の方
法により、組換え細胞培養物から回収および精製でき
る。高性能液体クロマトグラフィーを精製に用いるのが
最も好ましい。ポリペプチドが単離および／または精製
中に変性する場合、タンパク質を再生するための周知方
法を用い、再び活性な立体配座とすることができる。

【００３０】診断アッセイ 本発明はまた診断薬として用いるためのｐ３８β２ポリ
ヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関与するｐ
３８β２遺伝子の変異形の検出は、ｐ３８β２の発現不
足、過剰発現または発現の変化よりもたらされる疾患の
診断または疾患の罹病性に加えて、または限定すること
のできる診断手段を提供する。ｐ３８β２遺伝子に変異
のある個体は、種々の方法によりDNAレベルで検出でき
る。

【００３１】診断に供する核酸は、対象の細胞、例え
ば、血液、尿、唾液、組織生検または剖検材料より得る
ことができる。ゲノムDNAは、検出するのに直接使用し
てもよく、または分析の前にＰＣＲもしくはその他の増
幅法を用いることにより酵素的に増幅させてもよい。RN
AまたはｃDNAもまた同じ方法で用いることができる。正
常な遺伝子型との比較における増幅産物の大きさの変化
により、欠損および挿入を検出できる。点突然変異は、
増幅DNAを標識化ｐ３８β２ヌクレオチド配列にハイブ
リダイズさせることにより同定できる。完全に対合した
配列はRNase消化により、または融解温度の差により、
誤対合二重らせんから区別できる。DNA配列の差はま
た、変性物質と一緒にまたはなしで、ゲル中のDNAフラ
グメントの電気泳動の移動度の変化により、または直接
的なDNAの配列決定により検出できる。例えばMyersら、
Science，230：1242（1985）を参照のこと。特異的な位
置での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ、
例えばRnaseおよびＳ１保護または化学的切断法によっ
ても明らかにすることができる。Cottonら、Proc.Natl.
Acad.Sci.,USA，85：4397-4401（1985）を参照のこと。
もう１つの具体例において、ｐ３８β２ヌクレオチド配
列またはそのフラグメントからなるオリゴヌクレオチド
プローブのアレイ（array）を構築して、例えば遺伝的
変異の効果的なスクリーニングを行うことができる。ア
レイ法はよく知られており、適用範囲が広く、その方法
を用いて、遺伝子発現、遺伝的連鎖、および遺伝的変化
を含め、分子遺伝学における種々の問題と取り組むこと
ができる（例えば、M.Cheeら、Science,Vol 274,pp610-
613（1996）を参照のこと）。

【００３２】診断アッセイは、記載した方法によりｐ３
８β２遺伝子中の変異を検出することによる、アルツハ
イマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡＴ）、多発性硬化症、
脳性マラリア、発作、頭部外傷および脊髄損傷などの中
枢神経系障害；再狭窄およびアテローム性動脈硬化症な
どの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、
慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢ
Ｄ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性疾患；および骨
粗鬆症、外科的または外傷性事象による敗血症、慢性腎
不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免疫症状、例え
ば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反応および移植
片対宿主疾患などのサイトカインの異常調節または過剰
に伴う他のかかる疾患または症状の疑いを診断または測
定する方法を提供する。

【００３３】加えて、アルツハイマー型の老人性痴呆症
（ＳＤＡＴ）、多発性硬化症、脳性マラリア、発作、頭
部外傷および脊髄損傷などの中枢神経系障害；再狭窄お
よびアテローム性動脈硬化症などの心臓血管疾患；成人
呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性関節リウマチ、変形
性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘
息などの炎症性疾患；および骨粗鬆症、外科的または外
傷性事象による敗血症、慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシ
ーおよび自己免疫症状、例えば、エリテマトーゼス、宿
主移植片拒絶反応および移植片対宿主疾患などのサイト
カインの異常調節または過剰に伴う他のかかる疾患また
は症状は、患者から由来の試料より、異常に上昇または
低下したｐ３８β２ポリペプチドまたはｐ３８β２ｍＲ
ＮＡのレベルを測定することからなる方法により診断す
ることができる。発現の増加または低下は、ポリヌクレ
オチドの定量法として当該分野で周知の方法、例えば、
ＰＣＲ、ＲＴ-ＰＣＲ、RNase保護、ノーザンブロッティ
ングおよびその他のハイブリダイゼーション法を用いて
RNAレベルで測定できる。宿主から由来の試料中のｐ３
８β２ポリペプチドなどのタンパク質のレベルを決定す
るために用いることができるアッセイ法は、当業者に周
知である。このようなアッセイ法には、ラジオイムノア
ッセイ、競争結合アッセイ、ウェスタンブロット分析お
よびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。

【００３４】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値があ
る。該配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置を特異
的に標的とし、これとハイブリッド形成しうる。本発明
に従って、関連する配列を染色体にマッピングする工程
は、それらの配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な
第１工程である。配列を正確な染色体位置にマッピング
したならば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝地図の
データと関連づけることができる。かかるデータは、例
えば、V.McKusick,Mendelian Inheritance in Man（Joh
ns Hopkins University Welch Medical Libraryからオ
ンラインで利用できる）に見いだされる。次いで、連鎖
分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）により、同
じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関係
を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃDNAまた
はゲノム配列の相違も測定することができる。罹病個体
のいくつかまたは全部において変異が観察されるが、正
常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の
原因である可能性がある。

【００３５】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそれらのフラグメントま
たはそのアナログ、あるいはそれらを発現する細胞を免
疫原として用いて、ｐ３８β２ポリペプチドに対して免
疫特異的な抗体を得ることもできる。「免疫特異的」な
る語は、抗体が先行技術における他の関連ポリペプチド
に対するアフィニティーよりも、本発明のポリペプチド
に対して実質的により大きなアフィニティーを有するこ
とを意味する。ｐ３８β２ポリペプチドに拮抗して生じ
る抗体は、ポリペプチド、またはエピトープが付いたフ
ラグメント、アナログまたは細胞を、動物、好ましくは
ヒト以外の動物に、通常の実験法を用いて投与すること
により得ることができる。モノクローナル抗体の産生に
は、連続的細胞系培養により得られる抗体を提供するい
ずれの方法も用いることができる。例えば、ハイブリド
ーマ法（Kohler,G.およびMilstein,C.、Nature，256：4
95-497（1975）、トリオーマ法、ヒトB-細胞ハイブリド
ーマ法（Kozborら、Immunology Today，4：72（1983）
およびEBV-ハイブリドーマ法（Coleら、Monoclonal Ant
ibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,Inc.,pp.77-
96（1985））が挙げられる。

【００３６】一本鎖抗体の産生のために記載された技術
（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプ
チドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。ま
た、トランスジェニックマウスまたは他の生物、例えば
他の哺乳動物を、ヒト化抗体等の抗体を発現するのに用
いることができる。上記抗体を用いて、ポリペプチドを
発現するクローンを単離または同定してもよく、あるい
はアフィニティークロマトグラフィーによりポリペプチ
ドを精製してもよい。ｐ３８β２ポリペプチドに対する
抗体を用いて、とりわけ、アルツハイマー型の老人性痴
呆症（ＳＤＡＴ）、多発性硬化症、脳性マラリア、発
作、頭部外傷および脊髄損傷などの中枢神経系障害；再
狭窄およびアテローム性動脈硬化症などの心臓血管疾
患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、慢性関節リウマ
チ、変形性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、乾癬、皮
膚炎、喘息などの炎症性疾患；および骨粗鬆症、外科的
または外傷性事象による敗血症、慢性腎不全、ＡＩＤ、
カヘキシーおよび自己免疫症状、例えば、エリテマトー
ゼス、宿主移植片拒絶反応および移植片対宿主疾患など
のサイトカインの異常調節または過剰に伴う他のかかる
疾患または症状を治療してもよい。

【００３７】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的反応を
誘起する方法であって、抗体および／またはＴ細胞免疫
応答を生じさせるに十分なｐ３８β２ポリペプチドまた
はそのフラグメントを哺乳動物に接種して、とりわけ、
アルツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡＴ）、多発性
硬化症、脳性マラリア、発作、頭部外傷および脊髄損傷
などの中枢神経系障害；再狭窄およびアテローム性動脈
硬化症などの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲ
ＤＳ）、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾
患（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性疾患；
および骨粗鬆症、外科的または外傷性事象による敗血
症、慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免疫症
状、例えば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反応お
よび移植片対宿主疾患などのサイトカインの異常調節ま
たは過剰に伴う他のかかる疾患または症状から該動物を
防御することからなる方法に関する。本発明のもう１つ
別の態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する
方法であって、ｐ３８β２ポリペプチドをベクターを介
してデリバリーさせ、かかる免疫学的応答を誘発させ、
抗体を産生し、該動物を疾患から保護するように、イン
ビボにてｐ３８β２ポリヌクレオチドの発現を指令する
ことからなる方法に関する。

【００３８】本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチ
ン処方（組成物）であって、哺乳動物宿主中に導入され
た場合、その哺乳動物にてｐ３８β２ポリペプチドに対
する免疫学的応答を誘導する処方（該組成物はｐ３８β
２ポリペプチドまたはｐ３８β２遺伝子を含んでなる）
に関する。ワクチン処方は、さらに適当な担体を含んで
いてもよい。ｐ３８β２ポリペプチドは胃で分解される
かもしれないため、好ましくは非経口的（皮下、筋肉
内、静脈内、皮内注射等を包含する）に投与する。非経
口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファー、静菌剤
および処方を患者の血液と等張にする溶質を含有しても
よい水性および非水性滅菌注射用溶液；ならびに懸濁剤
または増粘剤を含んでいてもよい水性および非水性滅菌
懸濁液を包含する。処方を１回投与または複数回投与用
容器、例えば、密封アンプルおよびバイアルに入れて提
供してもよく、また使用直前に滅菌液体担体を添加する
だけでよい凍結乾燥状態にて保存してもよい。またワク
チン処方は、水中油系および当該分野で知られた他の系
などの処方の免疫原性を高めるためのアジュバント系を
含んでいてもよい。用量は、ワクチンの個々の活性に依
存しており、通常の実験により容易に決定することがで
きる。

【００３９】スクリーニングアッセイ 本発明のｐ３８β２ポリペプチドは、本発明のｐ３８β
２ポリペプチドの活性を活性化（アゴニスト）または阻
害（アンタゴニストまたは阻害剤とも称される）する化
合物についてのスクリーニング法にて用いてもよい。か
くして、本発明のポリペプチドを用いて、例えば細胞、
無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物
からのアゴニストまたはアンタゴニストを評価し、同定
してもよい。これらのアゴニストまたはアンタゴニスト
は、場合によっては、本発明のポリペプチドの天然の基
質、リガンド、レセプターなどであってもよく、あるい
は本発明のポリペプチドの構造または機能を模倣したも
のであってもよい。Coliganら、Current Protocols in
Immunology 1(2):Chapter5(1991)を参照のこと。

【００４０】ｐ３８β２タンパク質は哺乳動物宿主中に
偏在しており、種々の病原性を含め、多くの生物学的機
能に関与している。したがって、一方でｐ３８β２ポリ
ペプチドを刺激する化合物および薬剤を、他方でｐ３８
β２ポリペプチドの機能を阻害しうる化合物または薬剤
を見いだすことが望まれる。一般に、アゴニストは、ア
ルツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡＴ）、多発性硬
化症、脳性マラリア、発作、頭部外傷および脊髄損傷な
どの中枢神経系障害；再狭窄およびアテローム性動脈硬
化症などの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤ
Ｓ）、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患
（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性疾患；お
よび骨粗鬆症、外科的または外傷性事象による敗血症、
慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免疫症状、
例えば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反応および
移植片対宿主疾患などのサイトカインの異常調節または
過剰に伴う他のかかる疾患または症状などの症状の治療
および予防目的に用いられる。アンタゴニストは、アル
ツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡＴ）、多発性硬化
症、脳性マラリア、発作、頭部外傷および脊髄損傷など
の中枢神経系障害；再狭窄およびアテローム性動脈硬化
症などの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤ
Ｓ）、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾患
（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性疾患；お
よび骨粗鬆症、外科的または外傷性事象による敗血症、
慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免疫症状、
例えば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反応および
移植片対宿主疾患などのサイトカインの異常調節または
過剰に伴う他のかかる疾患または症状のような症状の種
々の治療および予防を目的として用いることができる。

【００４１】一般に、かかるスクリーニング操作は、細
胞表面に本発明のｐ３８β２ポリペプチドを発現する
か、または本発明のｐ３８β２ポリペプチドに応答する
適当な細胞を用いることからなる。かかる細胞は、哺乳
動物、酵母、DrosophilaまたはE.coli由来の細胞を包含
する。ついで、ｐ３８β２ポリペプチド（または発現し
たポリペプチドを有する細胞膜）またはｐ３８β２ポリ
ペプチドに応答する細胞を、試験化合物と接触させて、
結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。
候補化合物と接触させた細胞のｐ３８β２活性能を、接
触させていない同じ細胞と比較する。

【００４２】本発明はまた、未だｐ３８β２に結合する
ことが知られていないリガンドがかかるタンパク質に結
合しうるかどうかを測定する方法を提供する。該方法
は、同定すべきリガンドを哺乳動物細胞由来のサイトソ
ルフラクションと接触させ、ＣＳＡＩＤ結合アッセイ
（Leeら、Nature 372：739−746；前のＣＳＢＰファイ
リング）にて、既知の放射活性ＣＳＡＩＤと比較するこ
とによりその能力を測定することからなる。また、ＳＢ
２０２１９０などのＣＳＡＩＤまたは関連する化合物と
の競合結合アッセイにおいて、粗製ＴＨＰ．１細胞ライ
ゼートの代わりに精製した組換えタンパク質を用いるこ
ともできる（Leeら、Nature 372：739-746）。

【００４３】ｐ３８β２がタンパク質キナーゼをコード
すると認識することで、組換え形態を用いてタンパク質
キナーゼ活性を確立できることが示唆される。典型的に
は、これはｐ３８β２をγ−³²Ｐ−ＡＴＰの存在下でタ
ンパク質またはペプチド基質と共に直接インキュベート
し、つづいて分離し、計数することにより基質中に取り
込まれた放射性活性を測定することからなる。分離法
は、免疫沈降法、基質と遠心分離により分離させたビー
ズとの結合操作またはシンチレーション近接アッセイに
よる取り込み量の測定、ＳＤＳ−ＰＡＧＥつづいてオー
トラジオグラフィーまたはバイオセンサー分析を包含す
る。特異的な基質はいまなおわかっていないが、候補基
質として、ｐ３８β２それ自体（オートリン酸化）、ミ
エリン塩基性タンパク質、ＡＴＦ２、ＭＡＰＫＡＰキナ
ーゼ−２、ＭＡＰＫＡＰキナーゼ−３（McLaughlinら、
J.Biol.Chem. 271：8488−8492（1996）およびその中の
引用文献）および公知ＭＡＰキナーゼ基質に関連するペ
プチドが挙げられる。他の基質は、ｐ３８β２を、固体
支持体に結合するかまたはファージの表面に見られる無
作為なペプチドとインキュベートすることにより、また
はｐ３８β２を哺乳動物細胞ライゼート（例えば、ＴＨ
Ｐ．１細胞ライゼート）およびγ−³²Ｐ−ＡＴＰと一緒
にインキュベートし、つづいて標識化標的タンパク質を
分離し、配列決定することにより判明するかもしれな
い。キナーゼ活性はまた、アンチホスホチロシン抗体を
用いることで検出される。ｐ３８β２のタンパク質キナ
ーゼ活性は特異的ＭＡＰキナーゼとのインキュベートを
必要とするかもしれない。これはｐ３８β２を刺激した
真核細胞（例えば、ＬＰＳ処理ＴＨＰ．１細胞）からの
ライゼートおよびＡＴＰとプレインキュベートに付すこ
とで達成できる。別法として、高容量オスモル濃度条件
にて増殖させた、ヒトｐ３８β２を発現する酵母のＨＯ
Ｇ１欠失株からより活性な形態のｐ３８β２を単離する
ことも可能である（例えば、Kumarら、J.Biol.Chem. 27
0：29043−29046（1995）を参照のこと）。

【００４４】これらのアッセイで、インビトロにおける
ｐ３８β２キナーゼ活性、ＣＳＡＩＤＳの公知特性を阻
害する化合物を発見し、修飾することができる（Lee
ら、Nature、前掲）。かかる化合物は前記した化合物と
の比較方法でサイトカイン合成を遮断するであろう。そ
の化合物はまた、それ自体がサイトカイン生成を遮断す
る新規な化合物を発見するための実現可能な標的である
新規な基質の発見をもたらしうる。

【００４５】他のＭＡＰキナーゼと同様、ｐ３８β２は
ＭＡＰキナーゼキナーゼにより活性化され、したがって
組換えタンパク質はｐ３８β２のＭＡＰキナーゼキナー
ゼと推定されるものでリン酸化される能力を測定する第
2アッセイを確立させると考えられる。この場合、刺激
細胞ライゼートからのフラクション（例えば、ＬＰＳで
刺激したＴＨＰ．１細胞）を、γ−³²Ｐ−ＡＴＰの存在
下でｐ３８β２とインキュベートし、³²Ｐ−標識のｐ３
８β２への取り込み量を分離および計数により測定す
る。さらに、ｐ３８β２のチロシンリン酸化は市販され
ている抗ホスホチロシン抗体を用いる免疫沈降またはイ
ムノブロットで検出できる。

【００４６】これらのアッセイを用いてｐ３８β２キナ
ーゼ活性の活性化を遮断する化合物を見い出すこと、既
に発見されている化合物の効能を改良することができ
る。これら化合物はサイトカイン合成を遮断することに
有用性があると考えられる。ヒトｐ３８β２は高容量オ
スモル濃度条件下で増殖させたＨＯＧ１欠失株を救う能
力を有するため、インビボにおけるｐ３８β２活性を遮
断する化合物を直接スクリーニングすることができる。
例えば、化合物は高容量オスモル濃度にてｐ３８β２＋
／ＨＯＧ１−酵母株の増殖を遮断するその能力について
スクリーニングすることができるが、標準的な容量オス
モル濃度での同じ株または高容量オスモル濃度でのｐ３
８β２−／ＨＯＧ１＋株での増殖については効果がな
い。酵母をベースとするアッセイの感度は、細胞膜およ
び透過性に影響を及ぼす宿主変異を導入することにより
増大させることができる（Gaberら、Mol.Cell.Biol.
9：3447−3456（1989））。

【００４７】本発明のｐ３８β２がセリン−トレオニン
タンパク質キナーゼのＣＳＢＰ／Ｐ３８−ＭＡＰキナー
ゼ科に相同的であるという知見により、広範囲に及ぶ急
性および慢性炎症疾患の治療に対する理論的根拠が得ら
れる。従って、サイトカイン介在疾患を患っている患者
をｐ３８β２阻害量のＣＳＡＩＤで治療することも本発
明のさらなる態様である。かかる疾患の代表例として、
アルツハイマー型の老人性痴呆症（ＳＤＡＴ）、多発性
硬化症、脳性マラリア、発作、頭部外傷および脊髄損傷
などの中枢神経系障害；再狭窄およびアテローム性動脈
硬化症などの心臓血管疾患；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲ
ＤＳ）、慢性関節リウマチ、変形性関節症、炎症性腸疾
患（ＩＢＤ）、乾癬、皮膚炎、喘息などの炎症性疾患；
および骨粗鬆症、外科的または外傷性事象による敗血
症、慢性腎不全、ＡＩＤ、カヘキシーおよび自己免疫症
状、例えば、エリテマトーゼス、宿主移植片拒絶反応お
よび移植片対宿主疾患などのサイトカインの異常調節ま
たは過剰に伴う他のかかる疾患または症状が挙げられる
が、これに限定されるものではない。かくして、本発明
は、ｐ３８β２阻害量の化合物を投与することによりか
かる疾患を治療および／または改善することを意図とす
る。本発明のｐ３８β２の機能に関する理論に拘束され
ることなく、ｐ３８β２機能を阻害する有用なものに
は、ｐ３８β２のキナーゼ活性を阻害する化合物がある
と考えられる。他の阻害部位が、もちろん、シグナルト
ランスダクションカスケードにあるとの立場を取ること
も可能である。したがって、ｐ３８β２とその上流また
は下流にある１またはそれ以上の基質との相互作用を阻
害することも本発明の意図するところである。

【００４８】そのアッセイは候補化合物の結合を試験す
るだけでよく、候補化合物に直接的または間接的に結合
した標識を用いることにより、あるいは標識した競合物
質との競合に関するアッセイにより、ｐ３８β２ポリペ
プチドを有する細胞への付着を検出する。さらには、こ
れらのアッセイは、ｐ３８βポリペプチドを有する細胞
に適当な検出系を用い、候補化合物がｐ３８β２ポリペ
プチドの活性化により発せられるシグナルをもたらすか
どうかを試験することもできる。活性作用の阻害剤は、
一般に、既知アゴニストの存在下でアッセイされ、候補
化合物の存在によるアゴニストでの活性化の作用を観察
する。かかるスクリーニングアッセイを行うための標準
方法は当該分野にて周知である。潜在的なｐ３８β２ポ
リペプチドアンタゴニストの例として、抗体、またはあ
る場合には、ｐ３８β２ポリペプチドの、場合によって
は、リガンド、基質、レセプターなどに密接に関連した
オリゴヌクレオチドまたはタンパク質、例えば、リガン
ド、基質、レセプターのフラグメントまたは本発明のポ
リペプチドに結合せず、応答を惹起せず、その結果とし
て該ポリペプチドの活性を保持する小さな分子が挙げら
れる。

【００４９】予防および治療方法 本発明は、過剰量または不十分な量のｐ３８β２ポリペ
プチド活性に関連する、異常な症状の治療方法を提供す
る。ｐ３８β２ポリペプチド活性が過剰な場合、いくつ
かの方法を用いることができる。１の方法は、リガンド
のｐ３８β２ポリペプチドとの結合を遮断することによ
り、または別のシグナルを阻害することにより活性化を
阻害するのに効果的な量の前記した阻害化合物（アンタ
ゴニスト）を医薬上許容される担体と共に対象に投与
し、そのことにより異常な症状を改善することからな
る。もう１つ別の方法において、内在性ｐ３８β２ポリ
ペプチドと競争してリガンドとの結合能を有する可溶形
のｐ３８β２ポリペプチドを投与してもよい。かかる競
争物質の典型例はｐ３８β２ポリペプチドのフラグメン
トからなる。

【００５０】さらにもう１つ別の方法において、発現遮
断法を用いて内在性ｐ３８β２ポリペプチドをコードす
る遺伝子の発現を阻害してもよい。公知のかかる方法
は、内部生成した、あるいは別個に投与されたアンチセ
ンス配列の使用に関する。例えば、Oligodeoxynucleoti
des as Antisense Inhibitors of Gene Expression，CR
C Press，Boca Raton, FL（1988）中、O’Connor、J.Ne
urochem（1991）56：560を参照のこと。別法として、遺
伝子と共に三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを
供給することもできる。例えば、Leeら、Nucleic Acids
Res（1979）6：3073；Cooneyら、Science（1988）24
1：456；Dervanら、Science（1991）251：1360を参照の
こと。これらのオリゴヌクレオチドはそれ自体投与する
ことができ、あるいは関連するオリゴマーをインビボで
発現させることもできる。

【００５１】ｐ３８β２およびその活性の発現不足に関
連する異常な症状を治療するには、またいくつかの方法
が利用可能である。１の方法は、ｐ３８β２ポリペプチ
ドを活性化する治療上有効量の化合物（すなわち、上記
のアゴニスト）を医薬上許容される担体とともに投与
し、そのことにより異常な状態を改善することからな
る。別法として、遺伝子治療を用いて、対象中の関連細
胞によるｐ３８β２の細胞内での生成を有効ならしめて
もよい。例えば、上記のごとく、複製欠損レトロウイル
スベクターにて発現するように、本発明のポリヌクレオ
チドを操作してもよい。次いで、該レトロウイルス発現
構築物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲ
ＮＡ含有のレトロウイルスプラスミドベクターでトラン
スダクションしたパッケージング細胞中に導入して、パ
ッケージング細胞が目的とする遺伝子を含む感染性ウイ
ルス粒子を生成するようにしてもよい。これらのプロデ
ューサー細胞を対象に投与して細胞をインビボで操作
し、インビボでポリペプチドを発現するようにしてもよ
い。遺伝子治療の概説としては、Human Molecular Gene
tics,T.Strachan and A.P.Read,BIOS Scientific Publi
shers Ltd（1996）中、第２０章、Gene Therapy and ot
her Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches
（およびその中の引用文献）を参照のこと。

【００５２】処方および投与 可溶形のｐ３８β２ポリペプチドのごときペプチド、な
らびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチドまたは
小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処方しても
よい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプチドまた
は化合物、および医薬上許容される担体もまたは賦形剤
を含んでなる。かかる担体としては、食塩水、緩衝食塩
水、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、
およびその組み合わせを包含するが、これらに限定され
ない。処方は投与経路に適したものとすべきであり、当
業者によく知られている。さらに本発明は、前記した本
発明の組成物の１種またはそれ以上の成分を充填した、
１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パックおよ
びキットにも関する。

【００５３】本発明のポリペプチドおよび他の化合物を
単独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他
の化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身系
投与の好ましい形態は、典型的には静脈注射による注射
を包含する。皮下、筋肉内または腹腔内などの他の注射
経路を用いることもできる。全身系投与のための別の手
段は、胆汁酸塩またはフシジン酸などの浸透剤または他
の界面活性剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含す
る。加えて、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方
されるならば、経口投与も可能である。これらの化合物
の投与は、膏薬、パスタ、ゲル等の形態にて、局所的お
よび／または局在化であってもよい。

【００５４】必要な用量範囲は、ペプチドの選択、投与
経路、処方の性質、対象の症状の性質、および顧問医の
判断に依存する。しかしながら、適当な用量は対象１ｋ
ｇ当たり０．１ないし１００μｇの範囲である。しか
し、種々の使用化合物および種々の投与経路の効力の違
いを考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと思われ
る。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用量が必
要であると考えられる。当該分野においてよく知られた
最適化のための標準的な経験的慣用操作を用いてこれら
の用量の変更を行うことができる。

【００５５】しばしば「遺伝子治療」と称される上記治
療方法において、治療に用いられるポリペプチドを対象
中において内在的に得ることもできる。よって、例え
ば、レトロウイルスプラスミドベクターを用いて対象由
来の細胞をDNAまたはRNAなどのポリヌクレオチドで操作
し、ポリペプチドをエクスビボでコードしてもよい。次
いで、細胞を対象に導入する。

【００５６】

【実施例】以下の実施例は、特記する場合を除き、当業
者に周知かつ慣用的な、標準方法を用いて行う。実施例
は例示であって、本発明を限定するものではない。

【００５７】実施例１−クローニング ｐ３８β２をコードする本発明の一のポリヌクレオチド
は、ヒトの脳、心臓および骨格筋の細胞におけるｍＲＮ
Ａより由来のｃＤＮＡライブラリーより標準的クローニ
ングおよびスクリーニング法を用い、かつポリメラーゼ
連鎖反応法（Ｍ.Ａ.Innisら、PCR protocols：A guide
to methods and application，Academicpress，San Die
go，1990）を用いて得ることができる。ｐ３８β２を、
公開されているｐ３８β配列（Jiang,Y.、Chen,C.、Li,
Z.、Guo,W.、Gegner,J.A.、Lin,S.およびHan,J.、J.Bio
l.Chem. 271：17920−17926（1996）に基づき、プライ
マー５’GTG AAA TTC TGC TCC GGA C ３’（配列番号
３）および５’ATC TCG AGA AGC TTT GCC CAG ACT CCT
ACA CAT ３’（配列番号４）を用いるＰＣＲにより、ヒ
ト脳ｃＤＮＡライブラリー（LIFE TECHNOLOGY Gene Tra
pper Library）よりクローンした。

【００５８】実施例２−組織分布 ノーザンブロットをClontechからのヒトマルチ組織ノー
ザン上でｐ３８β２ｃＤＮＡを用いて行った（Lee,J.
C.，Laydon,J.T.，McDonnell,P.C.，Gallagher,T.F.，K
umer,S.，Green,D.，McNulty,D.，Blumenthal,M.J.，He
ys,J.R.，Landvatter,S.W.，Strickler,J.E.，McLaughl
in,M.M.，Siemers,I.R.，Fisher,S.M.，Livi,G.P.，Whi
te,J.R.，Adams,J.L.およびYoung,P.R. （1994）Nature
372、739−746）。ｐ３８β２はヒト脳および心臓で最
も多く発現し、胎盤、肺、肝臓、骨格筋、腎臓および膵
臓ではより少なく量で発現した。

【００５９】実施例３−ＭＡＰキナーゼ科に対するホモ
ロジーおよび発現 ＣＳＢＰ１およびＣＳＢＰ２について前記したのと同じ
方法にて、ｐ３８β２を酵母発現について遺伝子操作し
てもよい（Kumar,Ｓ.、McLaughlin,M.M.、McDonnell,P.
C.、Lee,J.C.、Livi,G.P.およびYoung,P.R. （1995）
J.Biol.Chem. 270、29043-29046）。ポリメラーゼ連鎖
反応によりｐ３８β２の各々の開始および停止コドンの
ＸｈｏＩおよびＢｇｌＩＩ部位を遺伝子操作する（Mull
isおよびFallona、Meth.Enymol. 155：335-50（198
7））。ついで、ｐ３８β２含有のＸｈｏＩ／ＢｇｌＩ
Ｉフラグメントをｐ１３８ＮＢＵの同じ部位にライゲー
トし、Ｔｒｐ選択可能なマーカーをＵＲＡ３で置換す
る、ｐ１３８ＮＢ（McHaleら、Mol.Pharｍ. 39：109-11
3（１９９１））の修飾を行った。また、ＸｈｏＩ部
位、ＦＬＡＧエピトープおよびｐ３８β２のアミノ末端
ヌクレオチド配列を含むポリメラーゼ連鎖反応を用いる
ことで、ｐ３８β２のアミノ末端をＦＬＡＧエピトープ
などのエピトープ・タグに融合させることができる（例
えば、試薬はIBI-Kodakより入手）。

【００６０】ｐ３８β２のアミノ末端をＦＬＡＧまたは
ヘマグルチニン（ＨＡ）エピトープと融合させることに
より、ＣＳＢＰβをまた、ＨｅＬａおよびＪＵＲＫＡＴ
などの哺乳動物細胞における発現用に遺伝子操作させる
ことができる。ヒトｐ３８β２の完全な読み枠を含有す
るＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩ制限フラグメントを、そ
のフラグメントが当初はクローンされているＰＣＲ２.
１プラスミドより除去し、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩ
ＩＩで切断したベクターｐＣＤＮに挿入した。ついで、
得られたベクターｐＣＤＮＨＡ−ｐ３８β２を、多くの
確立されたプロトコル、例えば、リポフェクタミン（Ｇ
ＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を用いて、ＨｅＬａまたはＪＵＲＫ
ＡＴなどの哺乳動物細胞にトランスフェクションするこ
とができる。細胞を適当な刺激（例えば、浸透性ショッ
ク、ＵＶ、ＩＬ−１）で処理し、ＨＡ−ｐ３８β２の活
性化を誘導し、ＣＳＡＩＤのｐ３８β２のキナーゼ活性
を阻害する能力を介してＣＳＡＩＤ結合を検出すること
ができる。かくして、ＨＡ−ｐ３８β２をトランスフェ
クションされた哺乳動物細胞からＨＡエピトープ（Boer
inger−Manheim）に対する抗体との免疫沈降に付すこと
ができ、前記したようにインビトロ・キナーゼ・アッセ
イをＣＳＡＩＤの存在または不在下で適当な基質（例え
ば、ミエリン塩基性タンパク質、ＡＴＦ−２、ＭＡＰＫ
ＡＰキナーゼ−２または−３）を用いて行うことができ
る（Leeら、（1994） Nature 372：739−746；McLaugjl
inら、J.Biol.Chem. 271：8488−8492（1996））。

【００６１】実施例４−E.coliにおける発現 本発明の単離ｃＤＮＡによりコードされるタンパク質が
ＣＳＡＩＤに結合しうることを確認するために、ｃＤＮ
ＡをＥ.coli、酵母および哺乳動物細胞（例えば、Ｈｅ
Ｌａ、ＣＨＯ、３Ｔ３）にて発現させることができる。
Ｅ.coliにおいて、ＣＳＢＰ／ｐ３８は、例えばβ―ガ
ラクトシダーゼ、エンテロキナーゼ切断可能なＦＬＡＧ
エピトープタグ、グルタチオンＳ−トランスフェラーゼ
またはヘキサヒスチジン尾部との融合タンパク質として
同定される。（ＦＬＡＧはその試薬がIBI−Kodakより入
手可能な市販のエピトープである。）後者の場合、これ
は開始部位、抗原認識配列およびエンテロキナーゼ切断
部位を有する合成オリゴヌクレオチドリンカーを設計す
ることにより達成される。タンパク質をｐＬａｃ（例え
ば、Bluescipt KSベクター（Stratagene、LaJolla、C
A）またはλｐＬ（Shatzmanら、N.Y.Acad.Sci.、478：2
33−248（1986））プロモーターのいずれかの制御の下
で発現させ、細胞ライゼートにて予期される大きさのタ
ンパク質と特異的に連結することが知られているラジオ
フォトアフィニティーＣＳＡＩＤでプローブに付す。
Ｅ.coliにて発現したタンパク質は、製造者の指示に従
って、ＦＬＡＧエピトープに対するモノクローナル抗体
を含有するアフィニティーマトリックス、グルタチオン
・ビーズまたはＮｉＮＴＡカラムに通すことで精製され
る。

【００６２】

【配列表】

（１）一般的情報 （ｉ）出願人：クマール，サンジャイ （ｉｉ）発明の名称：薬剤結合タンパク質 （ｉｉｉ）配列の数：４ （ｉｖ）郵送先 （Ａ）名称：スミスクライン・ビーチャム・コーポレイ
ション （Ｂ）通り名：スウェードランド・ロード・７０９ （Ｃ）都市名：キング・オブ・プルシア （Ｄ）州名：PA （Ｅ）国名：USA （Ｆ）郵便番号：19406 （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）オペレーティング・システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Windowsバージョン２.０用FastSE
Q （ｖ）現出願データ： （Ａ）出願番号：不明 （Ｂ）出願日：１９９７年2月１８日 （Ｃ）分類番号：不明 （ｖｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （ｖｉｉｉ）代理人情報： （Ａ）名称：ハン，ウィリアム・ティ （Ｂ）登録番号：３４３４４ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＰ５００００ （ｉｘ）テレコミュニケーション情報： （Ａ）電話番号：610-270-5219 （Ｂ）ファックス番号：610-270-4026 （Ｃ）テレックス番号：

【００６３】（２）配列番号１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１３１０塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：ｃDNA （ｘｉ）配列の記載：配列番号１： CCGGACATGT CGGGCCCTCG CGCCGGCTTC TACCGGCAGG AGCTGAACAA GACCGTGTGG 60 GAGGTGCCGC AGCGGCTGCA GGGGCTGCGC CCGGTGGGCT CCGGCGCCTA CGGCTCCGTC 120 TGTTCGGCCT ACGACGCCCG GCTGCGCCAG AAGGTGGCGG TGAAGAAGCT GTCGCGCCCC 180 TTCCAGTCGC TGATCCACGC GCGCAGAACG TACCGGGAGC TGCGGCTGCT CAAGCACCTG 240 AAGCACGAGA ACGTCATCGG GCTTCTGGAC GTCTTCACGC CGGCCACGTC CATCGAGGAC 300 TTCAGCGAAG TGTACTTGGT GACCACCCTG ATGGGCGCCG ACCTGAACAA CATCGTCAAG 360 TGCCAGGCGC TGAGCGACGA GCACGTTCAA TTCCTGGTTT ACCAGCTGCT GCGCGGGCTG 420 AAGTACATCC ACTCGGCCGG GATCATCCAC CGGGACCTGA AGCCCAGCAA CGTGGCTGTG 480 AACGAGGACT GTGAGCTCAG GATCCTGGAT TTCGGGCTGG CGCGCCAGGC GGACGAGGAG 540 ATGACCGGCT ATGTGGCCAC GCGCTGGTAC CGGGCACCTG AGATCATGCT CAACTGGATG 600 CATTACAACC AAACAGTGGA TATCTGGTCC GTGGGCTGCA TCATGGCTGA GCTGCTCCAG 660 GGCAAGGCCC TCTTCCCGGG AAGCGACTAC ATTGACCAGC TGAAGCGCAT CATGGAAGTG 720 GTGGGCACAC CCAGCCCTGA GGTTCTGGCA AAAATCTCCT CGGAACACGC CCGGACATAT 780 ATCCAGTCCC TGCCCCCCAT GCCCCAGAAG GACCTGAGCA GCATCTTCCG TGGAGCCAAC 840 CCCCTGGCCA TAGACCTCCT TGGAAGGATG CTGGTGCTGG ACAGTGACCA GAGGGTCAGT 900 GCAGCTGAGG CACTGGCCCA CGCCTACTTC AGCCAGTACC ACGACCCCGA GGATGAGCCA 960 GAGGCCGAGC CATATGATGA GAGCGTTGAG GCCAAGGAGC GCACGCTGGA GGAGTGGAAG 1020 GAGCTCACTT ACCAGGAAGT CCTTAGCTTC AAGCCCCCAG AGCCACCGAA GCCACCTGGC 1080 AGCCTGGAGA TTGAGCAGTG AGGTGCTGCC CAGCAGCCCC TGAGAGCCTG TGGAGGGGCT 1140 TGGGCCTGCA CCCTTCCACA GCTGGCCTGG TTTCCTCGAG AGGCACCTCC CACACTCCTA 1200 TGGTCACAGA CTTCTGGCCT AGGACCCCTC GCCTTCAGGA GAATCTACAC GCATGTATGC 1260 ATGCACAAAC ATGTGTGTAC ATGTGCTTGC CATGTGTAGG AGTCTGGGCA 1310

【００６４】（２）配列番号２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３６４アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：タンパク質 （ｘｉ）配列の記載：配列番号２： Met Ser Gly Pro Arg Ala Gly Phe Tyr Arg Gln Glu Leu Asn Lys Thr 1 5 10 15 Val Trp Glu Val Pro Gln Arg Leu Gln Gly Leu Arg Pro Val Gly Ser 20 25 30 Gly Ala Tyr Gly Ser Val Cys Ser Ala Tyr Asp Ala Arg Leu Arg Gln 35 40 45 Lys Val Ala Val Lys Lys Leu Ser Arg Pro Phe Gln Ser Leu Ile His 50 55 60 Ala Arg Arg Thr Tyr Arg Glu Leu Arg Leu Leu Lys His Leu Lys His 65 70 75 80 Glu Asn Val Ile Gly Leu Leu Asp Val Phe Thr Pro Ala Thr Ser Ile 85 90 95 Glu Asp Phe Ser Glu Val Tyr Leu Val Thr Thr Leu Met Gly Ala Asp 100 105 110 Leu Asn Asn Ile Val Lys Cys Gln Ala Leu Ser Asp Glu His Val Gln 115 120 125 Phe Leu Val Tyr Gln Leu Leu Arg Gly Leu Lys Tyr Ile His Ser Ala 130 135 140 Gly Ile Ile His Arg Asp Leu Lys Pro Ser Asn Val Ala Val Asn Glu 145 150 155 160 Asp Cys Glu Leu Arg Ile Leu Asp Phe Gly Leu Ala Arg Gln Ala Asp 165 170 175 Glu Glu Met Thr Gly Tyr Val Ala Thr Arg Trp Tyr Arg Ala Pro Glu 180 185 190 Ile Met Leu Asn Trp Met His Tyr Asn Gln Thr Val Asp Ile Trp Ser 195 200 205 Val Gly Cys Ile Met Ala Glu Leu Leu Gln Gly Lys Ala Leu Phe Pro 210 215 220 Gly Ser Asp Tyr Ile Asp Gln Leu Lys Arg Ile Met Glu Val Val Gly 225 230 235 240 Thr Pro Ser Pro Glu Val Leu Ala Lys Ile Ser Ser Glu His Ala Arg 245 250 255 Thr Tyr Ile Gln Ser Leu Pro Pro Met Pro Gln Lys Asp Leu Ser Ser 260 265 270 Ile Phe Arg Gly Ala Asn Pro Leu Ala Ile Asp Leu Leu Gly Arg Met 275 280 285 Leu Val Leu Asp Ser Asp Gln Arg Val Ser Ala Ala Glu Ala Leu Ala 290 295 300 His Ala Tyr Phe Ser Gln Tyr His Asp Pro Glu Asp Glu Pro Glu Ala 305 310 315 320 Glu Pro Tyr Asp Glu Ser Val Glu Ala Lys Glu Arg Thr Leu Glu Glu 325 330 335 Trp Lys Glu Leu Thr Tyr Gln Glu Val Leu Ser Phe Lys Pro Pro Glu 340 345 350 Pro Pro Lys Pro Pro Gly Ser Leu Glu Ile Glu Gln 355 360

【００６５】（２）配列番号３に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：１９塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：その他 （ｘｉ）配列の記載：配列番号３： GTGAAATTCT GCTCCGGAC 19

【００６６】（２）配列番号４に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：３３塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：線状 （ｉｉ）分子の型：その他 （ｘｉ）配列の記載：配列番号４： ATCTCGAGAA GCTTTGCCCA GACTCCTACA CAT 33

【図面の簡単な説明】

【図１】 ヒトｐ３８β２のヌクレオチドおよび推定ア
ミノ酸配列を示す（配列番号1および２)。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＢＤ Ｇ０１Ｎ 33/566 ＡＢＥ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＢ ＡＢＧ ＡＡＭ ＡＢＪ ＡＢＡ ＡＢＮ ＡＢＣ ＡＣＤ ＡＢＤ ＡＣＶ ＡＢＥ ＡＤＡ ＡＢＧ ＡＤＺ ＡＢＪ ＡＥＢ ＡＢＮ Ｃ０７Ｋ 14/52 ＡＣＤ Ｃ１２Ｎ 1/21 ＡＣＶ 9/12 ＡＤＡ Ｃ１２Ｐ 21/02 ＡＤＺ Ｇ０１Ｎ 33/566 ＡＥＢ //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 9/12 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (25)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のｐ３８β２ポリペプチドを
   コードするヌクレオチド配列に対してその全長にわたっ
   て少なくとも８５％の同一性を有するヌクレオチド配
   列、あるいは該ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチ
   ド配列を有してなる単離ポリヌクレオチド。
2. 【請求項２】 DNAまたはRNAである請求項１記載のポリ
   ヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ヌクレオチド配列が配列番号１に含まれ
   るヌクレオチド配列と少なくとも８５％同一である請求
   項１記載のポリヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ヌクレオチド配列が配列番号１に含まれ
   るｐ３８β２ポリペプチドをコードする配列を有してな
   る請求項３記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 配列番号１のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 請求項３のポリヌクレオチドの連続する
   少なくとも１5個のヌクレオチドからなるポリヌクレオ
   チドプローブまたはプライマー。
7. 【請求項７】 発現系を有してなるDNAまたはRNA分子で
   あって、その発現系が適合する宿主細胞中に存在する場
   合に、該発現系が配列番号２のポリペプチドと少なくと
   も９０％の同一性を有するアミノ酸配列からなるｐ３８
   β２ポリペプチドの生成能を有するDNAまたはＲＮＡ分
   子。
8. 【請求項８】 請求項７の発現系を有してなる宿主細
   胞。
9. 【請求項９】 ポリペプチドを生成するのに十分な条件
   下で請求項８の宿主を培養することからなるｐ３８β２
   ポリペプチドの製造方法。
10. 【請求項１０】 さらに、培養体よりポリペプチドを回
    収することからなる請求項９記載の方法。
11. 【請求項１１】 ｐ３８β２ポリペプチドを産生する細
    胞の製法であって、宿主細胞が、適当な培養条件下、ｐ
    ３８β２ポリペプチドを産生するように、該宿主細胞を
    請求項７に記載の発現系で形質転換またはトランスフェ
    クションすることからなる方法。
12. 【請求項１２】 請求項１１記載の方法により産生され
    る細胞。
13. 【請求項１３】 配列番号２のアミノ酸配列に対してそ
    の全体にわたって少なくとも９０％の同一性を有するア
    ミノ酸配列からなるｐ３８β２ポリペプチド。
14. 【請求項１４】 配列番号２のアミノ酸配列を有してな
    る請求項１３記載のポリペプチドまたはそのフラグメン
    ト。
15. 【請求項１５】 配列番号２のポリペプチド。
16. 【請求項１６】 請求項１０記載の方法により得られる
    ｐ３８β２ポリペプチド。
17. 【請求項１７】 請求項１３のｐ３８β２ポリペプチド
    に免疫特異的な抗体。
18. 【請求項１８】 ｐ３８β２ポリペプチド活性を強化す
    る必要性のある対象の治療法であって： （ａ）治療上有効量の該ポリペプチドに対するアゴニス
    トを該対象に投与し；および／または（ｂ）インビボに
    て該ポリペプチド活性を生じさせるような形態にてｐ３
    ８β２ポリペプチドを対象に付与することからなる方
    法。
19. 【請求項１９】 ｐ３８β２ポリペプチド活性を阻害す
    る必要性のある対象の治療法であって： （ａ）治療上有効量の該ポリペプチドに対するアンタゴ
    ニストを該対象に投与し；および／または（ｂ）該ポリ
    ペプチドをコードするヌクレオチド配列の発現を阻害す
    る核酸分子を該対象に投与し；および／または（ｃ）そ
    のリガンド、基質またはレセプターについて該ポリペプ
    チドと競合する治療上有効量のポリペプチドを対象に投
    与することからなる方法。
20. 【請求項２０】 対象におけるｐ３８β２ポリペプチド
    の発現または活性に関連した対象での疾患または疾患の
    疑いを診断する方法であって、 （ａ）該対象のゲノムにおいて該ｐ３８β２ポリペプチ
    ドをコードするヌクレオチド配列中の変異の有無を決定
    すること；および／または（ｂ）該対象から由来の試料
    中の該ｐ３８β２ポリペプチドの発現の存在または量を
    分析することからなる方法。
21. 【請求項２１】 ｐ３８β２ポリペプチドを阻害（拮
    抗）または作動する化合物の同定方法であって、 （ａ）候補化合物をｐ３８β２ポリペプチドを発現する
    細胞（またはｐ３８β２ポリペプチドを発現する細胞
    膜）あるいはｐ３８β２ポリペプチドに応答する細胞と
    接触させ；および（ｂ）結合または機能的応答の刺激ま
    たは阻害を観察するか、あるいはその候補化合物と接触
    させた細胞（または細胞膜）と、接触させなかった同一
    の細胞のｐ３８β２ポリペプチド活性についての能力を
    比較することからなる方法。
22. 【請求項２２】 請求項２１の方法により同定されるア
    ゴニスト。
23. 【請求項２３】 請求項２１の方法により同定されるア
    ンタゴニスト。
24. 【請求項２４】 本質的に、ｐ３８β２遺伝子を含有す
    る適当なライブラリーを、ストリンジェントなハイブリ
    ダイゼーション条件下で配列番号１の配列を有するプロ
    ーブまたはそのフラグメントを用いてスクリーニング
    し、そのDNA配列を単離することにより得られる該DNA配
    列からなるポリヌクレオチド。
25. 【請求項２５】 配列番号１のヌクレオチド配列からな
    る配列を発現させることにより得られるポリペプチド。