JPH10509462A - 経口用シクロスポリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 高いバイオアベイラビリティーを有し、かつ硬カプセル又はナノパーティクルにおいて投与することが可能な改善された経口用シクロスポリン製剤が提供される。本発明の製剤において、シクロスポリンは、少なくとも１種の非イオン性界面活性剤と組み合わせた炭素数２〜３の少なくとも１種のアルカノール溶媒からなる経口的に許容しうるビヒクル中で投与される。本発明の製剤は更に少なくとも１種の補助溶媒からなっていてもよく、興味のある補助溶媒は脂肪酸及びジオールを含む。本発明の製剤は免疫抑制療法に使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】 経口用シクロスポリン製剤 序文 発明の分野 本発明の分野は経口用シクロスポリン製剤である。背景技術 提供者(donor)の臓器を受容者（host）に導入する移植手順の大半において受 容者―提供者間の組織の型のマッチングによる移植片拒絶反応を避けるための努 力にもかかわらず、免疫抑制療法は受容者における提供者の臓器の維持された生 存能力にとって重要である。アザチオプリン、メトトレキセート、シクロホスフ ァミド、ＦＫ−５０６、ラパマイシン(rapamycin)およびコルチコステロイド類 を含む種々の免疫抑制剤が移植手順に使用されてきている。Ｔ細胞を介した反応 に対する優先的な効果のため、免疫抑制療法における使用が増加していることが 知られる薬剤はシクロスポリンである。 シクロスポリンは菌類の種であるトリポクラジウム・インフラタム ガムズ（ Tolypocladium inflatum Gams）に代謝産物として生成される１１個のアミノ酸 から構成される環状のポリペプチドに属する。シクロスポリンは免疫を担当する リンパ球、特に細胞周期がＧ₀期またはＧ₁期にあるＴリンパ球を可逆的に阻害す ることが認められてきている。またシクロスポリンはリンホカインの生成および 放出を可逆的に阻害することが認められてきている。多数のシクロスポリンが知 られているけれども、シクロスポリンＡは最も広く使用されている。 シクロスポリンＡの使用は皮膚、心臓、腎臓、膵臓、骨髄、小腸および肺を含 む同種異系（allogeneic）移植組織片の生存を延長することが報告されてきてい る。同種異系移植において、シクロスポリンＡは体液性免疫を抑制し、同種移植 片反応、遅延型過敏症、実験的アレルギー性脳脊髄炎、フロイントアジュバンド による関節炎（Freund's adjuvant arthritis）および移植片対受容者病を含む 細胞を介した免疫反応をかなりの程度抑制することが示されている。シクロスポ リンＡを用いての成功が実現されているけれども、シクロスポリン療法の恩恵は 可逆的でありかつ一度シクロスポリンＡの投与が中断されると移植片拒絶反応が 起こるので、移植に続いて薬剤の投与を続けなければならない。 経口および静脈内投与用のシクロスポリン製剤が開発されてきているけれども 、投与の容易さおよび優れた患者の受容性（patient acceptance）のため、シク ロスポリンの経口投与が好ましい。さらに、シクロスポリンの静脈内投与は経口 用製剤ではみられない副作用であるアナフィラキシー反応を起こすことがある。 開発され最近市場に出された経口用シクロスポリン製剤は軟ゼラチンカプセルお よび溶液製剤の両者を含み、これらは共にサンドイミュン（登録商標）（ＳＡＮ ＤＩＭＭＵＮＥ）およびネオラル（商標）（ＮＥＯＲＡＬ）という商標のもとに 販売されている。 免疫抑制療法における経口用シクロスポリン製剤の使用において、治療の提供 者（care giver）および製造者の両者は多くの問題を認識しなければならない。 経口用シクロスポリン製剤について、水中におけるシクロスポリンの不混和性お よび水性環境下におけるシクロスポリンの沈殿する傾向のため、シクロスポリン のバイオアベイラビリティーは制限されることがある。さらに、経口用製剤に存 在するシクロスポリンの濃度は、シクロスポリンの疎水性のため制限されること がある。さらに、胃腸管によるシクロスポリンの吸収は１回の製剤の製剤バッチ 毎に異なることがあるので、処置の間シクロスポリンの血中レベルを絶えず監視 することが要求される。最後に、経口用製剤について、包装と貯蔵安定性が問題 になる。例えば、シクロスポリンの軟ゼラチンカプセル製剤について、密閉包装 を用いなければならず、これは嵩張りおよび高い費用のため不便である。さらに 、シクロスポリンは結晶化するので、シクロスポリン製剤は低温下では不安定で あるかもしれない。 したがって、望ましい経口用シクロスポリン製剤は、前記の問題の少なくとも 幾つかに向けられた製剤であろう。理想的には、経口用製剤は高いバイオアベイ ラビリティーを促進し、高濃度のシクロスポリンからなり、硬カプセル型に調製 しやすいものであろう。関連文献 フィジシャンズ デスク リファレンス（Physician's Desk Reference）、２ ０７１〜２０７４頁、１９９４年には、サンドイミュン（登録商標）（ＳＡＮＤ ＩＭＭＵＮＥ）という商標で最近販売された経口用シクロスポリン製剤が記載さ れている。 また経口用シクロスポリン製剤は、ネオラル（商標） パッケージ インサー ト（ＮＥＯＲＡＬ package insert）、１９９５年（サンドズ ファーマシュー ティカルズ コーポレーション（Sandoz Pharmaceuticals Corporation）、イー ストハノーバー(East Hanover)、ニュージャージー(New Jersey)、０７９３６） にも記載されている。 シクロスポリン及びその誘導体について記載している興味のある米国特許には 、米国特許第４,２２０,６４１号、４,６３９,４３４号、４,２８９,８５１号お よび４,３８４,９９６号明細書が含まれる。米国特許第５,０４７,３９６号明細 書はシクロスポリン投与のための静脈内用調製物(intravenous preparation)に ついて記載している。米国特許第４，３８８，３０７号、４,９７０,０７６号及 び４,９９０,３３７号明細書は経口用シクロスポリン製剤の調製について記載し ている。 医薬製剤の経口送達のための硬カプセルの調製は、米国特許第４,８２２,６１ ８号、４,５７６,２８４号、５,１２０,７１０号及び４,８９４,２３５号明細書 に記載されている。 発明の概要 経口用シクロスポリン製剤及び免疫抑制療法における前記製剤の使用方法が提 供される。主題となる製剤において、シクロスポリンは、少なくとも１種の非イ オン性界面活性剤と組み合わせた炭素数２〜３の少なくとも１種のアルカノール 溶媒からなる経口的に許容しうるビヒクル中に存在する。本発明の製剤は更に１ 種以上の補助溶媒を含んでいてもよい。興味の対象となる補助溶媒は脂肪酸エス テル類及びジオール類である。シクロスポリン製剤は硬カプセルとして包装する ことができる。ポリオキシアルキレンの界面活性剤を含むことによって、安定な 分散体を水性媒体中に希釈すると同時に、非晶質の生物学的に利用しうるシクロ スポリンのナノパーティクル（nanoparticle）が提供される。 図面の簡単な説明 図１は、本発明の発明に従う経口用製剤の幾つかについて、ラットにおいて達 成されたシクロスポリンのピーク濃度（Ｃ_max）を示し、Ｃ_maxはサンドイミュン （登録商標）経口用製剤（ＳＯ）を用いて達成されたＣ_maxと比較した相対値と して示されている。 図２は、図１に示した個々の製剤について、Ｃ_maxが起こった時間（Ｔ_max）を 示し、Ｔ_maxはサンドイミュン（登録商標）経口用製剤（ＳＯ）のＴ_maxと比較し た相対値として示されている。 図３は、図１に示した個々の製剤について、血中濃度―時間曲線下の相対面積 （ＡＵＣ）を示し、ＡＵＣはサンドイミュン（登録商標）経口用製剤（ＳＯ）に ついてのＡＵＣ値と比較した相対値として示されている。 図４は、サンドイミュン（登録商標）経口用溶液（図中における“サンド”） だけでなく、本発明の発明に従う経口用製剤の幾つかについて、ヒトにおいて達 成されたシクロスポリンのピーク濃度（Ｃ_max）を示す。 図５は、図４に示した個々の製剤について、Ｃ_maxが起こった時間（Ｔ_max）を 示す。 図６は、図４に示した個々の製剤について、血中濃度―時間曲線下の面積（Ａ ＵＣ）を示す。 具体的な態様の説明 バイオアベイラビリティーを促進し、カプセル、特に硬カプセルとして処方す ることができる経口用シクロスポリン製剤が提供される。本発明の製剤において 、シクロスポリンは、少なくとも１種の非イオン性界面活性剤と組み合わせた炭 素数２〜３の少なくとも１種のアルカノール溶媒からなる経口的に許容しうるビ ヒクル中に存在する。本発明の製剤は更に１種以上の補助溶媒からなっていても よ く、興味のある補助溶媒は脂肪酸エステル類及びジオール類を含む。本発明の製 剤の個々の成分は医薬的に許容しうるものである。高いバイオアベイラビリティ ーを提供することに加えて、本発明の製剤は特定の製剤の１回のバッチから次の バッチまで再現性のあるシクロスポリンの吸収を提供する。本発明の製剤は免疫 抑制療法に使用できる。 当該技術分野において、多くのシクロスポリンが免疫抑制活性を示すことが知 られており、本発明の経口用製剤において投与されてもよい。本発明の経口用製 剤において投与できるシクロスポリンは、シクロスポリンＡ、シクロスポリンＢ 、シクロスポリンＣ、シクロスポリンＤ、シクロスポリンＧ及びそれらの合成し た類似体も含む。メルクインデックス、2759、1989年を参照のこと。本発明の経 口用製剤は特にシクロスポリンＡの放出に適している。本発明の製剤において放 出されるとき、シクロスポリンＡは、製剤のビヒクル成分の容積を基準として、 ５０〜１５０ｍｇ／ｍｌ、通常１００〜１５０ｍｇ／ｍｌの範囲の濃度で存在す る。 本発明の製剤のビヒクル成分はアルカノール溶媒成分であり、前記アルカノー ル溶媒成分は少なくとも１種のアルカノール、一般的にはせいぜい３種の異なる アルカノール、より一般的にはせいぜい２種の異なるアルカノールからなり、前 記アルカノールには、一般的には２〜３個の炭素原子および１.５個の炭素原子 当たりせいぜい１個のヒドロキシ基が存在するように１〜２個のヒドロキシ基が 存在するであろう。適切なアルカノール類はエタノールおよびプロピレングリコ ールを含む。製剤中のアルカノール溶媒の全量は、製剤の少なくとも約１％（ｖ ／ｖ）、一般的には少なくとも３％（ｖ／ｖ）であり、９５％（ｖ／ｖ）のよう な高濃度であってもよいが、通常は約５〜７５％（ｖ／ｖ）、一般的には約５〜 ６０％（ｖ／ｖ）、より一般的には約１０〜６０％（ｖ／ｖ）の範囲にあるだろ う。エタノールがアルカノール溶媒として製剤中に存在するとき、エタノールの 量は、製剤の５〜２０％（ｖ／ｖ）、一般的には約５〜１５％（ｖ／ｖ）であっ てもよく、一方、プロピレングリコールがアルカノール溶媒として存在するとき 、本発明の製剤中のプロピレングリコール量は、製剤の約５〜９０％（ｖ／ｖ） 、一般的には約５〜８５％（ｖ／ｖ）、より一般的には約１０〜５０％（ｖ／ｖ ） の範囲であってもよい。 また、経口的に許容しうるビヒクルには、少なくとも１種の非イオン性ポリオ キシアルキレン界面活性剤、一般的にはせいぜい２種のポリオキシアルキレンの 非イオン性界面活性剤が存在するだろう。前記ポリオキシアルキレン界面活性剤 は約５〜２０、一般的には約８〜１６の親水性―親油性―バランス（ＨＬＢ）を 有するだろう。好ましくは、本発明の製剤において使用されるポリオキシアルキ レン非イオン性界面活性剤はポリオキシエチレン化合物であろう。興味のあるポ リオキシエチレン化合物は、エトキシ化アルコール、すなわちアルコール部分（ moiety）に通常１０〜１８個、一般的には１０〜１４個の炭素原子が存在するポ リオキシエチレンアルコールまたはエトキシ化脂肪酸アルコール、それらのエー テル及びエステル置換体及び炭素数４〜６、一般的には炭素数６のポリオールで あり、該ポリオールは無水物、例えばソルビタンであってもよいポリオールの脂 肪酸の部分エステル、通常はモノエステルのポリオキシエチレン誘導体を含む。 本発明の界面活性剤の脂肪酸部分は典型的には炭素数１０〜１８個の範囲の炭素 数であろう。エチレンオキシド基の数は通常２〜３０、一般的には約２〜２５の 範囲にあるだろう。好ましい界面活性剤はポリオキシエチレン（４）ラウリルエ ーテル（ＢＲＩＪ ３０（登録商標）及びポリオキシエチレン（２０）モノソル ビタン モノ―オレイト（ツイーン ８０（登録商標）（ＴＷＥＥＮ ８０）で ある。本発明の製剤に存在する非イオン性界面活性剤の全量は、製剤の５〜６５ ％、一般的には５〜６０％（ｖ／ｖ）の範囲にあるだろう。ツイーン ８０（登 録商標）が製剤に存在する場合、一般的には総量で製剤の５〜６０％、より一般 的には約１０〜５０％（ｖ／ｖ）の範囲で存在するだろう。ＢＲＩＪ ３０（登 録商標）が製剤に存在する場合、一般的には総量で製剤の１０〜４５％、より一 般的には約１５〜４０％（ｖ／ｖ）の範囲で存在するだろう。 本発明の製剤は更に１種以上の補助溶媒、一般的にはせいぜい３種の異なる補 助溶媒、より一般的にはせいぜい２種の補助溶媒からなっていてもよく、適切な 補助溶媒は脂肪酸エステル類およびジオール類を含み、補助溶媒は１００％脂肪 酸エステル、１００％ジオールまたはそれらの組合わせであってもよい。製剤に 存在する補助溶媒の全量は約２０〜８０％（ｖ／ｖ）の範囲にあってよく、一般 的には約２５〜７５％（ｖ／ｖ）の範囲にあるだろう。製剤に存在するとき、本 発明の製剤中の溶媒に対する補助溶媒の割合は約１：１〜１５：１の範囲であっ てもよいが、一般的には約１：１〜１３：１の範囲にあるだろう。 本発明の製剤中で補助溶媒として働いてもよい脂肪酸エステル類は、脂肪酸の 炭化水素鎖の長さが炭素原子１２〜１８個、一般的には１４〜１８個の長さであ り、低級アルカノールのモノエステルであろう脂肪酸エステルである。適切な脂 肪酸エステル類は通常偶数の脂肪酸鎖からなり、炭化水素鎖は飽和または不飽和 であってよく、一般的にはせいぜい２個の不飽和部位を有している。興味のある 脂肪酸類は一般的には植物又は哺乳類起源であり、パルミチン酸エステル、ステ アリン酸エステル、パルミトレイン酸エステル、リノール酸エステル及びリノレ ン酸エステル等、特にミリスチン酸エステル及びオレイン酸エステルを含むだろ う。脂肪酸モノエステルのアルコールは炭素原子２〜４個の長さ、一般的には２ 〜３個の長さの、分岐しているかまたはしていない低級アルカノールであろう。 特に興味のある脂肪酸エステルは、ミリスチン酸イソプロピルエステル及びオレ イン酸エチルエステルである。ミリスチン酸イソプロピルエステルが存在すると き、ミリスチン酸イソプロピルエステルは全製剤の約５５〜７５％（ｖ／ｖ）の 範囲にあり、オレイン酸エチルエステルが存在するとき、オレイン酸エチルエス テルは全製剤の約３５〜７５％（ｖ／ｖ）の範囲にあるだろう。一般的に脂肪酸 エステルは、製剤中の界面活性剤の量と少なくともおおよそ等量（ｖ／ｖ）及び ８倍量まで存在するが、一般的には製剤中の界面活性剤量の５倍量（ｖ／ｖ）を 越えない。 又ジオール類も本発明の製剤中に存在してもよく、更に脂肪酸エステルの補助 溶媒の代わりに存在してもよい。補助溶媒として興味のあるジオール類は、通常 、生理学的温度で液体であり、かつ８〜２８個、一般的には１６〜２０個の炭素 原子を含み、前記ジオールはポリオキシアルキレンジオールであってもよく、こ の場合のアルキレンの炭素数は２〜３である。補助溶媒としての使用に適したジ オール類は、約２００〜８００ダルトン、通常約２００〜６５０ダルトンの範囲 にあってよい。特に興味のあるジオール類はポリエチレングリコール類、特にポ リエチレングリコール２００（ＰＥＧ₂₀₀）、ポリエチレングリコール４００ （ＰＥＧ₄₀₀）、ポリエチレングリコール６００（ＰＥＧ₆₀₀）等を含み、ＰＥＧ₄₀₀ が好ましい。本発明の製剤中に補助溶媒として存在するとき、ジオール類は 製剤の約５〜６０％（ｖ／ｖ）、一般的には５〜５５％（ｖ／ｖ）の範囲にある だろう。 非晶質のナノパーティクルの形成のために、望ましくは製剤において、低級ア ルカノールの全量は通常約２５〜６０重量％、より一般的には３０〜５０重量％ の範囲にあるだろう。アルキレンオキシ化合物（類）の全量は、約２０〜５０重 量％、より一般的には２５〜４０重量％の範囲にあるだろう。ポリオキシアルキ レン化合物の組合わせが使用される場合、脂肪酸エステル量は、通常ポリオキシ アルキレン化合物類の約２５〜１００％の範囲にあるだろう。 本発明の製剤において、補助溶媒そのものが、粘性、安定性等の物理的特性を 製剤に付与してもよい。所望の場合、製剤は更に所望の物理的特性を製剤に付与 する、例えば増粘剤、沈殿防止剤、凝固剤等の追加の剤からなっていてもよく、 前記剤はアラビアゴム、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセル ロース、レシチン、メチルセルロース、高分子量のポリエチレングリコール類、 例えば分子量が約１０００〜６０００、一般的には１０００〜５０００ダルトン の範囲にあるポリエチレングリコール、ポビドン、アルギン酸ナトリウム、トラ ガカントゴム等を含む。又、本発明の製剤には、様々な機能を提供する、例えば 酵素阻害剤、防腐剤、酸化防止剤、抗微生物剤及び安定剤等の多くの微量成分が 存在していてもよい。増粘剤及びその他の添加剤が製剤中に存在する場合、その 全量は製剤の５重量％、一般的には２重量％、より一般的には１重量％より多く ならないだろう。又当該技術分野において知られているように、多くの賦形剤が 本発明の製剤中に存在していてもよい。 本発明の製剤は広い温度範囲で安定であり、安定とは、製剤の物理的一体性が 保持されること、例えばシクロスポリンの活性な薬剤の結晶化が起こらないこと を意味している。冷凍貯蔵に使用する様な低温、典型的には約０〜１５℃、より 典型的には約２〜８℃といった低温は、本発明の製剤が安定である温度範囲内に 含まれる。 本発明の製剤はカプセル型、例えば硬及び軟カプセルでの投与に適している。 液体の製剤からなる硬カプセルを製造する方法は当該技術分野においては既知で あり、米国特許第４,８２２,６１８号及び４,５７６,２８４号明細書に記載され ており、これらの開示は参考文献として本明細書に組み込まれている。通常、本 発明の製剤に使用できる硬カプセルは、シェル成分及びキャップ成分の２つの部 分からなるだろう。シェル成分とキャップ成分とは一体に適合して、硬カプセル のシェル中に封止（sealed）された一定量の容積を有する密閉空間（cavity）を 生成する。シェル及びキャップ成分は、例えばデンプン又はゼラチン等の親水性 ポリマーから作製されてもよい。硬カプセルの調製において、液体の製剤をシェ ル成分に注ぎ、次いでシェル成分上にキャップ成分を適合させることによってカ プセルは封止されるだろう。２つの成分間の封止を確保してもよく、それによっ て、本明細書に参考文献として組み込まれている欧州特許出願第１１６７４４号 に記載されたシーラントを使用することによって、密閉された製剤のカプセルか らの漏出が防がれる。胃における崩壊を避けるため、本発明の製剤からなるカプ セルは、胃の酸性環境におけるカプセルの崩壊を阻害する腸溶性のコーティング で被覆されていてもよい。種々の腸溶性コーティングは当該技術分野においては 既知である。例えば本明細書に参考文献として組み込まれている米国特許第５, ２０６,２１９号明細書を参照のこと。 組成物、特にナノパーティクルを生成する製剤は、最初に低級アルカノール にシクロスポリンを溶解させることによって調製されるが、この場合、ポリオキ シアルキレン化合物の小部分が含まれていてもよく、この場合、通常シクロスポ リンの溶解に使用する組成物の約５０重量パーセントよりも低い。高温が使用さ れてもよく、通常は約６０〜９０℃の範囲である。シクロスポリンを溶解した後 、ポリアルキレンオキシ化合物の大部分を添加してもよく、適当な成分の添加に よって全製剤は所望の割合にされる。通常、シクロスポリンは低級アルカノール （任意にポリアルキレンオキシ化合物の一部分を含む）に約１：１.５〜 ５、 より一般的には１：２〜４の重量割合で溶解することができる。 本発明の製剤は免疫抑制療法に使用できる。免疫抑制療法は、突発性腎症症候 群(idiopathic nephrotic syndrome)、Ｉ型インスリン依存性糖尿病、ベーチェ ット症候群、活性クローン病（active Crohn's disease）、再生不良性貧血、重 度コルチコステロイド依存性喘息（severe corticosteroid-dependent asthma） 、乾癬、慢性関節リウマチ及び免疫系が病原の役割を果たしているかもしれない その他の疾患を含む広範囲の疾患において必要とされている。同種及び異種の臓 器、組織又は細胞の移植を含む移植の状況で、移植後の移植された臓器、組織又 は細胞の維持された生存度を保証するために、すなわち、骨髄移植後の移植片拒 絶反応又は移植片対受容者病を防ぐために免疫抑制療法が望まれる場合、本発明 の製剤の使用は特に興味の対象になる。 受容者に免疫抑制療法を提供するための本発明の製剤の使用において、シクロ スポリンの有効量は、処置される特定の状況に依存して、受容者における所望の 免疫抑制の水準を達成するように経口投与されるだろう。移植に関して、通常シ クロスポリンの初回量は手術前に投与されるだろう。提供者の臓器の受容者への 移植に続いて、シクロスポリンは繰り返して、すなわち長期的に、免疫抑制を維 持するために受容者に投与されるだろう。初回量は移植４〜１２時間前に投与さ れ、受容者１ｋｇ当たり１０〜１８ｍｇ、一般的には受容者１ｋｇ当たり１０〜 １５ｍｇの範囲で投与されてもよい。手術に続いて、初回量は１〜３週間、一般 的には１〜２週間、一般的には毎日を基本として続けられるだろう。次いで投薬 量は、１日当たり３〜１０ｍｇ／ｋｇ、一般的には１日当たり３〜６ｍｇ／ｋｇ の投薬量を維持するように次第に減らしてもよい。投与量が水準を維持するよう 次第に減らされる速度は、１週間当たり３〜８％の範囲であってもよく、一般的 には１週間当たり約５％であろう。投与量は典型的には、高速液体クロマトグラ フィー（HPLC）、放射線免疫検定法(RIA)、エリザ(ELISA)又はＴＤｘ法により測 定する最少血中濃度を１５０〜２５０ｎｇ／ｍｌに維持することを基礎として調 節されるだろう。本発明の製剤は追加の剤と共に投与されてもよく、この場合、 補助的な療法(adjunct therapy)が推奨され、これは当該技術分野において既知 である。例えば、本発明の製剤は副腎皮質コルチコステロイド、アザチオプリン 等と共に投与されてもよい。 提供者の臓器の受容者への移植に伴う本発明の製剤の投与は、結果として提供 者の臓器の存在に対する受容者の免疫反応の抑制の結果としての受容者における 提供者の臓器の生存能力の延長を起こす。提供者の臓器が受容者中で、移植と共 に免疫療法を使用しないときよりも長期間生存したままでいることは、「生存能 力の延長」を意味する。従って、生存能力の延長は無限の期間の生存能力の維持 を含む。提供者の臓器は受容者の環境において機能的に維持されている限り生存 能力があると考えられる。 使用者の便宜のために、適当量のシクロスポリン、１種以上の投薬レベル及び 補助溶媒、すなわち低級アルカノール（類）及びポリアルキレンオキシ化合物（ 類）、例えばエタノール及びプロピレングリコールの少なくとも１種ならびにポ リソルベート ８０（polysorbate 80）及びＰＥＧ４００の少なくとも１種を有 するキットが提供されてもよい。 以下に示す実施例は実例によって示されるが、限定する手段ではない。 実施例 本発明の発明に従い幾つかの経口用シクロスポリン製剤を調製した。次いで調 製したシクロスポリンのバイオアベイラビリティーをラット及びヒトにおいて観 察した。 Ｉ．経口用シクロスポリン製剤 以下に示す経口用シクロスポリンＡ製剤を調製した。それぞれにおいて、１０ ０ｍｇのシクロスポリンＡ(CsA)、表示した量の界面活性剤、示した量のエタノ ール又はプロピレングリコールを１.０ｍｌの容積測定用フラスコに加え、次い で適量の脂肪酸エステル及び／又はジオールを添加することによって最終容量１ .０ｍｌを達成した。 II．製剤１９〜２４及び３３〜４２についてのインビボにおけるバイオアベイビ リティーの研究 製剤１９〜２４及び３３〜４２におけるシクロスポリンのバイオアベイラビリ ティーを以下の様にして研究した。バイオアベイラビリティーの程度として、以 下の薬物動態学的パラメーター、（ａ）シクロスポリンのピークの血中濃度（Ｃ_max ）、（ｂ）Ｃ_maxを達成するために必要とした時間（Ｔ_max）及び血中濃度時 間―曲線時間（ＡＵＣ）下の面積を決定した。製剤１９〜２４及び３３〜４２に 加えて、類似の環境下のサンドイミュン(登録商標)経口用溶液におけるシクロス ポリンのバイオアベイラビリティーを比較する目的で観察した。前記各製剤につ いて、シクロスポリンＡを使用したことのない(CsA-naive)、体重２５０〜３５ ０ｍｇのスプラグ ダウレイ ラット(Sprague Dawley rats)に小球状にした標 準的な食料（アグウェイ（登録商標） ３０００（Agway 3000）、グランビルミ ル（Granville Mill）、グリーンスボロ（Greensboro）、ノースカロライナ（NC ））及び水を任意に与えた。実験１日前、シリコーンゴムのカニューレを軽度の エーテル麻酔のもと右頸静脈及び右大腿静脈に挿入した。一晩の断食後、 シクロスポリンＡを胃管ガバージュにより投与した。 投与に続いて、２００μｌの血液サンプルを頸静脈から０.３ｍｇの凍結乾燥 したＥＤＴＡナトリウムを含む０.５ｍｌのポリプロピレン製マイクロヒュージ 管（microfuge tube）内に集め、直ちに１０秒間ボルテックス（vortex）した。 経口用製剤を投与した動物に対するサンプリング時間は投与後０、０.５、１、 ２、４、８、１２、２４、３６、４８及び７２時間後であった。 代謝物を含め、シクロスポリンＡを全血中で、蛍光極性免疫検定法(fluoresce nt polarization immunoassay)(ＦＰＩ)(ＴＤｘ、アボット ラボ(Abbot Lab.)) により決定した。簡潔に述べると、１５０μｌの全血サンプルを定量的に１.５ ｍｌのマイクロヒュージ管に移した。細胞を溶解し、５０μｌの界面活性剤を含 有する可溶化剤で溶解した。次いでタンパク質を３００μｌのアセトニトリルを 用いて沈殿させた。遠心分離後、上清をアボット ダイアグノスティックス（Ab bott Diagnostics）が推奨する手順に従いＴＤｘ オートアナライザーにてＦＰ Ｉ法に付した。ＴＤｘ法は元来ヒトの血液用に開発されたので、推奨された手順 の幾つかを以下の様に改変した。一連の既知のシクロスポリンＡ濃度の標準溶液 を、既知量のシクロスポリンＡをＥＤＴＡで処理したラットの血液に添加するこ とによって調製した。サンプル中のシクロスポリンＡ濃度が１.０ｇ／ｍｌより も高いことが期待されたとき、血液サンプルをｐＨ７.０の０.１Ｍ リン酸緩衝 液で１０倍に希釈した。希釈したサンプルについて、ラット血液において体積で １０％である既知量のシクロスポリンＡ及び９０％のリン酸緩衝液を含む一連の 標準溶液を使用して別の較正曲線を作製した。 記述的な(descriptive)薬物動態学的パラメーターをノンコンパートメンタル 分析（non-compartmental analyses）によって得た。ピーク濃度（Ｃ_max）及び ピークの生じる時間（Ｔ_max）を、個々のラットについての修正していない濃度 −時間のプロフィールの精査により推定した。時間０から最終のデータ点（ＡＵ Ｃ（０→ｔ））の血中濃度―時間曲線（ＡＵＣ）下の面積を直線台形手順（line ar trapezoidal procedure）に従い計算した。血中濃度―時間曲線の尾部（tail ）下の残りの面積（ＡＵＣ（ｔ→∞））を、濃度―時間プロフィールの末端の脱 離相（terminal elimination phase）と関係した一次速度定数（first- order rate constant）（λ_z）に対する最終の認められた濃度（Ｃ^*）の割合と して推定した。速度定数λ_zを、濃度―時間プロフィールの明らかな末端の対数 ―直線相（すなわち、最終の３〜５点で、分析下のプロフィールに依存する）に おける濃度―時間データの対数―直線回帰によって決定した。全ＡＵＣ（ＡＵＣ （ｔ→∞））をＡＵＣ（０→ｔ）及びＡＵＣ（ｔ→∞）の和としてとった。 個々の製剤の結果をＳＯについて得られた結果と比較し、図１〜３に示す。結 果は、製剤の大部分では、本発明の製剤の高いＡＵＣ値に示される様に、サンド イミュン（登録商標）経口用溶液（ＳＯ）と比較して、本発明の製剤についてシ クロスポリンの高いバイオアベイラビリティーが達成された。 III．製剤３５、４３〜４６及び４８〜５２のインビボでのヒトにおけるバイオ アベイラビリティー 理想体重の偏りがせいぜい２０％を越えず、年齢が１９〜５５歳の４８人の健 康な男性を試験の被験者として使用した。単一投与で、断食した、無作為抽出し た、二重盲検法による、スリーウェイクロスオーバースタディ（three-waycross over study)を行った。４８人の被験者を８人の被験者からなる６つの群に無作 為抽出した。各群は、３つの異なる状況において、前記製剤又はサンドイミュン （登録商標）経口用溶液（ＳＯ）から１回に３００ｍｇのシクロスポリンを受け 、各状況は７日間のウオッシュアウト期間（washout period）により分離した。 被験者は投与１０時間前及び４時間後に断食を要求された。投与１時間前から 投与２時間後を除いて、試験中、水は随意摂取させた。投与前、１５ｍｌの血液 サンプルを採取した。投与については、製剤の３ｍｌのアリコート（３００ｍｇ ）を２００ｍｌのチョコレートミルクと組合わせ摂取させた。１０ｍｌの血液サ ンプルを０、０.５、１、１．５、２、３、４、６、８、１０、１２、１６、２ ０及び２４時間に採取した。又、ポストスタディ用の１５ｍｌの血液サンプルを 採取した。 全血中のシクロスポリンＡ濃度を、製造者の指示に従い、ＴＤｘ（アボットダ イアグノスティックス、エヌ．シカゴ(N.Chicago)、イリノイ（ＩＬ））を使 用して分析した。 ノンコンパートメンタルな薬物動態学は標準的な方法の使用に由来した。全血 中の濃度の最大値（Ｃ_max）及びそれが起こった時間（Ｔ_max）は濃度―時間のデ ータから編集した。血中濃度時間曲線（ＡＵＣ）下の面積を、感度の限界（２５ ｎｇ／ｍｌ）よりも上の最後の血中濃度に対して直線台形則(linear trapezoida l rule)によって計算し、無限に外挿した。 各製剤に対して認められたＣ_max、Ｔ_max、及びＡＵＣ値を平均化した。各製剤 に対する平均値を図４〜６に示した。結果は、試験した各製剤について、Ｃ_max が、同じ条件下のサンドイミュン（登録商標）経口用溶液（ＳＯ）の少なくとも ２倍の速さで起こったことを示している。更に、試験した製剤について認められ たＡＵＣは、２０００ｎｇ・ｈｒ／ｍｌであり、同じ条件下のサンドイミュン（ 登録商標）経口用溶液（ＳＯ）について認められた値よりも大きかった。これら の結果に基づくと、製剤３５、４３〜４６及び４８〜５２は、サンドイミュン（ 登録商標）経口用溶液（ＳＯ）よりも高いバイオアベイラビリティーを提供した 。 水性媒体中に希釈している非晶質のナノパーティクルの形成のための製剤を調 製した。 IV．ナノパーティクル製剤 Ａ．５ｇのシクロスポリンＡを５ｍｌのエタノールに添加した。混合物を攪拌 し、シクロスポリンＡの溶解を完了した。得られた溶液に、２５ｇのポリソルベ ート ８０を添加し、次いで１，２−プロピレングリコールを添加することによ って容積を５０ｍｌにした。混合物を均一な溶液が形成されるまで室温下で充分 に攪拌した。 Ｂ．５ｇのシクロスポリンＡを５ｍｌのエタノールに添加した。混合物をシク ロスポリンＡの溶解が完了するまで攪拌した。得られた溶液に、１５ｇのポリソ ルベート ８０を添加し、次いで１，２−プロピレングリコール及びポリエチレ ングリコール ４００の混合物を添加することによって容積を５０ｍｌにした。 混合物を均一な溶液が形成されるまで室温下で充分に攪拌した。 Ｃ．実施例１で得た溶液１ｍｌを、ヒトにおける濃縮エマルション又はマイク ロエマルションの経口投与に推奨されるので、ガラスシリンジを用いて水５０ｍ ｌに添加した。溶液の添加に続いて、急速な溶解が起こり、次いでコロイド懸濁 液の様な青い反射(blue reflect)(チンダル効果)を有する微小粒子の白い懸濁液 を得た。２６，０００ｇで５時間の遠心分離の後、沈殿物を水で洗浄し、２６， ０００ｇで２４時間遠心分離した。洗浄及び遠心分離工程を同じ条件下で２回繰 り返した。乾燥後、Ｘ線粉末ダイアグラム（x-ray powder diagram）を行った。 固体は専ら非晶質形であった。 沈殿物を走査型電子顕微鏡により調べた。沈殿物は凝集体として存在する２０ ０〜４００ｎｍの直径を有する非晶質の球状のナノパーティクルから構成されて いた。 Ｄ．実施例１で得た溶液２ｍｌを水１００ｍｌに添加し、次いで回折／拡散レ ーザーグラニュロメーター(diffraction/diffusion laser granulometer)(マル バーン エスビー．オーディー（Malvern SB.OD)）により希釈１０分及び１時間 後に調べた。 １時間後、２つの粒子群が認められた。１つは７０重量％の平均直径３００ｎ ｍのシクロスポリンＡを表し、２つめは３０重量％の、多分ナノパーティクルの 凝集体を構成している平均直径２０ｎｍのシクロスポリンＡを表していた。 Ｅ．実施例１で得た溶液１ｍｌを５０ｍｌの水に添加し、得られたコロイド懸 濁液を１０分間懸濁した。 次いで懸濁液を人工酸性胃液(artificial acidic gastric juice)２００ｍｌ に添加し３７℃で加温した。均一なコロイド懸濁液を回折／拡散レーザーグラニ ュロメーター（マルバーン エスビー．オーディー）により調べた。懸濁液は専 ら平均直径６００ｎｍを有するナノパーティクルから構成されていた。 Ｆ．実施例１で得た溶液１ｍｌを２００ｍｌの人工酸性胃液に直接添加した。 均一な懸濁液を３７℃に加温し、直ちに回折／拡散レーザーグラニュロメータ ー（マルバーン エスビー．オーディ）により調べた。懸濁液は専ら平均直径３ ５０ｎｍを有するナノパーティクルから構成されていた。 前記の結果及び検討より、高いバイオアベイラビリティーを有する新規のシク ロスポリン製剤が提供されることは明らかである。本発明の製剤は高濃度のシク ロスポリンからなり、通常冷凍において使用される低温を含む広い温度範囲で貯 蔵安定性を有することができる。本発明の製剤は硬カプセル型を含むカプセル型 において放出されやすく、これは貯蔵及び取扱いの容易さを提供する。又、製剤 はシクロスポリンの高められたバイオアベイラビリティーを生じる非晶質のナノ パーティクルを提供する。 本明細書において引用された全ての刊行物及び特許出願はは、あたかもそれぞ れの独立した刊行物又は特許出願が詳細かつ明確に示されリファレンスに組み込 まれているようにリファレンスに組み込まれている。 前記発明は、理解を明確にする目的のために実例及び実施例によって幾分明確 に記載されているけれども、変化及び改変は、添付した請求項の精神又は範囲か ら離れることなくなされてもよいことは、本発明の教示を鑑みた当業者にとって 容易に明白になるだろう。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (31)優先権主張番号 ０８／６２２，５１６ (32)優先日 1996年３月25日 (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 チョー ムー ジェイ アメリカ合衆国 ノースカロライナ州 27514 チャペル ヒル ウィンドーヴァ ー ドライヴ 202 (72)発明者 レヴィ ラルフ イー アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94566 プレザントン アンバー レーン 6637 (72)発明者 ポーレッティー フィリップ ジェイ アメリカ合衆国 カリフォルニア州 94027 アサートン オーデル プレイス ３ (72)発明者 フロック ロベール フランス エフ−44300 ナント アベニ ュー ドーレイ ９ (72)発明者 メルル クリスチャン フランス エフ−86000 ポワティエール アンパス サント ラデゴンド ７

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．シクロスポリン、炭素数２〜３の少なくとも１種のアルカノール溶媒及び少 なくとも１種の非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤からなるシクロスポ リン製剤であって、該界面活性剤はポリオキシエチレンアルコール及び炭素数４ 〜６のエトキシ化ポリオールの脂肪酸モノエステルからなる群より選ばれること を特徴とするシクロスポリン製剤。 ２．更に低級アルカノールのモノエステル、炭素数１４〜１８の脂肪酸及び炭素 数８〜２８のジオールからなる群より選ばれる少なくとも１種の補助溶媒を含む 請求の範囲第１項記載の製剤。 ３．前記アルカノール溶媒が前記製剤の約５〜７５％（ｖ／ｖ）であり、前記少 なくとも１種の非イオン性ポリオキシアルキレン界面活性剤が前記製剤の約５〜 ６５％（ｖ／ｖ）であり、かつ前記少なくとも１種の補助溶媒が前記製剤の約２ ０〜８０％（ｖ／ｖ）である請求の範囲第１項記載の製剤。 ４．シクロスポリン製剤であって、シクロスポリンＡと、エタノール及びプロピ レングリコールからなる群より選ばれ、前記製剤の約５〜７５％（ｖ／ｖ）であ る少なくとも１種のアルカノール溶媒と、ポリオキシエチレンアルコール及びエ トキシ化ソルビタンのモノエステルからなる群より選ばれ、前記製剤の約５〜６ ５％（ｖ／ｖ）である少なくとも１種の非イオン性ポリオキシエチレン界面活性 剤と、炭素数２〜４の低級アルカノール及び炭素数１４〜１８の脂肪酸のエステ ルであり、前記製剤の約２０〜８０％（ｖ／ｖ）である少なくとも１種の補助溶 媒とからなることを特徴とするシクロスポリン製剤。 ５．前記非イオン性界面活性剤がポリオキシエチレン（４）ラウリルエーテル及 びポリオキシエチレン（２０）モノソルビタンモノオレイトからなる群より選ば れ、前記脂肪酸エステルがミリスチン酸イソプロピル及びオレイン酸エチルから なる群より選ばれ、かつ前記製剤が２種の補助溶媒からなり、前記補助溶媒の１ 種は炭素数８〜２８のジオールである請求の範囲第４項記載の製剤。 ６．経口用シクロスポリン製剤であって、濃度が約５０〜１５０ｍｇ／ｍｌの範 囲にあるシクロスポリンＡ、エタノール及びプロピレングリコールからなり、前 記製剤の約５〜７５％（ｖ／ｖ）であるアルカノール溶媒成分、及び前記製 剤の約１０〜５０％（ｖ／ｖ）であるエトキシ化ソルビタンのモノエステルから なることを特徴とするシクロスポリン製剤。 ７．前記エタノールが前記製剤の約５〜２０％（ｖ／ｖ）である請求の範囲第６ 項記載の製剤。 ８．前記プロピレングリコールが前記製剤の約１０〜５０％（ｖ／ｖ）である請 求の範囲第６項記載の製剤。 ９．請求の範囲第１項記載の経口用製剤を含む硬カプセルからなる硬カプセルシ クロスポリン製剤。 10．シクロスポリンナノパーティクルの水性分散体であって、存在する少なくと も５０重量％のシクロスポリンが約１μｍ未満の粒子であり、かつ該シクロスポ リンが非晶質であることを特徴とする水性分散体。 11．少量の低級アルカノール及び少なくとも１種のポリオキシエチレン界面活性 剤を含有する請求の範囲第１０項記載の分散体。 12．前記低級アルカノールが、エタノール及びプロピレングリコールの少なくと も１種であり、かつ前記ポリオキシエチレン化合物がポリソルベート８０である 請求の範囲第１１項記載の分散体。 13．シクロスポリン、エタノール及びプロピレングリコールの少なくとも１種並 びにポリソルベート８０及びＰＥＧ４００の少なくとも１種を含むことを特徴と するキット。 14．請求の範囲第１０項記載のシクロスポリン粒子の水性分散体を調製する方法 であって、エタノール及びプロピレングリコールの少なくとも１種とシクロスポ リンとを組合わせて溶液を形成すること、該溶液とポリエチレンオキシ界面活性 剤とを組合わせて第２の溶液を形成させ、水で希釈すると、該シクロスポリンの 非晶質のナノパーティクルを形成することを特徴とする方法。