JPH1081692A - 新規化合物ｆｅ３５ａおよびｂ、その製造法およびその用途 - Google Patents
新規化合物ｆｅ３５ａおよびｂ、その製造法およびその用途Info
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- JPH1081692A JPH1081692A JP8255333A JP25533396A JPH1081692A JP H1081692 A JPH1081692 A JP H1081692A JP 8255333 A JP8255333 A JP 8255333A JP 25533396 A JP25533396 A JP 25533396A JP H1081692 A JPH1081692 A JP H1081692A
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- Japan
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- fe35a
- methanol
- fe35b
- chloroform
- compound
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- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】抗腫瘍活性を有する新規化合物を提供する。
【解決手段】化合物ＦＥ３５ＡおよびＦＥ３５Ｂは、ス
トレプトミセス ロチェイ３２１８−ＧＭ２株（生命
ＦＥＲＭ Ｐ−１５７２０号）の培養によって得られ、
ＦＥ３５Ａは分子量５４９、分子式Ｃ30Ｈ31ＮＯ9 、ま
たＦＥ３５Ｂは分子量５７７、分子式Ｃ31Ｈ31ＮＯ10の
化合物である。
トレプトミセス ロチェイ３２１８−ＧＭ２株（生命
ＦＥＲＭ Ｐ−１５７２０号）の培養によって得られ、
ＦＥ３５Ａは分子量５４９、分子式Ｃ30Ｈ31ＮＯ9 、ま
たＦＥ３５Ｂは分子量５７７、分子式Ｃ31Ｈ31ＮＯ10の
化合物である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は新規化合物ＦＥ３５
ＡおよびＢの製造法及びその用途に関する。本発明の化
合物は、細胞増殖抑制作用を有し、悪性腫瘍に対する化
学療法剤として使用される生物活性物質として期待され
る。
ＡおよびＢの製造法及びその用途に関する。本発明の化
合物は、細胞増殖抑制作用を有し、悪性腫瘍に対する化
学療法剤として使用される生物活性物質として期待され
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、悪性腫瘍に対する化学療法剤とし
てはアドリアマイシン、ブレオマイシン、シスプラチ
ン、エトポシド等が知られている。
てはアドリアマイシン、ブレオマイシン、シスプラチ
ン、エトポシド等が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、副作用、薬剤
耐性あるいは固形癌への有効性等の問題から、これらの
用途に適する新規化合物の発明が待たれている。
耐性あるいは固形癌への有効性等の問題から、これらの
用途に適する新規化合物の発明が待たれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らは微
生物の代謝産物について種々検索した結果、ストレプト
ミセス属に属する一菌株が動物細胞に対する強い増殖抑
制作用を有する新規化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを産生す
ることを見い出した。
生物の代謝産物について種々検索した結果、ストレプト
ミセス属に属する一菌株が動物細胞に対する強い増殖抑
制作用を有する新規化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを産生す
ることを見い出した。
【０００５】本発明は、上記知見に基いて完成されたも
のである。上記新規化合物ＦＥ３５ＡおよびＢは、スト
レプトミセス属に属するＦＥ３５ＡおよびＢの生産菌を
培養し、目的化合物を生成、蓄積せしめ、この培養物よ
り化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを採取することにより得ら
れる。
のである。上記新規化合物ＦＥ３５ＡおよびＢは、スト
レプトミセス属に属するＦＥ３５ＡおよびＢの生産菌を
培養し、目的化合物を生成、蓄積せしめ、この培養物よ
り化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを採取することにより得ら
れる。
【０００６】ＦＥ３５ＡおよびＦＥ３５Ｂの生産菌の代
表的なものとして３２１８−ＧＭ２株（生工研菌寄第１
５７２０号、ＦＥＲＭ Ｐ−１５７２０、以下３２１８
−ＧＭ２株と略す）が挙げられる。この菌株は放射線の
照射などの常法により変異させ、変異株の中より、より
良い生産性の菌株を得ることもできる。
表的なものとして３２１８−ＧＭ２株（生工研菌寄第１
５７２０号、ＦＥＲＭ Ｐ−１５７２０、以下３２１８
−ＧＭ２株と略す）が挙げられる。この菌株は放射線の
照射などの常法により変異させ、変異株の中より、より
良い生産性の菌株を得ることもできる。
【０００７】
【発明の実施の形態】新規化合物ＦＥ３５ＡおよびＦＥ
３５Ｂは酸と塩を作り、本発明において薬理学上許容さ
れる塩とは塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩およびＰ
−トルエンスルホン酸塩等を示す。以下に３２１８−Ｇ
Ｍ２株の菌学的性状を示す。 １．形態的性質
３５Ｂは酸と塩を作り、本発明において薬理学上許容さ
れる塩とは塩酸塩、硝酸塩、硫酸塩、リン酸塩およびＰ
−トルエンスルホン酸塩等を示す。以下に３２１８−Ｇ
Ｍ２株の菌学的性状を示す。 １．形態的性質
【０００８】本菌株の基生菌糸は分断しない。基菌糸は
主軸を形成し、それより不規則に分枝した先端に、１０
〜５０個またはそれ以上からなる螺旋状、ループ状の胞
子鎖を形成する。胞子は非運動性で、円柱形あるいは卵
形を呈し、幅０．４〜０．５、長さ０．６〜０．８μｍ
で胞子表面は平滑である。菌核、胞子嚢、その他の特殊
形態は観察されない。細胞壁化学型はＩ型である。
主軸を形成し、それより不規則に分枝した先端に、１０
〜５０個またはそれ以上からなる螺旋状、ループ状の胞
子鎖を形成する。胞子は非運動性で、円柱形あるいは卵
形を呈し、幅０．４〜０．５、長さ０．６〜０．８μｍ
で胞子表面は平滑である。菌核、胞子嚢、その他の特殊
形態は観察されない。細胞壁化学型はＩ型である。
【０００９】２．生理学的性質 １ 生育温度範囲：２０〜３７℃ ２ 硝酸塩の還元：陰性 ３ ゼラチンの液化：陰性 ４ スターチの加水分解：陰性 ５ 脱脂粉乳の凝固：陰性 ６ 脱脂粉乳のペプトン化：陽性 ７ メラニン様色素の生成：陰性 ３．炭素源の利用性 Ｄ−グルコース：＋ Ｌ−アラビノース：− Ｄ−キシロース：＋ Ｄ−フラクトース：± シュクロース：± Ｌ−ラムノース：− ラフィノース：− イノシトール：＋ Ｄ−マンニトール：−
【００１０】４．細胞壁の化学型 細胞壁の化学型はＩ型である。以上を要約すると、本菌
株は細胞壁化学型がＩ型であり、基生菌糸は分断せず、
気菌糸は主軸を形成し、それより不規則に分枝した先端
に、１０〜５０個またはそれ以上からなる螺旋状、ルー
プ状の胞子鎖を形成する。胞子は非運動性で、円柱形あ
るいは卵形を呈し、幅０．４〜０．５μｍ、長さ０．６
〜０．８μｍで胞子表面は平滑である。菌核、胞子嚢、
その他の特殊形態は観察されない。集落表面の菌叢色は
灰色系列で裏面色は不鮮明色を呈し、ｐＨでは変化しな
い。拡散性色素は認められない。炭素源の利用性はグル
コース、キシロース、イノシトールを利用する。本菌株
の形態的性状と細胞壁化学型から本菌株はストレプトミ
セス属に位置する。
株は細胞壁化学型がＩ型であり、基生菌糸は分断せず、
気菌糸は主軸を形成し、それより不規則に分枝した先端
に、１０〜５０個またはそれ以上からなる螺旋状、ルー
プ状の胞子鎖を形成する。胞子は非運動性で、円柱形あ
るいは卵形を呈し、幅０．４〜０．５μｍ、長さ０．６
〜０．８μｍで胞子表面は平滑である。菌核、胞子嚢、
その他の特殊形態は観察されない。集落表面の菌叢色は
灰色系列で裏面色は不鮮明色を呈し、ｐＨでは変化しな
い。拡散性色素は認められない。炭素源の利用性はグル
コース、キシロース、イノシトールを利用する。本菌株
の形態的性状と細胞壁化学型から本菌株はストレプトミ
セス属に位置する。
【００１１】以上の諸性状を基に「細菌名承認リスト、
１９８０」及びそれ以後の有効名リストに記載されたス
トレプトミセス属の種について検索し、本菌株をストレ
プトミセス・ロチェイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒ
ｏｃｈｅｉ）に含まれる一菌株と同定し、ストレプトミ
セス・ロチェイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｃｈ
ｅｉ）３２１８−ＧＭ２と命名した。該菌株は、工業技
術院生命工学工業技術研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１５７
２０として寄託されている。
１９８０」及びそれ以後の有効名リストに記載されたス
トレプトミセス属の種について検索し、本菌株をストレ
プトミセス・ロチェイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒ
ｏｃｈｅｉ）に含まれる一菌株と同定し、ストレプトミ
セス・ロチェイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｃｈ
ｅｉ）３２１８−ＧＭ２と命名した。該菌株は、工業技
術院生命工学工業技術研究所に、ＦＥＲＭ Ｐ−１５７
２０として寄託されている。
【００１２】本発明による化合物ＦＥ３５ＡおよびＢの
生産には上記の３２１８−ＧＭ２株による発酵が実施さ
れる。本菌株の培養は２０〜３７℃好ましくは２０〜３
０℃の温度範囲で通常の放線菌の培養に適切な水溶性栄
養源を含む培地中にて好気条件下で実施される。
生産には上記の３２１８−ＧＭ２株による発酵が実施さ
れる。本菌株の培養は２０〜３７℃好ましくは２０〜３
０℃の温度範囲で通常の放線菌の培養に適切な水溶性栄
養源を含む培地中にて好気条件下で実施される。
【００１３】本培養の目的に供される培地としては放線
菌が利用できる栄養源を含めばよく、培地組成としてグ
ルコース、フルクトース、シュクロースなどの糖類、澱
粉およびグリセリンなどの炭素源およびカゼイン、ポリ
ペプトン、大豆粉、乾燥酵母などの有機態窒素もしくは
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの無機態窒素
などの窒素源が単独ないしは併合して用いることができ
る。
菌が利用できる栄養源を含めばよく、培地組成としてグ
ルコース、フルクトース、シュクロースなどの糖類、澱
粉およびグリセリンなどの炭素源およびカゼイン、ポリ
ペプトン、大豆粉、乾燥酵母などの有機態窒素もしくは
硫酸アンモニウム、塩化アンモニウムなどの無機態窒素
などの窒素源が単独ないしは併合して用いることができ
る。
【００１４】さらに塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、
硫酸鉄、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、各種ビタミンな
どを生育促進および調節の目的で利用することも可能で
あり、必要に応じてシリコーン、植物油あるいは合成消
泡剤を培地に添加し発泡を防ぐことも可能である。３２
１８−ＧＭ２株の保存は凍結乾燥、寒天斜面培地などに
継代するなど種々の方法が可能である。
硫酸鉄、硫酸マグネシウム、硫酸亜鉛、各種ビタミンな
どを生育促進および調節の目的で利用することも可能で
あり、必要に応じてシリコーン、植物油あるいは合成消
泡剤を培地に添加し発泡を防ぐことも可能である。３２
１８−ＧＭ２株の保存は凍結乾燥、寒天斜面培地などに
継代するなど種々の方法が可能である。
【００１５】化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを生産する場
合、寒天斜面培地より１白金耳胞子をかきとり、振騰フ
ラスコに移植し２〜５日、約２５〜約３０℃で培養し種
菌とする。本培養のスケールに応じて種培養を繰り返
し、種菌を大量に得ることもできる。本培養に際しては
このようにして得られた種菌を一定量発酵容器に接種
し、約２０〜３５℃好ましくは約２５〜約３０℃で３〜
６日間通気撹拌する。
合、寒天斜面培地より１白金耳胞子をかきとり、振騰フ
ラスコに移植し２〜５日、約２５〜約３０℃で培養し種
菌とする。本培養のスケールに応じて種培養を繰り返
し、種菌を大量に得ることもできる。本培養に際しては
このようにして得られた種菌を一定量発酵容器に接種
し、約２０〜３５℃好ましくは約２５〜約３０℃で３〜
６日間通気撹拌する。
【００１６】得られた培溶液を遠心分離またはろ過など
の手段により菌体と培養ろ液とに分け、菌体はアセト
ン、メタノールなど水と混じる溶媒にて抽出する。抽出
液は減圧下にて溶媒を留去し、培養ろ液と混合する。か
くして得られた化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを含む水溶液
をダイアイオンＨＰ−２０（商品名）などを用いたカラ
ムに吸着後、含水アセトンなどの溶離液で目的物質を溶
出する。溶出液は減圧下にて有機溶媒を除去する。この
水懸濁液に、酢酸エチル、クロロホルムなどの溶媒を加
えて目的化合物を有機溶媒層に抽出する。必要ならば有
機溶媒層を飽和食塩水などの溶液にて洗浄すれば水溶性
の不純物などの除去に効果がある。この抽出液を無水硫
酸ナトリウム等で脱水した後溶媒を留去すれば、化合物
ＦＥ３５ＡおよびＢを含む抽出物を得ることができる。
さらに、化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを精製するためには
通常の脂溶性低分子物質の精製手段を適用できる。たと
えばクロロホルム―メタノールを展開溶媒とするシリカ
ゲルクロマトグラフィーを行い、得られた活性画分を各
々濃縮乾固する。最後に逆相ＨＰＬＣを行うことにより
黄色結晶ＦＥ３５ＡおよびＦＥ３５Ｂを別々に単離す
る。
の手段により菌体と培養ろ液とに分け、菌体はアセト
ン、メタノールなど水と混じる溶媒にて抽出する。抽出
液は減圧下にて溶媒を留去し、培養ろ液と混合する。か
くして得られた化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを含む水溶液
をダイアイオンＨＰ−２０（商品名）などを用いたカラ
ムに吸着後、含水アセトンなどの溶離液で目的物質を溶
出する。溶出液は減圧下にて有機溶媒を除去する。この
水懸濁液に、酢酸エチル、クロロホルムなどの溶媒を加
えて目的化合物を有機溶媒層に抽出する。必要ならば有
機溶媒層を飽和食塩水などの溶液にて洗浄すれば水溶性
の不純物などの除去に効果がある。この抽出液を無水硫
酸ナトリウム等で脱水した後溶媒を留去すれば、化合物
ＦＥ３５ＡおよびＢを含む抽出物を得ることができる。
さらに、化合物ＦＥ３５ＡおよびＢを精製するためには
通常の脂溶性低分子物質の精製手段を適用できる。たと
えばクロロホルム―メタノールを展開溶媒とするシリカ
ゲルクロマトグラフィーを行い、得られた活性画分を各
々濃縮乾固する。最後に逆相ＨＰＬＣを行うことにより
黄色結晶ＦＥ３５ＡおよびＦＥ３５Ｂを別々に単離す
る。
【００１７】このようにして得られた化合物ＦＥ３５Ａ
およびＢは各々下記に示すような物理化学的性状を有す
る。 ＦＥ３５Ａ (1) 外観：黄色結晶 (2) 分子量：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ５５０( Ｍ＋Ｈ) + (3) 分子式：Ｃ30Ｈ31ＮＯ9 (4) 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、メタ
ノール、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。 (5) 呈色反応：リンモリブデン酸−硫酸、ヨウ素蒸気反
応に陽性。 (6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ク
ロロホルム：メタノール（１０：１）の展開溶媒で０．
４３を示す。 (7) 赤外吸収スペクトル：V ｍａｘ（ＫＢｒ) ：３３７
０，１７１０，１６２０ｃｍ-1 (8)1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重メタノール中で測定した
スペクトルを図１に示す。 ＦＥ３５Ｂ (1) 外観：黄色結晶 (2) 分子量：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ５７８( Ｍ＋Ｈ) + (3) 分子式：Ｃ31Ｈ31ＮＯ10 (4) 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、メタ
ノール、アセトン、クロロホルムに可溶、ヘキサン、水
に不溶。 (5) 呈色反応：リンモリブデン酸―硫酸、ヨウ素蒸気反
応に陽性。 (6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ク
ロロホルム：メタノール（１０：１）の展開溶媒で０.
５８を示す。 (7) 赤外吸収スペクトル：V ｍａｘ（ＫＢｒ) ：３４０
０，３３７０，１７１５，１６２０ｃｍ-1 (8)1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で測定し
たスペクトルを図２に示す。
およびＢは各々下記に示すような物理化学的性状を有す
る。 ＦＥ３５Ａ (1) 外観：黄色結晶 (2) 分子量：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ５５０( Ｍ＋Ｈ) + (3) 分子式：Ｃ30Ｈ31ＮＯ9 (4) 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、メタ
ノール、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。 (5) 呈色反応：リンモリブデン酸−硫酸、ヨウ素蒸気反
応に陽性。 (6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ク
ロロホルム：メタノール（１０：１）の展開溶媒で０．
４３を示す。 (7) 赤外吸収スペクトル：V ｍａｘ（ＫＢｒ) ：３３７
０，１７１０，１６２０ｃｍ-1 (8)1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重メタノール中で測定した
スペクトルを図１に示す。 ＦＥ３５Ｂ (1) 外観：黄色結晶 (2) 分子量：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ５７８( Ｍ＋Ｈ) + (3) 分子式：Ｃ31Ｈ31ＮＯ10 (4) 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、メタ
ノール、アセトン、クロロホルムに可溶、ヘキサン、水
に不溶。 (5) 呈色反応：リンモリブデン酸―硫酸、ヨウ素蒸気反
応に陽性。 (6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるRf値：ク
ロロホルム：メタノール（１０：１）の展開溶媒で０.
５８を示す。 (7) 赤外吸収スペクトル：V ｍａｘ（ＫＢｒ) ：３４０
０，３３７０，１７１５，１６２０ｃｍ-1 (8)1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で測定し
たスペクトルを図２に示す。
【００１８】
【作用】化合物ＦＥ３５ＡおよびＢのヒト卵巣癌細胞
（Ａ２７８０）に対する増殖抑制作用を検討した。ヒト
卵巣癌細胞を１．５Ｘ１０４個／ｗｅｌｌの割合で９６
穴テストプレートに播種し、３７℃, ５％ＣＯ２インキ
ュベーター内で２４時間培養した後、本化合物をそれぞ
れ種々の濃度で培養液に添加した。７２時間後、ＭＴＴ
法により本化合物のヒト卵巣癌細胞に対する増殖抑制率
を求めた。 増殖抑制率( ＧＩ) ％＝( １−Ｘ／Ｃ) ｘ１００ Ｃ：コントロール吸光度、Ｘ：サンプル吸光度 結果を表１および２に示した。
（Ａ２７８０）に対する増殖抑制作用を検討した。ヒト
卵巣癌細胞を１．５Ｘ１０４個／ｗｅｌｌの割合で９６
穴テストプレートに播種し、３７℃, ５％ＣＯ２インキ
ュベーター内で２４時間培養した後、本化合物をそれぞ
れ種々の濃度で培養液に添加した。７２時間後、ＭＴＴ
法により本化合物のヒト卵巣癌細胞に対する増殖抑制率
を求めた。 増殖抑制率( ＧＩ) ％＝( １−Ｘ／Ｃ) ｘ１００ Ｃ：コントロール吸光度、Ｘ：サンプル吸光度 結果を表１および２に示した。
【００１９】
【表１】
【表２】 化合物ＦＥ３５ＡおよびＦＥ３５Ｂのヒト卵巣癌細胞に
対する増殖抑制作用のＩＣ５０値は０．５４μｇ／ｍｌ
および１．００μｇ／ｍｌであった。
対する増殖抑制作用のＩＣ５０値は０．５４μｇ／ｍｌ
および１．００μｇ／ｍｌであった。
【００２０】上記のように、化合物ＦＥ３５ＡおよびＦ
Ｅ３５Ｂは抗腫瘍作用を有するので、抗腫瘍剤として使
用できる。
Ｅ３５Ｂは抗腫瘍作用を有するので、抗腫瘍剤として使
用できる。
【００２１】抗腫瘍剤として使用する場合の製剤化およ
び投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すな
わち、投与方法として注射、経口、直腸投与などが可能
である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠
剤、座剤などの形態がとり得る。
び投与方法は従来公知の種々の方法が適用できる。すな
わち、投与方法として注射、経口、直腸投与などが可能
である。製剤形態としては注射剤、粉末剤、顆粒剤、錠
剤、座剤などの形態がとり得る。
【００２２】製剤化の際に化合物ＦＥ３５ＡおよびＢに
悪影響を与えない限り、医薬品に用いられる種々の補助
剤、すなわち担体やその他の助剤、たとえば安定剤、防
腐剤、無痛化剤、乳化剤などが必要に応じて使用されう
る。製剤において、化合物ＦＥ３５ＡおよびＢの含量
は、製剤形態等により広範囲に変えることが可能であ
り、一般には化合物ＦＥ３５ＡないしはＢを０．０１〜
１００％（重量）、好ましくは０．１〜７０％（重量）
含有し、残りは通常医薬用に使用される担体その他の補
助剤からなる。
悪影響を与えない限り、医薬品に用いられる種々の補助
剤、すなわち担体やその他の助剤、たとえば安定剤、防
腐剤、無痛化剤、乳化剤などが必要に応じて使用されう
る。製剤において、化合物ＦＥ３５ＡおよびＢの含量
は、製剤形態等により広範囲に変えることが可能であ
り、一般には化合物ＦＥ３５ＡないしはＢを０．０１〜
１００％（重量）、好ましくは０．１〜７０％（重量）
含有し、残りは通常医薬用に使用される担体その他の補
助剤からなる。
【００２３】化合物ＦＥ３５ＡおよびＢの投与量は症状
等により異なるが、成人１人１日当たり０．０１〜８０
０ｍｇ程度である。連投を必要とする場合には１日当た
り使用量を抑えることが望ましい。以下本発明の化合物
の製法を実施例により示す。
等により異なるが、成人１人１日当たり０．０１〜８０
０ｍｇ程度である。連投を必要とする場合には１日当た
り使用量を抑えることが望ましい。以下本発明の化合物
の製法を実施例により示す。
【００２４】
実施例１ （１）発酵 大豆粉１．５％、ペプトン０．５％、酵母エキス０．０
５％、グリセリン２％、グルコース０．５％、硫酸マグ
ネシウム０．００５％、リン酸１カリウム０．０５％、
炭酸カルシウム０．２％よりなる培地を５００ｍｌ容三
角フラスコに１００ｍｌ分注し、滅菌後ストレプトミセ
ス・ロチェイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｃｈｅ
ｉ）３２１８−ＧＭ２株を１白金耳接種して、２７℃、
４８時間回転式振とう機上で培養し、本培養の種菌とし
た。本培養は３０Ｌジャーファーメンターに大豆粉１
％、酵母エキス１％、グルコース３％、炭酸カルシウム
０．５％、プロナール（消泡剤）０．０３％よりなる培
地２０Ｌを仕込み滅菌した後、種菌４００ｍｌを移植し
２７℃で毎分６リットルの通気をし、毎分２５０回転で
撹拌しながら３日間培養した。３０Ｌジャーファーメン
ター２基から得られた培養液より、フィルタープレスを
用いてろ過を行い、ろ液と菌体を分離した。
５％、グリセリン２％、グルコース０．５％、硫酸マグ
ネシウム０．００５％、リン酸１カリウム０．０５％、
炭酸カルシウム０．２％よりなる培地を５００ｍｌ容三
角フラスコに１００ｍｌ分注し、滅菌後ストレプトミセ
ス・ロチェイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｒｏｃｈｅ
ｉ）３２１８−ＧＭ２株を１白金耳接種して、２７℃、
４８時間回転式振とう機上で培養し、本培養の種菌とし
た。本培養は３０Ｌジャーファーメンターに大豆粉１
％、酵母エキス１％、グルコース３％、炭酸カルシウム
０．５％、プロナール（消泡剤）０．０３％よりなる培
地２０Ｌを仕込み滅菌した後、種菌４００ｍｌを移植し
２７℃で毎分６リットルの通気をし、毎分２５０回転で
撹拌しながら３日間培養した。３０Ｌジャーファーメン
ター２基から得られた培養液より、フィルタープレスを
用いてろ過を行い、ろ液と菌体を分離した。
【００２５】（２）精製 得られた菌体にメタノール１０Ｌを加え、撹拌後２時間
放置しろ過して抽出液を得た。この抽出液から減圧下で
メタノールを留去後、得られた水溶液をダイアイオンＨ
Ｐ−２０（商品名）に吸着させ、８０％アセトン水で溶
出した。この溶出液を濃縮しアセトンを留去後酢酸エチ
ルにて抽出した。抽出液は無水硫酸ナトリウムで脱水
し、減圧下濃縮乾固して３．８ｇの油状物質を得た。得
られた油状物質は、クロロホルム−メタノール（５０：
１）を溶出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（カラム体積：２００ｍｌ）にて精製し、得られた活
性画分は、減圧下濃縮乾固し粗物質１．８ｇを得た。こ
の粗物質を少量のメタノールに溶解し、一回の操作にお
いて約５０ｍｇ相等量を０．１％リン酸を含む５０％ア
セトニトリルで充填したＹＭＣ−ＯＤＳ−ＡＭカラム
（２０ｘ３００ｍｍ、ＹＭＣ（株））に付し、４０℃、
流速８ｍｌ／分で同組成の溶媒によって溶出し、保持時
間が２４分（ＦＥ３５Ａが溶出）、および３０分（ＦＥ
３５Ｂが溶出）前後の画分をそれぞれ集めた。残りの粗
物質についても同様な操作を行い、採取した溶出液をそ
れぞれプールした。それぞれの溶出液のアセトニトリル
をエバポレーターにて留去し、得られた水溶液を１Ｎ
ＮａＯＨでｐＨ８．０に調整した後、それぞれを酢酸エ
チルで抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、減圧下で濃縮乾固し、ＦＥ３５ＡおよびＢ物質の黄
色粉末をそれぞれ２８ｍｇおよび１２ｍｇ得た。
放置しろ過して抽出液を得た。この抽出液から減圧下で
メタノールを留去後、得られた水溶液をダイアイオンＨ
Ｐ−２０（商品名）に吸着させ、８０％アセトン水で溶
出した。この溶出液を濃縮しアセトンを留去後酢酸エチ
ルにて抽出した。抽出液は無水硫酸ナトリウムで脱水
し、減圧下濃縮乾固して３．８ｇの油状物質を得た。得
られた油状物質は、クロロホルム−メタノール（５０：
１）を溶出液とするシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（カラム体積：２００ｍｌ）にて精製し、得られた活
性画分は、減圧下濃縮乾固し粗物質１．８ｇを得た。こ
の粗物質を少量のメタノールに溶解し、一回の操作にお
いて約５０ｍｇ相等量を０．１％リン酸を含む５０％ア
セトニトリルで充填したＹＭＣ−ＯＤＳ−ＡＭカラム
（２０ｘ３００ｍｍ、ＹＭＣ（株））に付し、４０℃、
流速８ｍｌ／分で同組成の溶媒によって溶出し、保持時
間が２４分（ＦＥ３５Ａが溶出）、および３０分（ＦＥ
３５Ｂが溶出）前後の画分をそれぞれ集めた。残りの粗
物質についても同様な操作を行い、採取した溶出液をそ
れぞれプールした。それぞれの溶出液のアセトニトリル
をエバポレーターにて留去し、得られた水溶液を１Ｎ
ＮａＯＨでｐＨ８．０に調整した後、それぞれを酢酸エ
チルで抽出した。抽出液を無水硫酸ナトリウムで脱水
後、減圧下で濃縮乾固し、ＦＥ３５ＡおよびＢ物質の黄
色粉末をそれぞれ２８ｍｇおよび１２ｍｇ得た。
【００２６】
【発明の効果】上記のように化合物ＦＥ３５ＡおよびＢ
は細胞増殖抑制作用を有するので、抗腫瘍剤として使用
できる。
は細胞増殖抑制作用を有するので、抗腫瘍剤として使用
できる。
【図１】ＦＥ３５Ａの重メタノール中の 1Ｈ−ＮＭＲス
ペクトルを示す。
ペクトルを示す。
【図２】ＦＥ３５Ｂの重クロロホルム中の 1Ｈ−ＮＭＲ
スペクトルを示す。
スペクトルを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 1/06 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (6)
- 【請求項１】下記の理化学的性質を有することを特徴と
するＦＥ３５Ａ物質又はその薬理学上許容される塩。 (1) 外観：黄色結晶 (2) 分子量：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ５５０（Ｍ＋Ｈ）+ (3) 分子式：Ｃ30Ｈ31ＮＯ9 (4) 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、メタ
ノール、アセトンに可溶、ヘキサン、水に不溶。 (5) 呈色反応：リンモリブデン酸−硫酸、ヨウ素蒸気反
応に陽性。 (6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値：
クロロホルム：メタノール（１０：１）の展開溶媒で
０．４３を示す。 (7) 赤外吸収スペクトル：V ｍａｘ（ＫＢｒ）: ３３７
０, １７１０, １６２０ｃｍ-1 (8)1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重メタノール中で測定した
スペクトルを図１に示す。 - 【請求項２】下記の理化学的性質を有することを特徴と
するＦＥ３５Ｂ物質又はその薬理学上許容される塩。 (1) 外観：黄色結晶 (2) 分子量：ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ５７８ (Ｍ＋Ｈ) + (3) 分子式：Ｃ31Ｈ31ＮＯ10 (4) 溶剤に対する溶解性：ジメチルスルホキシド、メタ
ノール、アセトン、クロロホルムに可溶、ヘキサン、水
に不溶。 (5) 呈色反応：リンモリブデン酸−硫酸、ヨウ素蒸気反
応に陽性。 (6) シリカゲル薄層クロマトグラフィーによるＲｆ値：
クロロホルム：メタノール（１０：１）の展開溶媒で
０．５８を示す。 (7) 赤外吸収スペクトル：V ｍａｘ（ＫＢｒ) : ３４０
０, ３３７０, １７１５, １６２０ｃｍ-1 (8)1Ｈ−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中で測定し
たスペクトルを図２に示す。 - 【請求項３】ストレプトミセス属に属するＦＥ３５物質
生産菌を培養して請求項１または２に記載の化合物ＦＥ
３５ＡまたはＦＥ３５Ｂを生成せしめ、これを採取する
ことを特徴とする化合物ＦＥ３５ＡまたはＦＥ３５Ｂの
製造方法。 - 【請求項４】請求項１又は２に記載の化合物ＦＥ３５
Ａ、ＦＥ３５Ｂ又はそれらの薬理学上許容される塩を有
効成分とする抗腫瘍剤。 - 【請求項５】請求項１又は２に記載のＦＥ３５Ａ、ＦＥ
３５Ｂ又はそれらの薬理学上許容される塩を有効成分と
する医薬。 - 【請求項６】ストレプトミセス・ロチェイ３２１８−Ｇ
Ｍ２（生命研 ＦＥＲＭＰ−１５７２０号）株及びその
変異株。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8255333A JPH1081692A (ja) | 1996-09-06 | 1996-09-06 | 新規化合物ｆｅ３５ａおよびｂ、その製造法およびその用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8255333A JPH1081692A (ja) | 1996-09-06 | 1996-09-06 | 新規化合物ｆｅ３５ａおよびｂ、その製造法およびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1081692A true JPH1081692A (ja) | 1998-03-31 |
Family
ID=17277339
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8255333A Pending JPH1081692A (ja) | 1996-09-06 | 1996-09-06 | 新規化合物ｆｅ３５ａおよびｂ、その製造法およびその用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1081692A (ja) |
-
1996
- 1996-09-06 JP JP8255333A patent/JPH1081692A/ja active Pending
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