JPH1121263A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−４５９８５類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規抗腫瘍剤の創製。 【解決手段】構造式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ²は酸素
原子又はイミノ基を示す］で表される化合物又はその薬
学的に許容しうる塩等。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞に対し増殖を阻害し、制
癌効果を発揮する新規化合物、その製造法及びその用途
並びに本化合物を産生する新規なストレプトミセス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に関するも
のである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。このような状況
下、癌治療の分野においては常に新規抗腫瘍性物質の開
発が求められている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の制癌物質が充分
に効果を発揮できない種々の癌を標的とした優れた制癌
活性を有する化合物を見出すことが本発明が解決しよう
とする課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、構造式
［Ｉ］及び構造式［ＩＩ］で表される化合物が優れた抗
腫瘍作用を示すことを見いだして本発明を完成した。即
ち、本発明は新規な構造式［Ｉ］

【０００５】

【化４】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ²は酸素
原子又はイミノ基を示す］で表される化合物又はその薬
学的に許容しうる塩、構造式［ＩＩ］

【０００６】

【化５】 で表される化合物、その製法及び用途、並びに上記構造
式［ＩＩ］で表される化合物及び構造式［ＩＩＩ］

【０００７】

【化６】 で表される化合物を産生する能力を有するストレプトミ
セス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に
関するものである。以下に本発明にかかわる新規な抗腫
瘍性物質ＢＥ−４５９８５類の物理学的な性状を示す。
ここで、構造式［ＩＩＩ］で表される化合物をＢＥ−４
５９８５Ａ₁、構造式［Ｉ］のＲ¹が水素原子であり、Ｒ
²が酸素原子である化合物をＢＥ−４５９８５Ａ₂、Ｒ¹
がメチル基であり、Ｒ²がイミノ基である化合物をＢＥ
−４５９８５Ａ₃、Ｒ¹が水素原子であり、Ｒ²がイミノ
基である化合物をＢＥ−４５９８５Ａ₄、構造式［Ｉ
Ｉ］で表される化合物をＢＥ−４５９８５Ｘと称する。

【０００８】本発明の化合物は、薬学的に許容しうる塩
の形で存在することができる。そのような塩としては、
例えば、塩酸、硫酸などの無機酸又は酢酸、クエン酸、
酒石酸、マレイン酸などの有機酸との付加塩が挙げられ
る。また、本発明の化合物が酸性の基を含む場合には、
該酸性基は、例えばカリウム塩、ナトリウム塩などのア
ルカリ金属塩、マグネシウム塩、カルシウム塩のどのア
ルカリ金属塩、エチルアミン塩、アルギニン塩などの有
機塩基との塩の形態で存在することもできる。下記にＮ
ＭＲ測定における略号の意味を示す。 ｓ ： シングレット ｄ ： ダブレット ｔ ： トリプレット ｑ ： カルテット ｍ ： マルチプレット ｂｒ： ブロード Ｊ ： カップリング定数 Ｈｚ： ヘルツＢＥ−４５９８５Ａ₁の物理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₄Ｈ₁₉Ｏ₇Ｃｌ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ
として： 実測値 ４５５．０８９９ 計算値 ４５５．０８９８ 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＣＨＣｌ₃，ｎｍ）：３
１０，４３４，５１０（ｓｈ） 赤外部吸収スペクトル；ν（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３０８
１，２９６０， １７２４，１６２６，１５４１，１
５００，１４１０，１３７１，１３５０， １２８０，
１２２０，１１６９，１１２６，１０７８，１０３９，
８８３， ７１９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，５００ＭＨｚ）δ
ｐｐｍ：１２．１（１Ｈ，ｓ），１１．５（１Ｈ，
ｓ），７．９７（１Ｈ，ｓ），７．４２（１Ｈ，ｓ），
７．３５（１Ｈ，ｂｒｓ），３．９８（３Ｈ，ｓ），
３．８４（３Ｈ，ｓ），３．０４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．
３Ｈｚ），２．５４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝０．９Ｈｚ），
１．２７（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，１２５ＭＨｚ）
δｐｐｍ：１９２．９（ｓ），１８３．４（ｓ），１６
６．５（ｓ），１６０．４（ｓ），１５６．３（ｓ），
１５３．８（ｓ），１４１．１（ｓ），１４０．５
（ｓ）， １３８．６（ｓ），１３７．９（ｓ），１３
７．０（ｓ），１３３．３（ｓ），１２６．６（ｓ），
１２２．７（ｄ），１１９．４（ｓ），１１９．３
（ｓ）， １１８．９（ｄ），１１７．６（ｄ），１１
５．５（ｓ），６１．４（ｑ）， ５２．５（ｑ），２
１．１（ｑ），２０．３（ｔ），１３．８（ｑ） 溶解性；酢酸エチル等の有機溶媒に可溶。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．７７［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：ヘキサン／酢酸エチル（２：
１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性ＢＥ−４５９８５Ａ₂の物理化学的性状 性状 ；赤褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₃Ｈ₁₇Ｏ₇Ｃｌ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／
ｚとして： 実測値 ４４１．０７３９ 計算値 ４４１．０７４１ 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ，ｎｍ）：２
３２，３０４，４３５，５０５（ｓｈ） 赤外部吸収スペクトル；ν（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：２９３
３，１７１６， １６２９，１５５８，１４０９，１３
７５，１２７６，１２４０，１１６５， １１２４，１
０８１，１０４１，８８７，７２９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，４００ＭＨｚ）δ
ｐｐｍ：１２．１（１Ｈ，ｓ），１１．５（１Ｈ，
ｓ），８．０９（１Ｈ，ｓ），７．４３（１Ｈ，ｓ），
７．３５（１Ｈ，ｓ），３．８５（３Ｈ，ｓ），３．１
２（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），２．５４（３Ｈ，
ｓ），１．２９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（ＣＤＣｌ₃，１００ＭＨｚ）
δｐｐｍ：１９３．１（ｓ），１８３．６（ｓ），１６
８．２（ｓ），１６０．５（ｓ），１５６．５（ｓ），
１５３．９（ｓ），１４１．４（ｓ），１４１．３
（ｓ），１３８．８（ｓ），１３７．１（ｓ），１３
６．７（ｓ），１３３．５（ｓ），１２６．９（ｓ），
１２２．９（ｄ），１１９．６（ｓ），１１９．５
（ｄ），１１９．４（ｓ），１１７．８（ｄ），１１
６．０（ｓ），６１．４（ｑ），２１．２（ｑ），２
０．４（ｔ），１３．８（ｑ） 溶解性；ジメチルスルホキシド、メタノール等の有機溶
媒に可溶． 酸性、中性、塩基性物質の区別；酸性 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．４３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（３：
１）］ＢＥ−４５９８５Ａ₃の物理化学的性状 性状 ；紫色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₄Ｈ₂₀Ｏ₆ＮＣｌ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ
として： 実測値 ４５４．１０４４ 計算値 ４５４．１０５７ 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ，ｎｍ）：２
４４，３０５，５７５ 赤外部吸収スペクトル；ν（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３３２
３，２９５０， １７３０，１６１０，１４５６，１３
５７，１２６７，１２４３，１０７６， １０２２，８
８１，¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆）δｐｐｍ：１６．３（１Ｈ，ｓ），１２．５（１
Ｈ，ｂｒｓ），１１．９（１Ｈ，ｓ），７．６２（１
Ｈ，ｓ），７．５１（１Ｈ，ｓ），７．３８（１Ｈ，
ｓ），３．８９（３Ｈ，ｓ），３．６２（３Ｈ，ｓ），
２．８９（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．４８（３
Ｈ，ｓ），１．１３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
₆）δｐｐｍ：１８４．１（ｓ），１７０．２（ｓ），
１６７．４（ｓ），１６３．５（ｓ），１５４．９
（ｓ），１５３．４（ｓ），１４２．７（ｓ），１３
８．７（ｓ），１３６．５（ｓ），１３６．１（ｓ），
１３４．０（ｓ），１３２．１（ｓ），１２４．９
（ｓ），１２２．７（ｄ），１１９．３（ｓ），１１
８．２（ｓ），１１５．７（ｄ），１１２．５（ｄ），
１１１．３（ｓ），６０．８（ｑ）， ５２．４
（ｑ），２０．６（ｑ），２０．４（ｔ），１４．１
（ｑ） 溶解性；ジメチルスルホキシド、メタノール等の有機溶
媒に可溶。 酸性、中性、塩基性物質の区別；弱塩基性 Ｒｆ値；０．３２［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ＢＥ−４５９８５Ａ₄の物理化学的性状 性状 ；紫色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₃Ｈ₁₈Ｏ₆ＮＣｌ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ ｍ／ｚ
として： 実測値 ４４０．０８９６ 計算値 ４４０．０９０１ 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ，ｎｍ）：２
３７，３０３，５３５ 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３１４
７，２９６２， １７１６，１６７０，１６１６，１６
００，１４５６，１４０７，１３５６， １３３８，１
２４０，１０５１，８８７，７５９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−
ｄ₆）δｐｐｍ：１６．３（１Ｈ，ｓ），１３．３（２
Ｈ，ｂｒｓ），１２．０（１Ｈ，ｓ），７．６１（１
Ｈ，ｓ），７．４９（１Ｈ，ｓ），７．３７（１Ｈ，
ｓ），３．６２（３Ｈ，ｓ），２．９２（２Ｈ，ｑ，Ｊ
＝７．３Ｈｚ），２．４７（３Ｈ，ｓ），１．１３（３
Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
₆）δｐｐｍ：１８４．３（ｓ），１７０．１（ｓ），
１６８．８（ｓ），１６３．６（ｓ），１５５．３
（ｓ），１５３．４（ｓ），１４２．１（ｓ），１３
８．６（ｓ），１３６．５（ｓ），１３６．１（ｓ），
１３５．５（ｓ），１３２．０（ｓ），１２４．７
（ｓ），１２２．６（ｄ），１１９．４（ｓ），１１
８．０（ｓ），１１５．７（ｄ），１１２．７（ｄ），
１１１．２（ｓ），６０．８（ｑ），２０．６（ｑ），
２０．３（ｔ），１４．２（ｑ） 溶解性；ジメチルスルホキシド、メタノール等の有機溶
媒に可溶． 酸性、中性、塩基性物質の区別；両性 Ｒｆ値；０．２３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール（２：
１）］ 呈色反応；硫酸反応 陽性ＢＥ−４５９８５Ｘの物理化学的性状 性状 ；濃い茶色のアモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₃Ｈ₁₂Ｏ₈ 質量分析；［ＨＲＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋３Ｈ）⁺ ｍ／
ｚとして： 実測値 ４１９．０７６４ 計算値 ４１９．０７６７ 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ，ｎｍ）：２
３１，２７２，４５４，５５０；（ＨＣｌ酸性ＭｅＯ
Ｈ，ｎｍ）：２０５，２３３，２６３，４６８；（Ｎａ
ＯＨ塩基性ＭｅＯＨ，ｎｍ）：２３４，２８１，３７５
（ｓ），６１０ 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３３５
４，３２９６， １６５３，１５５８，１５４１，１４
１９，１３７３，１１０５，１０７０， ６０８¹Ｈ−
ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＴＨＦ−ｄ₈）δｐ
ｐｍ：２．３４（３Ｈ，ｓ），６．３１（１Ｈ，ｓ），
６．８５（１Ｈ，ｓ），７．１４（１Ｈ，ｓ），７．６
６（１Ｈ，ｓ），８．３１（１Ｈ，ｓ），９．７６（１
Ｈ，ｓ），１２．４（１Ｈ，ｓ），１３．９（１Ｈ，
ｓ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＴＨＦ−
ｄ₈）δｐｐｍ：２１．９（ｑ），１１２．４（ｄ），
１１７．０（ｄ），１１７．７（ｓ），１１８．１
（ｄ），１２０．２（ｓ），１２０．３（ｄ），１２
２．５（ｓ）， １２４．０（ｄ），１２５．２
（ｓ），１３３．７（ｓ），１３６．２（ｓ），１４
２．２（ｓ），１４２．４（ｓ），１４３．２（ｓ），
１５６．２（ｓ）， １５８．１（ｓ），１６２．４
（ｓ），１６３．５（ｓ），１８１．３（ｓ），１８
８．９（ｓ），１８９．３（ｓ）， １９２．８（ｓ） 溶解性；ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド
等に溶け易く、メタノール、テトラヒドロフランにわず
かに溶解するが、水には殆ど溶けない。 酸性、中性、塩基性物質の区別；弱酸性物質 Ｒｆ値；０．３８［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＢＥ−４５９８５類の生物学的活性（抗腫瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−４５９８５類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、ｉｎ ｖｉｔｒ
ｏで試験を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対す
る抗腫瘍試験は、ＢＥ−４５９８５類をジメチルスルホ
キシドに溶解した後、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１
６４０培地（２０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含
む）で逐次希釈し、２ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞
培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培
地、２０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）５０
μｌに対し５０μｌを加えた。３７℃で７２時間、５％
ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法により対照群と比較
した。

【０００９】マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６に対する
抗腫瘍試験は、ＢＥ−４５９８５類をジメチルスルホキ
シドに溶解した後、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６
４０培地で逐次希釈し、１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む
細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０
培地）１００μｌに対し１００μｌを加えた。３７℃で
７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、５０％トリクロロ酢
酸で固定し、０．４％スルホローダミンＢで染色後、１
０ｍＭトリス液を用いて細胞から色素を抽出した。４５
０ｎｍを対照波長として５５０ｎｍに於ける吸光度を測
定して対照群と比較した。その結果、ＢＥ−４５９８５
類は両癌細胞に対し、強い増殖阻止活性を示し、５０％
増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。更
に、ＢＥ−４５９８５類のヒト癌細胞に対する抗腫瘍活
性をｉｎ ｖｉｔｒｏで試験した。

【００１０】細胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト
肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使
用し、細胞培養用培地は、全ての癌細胞共に牛胎児血清
１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用いた。ＢＥ−４５
９８５類をまずジメチルスルホキシドに溶解し、次に牛
胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地で逐次希釈し
て検液とした。癌細胞増殖阻害の検定は、１ｘ１０³個
の癌細胞を含む細胞培養用の培地１００μｌを９６穴マ
イクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、５％ Ｃ
Ｏ₂下で培養した後、上記検液１００μｌを加えた。更
に、７２時間培養後細胞を５０％トリクロロ酢酸で固定
し、以下ｃｏｌｏｎ２６細胞と同様の方法を用い対照群
と比較検討した。その結果、ＢＥ−４５９８５類はヒト
腫瘍細胞においても強い増殖阻害活性を示し、その５０
％増殖阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。

【００１１】

【表１】 上述したように ＢＥ−４５９８５類はマウス及びヒト
の腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、
本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として
有用である。つぎに、ＢＥ−４５９８５類の製造法につ
いて説明する。本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−４５９８５
類の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性
物質ＢＥ−４５９８５類を生産するものならばいずれで
も良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙
げられる。 １．形態 Ａ４５９８５株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し輪生岐及び菌糸の分断は認められない。気菌糸
上には胞子の長い連鎖（５０個以上）を作り、その形態
は、主として直線〜波状であるが、フック〜ループ状も
見られる。胞子の表面は毛様で大きさが１．０〜０．７
×０．７〜０．６μｍ位の円筒及び卵形であり、胞子の
う、鞭毛胞子及び菌核等の特殊な器官は観察されない。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 Ａ４５９８５株の各種寒天平板培地における培養性状を
第２表に示す。

【００１２】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） ９℃；生育せず １２℃；生育不良、気菌糸形成せず １５℃；生育良好、気菌糸形成僅少 １８℃；生育良好、気菌糸形成良好 ２２℃；生育、気菌糸形成非常に良好 ２６℃；生育、気菌糸形成非常に良好 ２９℃；生育、気菌糸形成非常に良好 ３５℃；生育不良、気菌糸形成せず ３８℃；生育せず ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含有量４％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。（＋は利用され
ることを示し、−は利用され内ことを示す。）

【００１３】

【表３】 ６．細胞壁組成 ＬＬージアミノピメリン酸が検出された。以上の菌学的
諸性質よりＡ４５９８５株は放線菌ストレプトミセス属
に属すると考えられる。したがって、Ａ４５９８５株を
ストレプトミセス・エスピー Ａ４５９８５（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４５９８５）と称するこ
ととした。なお、本菌株は通商産業省工業技術院生命工
学工業技術研究所に寄託されており、受託番号はＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１４７０７である。本発明で使用する抗腫瘍性
物質ＢＥ−４５９８５類を生産する微生物の変異株は、
例えばＸ線若しくは紫外線などの照射処理、例えばナイ
トロジェンマスタード、アザセリン、亜硝酸、２−アミ
ノプリン若しくはＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、
ファージ接触、形質転換、形質導入又は接合などの通常
用いられる菌種変換処理方法によりＢＥ−４５９８５類
生産菌を変異させた微生物である。本発明のＢＥ−４５
９８５類を製造するにあたり、ＢＥ−４５９８５類の生
産菌株を栄養源含有培地に接種して好気的に発育させる
ことにより、ＢＥ−４５９８５類を含む培養物が得られ
る。栄養源としては、放線菌の栄養源として公知のもの
が使用できる。例えば、炭素源としては、市販されてい
るブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶糖、糖密又はデキス
トリンなどが単独又は混合物として用いられる。窒素源
としては、市販されている大豆粉、コーンステイープリ
カー、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプ
トン、小麦胚芽、魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱
脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなど
が単独又は混合物として用いられる。無機塩としては、
市販されている炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化
カリウム、硫酸マグネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸
ナトリウム又は各種リン酸塩などを使用することができ
る。その他必要に応じて、鉄、マンガン、亜鉛、コバル
ト、モリブデン酸などの重金属塩を微量添加することも
できる。また、発泡の激しい場合には消泡剤として、例
えば大豆油又は亜麻仁油などの植物油、オクタデカノー
ルなどの高級アルコール類、各種シリコン化合物などを
適宜添加してもよい。これらのもの以外でも、該生産菌
が利用し、ＢＥ−４５９８５類の生産に役立つもの例え
ば３−（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ
酸ナトリウムなどであれば、いずれも使用することがで
きる。

【００１４】培養方法としては、一般の微生物代謝産物
の生産方法と同様に行なえばよく、固体培養でも液体培
養でもよい。液体培養の場合は、静置培養、攪拌培養、
振とう培養又は通気培養などのいずれを実施してもよい
が、特に振盪培養又は深部通気攪拌培養が望ましい。培
養温度は１６〜３６℃が適当であるが、好ましくは１８
〜２９℃である。好ましい培地のｐＨは４〜８の範囲
で、培養時間は７２時間〜４００時間、好ましくは９６
時間〜３６０時間である。培養物から目的とするＢＥ−
４５９８５類を採取するには、微生物の生産する代謝物
から採取するのに通常使用される分離手段が適宜利用さ
れる。

【００１５】ＢＥ−４５９８５類は培養濾液中及び菌体
中に存在するので、培養濾液又は菌体より通常の分離手
段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着若し
くは分配クロマトグラフィー法及びゲル濾過法などを単
独又は組み合わせて行なうことにより精製できる。好ま
しい分離精製の例として次の方法が挙げられる。まず培
養液を濾過し、菌体を得る。得られた菌体をメタノール
又はアセトンなどの有機溶媒を用いて抽出する。得られ
た粗抽出物について、水ー酢酸エチル分配を行ない、酢
酸エチルを留去後得られる抽出物について逆相カラムク
ロマトグラフィーを行なう。ＢＥ−４５９８５類を含む
フラクションを減圧下で濃縮し、残留物を再度逆相カラ
ムクロマトグラフィーに供することにより、ＢＥ−４５
９８５類を得ることができる。本発明の化合物ＢＥ−４
５９８５類は腫瘍細胞の増殖を阻害し、制癌効果を発揮
するが、本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投
与形態としては各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カ
プセル剤、散剤、顆粒剤若しくは液剤などの経口剤、又
は例えば溶液若しくは懸濁液などの殺菌した液状の非経
口剤が挙げられる。

【００１６】固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖若しくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦若しくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウム若しくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ン若しくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウム若しくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コール若しくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルルース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロース若しくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。

【００１７】これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。液状製
剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、ピーナッツ
油若しくはゴマ油などの植物由来の油など液状製剤にお
いて通常用いられる適当な添加剤を使用し、懸濁液、シ
ロップ剤若しくは注射剤などの形態として製造される。
特に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又は皮下注射で
投与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射用蒸留
水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射用）、生理食塩
水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液体
（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウムなどの水溶
液）若しくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）
など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。

【００１８】これらの注射剤はあらかじめ溶解したもの
のほか、粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたもの
を用時溶解する形態もとり得る。これらの注射液 は通
常、０．１〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有
効成分を含む。 また、経口投与の懸濁剤又はシロップ
剤などの液剤は、０．５〜１０重量％の有効成分を含
む。

【００１９】本発明の化合物の実際に好ましい投与量
は、使用される化合物の種類、配合された組成物の種
類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及び腫瘍に
よって変化することに注意すべきである。例えば、１日
あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１０〜５０
０ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注射の場
合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。なお、投与
回数は投与方法及び症状によって異なるが、１回ないし
５回である。以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に
説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるも
のではない。

【００２０】

【発明の実施の形態】

【００２１】

【実施例】

実施例１ＢＥ−４５９８５Ａ₁の製造 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４５９８５株をグル
コース０．１％、デキストリン２％、魚粉０．５％、コ
ーングルテンミール１％、酵母エキス０．１％、硫酸マ
グネシウム０．０５％、塩化ナトリウム０．１％、塩化
カルシウム０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩
化第二銅０．００００４％、塩化マンガン０．００００
４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０．０
０００８％、ホウ酸ナトリウム０．００００８％、及び
モリブデン酸ナトリウム０．０００２４％からなる培地
（ｐＨ７．０）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フ
ラスコ２本に接種し、２８℃で３日間、回転振盪機（毎
分１８０回転）上で培養した。この培養液を２ｍｌずつ
上記の培地を１１０ｍｌ含む５００ｍｌ容の三角フラス
コ５０本に接種し２８℃で５日間、回転振盪機（毎分１
８０回転）上で培養した。

【００２２】このようにして得られた培養液（約５Ｌ）
にセライト（和光純薬、Ｎｏ．５４５）３００ｇを加え
て濾過し、菌体を分離した。この菌体にメタノール２Ｌ
を加え、数時間攪拌後、菌体を濾去し、メタノール抽出
液を得た。メタノール抽出液を減圧下に濃縮した後、残
渣に酢酸エチル６００ｍｌ、脱イオン水３００ｍｌを加
えて抽出した。得られた酢酸エチル抽出液を減圧下に濃
縮し黒色残渣を得た。この残渣に酢酸エチル３０ｍｌを
加えた後濾過し、濾液を減圧下に留去した。得られた残
留物をシリカゲルのカラム（メルク社製キーゼルゲル６
０、２．０ｃｍφｘ４０ｃｍ）にかけ、ヘキサン／酢酸
エチルの溶出溶媒（３０：１、１５：１、１０：１）で
順次溶出した。溶出した活性画分にメタノール１０ｍｌ
を加え、濃縮したところ、結晶が析出した。この結晶を
含む溶液を減圧濾過し、ＢＥ−４５９８５Ａ₁の赤褐色
粉末を４９ｍｇ得た。 実施例２ＢＥ−４５９８５Ａ₂の製造 実施例１で得られたＢＥ−４５９８５Ａ₁１２．５ｍｇ
に１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液０．５ｍｌ、メタノール
５ｍｌを加え、６０℃、２時間攪拌した。反応後、反応
液を減圧下に濃縮した後、１Ｎ−塩酸０．５ｍｌを加え
たたところ、褐色の沈殿を生じた。この沈殿を含む溶液
に脱イオン水５ｍｌ及び酢酸エチル５ｍｌを加えて抽出
し、さらに、脱イオン水１０ｍｌで洗浄した。酢酸エチ
ル抽出液を減圧下に濃縮した後、残渣に 酢酸エチル２
ｍｌ、メタノール４ｍｌを加えて溶解させ、濃縮したと
ころ、結晶が析出した。この結晶を含む溶液を減圧濾過
し、ＢＥ−４５９８５Ａ₂の赤褐色粉末を７．７ｍｇ得
た。 実施例３ＢＥ−４５９８５Ａ₃の製造 実施例１で得られたＢＥ−４５９８５Ａ₁１３ｍｇに１
Ｎ−アンモニア−メタノール溶液２ｍｌを加え、室温で
２４時間攪拌した。反応後、１Ｎ 塩酸を用いて中和
し、濃縮した。得られた残渣に酢酸エチル５０ｍｌ、脱
イオン水１００ｍｌを加えて抽出した。得られた酢酸エ
チル抽出液を減圧下に濃縮乾固し、ＢＥ−４５９８５Ａ
₃の紫色粉末を１２．７ｍｇ得た。 実施例４ＢＥ−４５９８５Ａ₄の製造 実施例１で得られたＢＥ−４５９８５Ａ₁１０ｍｇに２
８％アンモニア水２ｍｌを加え、室温で４時間攪拌し
た。反応を進行させるために、４時間後に温度を６０℃
とし、２０時間後に温度８０℃、メタノール１ｍｌ、２
８％アンモニア水１ｍｌを加え、４０時間後に、温度を
１００℃、２８％アンモニア水１ｍｌ加え、４８時間攪
拌した。反応後、反応液を減圧下に留去後、残渣をセフ
ァデックスＬＨ−２０（ファルマシア社製、１．５ｃｍ
φｘ３０ｃｍ， 溶出；メタノール）のクロマト用カラ
ムにかけて精製し、目的の画分を減圧下に濃縮した。得
られた残渣に酢酸エチル５０ｍｌ、脱イオン水５０ｍｌ
を加え抽出し、得られた酢酸エチル抽出液を減圧下に濃
縮乾固して、ＢＥ−４５９８５Ａ₄の紫色粉末を８ｍｇ
得た。 実施例５ＢＥ−４５９８５Ｘの製造 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４５９８５株をグル
コース０．１％、デキストリン２％、魚粉０．５％、コ
ーングルテンミール１％、酵母エキス０．１％、硫酸マ
グネシウム０．０５％、塩化ナトリウム０．１％、塩化
カルシウム０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩
化第二銅０．００００４％、塩化マンガン０．００００
４％、塩化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０．０
０００８％、ホウ酸ナトリウム０．００００８％、及び
モリブデン酸ナトリウム０．０００２４％からなる培地
（ｐＨ７．０）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フ
ラスコ１本に接種し、２８℃で７日間、回転振盪機（毎
分１８０回転）上で培養した。この培養液を３ｍｌずつ
上記の培地を１１０ｍｌ含む５００ｍｌ容の三角フラス
コ７本に接種し２８℃で５日間、回転振盪機（毎分１８
０回転）上で培養した。さらにこの培養物をグルコース
０．１％、デキストリン２％、ＭＳ−＃３６００（日本
食品化工（株）製） ２％、魚粉０．５％、コーングル
テンミール１％、酵母エキス０．１％、硫酸マグネシウ
ム０．０５％、塩化ナトリウム０．１％、塩化カルシウ
ム０．０５％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第二銅
０．００００４％、塩化マンガン０．００００４％、塩
化コバルト０．００００４％、硫酸亜鉛０．００００８
％、ホウ酸ナトリウム０．００００８％、及びモリブデ
ン酸ナトリウム０．０００２４％からなる培地（ｐＨ
７．０）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容の三角フラスコ
２００本に接種し、２８℃で１４日間、回転振盪機（毎
分１８０回転）上で培養した。このようにして得られた
培養液約 ２０Ｌにメチルエチルケトン ３０Ｌを加
え、１時間攪拌後、セライト（和光純薬、Ｎｏ．５４
５）５００ｇを加えて濾過した。濾液の上層を減圧下に
濃縮し、メチルエチルケトンを留去した。この粗抽出物
を６Ｎ ＨＣｌを用いてｐＨ ４に調製し、４℃にて一
晩放置した。生成した沈澱物を水１５０ｍｌ、メタノー
ル１５０ｍｌ、メチルエチルケトン１５０ｍｌで順次洗
浄し、粗抽出物７．０３ｇを得た。この粗抽出物０．７
２ｇを取り、ジメチルホルムアミド ３０ｍｌ、トルエ
ン１００ｍｌに溶解し、ワコーゲル Ｃ−３００（和光
純薬、４．０ｃｍｆ ｘ４８ｃｍ）カラムにチャージし
た後、トルエン−ジメチルホルムアミド−メタノール
（１００：３０：５）、毎分９ｍｌで溶出した。活性画
分を集め、酢酸エチル４００ｍｌを加え、４００ｍｌの
６ｍＭ塩酸で洗浄した。さらに酢酸エチル層を４００ｍ
ｌの水で洗浄した後、上層を減圧下に濃縮した。酢酸エ
チルを留去したのち、３ｍＭ塩酸 １００ｍｌを加えて
僅かに濃縮し、生成した沈殿物を濾集して粗精製物６
５．３ｍｇを得た。このうち１５．１ｍｇ、１５．６ｍ
ｇをそれぞれ２ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解して
逆相クロマトグラフィーに供した。カラムはＹＭＣ Ｐ
ａｃｋ Ａ３４３ Ｓ５ ＯＤＳ （株式会社ワイエム
シー、２．０ｃｍφｘ２５ｃｍ）、２０ｍＭギ酸アンモ
ニウム緩衝液（ｐＨ３．８１）−アセトニトリル（５
５：５４）から１２０分で（１０：９０）となるように
直線濃度勾配法を用いて、毎分２ｍｌの流速で溶出し
た。得られた活性画分を集め、酢酸エチル２００ｍｌを
加えた後、水２００ｍｌで洗浄し、さらに上層を水１０
０ｍｌで洗浄した。上層は減圧下に濃縮して水が約１ｍ
ｌとなった時、３ｍｌのメタノールを加え、３０００回
転、１０分で遠心分離した。得られた沈澱物に水１ｍｌ
を加え、凍結乾燥することにより、純粋なＢＥ−４５９
８５Ｘ６．６ｍｇを濃い茶色の粉末として得た。以下に
本発明の化合物の製剤例を示すが、本発明の化合物の製
剤は本製剤例に限定されるものではない。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−４５９８５類） １０（部） 重質酸化マグネシウム １５ 乳糖 ７５ を均一に混合して、３５０ｍｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。 製剤例２ 本物質（ＢＥ−４５９８５類） ４５（部） 澱粉 １５ 乳糖 １６ 結晶性セルロース ２１ ポリビニルアルコール ３ 蒸留水 ３０ を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７ｍｍの大きさの顆粒剤とし
た。 製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。 製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。 製剤例５ 本物質（ＢＥ−４５９８５類） ０．６（部） 非イオン系界面活性剤 ２．４ 生理的食塩水 ９７ を加温混合してからアンプルに入れ、滅菌を行なって注
射剤を作製した。

【００２３】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４５９８５類、
マウス及びヒトの癌細胞に対して強い増殖抑制効果を示
すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 69/95 Ｃ０７Ｃ 69/95 251/22 251/22 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｐ 7/66 Ｃ１２Ｐ 7/66 29/00 29/00 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 7/66 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 29/00 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 中島 茂 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】構造式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒ¹は水素原子又はメチル基を示し、Ｒ²は酸素
   原子又はイミノ基を示す］で表される化合物又はその薬
   学的に許容しうる塩。
2. 【請求項２】構造式［ＩＩ］ 【化２】 で表される化合物又はその薬学的に許容しうる塩。
3. 【請求項３】構造式［ＩＩＩ］ 【化３】 で表される化合物を産生する能力を有する微生物又はそ
   の変異株を培養し、構造式［ＩＩＩ］で表される化合物
   を採取することを特徴とする構造式［ＩＩＩ］で表され
   る化合物の製造法。
4. 【請求項４】構造式［ＩＩ］で表される請求項２記載の
   化合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株を
   培養し、構造式［ＩＩ］で表される化合物を採取するこ
   とを特徴とする構造式［ＩＩ］で表される化合物の製造
   法。
5. 【請求項５】微生物又はその変異株がストレプトミセス
   ・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）であ
   る請求項２記載の製造法。
6. 【請求項６】微生物がストレプトミセス・エスピー Ａ
   ４５９８５（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． ４５
   ９８５）又はその変異株である請求項３又は４記載の製
   造法。
7. 【請求項７】請求項２又は３記載の化合物を産生する能
   力を有するストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔ
   ｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）又はその変異株。
8. 【請求項８】請求項２又は３記載の化合物を産生する能
   力を有するストレプトミセス・エスピー Ａ４５９８５
   （Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４５９８５）
   又はその変異株。
9. 【請求項９】請求項１又は２記載の化合物を有効成分と
   して含有することを特徴とする抗腫瘍剤。