JPH0987284A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−４２３０３類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【構成】一般式 【化１】 ［式中、Ｒ₁はヒドロキシ基又はヒドラジノ基を、Ｒ₂は
水素原子又はメチル基を示す］で表される化合物、その
製造法及びその用途並びに該化合物を産生する微生物に
関するものである。 【効果】本発明の化合物は、腫瘍細胞の増殖を阻害して
抗腫瘍作用を有することから医薬の分野において抗腫瘍
剤として有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を有する新規化合物群、その製造法及びその用途並
びに該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。このような状況
下、癌治療の分野においては常に新規抗腫瘍性物質の開
発が求められている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、一般式
［１］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示すこと
を見いだして本発明を完成した。

【０００５】即ち、本発明は新規な一般式

【０００６】

【化４】 ［式中、Ｒ₁はヒドロキシ基またはヒドラジノ基を、Ｒ₂
は水素原子またはメチル基を示す］で表される化合物、
その製法及び用途、並びに一般式［１Ａ］の化合物を産
生する能力を有するストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ）属に属する微生物に関するものである。以
下に本発明にかかわる新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３
０３類の物理化学的な性状を示す。ここで、一般式
［１］のＲ₁がヒドロキシ基であり、Ｒ₂がメチル基であ
る化合物をＢＥ−４２３０３Ａ、Ｒ₁がヒドロキシ基で
あり、Ｒ₂が水素原子である化合物をＢＥ−４２３０３
Ｂ、Ｒ₁がヒドラジノ基であり、Ｒ₂がメチル基である化
合物をＢＥ−４２３０３Ｃ、Ｒ₁がヒドラジノ基であ
り、Ｒ₂が水素原子である化合物をＢＥ−４２３０３Ｄ
とそれぞれ称する。下記にＮＭＲ測定における略号の意
味を示す。 ｓ ： シングレット ｄ ： ダブレット ｔ ： トリプレット ｑ ： カルテット ｍ ： マルチプレット ｂｒ ： ブロード Ｊ ： カップリング定数 Ｈｚ ： ヘルツ ＢＥ−４２３０３Ａの物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₃₀Ｈ₄₀Ｏ₅Ｎ₂ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ と
して： 実測値 ５０９．３０４８ 計算値 ５０９．３０１６ 比旋光度；［α］²⁰ _D ＝ ＋３７２°（ｃ １．０，
ＣＨＣｌ₃ −ＣＨ₃ＯＨ／６：１） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）； ２７８ （３２０００） 赤外部吸収スペクトル ；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1） ３３１
９，２９５２， ２９２５，２８６３，１７１１，１６
７６，１６５１，１６２０，１５９７，１５４５，１４
５２，１３４６，１２５２，１０５７，１００３，９６
６ 融点；２５０ ℃ （分解）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃−Ｃ
Ｄ₃ＯＤ／６：１）δｐｐｍ： ６．９９（２Ｈ，
ｍ），６．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ），６．
２０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ），５．３７ （１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，９．３Ｈｚ）， ５．２
０ （１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，８．８Ｈｚ，
４．９Ｈｚ）， ３．６０ （２Ｈ，ｍ）， ２．８４
〜２．９６（２Ｈ，ｍ）， ２．８４ （３Ｈ，ｓ），
２．７０ （１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１３．２Ｈｚ，
１１．７Ｈｚ，＜０．５Ｈｚ）， ２．５６ （１Ｈ，
ｄｄ，Ｊ＝１０．７Ｈｚ，９．３Ｈｚ）， ２．４０
（１Ｈ，ｍ）， ２．３０ （１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１
６．６Ｈｚ， １２．２Ｈｚ，４．４Ｈｚ）， ２．２
０ （１Ｈ，ｍ）， １．９７〜２．１５ （４Ｈ，
ｍ）， １．９１ （１Ｈ，ｍ）， １．８２ （１
Ｈ，ｍ）， １．４６〜１．５４ （２Ｈ，ｍ），
１．３１ （１Ｈ，ｍ）， １．１０〜１．２６（２
Ｈ，ｍ）， １．０６ （１Ｈ，ｍ）， ０．９６
（１Ｈ，ｍ）， ０．８５ （３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈ
ｚ）， ０．７７ （３Ｈ，ｔ， Ｊ＝７．３Ｈｚ），
０．７５ （１Ｈ，ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃
−ＣＤ₃ＯＤ／６：１）δｐｐｍ；２０２．２
（ｓ）， １９４．９ （ｓ）， １８６．５
（ｓ）， １７２．８ （ｓ）， １６５．８
（ｓ）， １３７．５ （ｄ）， １３６．７
（ｄ）， １３５．９ （ｄ）， １３３．６
（ｄ）， １３２．２ （ｄ）， １２９．０
（ｄ）， １００．８ （ｓ）， ６６．０ （ｄ），
６５．５ （ｄ）， ５４．７ （ｄ）， ５２．７
（ｄ）， ５１．５ （ｄ）， ４８．３ （ｄ），
４３．７ （ｄ）， ４０．５ （ｔ），３８．６
（ｔ）， ３８．１ （ｔ）， ３３．２ （ｔ），２
６．７ （ｔ），２６．１ （ｑ），２５．８
（ｔ）， ２４．３ （ｔ）， ２１．４（ｔ）， １
７．０ （ｑ）， １２．１ （ｑ） 溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒および水に
難溶。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 Ｒｆ値；０．５３ ［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水
（１０：２：０．１ ）］ ＢＥ−４２３０３Ｂ の理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₉Ｈ₃₉Ｏ₅Ｎ₂ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ と
して： 実測値 ４９５．２８７４ 計算値 ４９５．２８５９ 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）； ２７７ （３８０００） 赤外部吸収スペクトル ；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）３３２
６，２９５４，２９４８，１７１８，１６４８，１６１
２，１５９６， １５５８，１４５６，１３４４，１２
５３，１０６０，１００４，９６０ 融点；２５０ ℃ （分解）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル （４００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃
−ＣＤ₃ＯＤ／６：１）δｐｐｍ； ７．０２ （２
Ｈ，ｍ）， ６．３４ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈ
ｚ）， ６．２３ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１４．２Ｈｚ），
５．４０ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈｚ，８．８
Ｈｚ）， ５．２５ （１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１５．１Ｈ
ｚ，８．８Ｈｚ，５．４Ｈｚ）， ３．７７ （１Ｈ，
ｍ）， ３．５５ （１Ｈ，ｍ）， ２．９３ （１
Ｈ，ｍ）， ２．８９ （１Ｈ，ｍ），２．７８ （１
Ｈ，ｍ）， ２．６２ （１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１０．８Ｈ
ｚ，８．８Ｈｚ）， ２．３５〜２．５０ （２Ｈ，
ｍ）， ２．００〜２．３０ （５Ｈ，ｍ）， １．８
７ （１Ｈ，ｍ）， １．８２ （１Ｈ，ｍ）， １．
５９（１Ｈ，ｍ）， １．５３ （１Ｈ，ｍ）， １．
２０〜１．３８ （３Ｈ，ｍ）， １．０８ （１Ｈ，
ｍ）， １．００ （１Ｈ，ｍ）， ０．８８ （３Ｈ
ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ）， ０．８０ （３Ｈ，ｔ，Ｊ＝
７．３Ｈｚ）， ０．８０ （１Ｈ，ｍ） 溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒および水に
難溶。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 Ｒｆ値；０．２８［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水（１
０：２：０．１）］ ＢＥ−４２３０３Ｃ の理化学的性状 性状 ；黄褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₃₀Ｈ₄₃Ｏ₄Ｎ₄ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺ と
して： 実測値 ５２３．３２６２ 計算値 ５２３．３２８４ 比旋光度；［α］²⁰ _D ＝ ＋２００° （ｃ ０．
２，ＣＨＣｌ₃−ＣＨ₃ＯＨ／６：１） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）； ２０２ （１５０００）， ２４５ （ｓ
ｈ）， ２８５ （２４０００）， ３４５（ｓｈ） 赤外部吸収スペクトル ； （ＫＢｒ，ｃｍ^-1 ） ３
４２３， ２９４８，２８６３， １６５０， １６２
５， １５９２， １５００， １４４８，１４３０，
１４００， １２７０， １２５３， １０５３，
１００２，９７０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ；１１．４（１Ｈ，ｓ），７．３１（１Ｈ，
ｂｒｓ），７．１０（２Ｈ，ｍ），６．５２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１３．７Ｈｚ），６．２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
４．６Ｈｚ），５．５６（２Ｈ，ｍ），３．９５（２
Ｈ，ｓ），３．６２（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝４．３Ｈ
ｚ），３．５６（１Ｈ，ｍ），３．３８（１Ｈ，ｄｄ
ｄ，Ｊ＝１２．２， １０．７， ４．３Ｈｚ），３．
１３（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，１０．７Ｈ
ｚ，４．９Ｈｚ），３．０６（１Ｈ，ｍ），２．９８
（１Ｈ，ｍ），２．８８（３Ｈ，ｓ），２．６１（１
Ｈ，ｄｄ， Ｊ＝１１．０Ｈｚ， ８．６Ｈｚ），２．
５４（１Ｈ，ｍ），２．２３（１Ｈ，ｍ）， ２．０６
〜２．１８（３Ｈ，ｍ），２．０５（１Ｈ，ｍ），１．
９２（２Ｈ，ｍ），１．６６（１Ｈ，ｍ），１．５９
（１Ｈ，ｍ），１．２５〜１．４５ （３Ｈ，ｍ），
１．１４（１Ｈ，ｍ），１．０４（１Ｈ，ｍ），０．９
４ （３Ｈ，ｄ， Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．８６（３
Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）， ０．８５ （１Ｈ，ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ， ＣＤＣ
ｌ₃） δｐｐｍ；２００．９ （ｓ）， １９５．２
（ｓ）， １７３．２ （ｓ）， １７２．８
（ｓ）， １６６．６ （ｓ）， １３７．７
（ｄ）， １３６．２（ｄ）， １３５．０ （ｄ），
１３３．２ （ｄ）， １３３．０ （ｄ）， １２
９．６ （ｄ）， ９３．６ （ｓ），６５．８
（ｄ）， ６５．２（ｄ）， ５３．３ （ｄ），
５２．９ （ｄ）， ５１．４ （ｄ），４８．５
（ｄ）， ４３．４ （ｄ）， ４０．９ （ｔ），
３８．７（ｔ）， ３８．６ （ｔ）， ２９．１
（ｔ）， ２６．３ （ｑ）， ２６．２ （ｔ），
２５．４ （ｔ）， ２５．１ （ｔ）， ２２．２
（ｔ）， １７．４ （ｑ）， １２．４ （ｑ） 溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に溶け易
く、水に溶けにくい。 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水（１
０： ２：０．１）］ ＢＥ−４２３０３Ｄ の理化学的性状 性状 ；黄褐色アモルファス状固体又は結晶 分子式 ；Ｃ₂₉Ｈ₄₁Ｏ₄Ｎ₄ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５０９．３１３２ 計算値 ５０９．３１２８ 比旋光度；［α］²⁰ _D ＝ ＋１４８° （ｃ
０．２， ＣＨＣｌ₃−ＣＨ₃ＯＨ／６：１） 紫外部吸収スペクトル；λｍａｘ［ＭｅＯＨ，ｎｍ］
（ε）； ２０２ （１４０００）， ２４８ （ｓ
ｈ）， ２８５ （２４０００）， ３４５（ｓｈ） 赤外部吸収スペクトル ； （ＫＢｒ，ｃｍ^-1） ３４
２４， ２９５０， ２８６１， １６４３， １６２
５， １５８９， １５００， １４５０，１４２７，
１３９０， １３０５， １２５１， １０６０，
１０００， ９７０¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ， ＣＤＣｌ₃）
δｐｐｍ；１１．４ （１Ｈ，ｓ）， ７．５８ （１
Ｈ，ｂｒｓ）， ７．１０ （２Ｈ，ｍ）， ６．５１
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０）， ６．２７ （１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝１５．０）， ５．５４ （２Ｈ，ｍ），
５．４６ （１Ｈ，ｂｒｓ），３．９９ （２Ｈ，
ｓ）， ３．８４ （１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝４．８Ｈ
ｚ），３．５７ （１Ｈ，ｍ）， ３．４０ （１Ｈ，
ｄｔ， Ｊ＝１１．８，４．４Ｈｚ）， ３．１４
（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１１．８，４．５）， ３．０５
（１Ｈ，ｍ）， ２．９８ （１Ｈ，ｍ）， ２．６２
（１Ｈ，ｄｄ， Ｊ＝１０．７， ８．６Ｈｚ），
２．５５ （１Ｈ，ｍ）， ２．２３ （１Ｈ，ｍ），
２．０２〜２．２０ （４Ｈ，ｍ）， １．８８
（２Ｈ，ｍ）， １．７６ （１Ｈ，ｍ）， １．５９
（１Ｈ，ｍ） ， １．５１ （１Ｈ，ｍ）， １．
４０ （１Ｈ，ｍ）， １．３３ （１Ｈ，ｍ），
１．１４ （１Ｈ，ｍ）， １．０５ （１Ｈ，ｍ），
０．９４ （３Ｈ，ｄ， Ｊ＝６．４Ｈｚ）， ０．
８６ （３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ）， ０．８５
（１Ｈ，ｍ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ， ＣＤＣ
ｌ₃） δｐｐｍ；２０１．０ （ｓ）， １９６．４
（ｓ）， １７５．２ （ｓ）， １７４．０
（ｓ）， １６６．６ （ｓ）， １３７．６
（ｄ），１３６．３ （ｄ）， １３５．１（ｄ），
１３２．９ （ｄ）， １２９．５ （ｄ），９３．２
（ｓ）， ６５．９ （ｄ）， ６０．０ （ｄ），
５３．５ （ｄ）， ５２．８ （ｄ）， ５１．５
（ｄ）， ４８．６ （ｄ）， ４３．４ （ｄ），
４０．８ （ｔ）， ３８．９ （ｔ）， ３８．６
（ｔ），２９．１ （ｔ）， ２８．５ （ｔ）， ２
６．１ （ｔ）， ２５．３（ｔ）， ２２．６
（ｔ）， １７．４ （ｑ）， １２．３（ｑ） 溶解性；ジメチルスルホキシド等の有機溶媒に溶け易
く、水に溶けにくい。 Ｒｆ値；０．５０［メルク社製キーゼルゲル６０Ｆ₂₅₄
使用、展開溶媒：クロロホルム／メタノール／水（１
０： ２：０．１）］ ＢＥ−４２３０３類の抗腫瘍作用 抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３０３類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
作用試験は、ＢＥ−４２３０３類をジメチルスルホキシ
ドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２
０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え検液
とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地
（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地、２０ｍ
Ｍの２−メルカプトエタノールを含む）５０μｌを９６
穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、５％
ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液を５０μｌを加え、
３７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定
法により対照群と比較した。マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏ
ｎ ２６に対する抗腫瘍試験は、ＢＥ−４２３０３類を
ジメチルスルホキシドに溶解した後ジメチルスルホキシ
ドで逐次希釈してから、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ
１６４０培地に加え検液とした。１ｘ １０³個の腫瘍
細胞を含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭ
Ｉ１６４０培地）１００μｌを９６穴マイクロプレート
に分注し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した
後に上記の検液１００μｌを加え、３７℃で７２時間、
５％ＣＯ₂下で培養後、５０％トリクロロ酢酸で固定
し、０．４％ スルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭ
トリス液を用いて細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍ
を対照波長として５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して
対照群と比較した。その結果、ＢＥ−４２３０３類は両
腫瘍細胞に対し、強い増殖阻止活性を示し、５０％増殖
阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。更に、Ｂ
Ｅ−４２３０３類のヒト腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を
試験管内で試験した。細胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−
１、ヒト肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−
４５ を使用し、細胞培養用培地は、全ての腫瘍細胞共
に牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用い、
上記のマウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ ２６と同様の方法
を用いて測定した。その結果、ＢＥ−４２３０３類はヒ
ト腫瘍細胞に対しても強い増殖阻害活性を示し、その５
０％増殖阻止濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。

【０００７】

【表１】 上述したようにＢＥ−４２３０３類はマウス及びヒトの
腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、本
発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として有
用である。ＢＥ−４２３０３類の製造法について説明す
る。本発明の抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢ
の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍性物
質 ＢＥ−４２３０３類を生産するものならばいずれで
も良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物が挙
げられる。 １．形態 Ａ４２３０３株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し輪生岐および菌糸の分断は認められない。気菌
糸上には胞子の連鎖（１０〜５０個、時としてそれ以
上）を作り、その形態は、らせん状である。胞子の表面
は平滑で大きさが１．０〜０．８Ｘ０．６〜０．４ μ
ｍの卵形であり、胞子のう、鞭毛胞子、および菌核等の
特殊な器官は観察されない。 ２．各種寒天平板培地における培養性状 各種寒天平板培地において、２８℃、１４日間培養した
結果を第２表に示す。 第２表

【０００８】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） １５℃： 生育せず １８℃： 生育不良、気菌糸形成せず ２２℃： 生育良好、気菌糸形成僅少 ２６℃： 生育良好、気菌糸形成僅少 ２９℃： 生育非常に良好、気菌糸形成良好 ３４℃： 生育非常に良好、気菌糸形成良好 ３７℃： 生育良好、気菌糸形成僅少 ４１℃： 生育不良、気菌糸形成せず ４８℃： 生育せず ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含有量７％以下で生育 （チロシン寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。炭素源の利用能
の結果を第３表に示す。

【０００９】

【表３】 ６．細胞壁組成 ＬＬ−ジアミノピメリン酸とグリシンが検出された。

【００１０】以上の菌学的諸性質よりＡ４２３０３株は
放線菌ストレプトミセス属に属すると考えられる。した
がってＡ４２３０３株をストレプトミセス エスピー
Ａ４２３０３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．
Ａ４２３０３）と称することとした。尚、本菌株は通
商産業省工業技術院生命工学工学技術研究所に寄託され
ており、受託番号はＦＥＲＭ Ｐ−１４７０６である。
本発明で使用する抗腫瘍性物質ＢＥ−４２３０３Ａおよ
びＢを生産する微生物の変異株は、例えばＸ線若しくは
紫外線などの照射処理、例えばナイトロジェンマスター
ド、アザセリン、亜硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ
−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン
（ＮＴＧ）等の変異誘起剤による処理、ファージ接触、
形質転換、形質導入又は接合などの通常用いられる菌種
変換処理方法によりＢＥ−４２３０３ＡおよびＢ生産菌
を変異させた微生物である。本発明のＢＥ−４２３０３
ＡおよびＢを製造するにあたり、ＢＥ−４２３０３Ａお
よびＢの生産菌株を栄養源含有培地に接種して好気的に
発育させることにより、ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢを
含む培養物が得られる。栄養源としては、放線菌の栄養
源として公知のものが使用できる。例えば、炭素源とし
ては、市販されているブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶
糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物として
用いられる。窒素源としては、市販されている大豆粉、
コーンステイープリカー、肉エキス、酵母エキス、乾燥
酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、魚粉、ミートミー
ル、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機アンモニウム塩又は
硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物として用いられ
る。無機塩としては、市販されている炭酸カルシウム、
塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、臭
化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は各種リン酸塩など
を使用することができる。その他必要に応じて、鉄、マ
ンガン、亜鉛、コバルト、モリブデン酸などの重金属塩
を微量添加することもできる。また、発泡の激しい場合
には消泡剤として、例えば大豆油又は亜麻仁油などの植
物油、オクタデカノールなどの高級アルコール類、各種
シリコン化合物などを適宜添加してもよい。これらのも
の以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−４２３０３Ａお
よびＢの生産に役立つもの例えば３−（Ｎ−モルホリ
ノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナトリウムなどであ
れば、いずれも使用することができる。培養方法として
は、一般の微生物代謝産物の生産方法と同様に行なえば
よく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養の場合
は、静置培養、攪拌培養、振とう培養又は通気培養など
のいずれを実施してもよいが、特に振盪培養又は深部通
気攪拌培養が望ましい。培養温度は２２〜３７℃が適当
であるが、好ましくは２６〜３７℃である。好ましい培
地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は４８ 時間〜１
９２時間、好ましくは ７２ 時間〜１４４ 時間であ
る。培養物から目的とするＢＥ−４２３０３ＡおよびＢ
を採取するには、微生物の生産する代謝物から採取する
のに通常使用される分離手段が適宜利用される。ＢＥ−
４２３０３ＡおよびＢは培養濾液中及び菌体中に存在す
るので、培養濾液または菌体より通常の分離手段、例え
ば溶媒抽出法、イオン交換樹脂法又は吸着もしくは分配
クロマトグラフィー法及びゲル濾過法などを単独又は組
み合わせて行なうことにより精製できる。好ましい分離
精製の例として次の方法が挙げられる。まず培養液を濾
過し、菌体を得る。得られた菌体をメタノールまたはア
セトンなどの有機溶媒を用いて抽出する。得られた粗抽
出物について、水／２ーブタノン分配を行ない、２ーブ
タノンを留去後得られる抽出物についてシリカゲルクロ
マトグラフィー（クロロホルム／メタノールで溶出）な
どを行なうことにより、ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢを
粉末もしくは固体として得ることができる。本発明の式
［１］ で表される化合物のうちＲ₁がヒドロキシ基
である化合物のヒドロキシ基は、化学の分野で通常用い
られる方法によってヒドラジノ基に変換することができ
る。ＢＥ−４２３０３Ａは、ＢＥ−４２３０３Ｃに、Ｂ
Ｅ−４２３０３Ｂは、ＢＥ−４２３０３Ｄにそれぞれ変
換することができる。本発明の化合物 ＢＥ−４２３０
３類は腫瘍細胞の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮する
が、本発明化合物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形
態としては各種の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセ
ル剤、散剤、顆粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例
えば溶液もしくは懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤
が挙げられる。固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル
剤、顆粒剤又は粉末の形態として製造することもできる
が、適当な添加物を使用して製造することもできる。そ
のような添加物としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖
などの糖類、例えばトウモロコシ、小麦もしくは米など
のデンプン類、例えばステアリン酸などの脂肪酸、例え
ばメタケイ酸アルミン酸マグネシウムもしくは無水リン
酸カルシウムなどの無機塩、例えばポリビニルピロリド
ンもしくはポリアルキレングリコールなどの合成高分
子、例えばステアリン酸カルシウムもしくはステアリン
酸マグネシウムなどの脂肪酸塩、例えばステアリルアル
コールもしくはベンジルアルコールなどのアルコール
類、例えばメチルセルロース、カルボキシメチルセルロ
ース、エチルセルロースもしくはヒドロキシプロピルメ
チルセルロースなどの合成セルロース誘導体、その他、
水、ゼラチン、タルク、植物油、アラビアゴムなど通常
用いられる添加物が挙げられる。これらの錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤及び粉末などの固形製剤は一般的には０．
１〜１００重量％、好ましくは５〜１００重量％の有効
成分を含む。液状製剤は、水、アルコール類又は例えば
大豆油、ピーナッツ油もしくはゴマ油などの植物由来の
油など液状製剤において通常用いられる適当な添加剤を
使用し、懸濁液、シロップ剤もしくは注射剤などの形態
として製造される。特に、非経口的に筋肉内注射、静脈
注射又は皮下注射で投与する場合の適当な溶剤として
は、例えば注射用蒸留水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉
注射用）、生理食塩水、ブドウ糖水溶液、エタノール、
静脈内注射用液体（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリ
ウムなどの水溶液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び
静脈内注射用）など、又はこれらの混合溶液が挙げられ
る。これらの注射剤はあらかじめ溶解したもののほか、
粉末のままあるいは適当な添加剤を加えたものを用時溶
解する形態もとり得る。これらの注射液は通常、０．１
〜１０重量％、好ましくは１〜５重量％の有効成分を含
む。又、経口投与の懸濁剤又はシロップ剤などの液剤
は、０．５〜１０重量％の有効成分を含む。本発明の化
合物の実際に好ましい投与量は、使用される化合物の種
類、配合された組成物の種類、適用頻度及び治療すべき
特定部位、宿主及び腫瘍によって変化することに注意す
べきである。例えば、１日あたりの成人の投与量は、経
口投与の場合、１０〜５００ ｍｇであり、非経口投
与、好ましくは静脈注射の場合、１日あたり、１０〜１
００ ｍｇである。なお、投与回数は投与方法及び症状
によって異なるが、１回ないし５回である。以下に、実
施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本発明はこ
れら実施例のみに限定されるものではない。

【００１１】

【発明の実施の形態】

【００１２】

【実施例】

実施例１：ＢＥ−４２３０３ＡおよびＢの発酵製造 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４２３０３株をグル
コース０．１％、デキストリン２．０％、魚粉０．５
％、グルテンミール１．０％、酵母エキス０．１％、塩
化ナトリウム０．１％、硫酸マグネシウム０．０５％、
硫酸亜鉛０．００００８％、塩化カルシウム０．０５
％、硫酸第一鉄０．０００２％、塩化第一銅０．０００
０４％、塩化マンガン０．００００４％、塩化コバルト
０．００００４％、ほう酸ナトリウム０．００００８
％、モリブデン酸アンモニウム０．０００２４％、３−
（Ｎ−モルホリノ）プロパンスルホン酸０．５％からな
る培地（ｐＨ ６．８）１１０ ｍｌを含む５００ ｍ
ｌ容の三角フラスコ４本に接種し、２８℃で７２時間、
回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養
液を２ｍｌずつ上記の培地を１１０ｍｌを含む５００ｍ
ｌ容の三角フラスコ１００本に接種し２８℃で １２０
時間、回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。
このようにして得られた培養液（１０ Ｌ）から濾過に
より菌体を分離し、この菌体にメタノール６Ｌを加え、
数時間攪拌後、菌体を濾去し、メタノール抽出液を得
た。メタノール抽出液のメタノールを減圧下に留去し、
残渣にヘキサン３Ｌ、メタノール２Ｌを加えて抽出し
た。再びメタノール抽出液を減圧下に留去した。更に残
渣に２ーブタノン３Ｌ、水１Ｌを加えて抽出した後、２
ーブタノン抽出液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカゲ
ルのクロマト塔（３．５Ｘ７０ ｃｍ）にかけ、クロロ
ホルム／メタノール／水の混合溶媒（２０：１：０．１
→５：１：０．１）で順次溶出した。溶出した活性画分
を減圧下に濃縮乾固し、ＢＥ−４２３０３Ａを含む固体
４００ｍｇ、ＢＥ−４２３０３Ｂを含む固体３２０ｍｇ
をそれぞれ得た。 実施例２：ＢＥ−４２３０３Ａの製造 実施例１で得られたＢＥ−４２３０３Ａを含む混合物４
００ ｍｇをクロロホルム２ ｍｌとメタノール２ ｍ
ｌに溶解し、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア
製，３．５Ｘ５５ｃｍ，溶出； クロロホルム：メタノ
ール ／ １：１ ）のクロマト用カラムにかけて精製
し、目的の分画を減圧下に濃縮した。次いでクロマトレ
ックスＯＤＳカラム（富士シリシア社製、ｃｈｒｏｍａ
ｔｏｒｅｘ^TM ＯＤＳ ＤＵ３０５０ＭＴ， ４．０
Ｘ ５０ ｃｍ ）にかけ、０．１％のりん酸を含む８
２％メタノールを移動相とする液体クロマトグラフィー
に付し、ＢＥ−４２３０３Ａを含む画分を得た。その画
分を減圧下に約半分まで濃縮し、４℃、終夜で放置し結
晶化を行った後、濾過、洗浄することによりによりＢＥ
−４２３０３Ａの白色粉末を４６ ｍｇ得た。 実施例３：ＢＥ−４２３０３Ｂの製造 実施例１で得られたＢＥ−４２３０３Ｂを含む混合物３
２０ ｍｇに、ジメチルスルホキシド１０ ｍｌを加え
攪拌後濾過した。得られた濾液に水５０ ｍｌを加えて
凍結させた後、凍結乾燥により溶媒を留去した。次いで
クロロホルム／メタノール／りん酸 （１：１：０．０
２） の溶液１０ ｍｌを加え、可溶部についてトヨパ
ール ＨＷ−４０（東ソー社製，２．５Ｘ７０ｃｍ、溶
出；クロロホルム：メタノール：りん酸＝１：１：０．
０２）のカラムにかけて、ＢＥ−４２３０３Ｂを含む画
分を得た。その画分を４℃、終夜で放置し結晶化を行っ
た後、濾過、洗浄することにより、ＢＥ−４２３０３Ｂ
の白色粉末を４６ｍｇ得た。 実施例４：ＢＥ−４２３０３Ｃの製造 実施例２で得られたＢＥ−４２３０３Ａ １５ｍｇと抱
水ヒドラジン１．４７ｍｇをジメチルホルムアミド２．
０ｍｌ中に加え、４０℃、１時間攪拌後、更に５０℃、
１時間反応させた。反応を進めるために、抱水ヒドラジ
ンを反応２時間後に０．５８ｍｇ、３．５時間後に０．
２８ｍｇを加え、また反応２時間後、反応温度を６０℃
にして、更に４時間反応させた。得られた反応液を濃縮
乾固した後、セファデックスＬＨ−２０（ファルマシア
社製，１．５Ｘ９０ｃｍ） のクロマト塔にかけメタノ
ールで溶出した。目的物を含む画分を濃縮乾固してＢＥ
−４２３０３Ｃの黄褐色固体を６．０ｍｇ得た。 実施例５：ＢＥ−４２３０３Ｄの製造 実施例３で得られたＢＥ−４２３０３Ｂ １５ｍｇと抱
水ヒドラジン１．６７ｍｇをジメチルホルムアミド１．
０ｍｌ中に加え、６０℃、１．５時間反応させた。得ら
れた反応液を濃縮乾固した後、セファデックスＬＨ−２
０（ファルマシア社製，１．５Ｘ９０ｃｍ）のクロマト
塔にかけメタノールで溶出した。目的物を含む画分を濃
縮乾固してＢＥ−４２３０３Ｄの黄褐色固体を７．３ｍ
ｇ得た。以下に本発明の化合物の製剤例を示すが、本発
明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるものではな
い。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−４２３０３Ｂ） １０部 重質酸化マグネシウム １５部 乳糖 ７５部 を均一に混合して、３５０μｍ以下の散剤とする。この
散剤をカプセル容器に入れカプセル剤とした。 製剤例２ 本物質（ＢＥ−４２３０３Ｂ） ４５部 澱粉 １５部 乳糖 １６部 結晶性セルロース ２１部 ポリビニルアルコール ３部 蒸留水 ３０部 を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。 製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ ｍｍの錠剤を作製した。 製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ ｍｍの錠剤とした後、これに
シロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を
加えて糖衣錠を作製した。

【００１３】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４２３０３類
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 【化１】 ［式中、Ｒ₁はヒドロキシ基又はヒドラジノ基を、Ｒ₂は
   水素原子又はメチル基を示す］で表される化合物。
2. 【請求項２】ストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
   ｅｓ）属に属し、一般式 【化２】 ［式中、Ｒ_1aはヒドロキシ基、Ｒ₂は水素原子又はメチ
   ル基を示す］で表される化合物を産生する能力を有する
   微生物又はその変異株を培養し、一般式［１Ａ］で表さ
   れる化合物を採取することを特徴とする一般式［１Ａ］
   で表される化合物の製造法。
3. 【請求項３】微生物又はその変異株が、ストレプトミセ
   ス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）で
   ある請求項２記載の製法。
4. 【請求項４】請求項１記載の化合物を有効成分として含
   有することを特徴とする抗腫瘍剤。
5. 【請求項５】一般式 【化３】 ［式中、Ｒ_1aはヒドロキシ基、Ｒ₂は水素原子又はメチ
   ル基を示す］で表される化合物を産生する能力を有する
   微生物又はその変異株。
6. 【請求項６】微生物が、ストレプトミセス・エスピー
   Ａ４２３０３（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ
   ４２３０３）である請求項５記載の微生物又はその変異
   株。