JPH10147594A - 抗腫瘍性物質ｂｅ−４３５４７類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】新規抗腫瘍剤の創製。 【解決手段】一般式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒは−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−（Ｃ
Ｈ₂）₁₂ＣＨ₃、−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃） ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₃、−（ＣＨ₂）₁₁ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−（ＣＨ₂）₁₃Ｃ
Ｈ₃、−（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂又は−（ＣＨ₂）₁₄
ＣＨ₃を示す］で表される化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は医薬の分野で有用で
あり、より具体的には腫瘍細胞の増殖を阻害して抗腫瘍
作用を示す新規化合物、その製造法及びその用途並びに
該化合物を産生する微生物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】癌化学療法の分野においては、既に多く
の化合物が医薬品として実用化されている。しかしなが
らさまざまな種類の腫瘍に対してその効果は必ずしも充
分ではなく、また臨床上これらの薬剤に対する腫瘍細胞
の耐性現象が明らかにされるにつれ、その臨床的応用性
は複雑化している［第４７回日本癌学会総会記事、１２
頁〜１５頁（１９８８年）等参照］。このような状況
下、癌治療の分野においては常に新規抗腫瘍性物質の開
発が求められている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明は上記の希求に
応えることのできる新規な抗腫瘍性物質を提供すること
を目的とするものである。即ち、既存の抗腫瘍性物質が
充分に効果を発揮できない種々の腫瘍に対しても抗腫瘍
効果を発揮する化合物を提供することが本発明が解決し
ようとする課題である。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題を解決すべく、抗腫瘍活性を有する物質について微生
物二次代謝産物を広くスクリーニングした結果、後記一
般式［Ｉ］で表される化合物が優れた抗腫瘍作用を示す
ことを見いだして本発明を完成した。即ち、本発明は新
規な一般式［Ｉ］

【０００５】

【化２】 ［式中、Ｒは−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−（Ｃ
Ｈ₂）₁₂ＣＨ₃、−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃） ＣＨ₂Ｃ
Ｈ₃、−（ＣＨ₂）₁₁ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−（ＣＨ₂）₁₃Ｃ
Ｈ₃、−（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂又は−（ＣＨ₂）₁₄
ＣＨ₃を示す］で表される化合物、その製法及び用途、
並びに一般式［Ｉ］の化合物を産生する能力を有するス
トレプトミセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属す
る微生物に関するものである。

【０００６】一般式［Ｉ］の化合物は、その産生菌株ス
トレプトミセス・エスピー Ａ４３５４７株に因んで、
Ｒが−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃）₂である化合物をＢＥ
−４３５４７Ａ₁、−（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ₃である化合物を
ＢＥ−４３５４７Ａ₂、−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃） Ｃ
Ｈ₂ＣＨ₃である化合物をＢＥ−４３５４７Ｂ₁、−（Ｃ
Ｈ₂）₁₁ＣＨ（ＣＨ₃）₂である化合物をＢＥ−４３５４
７Ｂ₂、−（ＣＨ₂）₁₃ＣＨ₃である化合物をＢＥ−４３
５４７Ｂ₃、−（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂である化合物
をＢＥ−４３５４７Ｃ₁、−（ＣＨ₂）₁₄ＣＨ₃である化
合物をＢＥ−４３５４７Ｃ₂と称し、またこれらを総称
してＢＥ−４３５４７類と称する。以下に本発明にかか
わる新規な抗腫瘍性物質ＢＥ−４３５４７類の物理化学
的な性状を示す。下記にＮＭＲ測定における略号の意味
を示す。 ｓ ： シングレット ｄ ： ダブレット ｔ ： トリプレット ｑ ： カルテット ｍ ： マルチプレット ｂｒ： ブロード Ｊ ： カップリング定数 Ｈｚ： ヘルツＢＥ−４３５４７Ａ₁の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₀Ｈ₄₉Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５６４．３６４４ 計算値 ５６４．３６４９ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋１２．８°（ｃ＝０．５，Ｍ
ｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３８ｓｈ（１３，２００），２５８
（１６，２００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４４
２，３４１０，３３６９，３２５３，２９２０，２８５
２，１７４９，１７０９，１６８９，１６６２，１６１
８，１５９１，１５３３，１５１６，１４６８，１４０
０，１２７５，１１９２，１１６５，１１０９，１０８
２，１０１８，９７４，９３７，８７０，８４９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．５９（１Ｈ，ｓ），８．３０（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，５．５Ｈｚ），７．０５（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１５．２Ｈｚ），６．２０（１Ｈ，ｓ），５．７２
（１Ｈ，ｓ），５．２７（１Ｈ，ｓ），５．０５（１
Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１９．０Ｈｚ），４．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，５．５Ｈｚ），３．７８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，６．７Ｈｚ），３．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
９．０Ｈｚ），３．３３（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝９．８，
７．０Ｈｚ），２．９１（３Ｈ，ｓ），１．６１（３
Ｈ，ｓ），１．６１（１Ｈ，ｍ），１．４６（１Ｈ，
ｍ），１．４２（１Ｈ，ｍ），１．１２−１．２８（１
６Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），
１．０５（２Ｈ，ｍ），０．７７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．
７Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．５（ｓ），１７３．７（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１６６．５
（ｓ），１３９．５（ｄ），１３６．８（ｓ），１１
６．３（ｄ），１１４．９（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．２（ｄ），５０．３（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．７（ｄ），３８．３（ｔ），３５．１（ｑ），３
１．３（ｔ），２９．２（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．８（ｔ），２８．７（ｔ），２
８．７（ｔ），２７．２（ｄ），２６．７（ｔ），２
４．２（ｔ），２２．１（ｑ），２２．１（ｑ），２
０．７（ｑ），１５．７（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１０．６ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］ＢＥ−４３５４７Ａ₂の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₀Ｈ₄₉Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５６４．３６４０ 計算値 ５６４．３６４９ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋９°（ｃ＝１．０，ＭｅＯＨ
−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３６ｓｈ（１１，６００），２５７
（１４，３００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４０
６，３３６７，３３０２，３２６９，２９２０，２８５
０，１７４７，１７０７，１６６０，１６１８，１５９
１，１５３１，１５１４，１４６８，１４００，１３７
７，１２６９，１１９２，１１６１，１１３４，１１１
１，１０８０，１０１２，９７２，９３７，８６６，８
４９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．５９（１Ｈ，ｓ），８．３２（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，５．５Ｈｚ），７．０４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１５．３Ｈｚ），６．２１（１Ｈ，ｓ），５．７２
（１Ｈ，ｓ），５．２６（１Ｈ，ｓ），５．０４（１
Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１９．２Ｈｚ），４．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，５．５Ｈｚ），３．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，６．７Ｈｚ），３．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
９．２Ｈｚ），３．３３（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝９．８，
７．０Ｈｚ），２．９１（３Ｈ，ｓ），１．６１（３
Ｈ，ｓ），１．６１（１Ｈ，ｍ），１．４７（１Ｈ，
ｍ），１．１２−１．２８（２２Ｈ，ｍ），１．０９
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），０．７８（３Ｈ，ｔ，
Ｊ＝６．７Ｈｚ ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．６（ｓ），１７３．７（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１６６．５
（ｓ），１３９．５（ｄ），１３６．８（ｓ），１１
６．３（ｄ），１１４．９（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．２（ｄ），５０．３（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．７（ｄ），３５．０（ｑ），３１．３（ｔ），３
１．２（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２８．８（ｔ），２
８．７（ｔ），２８．７（ｔ），２８．６（ｔ），２
４．２（ｔ），２２．０（ｔ），２０．７（ｑ），１
５．７（ｑ），１３．５（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１１．３ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］ＢＥ−４３５４７Ｂ₁の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₁Ｈ₅₁Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５７８．３８０７ 計算値 ５７８．３８０５ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋１９．６°（ｃ＝０．５，Ｍ
ｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３８ｓｈ（１２，１００），２５７
（１４，８００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４４
２，３４０８，３３６９，３３３１，３２６１，２９６
２，２９２０，２８５２，２３３５，１７４９，１７０
７，１６６２，１６１６，１５８９，１５３５，１５１
４，１４６６，１４２７，１４００，１３７７，１３５
０，１２７７，１１９０，１１６１，１１３４，１１０
９，１０７８，１０１２，９７２，９３５，８６８，８
４９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．５７（１Ｈ，ｓ），８．１３（１
Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），７．０８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
１５．１Ｈｚ），６．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．１Ｈ
ｚ），６．０５（１Ｈ，ｓ），５．７２（１Ｈ，ｓ），
５．２９（１Ｈ，ｓ），５．０８（１Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝
１０．０Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１８．９Ｈ
ｚ），４．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，５．８Ｈ
ｚ），３．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１６．５，６．７Ｈ
ｚ），３．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１８．９Ｈｚ），３．
３４（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝１０．０，７．０Ｈｚ），２．
９２（３Ｈ，ｓ），１．６１（３Ｈ，ｓ），１．６０
（１Ｈ，ｍ），１．４６（１Ｈ，ｍ），１．１２−１．
２８（１９Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０
Ｈｚ），１．０２（１Ｈ，ｍ），０．９９（１Ｈ，
ｍ），０．７６（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），０．７
４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．５（ｓ），１７３．７（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．２（ｓ），１６６．６
（ｓ），１３９．６（ｄ），１３６．７（ｓ），１１
６．２（ｄ），１１５．２（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．１（ｄ），５０．４（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．９（ｄ），３５．９（ｔ），３５．１（ｑ），３
３．７（ｄ），３１．４（ｔ），２９．３（ｔ），２
９．０（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．８（ｔ），２８．８（ｔ），２８．７（ｔ），２
６．４（ｔ），２４．２（ｔ），２０．７（ｑ），１
８．６（ｑ），１５．７（ｑ），１０．８（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１３．４ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］，２２．８ｍｉｎ
［高速液体クロマトグラフィー；カラム：フルオフィッ
クス ４．６Φｘ２５０ｍｍ、溶出溶媒：７０％メタノ
ール、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎ
ｍ］ＢＥ−４３５４７Ｂ₂の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₁Ｈ₅₁Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５７８．３８０４ 計算値 ５７８．３８０５ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋１６．８°（ｃ＝０．５，Ｍ
ｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３６ｓｈ（１３，５００），２５７
（１６，５００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４４
４，３４０６，３３６９，３２６１，３２５３，２９２
０，２８５０，２３６２，２３３３，１７４９，１７０
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２，１４６８，１４２９，１４００，１３７７，１３４
６，１２７７，１１９０，１１６３，１１３４，１１０
９，１０７８，１０１６，９７４，９３７，８６６，８
４９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．５７（１Ｈ，ｓ），８．１６（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，５．５Ｈｚ），７．０８（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），６．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１５．０Ｈｚ），６．０７（１Ｈ，ｓ），５．７２
（１Ｈ，ｓ），５．２８（１Ｈ，ｓ），５．０８（１
Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝９．７Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１９．２Ｈｚ），４．０３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，５．５Ｈｚ），３．７９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，６．７Ｈｚ），３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
９．２Ｈｚ），３．３４（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝９．７，
７．０Ｈｚ），２．９２（３Ｈ，ｓ），１．６１（３
Ｈ，ｓ），１．６０（１Ｈ，ｍ），１．４６（１Ｈ，
ｍ），１．４３（１Ｈ，ｍ），１．１２−１．２８（１
８Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），
１．０５（２Ｈ，ｍ），０．７７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．
４Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．５（ｓ），１７３．７（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．２（ｓ），１６６．５
（ｓ），１３９．６（ｄ），１３６．７（ｓ），１１
６．２（ｄ），１１５．２（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．１（ｄ），５０．３（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．９（ｄ），３８．３（ｔ），３５．１（ｑ），３
１．４（ｔ），２９．２（ｔ），２９．０（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．８（ｔ），２８．７（ｔ），２７．２（ｄ），２
６．７（ｔ），２４．２（ｔ），２２．０（ｑ），２
２．０（ｑ），２０．７（ｑ），１５．７（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１３．４ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］，２４．２ｍｉｎ
［高速液体クロマトグラフィー；カラム：フルオフィッ
クス ４．６Φｘ２５０ｍｍ、溶出溶媒：７０％メタノ
ール、流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎ
ｍ］ＢＥ−４３５４７Ｂ₃の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₁Ｈ₅₁Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５７８．３７８５ 計算値 ５７８．３８０５ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋９．４°（ｃ＝１．０，Ｍｅ
ＯＨ−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３８ｓｈ（１３，３００），２５８
（１６，４００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４４
４，３４０８，３３６９，３２６７，２９２０，２８５
０，１７４９，１６９１，１６６２，１６１６，１５９
１，１５３３，１５１２，１４６８，１４００，１３７
７，１２７５，１１９２，１１６３，１１０９，１０８
０，１０１２，９７４，９３７，８６８，８４９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．５８（１Ｈ，ｓ），８．１８（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４，５．５Ｈｚ），７．０７（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
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５，６．４Ｈｚ），３．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．６Ｈ
ｚ），３．３４（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝９．８，７．０Ｈ
ｚ），２．９２（３Ｈ，ｓ），１．６１（３Ｈ，ｓ），
１．６１（１Ｈ，ｍ），１．４７（１Ｈ，ｍ），１．１
２−１．２８（２４Ｈ，ｍ），１．１０（３Ｈ，ｄ，Ｊ
＝７．０Ｈｚ），０．７８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈ
ｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．５（ｓ），１７３．７（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１６６．６
（ｓ），１３９．６（ｄ），１３６．８（ｓ），１１
６．２（ｄ），１１５．２（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．１（ｄ），５０．４（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．９（ｄ），３５．１（ｑ），３１．４（ｔ），３
１．２（ｔ），２９．０（ｔ），２９．０（ｔ），２
９．０（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．８（ｔ），２８．７（ｔ），２
８．６（ｔ），２４．２（ｔ），２２．０（ｔ），２
０．７（ｑ），１５．７（ｑ），１３．５（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１４．５ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］ＢＥ−４３５４７Ｃ₁の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₂Ｈ₅₃Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５９２．３９３０ 計算値 ５９２．３９６２ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋１３．７°（ｃ＝１．０，Ｍ
ｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３５ｓｈ（１１，５００），２５６
（１４，８００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３４４
２，３４１０，３３７１，２９１８，２８５０，１７４
９，１７０７，１６８９，１６６０，１５３３，１５１
６，１４６８，１４００，１２７５，１１９２，１１６
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４，９３７，８６８，８４９¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．６０（１Ｈ，ｓ），８．３４（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．８，５．５Ｈｚ），７．０４（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１５．０Ｈｚ），６．２３（１Ｈ，ｓ），５．７２
（１Ｈ，ｓ），５．２６（１Ｈ，ｓ），５．０４（１
Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１９．０Ｈｚ），４．００（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，５．５Ｈｚ），３．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．５，６．８Ｈｚ），３．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
９．０Ｈｚ），３．３３（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝９．８，
７．０Ｈｚ），２．９１（３Ｈ，ｓ），１．６１（３
Ｈ，ｓ），１．６１（１Ｈ，ｍ），１．４６（１Ｈ，
ｍ），１．４２（１Ｈ，ｍ），１．１２−１．２９（２
０Ｈ，ｍ），１．０９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ），
１．０５（２Ｈ，ｍ），０．７７（６Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．
７Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．６（ｓ），１７３．８（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．３（ｓ），１６６．６
（ｓ），１３９．５（ｄ），１３６．８（ｓ），１１
６．３（ｄ），１１４．９（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．２（ｄ），５０．３（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．７（ｔ），３８．３（ｔ），３５．１（ｑ），３
１．３（ｔ），２９．２（ｔ），２９．０（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．８（ｔ），２８．７（ｔ），２
７．２（ｔ），２６．７（ｔ），２４．２（ｔ），２
２．１（ｑ），２２．１（ｑ），２０．７（ｑ），１
５．７（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１７．４ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］ＢＥ−４３５４７Ｃ₂の物理化学的性状 性状 ；白色アモルファス状固体若しくは結晶 分子式 ；Ｃ₃₂Ｈ₅₃Ｎ₃Ｏ₇ 質量分析；［高分解能ＦＡＢ−ＭＳ］（Ｍ＋Ｈ）⁺とし
て： 実測値 ５９２．３９７６ 計算値 ５９２．３９６２ 比旋光度；［α］²⁰ _D＝＋１５．４°（ｃ＝０．３２，
ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃） 紫外部吸収スペクトル；λ_max（ＭｅＯＨ−ＣＨＣｌ₃，
ｎｍ（ε））：２３８ｓｈ（１４，７００），２５７
（１８，３００） 赤外部吸収スペクトル；（ＫＢｒ，ｃｍ^-1）：３３６
３，３２４６，２９２２，２８４８，２３６４，１７４
５，１７０７，１６５３，１６１６，１５８９，１５１
６，１４６４，１４２７，１３９８，１２５９，１１９
４，１１０９，１０８４，１０１４，９７６，９４１，
８６８¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル（５００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：８．６０（１Ｈ，ｓ），８．３９（１
Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．４，５．５Ｈｚ），７．０３（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝１５．２Ｈｚ），６．３０（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝１５．２Ｈｚ），６．２９（１Ｈ，ｂｒｓ），５．７
１（１Ｈ，ｓ），５．２６（１Ｈ，ｓ），５．０３（１
Ｈ，ｂｒｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．５２（１Ｈ，ｄ，
Ｊ＝１９．２Ｈｚ），３．９９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．２，５．５Ｈｚ），３．７７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１
６．２，６．４Ｈｚ），３．６７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１
９．２Ｈｚ），３．３３（１Ｈ，ｄｑ，Ｊ＝９．８，
６．７Ｈｚ），２．９１（３Ｈ，ｓ），１．６０（３
Ｈ，ｓ），１．６０（１Ｈ，ｍ），１．４７（１Ｈ，
ｍ），１．１２−１．２８（２６Ｈ，ｍ），１．０９
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），０．７８（３Ｈ，ｔ，
Ｊ＝６．７Ｈｚ）¹³ Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１２５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ
_6,δｐｐｍ）：２１１．６（ｓ），１７３．８（ｓ），
１６７．９（ｓ），１６７．４（ｓ），１６６．５
（ｓ），１３９．５（ｄ），１３６．８（ｓ），１１
６．３（ｄ），１１４．８（ｔ），８０．４（ｓ），７
６．２（ｄ），５０．３（ｔ），４４．０（ｔ），４
３．７（ｄ），３５．０（ｑ），３１．３（ｔ），３
１．２（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２
８．９（ｔ），２８．９（ｔ），２８．８（ｔ），２
８．７（ｔ），２８．６（ｔ），２４．２（ｔ），２
２．０（ｔ），２０．７（ｑ），１５．７（ｑ），１
３．５（ｑ） 溶解性；クロロホルム等の有機溶媒に溶け易く、水に溶
けにくい。 酸性、中性、塩基性物質の区別；中性物質 呈色反応；硫酸反応 陽性 Ｒｆ値；０．５３［メルク社製キーゼルゲル ６０Ｆ
₂₅₄使用、展開溶媒：クロロホルム−メタノール（１
０：１）］ ＲＴ；１８．８ｍｉｎ［高速液体クロマトグラフィー；
カラム：クロマトレックス−ＯＤＳ ４．６Φｘ２５０
ｍｍ、溶出溶媒：９０％メタノール、流速：１．０ｍｌ
／ｍｉｎ、検出：ＵＶ２５４ｎｍ］ＢＥ−４３５４７類の生物学的活性（抗腫瘍作用） 抗腫瘍性物質ＢＥ−４３５４７類のマウス実験腫瘍細胞
に対する増殖阻止作用を決定するため、試験管内で試験
を行なった。マウス白血病細胞Ｐ３８８に対する抗腫瘍
作用試験は、ＢＥ−４３５４７類をジメチルスルホキシ
ドに溶解した後、ジメチルスルホキシドで逐次希釈して
から、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地（２
０ｍＭの２−メルカプトエタノールを含む）に加え検液
とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を含む細胞培養培地
（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地、２０ｍ
Ｍの２−メルカプトエタノールを含む）５０μｌを９６
穴マイクロプレートに分注し、３７℃で２４時間、５％
ＣＯ₂下で培養した後に上記の検液５０μｌを加え、３
７℃で７２時間、５％ＣＯ₂下で培養後、ＭＴＴ測定法
により対照群と比較した。マウス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ
２６に対する抗腫瘍試験は、ＢＥ−４３５４７類をジメ
チルスルホキシドに溶解した後ジメチルスルホキシドで
逐次希釈してから、牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６
４０培地に加え検液とした。１ｘ１０³個の腫瘍細胞を
含む細胞培養培地（牛胎児血清１０％含有ＲＰＭＩ１６
４０培地）１００μｌを９６穴マイクロプレートに分注
し、３７℃で２４時間、５％ＣＯ₂下で培養した後に上
記の検液１００μｌを加え、３７℃で７２時間、５％Ｃ
Ｏ₂下で培養後、５０％トリクロロ酢酸で固定し、０．
４％スルホローダミンＢで染色後、１０ｍＭトリス液を
用いて細胞から色素を抽出した。４５０ｎｍを対照波長
として５５０ｎｍに於ける吸光度を測定して対照群と比
較した。その結果、ＢＥ−４３５４７類は両腫瘍細胞に
対し、強い増殖阻止活性を示し、５０％増殖阻害濃度
（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。更に、ＢＥ−４３
５４７類のヒト腫瘍細胞に対する抗腫瘍活性を試験管内
で試験した。細胞は、ヒト大腸癌細胞ＤＬＤ−１、ヒト
肺癌細胞ＰＣ−１３及びヒト胃癌細胞ＭＫＮ−４５を使
用し、細胞培養用培地は、全ての腫瘍細胞共に牛胎児血
清１０％含有ＲＰＭＩ１６４０培地を用い、上記のマウ
ス大腸癌細胞ｃｏｌｏｎ２６と同様の方法を用いて測定
した。その結果、ＢＥ−４３５４７類はヒト腫瘍細胞に
対しても強い増殖阻害活性を示し、その５０％増殖阻止
濃度（ＩＣ₅₀）は第１表の通りであった。

【０００７】

【表１】 上述したように ＢＥ−４３５４７類はマウス及びヒト
の腫瘍細胞に対し顕著な増殖阻止作用を示す。従って、
本発明はヒトをはじめとする哺乳動物の抗腫瘍剤として
有用である。つぎに、ＢＥ−４３５４７類の製造法につ
いて説明する。本発明の抗腫瘍性物質 ＢＥ−４３５４
７類の製造に使用する微生物又はその変異株は、抗腫瘍
性物質 ＢＥ−４３５４７類を生産するものならばいず
れでも良いが、例えば以下の菌学的性状を有する微生物
が挙げられる。 １．形態 Ａ４３５４７株はよく伸長し分岐する基生菌糸と気菌糸
を形成し輪生枝および菌糸の分断は認められない。気菌
糸上には胞子の長い連鎖（５０個以上）を作り、その形
態は直線状である。胞子の表面は平滑で大きさが１．８
〜１．０×０．９〜０．７μｍ位の円筒状であり、胞子
のう、鞭毛胞子および菌核等の特殊な器官は観察されな
い。コロニーはイースト・麦芽寒天培地等で気菌糸の成
熟と共に次第に湿潤化することが観察される。 ２．各種寒天平板培地における培養性状（２８℃、１４
日間培養）

【０００８】

【表２】 ３．生育温度（イースト・麦芽寒天培地、１４日間培
養） ９℃；生育せず １２℃；生育せず １５℃；生育僅少、気菌糸形成せず １８℃；生育良好、気菌糸形成せず ２２℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ２６℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ２９℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ３５℃；生育非常に良好、気菌糸形成良好 ３７℃；生育良好、気菌糸形成僅少 ４１℃；生育僅少、気菌糸形成せず ４８℃；生育せず ４．生理学的諸性質 （１）ゼラチンの液化 陽性 （グルコース・ペプトン・ゼラチン培地） （２）スターチの加水分解 陽性 （スターチ・無機塩寒天培地） （３）脱脂粉乳の凝固 陰性 （スキムミルク培地） （４）脱脂粉乳のペプトン化 陽性 （スキムミルク培地） （５）メラニン様色素の生成 陰性 （６）食塩耐性 食塩含有量４％以下で生育 （イースト・麦芽寒天培地） ５．炭素源の利用能 プリドハム・ゴドリーブ寒天を基礎培地とし、下記各種
糖を添加して２８℃１４日間培養した。

【０００９】

【表３】 ６．細胞壁組成 ＬＬージアミノピメリン酸とグリシンが検出された。以
上の菌学的諸性質よりＡ４３５４７株は放線菌ストレプ
トミセス属に属すると考えられる。したがって、Ａ４３
５４７株をストレプトミセス・エスピー Ａ４３５４７
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４３５４
７）と称することとした。尚、本菌株は通商産業省工業
技術院生命工学工業技術研究所に寄託されており、受託
番号はＦＥＲＭ Ｐ−１４４４４である。本発明で使用
する抗腫瘍性物質ＢＥ−４３５４７類を生産する微生物
の変異株は、例えばＸ線若しくは紫外線などの照射処
理、例えばナイトロジェンマスタード、アザセリン、亜
硝酸、２−アミノプリン若しくはＮ−メチル−Ｎ’−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン（ＮＴＧ）等の変異誘起
剤による処理、ファージ接触、形質転換、形質導入又は
接合などの通常用いられる菌種変換処理方法によりＢＥ
−４３５４７類生産菌を変異させた微生物である。本発
明のＢＥ−４３５４７類を製造するにあたり、ＢＥ−４
３５４７類の生産菌株を栄養源含有培地に接種して好気
的に発育させることにより、ＢＥ−４３５４７類を含む
培養物が得られる。栄養源としては、放線菌の栄養源と
して公知のものが使用できる。例えば、炭素源として
は、市販されているブドウ糖、麦芽糖、デンプン、庶
糖、糖蜜又はデキストリンなどが単独又は混合物として
用いられる。窒素源としては、市販されている大豆粉、
コーンスティープリカー、グルテンミール、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、綿実粉、ペプトン、小麦胚芽、
魚粉、ミートミール、脱脂米ヌカ、脱脂肉骨粉、無機ア
ンモニウム塩又は硝酸ナトリウムなどが単独又は混合物
として用いられる。無機塩としては、市販されている炭
酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、硫酸マ
グネシウム、臭化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム又は各
種リン酸塩などを使用することができる。その他必要に
応じて、鉄、マンガン、亜鉛、コバルト、モリブデン酸
などの重金属塩を微量添加することもできる。また、発
泡の激しい場合には消泡剤として、例えば大豆油又は亜
麻仁油などの植物油、オクタデカノールなどの高級アル
コール類、各種シリコン化合物などを適宜添加してもよ
い。これらのもの以外でも、該生産菌が利用し、ＢＥ−
４３５４７類の生産に役立つもの例えば ３−（Ｎ−モ
ルホリノ）プロパンスルホン酸又はホウ酸ナトリウムな
どであれば、いずれも使用することができる。培養方法
としては、一般の微生物代謝産物の生産方法と同様に行
なえばよく、固体培養でも液体培養でもよい。液体培養
の場合は、静置培養、攪拌培養、振とう培養又は通気培
養などのいずれを実施してもよいが、特に振盪培養又は
深部通気攪拌培養が望ましい。培養温度は１５〜４１℃
が適当であるが、好ましくは２２℃〜３５℃である。好
ましい培地のｐＨは４〜８の範囲で、培養時間は １２
０時間〜２１６時間、好ましくは１４４時間〜１９２時
間である。培養物から目的とするＢＥ−４３５４７類を
採取するには、微生物の生産する代謝物から採取するの
に通常使用される分離手段を適宜利用することができ
る。ＢＥ−４３５４７類は菌体中に存在するので、菌体
より通常の分離手段、例えば溶媒抽出法、イオン交換樹
脂法又は吸着もしくは分配クロマトグラフィー法及びゲ
ル濾過法などを単独又は組み合わせて行なうことにより
精製できる。好ましい分離精製の例として次の方法が挙
げられる。まず培養液を濾過し、菌体を得る。得られた
菌体をメタノールまたはアセトンなどの有機溶媒を用い
て抽出する。得られた粗抽出物について、水−酢酸エチ
ル系で分配を行ない、酢酸エチル層を留去後得られる残
留物についてシリカゲルクロマトグラフィー（クロロホ
ルム／メタノールで溶出）などを行なうことにより、Ｂ
Ｅ−４３５４７類を粉末もしくは固体として得ることが
できる。本発明の化合物ＢＥ−４３５４７類は腫瘍細胞
の増殖を阻害し、抗腫瘍効果を発揮するが、本発明化合
物を抗腫瘍剤として使用する際の投与形態としては各種
の形態を選択でき、例えば錠剤、カプセル剤、散剤、顆
粒剤もしくは液剤などの経口剤、又は例えば溶液もしく
は懸濁液などの殺菌した液状の非経口剤が挙げられる。
固体の製剤は、そのまま錠剤、カプセル剤、顆粒剤又は
粉末の形態として製造することもできるが、適当な添加
物を使用して製造することもできる。そのような添加物
としては、例えば乳糖もしくはブドウ糖などの糖類、例
えばトウモロコシ、小麦もしくは米などのデンプン類、
例えばステアリン酸などの脂肪酸、例えばメタケイ酸ア
ルミン酸マグネシウムもしくは無水リン酸カルシウムな
どの無機塩、例えばポリビニルピロリドンもしくはポリ
アルキレングリコールなどの合成高分子、例えばステア
リン酸カルシウムもしくはステアリン酸マグネシウムな
どの脂肪酸塩、例えばステアリルアルコールもしくはベ
ンジルアルコールなどのアルコール類、例えばメチルセ
ルロース、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロ
ースもしくはヒドロキシプロピルメチルセルロースなど
の合成セルロース誘導体、その他、水、ゼラチン、タル
ク、植物油、アラビアゴムなど通常用いられる添加物が
挙げられる。これらの錠剤、カプセル剤、顆粒剤及び粉
末などの固形製剤は一般的には０．１〜１００重量％、
好ましくは５〜１００重量％の有効成分を含む。液状製
剤は、水、アルコール類又は例えば大豆油、ピーナッツ
油もしくはゴマ油などの植物由来の油など液状製剤にお
いて通常用いられる適当な添加剤を使用し、懸濁液、シ
ロップ剤又は注射剤などの形態として製造される。特
に、非経口的に筋肉内注射、静脈注射又は皮下注射で投
与する場合の適当な溶剤としては、例えば注射用蒸留
水、塩酸リドカイン水溶液（筋肉注射用）、生理食塩
水、ブドウ糖水溶液、エタノール、静脈内注射用液体
（例えばクエン酸及びクエン酸ナトリウムなどの水溶
液）もしくは電解質溶液（点滴静注及び静脈内注射用）
など、又はこれらの混合溶液が挙げられる。これらの注
射剤はあらかじめ溶解したもののほか、粉末のままある
いは適当な添加剤を加えたものを用時溶解する形態もと
り得る。これらの注射液は通常、０．１〜１０重量％、
好ましくは１〜５重量％の有効成分を含む。又、経口投
与の懸濁剤又はシロップ剤などの液剤は、０．５〜１０
重量％の有効成分を含む。本発明の化合物の実際に好ま
しい投与量は、使用される化合物の種類、配合された組
成物の種類、適用頻度及び治療すべき特定部位、宿主及
び腫瘍によって変化することに注意すべきである。例え
ば、１日あたりの成人の投与量は、経口投与の場合、１
０〜５００ｍｇであり、非経口投与、好ましくは静脈注
射の場合、１日あたり、１０〜１００ｍｇである。な
お、投与回数は投与方法及び症状によって異なるが、１
回ないし５回である。以下に、実施例を挙げて本発明を
具体的に説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定
されるものではない。

【００１０】

【発明の実施の形態】

【００１１】

【実施例】

実施例１ ＢＥ−４３５４７類の製造法 斜面軟寒天培地に接種した放線菌Ａ４３５４７株をグル
コース０．２％、デキストリン２．０％、ミートミール
０．５％、脱脂米ヌカ０．５％、脱脂肉骨粉０．１％、
乾燥酵母０．０５％、硫酸マグネシウム０．０２５％、
臭化ナトリウム０．０２５％、塩化ナトリウム０．２５
％、リン酸水素二カリウム０．０５％、硫酸第一鉄０．
０００２％、塩化第二銅０．００００４％、塩化マンガ
ン０．００００４％、塩化コバルト０．００００４％、
硫酸亜鉛０．００００８％、ホウ酸ナトリウム０．００
００８％、モリブデン酸ナトリウム０．０００２４％か
らなる培地（ｐＨ７．２）１１０ｍｌを含む５００ｍｌ
容の三角フラスコ６本に接種し、２８℃で７２時間、回
転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。この培養液
を２ｍｌずつ上記の培地１１０ｍｌを含む５００ｍｌ容
の三角フラスコ２００本に接種し２８℃で１６８時間、
回転振盪機（毎分１８０回転）上で培養した。このよう
にして得られた培養液（約２０Ｌ）から濾過により菌体
を分離し、この菌体をメタノール２Ｌで洗浄後、メタノ
ール、メチルエチルケトンの混合溶媒（２：１）９Ｌで
数時間攪拌後、菌体を濾去し、粗抽出液を得た。この抽
出液をｎ−ヘキサン９Ｌで洗浄した後、酢酸エチル、脱
イオン水の混合溶媒（２：１）１８Ｌで溶剤抽出を行な
った。上層を減圧下に約１Ｌに濃縮し、クロロホルム
１．５Ｌ、メタノール１Ｌを加えて抽出した。得られた
クロロホルム抽出液を減圧下に濃縮し、残留物をシリカ
ゲル（１００ｇ）のクロマトカラムにかけ、クロロホル
ム、メタノールの混合溶媒（３０：１）で溶出した。溶
出した活性画分を減圧下に濃縮乾固し、ＢＥ−４３５４
７類を含む混合物を得た。再度、シリカゲル（８０ｇ）
のクロマトカラムを行なった後、セファデックスＬＨ−
２０のクロマトグラフィー用カラム（３φｘ５８ｃｍ）
にかけ、クロロホルム、メタノールの混合溶媒（１：
２）で溶出した。目的の分画を減圧下に濃縮し、クロロ
ホルム、メタノール及び脱イオン水の混合溶媒系を用い
て、４℃で２日間攪拌しながら結晶化を行ない、ＢＥ−
４３５４７類化合物を含む結晶を１０７６．７ｍｇ得る
ことができた。次いで、クロマトレックスのＯＤＳカラ
ム（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ，５０φｘ３００ｍｍ）を
用いた高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を行な
い、９０％メタノール溶液で溶出した結果、ＢＥ−４３
５４７Ａ₁，Ａ₂を含む画分Ｉ（１５６．３ｍｇ）、ＢＥ
−４３５４７Ｂ₁，Ｂ₂，Ｂ₃を含む画分ＩＩ（６５７．
１ｍｇ）、ＢＥ−４３５４７Ｃ₁，Ｃ₂を含む画分ＩＩＩ
（１５１．０ｍｇ）がそれぞれ得られた。画分Ｉ（１５
３．６ｍｇ）からは、９０％メタノール溶液でＨＰＬＣ
（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ−ＯＤＳ，２０φｘ２５０ｍ
ｍ）を行なうことにより、ＢＥ−４３５４７Ａ₁を２
７．４ｍｇ、ＢＥ−４３５４７Ａ₂を１１４．５ｍｇ単
離した。また、画分ＩＩの一部（３９８．０ｍｇ）よ
り、画分Ｉと同条件でＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅ
ｘ−ＯＤＳ，２０φｘ２５０ｍｍ）を行ない、ＢＥ−４
３５４７Ｂ₁，Ｂ₂の混合物を２６１．２ｍｇ、ＢＥ−４
３５４７Ｂ₃を１３０．５ｍｇ得た。更にＢＥ−４３５
４７Ｂ₁，Ｂ₂の混合物からは、７０％メタノールの溶出
溶液でフルオフィックスカラムを用いたＨＰＬＣ（Ｆｌ
ｕｏｆｉｘ，２０φｘ２５０ｍｍ）を行なうことによ
り、ＢＥ−４３５４７Ｂ₁を２７．９ｍｇ、ＢＥ−４３
５４７Ｂ₂を２２．２ｍｇ単離した。最後の画分ＩＩＩ
（１５１．０ｍｇ）においては、９０％メタノール溶液
でＨＰＬＣ（Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ−ＯＤＳ，２０φ
ｘ２５０ｍｍ）を行なうことにより、ＢＥ−４３５４７
Ｃ₁を１１２．８ｍｇ、ＢＥ−４３５４７Ｃ₂を１１．２
ｍｇ単離した。以下に本発明の化合物の製剤例を示す
が、本発明の化合物の製剤は本製剤例に限定されるもの
ではない。 製剤例１ 本物質（ＢＥ−４３５４７） １０（部） 重質酸化マグネシウム １５ 乳糖 ７５ を均一に混合して、３５０μｍ以下の粉末状又は細粒状
の散剤とする。この散剤をカプセル容器に入れカプセル
剤とした。 製剤例２ 本物質（ＢＥ−４３５４７） ４５（部） 澱粉 １５ 乳糖 １６ 結晶性セルロース ２１ ポリビニルアルコール ３ 蒸留水 ３０ を均一に混合した後、破砕造粒して乾燥し、次いで篩別
して直径１４１０〜１７７μｍの大きさの顆粒剤とし
た。 製剤例３ 製剤例２と同様の方法で顆粒剤を作製した後、この顆粒
剤９６部に対してステアリン酸カルシウム３部を加えて
圧縮成形し直径１０ｍｍの錠剤を作製した。 製剤例４ 製剤例２の方法で得られた顆粒剤９０部に対して結晶性
セルロース１０部及びステアリン酸カルシウム３部を加
えて圧縮成形し、直径８ｍｍの錠剤とした後、これにシ
ロップゼラチン、沈降性炭酸カルシウム混合懸濁液を加
えて糖衣錠を作製した。

【００１２】

【発明の効果】本発明に記載するＢＥ−４３５４７類
は、マウス及びヒトの腫瘍細胞に対して強い増殖抑制効
果を示すことから、医薬の分野で癌の治療剤として有用
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｐ 21/04 Ｃ１２Ｐ 21/04 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 小尻 勝久 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内 (72)発明者 須田 寛之 茨城県つくば市大久保３番地 萬有製薬株 式会社つくば研究所内

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式［Ｉ］ 【化１】 ［式中、Ｒは−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−（Ｃ
   Ｈ₂）₁₂ＣＨ₃、−（ＣＨ₂）₁₀ＣＨ（ＣＨ₃） ＣＨ₂Ｃ
   Ｈ₃、−（ＣＨ₂）₁₁ＣＨ（ＣＨ₃）₂、−（ＣＨ₂）₁₃Ｃ
   Ｈ₃、−（ＣＨ₂）₁₂ＣＨ（ＣＨ₃）₂又は−（ＣＨ₂）₁₄
   ＣＨ₃を示す］で表される化合物。
2. 【請求項２】一般式［Ｉ］で表される請求項１記載の化
   合物を産生する能力を有する微生物又はその変異株を培
   養し、一般式［Ｉ］で表される化合物を採取することを
   特徴とする、一般式［Ｉ］で表される化合物の製造法。
3. 【請求項３】微生物又はその変異株がストレプトミセス
   ・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ．）であ
   る請求項２記載の製造法。
4. 【請求項４】微生物がストレプトミセス・エスピー Ａ
   ４３５４７（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４
   ３５４７）又はその変異株である請求項２記載の製造
   法。
5. 【請求項５】請求項１記載の化合物を産生する能力を有
   するストレプトミセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
   ｃｅｓ ｓｐ．）又はその変異株。
6. 【請求項６】ストレプトミセス・エスピー Ａ４３５４
   ７（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｓｐ． Ａ４３５４
   ７）又はその変異株。
7. 【請求項７】一般式［Ｉ］で表される請求項１記載の化
   合物を有効成分として含有することを特徴とする抗腫瘍
   剤。