JPH11228526A - ペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩、その製造方法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】アルグ−ジンジパイン（ＲＧＰ）の蛋白質分解
活性を選択的に阻害することにより、歯周病疾患の予防
剤及び治療剤等として有用な新規化合物を提供するこ
と。 【解決手段】一般式 【化１】 （式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ¹及
びＡ²は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基
を示す。Ｒ¹は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ²は置換
オキシカルボニル基を示し、Ｒ³は−ＯＲ⁴又は−ＮＲ⁵
Ｒ⁶を示す。Ｒ⁴、Ｒ⁵又はＲ⁶は、同一又は異なってそれ
ぞれ低級アルキル基を示す。）で表されるペプチド誘導
体及びその薬学的に許容される塩、その製造方法及びそ
の用途。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なペプチド誘
導体及びその薬学的に許容される塩、その製造方法及び
その用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】多くの歯周病は歯周局所の常在微生物に
よって惹起される一種の感染症と考えられている。その
中でも特に、グラム陰性嫌気性桿菌のポルフィロモナス
・ジンジバリス（Porphyromonas gingivalis、以下
「Ｐ．ジンジバリス」と略す。）が成人性歯周炎や急速
進行性歯周炎において最も重要な病因菌であることが明
らかにされている(J. Clin. Periodontol., 15, 85-93,
1988、同316-323, 1988、J.Dent. Res.,63, 441-451,
1984)。近年、そのＰ．ジンジバリスが産生するプロテ
アーゼ群がその機能、即ちコラーゲンをはじめとする歯
周組織成分や生体防御系に関与する血清蛋白質を分解す
ることが知られ、病原性と深く関係していることが明ら
かにされている(Greiner D.,Mayrand D.:Biology of th
e Species Porphyromonas gingivalis, Edited by Shah
H. N., Mayrand D. and Genco R. J.,pp227-243, CRC
Press, Boca Raton, Ann Arbor, London, Tokyo, 199
3)。このＰ．ジンジバリスが産生するトリプシン様プロ
テアーゼ活性を有する蛋白質分解酵素であるアルグ−ジ
ンジパイン（Arg-gingipain、以下「ＲＧＰ」と略
す。）も好中球障害活性や歯周組織の主要成分であるコ
ラーゲンを分解することが知られ、菌の定着、歯周炎の
発現や歯周組織の破壊に関与するものと考えられている
（山本，日薬理誌，１０５，３４５〜３５５（１９９
５））。

【０００３】従来より、歯周病の予防及び治療には、細
菌の成育を阻害するような薬剤、例えばシクロヘキサジ
ン、トラネキサム酸やテトラサイクリン、ミノサイクリ
ン等の抗生物質、カミツレチンキ、ラタニアチンキ等の
天然物等が利用されている。しかしながら、これらの薬
剤は安全性に問題があったり、不快臭を伴う等種々の問
題が残されている。また、特開平５−９７７０８号公報
には、ＡＴＰアーゼ阻害剤、システインプロテアーゼ阻
害剤等を有効成分とする歯周病治療剤が開示されている
が、該治療剤の抗歯周病効果は満足のいくものではなか
った。一方、ＲＧＰを阻害する物質としては、特開平８
−８１３８０号公報に高分子量ポリフェノールが報告さ
れているのみである。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、歯周
病の発症と進行にＰ．ジンジバリスが密接に関係してい
ること、Ｐ．ジンジバリスの歯周病に関与する成分には
蛋白質分解酵素であるＲＧＰが寄与していることに着目
し、ＲＧＰの蛋白質分解活性を選択的に阻害することに
より、歯周病疾患の予防剤及び治療剤等として有用な新
規化合物を提供することにある。

【０００５】また、本発明の他の目的は、上記化合物の
製造方法及び用途を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者は、有効な歯周
病疾患の予防及び治療剤を得るべく鋭意研究を重ねた結
果、蛋白質分解酵素であるＲＧＰの活性を阻害する新規
なペプチド誘導体を見出し、これに基づき本発明を完成
した。

【０００７】即ち、本発明は、一般式

【０００８】

【化４】

【０００９】（式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を
示し、Ａ¹及びＡ²は同一又は相異なってリジル基又はヒ
スチジル基を示す。Ｒ¹は水素原子又はニトロ基を示
し、Ｒ²は置換オキシカルボニル基を示し、Ｒ³は−ＯＲ
⁴又は−ＮＲ⁵Ｒ⁶を示す。Ｒ⁴、Ｒ⁵又はＲ⁶は、同一又は
異なってそれぞれ低級アルキル基を示す。）で表される
ペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩に係る。

【００１０】また、本発明は、一般式

【００１１】

【化５】

【００１２】（式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を
示し、Ａ¹及びＡ²は同一又は相異なってリジル基又はヒ
スチジル基を示す。Ｒ¹は水素原子又はニトロ基を示
し、Ｒ²は置換オキシカルボニル基を示し、Ｒ³は−ＯＲ
⁴又は−ＮＲ⁵Ｒ⁶を示す。Ｒ⁴、Ｒ^５又はＲ^６は、同一又
は異なってそれぞれ低級アルキル基を示す。Ａ³及びＡ⁴
は同一又は相異なってＮ^εが保護基で保護されたリジル
誘導体又はＮ^imが保護基で保護されたヒスチジル誘導体
を示し、Ｒ⁷は水素原子、ニトロ基又は保護基を示
す。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容
される塩を、脱保護基反応することを特徴とする一般式

【００１３】

【化６】

【００１４】（式中、Ｘ、Ａ¹、Ａ²、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³
は、前記に同じ。）で表されるペプチド誘導体及びその
薬学的に許容される塩の製造方法にも係る。

【００１５】更に、本発明は、一般式（１）で表される
ペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を有効成
分とするアルグ−ジンジパイン阻害剤、一般式（１）で
表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容される塩
を有効成分とする歯周病疾患用薬剤、並びに一般式
（１）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容
される塩、及び薬学的に許容される担体を含有する組成
物にも係る。

【００１６】

【発明の実施の形態】一般式（１）のＲ²で示される置
換オキシカルボニル基としては、例えば、ベンジルオキ
シカルボニル、ジフェニルメトキシカルボニル、ｐ−メ
トキシベンジルオキシカルボニル等のアラルキルオキシ
カルボニル基、エトキシカルボニル、ｔｅｒｔ−ブトキ
シカルボニル等のアルキルオキシカルボニル基等が挙げ
られ、好ましくはアラルキルオキシカルボニル基であ
り、より好ましくはベンジルオキシカルボニル基であ
る。

【００１７】一般式（１）中、Ｒ⁴、Ｒ⁵又はＲ⁶の低級
アルキル基としては、例えばメチル、エチル、ｎ−プロ
ピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ペンチ
ル、ヘキシル基等の炭素数１〜６の直鎖状又は分枝状の
アルキル基が挙げられ、好ましくはメチル又はエチル基
である。

【００１８】一般式（１）の本発明化合物の内、好まし
い化合物は、一般式（１）においてＡ¹及びＡ²がリジル
基であり、Ｒ³が−ＮＲ⁵Ｒ⁶であるペプチド誘導体及び
その薬学的に許容される塩である。更に、より好ましい
化合物は、一般式（１）においてＡ¹及びＡ²がリジル
基、Ｒ¹が水素原子であり、Ｒ²がアラルキルオキシカル
ボニル基であり、Ｒ³が−ＮＲ⁵Ｒ⁶であるペプチド誘導
体及びその薬学的に許容される塩である。

【００１９】本発明化合物の薬学的に許容される塩とし
ては、特に制限はなく、薬学的に許容される酸を作用さ
せた酸付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、例えば
塩酸塩、硫酸塩等の無機酸塩、ギ酸塩、トリフルオロ酢
酸塩、酢酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、
コハク酸塩、メタンスルホン酸塩等の有機酸塩等の塩が
挙げられる。更に、本発明化合物又はその薬学的に許容
される塩は、水和物に代表される溶媒和物の形であって
もよい。

【００２０】また、本発明化合物を構成するアミノ酸は
Ｌ−体、Ｄ−体のいずれであっても良い。好ましくは、
Ｌ−体である。

【００２１】一般式（１）で表される本発明化合物は、
例えば、前記本発明製造方法に基づき、下記反応工程式
１に従って製造することができる。

【００２２】＜反応工程式１＞

【００２３】

【化７】

【００２４】（各式中、Ｘ、Ａ¹、Ａ²、Ｒ¹、Ｒ²、
Ｒ³、Ａ³、Ａ⁴及びＲ⁷は、前記に同じ。）。

【００２５】上記一般式（２）において、Ａ³及びＡ⁴で
示されるＮ^εが保護基で保護されたリジル誘導体又はＮ
^imが保護基で保護されたヒスチジル誘導体の保護基とし
ては、Ｒ²が安定であるような反応条件で除去されるも
のであれば特に制限はなく、例えば、ｔ−ブトキシカル
ボニル基、ｐ−メトキシカルボベンゾキシ基、トリチル
基等が挙げられる。

【００２６】Ｒ⁷で示される保護基としては、Ｒ²が安定
であるような反応条件で除去されるものであれば特に制
限はなく、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、１−ア
ダマンチルオキシカルボニル基、２,２,５,７,８−ペン
タメチルクロマン−６−スルホニル基等が挙げられ、好
ましくは２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−
スルホニル基である。

【００２７】〔工程(i)〕一般式（２）で表される化合
物を、適当な溶媒中あるいは無溶媒で、希酸で処理する
ことにより、Ａ³、Ａ⁴及びＲ⁷の保護基を選択に除去
し、一般式（１）で表される本発明化合物が得られる。
反応の条件としてはＲ²が安定であるような反応条件で
あれば特に制限はない。

【００２８】反応に使用される溶媒としては、反応に関
与しないものであれば特に制限はなく、例えばクロロホ
ルム、ジクロロメタン、ジオキサン、テトラヒドロフラ
ン等が例示できる。希酸としては、例えば塩酸、硫酸等
の鉱酸、トリフルオロ酢酸、パラトルエンスルホン酸等
の有機酸が例示できる。希酸の量としては、一般式
（２）で表される化合物に対し、１〜１０００倍モル量
程度、好ましくは１〜１００倍モル量である。また、反
応を促進するために、アニソール、チオアニソール等を
反応促進剤として添加してもよい。反応時間は、０．１
〜１００時間程度であり、好ましくは０．５〜５時間で
ある。反応温度は、０〜１００℃程度であり、好ましく
は０〜４０℃である。

【００２９】反応工程式１で原料として用いられる一般
式（２）で表される化合物は、ペプチド合成化学の分野
で通常用いられる方法、例えば、「（社）日本生化学会
編、生化学実験講座１、タンパク質の化学IV、207-400
頁、1977年、（株）東京化学同人発行」に記載の方法に
準じて製造される。具体的には、下記反応工程式２及び
３に従って、製造できる。

【００３０】＜反応工程式２＞

【００３１】

【化８】

【００３２】（各式中、Ａ³、Ａ⁴、Ｒ²及びＲ³は、前記
に同じ。Ｒ^7aは水素原子又は保護基を示し、Ｒ⁸はアラ
ルキルオキシカルボニル基を示し、Ｒ⁹は低級アルキル
基を示す。）。

【００３３】上記反応工程式中、Ｒ^7aの保護基として
は、例えば、ｔ−ブトキシカルボニル基、１−アダマン
チルオキシカルボニル基、２,２,５,７,８−ペンタメチ
ルクロマン−６−スルホニル基等が挙げられ、好ましく
は２,２,５,７,８−ペンタメチルクロマン−６−スルホ
ニル基である。

【００３４】Ｒ⁸のアラルキルオキシカルボニル基とし
ては、例えば、ベンジルオキシカルボニル、ジフェニル
メトキシカルボニル基等が挙げられ、好ましくはベンジ
ルオキシカルボニル基である。

【００３５】Ｒ⁹の低級アルキル基としては、例えばメ
チル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチ
ル、イソブチル、ペンチル、ヘキシル基等の炭素数１〜
６の直鎖状又は分枝状のアルキル基が挙げられ、好まし
くはメチル又はエチル基である。

【００３６】〔工程(ii)〕一般式（３）で表される化合
物を、適当な溶媒中又は無溶媒で、公知化合物である一
般式（４）で表される化合物と縮合させることにより、
一般式（５）で表される化合物が得られる。

【００３７】反応に使用される溶媒としては、反応に関
与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−
ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、
ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン
等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使
用してもよい。縮合させる場合、例えばＮ，Ｎ−ジシク
ロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジ
メチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩等の縮合
剤を用いる方法、イソブチルクロロフォルメート等を用
いた混合酸無水物法、アジド法、活性エステル法等を用
いることができ、好ましくは縮合剤を用いる方法であ
る。縮合剤の量としては、一般式（３）で表される化合
物に対し、０．５〜１０モル倍量程度、好ましくは、１
〜２倍モル量である。また、反応を促進するために、そ
れらの縮合剤に、例えば１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール、Ｎ−ヒドロキシ−５−ノルボルネン−２，３−ジ
カルボキシイミド等の添加剤を反応促進剤として添加し
てもよい。反応時間は、０．１〜１００時間程度であ
り、好ましくは０．５〜２０時間である。反応温度は、
−５０〜１００℃程度であり、好ましくは−２０〜４０
℃である。

【００３８】本工程により得られた一般式（５）で表さ
れる化合物は、単離又は単離することなく次の工程(ii
i)に用いることができる。

【００３９】〔工程(iii)〕工程(ii)により得られた一
般式（５）で表される化合物を、適当な溶媒中又は無溶
媒で、一般式（６）で表される化合物を反応させること
により、一般式（２ａ）で表される化合物が得られる。

【００４０】反応に使用される溶媒としては、反応に関
与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−
ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、
ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン
等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使
用してもよい。一般式（６）で表される化合物の量とし
ては、一般式（５）で表される化合物に対し、０．５〜
１０倍モル量程度、好ましくは０．９〜２倍モル量であ
る。反応時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ま
しくは０．５〜２０時間である。反応温度は、−５０〜
１００℃程度であり、好ましくは−２０〜４０℃であ
る。

【００４１】本工程により得られた一般式（２ａ）で表
される化合物は、単離又は単離することなく前記工程
(i)に用いることができる。

【００４２】一般式（３）で表される化合物は、例えば
特表平８−５０２４９３号公報に開示されている６−ニ
トログアニジノ−３−（Ｓ）−（１，１−ジメチルエト
キシ）メタナミイミド−２−ヒドロキシヘキサン酸エス
テルを出発原料として、公知慣用の方法により、Ｎ^α−
ｔ−ブトキシカルボニル基をＲ⁸基に変換し、更にニト
ロ基をＲ^7a基に変換することにより得られる。

【００４３】＜反応工程式３＞

【００４４】

【化９】

【００４５】（各式中、Ａ³、Ａ⁴、Ｒ²、Ｒ³及びＲ⁹は
前記に同じ。）。

【００４６】〔工程(iv)〕反応工程式２の工程(iii)と
同様の方法により、上記一般式（５）で表される化合物
の代わりに、特表平８−５０２４９３号公報に開示され
ている一般式（７）で表される化合物を用いて、一般式
（８）で表される化合物が得られる。

【００４７】本工程により得られた一般式（８）で表さ
れる化合物は、単離又は単離することなく、次の工程
(v)に用いることができる。

【００４８】〔工程(v)〕反応工程式２の工程(ii)と同
様の方法により、上記一般式（３）で表される化合物の
代わりに、工程(iv)により得られた一般式（８）で表さ
れる化合物を用いて、一般式（２ｂ）で表される化合物
が得られる。

【００４９】本工程により得られた一般式（２ｂ）で表
される化合物は、単離又は単離することなく、前記工程
(i)に用いることができる。

【００５０】上記反応工程式２又は３で得られた一般式
（２ａ）又は（２ｂ）で表される化合物は、適当な溶媒
中又は無溶媒で、酸化反応を行い、一般式（２）で表さ
れる化合物におけるＸを−ＣＨＯＨ−から−ＣＯ−に変
換することができる。本酸化反応は、例えば、デスマー
チン試薬を用いるデスマーチン酸化、ジメチルスルフォ
キシド−１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピ
ル）カルボジイミド塩酸塩−ジクロロ酢酸を試薬として
用いる改良モファット酸化等の方法が用いられる。

【００５１】反応に使用される溶媒としては、反応に関
与しないものであれば特に制限はなく、例えばＮ，Ｎ−
ジメチルアミド、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、
ジオキサン、酢酸エチル、１−メチル−２−ピロリドン
等が例示でき、これらを単独で又は２種以上混合して使
用してもよい。試薬の量としては、一般式（２ａ）又は
（２ｂ）で表される化合物に対し、０．３〜１００モル
量程度、好ましくは０．５〜１０倍モル量である。反応
時間は、０．１〜１００時間程度であり、好ましくは
０．５〜５０時間である。反応温度は、−２０〜１００
℃程度であり、好ましくは０〜４０℃である。

【００５２】上記方法により得られる本発明化合物及び
各化合物は、再結晶、蒸留、各種カラムクロマトグラフ
ィー等の合成化学上の通常の分離手段で精製可能であ
る。

【００５３】本発明の一般式（１）のペプチド誘導体及
びその薬学的に許容される塩は、歯周病の発症と進行に
密接に関係しているＰ．ジンジバリスが産生する蛋白質
分解酵素であるＲＧＰを選択的に強力に阻害する。ま
た、本発明ペプチド誘導体は、その構造成分が、天然に
存在する安全性の高いアミノ酸あるいはその誘導体より
なることから、生体内代謝産物も含めて、極めて安全性
の高いと考えられる。

【００５４】従って、一般式（１）で表されるペプチド
誘導体及びその薬学的に許容される塩は、これを有効成
分とするアルグ−ジンジパイン阻害剤及び歯周病疾患用
薬剤として、有用である。ここで、歯周病疾患用薬剤と
しては、歯周病疾患の予防剤及び治療剤が包含される。

【００５５】また、一般式（１）で表されるペプチド誘
導体及びその薬学的に許容される塩は、これと薬学的に
許容される担体を含有する組成物としても、有用であ
る。例えば、本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許
容される塩は薬学的に許容される担体と配合し、口腔用
ゲル製剤、口腔用粘膜付着性軟膏、歯周ポケット挿入
剤、歯肉付着製剤等の口腔用製剤又は歯磨、洗口液、ト
ローチ等の口腔衛生剤として投与することができる。

【００５６】薬学的に許容される担体としては、その剤
形に応じた通常使用される適宜な成分を使用することが
でき、例えば、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセ
ルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメ
チルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチル
セルロース、流動パラフィン、白色ワセリン、プラチナ
ベース、オイドラジットＬ、アルギン酸ナトリウム、ア
ルギン酸プロピレングリコールエステル、プルラン、ト
ラガント、キサンタンガム、キトサン、ポリビニルピロ
リドン、ポリビニルアルコール、ポリアクリル酸、ポリ
メタアクリル酸、メタアクリル酸エチル、ジメチルアミ
ノアセテート、酢酸セルロース、コラーゲン、アテロコ
ラーゲン、ゼラチン、グリセリン、トリアセチン、マク
ロゴール４００、ポリソルベート６０、ステアリン酸ポ
リオキシル４０、パラオキシ安息香酸ブチル、セタノー
ル、モノステアリン酸グリセリン、炭酸カルシウム、炭
酸マグネシウム、第二リン酸カルシウム、カラギーナ
ン、ジオクチルスルホコハク酸ナトリウム、ラウリル硫
酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウ
ム、ヒノキチオール、アラントイン、グリチルリチン、
アラビアゴム、デンプン、コーンスターチ、サッカリン
ナトリウム、ステビオサイド、ブドウ糖、乳糖、ステア
リン酸マグネシウム、リン酸一カリウム、リン酸二カリ
ウム、メントール、ユーカリ油、ペッパーミント、スペ
アミント、色素、フッ化ナトリウム、モノフルオロリン
酸ナトリウムのフッ化物、塩化リゾチウム、アズレン等
の抗炎症剤、塩化ナトリウム等の通常使用される成分を
適宜配合することができる。

【００５７】本発明ペプチド誘導体又はその薬学的に許
容される塩を含有する組成物を投与する方法としては、
例えば、ゲル製剤又は軟膏製剤の場合は、歯肉に塗布す
ればよく、テープ製剤の場合には歯肉に付着させればよ
く、又ポケット挿入剤の場合には歯周ポケットに挿入す
ればよい。

【００５８】投与量としては歯周病の広がり度合いによ
り異なるが、通常本発明ペプチド誘導体又はその薬学的
に許容される塩として０．００１重量％以上を含有する
製剤の適量を、通常１日１回以上投与、塗布または洗浄
すればよい。

【００５９】

【実施例】以下に、参考例、実施例及び試験例を挙げて
本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例に
制限されるものではない。尚、参考例及び実施例に示し
た各化学構造式において、ＯＨ基が結合する不斉炭素原
子に付けられた「＊」及び「※」の記号は、対となる化
合物間で絶対配置が互いに逆であることを示している。

【００６０】参考例１ 下記化合物（１）の合成

【００６１】

【化１０】

【００６２】特表平８−５０２４９３号記載の方法に準
じて製造された６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−
（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒ
ドロキシヘキサン酸メチルエステル１.９ｇ（５.２ｍｍ
ｏｌ）、アニソール０.２ｍｌとトリフルオロ酢酸１９
ｍｌの混合物を氷冷下１５分、室温４５分攪拌した。反
応後、反応液を減圧下濃縮し、残渣にｎ−ヘキサン２０
ｍｌを加えた。ｎ−ヘキサン層をデカンテーションによ
り除去後、得られた残渣をテトラヒドロフラン２０ｍｌ
に溶解し、氷冷下、トリエチルアミンで中和した。この
テトラヒドロフラン溶液をＮ^α−カルボベンゾキシ−Ｎ
^ε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン２.５７ｇ
（６.８ｍｍｏｌ）、トリエチルアミン１.１ｍｌ（７.
８ｍｍｏｌ）とイソブチルクロロホルメート１.０ｍｌ
（７.８ｍｍｏｌ）で調製した混合酸無水物のテトラヒ
ドロフラン溶液３０ｍｌに加え、氷冷下０．５時間撹拌
した。精製水２ｍｌを加え反応を停止させた後、反応液
に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層
を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウ
ム水、飽和食塩水で順次洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥
した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマト
グラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝1
０：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エーテ
ルより粉末化し、上記化合物２.８５ｇ（収率８７.７
％）を得た。以下に物性値を示す。

【００６３】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６６４（Ｍ＋Ｋ）⁺。

【００６４】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：8.46 (1H,
brs), 7.38-7.23 (6H, m), 6.92 (1H, m), 5.96及び5.7
8 (1H, brd), 5.06 (2H, m), 4.84及び4.77 (1H, brs),
4.39 (1H, m), 4.27及び4.203 (1H, brs), 4.08 (1H,
m), 3.79及び3.77 (3H, s),3.45-3.08 (4H, m), 1.82-
1.27 (19H, m)。

【００６５】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3334, 1708, 1704,
1693, 1680, 1666, 1660, 1536, 1531, 1273, 1256。

【００６６】参考例２ 下記化合物（２−１）及び（２
−２）の合成

【００６７】

【化１１】

【００６８】参考例１で得た化合物（１）２．３０ｇ
（３．７ｍｍｏｌ）のメタノール溶液２３ｍｌに氷冷
下、水酸化ナトリウム２２１ｍｇ（５．５ｍｍｏｌ）の
水溶液２２ｍｌを加え、３時間撹拌した。反応液を１Ｎ
塩酸水にてｐＨ４に調製し、溶媒を留去した後、酢酸エ
チルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩水で洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣にジエ
チルエーテルを加え粉末化し、化合物（１）のカルボン
酸誘導体１．９４ｇ(収率８５．８ｇ）を得た。得られ
たカルボン酸誘導体１．６０ｇ（２．６ｍｍｏｌ）に、
Ｎ^α−カルボベンゾキシ−Ｎ^ε−ｔ−ブトキシカルボニ
ル−Ｌ−リジン ジメチルアミド８４７ｍｇ（３．１ｍ
ｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物４
２４ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−（３−
ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩５９４
ｍｇ（３．１ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン２６３
ｍｇ（２．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ１６ｍｌ溶液を室温６
時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸
エチル抽出した。酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和
食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次
洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残
渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；
クロロホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ）で溶
出）により精製し、薄層クロマトグラフィー上、Ｒｆ値
０．３９（展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝１
０：１（ｖ／ｖ））の画分を採取し、石油エーテルより
粉末化し、化合物（２−１）を５７９ｍｇ（収率２５．
７％）得た。また、Ｒｆ値０．３５（展開溶媒；クロロ
ホルム：メタノール＝１０：１（ｖ／ｖ））の画分を採
取し、ジエチルエーテルより粉末化し、化合物（２−
２）を９１８ｍｇ（収率４０．７％）得た。更に両化合
物の混合物を３４９ｍｇ（収率１５．５％）得た。以下
に物性値を示す。

【００６９】（ｉ）化合物（２−１）： 融点：９５−９９℃。

【００７０】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ９０５（Ｍ＋Ｋ）⁺。

【００７１】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：8.10 (1H,
brs), 7.81-7.69 (1H, brd), 7.32(5H, m), 6.86 (1H,
m), 5.98 (1H, brs), 5.11-5.02 (2H, m), 4.89-4.60
(3H,m), 4.36-4.12 (3H, m), 3.45 (1H, m), 3.11 (8H,
m), 2.93 (3H, s), 1.80-1.27 (34H, m)。

【００７２】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3334, 1721, 1710,
1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1641, 1632, 16
15, 1601, 1547, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 145
3, 1444, 1413, 1408, 1403, 1392, 1367, 1268, 1254,
1170。

【００７３】比旋光度：［α］²⁵ _D＝−２２．５３°
（ｃ＝1.003, クロロホルム ）。

【００７４】（ｉｉ）化合物（２−２）： 融点：９１−９５℃。

【００７５】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ９０５（Ｍ＋Ｋ）⁺。

【００７６】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：8.30 (1H,
brs), 7.70-7.52 (2H, m), 7.33-7.23 (5H, m), 6.13
(1H, brs), 5.17-4.74 (5H, m), 4.30 (1H, m), 4.18
(1H, m), 4.12 (1H,m), 3.33-2.91 (12H, m), 1.72-1.3
5 (34H, m)。

【００７７】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3334, 1722, 1710,
1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 16
14, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 1453, 144
4, 1413, 1409, 1403, 1392, 1367, 1268, 1254, 117
0。

【００７８】比旋光度：［α］²⁵ _D＝−１３．０１°
（ｃ＝0.507, クロロホルム ）。

【００７９】参考例３ 下記化合物（３）の合成

【００８０】

【化１２】

【００８１】参考例２で得られた化合物（２−１）５０
０ｍｇ（０．５８ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール
溶液２０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン２５０ｍｇ
を加え、常圧下で２０時間接触水素還元した。反応後、
不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣のジオ
キサン２ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水２ｍｌの混合
溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド１６５μｌ
（１．１５４ｍｍｏｌ）を加え、１０時間反応した。反
応後、反応液を半分量濃縮し、精製水を加え、ジエチル
エーテルで洗浄した。水層を濃縮後、得られた残渣を５
０％メタノール水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社
製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカ
ラムクロマトグラフィー（展開溶媒；６０％メタノール
水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮
し、ジエチルエールより粉末化し、上記化合物３７４ｍ
ｇ（収率７８．９％）を得た。以下に物性値を示す。

【００８２】融点：１００−１０４℃。

【００８３】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８２２（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【００８４】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ：7.35-7.29
(5H, m), 5.12-5.04 (2H, m), 4.84(1H, m), 4.28-4.27
(1H, m), 4.07-4.04 (2H, m), 3.21-3.01 (9H, m),2.9
5 (3H, s), 1.81-1.25 (34H, m)。

【００８５】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3345, 1721, 1709,
1704, 1691, 1689, 1679, 1674, 1666, 1660, 1650, 16
42, 1633, 1615, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 150
3, 1407, 1403, 1367, 1275, 1252, 1172。

【００８６】比旋光度：［α］²⁵ _D＝−３０．２０°
（ｃ＝1.013, メタノール ）。

【００８７】参考例４ 下記化合物（４）の合成

【００８８】

【化１３】

【００８９】参考例２で得られた化合物（２−２）８５
４ｍｇ（０．９９ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール
溶液３０ｍｌに、１０％パラジウムカーボン４００ｍｇ
を加え、常圧下で２０時間接触水素還元した。反応後、
不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られた残渣のジオ
キサン３ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウム水３ｍｌの混合
溶液に氷冷下、カルボベンゾキシクロライド２１１μｌ
（１．４８ｍｍｏｌ）を加え、１０時間反応した。反応
後、反応液を半分量濃縮し、精製水を加え、ジエチルエ
ーテルで洗浄した。水層を濃縮後、得られた残渣を５０
％メタノール水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱化学社製、
ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体としたカラム
クロマトグラフィー（展開溶媒；５５％メタノール水で
溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮し、
凍結乾燥し、上記化合物５４４ｍｇ（収率６７．２％）
を得た。以下に物性値を示す。

【００９０】融点：９４−９８℃。

【００９１】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８２２（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【００９２】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ：7.46
(1H, brs), 7.36-7.31 (5H, m), 6.76 (1H, brs), 5.04
-4.95 (2H, m), 4.66-4.63 (1H, m), 4.09 (1H, m),3.9
6 (1H, m), 3.92-3.88 (1H, m), 3.05-2.82 (12H, m),
1.64-1.09 (34H, m)。

【００９３】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3354, 1684, 1672,
1642, 1527, 1456, 1405, 1367, 1274, 1252, 1172。

【００９４】比旋光度：［α］²⁵ _D＝−１３．５１°
（ｃ＝1.006, メタノール ） 参考例５ 下記化合物（５）の合成

【００９５】

【化１４】

【００９６】参考例２で得られた化合物（２−１）及び
（２−２）の混合物３４９ｍｇ（０．４０ｍｍｏｌ）と
デスマーチン試薬６８０ｍｇ（１．６１ｍｍｏｌ）のジ
クロロメタン溶液３０ｍｌを室温１３時間撹拌した後、
反応液に精製水２ｍｌを加え、０．２時間撹拌した。不
溶物を瀘去し、ジクロロメタン層を５％炭酸水素ナトリ
ウム水、飽和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾
燥した。溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマ
トグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝
１２：１（ｖ／ｖ）で溶出）により精製した。石油エー
テルより粉末化し、上記化合物１９１ｍｇ（収率５４．
８％）を得た。以下に物性値を示す。

【００９７】融点：８１−８４℃。 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（−）；ｍ／ｅ ８６３（Ｍ−Ｈ）^-。

【００９８】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：7.86 (1H,
brs), 7.52 (1H, brs), 7.33 (5H,m), 5.88 (1H, brs),
5.39 (1H, brs), 5.07 (2H, s), 4.87-4.83 (1H, m),
4.75 (1H, m), 4.17 (1H, m), 3.49-3.29 (2H, m), 3.1
0-2.91 (10H, m), 1.98 (1H, m), 1.75-1.33 (33H,
m)。

【００９９】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3332, 1722, 1710,
1704, 1692, 1680, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 16
21, 1614, 1548, 1536, 1530, 1519, 1514, 1503, 145
3, 1367, 1254, 1170。

【０１００】参考例６ 下記化合物（６）の合成

【０１０１】

【化１５】

【０１０２】特表平８−５０２４９３号記載の方法に準
じて製造された６−ニトログアニジノ−３−（Ｓ）−
（１，１−ジメチルエトキシ）メタナミイミド−２−ヒ
ドロキシヘキサン酸メチルエステル１４．２ｇ（３９．
１ｍｍｏｌ）の１０％酢酸−メタノール溶液２０ｍｌ
に、１０％パラジウムカーボン４．０ｇを加え、常圧下
で３２時間接触水素還元した。反応後、不溶物を濾去
し、溶媒を留去した。得られた残渣とトリフルオロ酢酸
１５０ｍｌの混合物を１．３時間撹拌した。反応液を減
圧下濃縮し、残渣にｎ−ヘキサン５０ｍｌを加えた。ｎ
−ヘキサン層をデカンテーションにより除去後、得られ
た残渣のジオキサン１８０ｍｌと飽和炭酸水素ナトリウ
ム水２００ｍｌ混合溶液に氷冷下、カルボベンゾキシク
ロライド７．３ｍｌ（５１．０ｍｍｏｌ）を加え、１３
時間撹拌した。反応液を濃縮し、２Ｎ塩酸を加え、ジエ
チルエーテルで洗浄した。水層をＭＣＩゲル（三菱化学
社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体とした
カラムクロマトグラフィー（展開溶媒；３０％メタノー
ル水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下濃
縮・乾燥し、不定形の結晶１１．５ｇ（８３．５％）を
得た。得られた結晶１０．５ｇ（２９．８ｍｍｏｌ）、
水酸化ナトリウム２．０ｇ（５０ｍｍｏｌ）、５０％メ
タノール水２００ｍｌの混合物を５５分間撹拌した。反
応液を１Ｎ塩酸でｐＨ７に調製し、減圧下濃縮した。得
られた残渣を１Ｎ塩酸に溶解し、ＭＣＩゲルを担体とし
たカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；３０〜４０％
メタノール水で溶出）により精製した。得られた画分を
減圧下濃縮・乾燥し、不定形の結晶７．３２ｇ（７２．
６％）を得た。得られた結晶５００ｍｇ（１．４４ｍｍ
ｏｌ）、２Ｎ水酸化ナトリウム３ｍｌ、アセトン３ｍｌ
の混合物に氷冷下、２，２，５，７，８−ペンタメチル
クロマン−６−スルホニルクロライド７００ｍｇ（２．
３１ｍｍｏｌ）のアセトン溶液２ｍｌを滴下し、２．５
時間撹拌した。反応後、反応液を５％クエン酸でｐＨ７
に調製し、減圧下濃縮した。残渣を５％クエン酸で酸性
とし、酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル層を飽和食塩
水で洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去
し、残渣をメタノール中シクロヘキシルアミン塩とし、
ジエチルエーテルより粉末化した。得られた粉末を１Ｎ
塩酸にて脱塩し、酢酸エチルで抽出後、酢酸エチル層を
硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を留去した。得られた残
渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；
クロロホルム：メタノール：精製水＝１０：３：１（ｖ
／ｖ）の下層液で溶出）により精製した。ジエチルエー
テルより粉末化し、上記化合物を１５４ｍｇ（収率１
７．７％）得た。以下に物性値を示す。

【０１０３】Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２７
（Ｍ＋Ｎａ）⁺。

【０１０４】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ：7.35-
7.29 (5H, m), 7.09及び6.84 (１H,d, J=8Hz), 6.74 (1
H, brs), 6.41 (1H, brs), 5.03-4.99 (2H, m), 3.93-
3.89(1H, m), 3.77-3.72 (1H, m), 3.03-2.97 (2H, m),
2.60-2.47 (8H, m), 2.03 (3H, s), 1.79-1.74 (2H,
m), 1.48-1.26 (10H, m)。

【０１０５】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3435, 3354, 1722,
1710, 1626, 1621, 1580, 1550, 1453, 1299, 1238, 11
66, 1110。

【０１０６】参考例７ 下記化合物（７）の合成

【０１０７】

【化１６】

【０１０８】参考例６で得られた化合物（６）７００ｍ
ｇ（１．１６ｍｍｏｌ）に、Ｎ^ε−ｔ−ブトキシカルボ
ニル−Ｌ−リジン ジメチルアミド３８１ｍｇ（１．３
９ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和
物２０３ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、１−エチル−３−
（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩
２９０ｍｇ（１．５ｍｍｏｌ）、Ｎ−メチルモルホリン
１１７ｍｇ（１．２８ｍｍｏｌ）のＤＭＦ２５ｍｌ溶液
を加え、室温６時間撹拌した。反応後、反応液に飽和食
塩水を加え酢酸エチル抽出した。酢酸エチル層を５％ク
エン酸水、飽和食塩水、５％炭酸水素ナトリウム水、飽
和食塩水で順次洗浄後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶
媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィ
ー（展開溶媒；クロロホルム：エタノール＝１５：１
（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、上記化合物６３２ｍ
ｇ（収率６３．３％）を得た。以下に物性値を示す。

【０１０９】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ８６０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１１０】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：7.58-7.57
(1H, m), 7.32-7.29 (5H, m), 6.28-6.02 (2H, m), 5.7
5及び5.55 (1H, ｍ), 5.11-5.04 (2H, m), 4.81 (2H,
m), 4.46-4.05 (2H, m), 3.34-3.04 (7H, m), 2.91 (3
H, s), 2.63-2.56 (8H, m), 2.10 (3H, s), 1.81 (2H,
m), 1.61-1.24 (25H, m)。

【０１１１】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3340, 1705, 1701,
1636, 1550, 1455, 1403, 1394, 1368, 1298, 1251, 11
67, 1111, 610.7。

【０１１２】参考例８ 下記化合物（８）の合成

【０１１３】

【化１７】

【０１１４】参考例７で得られた化合物（７）６２１ｍ
ｇ（０．７２ｍｍｏｌ）に、１０％パラジウムカーボン
２１０ｍｇ、酢酸３滴、メタノール１００ｍｌの混合物
を加え、３．０ｋｇ／ｃｍ²、５時間接触水素還元し
た。反応後、不溶物を濾去し、溶媒を留去した。得られ
た残渣とＮ−メチルモルホリン７３ｍｇ（０．７２ｍｍ
ｏｌ）のＤＭＦ２ｍｌ溶液をＮ^α−カルボベンゾキシ−
Ｎ^ε−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−リジン３３０ｍｇ
（０．８７ｍｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾ
ール水和物１１７ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）、１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミ
ド塩酸塩１６６ｍｇ（０．８７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ５ｍ
ｌ溶液に氷冷下、滴下し、室温で１２時間撹拌した。反
応後、反応液に飽和食塩水を加え酢酸エチル抽出した。
酢酸エチル層を５％クエン酸水、飽和食塩水、５％炭酸
水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄、硫酸ナトリ
ウムで乾燥した。溶媒を留去後、残渣をシリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロロホルム：エタ
ノール＝２５：２（ｖ／ｖ）で溶出）により精製し、上
記化合物６３２ｍｇ（収率８０．５％）を得た。以下に
物性値を示す。

【０１１５】Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ １０８
８（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１１６】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ：7.71-7.69
(1H, m), 7.30 (5H, m), 6.97 (1H,m), 6.31 (2H, br
s), 6.13-6.03 (1H, m), 5.10-4.80 (5H, m), 4.30-4.1
5 (3H, m), 3.20-2.91 (12H, m), 2.61 (2H, m), 2.57
(3H, s), 2.55 (3H, s), 2.09(3H, s), 1.79 (2H, m),
1.71-1.24 (40H, m)。

【０１１７】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3344, 2934, 1691,
1656, 1639, 1548, 1479, 1454, 1402, 1393, 1367, 12
96, 1251, 1168, 1111, 610.6。

【０１１８】参考例９ 下記化合物（９）の合成

【０１１９】

【化１８】

【０１２０】参考例８で得られた化合物（８）５１０ｍ
ｇ（０．４７ｍｍｏｌ）とデスマーチン試薬７９４ｍｇ
（１．８７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン溶液２０ｍｌを
室温５時間撹拌した後、反応液に精製水２ｍｌを加え、
０．５時間撹拌した。不溶物を瀘去し、ジクロロメタン
層を５％炭酸水素ナトリウム水、飽和食塩水で順次洗浄
後、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を留去し、残渣を
シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；クロ
ロホルム：エタノール＝１６：１（ｖ／ｖ）で溶出）に
より精製した。石油エーテルより粉末化し、上記化合物
２１５ｍｇ（収率４２．３％）を得た。以下に物性値を
示す。

【０１２１】融点：８６−９０℃。

【０１２２】Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（−）；ｍ／ｅ １０８
４（Ｍ−Ｈ）^-。

【０１２３】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ：8.53
(1H, brd, J=7.6Hz), 8.28 (1H, brd, J=6.6Hz), 7.35-
7.26 (6H, m), 6.77-6.75 (2H, m), 6.40 (1H, brs),
5.04-4.97 (2H, m), 4.92 (1H, m), 4.67-4.62 (1H,
m), 4.02-3.97 (1H, m), 3.03-2.83 (12H, m), 2.59-2.
47 (8H, m), 2.03 (3H, s), 1.78-1.75 (2H, m), 1.62-
1.14 (40H, m)。

【０１２４】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3348, 1722, 1711,
1704, 1692, 1679, 1666, 1659, 1650, 1642, 1632, 16
21, 1613, 1581, 1573, 1564, 1548, 1536, 1531, 151
9, 1513, 1503, 1494, 1453, 1444, 1392, 1367, 1296,
1251, 1168, 1111。

【０１２５】実施例１ 下記化合物（１０）の合成

【０１２６】

【化１９】

【０１２７】参考例３で得られた化合物（３）１０５ｍ
ｇ（０．１２８ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、
トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下１５
分、室温１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減
圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出し
た結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶
解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操
作を２度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱
化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体と
したカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；５％メタノ
ール水で溶出）により精製した。得られた画分を減圧下
濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥
し、上記化合物の塩酸塩を７３．３ｍｇ得た。以下に物
性値を示す。

【０１２８】融点：１２４−１２８℃。

【０１２９】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２２（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１３０】¹Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ₂Ｏ）δ：7.47-7.37 (5H,
m), 5.21-5.11 (2H, m), 4.79 (1H, m), 4.27-4.08 (3
H, m), 3.18 (3H, s), 3.10-2.97 (9H, m), 1.80-1.32
(16H, m)。

【０１３１】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3392, 3190, 3059,
2946, 1703, 1661, 1650, 1633, 1573, 1562, 1525, 14
69, 1455, 1255, 1128, 699, 634, 622, 607, 593, 57
9, 564, 550, 536。

【０１３２】比旋光度：［α］²⁵ _D＝−２６．１２°
（ｃ＝0.513, メタノール ）。

【０１３３】実施例２ 下記化合物（１１）の合成

【０１３４】

【化２０】

【０１３５】参考例４で得た化合物（４）８４ｍｇ
（０．１０２ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、ト
リフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下１５
分、室温１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を減
圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出し
た結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに溶
解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する操
作を2度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三菱
化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体と
したカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；精製水で溶
出）により精製した。得られた画分を減圧下濃縮した
後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥し、上記化
合物の塩酸塩を６０．７ｍｇ得た。以下に物性値を示
す。

【０１３６】融点：１２３−１２６℃。

【０１３７】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２２（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１３８】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ：7.73 (1H,
d, J=9Hz), 7.36-7.30 (5H, m), 5.12-5.04 (2H, m),
4.83 (1H, m), 4.28 (1H, m), 4.17-4.04 (2H, m), 3.2
3-3.12 (5H, m), 2.98-2.92 (7H, m), 1.84-1.35 (16H,
m)。

【０１３９】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3388, 3253, 3051,
1698, 1662, 1656, 1644, 1633, 1526, 1469, 1457, 12
52, 599, 575。

【０１４０】比旋光度：［α］²⁵ _D＝−１９．８６°
（ｃ＝0.574, メタノール ）。

【０１４１】実施例３ 下記化合物（１２）の合成

【０１４２】

【化２１】

【０１４３】参考例５で得られた化合物（５）１５０ｍ
ｇ（０．１７４ｍｍｏｌ）に、アニソール０．１ｍｌ、
トリフルオロ酢酸１０ｍｌの混合物を加え、氷冷下で１
５分、室温で１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物
を減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析
出した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノール
に溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固す
る操作を2度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル
（三菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を
担体としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；１０
％メタノールで溶出）により精製した。得られた画分を
減圧下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結
乾燥し、上記化合物の塩酸塩を９０．９ｍｇ得た。以下
に物性値を示す。

【０１４４】融点：１３１−１３４℃。

【０１４５】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６６５（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１４６】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ：7.35-7.29
(5H, m), 5.09 (2H, s), 4.81(1H,m), 4.29-4.02 (2H,
m), 3.22-2.91 (12H, m), 1.93-1.35 (16H, m)。

【０１４７】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3294, 3209, 2941,
1673, 1634, 1528, 1455, 1404, 1342, 1266, 1132, 10
61, 700。

【０１４８】実施例４ 下記化合物（１３）の合成

【０１４９】

【化２２】

【０１５０】参考例９で得られた化合物（９）４４０ｍ
ｇ（０．４０５ｍｍｏｌ）に、アニソール０．４ｍｌ、
トリフルオロ酢酸６ｍｌの混合物を加え、氷冷下で１５
分、室温で１．５時間撹拌した。反応後、反応混合物を
減圧下濃縮した。残渣にジエチルエーテルを加え、析出
した結晶を瀘取した。得られた結晶を含水メタノールに
溶解し、４Ｎ塩酸１ｍｌを加え、反応液を蒸発乾固する
操作を２度行った後、精製水に溶解し、ＭＣＩゲル（三
菱化学社製、ＣＨＰ−２０（７５〜１５０μ））を担体
としたカラムクロマトグラフィー（展開溶媒；１０％メ
タノールで溶出）により精製した。得られた画分を減圧
下濃縮した後、更に１Ｎ塩酸０．５ｍｌを加え凍結乾燥
し、上記化合物の塩酸塩を１７４ｍｇ得た。以下に物性
値を示す。

【０１５１】融点：１０２−１０６℃。

【０１５２】 Ｍａｓｓ：ＦＡＢ（＋）；ｍ／ｅ ６２０（Ｍ＋Ｈ）⁺。

【０１５３】¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ：7.36-7.30
(5H, m), 5.12 (1H, d, J=12Hz), 5.07 (1H, d, J=12H
z), 4.80-4.77 (1H, m), 4.26-4.02 (2H, m), 3.22-3.1
0 (5H, m), 2.98-2.92 (7H, m), 1.98-1.36 (16H, m)。

【０１５４】ＩＲ（ＫＢｒ）cm^-1：3371, 3180, 3042,
2949, 1660, 1649, 1520, 1469, 1456, 1405, 1256, 11
74, 620, 597, 584。

【０１５５】試験例１ ＲＧＰに対する本発明化合物の
阻害活性の測定 ＲＧＰは門脇、山本らの方法〔T.kadowaki, K.Yamamot
o, et al. The Journalof Biological Chemistry, 269,
21371-21378（1994）〕によりPorphyromonasgingivali
s 381の培養瀘液の上清より調製されたものを使用し
た。

【０１５６】ＲＧＰに対する阻害活性については、門
脇、山本らの方法〔The Journal of Biological Chemis
try, 269, 21371-21378（1994）〕に従って測定した。
即ち、５０ｍＭのＬ−システイン１００μｌ、０．１Ｍ
のリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．５）２００μｌ、
０．０５％のブリッジ３５（ポリオキシエチレン（２
３）ラウリルエーテル、商標名、和光純薬（株）製）を
含む１２．３ｎＭの酵素（ＲＧＰ）液２０μｌ、蒸留水
８０μｌ、本発明化合物のジメチルスルホキシド溶液１
００μｌの混合物を３７℃で５分間保温した。その後、
２０μＭの７−（Ｎ^α−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェニ
ルアラニル−Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルクマ
リンを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液５００
μｌを加え、４０℃で反応した。１０分間後、１０ｍＭ
のヨード酢酸を含む０．１Ｍ酢酸ナトリウム緩衝液（ｐ
Ｈ５．０）１０００μｌを反応液に加え、反応を停止さ
せ、遊離した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光分
光光度計を用い、波長３８０ｎｍで励起した４６０ｎｍ
の蛍光波長の蛍光強度を測定した。対照として、本発明
化合物のジメチルスルホキシド溶液の代わりにジメチル
スルホキシドを用い、同様に反応し、蛍光強度を測定し
た。それらの結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵
素活性（５０％阻害活性）を表１に示す。

【０１５７】同様に、カテプシンＢ及びカテプシンＬの
阻害活性の測定はＡ．Ｊ．Ｂａｒｒｅｔｔらの方法（Bi
ochemical Journal、201、189-198(1982)）に従った。

【０１５８】即ち、カテプシンＢに対する阻害活性の測
定は８ｍＭのジチオスレイトール及び４ｍＭのエチレン
ジアミン四酢酸四ナトリウムを含む４００ｍＭのリン酸
ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０）０．５ｍｌ、５μｌの
カテプシンＢと０．１％ブリッジ３５（ポリオキシエチ
レン（２３）ラウリルエーテル、商標名、和光純薬
（株）製）を含む酵素液０．８ｍｌ及び本発明化合物
０．２ｍｌを加え、４０℃で１０分間保温した。その
後、２０μＭの７−（Ｎ−カルボベンゾキシ−Ｌ−フェ
ニルアラニル−Ｌ−アルギニル）アミノ−４−メチルク
マリンを含む０．１％ジメチルスルホキシド水溶液０．
５ｍｌを加え、４０℃で１０分間反応した。反応後、１
００ｍＭのモノクロル酢酸ナトリウムを含む１００ｍＭ
の酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．３）２．０ｍｌを加
え反応を停止させ、遊離した７−アミノ−４−メチルク
マリンを蛍光光度計を用い、波長３５０ｎｍで励起した
４５８ｎｍの蛍光波長の蛍光強度を測定した。それらの
結果から算出した各化合物の蛋白質分解酵素活性（５０
％阻害活性）を表１に示す。

【０１５９】カテプシンＬに対する阻害活性については
上記カテプシンＢの測定方法に準じて行った。

【０１６０】即ち、上記方法のカテプシンＢの代わりに
カテプシンＬをｐＨ５．５の緩衝液に加え、同様に遊離
した７−アミノ−４−メチルクマリンを蛍光光度計を用
い蛍光強度を測定した。それらの結果から算出した各化
合物の蛋白質分解酵素活性（５０％阻害活性）を表１に
示す。

【０１６１】

【表１】

【０１６２】表１より本発明化合物は、高活性でかつ選
択的にアルグ−ジンジパイン（ＲＧＰ）の酵素分解活性
を阻害しうることが判る。

【０１６３】試験例２ ＲＧＰのヒトtypeＩコラーゲン
分解能に対する本発明化合物による阻害活性の測定 ＲＧＰによるヒトtypeＩコラーゲンの分解に対する本発
明化合物による阻害活性の測定は、次のようにして行っ
た。５０ｍＭのＬ−システインと１００ｍＭのリン酸ナ
トリウム緩衝液（ｐＨ７．５）の１：２の割合（Ｖ／
Ｖ）の混液１０μｌ、０．３６ｍｇ／ｍｌの酵素液１０
μｌ、本発明化合物の水溶液１０μｌの混合物を３７℃
で１０分間保温した。その後、１０００μｇ／ｍｌのヒ
トtypeＩコラーゲン（生化学工業製）３０μｌを加え、
３７℃で反応した。６０分間後、反応液２０μｌを１０
０μｇ／ｍｌのロイペプチンと１０ｍＭのＥＤＴＡ−Ｎ
ａ₂を含む混液１μｌで反応を停止させた。反応液を１
００℃で、５分間熱処理した後、反応液１５μｌをＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供し、下記条件
下でヒトtypeＩコラーゲンを測定した。対照として、本
発明化合物の水溶液に代えて、精製水を用い、同様に反
応し、電気泳動により比較測定した。

【０１６４】ゲル：マルチゲル（４／２０）２０，００
０−２００，０００（第一化学薬品（株）製）、 ローディングバッファー：０．０６２５Ｍトリス塩酸バ
ッファー（ｐＨ６．８），２％ドデシル硫酸ナトリウ
ム，１０％グリセロール，５％２−メルカプトエタノー
ル，１０％ブロモフェノールブルー、 電極バッファー：０．０２５Ｍトリス−０．１９４Ｍグ
リシン（ｐＨ８．４），０．１％ドデシル硫酸ナトリウ
ム、 泳動条件：２０ｍＡ定電流、泳動時間：約２時間、 着色：Coomassie Brilliant Blue R-250(PAGE Blue 8
3)。

【０１６５】上記測定の結果、本発明の前記化合物（１
３）は、１μｇ／ｍｌの低用量でＲＧＰによるヒトtype
Ｉコラーゲンの分解を有意に阻害することが判った。

【０１６６】

【発明の効果】本発明化合物は、蛋白質分解酵素、特に
口腔内中に存在しているポルフィロモナス・ジンジバリ
ス（P.gingivalis）が産生するアルグ−ジンジパイン
（ＲＧＰ）の活性を特異的かつ高活性に阻害することが
でき、例えば、歯周病の予防剤及び治療薬等として有用
である。

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】一般式 【化１】 （式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ¹及
   びＡ²は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基
   を示す。Ｒ¹は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ²は置換
   オキシカルボニル基を示し、Ｒ³は−ＯＲ⁴又は−ＮＲ⁵
   Ｒ⁶を示す。Ｒ⁴、Ｒ⁵又はＲ⁶は、同一又は異なってそれ
   ぞれ低級アルキル基を示す。）で表されるペプチド誘導
   体及びその薬学的に許容される塩。
2. 【請求項２】Ａ¹及びＡ²がリジル基であり、Ｒ³が−Ｎ
   Ｒ⁵Ｒ⁶である請求項１に記載のペプチド誘導体及びその
   薬学的に許容される塩。
3. 【請求項３】Ａ¹及びＡ²がリジル基、Ｒ¹が水素原子で
   あり、Ｒ²がアラルキルオキシカルボニル基であり、Ｒ³
   が−ＮＲ⁵Ｒ⁶である請求項２に記載のペプチド誘導体及
   びその薬学的に許容される塩。
4. 【請求項４】一般式 【化２】 （式中、Ｘは−ＣＨＯＨ−又は−ＣＯ−を示し、Ａ¹及
   びＡ²は同一又は相異なってリジル基又はヒスチジル基
   を示す。Ｒ¹は水素原子又はニトロ基を示し、Ｒ²は置換
   オキシカルボニル基を示し、Ｒ³は−ＯＲ⁴又は−ＮＲ⁵
   Ｒ⁶を示す。Ｒ⁴、Ｒ⁵又はＲ⁶は、同一又は異なってそれ
   ぞれ低級アルキル基を示す。Ａ³及びＡ⁴は同一又は相異
   なってＮ^εが保護基で保護されたリジル誘導体又はＮ^im
   が保護基で保護されたヒスチジル誘導体を示し、Ｒ⁷は
   水素原子、ニトロ基又は保護基を示す。）で表されるペ
   プチド誘導体及びその薬学的に許容される塩を、脱保護
   基反応することを特徴とする一般式 【化３】 （式中、Ｘ、Ａ¹、Ａ²、Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は、前記に同
   じ。）で表されるペプチド誘導体及びその薬学的に許容
   される塩の製造方法。
5. 【請求項５】一般式（１）で表されるペプチド誘導体及
   びその薬学的に許容される塩を有効成分とするアルグ−
   ジンジパイン阻害剤。
6. 【請求項６】一般式（１）で表されるペプチド誘導体及
   びその薬学的に許容される塩を有効成分とする歯周病疾
   患用薬剤。
7. 【請求項７】一般式（１）で表されるペプチド誘導体及
   びその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される
   担体を含有する組成物。