JPH11501031A

JPH11501031A - ２−ベンジル−３−アリールベンゾチオフェン

Info

Publication number: JPH11501031A
Application number: JP8526364A
Authority: JP
Inventors: カリナン，ジョージ・ジェイ; セールズ，ジェイムズ・ジェイ
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1995-02-28
Filing date: 1996-02-27
Publication date: 1999-01-26
Also published as: US5643896A; EP0729955A1; US5552401A; CA2214134A1; AU4996696A; WO1996026935A1

Abstract

(57)【要約】本発明は２−フェニルメチル−３−［４−（２−アミノエトキシ）フェニル］−ベンゾ［ｂ］チオフェンの誘導体を提供する。本発明はさらにこれらの誘導体を含む医薬組成物および閉経後症候群の兆候、特に骨粗鬆症、心臓血管関連病状およびエストロゲン依存性の癌の兆候を緩和するための、そのような化合物の単独でかまたはエストロゲンまたはプロゲスチンと組み合わせての使用を提供する。これらの化合物はまた、女性における子宮類線維腫疾患および子宮内膜症およびヒトにおける大動脈平滑筋細胞増殖、特に再狭搾を抑制するのに有用である。

Description

【発明の詳細な説明】２−ベンジル−３−アリールベンゾチオフェン本発明は製薬学および有機化学の領域に関連し、閉経後症候群および子宮類線維腫疾患（uterine fibroid disease）、子宮内膜炎および大動脈平滑筋細胞増殖に関連する様々な医学的兆候の処置に有用である新規ベンゾチオフェン化合物を提供する。「閉経後症候群」なる用語は、閉経として知られる生理学的変化に差しかかったかまたは完了した女性にしばしば影響を及ぼす様々な病理学的状態を記載するために用いられる。この用語の使用によって、多数の病状が考えられるが、閉経後症候群の３つの主要な影響が最大の長期にわたる医学的心配の源である：骨粗鬆症、高脂質血症のような心臓血管への影響、およびエストロゲン依存性の癌、特に乳癌および子宮癌である。骨粗鬆症は、様々な病因から生じる一群の疾患をいい、単位体積当たりの骨の質量の正味の損失によって特徴付けられる。骨質量のこの損失とその結果生じる骨折の結果、構造上十分に体を支えている骨格が衰弱する。最も一般的なタイプの骨粗鬆症の１つは、閉経に関連するものである。大部分の女性は、月経停止後３年から６年以内に骨の小柱の構成部分において骨質量の約２０％から約６０％を損失する。この急速な損失には、一般に骨の吸収および形成の増加を伴う。しかしながら、骨の吸収のサイクルがより支配的であり、その結果は骨質量の正味の減少である。骨粗鬆症は閉経後の女性にとっては一般的で深刻な病気である。米国だけでも、これらの病気に悩まされている女性だけでも２５００万人いると見積もられる。骨粗鬆症の結果は個人的な損害となり、またその慢性のために大きい経済的な損失を計上し、その病気の後遺症により広範囲で長期間の介護（入院および在宅医療での看護）を必要とする。年長の患者ほど、このことについては特に確かなことである。さらに、骨粗鬆症は生命を脅かす状態であるとは一般には考えられていないが、老人女性の２０％から３０％の死亡率が股関節の骨折に関連する。この高い死亡率のパーセントは閉経後の骨粗鬆症に関連し得る。骨において、閉経後の骨粗鬆症の影響を最も受け易い組織は小柱である。この組織はしばしば、海綿状のまたは網状の骨を指し、特に骨の末端近く（関節の近く）、および脊柱の椎骨に集中している。小柱組織は、他の小柱組織と互いに相互連結する小さな骨状の組織、並びに骨の表面および中心幹を形成するより堅く密な皮質性の組織よって特徴づけられる。小柱のこの相互に連結した網状組織は、外部皮質性構造を側方から支持し、構造全体にわたる生体力学的強度にとって決定的なものである。閉経後の骨粗鬆症においては、骨の不全および骨折をもたらすのは小柱の正味の吸収および損失である。閉経後の女性における小柱の損失からみれば、最も一般的な骨折が、小柱の支持に大いに依存する骨、例えば椎骨、大腿および前腕のような重量を支える骨頸に関連した骨折であるということは意外なことではない。確かに、股関節の骨折、コリーズ（collies）骨折、および脊柱の粉砕骨折は、閉経後の骨粗鬆症の際立った特質である。現在、閉経後の骨粗鬆症の処置の唯一、一般的に受け入れられている方法は、エストロゲン置換療法である。治療は通常はうまく行くが、患者のこの治療に対する同意は低いものである。主として、エストロゲン療法はしばしば好ましくない副作用を生ずるからである。閉経前の時期を通じて、大部分の女性は、同年齢の男性よりも心臓血管の病気の発生率が低い。しかし、閉経後は女性の心臓血管の病気の発生率はゆっくりと増加して男性にみられる割合に匹敵するようになる。この保護の損失は、エストロゲンの損失、特に、血清脂質レベルを調節するエストロゲンの能力の損失に関連している。血清脂質を調節するエストロゲンの能力の性質はよく理解さていないが、現在までのところ、エストロゲンが過剰のコレステロールを除去する肝臓の低密度脂質（ＬＤＬ）レセプターを上方調節し得ることを示す証拠はある。さらに、エストロゲンは、コレステロールの生合成にある影響を及ぼし、心臓血管の健康にとって別の有益な影響を及ぼしているようである。エストロゲン置換療法を受けている閉経後の女性は、血清脂質の濃度レベルが閉経前にみられた濃度に戻ることが文献に報告されている。したがって、エストロゲンは、この状態のための合理的な処置であるように思われよう。しかし、エストロゲン置換療法の副作用は、多くの女性にとっては受け入れられないものであり、したがって、この療法の使用が制限される。この状態のための理想的な治療は、エストロゲンと同様に血清脂質レベルを調節するが、副作用およびエストロゲン療法に関連した危険性が全くない薬剤による治療であろう。閉経後症候群に関連した第三の主要な病状はエストロゲン依存性の乳癌およびより低い程度でのエストロゲン依存性の他の器官の癌、特に子宮癌である。このような腫瘍は、閉経後の女性だけに限られるものではないが、年長の閉経後の女性の群に一層一般的なものである。これらの癌の現在の化学療法は、例えばタモキシフェンのような抗エストロゲン化合物の使用に大いに依存している。このような混成アゴニスト−アンタゴニストは、これらの癌の処置において有益な効果を有し、エストロゲンの副作用は生命が脅かされる緊急の状態においては許容できるものの、理想的ではない。例えば、これらの薬剤は、それらのエストロゲン（アゴニスト）の特性のために、子宮におけるある癌細胞の群に対して刺激的影響を及ぼすことがあり、したがって、ある場合には反対の効果を有することがある。これらの癌の処置のためのより良い治療は、繁殖する組織に対してエストロゲンアゴニスト特性が無視し得るかまたは全く存在しない抗エストロゲン化合物による治療であろう。特に、閉経後症候群の症状を緩和することが可能な新規薬剤に対する明確な必要性に答えるべく、本発明は新規ベンゾチオフェン化合物、該化合物を含む医薬組成物、および閉経後症候群および以下に記載するような他のエストロゲンが関与する病状の処置のための、このような化合物の使用方法を提供する。子宮線維症（子宮類線維腫疾患）は、子宮類線維腫疾患、子宮肥大、子宮平滑筋腫（uterine lieomyomata）、子宮筋層肥大（myometrical hypertrophy）、線維増多子宮（fibrosis uteri）および線維子宮筋層炎（fibrotic metritis）を含む様々な病名で呼ばれている臨床的問題である。本質的には子宮線維症は子宮の壁に不適当な類線維組織の沈着が存在する状態である。この状態は女性の月経困難および不妊症の原因である。この状態の正確な原因は、エストロゲンに対する類線維組織の不適切な応答であるという証拠が示唆されていることを除けば、十分には分かってはいない。このような状態はウサギにエストロゲンを３ヶ月間毎日投与すると起こる。モルモットは４ヶ月間の毎日の投与でこの状態になる。さらに、ラットにおいてはエストロゲンは同様の肥大を起こす。子宮線維症の最も一般的な治療は、高価で、時には腹側の癒着および感染などの合併症の原因になる外科手術が関係する。患者の中には最初の手術が一時的な治療のみで類線維腫が再発する者もいる。このような場合、類線維腫を効果的に止める子宮摘出を行うが、その患者は生殖能力をも失う。またゴナドトロピン放出ホルモンアンタゴニストも投与できるが、骨粗鬆症を引き起こし得るということから使用が加減される。したがって、子宮線維症を処置するための新規の方法が必要とされており、本発明の方法はこの要求を満足するものである。子宮内膜炎は痛烈な痛み、子宮内膜塊内または腹膜腔内への出血を伴う深刻な月経困難の状態であり、しばしば不妊症につながる。この状態の症状の原因は、正常なホルモン制御に不適切に応答し、不適切な組織に存在する異所性の子宮内膜の成長であるとみられる。不適切な位置での子宮内膜の成長のために、組織は局所的な炎症性様の応答を開始し、疼痛応答の開始に至るカスケード様の事象を引き起こすと思われる。この疾患の厳密な病因はよくわかっておらず、ホルモン治療による処置も様々で、十分には明らかにされておらず、多くの望ましくない、そしておそらくは危険な副作用に注意しなければならない。この疾患の処置法の１つは、低用量のエストロゲンを用い、中枢のゴナドトロピン放出への負のフィードバック効果を通して子宮内膜の増殖を抑制し、次いで、卵巣のエストロゲン生産を抑制することである；しかし、該症状のコントロールのためにエストロゲンの継続的使用が必要な場合がある。このようなエストロゲンの使用はしばしば望ましくない副作用を招き、子宮内膜癌の危険性さえ招くことがある。もう１つの処置は、卵巣のエストロゲン生成を抑制することによって無月経を誘導するプロゲスチンの継続的投与からなるが、子宮内膜の成長の退行を起こすことある。長期間のプロゲスチン治療の使用は、しばしばプロゲスチンの不快なＣＮＳ副作用を伴い、卵巣の機能の抑制のために不妊症につながることが多い。第三の処置は、子宮内膜炎をコントロールするのに効果的な、弱いアンドロゲンの投与からなる；しかし、アンドロゲンは深刻な男性化を引き起こす。子宮内膜炎のためのこれら処置のいくつかは、継続的な治療によって軽度の骨損失を引き起こすことにも関係してくる。従って、子宮内膜炎の新規の治療の方法が望まれる。大動脈平滑筋細胞の増殖は、アテローム性動脈硬化症および再狭窄などの疾患において重要な役割を果たしている。経皮経管冠動脈形成（ＰＴＣＡ）後の血管の再狭窄は、初期および後期に特徴的な組織の応答であると示されている。ＰＴＣＡ後数時間〜数日の初期が、血管攣縮を伴う血栓症に起因する一方、後期は大動脈平滑筋細胞の過度の増殖および移動によって支配されるようである。この疾患において、細胞運動性の増加およびこのような筋細胞およびマクロファージによる集落形成が重要な病因になっている。血管の大動脈平滑筋の過度の増殖および移動がＰＴＣＡ、アテローム切除術（atherectomy）、レーザー血管形成術、および動脈バイパス移植手術後の、冠状動脈の再閉塞の主要な機構であろう（“ Ｉntimal Ｐroliferation of Ｓmooth Ｍuscle Ｃells as an Ｅxplanation for Ｒecurrent Ｃoronary Ａrtery Ｓtenosis after Ｐercutaneous Ｔranslumina l Ｃoronary Ａngioplasty"、オースチン（Ａustin）ら、Ｊournal of the Ａme rican Ｃollege of Ｃardiology 、８：３６９〜３７５（１９８５年８月）を参照）。経皮経管冠状動脈形成（ＰＴＣＡ）、アテローム切除術、レーザー血管形成術および動脈バイパス移植手術などによる動脈遮断の外科的介入後に血管再狭窄が主要な長期間の合併症として存続する。ＰＴＣＡを受けた患者の約３５％は術後、３〜６ヶ月以内に再閉塞が起こる。血管再狭窄の処置のために現在用いられている方法には、ステントなどの器具による機械的介入、またはヘパリン、低分子量ヘパリン、クマリン、アスピリン、魚油、カルシウムアンタゴニスト、ステロイド類、プロスタサイクリンを含む薬理学的治療が含まれる。これらの方法は再閉塞率を抑制できず、血管再狭窄の治療および予防に効果がない（“Ｐrevention of Ｒestenosis after Ｐercutaneous Ｔransluminal Ｃoronary Ａngioplasty ：Ｔhe Ｓerch for a ‘Ｍagic Ｂullet'"、Ｈermansら、Ａmerican Ｈeart Ｊo urnal 、１２２：１７１〜１８７（１９９１年７月）を参照）。再狭窄の病因においては、血液内および損傷した動脈管壁内で細胞成分によってつくられる、血管再狭窄における平滑筋の増殖を媒介する成長因子の結果として、過度の細胞増殖および移動が起こる。大動脈平滑筋細胞の増殖および／または移動を阻害する薬剤は、再狭窄の治療および予防に有用である。本発明は大動脈平滑筋細胞増殖阻害剤としての、従って再狭窄の阻害剤としての化合物の使用を提供する。本発明は式Ｉ式中、Ｒ₁は水素、ヒドロキシ保護基またはメチルであり；Ｒ₂およびＲ₃は独立してＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素と共にピロリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノおよびピペリジノからなる群から選択される複素環を形成する；Ｚは臭素、塩素、フッ素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシまたは水素であるで示される化合物およびその製薬学的に許容し得る塩およびその溶媒和物に関する。本発明はさらに、式Ｉの化合物を含有し、場合によりエストロゲンまたはプロゲスチンを含有する医薬組成物および閉経後症候群特に骨粗鬆症、心臓血管に関係する病状およびエストロゲン依存性の癌の阻害のための該化合物の単独での使用またはエストロゲンまたはプロゲスチンとの組合せての使用に関する。本明細書で使用する「エストロゲン」なる語は、エストロゲン活性を有する化合物、例えば、１７β−エストラジオール、エストロン、コンジュゲートしたエストロゲ７β−エチニルエストラジオールなどのステロイド化合物を含む。本明細書で使用する「プロゲスチン」なる語は、プロゲステロン活性を有する化合物、例えば、プロゲステロン、ノルエチノドレル、ノルゲストレル、メゲストロールアセテート、ノルエチンドロンなどの化合物を含む。本明細書の化合物はまた、女性における子宮線維症および子宮内膜炎およびヒトにおける動脈平滑筋細胞増殖、特に再狭搾を抑制するのに有用である。また、新規な中間体をも提供する。本発明の一つの態様には、式Ｉ式中、Ｒ₁は水素、ヒドロキシ保護基またはメチルであり；Ｒ₂およびＲ₃は独立してＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素と共にピロリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノおよびピペリジノからなる群から選択される複素環を形成する；Ｚは臭素、塩素、フッ素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシまたは水素であるで示される化合物およびその製薬学的に許容し得る塩およびその溶媒和物に関する。本発明はまた、式（ＸIII）式中、Ｒ_1aは、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシまたはメトキシであり；Ｚ'は臭素、塩素、フッ素、水素、ヒドロキシまたは保護されたヒドロキシであり；およびＲ₄はヒドロキシ、保護されたヒドロキシまたは下記式の基［式中、Ｒ₂およびＲ₃は独立してＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素と共にピロリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノおよびピペリジノからなる群から選択される複素環を形成する］である；で示される化合物およびその製薬学的に許容し得る塩およびその溶媒和物をも含む。本明細書中の化合物の記載において使用される一般的な用語は、それらの通常の意味を有する。例えば、「Ｃ₁−Ｃ₆アルキル」は、炭素原子１〜６の直鎖のまたは分枝した脂肪族鎖を意味し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｎ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシルなどが含まれる。本発明の化合物は公知の方法によって製造される。例えば、下記式である３− ケト化合物は式（III）を有するアリールリチウムブロミド（またはアリールマグネシウムブロミド）と反応させてよい。該反応はテトラヒドロフランまたはエーテルなどの不活性溶媒中で行うのが望ましい。その反応産物をエタノール中で塩酸と共に加熱することによって脱水する。該反応の産物を塩酸塩として直接単離するかまたは塩基性化（basification）を用いて、遊離塩基として単離する。さらに、該遊離塩基を酸付加塩を提供するためにさらなる塩の形成を用いる。式（II）の化合物は、式(IＶ)の対応する化合物を室温で、パラジウムまたは酸化プラチナなどの触媒の存在下で脱水することにより製造する。該反応に適する溶媒はアルコールおよび酢酸エチルを含む。合成の他の例は、式（Ｖ）の化合物とマグネシウムブロミドエーテレートを反応させ、水素化リチウムアルミニウムで処理するものである。式（IＶ）の化合物を式（III）を有するアリールリチウムブロミド（またはアリールマグネシウムブロミド）で処理することにより式（Ｖ）の化合物を製造する。式（ＩＶ）の化合物を米国特許第５,３５４,８６１号に開示されるのと類似のやり方で製造する。式（IＶ）の３−ケト−ベンゾチオフェン化合物を塩酸の触媒量中で適当なアルデヒドと縮合する。他の製造方法にはジョーンズ（Ｊones）ら、米国特許第４,０７５,２２７号（参照のため本明細書に包含する）に記載される類似の方法を用いることが含まれる。式ＶIIのチオール［式中、Ｒ_1aは保護されたヒドロキシである］を、式（ＶIII）［式中Ｒ₄は保護されたヒドロキシであり、Ｙはハロである］のα−ハロアセトフェノンと反応させ、式（IＸ）の化合物を製造する。化合物IＸはアリールスルホン酸、アルカンスルホン酸、硫酸、ポリリン酸などの酸の存在下で閉環して、式（Ｘ）を形成する。ついで化合物Ｘを塩化アルミニウムなどのフリーデル−クラフツ触媒の存在下で式（ＸI）の塩化ベンゾイル［式中、Ｚ'はＺまたは保護されたヒドロキシである］と反応させて、を製造する。ついで化合物ＸIIをジエチルエーテル、ＴＨＦ、ジオキサンなどの適当な溶媒中におく。その後、化合物ＸIIを水素化リチウムアルイミニウム（ＬＡＨ）などの還元剤と窒素などの不活性ガスの下で反応させる。使用する還元剤の量は、カルボニルを還元して式（ＸIII）のカルビノールとするのに十分な量である。この中間体は新規であり、ならびにＲ₄がである場合またはＲ_1aもまたヒドロキシまたは保護されたヒドロキシである場合、Ｚ'もまたヒドロキシであり、Ｒ₄もまたヒドロキシである。その後、化合物Ｘ IIIをさらに還元して２−メチレン結合を提供する。これは化合物ＸIIIを適切な溶媒中で、不活性ガスの下で冷却して行う。これに適当なトリアルキルシラン還元剤を加えて、好ましくはトリエチルシリルを加え、ついで塩酸、トリフルオロ酢酸などのかなり強いプロトン酸を加える。適当な溶媒には、ジクロロメタン、１,２ジクロロエテンおよびクロロベンゼンが含まれる。この反応のための温度は−５℃〜約２０℃の間である。Ｒ₁および／またはＺがヒドロキシである場合、Ｒ_1aおよびＺ'は該反応の間保護されたヒドロキシであり、ついで該ヒドロキシ保護基は既知の方法により除去される。Ｒ₄をに変換するため、メチレンに還元する前または後に任意の他のヒドロキシが保護されているべきであり、ついで該化合物（任意の保護されたヒドロキシを有するＸIIIまたはＩ）を水酸化ナトリウムなどの中程度に強い塩基と式の化合物［Ｑは臭素または塩素などのハロである］の存在下で反応させる。上記に適切であるヒドロキシ保護基は公知である。好ましいヒドロキシ保護基にはＣ₁−Ｃ₄アルキルが含まれる。例えば、バーキン（Ｂarkin）、「プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・ケミストリー」（“Ｐrotective Ｇ roups in Ｏrganic Ｃhrmistry”）、マッコーミー（Ｊ．Ｇ．Ｗ．ＭcＯmie）編、プレナム・プレス（Ｐlenum Ｐress）、ニューヨーク、ニューヨーク、１９７３、第２章およびグリーン（Ｇreene）、「プロテクティブ・グループス・イン・オーガニック・シンセシス」（“Ｐrotective Ｇroups in Ｏrganic Ｓynthes is"）、ジョン・ウィリー・アンド・サンズ（Ｊohn Ｗily and Ｓons）、ニューヨーク、ニューヨーク、１９８１、第７章、参照のため本明細書に包含する。以下の実施例は本発明を不当に限定することなく本明細書に記載される本発明を説明することを意図するものである。実施例１２−（ｐ−クロロベンジル−３−［ｐ−（２−ジメチルアミノエトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェンＴＨＦ中のｎ−ブチルリチウム（５.２７ml、７.８０ミリモル）を−７８℃でＴＨＦ（５ml）中の４−［２−ジメチルアミノエトキシ］フェニルブロミド（１ .９０ｇ、７.８０ミリモル）の溶液に滴下添加する。−７８℃で３０分間撹拌した後、その混合液にＴＨＦ中の２−（ｐ−クロロベンジル）−６−メトキシ−３ −ケト−（２Ｈ）ベンゾチオフェン（１.５８ｇ、５.２０ミリモル）を滴下添加する。その混合液を−７８℃で１時間撹拌し、ついで室温にまであたためる。１８時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウムで停止させ、ついでＴＨＦを蒸発させる。その残渣を酢酸エチル（３０ml）中に溶かし、塩化ナトリウム（２×２０ml ）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、ついで溶媒を蒸発させる。その残渣をフラッシュクロマトグラフィー（溶剤、ジクロロメタン：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：１：０.２）によって精製する。特徴付けせずにそのアルコールを脱水する。乾燥塩化水素ガスで飽和させたメタノール（０.４０ml）の溶液をナトリウム乾燥したエーテル（４０ml）中に溶かした第三級アルコールに加える。その化合物を形成し、ついで濾過し、ついでエタノールから再結晶させて標記化合物の塩酸塩を得る。実施例２２−（ｐ−クロロベンジル）−３−［ｐ−（２−（１−ピロリジノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェン乾燥ＴＨＦ（５０ml）中の４−［２−（１−ピロリジノ）エトキシ］フェニルブロミド（１.４１ｇ、５.２０ミリモル）を無酸素の窒素雰囲気下で乾燥三つ口丸底フラスコ中でマグネシウム末（３１２mg、１３.０ミリモル）に加え、その混合物をゆっくりした還流下で維持する。１,２−ジブロモメタン（０.２２ml、２.６０ミリモル）を１／２時間かけて滴下添加する。その混合物をマグネシウムがほとんど消費されるまで（ca．１／２時間）ゆっくり加熱する。ＴＨＦ（５０ml）中の２−（ｐ−クロロベンジル）−６−メトキシ−３−ケト−（２Ｈ）ベンゾチオフェン（７９２mg、２.６０ミリモル）を０℃でその混合物に滴下添加する。その反応混合物を室温にまで暖め、ついで１８時間還流する。冷却した混合物を飽和塩化アンモニウム（３０ml）で停止させ、ジクロロメタン（３×４０ ml）で抽出し、水で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、ついで溶媒を蒸発させる。その残渣をエタノール（２５ml）中の濃塩酸（２ml）で脱水させる。その混合物を２時間還流し、エタノールを除去する。ついで１０％水酸化ナトリウム（２０ml）で塩基性にし、ついでジクロロメタン（３×４０ml）で抽出する。そのジクロロメタン抽出物を水（３×２０ml）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、ついで溶媒を蒸発させる。（ジクロロメタン：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：２：０.３）で溶出し、粗製標記化合物を得て、メタノールから再結晶して標記化合物を得る。乾燥塩化水素ガスを１０分間遊離塩基のエーテル溶液に通して泡立て、ついで０℃に冷却する。沈澱したその塩酸塩をポンプにて濾去し、エーテルで濯ぎ、ついでイソプロパノールから再結晶させて塩酸塩を得る。実施例３２−（ｐ−クロロベンジル）−３−［ｐ−（２−（１−ピペリジノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェンＴＨＦ中のｎ−ブチルリチウム（５.２７ml、７.８０ミリモル）を−７８℃でＴＨＦ（５ml）中の４−［２−（１−ピペリジノ）エトキシ］フェニルブロミド（１.４５ｇ、７.８０ミリモル）の溶液に滴下添加する。−７８℃で３０分間撹拌した後、−７８℃でその混合液にＴＨＦ中の２−（ｐ−クロロベンジル）−６ −メトキシ−３−ケト−（２Ｈ）ベンゾチオフェン（１.５８ｇ、５.２０ミリモル）を滴下添加する。その混合液を−７８℃で１時間撹拌する。該液を室温にまであたためる。１８時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウムで停止させ、ついでＴＨＦを蒸発させる。その残渣を酢酸エチル（３０ml）中に溶かし、塩化ナトリウム（２×２０ml）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、ついで溶媒を蒸発させる。その物質をフラッシュクロマトグラフィー（溶剤、ジクロロメタン：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：１：０.２）によって精製した後、乾燥塩化水素ガスで飽和させたメタノール（０.４０ml）の溶液をナトリウム乾燥したエーテル（４０ml）中に溶かした物質に加える。その反応混合物を室温で１／２時間撹拌する。沈澱物が形成され、ついで濾過し、ついでエタノールから再結晶させて標記化合物の塩酸塩を得る。実施例４２−（ｐ−クロロベンジル）−３−［ｐ−（２−（１−モルホリノ）エトキシ）フェニル−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェン（ａ）ｎ−ブチルリチウム（１.５６Ｍ溶液の１.４１ml、２.２ミリモル）を −７８℃でＴＨＦ（５ml）中の４−［２−（１−モルホリノ）エトキシ］フェニルブロミド（６３０mg、２.２ミリモル）の溶液に滴下添加する。−７８℃で３０分間撹拌した後、−７８℃でその混合液にＴＨＦ（２ml）中の２−（ｐ−クロロベンジル）−６−メトキシ−３−ケト−（２Ｈ）ベンゾチオフェン（６０９mg 、２.０ミリモル）を滴下添加する。その混合液を室温にまであたためる。１８時間撹拌した後、飽和塩化アンモニウムで停止させ、ＴＨＦを蒸発させて、エタノール（１０ml）中の濃塩酸（２ml）で脱水してアルコールを得る。その混合液を２時間還流し、エタノールを除去する。ついで１０％水酸化ナトリウム（２０ ml）で塩基性にし、ついでジクロロメタン（３×４０ml）で抽出する。そのジクロロメタン抽出物を水（３×２０ml）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、ついで溶媒を蒸発させる。ついでその物質を（ジクロロメタン：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：２：０.３）で溶出する。乾燥塩化水素ガスを１０分間泡立てる。標記化合物の塩酸塩をイソプロパノールから再結晶させた後、標記化合物の塩酸塩を得る。（ｂ）マグネシウムブロミドエテレート（０.１９４ｇ、０.７５ミリモル）を室温で無酸素の窒素雰囲気下で双頭フラスコ中の２０ml エーテルに溶かす。１時間撹拌後、エーテル（１０ml）中の２−（ｐ−クロロフェニルメチレン）−３ −［ｐ−（２−１−モロホリノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシ−２,３ −ジヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−オール（０.２５５ｇ、０.５ミリモル）をその混合物に滴下添加する。４時間撹拌した後、ＬiＡlＨ₄（０.０７６ｇ、２. ０ミリモル）を上記反応混合物に加える。その反応混合物を室温で一夜放置する。一夜撹拌した後、酢酸エチルを水素の遊離がなくなるまで滴下添加する。上記混合物を水、ついで食塩水（２×２０ml）で洗浄し、乾燥させ（無水硫酸ナトリウム）、ついで溶媒を蒸発させ、シリカゲル上でクロマトグラフィーにかける。（クロロホルム：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：１：０.２）で溶出して標記化合物を得る。実施例５２−（ｐ−クロロフェニルメチレン）−３−［ｐ−（２−（１−モルホリノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシ−２,３−ジヒドロベンゾ［ｂ］チオフェン−３−オールｎ−ブチルリチウム（１.２８Ｍ溶液の２.８７ml、３.６８ミリモル）を−７８℃で窒素雰囲気下でＴＨＦ（１０ml）中の４−［２−（１−モルホリノ）エトキシ］フェニルブロミド（０.８０mg、３.６７ミリモル）の溶液に滴下添加する。−７８℃で１時間撹拌した後、−７８℃でその混合液にＴＨＦ中の２−（ｐ− クロロベンジリデン）−６−メトキシ−３−ケト−ベンゾチオフェン（１.０６ｇ、３.５０ミリモル）を滴下添加する。その混合液を室温で一夜放置する。飽和塩化アンモニウムで停止させ、ＴＨＦを蒸発させて、酢酸エチル（２×２０ml ）で抽出する。その酢酸エチル抽出物を水、ついで食塩水（２×２０ml）で洗浄して、乾燥させ（無水硫酸マグネシウム）、その溶媒を蒸発させてシリカゲル上でクロマトグラフィーにかける。（クロロホルム：ヘキサン：トリエチルアミン＝１：１：０.２）で溶出し、標記化合物を得る。実施例６２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ−（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェン実施例４ｂに続く実施例５の方法を２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ −（２−ジエチルアミノエトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェンの製造に使用する。使用した反応物の具体的なグラム比率は同様であり、制限することを意図しているものではなく、当業者に公知の常法で理想的な化学量論的比率の周囲に分散することができる。実施例７２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ−（２−（１−ピロリジノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェン実施例４ｂに続く実施例５の方法を２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ −（２−（１−ピロリジノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェンの製造に使用する。実施例８２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ−（２−（１−ピペリジノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェン実施例４ｂに続く実施例５の方法を２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ −（２−（１−ピペリジノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェンの製造に使用する。実施例９２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ−（２−（１−モルホリノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェン実施例４ｂに続く実施例５の方法を２−（ｐ−フルオロベンジル）−３−［ｐ −（２−（１−モルホリノ）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンゾ［ｂ］チオフェンの製造に使用する。実施例１０２−（ｐ−メトキシフェニル）−３−［ｐ−（２−（１−ピペリデニル）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンズ［ｂ］チオフェン実施例４ｂに続く実施例５の方法を２−（ｐ−メトキシフェニル）−３−［ｐ −（２−（１−ピペリデニル）エトキシ）フェニル］−６−メトキシベンズ［ｂ］チオフェンの製造に使用する。式（I）の化合物の遊離塩基型は本発明の方法において使用することができるが、製薬学上許容し得る塩の形態を製造して使用することが好ましい。従って、本発明の方法に使用される化合物は、主として、広範囲の有機および無機の酸との製薬学的に許容し得る酸付加塩を形成し、製薬化学においてしばしば使用される生理学的に許容し得る塩を含む。このような塩もまた、本発明の一部を構成する。このような塩の形成に使用される典型的な無機の酸には、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、次リン酸などが含まれる。脂肪族のモノおよびジタルボン酸、フェニル置換されたアルカン酸、ヒドロキシアルカン酸およびヒドロキシアルカン二酸、芳香族の酸、脂肪族および芳香族のスルホン酸などの有機の酸から誘導される塩もまた使用し得る。従って、このような製薬学的に許容し得る塩には酢酸塩、フェニル酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、アクリル酸塩、アスコルビン酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ｏ−アセトキシ安息香酸塩、ナフタレン−２−安息香酸塩、臭化物、イソ酪酸塩、フェニル酪酸塩、β−ヒドロキシ酪酸塩、ブチン−１,４−二酸塩、ヘキシン−１,４−二酸塩、カプリン酸塩、カプリル酸塩、塩化物、ケイ皮酸塩、クエン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グリコール酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、乳酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、ヒドロキシマレイン酸塩、マロン酸塩、マンデル酸塩、メシラート、ニコチン酸塩、イソニコチン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、フタル酸塩、テレフタル酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、プロピオル酸塩、プロピオン酸塩、フェニルプロピオン酸塩、サリチル酸塩、セバシン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ピロ硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、スルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−ブロモフェニルスルホン酸塩、クロロベンゼンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホン酸塩、ナフタレン−２−スルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、酒石酸塩などが含まれる。好ましい塩は塩酸塩である。製薬学的に許容し得る酸付加塩は、典型的には式Ｉの化合物を等モルまたは過剰量の酸と反応させることによって形成する。反応成分は一般に、ジエチルエーテルまたは酢酸エチルなどの相互溶媒中で混合する。塩は普通、約１時間から１０日以内に溶液から沈殿し、濾過によって分離するかまたは慣用の方法によって溶媒を除去し得る。製薬学的に許容し得る酸付加塩は一般的に該塩が由来する化合物に比較して増強された溶解度の特性を有し、従って、しばしば液体または乳剤として製剤化される。以下の実施例はさらに本発明の化合物の製造を説明する。該実施例は以下の例の任意の理由に従って範囲を限定することを意図したものではない。試験方法一般的な製造方法方法を説明した実施例において、閉経後症候群のモデルを使用するが、その際、循環する脂質への多様な処置の効果を決定した。７５日齢の雌スプラーグ・ドーレィ（Ｓprague Ｄawley）ラット（体重の範囲２００〜２２５ｇ）をチャールズ・リバー・ラボラトリーズ（Ｃharles Ｒiver Ｌaboratories）（ポーテージ（Ｐortage）、ミシガン）から得た。その動物を両側卵巣摘出（ＯＶＸ）するかまたはチャールズ・リバー・ラボラトリーズにて疑似外科手術（Ｓham surgical procedure）を受けさせ、ついで１週間後に送り出す。到着後すぐにそれらは１つのカゴあたり３または４匹のグループにて金属製の携帯カゴで飼育し、任意に食物に近付くことができるように（カルシウム含有が約０.５％）し、１週間に１度水を与える。室温を２２.２℃±１.７℃で最少の相対湿度が４０％であるように維持する。室内の光周期は１２時間明るくして１２時間暗くするものである。投与方法組織収集馴化期間である１週間の後（ゆえに、ＯＶＸ後から２週間）に試験化合物を毎日投与することを開始する。１７−αエチニルエストラジオールまたは該試験化合物を特記しない限りは、１％カルボキシメチルセルロース中の懸濁液または２０％シクロデキストリンに溶かして経口投与する。動物に４日間毎日投与する。投与方法に従って、動物の体重を測定い、ケタミンにて麻酔する：キシラジン（２：１、Ｖ：Ｖ）混合物および血液サンプルを心臓穿刺によって採取する。ついで動物をＣＯ₂で窒息死させ、その子宮を正中切開（midline incision）により除去し、湿った子宮重量を決定する。コレステロール分析血液サンプルを室温で２時間凝固させ、血清を３０００rpmで１０分間遠心して得る。血清コレストロールをベーリンガー・マンハイム・ダイアグノスティックス・ハイ・パフォーマンス・コレステロール・アッセイ（Ｂoehringer Ｍannh eim Ｄiagnostics high performance cholesterol assay）を用いて決定する。簡単には、コレステロールを酸化させてコレスト−４−エン−３−オンおよび過酸化水素に酸化する。ついで過酸化水素をペルオキシダーゼの存在下でフェノールおよび４−アミノフェナゾンと反応させて、分光計で５００nmの赤いｐ−キノンイミンダイを製造する。ついでコレステロール濃度を標準曲線に対して算出する。全アッセイをバイオメク・オートメーテッド・ワークステーション（Ｂiome k Ａutomated Ｗorkstation）を用いて自動化する。子宮エオシノフィルペルオキシダーゼ（ＥＰＯ）アッセイ子宮を酵素分析の時刻まで４℃で維持する。ついでその子宮を０.００５％のＴriton Ｘ−１００を含む５０mＭトリスバッファー（ｐＨ−８.０）の５０容量にてホモジナイズする。０.０１％の過酸化水素およびトリスバッファー中の１０mＭＯ−フェニレンンジアミン（最終濃度）を加えてすぐに、吸光度の増加が１分間に４５０nmでモニターされる。子宮中のエオソノフィリスの存在は化合物のエストロゲン活性の指標である。１５秒間のその最大速度を最初の反応曲線の直線部位にわたって決定する。化合物の源１７α−エチニルエストラジオールをシグマ・ケミカル・コ（Ｓigma Ｃhemic al Ｃo.）、セントルイス、ミズーリから得る。骨粗鬆症試験方法一般的な製造方法に従って、下記、ラットを３５日間処理（処置グループ当たり６ラット）し、ついで３６日目に二酸化炭素により窒息死させる。３５日間は骨密度における最大の減少を可能にするのに十分であり、本明細書に記載されるように測定する。屠殺時に、子宮を除去し、外部組織を切除し、ついで完全な卵巣摘出術に伴うエストロゲン欠乏症を確認するために湿重量を決定する前に液体内容物を排出させる。子宮の重量は通常通り、卵巣摘出術に応じて約７５％減少する。ついで子宮を１０％中性緩衝ホルマリン中に静置して続いて組織学的分析を行う。右の大腿骨を切り出して、産生したＸ−線でディジタイズし、画像分析プログラム（image analysis program）（ＮＩＨイメージ）によって遠位の骨幹端で分析する。これらの動物からの脛骨の近位面もまた定量的に計算した断層写真によってスキャニングする。上記の手法に従って、本発明の化合物および２０％ヒドロキシプロピル β− シクロデキストリン中のエチニルエストラジオール（ＥＥ₂）を試験動物に経口投与する。ＭＣＦ−７増殖アッセイＭＣＦ−７胸腺癌細胞（ＡＴＣＣＨＴＢ２２）を１０％（Ｖ／Ｖ）ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、Ｌ−グルタミン（２ｍＭ）、ピルビン酸ナトリウム（１ｍＭ）、ＨＥＰＥＳ｛Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ'−［２−エタンスルホン酸］１０ｍＭ｝、非必須アミノ酸およびウシインシュリン（１μg／ｍl ）を添加したＭＥＭ（最小必須培地、フェノールレッドーフリー，シグマ，セントルイス，ミズーリ州）（保存培地）中で保存する。分析の１０日前、ＭＣＦ− ７細胞を、１０％ＦＢＳの代わりに、１０％のデキストランコートされた木炭でストリップしたウシ胎児血清（ＤＣＣ−ＦＢＳ）を添加した保存培地（分析培地）と交換し、中に蓄えられているステロイドを放出させる。ＭＣＦ−７細胞を、１０ｍＭＨＥＰＥＳおよび２ｍＭＥＤＴＡを添加した細胞分離培地（Ｃａ／Ｍｇを含まないＨＢＳＳ（フェノールレッド−フリー））を用いて保存フラスコから取り出す。細胞を分析培地で２回洗浄し、８０,０００細胞／ｍlに調整する。約１００μl（細胞数８，０００）を平底マイクロカルチャーウェル（コスター（Ｃostar）３５９６）に加え、５％ＣＯ₂の湿潤インキュベーター中、３７℃で４８時間インキュベートして、細胞を移植後に接着させ平衡させる。分析培地中で、薬剤または希釈剤対照としてのＤＭＳＯの連続希釈をし、５０μlを３つのマイクロカルチャーに移した後、５０μlの分析培地を加えて最終の体積を２００μlにする。さらに３７℃で５％ＣＯ₂の湿潤インキュベーター中で４８時間インキュベートした後、マイクロカルチャーに三重水素を含むチミジン（１μＣｉ／ウェル）でパルスを４時間送る。培養細胞を−７０℃で２４時間凍結することで終了し、解凍し、スケイトロン・セミオートマティック・セル・ハーベスター（Ｓkatron Ｓemiautomatic Ｃell Ｈarvester）を用いてマイクロカルチャーを回収することにより終了させる。サンプルを、液体シンチレーションによってウォーラック・ベータプレイスβカウンター（Ｗallac Ｂeta Ｐlace βcounter）を用いて計測する。ＤＭＢＡ−誘発性乳癌阻害エストロゲン依存性の乳癌をハーラン・インダストリーズ（Ｈarlan Ｉndustr ies）（インディアナポリス，インディアナ州）から購入した雌性スプラーグ・ドーレィラット中に発生させる。約５５日齢でラットに７,１２−ジメチルベンズ［ａ］アントラセン（ＤＭＢＡ）２０ｍgを１回経口投与する。ＤＭＢＡ投与から約６週間後に、１週間毎に乳腺を触診し腫瘍の出現を診る。１つまたはそれ以上の腫瘍が現れたら、各腫瘍の最長と最短の直径をメートル法のカリパスで測定して測定値を記録し、実験のためにラットを選択する。腫瘍の平均の大きさが試験群の間で等しく分布するように処置群および対照群の種々の腫瘍の大きさを均一に分布させる。各実験の対照群および処置群は５から９匹の動物を含む。式Ｉの化合物を２％アラビアゴム中での腹腔内注射投与かまたは経口投与のいずれかで投与する。経口投与される化合物は、０.２ｍlのコーン油中に溶解させるかまたは懸濁させる。アラビアゴムおよびコーン油の対照処置を含む各処置は、各ラットに毎日１回投与することにより行う。最初の腫瘍を測定し、試験用ラットを選択した後、前記の方法によって１週間毎に腫瘍を測定する。動物の処置および測定は３から５週間続け、腫瘍の最終的な領域を決定する。各化合物および対照処置について平均の腫瘍領域の変化を測定する。子宮線維症試験方法アッセイ１子宮線維症にかかっていると診断されている３から２０人の女性に本発明の化合物を投与する。投与された化合物の量は１日当たり０.１〜１０００ｍｇ／日であり、投与期間は３カ月である。その女性は投与期間中観察され、投与を終えてから３カ月後まで子宮線維症への効果を観察する。アッセイ２投与期間が６カ月ということを除いては試験１においてと同様の手順が使用される。アッセイ３投与期間が１年ということを除いては試験１においてと同様の手順が使用される。アッセイ４Ａ．モルモットにおける類線維腫の誘発長期的なエストロゲン刺激を用いて性的に成熟した雌性のモルモットにおいて平滑筋腫を誘発する。動物に１週間に３−５回、２−４カ月間かまたは腫瘍が生じるまでの間、エストラジオールを注射によって投与する。本発明の化合物またはビヒクルからなる処置を３−１６週間、毎日投与し、ついで動物を死亡させ、ついで子宮を採取し、ついで腫瘍の退行の分析をする。Ｂ．ヌードマウスにおけるヒト腫瘍組織の移植ヒト平滑筋腫から採取した組織を、性的に成熟した雌性ヌードマウスの腹腔およびまたは子宮筋層へ移植する。移植片の成育を促進するために外因エストロゲンを与える。いくつかの場合には、採取した腫瘍細胞を移植の前にイン・ビトロで培養する。本発明の化合物またはビヒクルからなる処置を３−１６週間胃洗浄により１日１回投与し、移植片を除去し、ついで増殖または退行を測定する。屠殺時に子宮を採取し、その器官の状態を査定する。アッセイ５ヒト子宮類線維腫からの組織を採取し、第１次非形質転換培養物としてイン・ビトロで維持する。外科的標本を滅菌したメッシュまたはふるいを通して押し出すかまたは周辺組織から別に分離して単一細胞懸濁物を製造する。細胞を１０％血清および抗生物質を含む培地中で維持する。エストロゲンの存在下および不在下で増殖率を測定する。補体要素Ｃ３の産生およびその増殖因子および増殖ホルモンへの応答能力をアッセイする。イン・ビトロ培養物をプロゲスチン、Ｇn ＲＨ、本発明の化合物およびビヒクルで処理して増殖応答をアッセイする。ステロイドホルモン受容体のレベルを１週間ごとに評価して、重要な細胞特性がイン・ビトロで維持されるかどうかを決定する。５−２５人の患者からの組織を利用する。上記の試験の少なくとも１つの活性は本発明の化合物が子宮線維疾患の処置が可能であることを示している。子宮内膜炎試験手順試験１および２において本発明の化合物の１４日および２１日投与の移植された子宮内膜組織の増殖に及ぼす効果を試験する。アッセイ１１２〜３０匹の成熟ＣＤ系雌性ラットを試験動物として使用する。それらを同数の３つの群に分ける。すべての動物の発情期をモニターする。発情前期の日で、外科手術を各雌に行う。各群の雌性ラットは左側の子宮角（uterine horn）を除去し、小さい四角形に切り分け、その四角形を腸間膜血流近隣の様々な部位でゆるく縫合する。さらに、第２群の雌は卵巣を摘出している。手術の翌日に、第１群の動物および第２群の動物に１４日間水を腹腔内注射する一方、第３群の動物に同期間体重１kg当たり本発明の化合物の１.０mgの腹腔内注射を受けさせる。処置１４日後、各雌を屠殺し、応用可能である子宮内膜移植物、副腎、残存している子宮および卵巣を摘出し、組織学的試験のために準備する。その卵巣および副腎の重量を測定する。アッセイ２１２〜３０匹の成熟ＣＤ系雌性ラットを試験動物として使用する。それらを同数の２つの群に分ける。すべての動物の発情期をモニターする。発情前期の日で、外科手術を各雌に行う。各群の雌性ラットは左側の子宮角を除去し、小さい四角形に切り分け、その四角形を腸間膜血流近隣の様々な部位でゆるく縫合する。術後約５０日後、第１群にあてられた動物に２１日間腹腔内注射する一方、第３群の動物に同期間体重１kg当たり本発明の化合物の１.０mgの腹腔内注射を受けさせる。処置２１日後、各雌を屠殺し、子宮内膜移植物、副腎を摘出し、重量を測定する。その移植物を増殖の指標として測定する。発情期をモニターする。アッセイ３Ａ．子宮内膜炎の外科的誘発子宮内膜組織のオートグラフィーを使用してラットおよび／またはウサギの子宮内膜炎を誘発する。生殖成熟に達している雌に両側の卵巣摘出を受けさせ、ついでエストロゲンを外から補うことにより特異的および一定のホルモンレベルを提供する。同系移植した子宮内膜組織を５〜１５０匹の動物の腹腔中に移植し、ついでエストロゲンを補って移植された組織の増殖を誘発する。本発明の化合物からなる処置を３−１６週間胃洗浄により１日１回補い、移植片を除去し、ついで増殖または退行を測定する。屠殺時に子宮の正常角を採取して子宮内膜炎の状態を査定する。Ｂ．ヌードマウスにおけるヒト子宮内膜炎組織の移植ヒト子宮内膜平滑筋から採取した組織を、性的に成熟し、去勢した雌性ヌードマウスの腹腔へ移植する。移植片の成育を促進するために外因エストロゲンを与える。いくつかの場合には、採取した子宮内膜細胞を移植の前にイン・ビトロで培養する。本発明の化合物またはビヒクルからなる処置を３−１６週間胃洗浄により１日１回投与し、移植片を除去し、ついで増殖または退行を測定する。屠殺時に子宮を採取し、正常子宮内膜の状態を査定する。アッセイ４Ａ．ヒト子宮内膜傷害からの組織を採取し、第１次非形質転換培養物としてイン・ビトロで維持する。外科的標本を滅菌したメッシュまたはふるいを通して押し出すかまたは周辺組織から別に分離して単一細胞懸濁物を製造する。細胞を１０％血清および抗生物質を含む培地中で維持する。エストロゲンの存在下および不在下で増殖率を測定する。補体要素Ｃ３の産生およびその増殖因子および増殖ホルモンへの応答能力をアッセイする。イン・ビトロ培養物をプロゲスチン、Ｇn ＲＨ、本発明の要素およびビヒクルで処理して増殖応答を評価する。ステロイドホルモン受容体のレベルを重要な細胞特性がイン・ビトロで維持されるかどうかを決定するように軽く評価する。５−２５人の患者からの組織を利用する。上記のアッセイのいずれにおける活性も本発明の化合物が子宮内膜炎の処置に有用であることを示す。大動脈平滑筋細胞増殖／再狭搾の抑制試験手順本発明の化合物は大動脈平滑筋細胞増殖を抑制する能力を有する。これはウサギ大動脈由来の培養平滑筋細胞を使用することによって証明することができ、増殖についてはＤＮＡ合成の測定によって決定することができる。ロス（Ｒoss）細胞をロス（Ｒoss）、Ｊ．of Ｃell Ｂio．５０：１７２（１９７１）に記載される移植方法により得る。細胞を９６ウェルマイクロタイタープレートに５日間播種する。その培養物を合流（confluent）させ、増殖を阻害する。ついでその細胞を０.５−２％の血小板の少ない血漿、２mＭＬ−グルタミン、１００Ｕ／m lペニシリン、１００mg／ml ストレプトマイシン、１mＣ／ml ³Ｈ−チミジン、２０ng／ml 血小板由来増殖因子および多様な濃度の本発明の化合物を含むダルベッコ改変イーグル培地（Ｄulbecco's Ｍodified Ｅagles Ｍedium、（ＤＭＥＭ））に移す。その化合物の保存溶液をジメチルスルホキシド中で製造し、ついで適切な濃度（０.０１〜３０mＭ）に上記アッセイ培地中で希釈する。ついで細胞を３７℃、５％ＣＯ₂／９５％空気の下で２４時間インキュベートする。２４時間の終了時に、その細胞をメタノールで固定する。ついで³ＨチミジンのＤＮＡへの取り込みをボニン（Ｂonin）ら、Ｅxp．Ｃell Ｒes．１８１：４７５− ４８２（１９８９）中に記載されるようにシンチレーションカウンティングによって測定する。本発明の化合物による大動脈平滑筋細胞増殖の抑制をさらに指数関数的に増殖する細胞への効果を測定することによって証明する。ウサギ大動脈細胞からの平滑筋細胞を１０％ウシ胎児血清、２mＭＬ−グルタミン、１００Ｕ／ml ペニシリンおよび１００mg／ml ストレプトマイシンを含むＤＭＥＭ中で１２ウェル組織培養プレート中に播種する。２４時間後、その細胞を接着させ、ついでその培地を１０％ウシ胎児血清、２mＭＬ−グルタミン、１００Ｕ／ml ペニシリン、１００mg／ml ストレプトマイシン、および望ましい濃度の本発明の化合物を含むＤＭＥＭに変える。細胞を４日間増殖させる。細胞をトリプシン処理し、ついで各培養物中の細胞数をＺＭ−クルターカウンター（ＺＭ−Ｃoulter counter）を用いてカウントして決定する。上記のアッセイのいずれにおける活性も本発明の化合物が再狭搾の処置に有用であることを示す。本発明はまた、女性における閉経後症候群を緩和する方法であって、式Ｉの化合物を用いた前記方法およびさらにエストロゲンまたはプロゲスチンの有効量を投与することを含む方法をもまた提供する。これらの処置は特に骨粗鬆症の処置および血清コレステロールを低下させるのに有効である。というのは患者が各薬剤の利点を受ている間、本発明の化合物はエストロゲンおよびプロゲスチンの望ましくない副作用を抑制するからである。閉経後症候群試験の任意におけるこれらの組み合わせた処置の活性、下記は、組み合わせた処置が女性における閉経後症候群の症状を緩和するのに有用であること示す。エストロゲンおよびプロゲスチンの様々な形態が市販で入手可能である。エストロゲンをベースとする薬剤には、例えばエチニルエストロゲン（０.０１〜０. ３ｍg／日）、メストラノーノレ（０.０５〜０.１５ｍg／日）、およびプレマリような結合型エストロゲンホルモンが含まれる。プロゲスチンをベースとする薬等のメドロキシプロゲステロン、ノルエチルノドレル（１.０〜１０.０ｍg／日）、およびノルエチンドロン（０.５〜２.０ｍg／日）が含まれる。エストロゲンをベースとする好ましい化合物はプレマリンであり、ノルエチルノドレルおよびノルエチンドロンは、プロゲスチンをベースとする好ましい薬剤である。各エストロゲンおよびプロゲスチンをベースとする薬剤の投与の方法は、当業者に公知の方法と一致する。本発明の方法の多数に関しては、式Ｉの化合物を１日１−３回持続的に投与する。しかしながら、臨床的処置は特に、子宮内膜炎の処置に有用であるかまたはその疾患の痛みの発作の間急性で使用してよい。再狭搾の場合には、血管形成などの医学手順後短期間（１−６カ月）に限られてよい。本明細書で使用する「有効量」とは、本明細書に記載した多様な病状の兆候を緩和することができる本発明の量を意味する。本発明により投与された化合物の具体的な用量は勿論、例えば投与された化合物、投与経路、患者の状態、ついで処置される病状などを含む周囲の特定の環境によって決定されるであろう。典型的な１日の投与量は本発明の化合物の約５mg〜約６００mg／日からの非毒性投与レベルを含む。好ましい１日投与量は一般的に約１５mg〜約８０mg／日の間である。本発明の化合物は経口、経直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内および鼻腔内を含む多様な経路によって投与することができる。これらの化合物は投与する前に製剤することが好ましく、その選択は担当医によって決定されるであろう。従って、本発明の他の態様は式Ｉの化合物、または製薬学的に許容し得るその塩、任意にエストロゲンおよびプロゲスチンの有効量を含む、および製薬学的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物である。そのような製剤中の総活性成分はその製剤の０.１％〜９９.９重量％を含む。「製薬学的に許容し得る」とは、担体、希釈剤、賦形剤および塩が製剤の他の成分と適合しなければならず、その受容者に有害であってはならないことを意味する。本発明の医薬製剤は当該技術分野においてよく知られている手法および簡単に利用できる成分を用いて製造することができる。例えば、式Ｉの化合物は、エストロゲンまたはプロゲスチンとともにかまたはなしに、一般的な賦形剤、希釈剤、または担体と共に製剤化することができ、錠剤、カプセル剤、懸濁剤、散剤などに形成することができる。このような製剤に適当な賦形剤、希釈剤および担体の例には次のものが含まれる：デンプン、糖類、マンニトールおよびケイ酸誘導体などの賦形剤および展開剤、カルボキシメチルセルロースおよび他のセルロース誘導体、アルギン酸塩、ゼラチンおよびポリビニル−ピロリドンなどの結合剤、グリセリンなどの湿潤剤、寒天、炭酸カルシウムおよび重炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、パラフィンなどの溶出遅延剤、第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、セチルアルコール、グリセリンモノステアラートなどの界面活性剤、カオリンおよびベントナイトなどの吸着担体、タルク、ステアリン酸カルシウムおよびステアリン酸マグネシウム、および固体のポリエチレングリコールなどの滑沢剤。化合物はまた、エリキシル剤または経口投与に便利な溶液または非経口投与、例えば、筋肉内、皮下または静脈内注射などに適している溶液として製剤化することもできる。さらに、その化合物は徐放性の剤形の製剤によく適合する。製剤は、唯一または好ましくは生理学的な特定部分において、できるだけ一定期間活性成分を放出するように構成することもできる。例えば、高分子物質またはワックス類から製造し得る、コーティング、薬袋および保護マトリックスが作られる。式Ｉの化合物は、単独または本発明の薬剤と組合せて一般的に便利な製剤にて投与されるであろう。以下の製剤例は単に説明するものであって、本発明の範囲を制限することを意図するものではない。製剤以下の製剤において、「活性成分」とは、式Ｉの化合物、またはその塩またはその溶媒和物を意味する。製剤１：ゼラチンカプセル硬ゼラチンカプセルを以下を用いて製造する。上記製剤は与えられた穏当な変化に応じて変更してよい。錠剤の製剤は以下の内容を用いて製造する。製剤２：錠剤成分を混合して圧縮して錠剤を成形する。あるいはまた、活性成分を各々２.５−１０００mg含む錠剤を、以下のようにして製造する。製剤３：錠剤活性成分、デンプンおよびセルロースをＮo.４５メッシュＵ.Ｓ.篩にかけて完全に混合する。その結果得られた粉末とポリビニニルピロリドン溶液とを混合した後、これをＮo.１４メッシュＵ.Ｓ.篩にかける。このようにして製造した顆粒を５０℃〜６０℃で乾燥し、Ｎo.１８メッシュＵ.Ｓ.篩にかける。ついであらかじめＮo.６０Ｕ.Ｓ.篩にかけておいたカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクを顆粒に加え、混合した後、これを打錠機で圧縮して錠剤を得る。５ml用量につき、活性成分を各々０.１−１０００mg含む懸濁液剤を以下のようにして製造する。製剤４：懸濁液剤薬物をＮo.４５メッシュＵ.Ｓ.の篩にかけ、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよびシロップと混合して、滑らかなペーストとする。安息香酸溶液、香料、および着色料を少量の水で希釈して、撹拌しながら加える。ついで、十分に水を加え所望の容量とする。以下の成分を含むエアロゾル溶液を製造する。製剤５：エアロゾル剤活性成分をエタノールと混合し、この混合物を一部のプロペラント２２に加え、−３０℃に冷却して充填機に移す。次いで必要量をステンレススチールの容器に入れて残りのプロペラントで希釈する。次にバルブユニットをこの容器に取り付ける。坐剤は以下のようにして製剤する。製剤例６：坐剤活性成分をＮo.６０メッシュＵ.Ｓ.篩にかけ、必要最少限の熱を用いてあらかじめ融点に加熱した飽和脂肪酸グリセリドに懸濁する。ついでその混合物をわずか２ｇの容量である坐剤用の型に入れ、冷却する。静脈内製剤を以下のようにして製剤する。製剤例７：静脈注射液上記成分の溶液を１分間に１mlの速度で患者に静脈内投与する。製剤例８：コンビネーションカプセルＩ製剤例９：コンビネーションカプセルII 製剤例１０：コンビネーション錠剤

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/535 ＡＣＶＡ６１Ｋ 31/535 ＡＣＶＡＤＮＡＤＮ (81)指定国ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ )，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｉ式中、Ｒ₁は水素、ヒドロキシ保護基またはメチルであり；Ｒ₂およびＲ₃は独立してＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素と共にピロリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノおよびピペリジノからなる群から選択される複素環を形成する；Ｚは臭素、塩素、フッ素、ヒドロキシ、保護されたヒドロキシまたは水素であるで示される化合物およびその製薬学的に許容し得る塩およびその溶媒和物。２．Ｚがヒドロキシである請求項１に記載の化合物。３．Ｚが塩素、臭素、フッ素または水素である請求項１に記載の化合物。４．Ｒ₂およびＲ₃がそれらが結合している窒素と共にピペリジノを形成する請求項１に記載の化合物。５．請求項１に記載の化合物またはその製薬学的に許容し得る塩および場合によりエストロゲンまたはプロゲスチンの有効量を製薬学的に許容し得る担体、希釈剤または賦形剤と組み合わせて含有する医薬組成物。６．処置を必要としている女性に請求項１に記載の化合物の有効量またはその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなる閉経後症候群の兆候を緩和する方法。７．該閉経後症候群の病状が骨粗鬆鬆症である請求項６に記載の方法。８．該閉経後症候群の病状が心臓血管疾患に関連するものである請求項６に記載の方法。９．該心臓血管疾患が高脂血症である請求項８に記載の方法。１０．処置を必要としている女性に請求項１に記載の化合物の有効量またはその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなる子宮類線維腫疾患を抑制する方法。１１．処置を必要としている女性に請求項１に記載の化合物の有効量またはその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなる子宮内膜症を抑制する方法。１２．処置を必要としているヒトに請求項１に記載の化合物の有効量またはその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなる大動脈平滑筋細胞増殖を抑制する方法。１３．処置を必要としているヒトに請求項１に記載の化合物の有効量またはその製薬学的に許容し得る塩を投与することからなる再狭搾を抑制する方法。１４．式IＸ式中、Ｒ_1aは保護されたヒドロキシまたはヒドロキシであり；Ｚ'は臭素、塩素、フッ素、水素、ヒドロキシまたは保護されたヒドロキシであり；およびＲ₄はヒドロキシ、保護されたヒドロキシまたは下式の基式中、Ｒ₂およびＲ₃は独立してＣ₁−Ｃ₆アルキルであるか、またはそれらが結合している窒素と共にピロリジノ、ヘキサメチレンイミノ、モルホリノおよびピペリジノからなる群から選択される複素環を形成する；で示される化合物およびその塩およびその溶媒和物。