JPH11504338A - チロシンおよび重合アレルゲンの組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 チロシンおよび重合アレルゲンを含有してなる医薬組成物は、（ａ）アレルゲンを重合化し、（ｂ）該アレルゲンの水溶液を強い水性酸中のチロシンの溶液と混合し、（ｃ）溶液の混合物を中和し、これにより、チロシンおよび重合アレルゲンを共沈させ、次いで、（ｄ）所望により、該生成物を生理学的に許容される担体と混合することにより調製される。

Description

【発明の詳細な説明】 チロシンおよび重合アレルゲンの組成物 本発明は、アレルギー患者の脱感作療法のための新規組成物に関する。 GB-A-1 492 973には、分散された修飾アレルゲンを有するチロシンの共沈物質 の製造方法が開示されている。該アレルゲンは、分子内架橋を生じるか、または 、非修飾アレルゲンに関連する生成物のアレルゲン性を低下させる、グルタルア ルデヒドなどの薬剤での治療によって修飾された。 EP-A-0 367 306およびNakadaら（Allergy，54［1985］437以下参照）には、架 橋剤により延長処理して分子内架橋を生じさせ、次いで、濾過または透析して非 重合生成物を除去することによる重合アレルゲンの製造方法が開示されている。 該重合アレルゲンは、低下したアレルゲン性を有すると開示されている。 本発明は、チロシンおよび重合アレルゲン性を含有してなる医薬組成物を提供 するものである。典型的には、該アレルゲンは、例えば共沈などにより、チロシ ンで被覆されているか、および／またはチロシンに吸着されている。 該アレルゲンは、花粉（例えば、ブタクサまたは樺の花粉）、食物、昆虫毒、 カビ、動物毛皮、またはハウスダストダニ（ディ・ファリナエ（Ｄ．farinae） またはディ・プテロナイスシナス（Ｄ．pteronyssinus））などのアレルギー原 因物質から得られてよい。特定の態様では、該アレルゲンは、ディ・プテロナイ スシナスから得られる。本明細書で用いる場合、「アレルゲン」としては、単一 供給源または１以上の供給源由来であってもよいアレルゲンの混合物が挙げられ る。 本発明のさらなる態様は、（ａ）アレルゲンを重合化し、（ｂ）該アレルゲン の水溶液を強い水性酸中のチロシンの溶液と混合し、（ｃ）溶液の混合物を中和 し、これにより、チロシンおよび重合アレルゲンを共沈させ、次いで、（ｄ）所 望により、該生成物を生理学的に許容される担体と混合することを特徴とする、 本発明の医薬組成物の製造方法を提供するものである。 適切な生理学的に許容される担体としては、フェノール−生理食塩水および無 菌水が挙げられる。 該アレルゲンは、pＨ３〜１０、典型的にはpＨ７±１で、０〜１００℃の温度 、典型的には４〜３７℃の温度で、１０時間まで、例えば、室温で約２時間、水 溶液中で、グルタルアルデヒドなどのジアルデヒドで処理することによって重合 化される。グルタルアルデヒドに対するアレルゲンの比率は、１：２５〜１：２ の範囲、例えば、約１：４（ｗ／ｗ）であるが、より長い反応時間と共に、より 高いアレルゲン比を用いてよい（例えば、約３：１の比および約７時間の反応時 間を用いる、EP-A-0 367 306を参照）。 次いで、低分子量生成物を、ゲル濾過または透析、例えば、接線流透析（tang ential flow dialysis）によって除去し、該生成物を凍結乾燥するかまたは次工 程でそのまま用いる。遮断された分子量は、典型的には、少なくとも１００キロ ダルトン、例えば、少なくとも２５０キロダルトン、より好ましくは、３００キ ロダルトンである。 次いで、重合化プロセスまたは固体の溶媒和により反応混合物として得られた pＨ７±１の重合アレルゲンの溶液を、強い水性酸中のチロシンの溶液と混合す る。この工程で用いた重合アレルゲンの溶液は、典型的には、０.１μg／ml〜１ ００μg／mlのアレルゲンタンパク質を含有する。該混合物中のアレルゲン：チ ロシンの比率は、典型的には、１：４×１０⁵〜１：４×１０²ｗ／ｗの範囲であ る。 得られたアレルゲンおよびチロシンの溶液の混合物を中和する。中和とは、４ .０〜７.５の範囲内の値にpＨを調節することを意味する。中和の間、かつて一 度も、または少なくとも延長された時間で一度も、溶液のpＨが７.５以上に相当 に上昇しないことは重要である。この条件は、所望により、該溶液を強く撹拌す ることによって、および必要量の塩基の使用のみによって、満たすことができる 。アレルゲンの該溶液に種々の緩衝化剤を注意深く添加して、混合および中和工 程の間にpＨ調節を助けることができる。 中和を行うのに特に有用な方法は、酸中のチロシンの溶液およびアレルゲンの 溶液中に送り込もうとする中和性塩基の分流についてである。添加された溶液の 流速は、pＨ状態によって、すなわち、反応混合物のpＨが予め決定されたレベル で実質的に一定のままであるように溶液の一方または両方の流れを調節する装置 によって調節される。本発明者らは、正確なpＨはアレルゲンの性質にしたがっ て変化するかもしれないが、通常、最適な結果が６.５〜７.５の範囲内でのpＨ 調節によって得られることを見いだした。 中和の結果は、チロシンの即時沈殿であり、この間および／またはこの後にア レルゲンの溶液が吸蔵されるか、および／または吸着される。沈殿後、該混合物 を即時洗浄するか、または、洗浄前に数時間から１または２日間放置させる。該 沈殿物は、できる限り微細な状態で得られるのが望ましく、このことは、該沈殿 が行われている間の強い撹拌と組み合わせた溶液の迅速な中和によって行われる 。 得られた沈殿物は、遠心分離または濾過によって該溶液から除去され、フェノ ール−生理食塩水または無菌水などの生理学的に許容される担体中に再懸濁させ る前に、例えばフェノール−生理食塩水などで洗浄されて、脱感作療法における 使用に適している注射用組成物を調製してよい。 以下の実施例は、本発明を説明する： 実施例 透析または分別によって一部精製した約２.５mg／mlのディ・プテロナイスシ ナス（Ｄ．pteronyssinus）抽出タンパク質の中性溶液を、等量の１％ｗ／ｖグ ルタルアルデヒドの添加によって重合化させ、該混合物を室温で約２時間撹拌し た。該反応を、等量の２％ｗ／ｖグリシンの添加によってクエンチし、該混合物 を室温でさらに１時間撹拌した。３００キロダルトンの分子量排除を有する膜を 横切るジアフィルトレーション（diafiltration）によって、低分子量物質を除 去した。次いで、該混合物を濾過滅菌し、凍結乾燥させた。 重合アレルゲンの溶液は、濾過滅菌溶液から直接、または、凍結乾燥固体の再 生によって調製した。この溶液は、リン緩衝液pＨ７±１中、１０μg／mlを含有 した。ＨＣl中の１容量倍のＬ−チロシン（Ｌ−チロシン２４gを３.４Ｍ ＨＣl で１００mlに溶解させて調製した）および１容量倍の３.２Ｍ ＮaＯＨを強く撹 拌しつつ同時添加してアレルゲン溶液の４容量倍にすることによって、アレルゲ ン溶液をチロシンと共沈させた。このようにして形成された懸濁液を遠心分離し 、緩衝生理食塩水で繰り返し洗浄して汚染物質を除去し、緩衝生理食塩水pＨ６ ±１中で初期容量に再懸濁させた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，Ｉ Ｓ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，Ｓ Ｄ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 テイラー，イエイン イギリス、ケイティ18・５エックスキュ ー、サリー、エプソム、ユー・トゥリー・ ボトム・ロード、グレート・バーグ、スミ スクライン・ビーチャム・ファーマシュー ティカルズ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．チロシンおよび重合アレルゲンを含有してなる医薬組成物。 ２．アレルゲンがチロシンで被覆されているか、および／またはチロシンに吸 着している請求項１記載の組成物。 ３．アレルゲンがディ・プテロナイスシナス（Ｄ．pteronyssinus）から得ら れる請求項１または２記載の組成物。 ４．（ａ）アレルゲンを重合化し、（ｂ）該アレルゲンの水溶液を強い水性酸 中のチロシンの溶液と混合し、（ｃ）溶液の混合物を中和し、これにより、チロ シンおよび重合アレルゲンを共沈させ、次いで、（ｄ）所望により、該生成物を 生理学的に許容される担体と混合することを特徴とする、医薬組成物の製造方法 。 ５．治療用の請求項１〜３のいずれか１項記載の組成物。 ６．アレルギー患者の脱感作療法用の請求項１〜３のいずれか１項記載の組成 物。 ７．アレルギー患者の脱感作療法薬の製造における請求項１〜３のいずれか１ 項記載の組成物の使用。