PL183484B1 - Kompozycja farmaceutyczna do leczenia lub odczulania alergików, oraz sposób jej wytwarzania - Google Patents

Description

Przedmiotem wynalazku są nowe kompozycje do stosowania w leczeniu lub terapii odczulającej u alergików, zawierające tyrozynę i spolimeryzowany alergen, oraz sposób wytwarzania takich kompozycji.

Brytyjski opis patentowy GB-A-1492973 opisuje sposób wytwarzania koprecypitatów tyrozyny zawierających zdyspergowany zmodyfikowany alergen. Alergen był zmodyfikowany przez działanie środkiem, takim jak aldehyd glutarowy, powodujący międzycząsteczkowe sieciowanie i zmniejszający alergenność produktu w porównaniu z niemodyfikowanym alergenem.

Europejski opis patentowy EP-A-0367306 i publikacja Nakłady i in. (Allergy, 54 [1985] 437 i dalsze) opisują sposoby wytwarzania spolimeryzowanych alergenów przez przedłużone traktowanie środkiem sieciującym w celu spowodowania międzycząsteczkowego sieciowania, następnie filtrację lub dializę w celu usunięcia niespolimeryzowanego produktu. Spolimeryzowane alergeny opisano jako środki o zmniejszonej alergenności.

Przedmiotem niniejszego wynalazku jest kompozycja farmaceutyczna do leczenia lub odczulania alergików zawierająca tyrozynę i spolimeryzowany alergen, charakteryzująca się tym że spolimeryzowany alergen ma masę cząsteczkową co najmniej 100 kDaltonów. Korzystnie alergen jest powlekany i/lub adsorbowany na tyrozynie, np. przez współstrącenie.

Alergen może pochodzić z dowolnej substancji alergennej, takiej jak pyłek (np. pyłek ambrozji lub brzozy), pokarm, jad owadów, pleśń, sierść zwierząt, lub roztocze z domowego kurzu (D. farinae lub D. pteronyssinus). W korzystnym wykonaniu wynalazku alergen pochodzi z D. pteronyssinus. W niniejszym opisie określenie „alergen” obejmuje mieszaninę alergenów pochodzących z pojedynczego źródła lub więcej niż jednego źródła.

Przedmiotem wynalazku jest także sposób wytwarzania wyżej określonej kompozycji farmaceutycznej, charakteryzujący się tym że obejmuje etapy (a) polimeryzowania alergenu przez obróbkę dialdehydem, (b) usuwania przez filtrację żelową lub dializę produktów o masie cząsteczkowej mniejszej niż 100 kDaltonów, (c) mieszania wodnego roztworu alergenu z roztworem tyrozyny w wolnym roztworze mocnego kwasu, (d) zobojętniania mieszaniny roztworów,

183 484 współstrącając tyrozynę i spolimeryzowany alergen, i (e) ewentualnie mieszanina produktu z fizjologicznie dopuszczalnym nośnikiem.

Przydatne fizjologicznie dopuszczalne nośniki obejmują fenol-solankę i sterylną wodę.

Alergen polimeryzuje się działaniem dialdehydu, takiego jak aldehyd glutarowy, w wodnym roztworze przy pH od 3 do 10, zazwyczaj 7±1 i w temperaturze pomiędzy 0 a 100°C, zazwyczaj pomiędzy 4 a 37°C, przez do 10 godzin, np. około dwu godzin w temperaturze pokojowej. Stosunek alergenu do aldehydu glutarowego mieści się zazwyczaj w zakresie 1:25 do 1:2, np. około 1:4 wagowo, chociaż można stosować wyższe ilości alergenu w połączeniu z dłuższym czasem reakcji (patrz np. EP-A-0367306, wykorzystujący stosunek około 3:1 i czas reakcji około 7 godzin.

Produkt o małej masie cząsteczkowej usuwa się następnie metodą filtracji na żelu lub dializy, np. dializy ze stycznym przepływem, produkt osusza przez wymrożenie lub używa bezpośrednio w następnym etapie. Wartość odcięcia masy cząsteczkowej wynosi co najmniej 100 kDa, np. co najmniej 250 kDa, korzystniej 300 kDa.

Roztwór spolimeryzowanego alergenu o pH 7±1, otrzymany jako mieszanina reakcyjna z procesu polimeryzacji lub przez rozpuszczenie ciała stałego, miesza się następnie z roztworem tyrozyny w wodnym roztworze mocnego kwasu. Mocnym kwasem jest zwykle kwas nieorganiczny, korzystnie kwas chlorowodorowy. Roztwór spolimeryzowanego alergenu użyty w tym etapie zazwyczaj zawiera pomiędzy 0,1 pg/ml i 100 pg/ml białka alergenu. Stosunek alergen:tyrozyna w mieszaninie wynosi zazwyczaj 1:4x10⁵ do 1:4x10² wagowo/wagowo.

Powstałą mieszaninę roztworów alergenu i tyrozyny zobojętnia się. Przez zobojętnienie rozumie się ustawienie odczynu pH na wartość w zakresie 4,0 do 7,5. Ważne jest, aby nigdy, lub co najmniej nie przez dłuższy czas, podczas zobojętniania pH roztworu nie wzrosło znacznie powyżej 7,5. Ten warunek spełnia się dzięki szybkiemu mieszaniu roztworu i przez użycie tylko żądanej ilości zasady, w razie potrzeby. Różne przydatne środki buforujące można dodawać do roztworów alergenu dla ułatwienia kontroli pH podczas etapów mieszania i zobojętniania.

Szczególnie przydatnym sposobem prowadzenia zobojętniania jest wprowadzanie oddzielnych strumieni roztworu tyrozyny w kwasie i zobojętniającej zasady do roztworu alergenu. Szybkości przepływu dodawanych roztworów są kontrolowane przez pH-stat, to jest przez urządzenie regulujące dopływ jednego lub obu roztworów, tak aby pH mieszaniny reakcyjnej pozostawało zasadniczo stałe na zadanym poziomie. Ustalono, że najlepsze wyniki zwykle otrzymuje się przez ustawianie pH w zakresie 6,5 do 7,5, chociaż dokładna wartość pH może się zmieniać w zależności od natury alergenu.

Wynikiem zobojętnienia jest natychmiastowe strącenie tyrozyny, na której lub w której jest okludowany i/lub adsorbowany roztwór alergenu. Po strąceniu mieszaninę przemywa się natychmiast lub odstawia na okres od kilku godzin do dnia lub dwu przed przemyciem. Korzystnie otrzymuje się możliwie drobny osad, co osiąga się przez szybkie zobojętnienie roztworu połączone z jednoczesnym energicznym mieszaniem.

Powstały osad można usunąć z roztworu przez odwirowanie lub odsączenie i przemycie, np. fenolem-solanką, następnie umieszcza się w zawiesinie w fizjologicznie dopuszczalnym nośniku, takim jak fenol-solanka, lub sterylnej wodzie, wytwarzając kompozycję do wstrzykiwania przydatną do stosowania w terapii odczulającej.

Następujący przykład ilustruje niniejszy wynalazek:

Przykład. Obojętny roztwór około 2,5 mg/ml ekstraktu białka D. pteronyssinus, częściowo oczyszczonego przez dializę lub frakcjonowanie, polimeryzowano przez dodanie równej objętości roztworu 1% (wagowo) aldehydu glutarowego i mieszaninę mieszano przez około 2 godziny w temperaturze pokojowej. Reakcję zatrzymano przez dodanie równej objętości roztworu 2% wagowo/objętościowo glicyny i mieszaninę mieszano przez dalszą godzinę w temperaturze pokojowej. Substancję o małej masie cząsteczkowej usunięto metodą diafiltracji przez membranę z wykluczaniem masy cząsteczkowej 300 kDa. Następnie mieszaninę przesączono sterylnie i osuszono przez wymrożenie.

183 484

Roztwór spolimeryzowanego alergenu wytworzono bezpośrednio ze sterylnego przesączonego roztworu lub przez roztworzenie osuszonego przez wymrożenie ciała stałego. Ten roztwór zawierał 10 pg/ml w buforze fosforanowym pH 7±1. Roztwór alergenu współstrącono z tyrozyną przez jednoczesne dodanie jednej objętości L-tyrozyny w HCl (wytworzonej przez rozpuszczenie 24 g L-tyrozyny do 100 ml 3,4M HCl) i jednej objętości 3,2M NaOH, do 4 objętości roztworu alergenu, z energicznym mieszaniem. Powstałą zawiesinę odwirowano, ponownie przemyto buforowaną solanką w celu usunięcia zanieczyszczeń i powtórnie zawieszono w roztworze do początkowej objętości stosując buforowaną solankę pH 6±1.

Departament Wydawnictw UP RP. Nakład 50 egz.

Cena 2,00 zł.

Claims (4)

1. Zastrzeżenia patentowe

   1. Kompozycja farmaceutyczna do leczenia lub odczulania alergików zawierająca tyrozynę i spolimeryzowany alergen, znamienna tym, ze spolimeryzowany alergen na masę cząsteczkową co najmniej 100 000.
2. 2. Kompozycja według zastrz. 1, znamienna tym, że zawiera alergen powlekany i/lub adsorbowany na tyrozynie.
3. 3. Kompozycja według zastrz. 1 albo 2, znamienna tym, że zawiera alergen pochodzący z D. pteronyssinus.
4. 4. Sposób wytwarzania kompozycji farmaceutycznej do leczenia lub odczulania alergików zawierającej tyrozynę i spolimeryzowany alergen, znamienny tym, że składa się z etapów (a) polimeryzowania alergenu przez obróbkę dialdehydem, (b) usuwanie przez filtrację żelową lub dializę produktów o masie cząsteczkowej mniejszej niż 100 000, (c) mieszania wodnego roztworu alergenu z roztworem tyrozyny w wodnym roztworze mocnego kwasu, (d) zobojętniania mieszaniny roztworów, współstrącając tyrozynę i spolimeryzowany alergen, i (e) ewentualnie mieszania produktu z fizjologicznie dopuszczalnym nośnikiem.