JPS58107191A - Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法 - Google Patents
Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法Info
- Publication number
- JPS58107191A JPS58107191A JP20457581A JP20457581A JPS58107191A JP S58107191 A JPS58107191 A JP S58107191A JP 20457581 A JP20457581 A JP 20457581A JP 20457581 A JP20457581 A JP 20457581A JP S58107191 A JPS58107191 A JP S58107191A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alanine
- cyclohexadiene
- cda
- medium
- pseudomonas
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラ
ニン（以下「ＯＤＡ」と記す。）の製造法に関する。
ニン（以下「ＯＤＡ」と記す。）の製造法に関する。
ＣＤＡはＬ−フェニールアラニンの代謝拮抗剤として知
られ、抗生物質等医薬品の原料として重要な物質である
。
られ、抗生物質等医薬品の原料として重要な物質である
。
従来、ＣＤＡの生産１こ関しては、ストレプトマイセス
属に属する放線菌による方法が知られているのみであっ
た（ Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＋ ２３°５
３７−５４１．１９７０年。Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ＋ ２３ ： ６ ］ ］８−６１９ １９７０年
。Ａｒｃｈ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ７５ ：３４６
−３５２．１９７１年）。
属に属する放線菌による方法が知られているのみであっ
た（ Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ ＋ ２３°５
３７−５４１．１９７０年。Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｔｉ
ｃｓ＋ ２３ ： ６ ］ ］８−６１９ １９７０年
。Ａｒｃｈ、 Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、 ７５ ：３４６
−３５２．１９７１年）。
これ１こ対し本発明者らは、シュードモナス属ンこ属す
る細菌がより高い効率でＯＤＡを培地中ンこ生成蓄積す
ることを見い出した。本発明は、この知見に基づいて完
成されるｅこ到ったものである。
る細菌がより高い効率でＯＤＡを培地中ンこ生成蓄積す
ることを見い出した。本発明は、この知見に基づいて完
成されるｅこ到ったものである。
本発明ｅこ用いる微生物としては、シュードモナス属ｔ
こ属しＣＤＡを生産する能力を有するものでシュードモ
ナス８Ｔ１．ＡＪ／１７弘ど の分類学的特徴を次に示
す。
こ属しＣＤＡを生産する能力を有するものでシュードモ
ナス８Ｔ１．ＡＪ／１７弘ど の分類学的特徴を次に示
す。
菌の形態：桿菌
サイズ゛０．６ Ｘ ２．０−３’、Ｏｐｍ運動性二局
鞭毛を有し、運動性あり ダラム染色°陰性 酸の生成：好気的ｔこ酸を生成するが嫌気的には生成し
ない カタラーゼ：陽性 オキングーゼ：陽性 硝酸還元性 陽性 合成培地での生育 容易に生育する １−３０の分類学的性質は」二記の如くであり、Ｂｅｒ
ｇｅｙ の細菌分類書ｅこよると、本菌株はシュード
モナス属に属する。
鞭毛を有し、運動性あり ダラム染色°陰性 酸の生成：好気的ｔこ酸を生成するが嫌気的には生成し
ない カタラーゼ：陽性 オキングーゼ：陽性 硝酸還元性 陽性 合成培地での生育 容易に生育する １−３０の分類学的性質は」二記の如くであり、Ｂｅｒ
ｇｅｙ の細菌分類書ｅこよると、本菌株はシュード
モナス属に属する。
この菌株よりの変異株、例えば、チロシン要求株、トリ
プトファン要求株、フェニルアラニンアナログ耐性株、
フェニルアラニンアナログ耐性株、チロン／アナログ耐
性株又はトリプトファンアナログ耐性株、およびこれら
の変異株の性質を合せ持つ変異株を用いれば、ＣＤＡの
生産量が増大する。
プトファン要求株、フェニルアラニンアナログ耐性株、
フェニルアラニンアナログ耐性株、チロン／アナログ耐
性株又はトリプトファンアナログ耐性株、およびこれら
の変異株の性質を合せ持つ変異株を用いれば、ＣＤＡの
生産量が増大する。
ＣＤＡを生産するために用いられる培地は、炭素源、窒
素源および無機塩類からなる通常の栄養培地であればよ
く、炭素源としては、グルコース、シュークロース、フ
ラクトース等の糖類をはじめビルビン酸、乳酸、フマル
酸、クエン酸、シギミ酸、キナ酸などの有機酸などが用
いられ、窒素源としては、アンモニウム塩、アンモニア
水、アンモニアガス、尿素、アミノ酸など通常の無機も
しガン塩などが一必要ｅこより培地ｔこ添加される。
素源および無機塩類からなる通常の栄養培地であればよ
く、炭素源としては、グルコース、シュークロース、フ
ラクトース等の糖類をはじめビルビン酸、乳酸、フマル
酸、クエン酸、シギミ酸、キナ酸などの有機酸などが用
いられ、窒素源としては、アンモニウム塩、アンモニア
水、アンモニアガス、尿素、アミノ酸など通常の無機も
しガン塩などが一必要ｅこより培地ｔこ添加される。
更ｔこ必要ｅこ応して、アミノ酸、ビタミン等の有機微
量栄養素及びこれらを含有する酵母エキス、害−ンステ
イープリカーが培地に添加される。又、使用する微生物
が栄養要求性を有するものであれば、必要とする物質を
添加することは言うまでもない。
量栄養素及びこれらを含有する酵母エキス、害−ンステ
イープリカーが培地に添加される。又、使用する微生物
が栄養要求性を有するものであれば、必要とする物質を
添加することは言うまでもない。
培養温度は２５ないし４０Ｃ１培養中のｐＨけ５．５な
いし９．０ｒこ保てばより望ましい結果が得られる、培
養液中のｐ！（の調節にはＣａＣＯ３、Ｎａ０Ｔ（。
いし９．０ｒこ保てばより望ましい結果が得られる、培
養液中のｐ！（の調節にはＣａＣＯ３、Ｎａ０Ｔ（。
Ｎ ａ２ Ｃ０２、尿素、アンモニア水、アンモニアガ
スなどが適宜用いられる。
スなどが適宜用いられる。
このようにして、１ないし７日間好気的に液体培養する
ことにより、培養液中ＦこＣＤＡが蓄積され、培養液中
のＣＤＡ濃度は０，５〜３ｔ／ｌｒこ達する。
ことにより、培養液中ＦこＣＤＡが蓄積され、培養液中
のＣＤＡ濃度は０，５〜３ｔ／ｌｒこ達する。
培養終了後は、ＯＤＡは例えば、以下の方法１こより採
取てきる。即ち、培養液を遠心分離又は濾過して菌体を
除去し、アニオン系會イオン交換樹脂（「アンバーライ
ト ＩＲＡ−４５ｊＯＨ−型）ンこ吸着せしめ、次ンこ
５０係アセトン水溶液で溶出する。溶出部を真空下で濃
縮し、濾紙にスポットし、水飽和−ｎ−ブタノールンこ
で展開する。次に濾紙を風乾し、ＣＤＡ相当部分を水抽
出し、真空下で乾固する。これｅこ、水飽和−ｎ−ブク
ノールを少量加え、溶解し、４００Ｘｒ、５分の遠心に
より和−ｎ−ブクノールより再結することりこより、白
色結晶を得ることができる。
取てきる。即ち、培養液を遠心分離又は濾過して菌体を
除去し、アニオン系會イオン交換樹脂（「アンバーライ
ト ＩＲＡ−４５ｊＯＨ−型）ンこ吸着せしめ、次ンこ
５０係アセトン水溶液で溶出する。溶出部を真空下で濃
縮し、濾紙にスポットし、水飽和−ｎ−ブタノールンこ
で展開する。次に濾紙を風乾し、ＣＤＡ相当部分を水抽
出し、真空下で乾固する。これｅこ、水飽和−ｎ−ブク
ノールを少量加え、溶解し、４００Ｘｒ、５分の遠心に
より和−ｎ−ブクノールより再結することりこより、白
色結晶を得ることができる。
この結晶の元素分析値は、Ｃ６４，３６，Ｈ７，７９゜
Ｎ８．３２であり、ＯＤＡの理論上の計算値であるＣ
６４．７０． Ｈ７，８４，Ｎ ８．３８ と
よく符合していた。
Ｎ８．３２であり、ＯＤＡの理論上の計算値であるＣ
６４．７０． Ｈ７，８４，Ｎ ８．３８ と
よく符合していた。
又、マス・スペクトルでのピークはｍ／ ｚ １６７
＋ ５− ９３．７４ｒこ認められる。この結晶の’Ｔ（−Ｎ Ｍ
Ｒスペクトルには３つのオレフィン・プロトン（δ５
．７７ （Ｓ ２ ）とδ５．６９ （Ｓ ］ ））と
６つのアリル・プロトン（δ２．６７）がある。又１３
Ｃ−Ｎ Ｍ Ｒスペクトルは９つの炭素（シグナル δ
２８．８゜δ３０．２．δ４１．３ 、 ａ ５５．２
、δ １２６．８゜δ １２７．０．δ １２７．３
．δ １３１．９．δ １７７．３）が存在している。
＋ ５− ９３．７４ｒこ認められる。この結晶の’Ｔ（−Ｎ Ｍ
Ｒスペクトルには３つのオレフィン・プロトン（δ５
．７７ （Ｓ ２ ）とδ５．６９ （Ｓ ］ ））と
６つのアリル・プロトン（δ２．６７）がある。又１３
Ｃ−Ｎ Ｍ Ｒスペクトルは９つの炭素（シグナル δ
２８．８゜δ３０．２．δ４１．３ 、 ａ ５５．２
、δ １２６．８゜δ １２７．０．δ １２７．３
．δ １３１．９．δ １７７．３）が存在している。
又、２３０ ｎｍ以上の波長での紫外部吸収は認められ
ない。本物質はノイロスポラ・クラツサに強い抗菌性を
示した。Ｌ−アミノ酸オキンダーゼ処理により、その抗
菌性が失なわれたが、Ｄ−アミノ酸オキンダーゼ処理で
は失活しなかったことから、本物質は光学活性がＬ体の
アミノ酸であることを示している。これらの結果から、
本物質なＬ −１、４−Ｃｙｃｌｏｈｅｘａｄｉｅｎｌ
−１−ａｌａｎｉｎｅ と同定した。
ない。本物質はノイロスポラ・クラツサに強い抗菌性を
示した。Ｌ−アミノ酸オキンダーゼ処理により、その抗
菌性が失なわれたが、Ｄ−アミノ酸オキンダーゼ処理で
は失活しなかったことから、本物質は光学活性がＬ体の
アミノ酸であることを示している。これらの結果から、
本物質なＬ −１、４−Ｃｙｃｌｏｈｅｘａｄｉｅｎｌ
−１−ａｌａｎｉｎｅ と同定した。
６−
実施例１
ンユークロース３．０９７ｄｅ、 ＮａＮ０．ＩＯ，２
９／ｄｅ。
９／ｄｅ。
Ｋ２ＨＰＯ４ｎ、１ ？／ｄｅ、 ＫＣＩ Ｏ，０５
？／ｄｅ１ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０５？ ／ｄｅ及
びＦｅ５０． ” ７Ｔ（２０１■／ｄＩ！を含有し、
ｐＨ７，０）こ調節した培地を５０ ＋１ ｄ容肩付フ
ラスコｔこ５０ｍ１１！宛入れ、１１５Ｃで１０分間滅
菌した。
？／ｄｅ１ＭｇＳＯ４−７Ｈ２００，０５？ ／ｄｅ及
びＦｅ５０． ” ７Ｔ（２０１■／ｄＩ！を含有し、
ｐＨ７，０）こ調節した培地を５０ ＋１ ｄ容肩付フ
ラスコｔこ５０ｍ１１！宛入れ、１１５Ｃで１０分間滅
菌した。
これに、グルツース２ｙ／ｄｅ１ペプトン１２／ｄｅ、
肉エキｙ、］ｙ／ｄｅ１酵母ｚ キｙ、 ｏ、ｓ ｔ
／ｄｅオよび食塩０．２５ ｆ ／ｄｅ （ｐＴ（７，
０）からなる種培養用の培地を用いてフラスコ中ｔこて
振盪培養（３４ｒ：、 １８時間）して得たシュード
モナスｓｐ の種培養液を５．Ｏｍｌｍｌ様し、３４
Ｃで４８時間フラスコ振盪培養を行った。
肉エキｙ、］ｙ／ｄｅ１酵母ｚ キｙ、 ｏ、ｓ ｔ
／ｄｅオよび食塩０．２５ ｆ ／ｄｅ （ｐＴ（７，
０）からなる種培養用の培地を用いてフラスコ中ｔこて
振盪培養（３４ｒ：、 １８時間）して得たシュード
モナスｓｐ の種培養液を５．Ｏｍｌｍｌ様し、３４
Ｃで４８時間フラスコ振盪培養を行った。
培養終了後、培養液１ｔをＩ Ｏ１＋１００ Ｘ ｒ、
１０分遠心分離し、菌体を除去することにより清澄な培
養液を得た。この培養液をｐＨ４，５にて「アンバーラ
イト ＩＲＡ−４５Ｊ（ＯＨ−型）処理し、活性区分を
吸着せしめ、次Ｖこ５０係アセトン水溶液で溶出した。
１０分遠心分離し、菌体を除去することにより清澄な培
養液を得た。この培養液をｐＨ４，５にて「アンバーラ
イト ＩＲＡ−４５Ｊ（ＯＨ−型）処理し、活性区分を
吸着せしめ、次Ｖこ５０係アセトン水溶液で溶出した。
溶出液２００ｗ＋／−をエバポレーターにごて／６縮し
、濃縮液５ ｍｌを得た。この濃縮液を東洋濾紙扁５２
７（４０Ｘ４０α）ｅこ線状ｅこスポットし、水飽和ブ
タノールにこて上方展開を行なった。展開終了後、風乾
し、ノイロスポラ・クラツサを指示菌とするバイオ・オ
ートグラムンこより抗菌性を有する活性区分（ＲｆＯ，
５０〜０．６３ ）ヲ切り取り、水ｔこて溶出を行なっ
た。この溶出液！＋Ｏｍｌをエバポレーターで２ｗｌ’
ｔこ濃縮した。このｅ 縮液ｔこ２罰の水飽和−ｎ−ブ
タノールを加工て溶解し、４００×２．５分間の遠心ン
こより不溶物を除いた。この」二清液を、２０ｉＣ，５
日間静置することｅこより粗結晶１３０ｍ７を得た。次
ｅこ水飽和−ｎ−ブタノールから再結を行い、ＣＤＡの
白色結晶を１００１１１１７得た。
、濃縮液５ ｍｌを得た。この濃縮液を東洋濾紙扁５２
７（４０Ｘ４０α）ｅこ線状ｅこスポットし、水飽和ブ
タノールにこて上方展開を行なった。展開終了後、風乾
し、ノイロスポラ・クラツサを指示菌とするバイオ・オ
ートグラムンこより抗菌性を有する活性区分（ＲｆＯ，
５０〜０．６３ ）ヲ切り取り、水ｔこて溶出を行なっ
た。この溶出液！＋Ｏｍｌをエバポレーターで２ｗｌ’
ｔこ濃縮した。このｅ 縮液ｔこ２罰の水飽和−ｎ−ブ
タノールを加工て溶解し、４００×２．５分間の遠心ン
こより不溶物を除いた。この」二清液を、２０ｉＣ，５
日間静置することｅこより粗結晶１３０ｍ７を得た。次
ｅこ水飽和−ｎ−ブタノールから再結を行い、ＣＤＡの
白色結晶を１００１１１１７得た。
特許出願人 味の素株式会社
Claims (1)
- シュードモナス属（こ属し、Ｌ−１，４−シクロヘキサ
ジエン−１−アラニンを蓄積スる能力を有する微生物を
培養し、培地中ンこ蓄積したし−１，４−シクロヘキサ
ジエン−１−アラニンな採取することを特徴とするＬ−
１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20457581A JPS58107191A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP20457581A JPS58107191A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58107191A true JPS58107191A (ja) | 1983-06-25 |
Family
ID=16492734
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP20457581A Pending JPS58107191A (ja) | 1981-12-18 | 1981-12-18 | Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58107191A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104606178A (zh) * | 2015-02-09 | 2015-05-13 | 李健 | 2-戊酰基-1,5-环己二烯-1-羧酸在制备治疗黄褐斑的药物中的应用 |
-
1981
- 1981-12-18 JP JP20457581A patent/JPS58107191A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104606178A (zh) * | 2015-02-09 | 2015-05-13 | 李健 | 2-戊酰基-1,5-环己二烯-1-羧酸在制备治疗黄褐斑的药物中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101285046B (zh) | 一种诱变菌株白色链霉菌TUST2及利用该诱变菌株生产ε-聚赖氨酸及其盐的方法 | |
| JPH0693839B2 (ja) | Ｌ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）酪酸の製造方法 | |
| US3458400A (en) | Process for producing l-alanine | |
| JP3525190B2 (ja) | ε−ポリ−Ｌ−リジンを著量に生産する菌株及びそれを用いたε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 | |
| JPS58107191A (ja) | Ｌ−１，４−シクロヘキサジエン−１−アラニンの製造法 | |
| JPH01187090A (ja) | ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 | |
| JPS5838153B2 (ja) | ハツコウホウニヨルアミノサンノセイゾウホウ | |
| JPH022589B2 (ja) | ||
| JP3006907B2 (ja) | 発酵法によるｌ−アラニンの製造法 | |
| JPS5920359B2 (ja) | ポリリジンの製造法 | |
| RU2078138C1 (ru) | Штамм бактерий arthrobacter globiformis - продуцент копропорфирина iii и способ получения копропорфирина iii | |
| JP2638541B2 (ja) | Ｌ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−酪酸の製法 | |
| JPS5928493A (ja) | アスパルチルフエニルアラニンアルキルエステルの製造法 | |
| EP0643139A2 (en) | Process for preparing indigo | |
| JPS589676B2 (ja) | ノジリマイシン ｂ ノ セイゾウホウ | |
| KR830000618B1 (ko) | 신 항생물질 sf-2050b물질의 제조법 | |
| JPS6057833B2 (ja) | Ｌ−トリプトフアンの製造方法 | |
| JPS6269993A (ja) | 微生物処理による光学活性なα−モノクロルヒドリンの製法 | |
| JPH06245782A (ja) | トランス−４−ハイドロキシ−ｌ−プロリンの製造法 | |
| JPH07327690A (ja) | インジゴの製造法 | |
| JPS6125495A (ja) | ノシヘプタイドの製造法 | |
| JPS623792A (ja) | Ｌ−アミノ酸の製造方法 | |
| JPS60180582A (ja) | 新規微生物 | |
| JPH05317076A (ja) | 発酵法によるアデノシンの製造法 | |
| JPS5898095A (ja) | デマノシノシル−マイシナミシン４の製造法 |