JPH01187090A - ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 - Google Patents
ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌Info
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- JPH01187090A JPH01187090A JP745788A JP745788A JPH01187090A JP H01187090 A JPH01187090 A JP H01187090A JP 745788 A JP745788 A JP 745788A JP 745788 A JP745788 A JP 745788A JP H01187090 A JPH01187090 A JP H01187090A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、ε−ポリリシンの新規な製造方法およびε−
ポリリシン生産菌に関するものである。
ポリリシン生産菌に関するものである。
（従来の技術とその問題点）
ε−ポリリシンは以下の構造式で表されるように、Ｌ−
リシンのポリマーでＬ−リシンのε−位のアミノ基が隣
合うＬ−リシンのカルボキシル基とペプチド結合によっ
て直鎖上に結合した高分子化合物である。
リシンのポリマーでＬ−リシンのε−位のアミノ基が隣
合うＬ−リシンのカルボキシル基とペプチド結合によっ
て直鎖上に結合した高分子化合物である。
当該物質は必須アミノ酸であるＬ−リシンのポリマーで
あるので安全性が高く、かつカチオン含量が高いので特
異な物性を有する。従ってそれらの性質を利用して、ト
イレタリー用品、化粧品、飼料添加物、農薬、医薬、食
品添加物、電子材料等の用途が開発されつつある。
あるので安全性が高く、かつカチオン含量が高いので特
異な物性を有する。従ってそれらの性質を利用して、ト
イレタリー用品、化粧品、飼料添加物、農薬、医薬、食
品添加物、電子材料等の用途が開発されつつある。
この富−ポリリシンはストレプトマイセス・アルプラス
・サブスピーシーズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）１１ｈ ３４６を培養する
ことによって得られることが既に知られている（特開昭
５３−７２８９６号）。
・サブスピーシーズ・リジノポリメラス（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ａｌｂｕｌｕｓ ５ｕｂｓｐ、 ｌｙｓ
ｉｎｏｐｏｌｙｍｅｒｕｓ）１１ｈ ３４６を培養する
ことによって得られることが既に知られている（特開昭
５３−７２８９６号）。
このストレプトマイセス・アルプラス・サブスピーシー
ズ・リジノボリメラスはＤ−グルコース、Ｄ−ガラクト
ース、Ｄ−マンニトールについては資化能力を持つが、
シュークロースについては資化能力を持たない、このた
め、゛この菌株を培養してε−ポリリシンの生産を行う
時Ｗ、培地の炭素源としてＤ−グルコースあるいはグリ
セロールを用いてきた。しかしＤグルコース、グリセロ
ールは価格が高いため得られたε−ポリリシンが高価格
になる。このため安価な炭素源を利用するε−ポリリシ
ンの生産法が求められていた。
ズ・リジノボリメラスはＤ−グルコース、Ｄ−ガラクト
ース、Ｄ−マンニトールについては資化能力を持つが、
シュークロースについては資化能力を持たない、このた
め、゛この菌株を培養してε−ポリリシンの生産を行う
時Ｗ、培地の炭素源としてＤ−グルコースあるいはグリ
セロールを用いてきた。しかしＤグルコース、グリセロ
ールは価格が高いため得られたε−ポリリシンが高価格
になる。このため安価な炭素源を利用するε−ポリリシ
ンの生産法が求められていた。
〔問題点を解決するための手段］
本発明者らは、安価なｅ−ポリリシンを得るため、炭素
源としてシュークロース、特に廃糖蜜を責化し、ε−ポ
リリシンを産出する菌株を探索した結果、本発明に到達
した。すなわち本発明は、ストレプトマイセス・ノール
セイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｉｙｃｅｓｎｏｕｒｓｅｉ）に
属するε−ポリリシン生産菌、およびこの菌を培地に培
養し、得られる培養物からε−ポリリシンを分離採取す
ることを特徴とするε−ポリリシンの製造方法である。
源としてシュークロース、特に廃糖蜜を責化し、ε−ポ
リリシンを産出する菌株を探索した結果、本発明に到達
した。すなわち本発明は、ストレプトマイセス・ノール
セイ（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｉｙｃｅｓｎｏｕｒｓｅｉ）に
属するε−ポリリシン生産菌、およびこの菌を培地に培
養し、得られる培養物からε−ポリリシンを分離採取す
ることを特徴とするε−ポリリシンの製造方法である。
本発明のストレプトマイセス・ノールセイ株は、工業技
術院微生物工業技術研究所に申請書受託番号第９７９７
号（ＦＩＲＭ Ｐ−９７９７）として寄託されている。
術院微生物工業技術研究所に申請書受託番号第９７９７
号（ＦＩＲＭ Ｐ−９７９７）として寄託されている。
本発明方法において、この菌の培養に使用する培地は、
生産コスートを引き下げ−るため、炭素源としてシュー
クロースおよび／または廃糖蜜を利用することが好まし
い。
生産コスートを引き下げ−るため、炭素源としてシュー
クロースおよび／または廃糖蜜を利用することが好まし
い。
ストレプトマイセス・ノールセイ株がε−ポリリシンを
産生ずることは今まで知られていない。
産生ずることは今まで知られていない。
この菌株の菌学的性質を示すと次の通りである。
（１） 形態学的性質
シュークロース・硝酸塩寒天培地上で３０℃、１０日間
生育した時の気菌糸および基体菌糸を顕微鏡で観察した
結果を次に示す。
生育した時の気菌糸および基体菌糸を顕微鏡で観察した
結果を次に示す。
■ 胞子形成菌糸の分枝法および形態：単純分枝、閉鎖
らせん状（ｃｌｏｓｅｄ ５ｐｉｒａｌ）■ 胞子の数
： 数十個 ■ 胞子の表面構造および大きさ： 胞子は円ないし楕円形で大きさは約１．２〜１．５μで
あり、その表面構造はスパイ二一（Ｓｐｉｎｙ）である
。
らせん状（ｃｌｏｓｅｄ ５ｐｉｒａｌ）■ 胞子の数
： 数十個 ■ 胞子の表面構造および大きさ： 胞子は円ないし楕円形で大きさは約１．２〜１．５μで
あり、その表面構造はスパイ二一（Ｓｐｉｎｙ）である
。
■ 鞭毛胞子、菌核および胞子のうの有無存在が認めら
れない。
れない。
■ 胞子槽の着生位置： 気菌糸上
（２） 各種培地上における生育状態下記の各種培地
上における性状はそれぞれ３０℃で１０〜１４日間培養
後の観察結果である。
上における性状はそれぞれ３０℃で１０〜１４日間培養
後の観察結果である。
（３） 生理的性質
本国株の生理的性質は次の通りである。
■ 生育温度範囲
約１５〜４０℃。生育最適温度：３０’Ｃ付近。
■ ゼラチンの液化、でん粉の加水分解および脱脂牛乳
のペプトン化： すべで陽性 ■ 脱脂牛乳の凝固： 陰性 ■ メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成する。
のペプトン化： すべで陽性 ■ 脱脂牛乳の凝固： 陰性 ■ メラニン様色素の生成 チロシン寒天培地上では褐色の色素を生成する。
（４） 各種炭素源の資化性（ブリドハム・ゴツトリ
ーブ寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ〜グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シュークロース ＋ ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ サリシン − 註）＋：二資する、 −８資化しない。
ーブ寒天培地上） Ｌ−アラビノース − Ｄ−キシロース − Ｄ〜グルコース ＋ Ｄ−フラクトース ＋ Ｌ−ラムノース − Ｄ−ガラクトース ＋ シュークロース ＋ ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ サリシン − 註）＋：二資する、 −８資化しない。
以上の菌学的性質から本国はストレプトマイセス・ノー
ルセイに属すると考えられる。
ルセイに属すると考えられる。
本発明のε−ポリリシンの製造方法における培養方法は
原則的には一般微生物の培養方法に順するが、通常は液
体培地による好気的培養方法が有利である。
原則的には一般微生物の培養方法に順するが、通常は液
体培地による好気的培養方法が有利である。
培養に用いられる培地としては合成培地、半合成培地あ
るいは天然培地が用いられ、培地の炭素源としてはグル
コース、フラクトース、グリセロール、シュークロース
、糖蜜、液化澱粉等が用いられる。経済性の面からは廃
糖蜜を用いるのが有利である。窒素源としては酵母エキ
ス、肉エキス、カゼイン加水分解物、ペプトン、硫酸ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化アンモニウム等が
用いられる。又、燐酸水素二ナトリウム、燐酸二水素カ
リウム、炭酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウ
ム、硫酸ｗ４二硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化マグネシ
ウム等の無機塩も必要に応して添加される。消泡剤とし
て大豆油、高級アルコール類、シリコン化合物等も適宜
添加する。
るいは天然培地が用いられ、培地の炭素源としてはグル
コース、フラクトース、グリセロール、シュークロース
、糖蜜、液化澱粉等が用いられる。経済性の面からは廃
糖蜜を用いるのが有利である。窒素源としては酵母エキ
ス、肉エキス、カゼイン加水分解物、ペプトン、硫酸ア
ンモニウム、燐酸アンモニウム、塩化アンモニウム等が
用いられる。又、燐酸水素二ナトリウム、燐酸二水素カ
リウム、炭酸カルシウム、硫酸第一鉄、硫酸マグネシウ
ム、硫酸ｗ４二硫酸亜鉛、塩化マンガン、塩化マグネシ
ウム等の無機塩も必要に応して添加される。消泡剤とし
て大豆油、高級アルコール類、シリコン化合物等も適宜
添加する。
培養温度は３０℃前後が適当である。培養時間は２４〜
１００時間位が適当である。培養中のｐＨは始めは調整
せず下がるにまかせ、ｐＨ３，５〜５．０間、好ましく
はｐＨ４，０に降下した後に水酸化ナトリウム水溶液あ
るいは水酸化アンモニウム水溶液により、そのｐＨに保
つ。
１００時間位が適当である。培養中のｐＨは始めは調整
せず下がるにまかせ、ｐＨ３，５〜５．０間、好ましく
はｐＨ４，０に降下した後に水酸化ナトリウム水溶液あ
るいは水酸化アンモニウム水溶液により、そのｐＨに保
つ。
このようにして培養液中に蓄積されたε−ポリリシンは
、遠心分離又は濾過により菌株を除去した後、濾液から
一般的な発酵生産物の製造に用いられる常用手段によっ
て分離、精製される。すなわち減圧濃縮、凍結乾燥、溶
媒抽出、イオン交換樹脂処理、活性炭処理、晶析等の手
段を単独あるいは任意の組合せ、又は反復して用いるこ
とにより精製ポリリシンを得ることができる。
、遠心分離又は濾過により菌株を除去した後、濾液から
一般的な発酵生産物の製造に用いられる常用手段によっ
て分離、精製される。すなわち減圧濃縮、凍結乾燥、溶
媒抽出、イオン交換樹脂処理、活性炭処理、晶析等の手
段を単独あるいは任意の組合せ、又は反復して用いるこ
とにより精製ポリリシンを得ることができる。
（発明の効果）
本発明の方法はストレプトマイセス・ノールセイを用い
てε−ポリリシンを生産することができる。また培地に
はＤ−グルコース、グリセロールに限ることなく、種々
の炭素源を用いることができ、特に安価な廃糖蜜培地で
ε−ポリリシンを生産できるので、生産コストを従来法
に比べて大幅に引き下げることができる。
てε−ポリリシンを生産することができる。また培地に
はＤ−グルコース、グリセロールに限ることなく、種々
の炭素源を用いることができ、特に安価な廃糖蜜培地で
ε−ポリリシンを生産できるので、生産コストを従来法
に比べて大幅に引き下げることができる。
（実施例）
以下、実施例に基づき本発明を具体的に説明する。
廃糖蜜２００ｇ （還元糖２５．１％、純糖度３０．２
％）、硫酸アンモニウム１０ｇ、酵母エキス５ｇ１硫酸
マグネシウム（７水化物） ０．５ｇ、燐酸−水素ナト
リウム（１２水化物）１．５８ｇ及び燐酸二水素カリウ
ム１．３６ｇを水に溶解して１０００−とする。Ｎａ１
ｌ溶液でｐＨを６．８に調節する。
％）、硫酸アンモニウム１０ｇ、酵母エキス５ｇ１硫酸
マグネシウム（７水化物） ０．５ｇ、燐酸−水素ナト
リウム（１２水化物）１．５８ｇ及び燐酸二水素カリウ
ム１．３６ｇを水に溶解して１０００−とする。Ｎａ１
ｌ溶液でｐＨを６．８に調節する。
この培地１００−を５００ｄの坂ロフラスコ７本にそれ
ぞれ注入し、１２０℃で２０分間滅菌する。これらにス
トレプトマイセス・ノールセイの斜面培養物を１白金耳
ずつ接種し、３０℃で２０分間、振盪培養する。
ぞれ注入し、１２０℃で２０分間滅菌する。これらにス
トレプトマイセス・ノールセイの斜面培養物を１白金耳
ずつ接種し、３０℃で２０分間、振盪培養する。
上記培地１．Ｅｌを容量３．Ｏｆ’のミニジャーファー
メンタ−（いわしや製）に注入し、１２０℃で２０分間
滅菌する。これに上記ストレプトマイセス・ノールセイ
の振盪培養液を接種する。温度３０℃、撹拌６００ｒｐ
ｍ、通気量３．０４１ ／ｌｌｌ１ｎ（１気圧）、ｐＨ
は始め下がるにまかせ、ｐＨ４，０になったとき、６Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液により、ｐ）１４．０に調節し
て４０時間培養する。
メンタ−（いわしや製）に注入し、１２０℃で２０分間
滅菌する。これに上記ストレプトマイセス・ノールセイ
の振盪培養液を接種する。温度３０℃、撹拌６００ｒｐ
ｍ、通気量３．０４１ ／ｌｌｌ１ｎ（１気圧）、ｐＨ
は始め下がるにまかせ、ｐＨ４，０になったとき、６Ｎ
水酸化ナトリウム水溶液により、ｐ）１４．０に調節し
て４０時間培養する。
培養終了後、培養物を濾過して、菌体を除去する。濾液
を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８，５に調整し、生ず
る沈澱を濾別する。この濾液量は洗浄液を含め１．８１
あり、この中のむ一ポリリシン量は１７．５ｇであった
。
を水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８，５に調整し、生ず
る沈澱を濾別する。この濾液量は洗浄液を含め１．８１
あり、この中のむ一ポリリシン量は１７．５ｇであった
。
この濾液を陽イオン交換樹脂アンバーライト！Ｒ−５０
（Ｈ＋型）を充填したカラムに通し、ポリリシンを吸着
させる。カラムを０．２Ｎ酢酸で洗浄後、０． Ｉ Ｎ
塩酸で溶出する。溶出液を水酸化ナトリウム水溶液で中
和し、ｐＨ６，８にする。粉末活性炭１０ｇを添加し、
室温で約１時間攪拌し、脱色を行う、活性炭を濾過して
除去する。濾液を３５℃で濃縮する。濃縮液に同量のメ
タノールを攪拌しつつ徐々に加え、引き続き３倍量のア
セトンを同じように攪拌しつつ徐々に加える。アセトン
添加終了後１時間攪拌を続ける。生じた沈澱物を吸引濾
別し、更に１回アセトン洗浄を行った後、減圧乾燥を行
うと白色粉末状のポリリシン塩酸塩５．５ｇが得られた
。このものの純度はメチノＣオレンジ法で測定して９９
．１％であった。
（Ｈ＋型）を充填したカラムに通し、ポリリシンを吸着
させる。カラムを０．２Ｎ酢酸で洗浄後、０． Ｉ Ｎ
塩酸で溶出する。溶出液を水酸化ナトリウム水溶液で中
和し、ｐＨ６，８にする。粉末活性炭１０ｇを添加し、
室温で約１時間攪拌し、脱色を行う、活性炭を濾過して
除去する。濾液を３５℃で濃縮する。濃縮液に同量のメ
タノールを攪拌しつつ徐々に加え、引き続き３倍量のア
セトンを同じように攪拌しつつ徐々に加える。アセトン
添加終了後１時間攪拌を続ける。生じた沈澱物を吸引濾
別し、更に１回アセトン洗浄を行った後、減圧乾燥を行
うと白色粉末状のポリリシン塩酸塩５．５ｇが得られた
。このものの純度はメチノＣオレンジ法で測定して９９
．１％であった。
Claims (3)
- （１）ストレプトマイセス・ノールセイ（Ｓｔｒｅｐｔ
ｏｍｙｃｅｓ ｎｏｕｒｓｅｉ）に属するε−ポリリシ
ン生産菌を培地に培養し、得られる培養物からε−ポリ
リシンを分離採取することを特徴とするε−ポリリシン
の製造方法。 - （２）前記培地の炭素源がシュークロースおよび廃糖蜜
から選ばれる特許請求の範囲第１項記載の方法。 - （３）ストレプトマイセス・ノールセイ（（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ｎｏｕｒｓｅｉ）微工研菌寄第９７９
７号）に属するε−ポリリシン生産菌。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP745788A JPH066061B2 (ja) | 1988-01-19 | 1988-01-19 | ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP745788A JPH066061B2 (ja) | 1988-01-19 | 1988-01-19 | ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01187090A true JPH01187090A (ja) | 1989-07-26 |
| JPH066061B2 JPH066061B2 (ja) | 1994-01-26 |
Family
ID=11666351
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP745788A Expired - Lifetime JPH066061B2 (ja) | 1988-01-19 | 1988-01-19 | ε−ポリリシンの製造方法およびε−ポリリシン生産菌 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH066061B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0557954A3 (en) * | 1992-02-26 | 1994-10-26 | Chisso Corp | A process for producing epsilon-poly-l-lysine |
| WO1998048033A1 (fr) * | 1995-10-24 | 1998-10-29 | Chisso Corporation | SOUCHE PRODUISANT UNE QUANTITE IMPORTANTE DE ε-POLY-L-LYSINE ET PROCEDE POUR PRODUIRE DE LA ε-POLY-L-LYSINE AU MOYEN DE CETTE SOUCHE |
| JP2002330797A (ja) * | 2001-05-08 | 2002-11-19 | Chisso Corp | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
| WO2008130034A1 (ja) | 2007-04-20 | 2008-10-30 | Chisso Corporation | ポリアミノ酸合成酵素とそれをコードする遺伝子 |
| CN104962592A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-10-07 | 苏州科技学院 | 一种以木薯淀粉原料生产ε-聚赖氨酸的连续流加补料分批发酵工艺 |
| WO2019039544A1 (ja) | 2017-08-23 | 2019-02-28 | 公立大学法人福井県立大学 | クリック官能基をもつε－ポリ－Ｌ－リジン誘導体、その製法、及びその用途 |
| CN110373439A (zh) * | 2019-08-01 | 2019-10-25 | 浙江新银象生物工程有限公司 | 一种稳定快速生产ε-聚赖氨酸的方法 |
-
1988
- 1988-01-19 JP JP745788A patent/JPH066061B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0557954A3 (en) * | 1992-02-26 | 1994-10-26 | Chisso Corp | A process for producing epsilon-poly-l-lysine |
| WO1998048033A1 (fr) * | 1995-10-24 | 1998-10-29 | Chisso Corporation | SOUCHE PRODUISANT UNE QUANTITE IMPORTANTE DE ε-POLY-L-LYSINE ET PROCEDE POUR PRODUIRE DE LA ε-POLY-L-LYSINE AU MOYEN DE CETTE SOUCHE |
| JP2002330797A (ja) * | 2001-05-08 | 2002-11-19 | Chisso Corp | ε−ポリ−Ｌ−リジンの製造法 |
| WO2008130034A1 (ja) | 2007-04-20 | 2008-10-30 | Chisso Corporation | ポリアミノ酸合成酵素とそれをコードする遺伝子 |
| CN104962592A (zh) * | 2015-07-29 | 2015-10-07 | 苏州科技学院 | 一种以木薯淀粉原料生产ε-聚赖氨酸的连续流加补料分批发酵工艺 |
| WO2019039544A1 (ja) | 2017-08-23 | 2019-02-28 | 公立大学法人福井県立大学 | クリック官能基をもつε－ポリ－Ｌ－リジン誘導体、その製法、及びその用途 |
| CN110373439A (zh) * | 2019-08-01 | 2019-10-25 | 浙江新银象生物工程有限公司 | 一种稳定快速生产ε-聚赖氨酸的方法 |
| CN110373439B (zh) * | 2019-08-01 | 2021-04-27 | 浙江新银象生物工程有限公司 | 一种稳定快速生产ε-聚赖氨酸的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH066061B2 (ja) | 1994-01-26 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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