JPS58123459A - 安定化された固相試薬及びその製造方法 - Google Patents
安定化された固相試薬及びその製造方法Info
- Publication number
- JPS58123459A JPS58123459A JP544782A JP544782A JPS58123459A JP S58123459 A JPS58123459 A JP S58123459A JP 544782 A JP544782 A JP 544782A JP 544782 A JP544782 A JP 544782A JP S58123459 A JPS58123459 A JP S58123459A
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- JP
- Japan
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- solid phase
- antibody
- phase reagent
- protective agent
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-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54393—Improving reaction conditions or stability, e.g. by coating or irradiation of surface, by reduction of non-specific binding, by promotion of specific binding
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- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は安定化された固相試薬及びその製造方法に関す
る。
る。
更に詳細には本発明は免疫化学的測定法に使用可能な固
相上に抗原又は抗体を物理的にあるいは化学的に結合さ
せた固相試薬を乾燥条件下で長期間、免疫化学的活性を
損なうことなく安定保存するための安定化に関する。
相上に抗原又は抗体を物理的にあるいは化学的に結合さ
せた固相試薬を乾燥条件下で長期間、免疫化学的活性を
損なうことなく安定保存するための安定化に関する。
近年、生体の微量活性物質の定量法として免疫化学的手
法を用いたラジオイムノアッセイ(以下RIAという)
及びエンザイムイムノアツセイ(以下EIAという)が
広く用いられるようになり、すでに多くの御]定キット
が実用に供されている。
法を用いたラジオイムノアッセイ(以下RIAという)
及びエンザイムイムノアツセイ(以下EIAという)が
広く用いられるようになり、すでに多くの御]定キット
が実用に供されている。
これら測定キットの多く社免疫化学的反応により生成す
る測定対象と試薬との結合−を反応系から分離する手段
として測定対象と特異的に結合する抗原又は抗体を固相
担体と結合させ不溶化した固体試薬を用いるものが多い
、これらの固相試薬免疫活性を十分に長期に保持させる
ことが重要な緋題である。
る測定対象と試薬との結合−を反応系から分離する手段
として測定対象と特異的に結合する抗原又は抗体を固相
担体と結合させ不溶化した固体試薬を用いるものが多い
、これらの固相試薬免疫活性を十分に長期に保持させる
ことが重要な緋題である。
輸送および保存には乾燥された固相試薬の提供が望まれ
るが、はとんどの固相試薬が乾燥により免疫活性が低下
し、また保存時にさらに活性が低下する。そのため多く
の固相試薬は過当な安定剤を含む緩衝液中に浸漬して保
存されるので取扱いが不便である。固相試薬の乾燥方法
として凍結乾燥法を用いることによシ著しい活性の低下
を避は得るものもあるが、高価な設備を使用する点とそ
の生産性に問題があり、さらに良い乾燥方法の提供が望
まれている。
るが、はとんどの固相試薬が乾燥により免疫活性が低下
し、また保存時にさらに活性が低下する。そのため多く
の固相試薬は過当な安定剤を含む緩衝液中に浸漬して保
存されるので取扱いが不便である。固相試薬の乾燥方法
として凍結乾燥法を用いることによシ著しい活性の低下
を避は得るものもあるが、高価な設備を使用する点とそ
の生産性に問題があり、さらに良い乾燥方法の提供が望
まれている。
本発明者は乾燥した状態でもその免疫活性の低゛ドが少
ない固相試薬を求めて鋭意研究の結果、本発明を完成す
るに至った。
ない固相試薬を求めて鋭意研究の結果、本発明を完成す
るに至った。
本発明は免疫化学的測定に用いる抗原又は抗体を固相担
体に結合させ不溶化した固相試薬をグリセリン、エチレ
ングリコール、フロピレンゲリコール、ハイトロオキシ
プロピルメチルセルローズ、ポリビニルピロリドン又は
メチルセルローズのいずれか1種又は2afQ上を保護
剤として含有する水溶液で処理したのち、乾燥してなる
ことを特徴とする安定化された固相試薬であり、そして
その製造方法である。以下さらに本発明を詳逓する。
体に結合させ不溶化した固相試薬をグリセリン、エチレ
ングリコール、フロピレンゲリコール、ハイトロオキシ
プロピルメチルセルローズ、ポリビニルピロリドン又は
メチルセルローズのいずれか1種又は2afQ上を保護
剤として含有する水溶液で処理したのち、乾燥してなる
ことを特徴とする安定化された固相試薬であり、そして
その製造方法である。以下さらに本発明を詳逓する。
本発明に係る同相担体とは免疫化学的#j定法に利用出
来るすべての固相担体を包含するが、好ましくは紙、ガ
ラス又はプラスチックを用いたディスク状、ビーズ状又
はチューブ状のものが良く、プラスチック製マイクロプ
レーHat最も好適である。固相担体と抗原又は抗体の
結合は物理的結合方法および化学的結合方法のいずれの
方法を用いて4よい。
来るすべての固相担体を包含するが、好ましくは紙、ガ
ラス又はプラスチックを用いたディスク状、ビーズ状又
はチューブ状のものが良く、プラスチック製マイクロプ
レーHat最も好適である。固相担体と抗原又は抗体の
結合は物理的結合方法および化学的結合方法のいずれの
方法を用いて4よい。
また本発明に係る保護剤としてはグリセリン、エチレン
グリコール、フロピレンゲリコール、ポリビニルピロリ
ドン、ハイトロオキシプロピルメチルセルローズ又はメ
チルセルローズの中がら任意に選択しその1種又は2穐
以上を適当な割合いで混合して用いることができる。こ
のなかでグリセリンは最も好適である。
グリコール、フロピレンゲリコール、ポリビニルピロリ
ドン、ハイトロオキシプロピルメチルセルローズ又はメ
チルセルローズの中がら任意に選択しその1種又は2穐
以上を適当な割合いで混合して用いることができる。こ
のなかでグリセリンは最も好適である。
水溶液中の保護剤の濃度はα1〜10%の範囲から適宜
選択することが出来る。また保護剤の溶解には緩衝液を
用いるのが好適であり、牛血清アルブミンc以下BAA
という)を含有する緩衝液は特に好適である。
選択することが出来る。また保護剤の溶解には緩衝液を
用いるのが好適であり、牛血清アルブミンc以下BAA
という)を含有する緩衝液は特に好適である。
抗原又は抗体を不鹸化した固相試薬の保護処理は固相試
薬を上記保護剤の水溶液と接触させることによシ行なう
が処理時間は1〜100時間のうちから適宜選択してよ
い。
薬を上記保護剤の水溶液と接触させることによシ行なう
が処理時間は1〜100時間のうちから適宜選択してよ
い。
珠謹処理後の固相試薬の乾燥は自然乾燥あるいは通気乾
燥のいずれの方法を用いてもよいが、乾燥1晶度は2〜
8℃程度の低温度が好ましい。
燥のいずれの方法を用いてもよいが、乾燥1晶度は2〜
8℃程度の低温度が好ましい。
本発明の同相試薬はこれに含まれる抗原又は抗体の免役
化学的活性が損われることなく乾燥状態で長期間、少な
くとも8ケ月以上保存可能であシ惨めて有用である。
化学的活性が損われることなく乾燥状態で長期間、少な
くとも8ケ月以上保存可能であシ惨めて有用である。
以下に本発明の実施例について記述するが、本発明はこ
れらの実施例にのみ限定されるものではない。
れらの実施例にのみ限定されるものではない。
太施例1
17tヒトフ工リチン抗体(IgG画分)fs液を0.
1Mリン酸緩衝液(pH7,0)(以下緩衝液1という
)に200μt/dの割合いに溶解させた液C以下抗体
液という)0.4atをポリプロピレンチューブ(7X
120mm)に注入し、低温下(2〜8°C)24時間
抗体の不溶化を行った。抗体液を吸引除去したのち、龜
衝液127で2回洗浄し、更に0.1チBSAを含有す
るQ、IMリン酸瞳衝液(PI(ス0)(以下緩衝液2
という)2dづつ注入し、低温下24時間放置した。こ
れとは別に緩衝液2に保護剤としてグリセリンを5チ添
加した処理液を調製し、固相試薬である抗体不溶化チュ
ーブに2dづつ注入し、低温下24時間放置した。グリ
セリン処理および未処理チューブの内容液を除去し低温
下で乾燥させたのち、室温および低温下で保存し、経日
的に抗体活性を測定した。対照は緩衝液2を注入したま
ま低温下保存した本のを用いた。
1Mリン酸緩衝液(pH7,0)(以下緩衝液1という
)に200μt/dの割合いに溶解させた液C以下抗体
液という)0.4atをポリプロピレンチューブ(7X
120mm)に注入し、低温下(2〜8°C)24時間
抗体の不溶化を行った。抗体液を吸引除去したのち、龜
衝液127で2回洗浄し、更に0.1チBSAを含有す
るQ、IMリン酸瞳衝液(PI(ス0)(以下緩衝液2
という)2dづつ注入し、低温下24時間放置した。こ
れとは別に緩衝液2に保護剤としてグリセリンを5チ添
加した処理液を調製し、固相試薬である抗体不溶化チュ
ーブに2dづつ注入し、低温下24時間放置した。グリ
セリン処理および未処理チューブの内容液を除去し低温
下で乾燥させたのち、室温および低温下で保存し、経日
的に抗体活性を測定した。対照は緩衝液2を注入したま
ま低温下保存した本のを用いた。
ポリプロピレンチューブに不溶化したフェリチン抗体の
活性測定は以下のごとく行った。
活性測定は以下のごとく行った。
すなわち抗体不溶化チューブにフェリチン測定用緩衝液
0.25mおよびβ−ガラクトクダーゼ標微フェリチン
抗体液(以下機織抗体液という)50μ!を加えたのち
、ヒト肝フェリチン標準品(500ng/d) 50μ
!を加えよく混和して57°Cで2時間インキュベート
する1反応液を吸引除去したのち、生理食塩水2Nで2
回洗浄する。
0.25mおよびβ−ガラクトクダーゼ標微フェリチン
抗体液(以下機織抗体液という)50μ!を加えたのち
、ヒト肝フェリチン標準品(500ng/d) 50μ
!を加えよく混和して57°Cで2時間インキュベート
する1反応液を吸引除去したのち、生理食塩水2Nで2
回洗浄する。
これに0−二トロンエニルーβ−D−ガラクトシドを酵
素反応基質として周込た酵素基質液0.5dを加え、5
7°Cで1時間インキュベートする。
素反応基質として周込た酵素基質液0.5dを加え、5
7°Cで1時間インキュベートする。
反応停止液2dをカロえてよく混和したのち420nr
nの吸光1を測定する。抗体活性は次式を用いて算出し
た。
nの吸光1を測定する。抗体活性は次式を用いて算出し
た。
結果を表1に示したが、同相上に不溶化した抗体をグリ
セリンで処理することにより、低温下で乾燥保存した場
合、抗体活性を損なうことなく、長期間保存出来ること
がわかる。また室温下保存した場合でも未処理チューブ
は急速な活性低下が認められるのに反し、グリセリン処
理チューブは活性の低下は比較的に少ない。
セリンで処理することにより、低温下で乾燥保存した場
合、抗体活性を損なうことなく、長期間保存出来ること
がわかる。また室温下保存した場合でも未処理チューブ
は急速な活性低下が認められるのに反し、グリセリン処
理チューブは活性の低下は比較的に少ない。
表 1
実施例2
実施例1で使用し、、d抗体液に直径15−5闘のポリ
スチレンボールを浸し、60℃で16〜24時間抗体の
不溶化を行った。抗体不溶化ポリスチレンボールを戸別
し、緩衝液1で充分洗浄したのち、緩衝液1にBSAを
1%を含有する液C以下緩衝!&3という)に浸して低
温下保存した。また緩衝液5にグリセリンを1%含有す
る処理液を調製し、抗体不溶化ポリスチレンボールを1
時間浸したのち、戸別して低温下乾燥した。同様にして
グリセリン未処理の抗体不溶化ポリスチレンボールを低
温下で乾燥したのち、室温および低温下保存後の抗体活
性を経日的に測定した。抗体不溶化ポリスチレンボール
の抗体活性線実施例1に準じて行った。すなわち試験管
にフェリチン測定用緩衝液0.25−および標識抗体液
50μ!を加えたのち、抗体不溶化ポリスチレンボール
1個を加える。更にヒト肝フェリチン標準品(50Q
ng/Ilj ) 50μlを加え、以下実施例1の抗
体活性測定法に準じて測定した。
スチレンボールを浸し、60℃で16〜24時間抗体の
不溶化を行った。抗体不溶化ポリスチレンボールを戸別
し、緩衝液1で充分洗浄したのち、緩衝液1にBSAを
1%を含有する液C以下緩衝!&3という)に浸して低
温下保存した。また緩衝液5にグリセリンを1%含有す
る処理液を調製し、抗体不溶化ポリスチレンボールを1
時間浸したのち、戸別して低温下乾燥した。同様にして
グリセリン未処理の抗体不溶化ポリスチレンボールを低
温下で乾燥したのち、室温および低温下保存後の抗体活
性を経日的に測定した。抗体不溶化ポリスチレンボール
の抗体活性線実施例1に準じて行った。すなわち試験管
にフェリチン測定用緩衝液0.25−および標識抗体液
50μ!を加えたのち、抗体不溶化ポリスチレンボール
1個を加える。更にヒト肝フェリチン標準品(50Q
ng/Ilj ) 50μlを加え、以下実施例1の抗
体活性測定法に準じて測定した。
結果を表2に示したが、抗体不溶化ポリスチレンボール
をグリセリンで処理することにより、抗体不溶化チュー
ブと同様に、低温下乾燥保存で長J9j間抗体活性の低
下は認められない。
をグリセリンで処理することにより、抗体不溶化チュー
ブと同様に、低温下乾燥保存で長J9j間抗体活性の低
下は認められない。
表 2
実施例5
実施例1と同一操作を行って、ポリスチレンチュー−j
(7X12D闘)K抗ヒトフェリチン抗体を不溶化した
。抗体不溶化チューブを緩衝液2にグリセリンを5%と
ポリビニルピロリドン(以下PvPという)を1%含有
する処理液およびポリビニルピロリドンを1%含有する
処理液でそれぞれ低温下6時間処理して乾燥したのち、
実施例1に準じて抗体活性を測定した。
(7X12D闘)K抗ヒトフェリチン抗体を不溶化した
。抗体不溶化チューブを緩衝液2にグリセリンを5%と
ポリビニルピロリドン(以下PvPという)を1%含有
する処理液およびポリビニルピロリドンを1%含有する
処理液でそれぞれ低温下6時間処理して乾燥したのち、
実施例1に準じて抗体活性を測定した。
結果を表6に示したが、ポリビニルピロリドン単独処理
でも未処理チューブに比べ抗体活性の保−作用が紹めら
れ、グリセリンとポリビニルピロIJ )ンを併用した
場合には著明な保繰効呆を示した。
でも未処理チューブに比べ抗体活性の保−作用が紹めら
れ、グリセリンとポリビニルピロIJ )ンを併用した
場合には著明な保繰効呆を示した。
表 6
実施例4
実施例2と同一操作を行って抗ヒトフェリチン抗体不溶
化ポリスチレンボールを調製した。各種処理剤による抗
体保護効果讐−べるため、エチレングリコール(EG)
、プロピレンクリコール(PG)、ポリエチレングリコ
ール400 (PEG400)、モノアセチン(MA)
、ハイドロオキシプロピルセルローズ(RPC−L)、
ポリビニルピロリドン(PVP )、ノ・イドロオキシ
プロビルメチルセルローズ(HPMC)おヨヒメf ル
セA/ C1−ズ(MC)を緩衝液2にそれぞれ5%の
割合で溶解した液を調製し、上記抗体不溶化ポリスチレ
ンボールをそれぞれの液に低温下6時間浸したのちp別
し、低温下乾燥した。乾燥ポリスチレンボールを室温下
保存し、実施例2に準じて、経日的に抗体活性を測定し
た。
化ポリスチレンボールを調製した。各種処理剤による抗
体保護効果讐−べるため、エチレングリコール(EG)
、プロピレンクリコール(PG)、ポリエチレングリコ
ール400 (PEG400)、モノアセチン(MA)
、ハイドロオキシプロピルセルローズ(RPC−L)、
ポリビニルピロリドン(PVP )、ノ・イドロオキシ
プロビルメチルセルローズ(HPMC)おヨヒメf ル
セA/ C1−ズ(MC)を緩衝液2にそれぞれ5%の
割合で溶解した液を調製し、上記抗体不溶化ポリスチレ
ンボールをそれぞれの液に低温下6時間浸したのちp別
し、低温下乾燥した。乾燥ポリスチレンボールを室温下
保存し、実施例2に準じて、経日的に抗体活性を測定し
た。
なお対照は未処理抗体不溶化ポリスチレンボールを緩衝
液2に浸し低温で保存したものを用いた。
液2に浸し低温で保存したものを用いた。
表4に結果を示したが、グリセリン以外に、エチレング
リコール、フロピレンクリコール、ポリビニルピロリド
ン、ハイドロオキシプロピルメチルセルローズおよびメ
チルセルローズに抗体活性保線効果が認められえ。
リコール、フロピレンクリコール、ポリビニルピロリド
ン、ハイドロオキシプロピルメチルセルローズおよびメ
チルセルローズに抗体活性保線効果が認められえ。
表 4
実施例5
抗ヒトIgE抗体(IgG画分)醪液をW&備液液16
00μg/a+7の割合に溶解させた液[J、 4 m
をポリプロピレンチューブに5人し、低温下2時間不溶
化を行った。以後実施例1に準じて操作を行い、IgE
抗体不溶化チューブの調製を行った。t7L体不溶化チ
ューブを更に6%グリセリン、5sグリセリン+1%プ
ロピレングリコールおよび6チグリセリン+1チメチル
セルローズで1時間処理したのち、低温下乾燥したのち
、室温に放置し、駐日的に抗体活性を測定した。なお対
照は未処理チューブを緩衝液2に浸して保存したものを
用いた。
00μg/a+7の割合に溶解させた液[J、 4 m
をポリプロピレンチューブに5人し、低温下2時間不溶
化を行った。以後実施例1に準じて操作を行い、IgE
抗体不溶化チューブの調製を行った。t7L体不溶化チ
ューブを更に6%グリセリン、5sグリセリン+1%プ
ロピレングリコールおよび6チグリセリン+1チメチル
セルローズで1時間処理したのち、低温下乾燥したのち
、室温に放置し、駐日的に抗体活性を測定した。なお対
照は未処理チューブを緩衝液2に浸して保存したものを
用いた。
IgE抗体活性の一]定は以下のごとく行った。即ち、
IgE611定用緩衝液0.5−を抗体不溶化チューブ
にと夛、標準IgE溶液(1280U/au)20μl
を加え、37°で1時間インキエベートする。
IgE611定用緩衝液0.5−を抗体不溶化チューブ
にと夛、標準IgE溶液(1280U/au)20μl
を加え、37°で1時間インキエベートする。
反応液を吸引除去したのち、8.01MIJン酸緩衝液
(pH7,0)2117で2回洗浄する。洗浄液を完全
に吸引除去して、次いでβ−ガラクトシターゼ標識Ig
E抗体液α5tを加え、67°で2時間インキユヘート
する。未反応のβ−ガラクトシクーゼ11rl! I
gE抗体液を吸引除去したのち、α01 M IJン酸
緩衝液(p117.0)2Mで2回洗浄する。洗浄液を
吸引除去したのち、酵素基質液0.51を加え、67°
で1時間インキュに一トする。反応停止液2vt−加え
よく混和して、420 nmのg&元度を測定する。抗
体粘性は次式によシ算出した。
(pH7,0)2117で2回洗浄する。洗浄液を完全
に吸引除去して、次いでβ−ガラクトシターゼ標識Ig
E抗体液α5tを加え、67°で2時間インキユヘート
する。未反応のβ−ガラクトシクーゼ11rl! I
gE抗体液を吸引除去したのち、α01 M IJン酸
緩衝液(p117.0)2Mで2回洗浄する。洗浄液を
吸引除去したのち、酵素基質液0.51を加え、67°
で1時間インキュに一トする。反応停止液2vt−加え
よく混和して、420 nmのg&元度を測定する。抗
体粘性は次式によシ算出した。
結果を表5に示したが、未処理チューブに比べ、著明な
抗体粘性保−効果が紹められ、グリセリンにプロピレン
グリコールあるいはメチルセルローズを混合した場合、
抗体の保譲効釆が増加する傾向がみらtする。
抗体粘性保−効果が紹められ、グリセリンにプロピレン
グリコールあるいはメチルセルローズを混合した場合、
抗体の保譲効釆が増加する傾向がみらtする。
表 5
代理人 弁理士 戸 1)製、男
Claims (2)
- (1)免疫化学的測定に用いる抗原又は抗体を同相担体
に結合させ不溶化した固相試薬を、グリセリン、エチレ
ングリコール、フロピレンゲリコール、ハイドロオキシ
プロピルメチルセルローズ、ポリビニルピロリドン又は
メチルセルローズのいずれか1種又ti2Ii以上を保
護剤として含有する水溶液で処理したのち、乾燥してな
ることを特徴とする安定化された同相試薬。 - (2)免疫化学的測定に用いる抗原又は抗体を固相担体
に結合させ不溶化した固相試薬を、グリセリン、エチレ
ングリコール、フロピレンゲリコール、ハイトロオキシ
プロピルメチルセルローズ、ポリビニルピロリドン又は
メチルセルローズのいずれか1種又は2種以とを保護剤
として含有する木酢液で処理したのち、乾燥することを
特徴とす
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP544782A JPS58123459A (ja) | 1982-01-19 | 1982-01-19 | 安定化された固相試薬及びその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP544782A JPS58123459A (ja) | 1982-01-19 | 1982-01-19 | 安定化された固相試薬及びその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS58123459A true JPS58123459A (ja) | 1983-07-22 |
Family
ID=11611457
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP544782A Pending JPS58123459A (ja) | 1982-01-19 | 1982-01-19 | 安定化された固相試薬及びその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS58123459A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2538907A1 (fr) * | 1982-09-15 | 1984-07-06 | Braylan Paul | Reactif immunologique constitue par des antigenes ou des anticorps en forme de cellules des particules ou des molecules ancres sur des surfaces solides continues par des unions ioniques ou covalents |
| EP0192320A1 (en) * | 1985-01-11 | 1986-08-27 | Unilever Plc | Preparation of reagents |
| JPH02129549A (ja) * | 1988-11-09 | 1990-05-17 | Nitto Denko Corp | 免疫体の固相化方法 |
| JPH02161357A (ja) * | 1988-12-15 | 1990-06-21 | Tosoh Corp | 免疫測定用材料の安定化方法 |
| JP2022054122A (ja) * | 2020-09-25 | 2022-04-06 | デンカ株式会社 | フェリチン測定試薬 |
| WO2025143227A1 (ja) * | 2023-12-28 | 2025-07-03 | Zacros株式会社 | 反応性物質が塗布された反応部を備えた検査デバイス |
-
1982
- 1982-01-19 JP JP544782A patent/JPS58123459A/ja active Pending
Cited By (9)
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