JPS58129977A - 制癌性物質ｔｆ−３００−２及びその製造法並びにこれを含有する制癌剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な制癌性物質、更に詳細にはフッバクテリ
ウム属に属する菌を培養し、この培養液から得られる制
癌作用を有する画分を蛋白質分解酵素による酵素処理に
付して得られる制癌性物質ＴＩ’−３００−２（Ｔｌ’
−！１１０−２、ＴＩ’−３２０−２およびＴＦ　−３
３０−２の総称）及びその塩に関する。更Ｋｔた１本発
明は二〇制癌性物質ＴＦ−３００−２及びその塩を製造
する方法並びにこれを含有する制癌剤に関する。

近年各種の癌患者の治療法において、宿主の免疫機能を
亢進させ、免疫機能の助けを借りながら制癌効果を発現
させる治療法が盛んとなってきた。

かかる療法に使用される薬剤としては、各種細菌の菌体
１ｍ体培養物から得られる成分、あるいは担子菌の子実
体又はその培養菌体から得られる多糖体が知られている
。しかし嫌気性菌を培養し、その培養液から優れた制癌
作用を有する成分の研究は少なく、特にフッバクテリウ
ム属に縞する菌を培養し、その培養液から得られる成分
並びＫその制癌作用については未だ知られていない。

本発明は、ヒト四腔内より分離したフッバクテリウム属
に属する菌を培養し、その培養液から菌体を除去した上
清液から採取される成分についてその薬理作用を調べて
いたところ、除蛋白処理に符し限外濾過して得られる特
定の成分は、制癌作用を有しており、宿主介在性あるい
は宿主の免疫力を先進させ、免疫力の助けを借シながら
間接的に制癌作用を発現させる作用を有するものである
ことを見い出した。そして、この特定の成分は。

制癌作用が強く、かつ副作用が少ない等制癌剤として好
ましい性質を有することを合わせて見い出し１本発明を
完成した。

本発明で利用される菌としては、菌を培養した上清液か
ら得られる制癌作用を有する画分を蛋白質分解酵素によ
る酵素処理に付せば制癌性物質ＴＦ　−３００−２を生
成するフッバクテリウム属に属する菌であればよく、好
適なものとしてはフッバクテリウム・ヌクレアタムが挙
げられる。具体的には１例えばフッバクテリウム・ヌク
レアタム？？−０３１（ＦｌｉＸＲＭ−５０７７、ムｒ
ａｏ　−５１６４７＞および微生物学の一般常識として
その性質を有する菌株、すなわち自然変異株あるいは人
工的に改曳された菌株等が利用される。

フッバクテリウム・ヌクレアタムＴＦ−０３１の菌学的
性状を記載すれば以下のとおりである。

（１）形態 （ｉ′）細胞の形：紡錘形（第１図） ■　細胞の多形性の有無：なし ■　運動性の有無：なし ■　胞子の有無：なし ■　ダラム染色ニゲラム陰性 ■　抗酸性：陰性 （２）培地における生育状態 工 ■　ＴＩＦ　−ａ寒天板及び斜面培地 外形：円形 大きさ：約１Ｍ 隆起：半球状 構造：露滴状 表面：平滑 辺縁：平滑 色　：乳黄白色 透明度：不透明 ■　Ｔシーａ液体培地 発育の程度：旺盛 濁り；凝塊 沈殿：なし 表面の発育：なし、約５Ｍまでは発育なしがス：なし く３）生理学的性質 ■　硫化水素の生成：＋ ■　硝酸塩の還元ニー ■　酪酸の生成：＋ ■　インドールの生成：＋ ■　ウレアーゼニー１ ■　カメラーゼニー ■　デンプンの加水分解ニー ■　酸素に対する態度：嫌気性 ■　アンモニアの生成：＋ ［相］　炭酸ガスの生成：＋ ■　生育の範囲：ｐＨ５〜８．５ 温度３０〜４５°Ｃ ＠　糖からのガスの生成 Ｌ−アラビノース（→、Ｄ−キシロース←）、Ｄ−グル
コース←）、Ｄ−マンノース←）、Ｄ−７ラクトース←
）、Ｄ−が２クトース（→、麦芽糖←）、ショ糖（→、
トレハロース←）、ソルビット（→、マンニトール（→
、イノジット（→、クリセリン←）、デンプン（→ 以上の諸性状をパーシーズ・マニュアル・オデ・デイタ
ミネイティブ・バクテリオロゾー第８版に照らして検討
すると、本菌株はフンバクテリウム・ヌクレアタム（！
Ｆｕｅｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｎｕｃｌｅａｔｕｍ　）　
　に酷似し、これに属する。

つぎに本発明の制癌性物質ＴＩＦ　−３００−２の製造
法の一例を図式化して説明すれば、次のとおシである。

（１）培養及び培養液から制癌作用を有する画分の分離 フッバクテリウム属に属す る制癌性物質ＴＦ−３００−２ 生産菌の培養 培養液又は 機溶媒　　　　　　分離−−可溶部 沈殿物 ＰＩ−ＩＫよる分割 （２）　　（１）で得られた画分の除蛋白処理および限
外濾過 上記の製造法の代表的ルートを具体的に示すと次のとお
９である。

（１）　　培養及び培養液から制癌作用を有する画分の
分離工程 （！Ｌ）培養 フッバクテリウム属に属する菌の培養は１通常の嫌気性
菌の培養方法によって行われる。即ち、牛の脳、心臓抽
出物、各種ペプトン類等の窒素源：イースト・エクスト
ラクト等のビタミン源；塩化ナトリウム等の無機塩類層
グルコース、２クトース等の炭素源ＩＬ−シスチン、亜
硫酸ナトリウム、チオグリコレート等の還元剤を含むよ
うな培地を水酸化ナトリウムでＰＨ６〜８．５好ましく
は６．５〜７．５に調整し、菌を植えつけ、嫌気的条件
下、３０〜４２℃好ましくは３２〜３７℃で１〜５日、
好ましくは１〜４日靜置装るいは攪拌培養を行う。

特に、下記成分表に記載の培地（以下τ？　培地と称す
る）を使用するのが好ましい。しかし。

窒素源として、牛の脳、心臓抽出物のプレイン・ハート
・インヒュージ冒ンは必ずしも必要ではなく、牛の心臓
抽出物であるハート・インヒューゾヨｙ１牛肉エキス、
魚肉エキス、トウモロコシより抽出されたコーンステイ
ゾリカ等を代用してもよく、また各種ペダトンにおいて
プロテオース・ベノトン、ファイトン・ペゾトンは必ず
しも必要ではなく、またトリットケース・ペノトンをポ
リペプトンで代用することもできる。

尚、嫁入を使用しないときは攪拌培養を行うのが好まし
い。　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３成分
表 （ｂ）　　培養液から上清液の採取＜ｔＳ体の除去）上
で得た培養液から菌体を除去して上清液を得る。菌体の
除去は常法、例えば遠心分離、ハイフロス−パーセル等
の一過助剤を用いる一過法を採用できるが、特に遠心分
離法は操作、菌の除去度合、上清液の収量の点で好まし
い。

（ｅ）　　制癌作用を有する有効画分の分離上で得られ
た上清液に親水性有機溶媒を加えて、生ずる沈殿物を採
取する。この際の上清液はｐＨ１，５〜７好ましくはＰ
Ｈ２付近（ｐＨ１，５〜２．５）Ｋ調整する。親水性有
機溶媒としては。

例えばエタノール、メタノール等のアルコール類、アセ
トン等のケトン類が挙げられるが、アルコール類特にエ
タノールが最もよい結果を与える。この親水性有機溶媒
はその濃度が６０〜８０憾（容量比）、好ましくは５０
−８〇−（容量比）になるように添加するのが好適であ
る。親水性有機溶媒を加えた後、低温、好ましくは約４
〜５℃の温度で数時間〜数日間放置し。

沈殿物の生成を完結させる。

このようにして生じた沈殿物をデカンテーション、遠心
分離、濾過尋の通常の操作で分離する。

次いでこの沈殿物に一般には５〜２０倍量の水を加え、
−により分割し有効画分を得る。例えば−７，５〜８に
調整し１次いで所望により不溶部を除去した後ｐ）（４
付近（ｐＨ３，５〜４．５）に調整して得られる水不溶
部（ＴＩＦ−２１０）を遠心分離、濾過等の通常の方法
で水不溶部を採取する。あるいはｐＨ７，５〜８に調整
し、次いで所望により不溶部を除去した後ＰＦ′Ｉ６付
近（ｐ）１５．５〜６．５）に調整して得られる水不溶
部（ＴＩＦ　−２２０）を常法により分離採取してもよ
く、更にはその水可溶部を一４付近（ｐＨ３，５〜４．
５）に調整して得られる沈殿物（ＴＦ　−２３０）を常
法により分離採取してもよへ上記のようにして得られた
制癌作用を有する画分（Ｔｌ’−２１０，ＴＩＦ−２２
０および’Ｉ’ｍ’　−２３０）は精製のために数回同
様の−による分割操作に付してもよい。このようＫして
得られた制癌作用を有する画分を次の除蛋白処理及び目
的物の採取工程に付す。

（２）除蛋白処理及び目的物の採取工程ここにいう除蛋
白処理とは、当核技術分野に於いて知られている処理で
あればよく、蛋白質分解酵素等の酵素処理に付す場合、
まず、上記の如くして得られた制癌作用を有する画分を
水または緩蛋白質分解酵素としては、！ロナーゼ、パパ
イン、トリプシンおよびキモトリジシン叫が挙げられ、
好ましくはゾ四ナーゼおよびトリプシンが挙げられる。

酵素処理にあたって、あるいは酵素処理中、水溶液を−
７〜８に調整保持するのが好ましく、そのためｋは水酸
化す）　ＩＪウム、水酸化カリウム、炭酸ソーダ、重炭
酸ソーダ等が用いられる。また、酵素処理中、反応液の
腐敗を防止するために、クロ′ロホルム、トルエン吟の
有機溶媒を少量添加するのが望ましい。そして、酵素の
使用量は、通常は酵−処理に付す粉末（固体）に対し　
　１て、約１〜２憾（重量比）付近の量が使用される。

上記酵素処理は通常３０〜４０°ＣＫて１〜７２時間、
好ましくは２４〜４８時間行う。また、例えば粉末（固
体）に対して酵素的１ｔ６（重量比）を加えて、１〜２
４時間酵素処理を行い、更に約１１（重量比）の酵素を
加えて酵素処理を行ってもよい。

上記除蛋白処理後、所望により遠心分離、濾過等の操作
により不溶物を除去した水可溶部から制癌性物質ＴＩ’
　−３００−２の画分を採取する。この水可溶部からＴ
Ｆ　−３００−２の画分を採取するには、例えば−によ
る分割法、親水性有機溶媒による沈殿分別法およびイオ
ン交換体による分割法郷を１つ以上組み合わせて処理し
た後、限外濾過に付せばよい（尚、これらの操作を２回
くり返してもよい）。具体的にその採取方法を例示すれ
ば、上記水可溶部を、好ましくは−２，５以下に調整し
く所望によりトリクロロ酢酸を添加してもよい）生ずる
沈殿物を除去し、可溶部に破水性有機溶媒１例えばアル
コールを３０〜８０チ（容量比）、好壕しくは６０〜８
０チ（容量比）になるように加え、生ずる目的物の画分
の沈殿物を採取し、所望により、ついでこの沈殿物を、
例えばダウエックス１型（商品名）、アンバーライトＩ
Ｒム−４００（商品名）勢の強塩基性陰イオン交換体勢
で処理して（この操作は数目行ってもよい）その非吸着
画分を採取し、限外−過（分画分子量５万〜２０万）し
て濃縮および脱塩した後、乾燥して本発明の制癌性物質
？？　−３００−２が得られる。

上記のよう和して得られる制癌性物質ＴＦ−３００−２
の性状は次のとお抄である。

（イ）白灰色ないし淡褐色の粉末。

（ロ）マウスのエールリッヒ腹水型癌、エールリッヒ結
節型癌、ザルツーｆｆ１８０癌細胞および３−１６メオ
ノーマ癌細胞の増殖を阻止し、免疫賦活作用を有する。

ｅｉ　　水Ｋｅ解し、メタノール、エタノール、アセト
ン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエ
ーテルに不溶。

に）明確な融点を示さず、約１８０℃よ抄分解を始め、
１９５℃以上で著しく分解する。

（ホ）　ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは。

３５００〜６３００．２９２０．２８５０．１６６０〜
１６２０％　１５８０．、〜１５４０．１４６０〜１４
００．１３８０〜１３６０゜’１２０．１０８０〜１０
２０，９７０および８２０〜８００ｃｗＩ−１の近傍に
吸収帯を有する。

（へ）−７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収末端
に強い吸収があり、また２７０〜２８０叫　の近傍に吸
収を示す。

（ト）　　モーリッシュ反応、フェノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウリー・フ
ォリン反応は陽性、ニンヒＦリン反応は陰性。

（ハ）元素分析値 Ｃ：５８優〜４７チ　　Ｈ：５憾〜７憾Ｎ：１囁〜４憾 （男　フェノール硫酸法による糖の含有率は約１６９４
−３０％　（グルコース換算）、およびロウリー・フォ
リン法による蛋白質の含有率は、約１０係以下　（牛血
清アルブミン換算）であも上記のようにして得られた制
癌性物’Ｊ［Ｔシー３０１１）ｂは、常法に従って医薬
上許容される非毒性塩としてもよい。具体的には１例え
ばナトリウム塩、カリウム塩等のアルカリ金属塩、マグ
ネシウム塩、カルシウム塩郷のアルカリ土類金属塩等が
挙げられる。

本明細書では、上記（１）−Ｃの上清液に親水性有機溶
媒を加えて得られた沈殿物の−による分割において、そ
の沈殿物をｐＨ４付近に調整して得られる水不溶部〔実
施例１−（５）および４−　＋４）　）、Ｐ）′Ｉ６付
近に調整し、て得られる水不溶部〔実施例２−＋３１）
及びＰＨ６付近に調整して得られる水可溶部を更にｐｉ
−１４付近に調整して得られる沈殿物〔実施例３−（３
）〕をそれぞれ使用して蛋白質分解酵素による酵素処理
に付した後限外濾過して得られたものを。

それぞれτＦ−３１０−２．７Ｆ−３２０−２及びτＦ
−３３０−２　　として示した。

次に本発明の制癌性物質Ｔ？　−３００−２の薬理作用
を示せば次のとおりである。尚、下記薬理試験において
ＴＩＦ　−３１０−２は実施例４で得ら部皮下に移殖し
た。次いで被検物質を５％ブドウ糖水溶液に溶解させ、
その溶９０．２−を癌細胞移１１３日目から、１日１回
６日間隔日腫瘍内へと腹腔内へと同時に投与し九。また
対照群に＃−ｔ５％ブドウ糖水溶液ｏ、２−／１回を同
様に投与した。

その結果をｉ！−２に示す。

以下余白 ３、急性毒性 マウス（ＮＣＲ系、♀、６週令（ｉｖ　　投与）におけ
るＴＦ　−３００−２のＬＤ５ｏ値はＩＣＩＰ／Ｋｇ以
上であった。

以上の薬理実験から明らかなように本発明方法によって
得られた制癌性物質ＴＦ　−３００−２は。

制癌剤として有用なものであシ、各種の癌疾患に使用さ
れ効果が期待されるものである。

本発明の制癌性物質ＴＦ　−３００−２はそのまま、あ
るいは非毒性塩として、常法によシ経口、注射、生薬等
の剤形として利用される。経口剤としては１種々の賦形
剤を含んでいてもよく、カプセル剤、錠剤、散剤、顆粒
剤とすることができる。

また注射剤としては、皮下、筋肉内、静脈内注射剤のい
ずれでもよく、懸濁液、溶液もしくは使用時溶解させる
粉末等の剤形が用いられる。また注射剤として使用する
には例えば、生理食塩水、ブドウ糖水溶液または局所麻
酔剤を含有する水溶液に上記粉末ｔｍ解または懸濁して
用いることができる。

本発明の制癌性物質ＴＦ　−３Ｑ　Ｏ−２及びその非毒
性塩を患者に使用する場合、その投与量は患者の症状に
応じて適宜選択されるが、一般に成人では０．０１〜５
０＊／Ｋｇを１日１〜数回に分は投与するのが好ましく
、投与方法としては経口又は皮下、筋肉内、静脈内もし
くは患部への注射によるの示好ましい。

次に本発明の実施例及び製剤例を挙げて説明するＯ 以丁余白 実施例１ ｍ１０ｆｆｌのジャー・ファメンタ−（丸菱理化研究ｆ
９′ｒ製）Ｋ、１！の蒸留水に対し、トリプトケース・
ペプトン１７１Ｉ、ハート・インヒユージョン１０ｇ、
イースト・エクストラクト６ｇ。

食堪７．５ｇ、〃゛ルコー２１２ｇラクトース１０ｇ、
曲硫酸ナトリウムｔｌ１７およびチオ〃゛リコレート・
ナトリウム０．５９を含有するＴＦ−ｅ培地８−ｅを加
え、１２０℃で６０分間滅菌する。

培養液に、冷却後窒素ガス欠１００＋＋／！／分にて１
時＋ｉＪ’１通気する。

あらかじめＦ述のＴＦ−ｅ培地にて前培書したフンバク
テリウム・ヌクレアタムＴＥ”−０３１（ＦＥ［（Ｍ　
−５０７７、ＡＴｅａ−６１６４７）の前項ＩＩ液１１
を滅菌φ外下で指揮する。培養は６７℃で窒素ガスを流
入（６５ｍ／’／分）しなから、攪拌（３０ｒｐｍ　）
下６日間行う。粗餐終了後、培ＩＩ液にセライト１６０
Ｉおよびセルロースパウダー８０．！ｉ’を加え攪拌し
、これを減圧下で濾過し隙５！Ｉした培養准上清７．６
ぷを侍に０（２）　　ｍで得られりｗ！養液上ｆｆ７．
ｌ：ＩＡＫ磯塩酸＄１７１を加え、ｐＨ２，０Ｋｉ１４
整しり後、ｘ　ｐ　／　−）Ｌ。

１１．７１を加え、６０憾エタノール浴液とし、４℃で
２４時間取直噴る。次いでデカンテーションにて溶液部
分を除き、沈殿物を採取するために４℃で遠心分離（６
Ｘ　１０’　ｒｐｍ、５分）する。この沈殿物Ｖｐ）４
２．０の６０’６エタノール水浴液４００−、エタノー
ル４００ＩＩ＋／、アセトン２０Ｑｄおよびジエチルエ
ーテル２００ｗＫ／で順次洗浄した後減圧乾燥して粉末
６．９ｇを得る。

Ｆ３１　　（２１で得られた粉末を水２５−に懸濁し、
１Ｎ−水酸化ナトリウム水泗液を加Ｊ　ｐＨ７，５〜８
．０となし、室温で３０分間攪拌した後、１Ｎ−塩＃ｋ
を力ｎえｐＨ４，０に調整する。次いで、氷冷Ｆ２時間
攪拌した後、遠心分１１１１　（Ｉ　Ｘ　１　［、］’
　ｒｐｍ　。

１０分）し、沈ｐｓｍと上清准を分離する。この沈殿物
ｖｐ）１４．０Ｋｖ＠＠Ｌｙ、：水１０ｍでａ浄し、沈
殿物と洗浄液を遠心分離（１ｘ　１０’　ｒｐｍ、１０
分）する。沈殿＠をエタノール１０−で洸紗した体、減
圧乾■して制癌性物質ＴＦ−２１Ｌ］ｔ’１．５ｇ得る
。

この屯σコは、次のような性状を有する。

（イ）白灰色ないし淡横色の粉末 （ロ）　マウスσノエールリツヒ腹水型綿、エールリッ
ヒ結節型楠、ずルコーマー１８０＆＃Ｉ胞およびＢ−１
６メラノーマ蝉細胞の増殖を阻止し、免疫賦活作用を有
する。

（ハ）　メタノール、エタノール、アセトン、ベンゼン
、クロロホルム、［？エチル、ジエチルエーテルに不溶
。

に）明確な＃ＡＩ点を示さず、１６０″Ｃ〜２６５°Ｃ
で分解する。

匝Ｉ　　ＫＢｒｖ剤伝による赤外純吸収スペクトルは、
６６００〜６２００．２９５０〜２９２０．１６８０〜
１６２０．１５５０〜１５１０．１４４０．１６８０．
１２４０〜１２２０および１１２０〜１０２０ｃＩｎ−
１の近傍に吸収帝な有する（第２図）。

（へ）　ｐｉｉ７での水口」浴画分の水−＃−液の系外
線吸収スペクトルは吸収末端に強い吸収かあり、また２
４８〜２６５　ｎｍの近僧に吸収を下す・（第６図・）
０ （ト）　モーリッシュ反応、フェノールｔｔｍｈ応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール堪酸反応、ロウリ−・フ
ォリン反応は耐性。

−元素分析値 ０：４０４〜４６優　Ｈ：５等〜７’ＩＮ：９僑〜１０
ｍ！ （１ハ　−７での水可溶画分のフェノール鎗酬法による
糖の含有率は約５参〜２５憾（グルコース換算）、およ
びロウリー・フォリン法による蛋白質の含有率は約２０
係〜５０係（牛血清アルブミン（１１算）である。

（４１（３１で得られた制癌性物質ＴＦ−２１０の１．
５ｇを水１５ゴに懸濁し、撹拌ドに１Ｎ−水酸化ナトリ
ウム水＃液を加えて−７，８に一整する。

６７℃に加温し、プロナーゼＩＣ（科研化学製商品名：
１．０００．０００チロシン率位／ｉ　’）　１５ＭＱ
ｖ癖加した後、トルエンを数ｌ両虎えて、攪拌Ｆ、ｐｉ
−１７，８〜８．０．３７〜４０″Ｇで２４時ＩＷ＃木
処理を行う。処理液を遠心分離（４０００ｒｐｍ、１０
分）し、上清液と沈殿物を分離し、沈殿物にｐＨ８，０
に調整した水６−を加え、遠心分１１ｇ１　（４００Ｑ
　ｒｐｍ、１０分）し、沈殿物と洗浄液を分離子る。洗
＃液に先の上１′！准を合わせてこれＫＩＮ−塩酸を加
えてＰ）（２，ＯＫ調整すれば沈殿が析出する。この溶
液を５℃で１２時間放置した後、遠心分＠（ＩＸ１０’
ｒｐｍ、１０分）し、上清液と沈殿物に分離し、沈殿物
に−２，０に調整した水３ＩＩｌ／’ｒ加え、遠心分１
１１１（ＩＸｌ　０’　ｒｐｔｎ、１０分）し、沈殿物
と洗浄液を分離する。浄；＃液に先の上清液を合わせて
エタノールを加λ８０係エタノール溶液とし、水冷下で
２時間攪拌した後、遠心分離（４０００ｒｐｍ、１０分
）シ、沈殿物と上清液を分＠−する。沈殿ｅｆｌｌｊ’
１８０％エタノール水浴液５１およびエタノール５−で
１１＃Ａ次流浄した後、減圧乾燥して即ｊ崩性ｗｉＴｙ
−ｓｔｏの画分！５２７ａｙ得る。

この粉末６２７〜を水５−に溶解させ、１Ｎ−水酸化ナ
トリウム水浴液を加えて−７，ＬＩ　Ｋ調整し、あらか
じめＩＮ−水酸化ナトリウム水源１［ＫてＯＨ型に調整
し九丁ンバーライトＩＲム４ｏｏ（ローム・アンド・ハ
アス社製商品名）４５ｓｄを充填したカラムにかゆ、水
２００ｇＩＩｌを流し九際のカラム通過液を全て合わせ
て、ＩＮ−塩酸を加えて、Ｈ７，ＯＫ調整する。これを
減圧下に＃に縮し孔径０．３声園のミリポアフィルタ−
（日本ミリボア・リミテッド製商品名）にてＶ過、次い
で凍結乾燥して制癌性物質〒Ｆ−３１０の凍結乾燥品１
−２１０１９得る。

このものは次のような性状を有する。

（イ）白灰色ないし淡褐色の粉末 （ロ）″Ｖウスのエールリッヒ腹水型癌、エールリッヒ
結節１１＠、ザルコーマ１８０癌細胞およびＢ−１６メ
ラノーｉ癌細胞の増殖を阻止し免疫賦活作用を有する。

Ｅう　水に溶解し、メタノール、エタノール、アセトン
、ベンゼン、りｅｔａホルム％　酢１１−！−ｆ−ル、
’ジエチルエーテルに不溶。

（ロ）＠１４ｉｉな融点を水石す、約１８０℃より分解
を始め、１９５℃以上で＃Ｌ＜分解する。

（ホ）　ＫＢｒ−刑法による赤外−吸収スベクトルは。

６５００〜３６００．２９２０．２８５０．１６６０〜
１６２０．１５８０〜１５４０．１４６０〜１４００．
１３８０〜１３６０．１１２０．１０８０〜１０２０．
９７０および８２０〜８０　［１（Ｗ−’の近傍に吸収
帯を有する（第４し１）。

（へ）Ｐ１１７の水浴液の紫外線吸収スぜクトルは、吸
収末端に強い吸収があり、また２４６〜２５９ｍｗａの
近傍に吸収を示す（蕗５し１）。

（）Ｉ　　ＴＳＫ　−ＧＥＬ　Ｇ　３　Ｑ　Ｑ　Ｉ　Ｓ
Ｗ　（東洋ｌＩ達株式会社ｆ１品名、カラムニア、５ｍ
ｍｇｘ６００ｍｍＸ２）Ｋよる画速液体クロマトグラム
（浴出液ニー７の０．１モルリン酸緩衝液、加速０．８
ｙ／分、室温）は２２０　ｎｍの紫外縁吸光１を測定に
おいては、＃媒先端部分、２８〜６２分句近、４６〜６
４分句近にかけて吸収′％：４Ｆ！シ、２６０　ｎｍ　
ｏ’ｒ紫外線吸光度測だにおいては浴媒元端部分、４２
〜６０分付近にかけて吸収なＭする（第６図）。

（ホ）モーリッシュ反応、フェノール鎗ａ！ｋＷ応、ア
ンスロン硫＊ル応、インドール鳩酸反応、ロウリー・フ
ォリン反応は陽性、ニンヒＰ１１ン反応、は陰性。

（１１元素分析値 ０　：　３８．０幅〜４２係　Ｈ：　５．０冬〜７Ｉ６
Ｎ：１係〜４ｍ （ヌ）　フェノール硫酸法による糖の含有率は、約２０
参〜６０４（グルコース換ＩＮ）およびロウリー・フォ
リン法による蛋白質の含有率は約１０Ｌ６以下（牛血清
アルブミン換算）である。

（５）上鮎で得られた制癌性物質ＴＩＦ−３１０１４０
ＩＩＱを倍にＳ給する。この−組数を孔径０．２μｍの
ミリポアフィルタ−（日本ミリホアリｓアツＦ製商品名
）Ｋて濾過し、次いで凍結乾燥して制癌ＵＷ實Ｔｖ−６
１ｏ−２の凍結乾燥品６６〜を侍る。

このようＫして得られた？１ｔｌｌ経性物質ＴＦ’−３
１０−２、特許請求の範囲に記載の性状を有し、糖含率
（ｌルコース侠算）は約１６〜６０優であった。

実施例２ （１１実施例１−１２１の方法で得られた粉末５．９ｇ
を水２５１１／に懸濁し、１Ｎ−水酸化ナト１］ウム水
溶液を加え、ｐｉ−１７，５〜８．０となし、室温で６
０分間攪拌（た後、１Ｎ−堪酸ケ加オー６．０に調整す
る。次いで水冷下、２時閉攪拌した後、遠心分＃（Ｉ　
Ｘ　１０’　ｒｐｍ、１０分）し、沈殿物と上清液を分
離する。この沈殿物をｐ）１６．０に調整した水５１で
洗浄し、沈殿物と洗浄液を遠心分＊（ｌＸ１０’ｒｐｍ
、１０分）する。洗浄液は、先に４％られた上清液と合
わせて４ｍ例６−（１１に記載する処理に付す。−刀、
沈殿物ケエタノール５ｓ／で洗浄した後、減圧０れて制
癌性物質ＴＦ−２２０Ｖ　１．０６．９得る。

こσ・ものは、次σ）ような性状Ｖ有する。

（イ）　白灰色かいしｆ！に褐色の粉末（ロ）　マウス
のエールリッヒ腹水型訪、エールす・ノヒ結節型崩、ず
ルコーマー１８０静細胞およびＢ−１６メラノーマ崩細
胞の増殖を阻止し、免疫賦活作用Ｖ有する。

（ハ）　メタノール、エタノール、アセトン、ベンゼン
、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエーテルに不溶
。

に）明確なｌ（点を示さず、１６０℃〜２４０　”Ｃで
分解する。

Ｍ　　ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは、３
６００〜６２００．２９５０〜２９２０．１６８０〜１
６２０．１５５０〜１５１０．１４４０．１６８０．１
２４０〜１２２０および１１２０〜１０２０ｃＩｓ−１
の近傍に吸収帯を有する（第７図）。

（へ）ｐＨ７での水可溶画分の水＃准の紫外＃］吸収ス
ペクトルは吸収末端に強い吸収があり、また２４８〜２
６６ｎｍの近８に吸収を下す（絹８図）。

（ト１　モーリッシュ反応、フェノール鮭峻Ｉｉ応、ア
ンスロン硫ｅＩＩ反応、インドール編酸反応、ロウリー
・フォリン反応は陽性、 （イ）元業分釘埴 Ｃ：４０係〜４２％　Ｈ＝５礪〜７４ Ｎ＝７憾〜９憾 （Ｉｌｌ　　ｐ）１７での水ＯＴ＃４画分のフェノール
硫酸法による糖の含有率は約５優〜２０４（ｙルコース
換算）、ふ°よびロウリ−・フォリン法による蛋白質の
含有率を言約１０４以下（牛面清アルデミン陣Ｉりであ
る。

（２１（ＩＩで得られた制癌性物質ＴＩ’−２２０の１
ｇを水１０Ｉｌ／に懸濁し、攪拌下に１Ｎ−水酸化ナト
リウム水＃液を加えてｐ）１７．８に一１彌整する。

６７℃に加温し、プロナーゼＢ（科研化学製商品名：　
１．０００．０００チロシン単位／ｇ）１５■Ｖ＃７１
Ｄした債、トルエンを数滴加オて、攪拌下、ｐＨ７，８
〜Ｂ、０．６７〜４０’Ｏで２４時間酵素処理な←う。

処ｆ！ｌＩ液を遠心分離（４０００ｒｌ）ｍ、１０分）
し、上清液と沈殿物を分離し、沈殿物にｐ）１８．０に
ａ４整した水６−を加え、遠心分＊　（４０（Ｊ　Ｏｒ
Ｅｌｍ、１０分）し、沈ａｉｍと洗浄液を分離する。洗
浄液に先の上清液を合わせて、これＫＩＭ−塩酸なｍえ
てｐ）１２．［１に調整すれば沈殿が析出する。この供
液を５−９で１２時間′ｊＩｉ装しり債、遠心分離（１
×１０’　ｒｐ”　、１０分）し、上清液と沈殿物に分
離し、沈ｌｉＭ物Ｋｐ）１２．０ＫＩ１１１１整した水
５ｄを加え、遠心分断（１×１０’　ｒｐｍ、　　１０
分）し、沈殿物と洸＃液を分離する。洗浄液に先の上清
液を合わせてエタノールを加え８０チエタノール溶液と
し、水冷下で２時間攪拌した後、遠心分Ｈｉ　（４００
Ｄ　ｒｐｍ１０分）し、沈殿物と上清液Ｖｆ＋離する。

沈殿物を８０係エタノール水浴液５ｓｌ／およびエタノ
ール５１１／で順次洗浄した後、城圧藍燥して制癌性物
質ＴＦ−３２０の自分を１６６〜得る。

この粉末１５０〜Ｖ水５ｓ／に溶解させ、１Ｎ−水酸化
ナトリウム水溶液を加えて−７，０に調整し、あらかじ
め１Ｎ−水酸化ナトリウム水浴液にてＯＨ型に調整した
アンバーライトＩＲＡ４００（ローム・アンド・）・ア
ス社製商品名）２５−を充填したカラムにかけ、水１０
０−を流した際のカラム通過液を全て合わせて、１Ｎ−
鳩醒を加えて−７，０に一姫する。これを減圧下に＃紬
り孔径０．６μｍのミリポアフィルタ−（日本ミリボア
・リミテッド製部品名）にてｐ過１次いで凍結乾燥して
制癌性−１ＴＦ　−３２０の凍結乾燥品ｖ１１０■得る
。

こσ）ものはつぎのような性状を有する。

印　白灰色ないし淡褐色の粉末。

（ｏｌ　　マウスのエールリッヒ腹水型癌の増殖Ｖ阻止
し免疫賦活作用を有する。

（ハ）水に溶解し、メタノール、エタノール、アセトン
、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエー
テルに不溶。

←１　明確な一；点を示さず、約１８０°Ｃより分解を
始め、１９５’Ｏ以上で着しく分解する。

捧）　　ＫＢｒ鯛剤法刑法る赤外耐吸収スペクトルは、
３５００〜６６００．２９２０，２８５０．１６６０〜
１６２０．１５８０〜１５４０．１４６０〜１４００，
１３８０〜１６６０．１１２０．１０８０〜１０２０．
９７０および８２０〜８ＱＱｍ−１の近傍に吸収帯を有
する（第９図）。

（へ）−７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸収末
端に強い吸収があり、また２５０〜２７０　ｎｍの近傍
に吸収ｌ示す（謝１０厚Ｉ）。

（ト＋　　Ｔｌ３Ｋ　−ＧＩＩＪ　ａ　３０００　ＳＷ
　（東洋＊達株式会社の商品名、カラムニア、５１１１
φＸ６０（ｌｌＸ２）による高速液体クロマトゲラム（
浴出＊：Ａ７の０．１モルリン酸緩衝液、流速０．８ｍ
／／分、室温）は２２０　ｎｍの紫外豊吸光度測定にお
いては、溶媒先端部分、２８〜６２分付近、４３〜６４
分付近Ｋかけて吸収１０．２６０　ｎｍの紫外線吸光度
測足においては溶媒先端部分、６５〜５６分付近Ｋかけ
て吸収を有する（第１１図）。

（イ）　モーリッシュ反応、フェノール健酸反応、アン
スロン硫酸反応、インドール塩６１　Ｂｔ　応、ロウリ
ー・７−４−１１７汐応は陽性、ニンヒＰりン反応１は
陰性。

（１月　元木分釘値 Ｃ：６８４〜４２憾　　Ｈ：　５憾〜７憾Ｎ　：　１　
％〜４　優 −）　フェノール硫酸法による糖の含有率は、約２０％
〜６０　％　（ｆ　ルコース換算）およびロウリー・ジ
オリン法による蛋白質の含有率は約１０係以下（牛面清
アルデミン換算）である。

（３１上Ｍｅ　テ１％　ラｔ１．　タＩＩＩ　ｍ性物Ｗ
’［’Ｆ’−３２０，１００ａｌｌ−水５０ｓ／に溶解
し、ウルトラフィルターＵＫ−５［１（東洋ｐ紙株式会
社製限外濾過樽商品名：分画債≠分子量５　Ｘ　１０４
．、　）にて限外濾過して１００＠に濃縮する。この濃
縮液を孔径０．２μｍのミリポアフィルタ−（１本ミリ
ボア・リミデツド製藺品名）Ｋて濾過り１次いで凍結乾
燥して制癌性物質ＴＩ”−３２０−２０伸結乾燥品７２
〜を得る。このようにして侍られた制癌性物’ｉｉＴ”
−３２０−２、特許請求の範囲に記載の性状を有し、糖
宮率（グルコース換算）は約１６〜６０優であった。

夾−？ｌ１６ （１１実施例２−　ｔｌ）で得られた洗紗液と上滑液を
合わせた溶液に１１Ｊ−塩ｒＨを加えて−４，０に調整
した後、５℃以下で１２時間穴膚する。仄いで遠心分離
（１ｘ１０’ｒｐｍ、ＩＱ分）し、沈殿物と上滑液を分
離する。この沈１１ｊｔｔｍｋｐＨ４，ｃＪＫ−整した
水５ＷＩｔで洗浄し、沈殿物と洗浄液を遠心分Ｈ（１ｘ
１０’ｒｐｍ、１０分）する。沈殿物をエタノール５ｓ
／で洗浄した後、減圧乾燥して制癌性物質ＴＦ−２３０
ｖＯ，４８９ｍる。

このものは、次のような性状ケ有する。

（イ）　白灰色ないし淡褐色の粉末。

（ロ）　マウスのエールリッヒ腹水型癌、エールリッヒ
結節型締、ずルコーマ−１８（ｌｅａおよびＢ−１６メ
ラノーマ癌細胞の増殖を阻止し、免疫賦活作用を有する
。

（／埼　　メタノール、エタノール、アセトン、ベンゼ
ン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエーテルに不
溶。

に）明確なｍ−漬を示さず、１８５℃〜２２５℃で分解
する。

（ホ）　ＫＢｒ綻剤法刑法る赤外線吸収スペクトルは、
６６００〜３２００，２９５０〜２９２０．１６８０〜
１６２０．１５５０〜１５１０゜１４４０．１６８０．
１２４０〜１２２０および１１２０〜１０２０（至）−
１の近傍に吸収帯を有する（＃Ｌ１２は１）。

（へ）ｐｌ−１７の水溶液の紫外線吸収スペクトルはｌ
＆収末端に強い吸収があり、また２４９〜２６４　ｎｍ
の近傍に吸収を示す（第１３１ｇ））。

（ト）モーリッシュ反応、フェノール硫酸反応、アンス
ロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウリー・フォリ
ン反応は陽性。

−冗素分析値 Ｃ：４２％〜４５１　　ＥＩ：５ｅ６〜７％Ｎ：１０憾
〜１１４ （１１１フェノール硫酸法による糖の含Ｍ率は約５優〜
２５憾（１）Ｓルコース換算）およびロウリー拳７オリ
ン法による蛋白質の含・有事は約６０憾〜６０係（十血
清アルブミン換りである。

（２＋　　＋１１　テｍられた制癌性物質Ｔｌ２３０　
〕０．４８ｇを水５ｓ／に懸濁し、攪拌下に１Ｎ−水酸
化ナトリウ入水溶液を加えて−７，８にａｌｔＥする。

３７℃に加温し、プロナーゼＥ（科研化学製商品名：　
１．０００．０００チロシン単位＃）５．０■を添加し
た後、トルエンを数滴加えて、攪拌下、ｐ）１７．８〜
８．０．　３７〜４０℃−Ｃ−２４ａｌｔ［素処理を行
う。処理液を遠心分離（４０００ｒｐｍ、１０分）し、
上清液と沈殿物を分離し、沈殿物ＫｐＨ８，０Ｋｇ１ｌ
ｌｌｌｌＦした水３ｗＬｌを加オ、遠心分離（４０００
ｒｐｍ、１０分）し、沈殿物と洗浄液を分離する。洗浄
液に先の±ｆ＃液を合わせて、これＫＩＮ−塩酸を加え
て−２，ＯＫ調整すれば沈殿が析出する。この溶液ｖ５
℃で１２時間放置した′後、遠心分離（Ｉ　Ｘ　Ｉ　Ｑ
’　ｒｐｍ、１０分）し、上滑液と沈１Ｉｊｔ物に分離
し、沈殿物ＫｐＨ２，０に調整された水６ＩＩ／を加え
、虚心分離（ＩＸ１０’ｒｐｍ、１０分）し、沈殿物と
洗浄液を分離する。洗浄液に先の上溝教を合わせてエタ
ノールを７１０え８０係エタノール俗液トし、水冷下で
２時間攪拌した後、遼心分１１ｉ　（４０００ｒｐｍ、
１０分）し、沈殿物と上滑液を分離する。

沈殿物を８０４工タノール水溶ｈ５ｗおよびエタノール
５−で鵬次洗浄した後、減圧乾−しで制癌性物質ＴＦ−
３３０の自分を１００■得る。

この粉末１００■を水５ｗに溶解させ、１Ｎ−水酸化す
）　ＩＩウム水溶液を加えて−７，ＯＫ　ｖＩ４整し、
あらかじめ１Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液にてＯＨ型に
＃整したアンバーライトエＲＡ４００（ローム・アンＦ
・ハアス社製四品名）１５−を充填したカラムＫかけ、
水６０ｗｄｖｆｌした際Ｊカラ１通過液を全て合せて、
１Ｎ−塩酸を加えてｐ）１７．０　Ｋ　ｍ整する。これ
を減圧下に濃縮し、孔径０．３μｍのミリポアフィルタ
−（日本ミリボア・リミテッド裏向品名）にて濾過、次
いで凍結乾燥して制癌性物質ＴＦ−３３０の凍結乾燥品
を７０〜得る。

このものは次のような性状を有する。

（イ）　白灰色ないし淡褐色の粉本。

−１マウスのエールリッヒ腹水型経のＮ情を阻止し免疫
賦油作用を有する。

（ハ）水に溶解し、メタノール、エタノール、アセトン
、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、。

ジエチルエーテルに不溶。

に）明確な融点１に下さず、約１８０℃より分解を始め
、１９５℃以上で看しく分解する。

（ホ）　ＩＣＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは
。

３５００〜３３００．２９２０．２８５０．１６６０〜
１６２０．１５８０〜１５４０．１４６０〜１４００．
１６８０〜１３６０゜１１２０．１０８０〜１０２０．
９７０および８２０〜８ＱＱｃＭ−１の近傍に吸収帯Ｖ
有する（＃！１４図１）６ （へ）ｐＨ７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸収
末端に強い吸収かあり、また２５０〜２６０　ｎｍの近
傍に吸収を示す（鯖１５図）。

（）ｌ　　Ｔ８に−Ｇｉ　Ｇ　３　Ｑ　００８Ｗ　（東
洋曹達株式会社の商品名、カラムニア、５鴎ダ×６００
趨×２）による高速液体クロマトｌラム（＃出液：Ｐ）
（７の０．１モルリン酸緩衝液、諏速ｕ、ｓ　ｍｔｉ分
、室温）は２２０ｎｍｆＮ第外儒吸ｊｔ度測定において
は、溶媒先端部分、３６〜６４分付近Ｋかけて吸収を有
し、２６０　ｎｍの紫外１１ｉｉ！吸光度測足において
は＃媒先端部分、３５〜６２分付近ｋかけて吸収を有す
る（＃１１６図）。

−モーリッシュ反応、フェノール硫酸反応、アンスロ７
艙酸反応、インドール塩酸反応、ロウリ−・フナ１１ン
反応は陽性、ニンヒドリン反応は陰性。

（す）　元素分析値 ０　：　３８１〜４２４　　Ｈ：５係〜７係Ｎ：１４〜
４憾 （ヌ）　フェノール硫酸法による糖の含有率は、約２０
憾〜６０憾（グルコース換算）およびＯウリ−・フォリ
ン法による蛋白實の含有率は約１０１１以下（午崩清ア
ルブミン声算）である。

（３）　　上記で得られた制癌性物質ＴＦ−３３０７０
〜Ｙ水５０ｗＩＩＫ溶解し、ウルトラフィルター〇にの
ミリポアフィルタ−（日本５ｌＪＴＩｅアリミテソド裂
商品名）Ｋて濾過り１次いでＯＩＲ＃乾燥して節；−性
物［’ｒＦ−３３０−２の凍結乾燥品４９〜を得る。

このよう托して得られた制癌性＠’Ｎ　ＴＰ−３３０−
２、特許請求の範囲に記載の性状ＶＮし、一般に糖含率
（ゲルコース換算）は約１６〜３ｏ優であ九代表的なも
のの赤外線吸収スにクトルおよび紮外酬吸収スペクトル
は１１１１７図および第１８ト１のとｉりであった。

実施例４ （１）　９０−６のジャー・ファメンタ−（丸菱理化研
究所製ＭｅＪ−Ｕ型）に７０ノσ・蒸留水に対し。

トリプトケース・ペプトン１１９０．９、ハート・イン
ヒユージョン１０５０ｇ、イースト・エクストラクト２
１０ｇ、食塩５２５．ｕ、ｆｆルコース８４０．９．ラ
クトース７００ｇ、亜諌酸ナトリウム７Ｉ、チオグリコ
レート・ナトリウム６５９および第２リン酸カリウム１
７５９を含　　１有ｆ６Ｔ１’−ｆ培ｍＹ７ＪＤえ、１
１８−Ｕで１５分間ｆＩＩｔ、ｒＩｉする◎培養液に、
冷却俊窒本ガスを２５０１／分にて１時間通気する。

あらかじめ上述のＴＦ−１培地にて前培養したフンバク
テリウム・ヌクレアタムＴＰ−０３１（ｖｗｈｖ　−５
０７７、ＡＴＯＯ−３１６４７）の前坩養液約９００Ｉ
ＩＩ／ｖ上述した培養液に接種する。培養は約３６℃で
窒素ガスを潴入（２５０ｔＲ１／分）しながら攪拌（９
０ｒ、ｐ、ｍ　）下４日間行う。培養終了後、培養液に
セライ）　１０？／彫およびセルロースパウダー５ｇ／
！を加え攪拌し、これを減圧下でＰ遇し除晒した培養液
上清約６５看ｖ＋４だ。

（２１＋１１で傅らねた培養液上清７．５−ｅＫ　ｍ　
堪ｅｌｌ　１１３ｗ？加え−２６０に調整した後、エタ
ノール１１，４−ｅ％Ｊｎえ６０４−１−１　／　−ル
溶ｇ　トＬ、４℃で２４時間放置する。次いでデカンテ
ーションにて溶液例分を除き、沈殿物を採取するために
４℃で遠心分＊（４Ｘ　１０’　ｒｐｍ、１０分）する
。との沈殿物をｐｉ−１２，０の６０％エタノール水浴
液１００ゴで２回、エタノール１５（Ｊ＋ｍ／、メタ／
　−ル１　ｂ　ＯｗＫｃ２回およびアセトン１５０−で
）−久洗浄した後、風乾して粉末６．０．９　ｖＭる。

＋３１　　（２１で得られた粉末な水６０−に懸濁し、
４Ｎ−水酸化ナトリウム水Ｔｈ液を加え、−７，５〜８
．０となし、室温で１５分Ｍ攪拌した恢、４Ｎ−塩酸を
加えてｐＨ４，ＯＫ真整する。次いで水冷下２時間静置
した後、遠心分離（Ｉ　Ｘ　１０’ｒｐｍ。

１０分）し、上清液と沈殿物を分離する。この沈殿物Ｋ
ＩＩＳｖ：浄ｆ＞１：メに水６ｄｖ’ＪＪＤＬＷ＆ｌＩ
ａ液）−ｆｘし、４Ｎ−水酸化ナトリウム水溶液を加え
ｐＨ７，５〜８．ＯＫ−整する。次いで室温で１５分間
攪拌し、その後４Ｎ−塩＃ｋを加えてｒＪ（４，ＯＫ−
祭し氷冷下２時間静置する。その後遠心分離（１×１０
’　ｒｐｍ、　　１０分）Ｌ沈殿物を採取する。この沈
殿物ｖ４４．０に隣整した水４１１／にてｆｃ紗し、遠
心分ＩＩＩ（Ｉ　Ｘ　Ｉ　Ｑ’　ｒｐｍ、１０分）して
湿重量で６．２ｇの沈殿物（ＴＦ−２１［１）を倚る。

このよう圧して得られた１１１Ｉ＃Ｉｈ性物餉ＴＦ−２
１０は、実施例１で得られｙ、＝４のと同じ性状なＭし
ていｙ：Ｏ （４１＋３１で侍られた’１’ｌＦ−２１０６，２、Ｉ
Ｔ’　（湿１會）を水６ｍＫＪ１１？濁し、攪拌ＦＫ飽
和炭酸アンモニウム水Ｗ４腋を力［１えて−７，８に調
整する。これＹ６７℃に加温し、プロナーゼＥ（科研化
学製商品名：　１．０００，０００チロシン単位／９　
）　２１〜Ｖ添７Ｊ［ｌ　した後トルエンＶ数滴加えて
振盪下、ｐｌ−１７，８〜８．０，３７〜４０℃で２時
間酵素処理を行う、次いで処理液に４Ｎ−￥ＪＡ酸を加
え−１，０とし沈殿を析出させる。この懸濁敢を水冷下
２時間静置した後、遠心分＃　（Ｉ　Ｘ　１０’　ｒｉ
）ｍ、１０分）シ、上清液を分取する。この上清液Ｋｘ
ｌ、／−ル２９−を加え、６０係エタノール水浴緻とな
【、沈殿物を析出させる。これを水冷下２時間静置した
後遠心分離（６ｘ　１０３ｒｐｍ。

１０分）して沈殿物を採取する。沈殿物を６０係工タノ
ール水浴ａ５ｍ１７、エタノール１０−およびアセトン
１０ＷＩｌで順次洗浄した後、風乾して制癌性物質ＴＦ
−５１０５１５４を得る。これ％：６０ｄの水に溶解さ
せ、４Ｎ−水醒化す）　ＩＩウム水齢液にてｐｉ′１８
．ＯＫ　ａＪｄ壷し、ダウエックス＋×４＠−Ｈ＃（ダ
ウケミカル社製部品名）ＣＩ謳３０〆を充填したカラ五
Ｋかけ、水１００ｓｌ／１１’泳した際のカラ五通過′
ｌ＆を全て合わせて−６，５〜八〇となる様に１ｉ１１
Ｅする。これをウルトラフィルターσに−５０（東洋ｐ
紙株式公社製限外ｐ過膜簡品名二捧会分画分子量５Ｘ１
０’）Ｋて限外の過を行ない１００倍までＳ−する。こ
の濃縮液を孔径０．３μｍのミリポアフィルタ−（日□
本ミリボア・りずテッド製部品名）にて戸遇し、次いで
凍結乾燥して１１１１＃ｈ性物質ＴＩＰ−６１０−２の
凍結乾燥品２３０啼を祷る。このようにして得られたＩ
ｌ＋瘤性物質Ｔｙ−３１０−２は特許ｉ１１′＃ｌ′５
１？の範囲に記載の性状ケ有し、一般にその稙含率（ｌ
ルコース換算）は約１６〜６０４↑あり、代表的な本の
の赤外線吸収スペクトル、紫外−吸収スペクトルおよび
＾速液体クロマトグラムはそれぞれ第１９図、第２０図
および絹２１図のとお匂であった。

製剤例１ 制知性＃ＩＪ員ＴＩ’−６１［Ｊ−２’？１’苫む一へ
Ｕ〜７．５の水浴液をバイアル瓶に充填し、０．５又は
１〜率位の制癌性物＊Ｔ１３１０−２伸結乾燥品を祷る
。これは使用時、滅菌生理食塩水、リドカイン０．５％
含有浴液又は５優ブドウ糖水浴液等圧溶解させ注射液と
して１史用する。

製剤例２ 制楠性物端Ｔｌ’−３２０−２を含む−７，０〜７．５
の水溶液をバイアル瓶に充填し、０．５又は１■単位の
１ｌ１１１熱性物’１ＴＦ−３２０−２ｙＡ結乾燥品を
得る。これは使用時、滅菌生理食塩水、リドカイン０．
５％含有溶液父は５優デドウ糖水＃液咎に溶解させ注射
液として使用する。

製剤例６ 割眸性物＊　ＴＩ’−３３０−２を含む−７，０〜７．
５の水浴液をバイアル瓶に充填り、０．５又は１＃一単
位σＪ％ｔｌｌ癌性ｇ１質Ｔ？−３５０−２凍結乾燥品
を得る。

こねは使用時、滅菌生理食塩水、リドカイン０．５係含
南溶液又は５％ブドウ糖水＃象尋に溶解して注射液とし
て使用する。

【図面の簡単な説明】

＃！１図は本発明で用いるフンパクテリウムパヌクｌｚ
７タムＴＦ−０３１（Ｆ）形１ａｔ’示すｍ微−写真、
第２図は制癌性物質ＴＦ−２１０の赤外鍼吸収スペクト
ル、謔６１は同＠質の紫外縁吸収スペクトル。 第４図は　　　制癌性物質ＴＦ−３１０σ）赤外線吸収
スペクトル、第５図は同物質の紫外巌吸収スｄクトル、
第６図は同物質の＾速液体クロマトｌラム、第７駒は制
癌性物質ＴＦ−２２０の赤外線吸収誠ベクトル、＃１８
医は一１物質の紫外線吸収ス４クトル、第９図は　　　
制−性物質ＴＦ−３２０の赤外＆１吸収スペクトル、第
１０図は同物質の紫外線吸収スペクトル、第１１図はｔ
Ｉ！ｒｉ物質の藺速液体クロマトグラム、第１２図は制
癌性物質Ｔ？−２３０の赤外線吸収スペクトル、ｌ１１
３ｈは一゛）物質の紫外縁吸収スペクトル、第１４図は
　　　制癌性物質ＴＦ−３３０の赤外線吸収スペクトル
、第１５図は同物質の紫外線吸収スにクトル、＃！１６
図は同物質の鳩速液体クロマトｌラム、第１７図は本発
明のＩＩ＋　１＋性＠ｘ　ＴＦ−６３０−２の赤外線吸
収スペクトル、謝１８図は同物質の市外−奴収スベクト
ル、第１９し１は、本発明の制癌性物質ＴＦ−３１０−
２の亦外蜘吸収スペクトル、１３１２０区１は回＠質の
紫外線吸収スペクトル、第２１しは同物漬の高速液体ク
ロマト〃゛ラムをボす。 以上 第　１　ン： １０μ 第１頁の続き ０発　明　者　杉田優利 富山市下赤江２−２市営住宅３ ２０４ ０発　明　者　山本芳子 滑川市高塚９７０−６ ０発　明　者　南向 富山市松若町９−１ ０発　明　者　堀孝子 富山市向新庄１３８３県営住宅４− ０２ ５４２−

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記に示す性状を有する制癌性物質ＴＦ　−３０
   ０−２およびその塩。 止し、免疫賦活作用を有する。 （ハ）水に溶解し、メタノール、エタノール、アセトン
   、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエー
   テルに不溶。 に）　明確な融点を示さず、約１８０°Ｃよシ分解を始
   め、１９５℃以上で著しく分解する。 （ホ）　ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは、
   ３５００〜３６００．２９２０．２８５０゜１６６０〜
   １６２０．１５８０〜１５４０．１４６０〜１４００．
   １！１８０〜１３６０゜１１２０．１０８０〜１０２０
   ．９７０および８２０〜８００　ｃＩＩ−１の近傍に吸
   収帯を有する。 （へ）−７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収末端
   に強い吸収があり、また２７０〜２８０圓　の近傍に吸
   収を有する。 （））　　モーリッシュ反応、フェノール硫酸反応、ア
   ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウリー・フ
   ォリン反応は陽性、ニンヒドリン反応は陰性。 （ハ）元素分析値 Ｃ：３８憾〜４７嗟　Ｈ：５憾〜７優 Ｎ：１憾〜４優 （ワ）　フェノール硫酸法による糖の含有率は約１６ｓ
   〜６０憾（グルコース換算）およびロウリー・フォリン
   法による蛋白質の含有率は約１０憾以下（牛血清アルブ
   ミン換算）である。
2. （２）　　フッバクテリウム属ＫＪＩＩする制癌性物質
   ＴＦ−３００−２生産菌を培養して得た培養液又はその
   上清液から制癌性物質ＴＩＦ　−３００−２又はその塩
   を採取することを特徴とする制癌性物質ＴＦ　−３００
   −２およびその塩の製造法。
3. （３）　　フッバクテリウム属に属する制癌性物質ＴＦ
   −３００−２生産菌を培養し、その培養液又はその上清
   液から得られる制癌作用を有する画分を除蛋白処理に付
   した後、限外濾過することを特徴とする特許請求の範囲
   第２項記載の製造法。
4. （４）　　フッバクテリウム属に属する制癌性物質ＴＦ
   −３００−２生産菌を培養して得た上清液に親水性有機
   溶媒を加えて生ずる沈殿物　　　　　−−又はその沈殿
   物から得られる制癌作用を有する画分を除蛋白処理に付
   した後、限外濾過することを特徴とする特許請求の範囲
   第３項記載の製造法。
5. （５）除蛋白処理が蛋白質分解酵素による酵素処理であ
   る特許請求の範囲第３項又は第４項記載の製造法。
6. （６）　　フッバクテリウム属￥’ｃＪｌ＠する制癌性
   物質？？−３００−２生産菌を培養して得た上清液に親
   水性有機溶媒を加えて生ずる沈殿物から得られる制癌作
   用を有する画分を蛋白質分解酵素による酵素処理に付し
   た後、限外濾過することを特徴とする特許請求の範囲第
   ４項記載の製造法。
7. （７）　　フッバクテリウム属に属する菌を培養して得
   た上清液に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈殿物を−に
   より分割して得られる制癌作用を有する画分を蛋白質分
   解酵素による酵素処理に付し、ついで制癌性物質画分を
   採取することを特徴とする特許請求の範囲第６項記載の
   製造法。
8. （８）上清液に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を
   −によ多分割して得られる制癌作用を有する画分が、−
   ３，５〜４．５で水に不溶な画分である特許請求の範囲
   第７項記載の製造法。
9. （９）上清液に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物を
   −によ）分割して得られる制癌作用を有する画分が、沈
   澱物に水を加え−３，５〜４．５に調整して得られる水
   不溶部である特許請求の範囲第８項記載の製造法。 ＯＩ　　上清液に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈＃　
   　１物をｐＨｋより分割して得られる制癌作用を有する
   画分が、ｐ）１５．５〜６．５で水に不溶な画分である
   特許請求の範囲第８項記載の製造法。 ａｌ　　上清液に親水性有機溶媒を加えて生ずる沈澱物
   を−により分割して得られる制癌作用を有する画分が、
   ｐＨ５，５〜６．５で水に可溶でｐ）１３．５〜４．５
   で水に不溶な画分である特許請求の範囲第８項記載の製
   造法。 α３　蛋白質分解酵素による酵素処理が、ｆロナーゼま
   たはトリプシン処理である特許請求の範囲第５〜１１項
   いずれかの項記載の製造法。 ０３　　酵素処理後制癌性物質画分を採取する操作が少
   なくとも−による分割法、親水性有機溶媒による分別沈
   殿法又はイオン交換体による分割法の１穫以上を組み合
   わせて処理した後、限外濾過して、制癌性物質画分を採
   取する操作である特許請求の範囲第５〜１２項いずれか
   の項記載の製造法。 （＋４１　　酵素処理後制癌性物質画分を採取する操作
   が蛋白質分解酵素による酵素処理後の水可溶部を−によ
   り分割し、ｐＨ２，５以下に調整して得られる水可溶部
   の有効画分に親水性有機溶媒を加え、得られる沈殿物を
   イオン交換体で処理し、その非吸着画分を採取する操作
   である特許請求の範囲第１．３項記載の製造法。 ０９　　酵素処理後制癌性物質画分を採取する操作が蛋
   白質分解酵素による酵素処理後の水可溶部を−によ多分
   割し、ｐｉ４２．５以下に調整して得られる水可溶部の
   有効画分に親水性有機溶媒を加え、得られる沈澱物をイ
   オン交換体で処理し、その非吸着画分を限外Ｐ遇する操
   作である特許請求の範囲第１３填記載の製造法。 Ｏｅ　　分画榛弄分子量が５万〜２０万である濾過膜を
   使用して限外−過、する特許請求の範囲第３項〜第１５
   項いずれかの項記載の製造法。 ａｎ　上清液に親水性有機溶媒を加える操作が−１，５
   〜２．５に調整した上清液に親水性有機溶媒を加えるこ
   とである特許請求の範囲第２〜１６項いずれかの項記載
   の製造法。 ０槌　上清液に加える親水性有機溶媒が、アルコールで
   ある特許請求の範囲第２〜１７項いずれかの項記載の製
   造法。 θ場　親水性有機溶媒をその濃度が３０〜８０鳴（容量
   比）になるように上清液に加えることを特徴とする特許
   請求の範囲第２〜１８項いずれかの項記載の製造法。 （イ）　フンバクテリウム属に属する制癌性物質Ｔシー
   ３００−２生産菌が、フッバクテリウム・ヌクレアタム
   である特許請求の範囲第２〜１９項いずれかの項記載の
   製造法。 （ハ）　フッバクテリウム属に属する制癌性物質Ｔ？−
   ３００−２生産薗を培養し、その培養液から得られる制
   癌作用を有する画分を、除蛋白処理に付して得られる次
   の性状を有する制癌性物質ＴＩＦ　−３００−２又はそ
   の塩を含有することを特徴とする制癌剤。 止し免疫賦活作用を有する。 （ハ）水に溶解し、メタノール、エタノール、アセトン
   、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、ジエチルエー
   テルに不溶。 に）明確な融点を示さず、約１８０℃より分解を始め、
   １９５℃以上で著しく分解する。 （ホ）　ＫＢｒ錠剤法による赤外線吸収スペクトルは。 ３５００〜３３００．２９２０，２８５０．１６６０〜
   １６２０．１５８０〜１５４０゜１４６０〜１４００．
   １３８０〜１３６０．１１２０．１０８０〜１０２０．
   ９７０および８２０〜８００ＣＭ−１の近傍に吸収帯を
   有する。 （へ）ｐＨ７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸収
   末端に強い吸収があり、また２７０〜２８０ｎ！１１０
   近傍に吸収を示す。 （ト）モーリッシュ反応、フェノール硫酸反応。 アンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応。 ロウリー・フォリン反応は陽性、ニンヒドリン反応は陰
   性。 （ハ）元素分析値 Ｃ：３８−〜４７１６　　Ｈ：５優〜７％Ｎ：１慢〜４
   憾 （す）　　フェノール硫酸法による糖の含有率は、約１
   ６囁〜３０優（グルコース換算）およびロウリー・フォ
   リン法による蛋白質の含有率は約１０係以下（牛血清ア
   ルゾミン換算）である。