JPH021157B2

JPH021157B2 -

Info

Publication number: JPH021157B2
Application number: JP56022277A
Authority: JP
Inventors: Kenzo Tamai; Isamu Saikawa; Takashi Yasuda; Shohachi Murakami; Toyoo Maeda; Hisatsugu Tsuda; Hiroshi Sakai; Masatoshi Sugita; Yoshiko Yamamoto; Takashi Minami; Takako Hori
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Current assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1981-02-19
Filing date: 1981-02-19
Publication date: 1990-01-10
Also published as: JPS57139089A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は新規な制癌性物質、更に詳細にはフソ
バクテリウム属に属する菌を培養し、この培養液
から得られる制癌作用を有する有効画分を蛋白質
分解酵素による酵素処理に付して得られる制癌性
物質TF―350及びその塩に関する。更にまた、本
発明はこの制癌性物質TF―350及びその塩を製造
する方法並びにこれを含有する制癌剤に関する。近年各種の癌患者の治療法において、宿主の免
疫機能を亢進させ、免疫機能の助けを借りながら
制癌効果を発現させる治療法が盛んとなつてき
た。かかる療法に使用される薬剤としては、各種
細菌の菌体、菌体培養物から得られる成分、ある
いは担子菌の子実体又はその培養菌体から得られ
る多糖体が知られている。しかし嫌気性菌を培養
し、その培養液から優れた制癌作用を有する成分
の研究は少なく、特にフソバクテリウム属に属す
る菌を培養し、その培養液から得られる成分並び
にその制癌作用については未だ知られていない。本発明者は、ヒト口腔内より分離したフソバク
テリウム属に属する菌を培養し、その培養液から
菌体を除去した上清液から採取される成分につい
てその薬理作用を調べていたところ、特定の成分
が強い制癌作用を有すること、しかもこれは、コ
ロニー形成抑制法においては癌細胞の集落形成阻
止作用は小さく、殺細胞による制癌作用ではな
く、宿主介在性あるいは宿主の免疫力を亢進さ
せ、免疫力の助けを借りながら間接的に制癌作用
を発現させる作用を有するものであることを見い
だした。そして得られた制癌作用を有する画分を
更に蛋白質分解酵素による酵素処理に付して得ら
れる特定の成分は、同様に好ましい制癌作用を有
し、かつ副作用が少ない等制癌剤として好ましい
性質を有することを見いだし本発明を完成した。本発明で利用される菌としては、菌を培養した
上清液から得られる制癌作用を有する画分を蛋白
質分解酵素による酵素処理に付せば制癌性物質
TF―350を生成するフソバクテリウム属に属する
菌であればよく、好適なものとしては、フソバク
テリウム、ヌクレアタムが挙げられる。具体的に
は、例えば、フソバクテリウム・ヌクレアタム
TF―031（FERM―Ｐ No.5077、ATCC―31647）
および微生物学の一般常識としてその性質を有す
る菌株、すなわち、自然変異株あるいは人工的に
改良された菌株等が利用される。フソバクテリウム・ヌクレアタムTF―031の菌
学的性状を記載すれば以下のとおりである。 (1) 形態細胞の形：紡錘形（第１図）細胞の多形性の有無：なし運動性の有無：なし胞子の有無：なしグラムの染色：グラム陰性抗酸性：陰性 (2) 培地における生育状態 TF―ａ寒天平板及び斜面培地外形：円形大きさ：約１mm 隆起：半球状構造：露滴状表面：平滑辺縁：平滑色：乳黄白色透明度：不透明 TF―ａ液体培地発育の程度：旺盛濁り：凝塊沈殿：なし表面の発育：なし、約５mmまでは発育なしガス：なし (3) 生理学的性質硫化水素の生成：＋硫酸塩の還元：− 酪酸の生成：＋インドールの生成：＋ウレアーゼ：− カタラーゼ：− デンプンの加水分解：− 酸素に対する態度：嫌気性アンモニアの生成：＋炭酸ガスの生成：＋生育の範囲：PH５〜8.5 温度30〜45℃ 糖からのガスの生成Ｌ―アラビノース（−）、Ｄ―キシロース
（−）、Ｄ―グルコース（−）、Ｄ―マントー
ス（−）、Ｄ―フラクトース（−）、Ｄ―ガラ
クトース（−）、麦芽糖（−）、シヨ糖（−）、
トレハロース（−）、ソルビツト（−）、マン
ニトール（−）、イノシツト（−）、グリセリ
ン（−）、デンプン（−）以上の諸性状をバージーズ・マニユアル・オ
ブ・デイタミネイテイブ・バクテリオロジー第８
版に照らして検討すると、本菌株はフソバクテリ
ウム・ヌクレアタム（Fusobacterium
nucleatum）に酪似し、これに属する。つぎに本発明の制癌性物質TF―350の製造法の
一例を図式化して説明すれば、次のとおりであ
る。

【表】分離 →可溶部

Claims

【特許請求の範囲】１フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―350生産菌を培養し、その培養液から得られる
制癌作用を有する画分を蛋白質分解酵素による酵
素処理に付して得られる次の性状を有する制癌性
物質TF―350及びその塩。 (イ) 白灰色ないし淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌の増殖を阻止
し免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点を示さず、約110℃より分解を始
め、180℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは、
3500〜3300、2920〜2900、1660〜1630、1580〜
1520、1460〜1340、1140〜1100、1080〜1020、
970および820〜800cm^-1の近傍に吸収帯を有す
る。 (ヘ) PH７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは、吸
収末端に強い吸収があり、また245〜264nmの
近傍に吸収を示す。 (ト) TSK―GEL G3000SW（東洋曹達株式会社の
商品名、カラム：7.5mmφ×600mm×２）による
高速液体クロマトグラム（溶出液：PH７の0.1
モルリン酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）は
220nmの紫外線吸光度測定においては、溶媒先
端部分、24〜44分付近、46〜62分付近にかけて
吸収を有し、260nmの紫外線吸光度測定におい
ては溶媒先端部分、24〜34分付近、46〜61分付
近にかけて吸収を有する。 (チ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反応
は陰性。 (リ) 元素分析値Ｃ：34％〜37％Ｈ：５％〜６％Ｎ：１％〜
２％ (ヌ) フエノール硫酸法による糖の含有率は、約80
％〜95％（グルコース換算）、およびロウリ
ー・フオリン法による蛋白質の含有率は約10％
以下（牛血清アルブミン換算）である。２フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―350生産菌を培養して得た上清液に親水性有機
溶媒を加えて生ずる沈殿物の制癌作用を有する画
分を、蛋白質分解酵素による酵素処理に付して得
られる特許請求の範囲第１項記載の制癌性物質
TF―350及びその塩。３フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―350生産菌を培養して得た上清液に親水性有機
溶媒を加えて生ずる沈殿物をPHにより分割してPH
２付近に調整して得られる水可溶部に親水性有機
溶媒を加えて析出する沈殿物を蛋白質分解酵素に
よる酵素処理に付し、ついで制癌性物質TF―350
の画分を採取して得られる特許請求の範囲第１項
又は第２項記載の制癌性物質TF―350及びその
塩。４蛋白質分解酵素による酵素処理が、プロナー
ゼ又はトリプシン処理である特許請求の範囲第１
〜３項いずれかの項記載の制癌性物質TF―350及
びその塩。５フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―350生産菌が、フソバクテリウム・ヌクレアタ
ムである特許請求の範囲第１〜４項いずれかの項
記載の制癌性物質TF―350及びその塩。６フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―350生産菌を培養して得た上清液に親水性有機
溶媒を加えて生ずる沈殿物の制癌作用を有する画
分を、蛋白質分解酵素による酵素作用に付すこと
を特徴とする制癌性物質TF―350及びその塩の製
造法。７フソバクテリウム属に属する制癌性物質TF
―350生産菌を培養して得た上清液に親水性有機
溶媒を加えて生ずる沈殿物をPHにより分割してPH
２付近に調整して得られる水可溶部に親水性有機
溶媒を加えて析出する沈殿物を蛋白質分解酵素に
よる酵素処理に付し、ついで制癌性物質TF―350
の画分を採取することを特徴とする特許請求の範
囲第６項記載の制癌性物質TF―350及びその塩の
製造法。８酵素処理後、制癌性物質TF―350の画分を採
取する操作が、PHによる分割法、親水性有機溶媒
による沈殿分別法又はイオン交換体による分割法
の１種以上を組み合わせて処理し、制癌性物質
TF―350の画分を採取する操作である特許請求の
範囲第７項記載の制癌性物質TF―350及びその塩
の製造法。９酵素処理後、制癌性物質TF―350の画分を採
取する操作が蛋白質分解酵素による酵素処理後、
PHにより分割し、PH2.5以下に調整して得られる
水可溶部の画分に親水性有機溶媒を加え、得られ
る沈殿物をイオン交換体により分割し、非吸着画
分を採取する操作である特許請求の範囲第７項又
は第８項記載の制癌性物質TF―350及びその塩の
製造法。１０上清液に親水性有機溶媒を加える操作が、
上清液をPH２付近に調整した後親水性有機溶媒を
加える操作である特許請求の範囲第６〜９項いず
れかの項記載の制癌性物質TF―350及びその塩の
製造法。１１上清液に加える親水性有機溶媒がアルコー
ルである特許請求の範囲第６〜１０項いずれかの
項記載の制癌性物質TF―350及びその塩の製造
法。１２親水性有機溶媒をその濃度が30％〜80％
（容量比）になるように上清液に加えることを特
徴とする特許請求の範囲第６〜１１項いずれかの
項記載の制癌性物質TF―350及びその塩の製造
法。１３ PH２以下に調整して得られる水可溶部に親
水性有機溶媒を加えて析出する沈殿物を採取する
操作が、水可溶部に親水性有機溶媒の濃度が20％
〜60％（容量比）になるように加え、析出する沈
殿物を採取する操作である特許請求の範囲第６〜
１２項いずれかの項記載の制癌性物質TF―350及
びその塩の製造法。１４蛋白質分解酵素による酵素処理が、プロナ
ーゼ又はトリプシン処理である特許請求の範囲第
６〜１３項いずれかの項記載の制癌性物質TF―
350及びその塩の製造法。１５フソバクテリウム属に属する制癌性物質
TF―350生産菌を培養し、その培養液から得られ
る制癌作用を有する画分を蛋白質分解酵素による
酵素処理に付して得られる次の性状を有する制癌
性物質TF―350又はその塩を含有することを特徴
とする制癌剤。 (イ) 白灰色ないし淡褐色の粉末。 (ロ) マウスのエールリツヒ腹水型癌の増殖を阻止
し、免疫賦活作用を有する。 (ハ) 水に溶解し、メタノール、エタノール、アセ
トン、ベンゼン、クロロホルム、酢酸エチル、
ジエチルエーテルに不溶。 (ニ) 明確な融点を示さず、約110℃より分解を始
め、180℃以上で著しく分解する。 (ホ) KBr錠剤法による赤外線吸収スペクトルは、
3500〜3300、2920〜2900、1660〜1630、1580〜
1520、1460〜1340、1140〜1100、1080〜1020、
970および820〜800cm^-1の近傍に吸収帯を有す
る。 (ヘ) PH７の水溶液の紫外線吸収スペクトルは吸収
末端に強い吸収があり、また245〜264nmの近
傍に吸収を示す。 (ト) TSK―GEL G3000SW（東洋曹達株式会社の
商品名、カラム：7.5mmφ×600mm×２）による
高速液体クロマトグラム（溶出液：PH７の0.1
モルリン酸緩衝液、流速0.8ml／分、室温）は
220nmの紫外線吸光度測定においては、溶媒先
端部分、24〜44分付近、46〜62分付近にかけて
吸収を有し、260nmの紫外線吸光度測定におい
ては溶媒先端部分、24〜34分付近、46〜61分付
近にかけて吸収を有する。 (チ) モーリツシユ反応、フエノール硫酸反応、ア
ンスロン硫酸反応、インドール塩酸反応、ロウ
リー・フオリン反応は陽性、ニンヒドリン反応
は陰性。 (リ) 元素分析値Ｃ：34％〜37％Ｈ：５％〜６％Ｎ：１％〜
２％ (ヌ) フエノール硫酸法による糖の含有率は約80％
〜95％（グルコース換算）、およびロウリー・
フオリン法による蛋白質の含有率は約10％以下
（牛血清アルブミン換算）である。