JPS58149696A - 醗酵法ビタミンｂ↓１↓２の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、グロビオニパクテリウム（Ｐｒ・ｐｉｅｓｉ
−ｈａａｔｅｒｔｓ講）緘に属するビタミンＢ１．生産
菌を培地に培養して、菌体内に蓄積するビタミン”１１
を採取するビタミンＢｔｔの製法に関し、とくに。

特定の炭素源を含有する培地を用いて上記培養を行なう
ことによって、顕著に改善さ・れ死生度量でビタミンＢ
ｌｌを取得できる改善方法に関する。

更に詳しくは、本発明は、プロピオニバクテリウム属に
属するビタミンＢｌｌ生産両管培地に＠養し、菌体内に
蓄積するビタミンＢ□を採取する醗酵法ビタ（ンＢｌ！
の製法に於て、炭素源としてフラクトース′を含有する
培地で該げタミンＢ、生産菌ｔ−培養することを特徴と
する醗酵法ビタミンＢ８．の製法に関する。

従来、ビタミンＢ□生産菌たとえば！ロビオニバクテリ
ウム属に属するビタ建ンＢ□生産菌を培地中で培養して
、菌体内に蓄積するビタξンＢｌ！を採取するビタミン
Ｂ□の製法は知られている（飼えば、米国特許＆９５１
，０１　？　（１９１１０））。

本発明者等は、プロピオニバクテリウム縞に属するビタ
ｉ７Ｂ、、生産菌を利用して、ビタミンＢ１ｇを製造す
る醗＃法ビタ建ンＢ１．の製法について検討奮進めてき
た。

その結果、ｆロピオニパクテリウム楓に属するビタミン
Ｂ１１生産菌による醗酵法ビタｉンＢ１３の製造に際し
て、プロピオニバクテリウム属に鵬するビタミンＢ１１
生産菌が資化利用困峻な廃糖蜜を。

加水分解処理して得られる廃糖蜜の加水分解生成物カ、
グロビオニパクテリウム属に属するピタインＢ□生産菌
のビタミンＢ１！の菌体内蓄積量を九とえば、約２倍も
しくはそれ以上にも顕著に増大させる炭素源として有用
であることを発見した。

更に、研究を進めた結果、廃糖蜜の加水分解物中に含有
されるフラクトースが、上記ピタ１ｙＢ１１の蓄積量の
増大に関与していること、更に、該加水分解物に共存す
るグルコースの共存によって上記増大効果が妨害されな
いことを発見した。更に又、該加水分解物に代えて、フ
ラクトースが利用でき且つ該フラクトースの一部とくに
は＃１ｙ半量までの範囲の量をより安価なグルコ、−ス
で代換しても該フラクトースの上記増大効果が妨害され
ないことを発見した。

更に、工業廃物である安価且つ入手容易な上記廃糖蜜を
、加水分解処理して得られる廃糖蜜加水分解生成物が、
フラクトース及びダルコース以外に更に共存含有してい
る何等かの他成分が、これらフラクトース及びグルコー
スと協同的に作用するためと推測しているが、より好ま
しい結＊を示し、醗酵法ビタζンＢ□生産コストの約に
を占める炭素源として安価且つ入手容易な工業廃物から
の加水分解処理物が利用できる利さと相俟って。

本発明方法の工業的価値を一層高めることを知った。

従って１本発明の目的は、改善された醗酵法ビタξンＢ
□の製造を提供するにある。

本発明の上記目的及び更に多くの他の目的ならびに利点
は、以下の１載から一層明らかとなるであろう。

本発明方法によれば、炭素源としてフラクトースを含有
する培地に於て、プロピオニバクテリウム縞に輌するビ
タミンＢ１．生産菌を培養し、菌体内に蓄積するビタミ
ンＢ□を採取する。

廃糖蜜は、製糖工業のａ産物であって、製糖原料である
例えばサトウキビ、テンサイ汁などを濃縮し、砂糖の晶
キ採取を繰返して、母液中の非糖性有機物、転化糖、塩
類などの含量が増加するとともに粘度が高まり、砂糖が
経済的に晶出採取できなくなった時に残ったシロップ状
の黒褐色−腫物である０本発明に於ては、仁のような廃
糖蜜を加水分解した加水分解生成物、任意の製法で得ら
れたフラクトース、更には該フラクトースの一部好まし
くは約５０重量％までの範囲の量を、より安価なグルコ
ースで代換したフラクトース及びダルコース混合物など
を、炭素源として利用することができる。

上記廃糖蜜の加水分解は、例えば塩酸、硫酸の如き無機
酸１−、該廃糖蜜シロップ状液もしくはその水性稀釈液
に、液のｐＨが約１〜約４になるように添加し、温度約
６０°〜約１２０Ｃで加水分解処理することにより行う
ことができる。処理時間は適宜に選択できるが、例えば
約１０〜約３０分の如き処理時間を例示することができ
る。

あるいはまた転化酵素インベルターゼｔ−使用して行う
こともできる。例えば酵素インベルターゼを該廃糖蜜重
量に対して約α０５〜約αＳ％になるよう添加し、ｐＨ
約３〜約６．温度約２０〜約６０Ｃで転化処理すること
により行うことができる。処理時間は適宜選択できるが
、ｔｌｌえば約２〜約２４にデの如き処理時間ｔ？ｌＩ
示することができる。

本発明方法に於ては、炭素源として上記例示の如きフラ
クトース含有層電音用いるほかＦｉ、、それ自体公知の
培地、培養条件で実施できる。培地としては、炭素源、
窒素源を含有し、所望により。

更にミネラル類、ビタオン類、ビタｉ：／Ｂ□構成成分
などを含有する培地を利用することができる。

該炭素源としては、上述の如きフラクトースもしくは７
ラクトース含有炭素源を利用するが、更に他の炭素源を
含有して差支えない、このような他の炭素源としては１
例えば、ダルコース、マンノース、ガラクト−９口の如
き他の糖質類、例えば′乳酸、酒石酸の如き有機酸類、
例えば、グリセリンの如きアルコール類などｔｎ示する
ことができる。

これら他の炭素源は単独でも複数糧適宜に組み合わせて
でも利用することができる。

又、ｉａ累源の例としては、たとえば、アンモニア塩類
、硝酸塩類りどの如き無機窒素化合物；たとえば、ペプ
トン、＃母エキス、カゼイン、肉エキス、コーン・ステ
ーブ・リカー、サンダロス、尿素、大豆粕、魚粕、醗酵
廃棄物１等を例示することができる。

更に、５．６−シメチルペンズイミメゾールの如きビタ
ミンＢ１１１１１成成分、す／酸塩類、マダネシウム塩
類、カリウム頃類、カルシウム塩類、マンガン塩類、コ
バルト塩類、鉄塩類％亜鉛塩類。

モリブデン塩類、銅塩類、アルオニウム塩類、／４ント
テン酸の如きビタきン類などの如きミネラル類乃至ビタ
ミン類、ビタミンＢ□構成成分類などを例示することが
できる。

培養は好ましくは嫌気性条件下に行うことができ、培養
方式としては、調えば静置培養方式、Ｎ８がスやＣＯ，
ガスによる通気攪拌培養方式などの培養方式を好ましく
例示できる。培養温度としては約２５°〜約３７Ｃの温
度条件、培養ｐＨとしては約４〜約＆５．より好ましく
は約５〜約７．５゜更には約６〜約７程度のｐＨ条件を
例示することができる。培養ｊＨＩＩ′ｉ、適時に例え
ば、炭酸ナトリウム、水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム、アンモニア水などの如きアルカリ類を培養系に脩加
して、上記例示ｐＨ範囲に系のｐＨを調整して行うのが
よい、ｔ＠養日数としては約３〜約１０日程度の日数を
例示することができる。

本発明方法に於ては、グロピオニノ者りテリウム属に属
するビタ１ｙＢｌｌ生産曹を利用する。

このようなビタ建ンＢ□生産薗としては、例え−ば　ｆ
ａぜオニバクテリウム・シャーマニー（Ｐｒｇｉｏ＊４
ｈａｅｔｇｒｉｓｍ　ａｋｇｒｖｗｘｓｉ（）Ｉ　Ｆ０
１１８９１　　株　（１ｍａｔｉｔｓｔａ　　ｆ＠ｒ　
　Ｆａｒｖｍａｎｔａｔｉｏｖｈ。

０８ＡＫＡ、　　Ｊａｐａｎ　　＄　自由分ｉ１１公知
１　）　Ｅ　ｆ　’　”オニバクテリウム・７０イデン
ライヒ（Ｐデａｐｔｏ＊４−ｂａａｔａｒｉｓｔｍ　ｆ
ｒａｗｄａ算ｒａｉｏｋｉｉ　）Ｉ　Ｆ　Ｏ１１！　４
　鵞４株（Ｉｎａｉｔ４ｔｓｔａ　ｆｏｒ　Ｆｅｒｙ＋
ｕｓｔａｔ、ｉｏ鴨、　０８ＡＫＡ。

Ｊａｐａｎ　　Ｈ自由分−公知菌〕など１にカ示するこ
とができる。上記例示菌株Ｆｉ、、夫々、上記したを託
機関に、上記した寄託番号で寄託されている公知自由分
鋼菌である。又、他のピタインＢｉ、生産劇として沈降
速度の向上したプロピオニ・母りテリウム・シャーミニ
−Ｎ０Ｃ１１０１１薗株（ＦＥＲＮＢ　Ｐ　−８５＄　
Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｒａａａａｒａｋ　Ｉｎ５
ｔｉｔｕｔｅ。

Ａｇｅｎｃｙ　　ａｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　　Ｂｉ
ａｓｅｓ　　ａｓｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。

Ｊ＠ｐａｍ１ツメペスト条約に基づく国際寄託菌〕。

史に、グロピオン酸耐性を賦与されたビタミンＢ１１生
産函グロピオニパクテリウム・シャーマニイＮＯＣ１１
０１Ｍ〔ＦＥＲＭ　　ＢＰ−８６゜Ｆｅｒｍｅｎｔａｔ
ｉｏｎ　Ｒｅｓ＃ａｒ＃五　Ｉｎａｔｔｔｓｔａ　　Ａ
ｇｅｎｃｙｏｆ　Ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ　Ｂｉａｓｅｓ
　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。

１６９６１％１　プメペスト条約に基づく国際寄託菌〕
、グロピオン酸耐性を賦与され九ビタンンＢｌｌ生産菌
グロピオニパクテリクム・フロイデンライヒＮ０Ｃ１１
０１Ｓ〔ＦＥＲＭ　　ＢＰ−８’１ｇＦｅｒｍｅｎｔａ
ｔｉｏｎ　Ｅａａａａｒｅｋ　　Ｉ旙ａｔｔｔｓｔａ　
　Ａｇｅｎｃｙｏｆ　Ｉｓｄｓｓｔｒｔｍｌ　　Ｂｉａ
ｓｅｓ　　ａｎｄ　Ｔａａｋ霊ｏ１ｅｇｙ＊Ｊａｐａ算
；ブダペスト条約に基づく国際寄託菌〕などを利用する
ことができる。

上記プロピオニバクテリウム・シャーマ二一＃、０（：
’１１０１１繭株の菌学的性質は、培養系を静置した際
の菌体の沈降速度が親菌株プロピオニバクテリウム・シ
ャーマニーＩＪ’０１！３１１１株より速いという以外
は、該親菌株について公知のそれらと同一である。又、
上記プロピオニバクテリウム・シャーマニーＮＯＣ１１
ｏｓｓ菌株の菌学的性質は、グロピオン酸耐性がよυ大
であるという以外Ｆｉ、その親菌株であるプロピオニバ
クテリウム・シャーマニーＩＦ０１２３９１株１／Ｃつ
いて公知のそれらと同一である。更に、上に２グロピオ
ニ／ぐクテリウム・フロイデンライ、ヒＮ０Ｃ１１０１
３菌株の菌学的性質は、！ロピオン酸耐性がより大であ
るという以外は、その親菌株であるプロピオニバクテリ
ウム・フロイデンティヒＩＰ０１２４ｇ４株について公
知のそれらと同一である。

そして、これら親菌株の菌学的性質は公知であり、例え
ば、Ｂａｒｇｙ’ａ　ＭａｎｓＬａｌ　ｏｆ　Ｄａｔａ
ｒｍイｓａｔｓｖｇＢａａｔａｒｔｏｔｏｇｙ、第８版
に記載されている。

尚、上記プロピオニバクテリウム・シャーマニ−ＮＯＣ
ＩＩＯＩＩｑ）製法については同−出願人の同日付出願
に係わる特願昭５７−　　　　　号（発明の名称：醗酵
法ビタミンＢ１．の製造方法）の参考１ＦＩＨに例示さ
れており、又、上記グロピオニハクテリウム會シャーマ
ニ−ＮＯＣ１１０１２及びプロピオニ／奇りテリウム・
フロイデンライヒ＃０Ｃ１１０１３に代表されるグロピ
オン酸耐性菌株の製法は、同一出願人の同日付出願に係
わる特願昭５７−　　　　　号（発明の名称：醗酵法ビ
タミンＢ１１の製法及びその生腫ｖｉｔ＞に詳しく開示
されている。

本発明方法によれば、プロピオニバクテリウム（Ｐｒｏ
ｐｔｏｓｉｈａｏｔａｒｉｍｍ　）属に属するピタｔン
Ｂ□生産菌を培地に培養し、菌体内に蓄積するビタミン
Ｂｌｌを採取する醗酵法ビタミンＢ１ｍの製法に於て、
炭素源としてフラクトースを含有する培地で該ビタミン
Ｂ１１生産１１ヲ培養することによって。

顕著に増大された生産量でビタインＢ、金生産させるこ
とかできる。

ビタミンＢ１．の採取は、培養！ロスを例えば遠心分離
処理して菌体を分離採取し、該菌体からビタミンＢ１冨
を分離採取することにより行うことができる。

該ビタミンＢ１１の菌体からの分離採取、Ｊ！には精製
は１種々の手段で行うことがでもる。

例えば、補酵素型ビタミンＢ□（，５，６−シメチルペ
ンズイミダゾールコパミドエンザイム）の形で、菌体か
ら分離する場合には、採取した菌体。

もしくは菌体細胞膜を例えば胎砕の如き物理的手段や超
音波手段で破砕した菌体破砕１Ｌメタノール、エタノー
ル、イソグロノ９ノールなどの如きアルコール類やピリ
ジンなどの如き溶剤を用いて。

暗所で抽出することにより、菌体から抽出分離すること
ができる。又、ヒドロキソコバラインの形で菌体から抽
出分離する場合に＃′ｉ、上述のようにして得られる補
酵素型ビタミンＢ１ｍの抽出液に光を当てることにより
、ヒドロキソコノ々ラミンの形に転化させることができ
る。更にジアノコバラミンの形で菌体から抽出分離する
。場合には、上述の如き溶媒とシアン塩たとえば、ＫＣ
Ｎ、ＮａＣＮなどの共存下に抽出することにより、ジア
ノコバラミンの形で抽出分離することができる。

又、他の態様によれば、菌体の細胞膜を上述のようにし
て破砕した菌体破砕物液、或は又菌体もしくはその破砕
物を上記例示の如き抽出溶媒で抽出した抽出液などの如
き挾雑成分を含むビタンンＢ、含有液を、吸着剤を用い
て吸着−溶出処理することにより一挙に精製分離するこ
ともできる。

この態様においては、同一出願人の先願発明に係わる手
段・を利用することができる。

例えば、同一出願人の出願に係わる特願昭５５−１６フ
３マ５号に開示され九提案に従って、例えば、前述の如
き菌体もしくは菌体破砕物の婢媒抽出液や菌体破砕物液
の如き挾雑成分を含むビタＺ　ンＢｔ＊　含有液’に、
ジビニルベンゼン、スチレンもしくはその官能性誘導体
、例えば、メチルスチレン、エチルスチレン、ジメチル
スチレン、ｆロピルスチレンなどのＣ３〜Ｃ，アルキル
基を有するアルキル置換誘導体の如き官能性誘導体、及
び下記式 但し式中、Ｒは炭素−炭素間二重結合を有するＣ１−Ｃ
１，の不飽和アルキル残基を示し、ｓは２又は３である
。

で衆わされる芳香族多価カルーン酸不飽和アルキルエス
テル、Ｉｉえば、１．１！、４−ベンゼントリカルＩン
酸トリイソプロペニルエステル、テレフタル＃Ｉゾイソ
グロペニルエステルの如きジーもしくはトリーＣａ’＝
ｃｔｍアルケニルエステル類、より導かれた共重合体樹
脂であって且つ表面積が約７００１１’／ｆ以上の樹脂
と接触させて、該樹脂にピタ（ンＢ□ｔ−吸着させ、該
吸着されたビタミンＢ□を溶出剤により溶出させて活性
溶出分画を取得する態様で行うことができる。上記吸着
及び溶出はパッチ方式でもカラム・りａマトダラフイ一
方式でも行うこセができる。吸着は％ガえばｐＨ約５〜
約８．より好ましくは約７前後のｐＨ条件及び例えば約
１０”〜約３００の如き温度条件で行うことができる。

又、吸着処理＆、所望により洗条装置を施し、溶出処理
を行って活性溶出分画を得ることができる。

上記洗条処理としては、飼えば水、低濃度の含水アルコ
ール類たとえば５％メタノール水、！％エタノール水％
　１％イソ７’ｏ）々ノール水による洗条処場ｔ−例示
できる。

又、上記溶出剤としては、普通の溶出剤が利用でき１例
えば、低級アルコール類、酸類、アルカリ類及び塩類よ
りなる群からえらばれた溶出剤を含有する水性溶液を例
示することができる。このような溶出剤の具体例として
は、ｆｃとえば、メタノール、エタノール、イソグロノ
々ノールの如き低級アルコール類蟇たとえば、？ん酸、
酢酸、ホウ＃、塩酸の如き酸類富たとえば、水酸化ナト
リウム、リン酸−アンモニウム％りん酸ニアンモニウム
、水酸化アンモニウムの如きアルカリ類！たとえば、炭
酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、りん酸ナトリウム、り
ん酸カリウムの如き１＠；を例示することができる。こ
のような溶出剤の′Ｉｓ類は。

挾雑成分のｍ類及び量、吸着剤樹脂の種類などによって
も、適宜に選択できるが、低級アルコール類の水溶液の
利用が好ましく１例えば、２５〜ＢＯ％メタノール、１
５〜４０％エタノール、６〜２０％イソグロΔノール等
の如きアルコール含量約５０％以下の含水アルコール類
の利用が例示できる。溶出操作も室温で行うことができ
、とくに加温もしくは冷却の必要はないが望むならば行
ってもよい０例えば約３０〜約６ｏＣの如き操作温度を
例示することができる。

このようにして溶出した活性溶出分画を取得し。

所望により、濃縮、再結晶化などを行うことができる。

又例えば、同一出願人の出願に係わる特願昭５！＄−１
１７１７４号に開示された提案に従って、前述の如き挾
雑成分を含むビタンンＢ□含有液を、最多−縦紬孔径〔
［多孔材料Ｊ３１〜）３頁（近藤連−著、昭和４８年９
月５日技報堂発行）に記載される一定及び決定方法によ
り得られる値〕が罠とえは刺冨ｏｏ〜豹！冨・＠Ａ′ｃ
、且つ細孔容積がａ　ｓ　ｄ／　ｆ　１に超エル、タト
ｔハ０．６１１４／ｆｔ−超え約ｔ２ｄ／を程度の槌目
の、ソーニルベンゼン／スチレン系共重合体樹脂と接触
させて、ｍ＊脂にビタミンＢ１１２！ｉ−吸着させ、核
吸着され次ビタミンＢ１．を溶出剤により溶出させて活
性溶出外−を取得する態様で行うこともできる。

この際、利用で茜る市場で入手可能な該１１脂の例とし
ては、ダイヤイオンＢＰ−Ｌ　Ｏ，ＨＰ−２６、ＨＰ−
８０、ＨＰ−４０，ＭＰ−５ｏ　（商品名：三菱化成社
製品）などを例示することができる。このような樹脂は
、ジビニルベンゼンとスチレンもしくはその官能性誘導
体、たとえば前記例示の如きスチレンの官能性誘導体、
との共重合反応によって製造することもできる。

る。吸着ｌ後、所望により行う洗条処理、溶出処理の操
作及び条件についても、前記提案について説明したと同
様な操作及び条件で行うことができる。

本発明方法の実施に際しては、上述のようにして菌体か
らビタミンＢ□を採取、更に所望により積装することが
できる。ｎ製手段としてＩＩ′ｉ、、他の公知＋段も利
用でき、例えば、フェノール抽出手段、活性炭による吸
着手段、鳩分子樹脂による吸着手段、あるいはカラムク
ロマトダラフイ一手段などを適宜組み合わせて行うこと
ができる。

以下、実施例により１本発明方法実施の数例について更
に詳しく説明す今。

実施例１ 廃糖蜜（含水率ｓＯ％）１００ｆｔ水１ｊＫ溶かし、塩
酸でｐＨＭに調整し、１ｏｏＣで３０分間加熱加水分解
した。分解液１ｊに対してコーンスチープリカーａｎｔ
、Ｎ九Ｎｏ、　３１％に鵡ｐｏ。

（Ｌ　４　　ｆ、　　Ｎａ１ＨＰＯ，−１２Ｈ，ＯＬ　
５　　ｆ、Ｍｇ５Ｏ，−７Ｉ−〇α５　ｆ、　Ｃｏ　（
Ｎｏ、）、　−６Ｈ，ＯＩ　Ｓ　ｑ、　　ｌｌ悌ＳＯ，
−丁Ｈ，０１０ダ、Ｍ算ＳＯ４・４Ｍ、０　５ダ、　Ｃ
襲ｓｏ、−ｓＨ，Ｏｓ　Ｏｓｆ、　　（ＮＨ，）６Ｍ＊
、０．．−４Ｈ，Ｏｌ。

μｆ、ノダントテン酸カルシウムｓｑ、ｓ、ｓ−ｙメチ
ルペンズイミメゾール１０ｑＦおよびＣａＣ０゜１０ｔ
を含む培地ｐＨ７に調整しｓｏ〇−容量の三角フラ、ス
コに２００ＷＪ入れ１！（Ｉ’でＩｏ分間加圧蒸気殺菌
した。

上記培地にＰｒｏｐ、　ａルーｒｗａｓｓｉ　Ｉ　ＦＯ
１！　３１１１を植菌しＳＯＣで７日間装置培養した。

なお、＠養牛のｐＨは１日１回２０％Ｎ〜ＣＯ１を用い
てＴ付近に間欠調整した。

Ｂ１１の定量は以下のようにして行った。すなわち、培
養液α３−に酢酸バッファー（３ｅＨ４７）４％ｍＩと
ＫＣＮｌｔｌＩ液！−とを加え８５０以上で１！！分間
煮沸し、画体内のＢｕｔ”温水抽出すると同時に安定な
ＣＮ型にかえる。これｔＢ□要求菌であルＬａａｔｏｈ
ａａｉｌｌｓａ　Ｉｓ（ａＡｗｓｓ（（ＡＴＣＣ］８３
０を用い、シアノコパラずンを基準として微生物定量し
九。

培養７８目のＢ□生産量を求めたところ２１智／Ｊであ
った。

比較例１ 実施Ｍｌに示し九廃糖蜜１ＧＯｆの代りにダルコースＳ
ｏｔを水１１に溶かし、他同様の培地成分を同量加えＰ
ｒｏｐ、　ａｋａｒｔｎａｓＮ　Ｉ　Ｆ　０１２３９１
を［１１７日関静置培養を行った。培養７８目のＢ□生
産量を求め九ところ１０智／Ｉであった。

実施例２ 実施例ｌに示した廃糖蜜１００ｆの代りにフラクトース
５０ｆを水ｌｏＫ＠かじ、他同様の培地成分を同量加え
Ｐｒａｙ、　ａｋａｒ９Ｍ＊ｉｉ　Ｉ　ＦＯ１２３９１
’ｆｌｊ植菌しＴ日間静置培養を行った。培養７８目の
Ｂ、生産量を求めたところ！４ｗｇ／ｊであつ喪。

実施例３ 廃糖蜜（含水率５０％）１００ｆｔ−水１１に溶かし、
塩酸でｐＨ２に調整し、１００Ｃで３０分間加熱加水分
解した。分解液１１に対してコーンスチーグリカ−４０
９％ＮＨ，Ｎｏ、　３　ｆ、　ＫＨ，ＰＯ。

α４　ｆ、Ｈａ、ＨＰＯ，・Ｌ２Ｅ、ＯＬ　！Ｉ　ｆｌ
ＭｇＳＯ，−’ＩＨ，Ｏ（Ｌ　５　ｆ、Ｃｏ　（Ｎｏ、
）、　−６Ｈｍ’０　１　！！　ｑｐ％Ｚ鴨ＳＯ，・Ｉ
Ｈ，ＯｌＯ叩５Ｍ舊ＳＯ，・４Ｈ，０５呼。

Ｃ襲ＳＯ４・５Ｈ，０５０μｆ、（ＮＨ，）６ＭＯ，０
，、・４Ｈ，０１０μｔ、ノぐントテン酸カルシウムｓ
雫。

５．６−シメチルペンズイミメゾール１０ダおよびＣａ
Ｃ０，１Ｏｆ　’に含む培地ｔｊＨ？に調整し５００１
１４容量の三角フラスコに！Ｏ〇−入れ１１０Ｃで１０
分間加圧蒸気殺菌した。

上記培地にＰｒｏｐ、　ｆｒａｍｄａ＊ｒｅｔｅｋｉ４
１Ｆ０１！４！４ｔ−植菌し３０ＣでＴ目間静置＠養し
た。

なお、培養中のｐＨＢ１８１回２０％Ｎａ、Ｃｏ１を用
いて７付近に間欠調整し九。

Ｂ１１の定量は以下のようにして行った。すなわチ、啼
養液（Ｂ３−に酢酸ノクツファ−（ｐＨ也７）４ｆｉｌ
ｌｌｊとＫＣＮ１ｆ／Ｉ液１ｗＪとを加え８５Ｃ以上で
１５分間煮沸し、・菌体内のＢ□を温水抽出すると同時
に安定なＣＮ＠にかえる。これをＢ１ｍ要求菌であるＬ
＠ａｔｏｋａｍｉｌｌｖｂａ　ｌａ４ｇｈｔｎａｎ＊ｔ
イＡＴＣＣ？　８３１）を用い、ジアノコバラミンを基
準として微生物定量した。

培養７８目のＢ１１生竜量を求めたところ１５ダ／ｌで
あつ九。

比較Ｎ！ 実施例３に示した廃糖蜜１００ｔの代りにダルコース５
０ｆｔ−水１ｊＫ、溶かし、他同様の培地成分を同量加
えＰｒｏｐ、　ｆｒａｓｄａｓｒａｉｅｈｉｔ　ＩＦ０
１！４！４ｔ−植値し７日間装置培養を行った。培養７
８目のＢ、生産ｉｔ求めたところ７Ｑ／Ｉであった。

実施例４ 実施例３に示した廃糖蜜１ＧＯｆの代りにフラクトース
５０ｆｆ水１ｊＫ溶かし、他同様の層端−成分を同量加
えＰｒｏｐ、　ｆｒａｓｄａｙａイａｈｉｉｌＦ。

“１２４２４を植菌し７日間静置培ＩＩＩを行った。培
養７８目のＢ、生産量を求めたところ１７ダ／１であっ
た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 Ｌ　デＱ　％／　オｘ−１４クテリウＡ　（Ｐｒａｐｉ
   ｍｍｉｈａｅ−ｔ−デ（％憤）馬に属するＣタインＢ□
   生産画を培地に培養し、菌体内に着積するｒクミンＢ１
   １を採取するｆＩＩ＃法ビタ建ンＢ、倉の製法に於て、
   炭素源としてフラクトースを含有する培地で該ビタミン
   Ｂ１゜生産菌を培養することを特徴とする醗酵法ビタミ
   ンＢ□の製法。 ２　該炭素源として該フラクトースのほかにダルコース
   を含有する培地で培養することｔ特徴とする特許請求の
   範囲ｌ１１項記載の製法。 龜　該炭素源としてフックドース及びダそコースを含有
   するＩＩＩＩＩｌ蜜の加水分解生成＊１含有Ｊする培地
   で培養することｔ特徴とする特許請求の範囲第１項も“
   しくに第２項記載の製法。