JPS5815924A - 免疫吸着材 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、生体免疫機能に起因する各種疾患と密接な関
係をもつと考えられているイムノグロブリンおよび／ま
たはイムノグロブリン複合体を特異的に吸着除去するグ
ロブリン系化合物の吸着材、および該吸着材を利用した
グロブリン系化合物の吸着除去装置に関する。

周知の如く、血液中に発現するイムノグロブリンおよび
／またはイムノグロブリン複合体は、癌、免疫増殖性症
候群、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス等の
自己免疫疾患、あるいはアレルギー、臓器移植時の拒絶
反応等の生体免疫機能に関係した疾患および現象の原因
あるいは進行と密接な関係をもっていると考えられてい
る。

そこで、血液、血漿等の体液成分から、上記イムノグロ
ブリンおよび／またはイムノグロブリン複合体を特異的
に吸着除去することによって、上記の如き疾患の進行を
防止し、症状を軽減せしめさらには治癒を早めることが
期待されていた。

本発明者らは、上記要請に沿って鋭意研究した結果、実
に驚くべきことには、不溶性担体に結合した疎水性化合
物および／または疎水性化合物を含むオリゴマーが極め
て高活性にイムノグロブリンを吸着すること、特に自己
抗体、免疫複合体を特異的に吸着することを見い出し、
先に特許出願した（％願昭５６−７１５２号）。

本発明は、先の発明に関して担体についてより詳細に検
討した結果なされたものであシ、担体の改良に関する。

従来、本目的を対象として特別に設計された担体は知ら
れていない。したがって、通常アフイニテイクロマトグ
ラフイ用として公知の担体を転用する他はなかった。公
知の担体としてよ、アガロース系担体、デキストラン系
担体、セルロース系担体等の天然高分子系担体、ポリア
クリルアミド系担体、ガラス系担体等が知られている。

しかしながら、天然高分子系担体は治療用に用いる時、
以下の欠点を有する。

ｔｌ＋機械的強度が不十分なために操作上の制約が多い
。たとえば活性化、固定化等の吸着体の調製時に破壊さ
れたり、輸送、使用時に担体のカケ、クダケが生じる。

（２；軟質ゲルであるため、カラムに充填し体外循ｌｊ
Ｋ用いる場合に、除去すべき物質を含む体液を高流速で
流すことができない。体液のような高粘度、高溶質濃度
液を高流速で流すと、軟質ゲルであるため、充填体積が
減少し、目づまりと流量低下をおこし、ついには流れな
くなる場合もある。

（３）軟質ゲルでありパーマネントポアーではないため
、体外循環治療用吸着材の必須要件である滅菌操作も容
易に行えない。例えばエチレ／オキサイドガス滅菌のよ
うに薬剤滅菌の場合、凍結乾燥して滅菌されるが、凍結
乾燥によって細孔が破壊され、再び水系媒体に分散して
も元にもどらない。

凍結乾燥時その体積は約半量まで減少し、再び水系媒体
に分散しても元の体積のたかだか８．０％程度にしかも
どらず、吸着能力も減少するのが常である。凍結乾燥時
細孔を保護するため、添加剤を混入して行う方法もある
が、添加剤が体液に入るのを防ぐため、使用前に徹底的
な洗浄を施さなければならない。また高圧蒸気滅菌のよ
うな熱滅菌も細孔を破壊するので用いることができない
。同様に放射線滅菌もその骨格および細孔を破壊するの
で用いることができない。

（４）さらには天然高分子系担体は体外循環治療用に用
いる時、補体系の活性化、凝固系の活性化がおこり、ロ
イコベニア、スロ／ボサイトベニア等を生来するといわ
れ、あまり好ましくない。

−ポリアクリルアミド系担体は、物理的、化学的に比較
的安定であるという長所を有するものの、血漿タンパク
の非特異的吸着が生じ、またアクリルアミドの残留毒性
も無視し得ない。ガラス系担体は物理的、化学的に安定
であるが、血漿タンパクの非特異的吸着が著しく、また
全血に用いる場合には血栓形成を起こし、用いられない
、本発明の目的は、上記の如き従来技術に基づく担体の
問題点に艦み、一般的に普及可能であり、イムノグロブ
リンおよび／ｌたはイムノグロブリン複合体を高活性か
つ特異的に吸着し、安定な活性を保持し、安全性があり
、滅菌操作°も簡易に行　５− なうことができ、体液浄化あるいは再生用に適した吸着
材およびそれを利用した吸着装置を提供せんとＪるもの
である。

本発明者らは、上記目的に沿って研究を進め、各糧の担
体に疎水性化合物および／または疎水性化合物を含む重
合体を結合し、イムノグロブリンおよびイムノグロブリ
ン複合体に対する結合活性および血漿タンパクの非特異
吸着と全血に対する使用可否等を評価したところ、実に
驚くべきことには、ビニルアルコール単位を主構成成分
とする共重合体が担体として極めて好結果を与えること
を見い出し、本発明を完成するに至った。

すなわち、本発明は、ビニルアルコール単位を主構成成
分とする架橋共重合体からなる担体に、疎水性化合物お
よび／または疎水性化合物を含む重合体が結合されてい
ることを特徴とするイムノグロブリンおよび／またはイ
ムノグロブリン複合体の吸着材に係９、また、前記の吸
着剤を流体の導出入口を有する容器内に収容してなるこ
とを特徴とするイムノグロブリンおよび／またはイムノ
　６− グロブリン複合体の吸着装置に係る。

本目的に用いる担体としては、■血漿タンパクの非特異
吸着が少ない、■補体系、凝固系を活性化しない等の血
漿タンパクとの相互作用特性および吸着特性が要求され
る。また安全性の面では、■滅菌可能であること、■物
理的強度があり、担体のカケやクダケが発生しないこと
、■担体より溶出物がないことが要求される。さらに全
血用吸着材として用いる場合には、血球成分との相互作
用、すなわち、血栓形成や血球成分の非特異粘着残血等
が問題になる。デキストラン、アガロース、セルロース
等の糖を含む天然高′分子系担体は、血球、血漿成分と
相互作用し、補体系の活性化、凝固系の活性化を起こす
。一方、合成高分子系担体は、比較的これらの問題を起
こさないとされている。本発明者らは、合成高分子担体
について検討した結果、ビニルアルコール単位を主構成
成分とする共重合体からなる担体は、以上の未解決の問
題をみごとに解決することを見い出した。

ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共重合体
からなる担体は、その親水性のため、血漿中のタンパク
質等溶質との相互作用が小さく、非特異吸着を最小限に
低下させる。また血漿中の補体系、凝固系と相互作用し
ない等の極めて優れた特性を有する。物理的特性の面で
も、耐熱性を有し、熱滅菌を可能ならしめ、さらには合
成高分子の特性である物理的機械的強度に優れている。

全血用吸着材の担体として用いる場合にも、血球成分と
の相互作用が少なく、血栓形成や血球成分の非特異粘着
、残血等を最少限におさえる等の極めて優れた特性を併
せ持っている。

本発明の架橋共重合体の水酸基の密度は、高くなればな
るほどその親水性が増加し、血液成分との相互作用を最
小にする上では好都合であり、また活性化試薬で活性化
した場合の活性基密度も高水準に保持でき好ましいが、
一方、架橋密度（架橋剤含誉）との関係で、物理的、機
械的強度が低下する。したがって、□水酸基密度として
は５〜１７ｍｅｑ、・ｌが好ましく、より好ましくは６
〜１５暉−である。

水酸基密度は、担体をピリジン溶媒中で無水酢酸と反応
させて、水酸基と反応して消費した無水酢酸の量または
担体の重量変化を測定し、これから求めることができる
。乾燥担体１ｇが１　ｗｗｎｏＬの無水酢酸と反応した
ときの水酸基密度が１暉１である。

ビニルアルコール単位を主構成々分とする架橋重合体は
、水酸基を有するモノマーの重合またはポリマーの化学
反応による水酸基の導入により合成できる。両者を併用
して合成することもできる。

重合方法としては、ラジカル重合法を用いることができ
る。架橋剤は重合時共重合により導入してもよいし、ま
たポリマーの化学反応（ポリマー間、□ポリマーと架橋
剤）で導入してもよく、両者を併用してもよい。

一例をあけると、ビニル系モノマーとビニル系またはア
リル系架橋剤との共重合により作ることができる。この
場合のビニル系モノマーとしては、酢酸ビニル、プロピ
オン酸ビニル等のカルボン酸のビニルエステル類、メチ
ルビニルエーテル、エ９− チルビニルエーテル等のビニルエーテル類を例示するこ
とができる。

架橋剤としては、トリアリルイソシアヌレート、トリア
リルシアヌレート等のアリル化合物類、エチレングリコ
ールジメタアクリレート、ジエチレングリコールジメタ
アクリレート等のジ（メタ）アクリレート類、ブタンジ
オールジビニルエーテル、ジエチレングリコールジビニ
ルエーテル、テトラビニルグリオキザール等のポリビニ
ルエーテル類、ジアリリデンペンタエリスリット、テト
ラアリロキシエタンのようなポリアリルエーテル類、グ
リシジルメタクリレート等のグリシジルアクリレート類
を用いることができる。また必要に応じて、他のコモノ
マーを共重合したものも用いることができる、 ビニル系共重合体の場合に社、カルボン酸のビニルエス
テルとインシアヌレート環を有するビニル化合物（アリ
ル化合物）を共重合し、共重合体を架水分解して得られ
るポリビニルアルコールのトリアリルイソシアヌレート
架橋体が、強度、化　１０− 学的安定性の面で特に良好な担体を与える。

以上ビニル系共重合体の場合を例示したが、本発明社、
これに限定されるものではない。

本担体の形状としては、球状、粒状、糸状、中空糸状、
平膜状等いずれも有効に用いられるが、その担体表面積
（吸着材としての吸着能力）および体外循環時の体液の
流通面より、球状また祉粒状が特に好ましく用いられる
。−シたがって、担体の合成法としては、公知の懸濁重
合法が特に有効（用いられる。

球状または粒子状担体の平均粒径は２５〜２５００μｍ
のものを利用できるが、その比表面積（吸着材としての
吸着能力）と体液の流通面より、１５０〜１５００μｍ
のものが特に好ましい。

本発明においては、架橋共重合体の比表面積が少なくと
も５　ｄ／９を保持するものを用いる。

比表面積と社、乾燥架橋共重合体単位重量当りに吸着し
た窒素ガスが占有する表面でもって表示したものである
。つまり比表面積は単位重量の架橋共重合体を構成する
物質が乾燥状態でいかに有効に表面を形成しているかを
表示している。

一般に架橋共重合体は、その架橋共重合体と親和性のあ
る媒体中で膨潤し、乾燥すると収縮する。

膨潤時に媒体が満たされているボアーが架橋の網目のみ
で維持されている軟質ゲルの場合は、乾燥すると網目が
つぶれてしまい、ボアーはほとんど消失する。この場合
の比表面積は、はとんど粒子の外側だけの値になるため
、一般に１　ｄｙ′り以下の低い値を示す従来アフイニ
テイクロマトグラフイ用として知られているアガロース
は軟質ゲルであるため、乾燥によってボアーが消失して
しまう。

したがって、滅菌操作も容易に行えず、さらにはつぶれ
やすい軟質の網目を持っているため、カラムに充填し体
外循環に用いる場合にも、体液を長時間、高流速で流す
ことができない。

一方、ボアーがしつかシした構造をもち、凍結乾燥や熱
滅菌に耐える硬質ゲル（架橋共重合体）の場合には、乾
燥し九際にボアーは多少収縮するものの、膨潤時の状態
をほとんど維持する。つまりパーマネントポアーを有し
、比表面積は軟質ゲルより高い値を示し１、少なくとも
５　ｗ？７９以上の値を示した。

本発明の比表面積の測定は、最も一般的な窒素ガスによ
るベット法（ＢＥＴ法）で求めた。また比表面積測定に
用いるサンプルは、十分乾燥しておかなければならない
が、本発明の架橋共重合体は乾燥しにくいこともあり、
水にぬれた担体をアセトンで平衡にした後、６０℃以下
で減圧乾燥して測定に供した。

本発明に用いる架橋共重合体の保水量（以下ｗＲという
）は０．５〜１６９／９の範囲にあるのが適当であり、
好ましくは１．０〜１５．０９．／９の範囲である。

ｗＲとは、架橋共重合体を生理食塩水と平衡にした時、
粒子内に含みうる生理食塩水の量を架橋共重合体乾燥重
量あたシの値として表示したものである一つまりＷＲｕ
架橋共重合体内の重量の目安になる。ＷＲが大きくなる
と、水中において架橋共重合体単位体積あたりの骨格を
形成する部分、つまり架橋共重合体そのものの重量が増
灯的に低　１３− 下し、そのため生理食塩水中さらには体液中において、
架橋共重合体の機械的強度が低下する。またＷＲが小さ
くなると、吸着に有効な単位重量（または単位体積）あ
たりの重量が少なくなるので吸着能力が低下する。した
がって、ｗＲが適当な範囲にあることが本目的の担体に
とって好ましいＯ ＷＲは予め十分に乾燥した架橋共重合体の重量（ｗ２）
を測定した後に、生理食塩水と十分平衡にした架橋共重
合体を遠心分離器にかけて架橋共重合体表面に付着して
いる生理食塩水を除去した後、その重量（ｗｌ）を測定
し、次式によって求めることができる。

賄 担体の排除限界分子量（タンパク質）としては、本発明
の目的吸着物質の分子量が１５万（ＩｇＧ　）より免疫
複合体特にＩｇＭ免疫複合体の場合には１０００万に達
するので、１５〜１０００万が好ましい。本発明の目的
に最も汎用的な排除限界分　１４− 子嚢は１００〜５００万である。

本発明で対象とする吸着物質は、イムノグロブリンおよ
び／またはイムノグロブリン複合体であるが、より詳細
に説明すると、通常のイムノグロブリン、リウマチ因子
、抗核抗体、抗ＤＮＡ抗体、抗９’７パ球抗体、抗赤血
球抗体、抗血小板抗体、アセチルコリンレセプター抗体
、血清脱随抗体、抗すイｐグロブリン抗体、杭マイクロ
シーム抗体、抗大腸抗体等の自己抗体を含むイムノグロ
ブリン、イムノグロブリンの還元生成物、化学修飾生成
物等のイムノグロブリン誘導体、イムノグロブリン間ま
たはイムノグロブリンと他の物質、特に抗原および抗原
様物質との複合体等である（以下、グロブリン系化合物
と総称する）　これらの中でも特に本発明の対象とする
吸着物質として好ましいもの１１自己免疫疾患の原因お
よび進行と深い係わシをもつ自己抗体および免疫複合体
である。

本発明に用いる疎水性化合物と１は、対生理食塩水溶解
度１００ミリモル／ｄｔ以下（２５℃）、より好ましく
は３０ミリモル、／ｄ以下の化合物をいう。対生理食塩
水溶解度が１００　ミリモル／ｄｉより大きい化合物は
、親水性が高くなりすぎ、グロブリン系化合物に対する
親和力が低下する結果、吸着能が極端に低下する。また
、より親水的なアルブミンに対する親和力が生じて、ア
ルブミンをも非特異的に吸着するようになり好ましくな
い。

疎水性化合物の中では、少なくとも一つの芳香族環を有
する化合物が、特に好ましい結果を与える。

芳香族環とは、芳香族性を持った環状化合物を意味し、
いずれも有用に用い得るが、ベンゼン、ナフタレン、フ
ェナントレン等のベンゼン系芳香族環、ピリジン、キノ
リン、アクリジン、インキノリン、７エナントリジ／等
の含窒素６員環、インドール、カルバゾール、イソイン
ドール、インドリジン、ホルフイリン、２，３．２’、
３’−ピロロピロール等の含窒素５員環１．ピリダジン
、ピリミジン、５ｙｒｎ　−）リアジン、ｓｙｍ−テト
ラジン、キナゾリン、１，５−ナフチリジン、プテリジ
ン、フェナジン等の多価含窒素６員環、ピラゾール、イ
ミダゾール、１，２．４−トリアゾール、Ｌ２，３−ト
リアゾール、テトラゾール、ベンゾチアゾール、イミダ
ゾール、プリン等の多価含窒素５員環、ノルハルマン環
、ペリミジン環、ベンゾフラン、イソベンシフ２ン、ジ
ベンドフラン等の含酸素芳香族環、ペンドチオフェン、
チェノチオフェン、チェピン等の含イオウ芳香族環、オ
キサゾール、イソオキサゾール、１．２．５−オキサダ
イアゾール、ぺ／ズオキサゾール等の含酸素複素芳香環
、チアゾール、インチアゾール、１．３．４−チアダイ
アゾール、ベンゾチアゾール等の含イオウ複素芳香環な
どの芳香族環およびその誘導体を少なくとも一つ有する
疎水性低分子有機化合物が好ましい結果を与える。

中でもトリプタミン等のインドール環を含む化合物は、
特に好ましい結果を与える。これはグロブリン系化合物
と該化合物の結合において、該化合物の疎水性、立体構
造と分子剛直性が有効に作用している結果と解釈できる
ものである。

また、本発明者らは、より安全に実用に供することがで
き、安価な疎水性化合物を求めて鋭意研究の結果、疎水
性アミノ酸およびその誘導体が極　１７　− めて高率かつ特異的にグロブリン系化合物を吸着、除去
することを見い出した。

疎水性アミノ酸およびその誘導体とは、Ｔａｎｆｏｒｄ
。

Ｎｏｚａｋｉ　（Ｊ、Ａｍ、Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　、
　１８４　４２４０　（１９６２）、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃ
ｈｅｍ、　２４６　２２１１（１９７１））　（タンフ
オードノザキ（ジャーナル・オプ・アメリカン・ケミカ
ル・ンサエティ、１見土、４２４０（１９６２）、ジャ
ーナル・オプ・バイオロジカル・ケミストリイ　２４６
．２２１Ｈ１９７１））により定義された疎水性尺度で
みて、１５００　ｃａｌ／ｎｏ１以上のアミノ酸および
その誘導体で、対生理食塩水溶解度１００ミＩＪモルｌ
ｄ１以下の化合物を意味する。例えば、リシン、バリン
、ロイシン、チロシン、フェニルアラニン、インロイシ
ン、トリプトファンおよびその誘導体等である。これら
の疎水性アミノ酸およびその誘導体の中では、トリプト
ファンおよびその誘導体が特に良好な結果を与える。ま
た、アミノ酸はｔＳｄの立体配座を特に限定することな
く使用することができる。

また、本発明者らは、鋭意研究の結果、実に驚　１８− くべきことには、疎水性化合物のうち、前記担体に結合
した状態で非解離性、両イオン性、カチオン性の化合物
が、グロブリン系化合物をよシ選択的に吸着することを
見い出した。すなわち、アニオン性の化合物は、アルブ
ミン分子がグロブリン分子より電気的に陰性であること
より当然予想される結果に反して、アルブミンに親和性
であり、グロブリン系化合物の吸着量が低下した。例え
ば、フェニルアラニンメチルエステル、フェニルアラニ
ン、チロシンは、その疎水性に大きな相違がないが、そ
のアミン基で担体に共有結合し、イムノプロプリ・ン吸
着能を評価した時、フェニルアラニンメチルエステルン
フェニルアラニンたチロシンの序列になり、フェニルア
ラニン、チロシンは、吸着能が低下することにその実例
をみることができる。また、非芳香環化合物も同様の結
果を示した１つ特にアニオン性基とし“Ｃ１スルフォン
酸基を有し、より親水化した化合物線、グロブリン系化
合物よりアルブミンに親和的であり、アルブミン吸着材
として作用した。これは化合物の電荷とアルブミン、分
子内のミクロな環境の電荷との相互作用によるものと推
定される。

以上の実験結果よシみて、本発明の作用メカニズムは、
担体に結合した疎水性化合物とグロブリン系化合物の疎
水性相互作用力（Ｖａｎ　ｄｅｒ　Ｗａａｌｓ力）に基
づくものと考えられる。また、速達力としての電荷量相
互作用力（クーロン力）が二次的に作用しているものと
推定される。

本発明の疎水性化合物を含む重合体とは、分子量１万以
下の重合体、よシ好ましくは分子量１０００以下の重合
体である。これによりプロティンＡ（分子量４２０００
　）のような天然高分子に比較して固定化時の取扱い、
固定化後の保存も容易に行えるものである。また、当骸
物質が担体から溶出した場合にも、分子量１万以下の重
合体は、生体に対する抗原性が無視できるほど小さく安
全であシ、滅菌操作も容易に行えるものである。

該重合体は、疎水性化合物モノマー単独または他の化合
物との共重合により得られる。疎水性化合物上ツマ−と
しては、例えばトリプタミン等のインドール環を含む化
合物のビニル誘導体、トリプト７゛Ｉン等の疎水性アミ
ノ酸を用いることができる。

疎水性化合物または／および疎水性化合物を含む重合体
を、ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共重
合体からなる担体に結合する方法は、共有結合、イオン
結合、物理吸着、包埋あるいは重合体表面への沈殿不溶
化等あらゆる公知の方法を用いることができるが、結合
物の溶出性よりみて、共有結合により固定、不溶化して
用いることが好ましい。そのため通常固定化酵素、アク
イニテイクロマトグラフイで用いられる公知の担体の活
性化方法を用いることができる。

活性化方法を例示すると、ハロゲン化シアン法、エピク
ロルヒドリン法、ビスエポキシド法、ハロゲン化トリア
ジン法、ブロモアセチルプロミド法、エチルクロロホル
マー）法、１．１’−カルボニルジイミダゾール法等を
あげることができる。本発明の活性化方法は、結合物の
アミノ基、水酸基、カルボキシル基、チオール基等の活
性水素を有する２１− 求核反応基と置換および／または付加反応できればよく
、上記の例示に限定されるものではない。

まだ必要に応じて、架橋共重合体（担体）と疎水性化合
物または／および疎水性化合物を含む重合体の間に、任
意の長さの分子（スペーサー）を導入して使用すること
もできる。例えば担体の水酸基とへキサメチレンジイン
シアナートの片側のイソシアナート基を反応、結合させ
、残ったインシアナート基と結合物のアミン基、ヒドロ
キシル基、チオール基、カルボキシル基等を反応、結合
させるごと〈実施することができる。スペーサー長さと
しては、スペーサーのないものから、その中に含まれる
原子数で２０までが特に好ましい結果を与える。

まだ本発明において、必要に応じて、担体に２種以上の
疎水性化合物または／および疎水性化合物を含む重合体
を結合させて用いることもできる。

本発明で担体に結合している疎水性化合物または／およ
び疎水性化合物を含む重合体の量に、担体１−当り０．
１〜３０ｍｇの範囲が好ましい。より　２２− 好ましくは０．５〜１５■の範囲である。保持量が０．
１■鷹を下まわるとグロブリン系化合物の吸着量が極度
に低下するし、３０■鷹を上まわると吸着特異性が低下
し好ましくない。

本発明のグロブリン系化合物の吸着装置は、上述の如き
グロブリン系化合物の吸着材を、体液の導出入口を備え
た容器内に充填保持させてなるものである。

第１図において、１は本発明のグロブリン系化合物の吸
着装置の１例を示すものであり、円筒２の一端開口部に
、内側にフィルター３を張ったバッキング４を介して体
液導入口５を有するキャップ６をネジ嵌合し、円筒２の
他端開口部に内側にフィルター３′を張ったバッキング
４′を介して体液導出ロアを有するキャップ８をネジ嵌
合して容器を形成し、フィルター３および３′の間隙に
吸着材を充填保持させて吸着材層９を形成してなるもの
である。

吸着材層９には、本発明の該吸着材を単独で充填しても
よく、他の吸着材と混合もしくは積層してもよい。他の
吸着材としては、例えばＤＮＡ等の他の悪性物質（抗原
）の吸着材や、幅広い吸着能を有する活性炭等を用いる
ことができる。これにより吸着材の相乗効果によるより
広範な臨床効果が期待できる。吸着材層９の容積は、体
外循環に用いる場合、５０〜４００＋＋ｔ／！程度が適
当である。

本発明の装置を体外循環で用いる場合には、大路次の二
通りの方法がある。一つには、体内から取り出した血液
を遠心分離器もしくは膜型血漿分離器を使用して、血漿
成分と血球成分とに分離した後、血漿成分を該装置に通
過させ、浄化した後、血球成分と合わせて体内にもどす
方法であシ、他の一つは体内から取り出した血液を直接
核装置に通過させ、浄化する方法である。

また、血液もしくは血漿の通過速度については、該吸着
材の吸着能率が非常に高いため、吸着材の粒度を粗くす
ることができ、また充填度を低くできるので、吸着材層
の形状の如何にかＸわりなく、高い通過速度を与えるこ
とができる。そのため多量の体液処理をすることができ
る。

体液の通液方法としては、臨床上の必要に応じ、あるい
は設備の装置状況に応じて、連続的に通液してもよいし
、また断続的に通液使用してもよい。

本発明の吸着材および吸着装置は、以上述べてきたよう
に、体液中のグロブリン系化合物を高率かつ特異的に吸
着除去し、非常にコンノくクトであると共に簡便かつ安
全である。

ビニルアルコール単位を主構成成分とする架橋共重合体
を担体に用いたため、血漿タンノ（りの非特異吸着が少
なく、補体系、凝固系との相互作用も小さいという極め
て優れた特性を有する上に、物理的、機械的強度に優れ
、吸着材の調製、取扱いによるカケ、クダケが極めて少
ない。また硬質であるため高流速で体液を流すことがで
きる。その上、耐熱性を有するため、通常の滅菌法（エ
チレンオキサイドガス滅菌、高圧蒸気等熱滅菌、γ線滅
菌等）も容易に、かつ確実に実施できるという効果を併
せもっている。さらには全血用吸着材として用いる場合
にも、血球成分との相互作用が小さいため、血栓形成や
血球成分の非特異粘着、　２５− 残血等を最小限におさえられるメリットを有する。

本発明は、自己血漿等の体液を浄化、再生する一般的な
用法に適用可能であり、生体免疫機能に関係した疾患の
安全で確実な治療、特に慢性関節リウマチ、全身性エリ
テマトーデス等の自己免疫疾患の治療に有効であるっ また、本発明の吸着材は、装置に充填して治療器として
用いられるにとソまらず、イムノグロブリン、自己抗体
、イムノグロブリン誘導体、免疫複合体の分離、精製用
吸着材およびこれらの測定用基材としても極めて有効に
利用できる。

以下実施例により、本発明の実施の態様をより詳細に説
明する。

　２６− 実施例１ 酢酸ビニル１００ｆ、）リアリルイソシアヌレ−）　２
４ｊ　ｔ　（Ｘ＝０．２０　）、酢酸エチル１２４１、
ヘプタン１２４ｆ、ポリ酢酸ビニル（重合度５００　）
　ｊｌ　ｆおよび２，２′−アゾビスイソブチロニトリ
ル６．１１よシなる均一混合液と、ポリビニルアルコー
ル−重量％、リン酸二水素ナトリウム二水和物０．０５
重量％およびリン酸水素二ナトリウム十二水和物１．５
重量−を溶解した水４０〇−とをフラスコに入れ、十分
攪拌した後、６．５℃で１８時間、さらに７５℃で５時
間加熱攪拌して懸濁重合を行い、粒状共重合体を得た。

ヂ過、水洗、ついでアセトン抽出後、カセイソーダ４６
．５　？およびメタノール２によりなる溶液中で、４０
℃で１８時間、共重合体のエステル交換反応を行った。

得られた粒子の平均粒径は１５０μｍであった。前記方
法で水酸基密度（ｑＯＨ）を求めたところ、１Ｓｒｎｅ
ｑ　／　ｆであった。〜 このゲルを内径７，５１１ｍ、長さ２５αのステンレス
製カラムに充填して、種々の分子量を持つデキストラン
やポリエチレングリコールの水溶液およびアルブミン、
イムノグロブリンＧ１イムノグロブリンＭ、β−リポプ
ロティンのリン酸緩衝塩溶液を測定したところ、それぞ
れ分子量の大きい順に溶出された。デキストランの排除
限界分子量は約３　Ｘ　１　Ｏ５，タンパク質の排除限
界分子量は約１８　Ｘ　１０６であった。また０、３Ｍ
塩化ナトリウムおよび０．１Ｍリン酸ナトリウムを含む
水溶液を溶媒として、ヒトーｒ−グロブリン、ヒト−ア
ルブミンの溶液を流したところ、はとんど１００−の回
収率で回収され、ゲルの非特異的吸着は非常に少なかっ
た。サンプルの測定はすべて流速１　ｇＩｔ／ｊｌｌｌ
で実施した つぎにエステル交換され、水で十分に洗浄されたゲル５
０ｃｃを２００−の水に懸濁し、Ｓｔの臭化シアンを加
え、攪拌する。２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液を用いてｐ
Ｈを１０〜１１に保ち８分間反応させた。反応終了後は
すみやかにガラスフィルターでｐ過し、ついで水２にで
洗浄して活性化ゲルを得た。該活性化ゲルに通常の方法
によって疎水性化合物を結合せしめ、過剰の活性基をエ
タノールアミンでブロッキングした。保持量は、残余疎
水性化合物の１級アミン基を４−フェニルスピロ〔フラ
ン−２（５Ｈ）　、　１’−フタラン〕−５．Ｓ’−ジ
オン（”フルラム■”ロシー社製）と反応結合させ、４
７５〜４９０　ｎｍの螢光（励起波５９０　ｎｍ）で測
定し、別に未活性化セファローズ４Ｂで実験した物理吸
着量をさし引いて算出した。

エタノールアミンブロッキング後の吸着材ヲ、ｐＨ４−
０，１Ｍ酢酸バッファー、ｐＨ８，５−０，１Ｍホウ酸
バッファーでくり返し洗浄後、生理食塩水で洗浄、水切
りして実験に供した。

吸着実験は、ヒト血漿６容と吸着材１容を混合し、６７
℃、３時間インキュベートした。吸着後のグロブリン、
アルブミン量をＡ　／　Ｇテストキラ１−　（Ａ／Ｇ　
Ｂテスト　ワコー、和光純薬工業（銅製〕にて測定した
。また、未活性化ゲルを用いて吸着実験を行い、コント
ロールとした。結果をコントロールの吸着率を０チとし
た場合の吸着率で表−１に示した。表−１より、ビニル
アルコール−２９一 単位を主構成４分とする架橋共重合体に結合した疎水性
化合物が、特異的かつ高率にグロブリンを吸着すること
が明らかである。

実施例２ 疎水性化合物として１−トリプトファンメチルエステル
を、ヒト血漿の代りにヒト慢性関節リウマチ患者血漿を
用いる以外は、実施例１と同様の実験を行った。慢性関
節リウマチの悪性物質であるリウマチ因子（自己抗体）
、免疫複合体の吸着−３０− 除去能を測定した。リウマチ因子の測定は、ラテックス
凝集テスト、受身感作血球凝集テストにて行った。

ラテックス凝集テストは、ポリスチレンラテックス粒子
にヒトーγ−グロブリンを吸着させたものに、リウマチ
因子を含む患者血漿を作用させると、ラテックス粒子が
凝集する性質を検出法として測定するものであり、通常
血漿の希釈系列を作成して、ラテックス粒子が凝集しな
くなる血漿希釈倍率でリウマチ因子濃度を評価するもの
である。

リウマチ因子を高濃度に含む血漿は、陰性になる希釈倍
率が高くなシ、低濃度の血漿は逆に低くなる。

受身感作血球凝集テストは、ヒツジ赤血球にウサギ−ｒ
−グロブリンを吸着させたものであシ、他はラテックス
凝集テストと同じである。一般に、受身感作血球凝集テ
ストの方がラテックス凝集テストよりり９マチ因子特異
性が高いとされている。

・　　グリシン食塩緩衝液で希釈系列を作成して、ラテ
ックス凝集テストにてリウマチ因子の陰性にな日本凍結
乾燥研究所のキットを用いて行った。同様に受身感作血
球凝集テス）　ＣＲＡＨＡテスト、富士臓器製薬（銅製
〕にて評価した。

また、免疫複合体の測定は、ポリエチレングリコール、
補体溶血法によった。この方法はポリエチレングリコー
ルで沈降分取した免疫複合体を、ヒト健康人血清中の補
体と反応させ、残余の補体量を、抗体を結合した赤血球
の溶血量で測定することにより、免疫複合体量を評価す
るものである。

この方法の操作方法、条件は以下の通りである。

ｉｌ＋検体０．３−を分離管に注ぐ。０．２Ｍ　　ＥＤ
ＴＡ　５０μを加え攪拌する。はう酸バッファ（ＰＢＳ
　）５０μを加え攪拌する。１２．５１　ＰＥＧ　（ポ
リエチレングリコール）（Ｍｗ７５０Ｇ）を０．１−加
え攪拌し、４℃９０ｍ靜置する装 置２）４℃、１ア０Ｏｆ１０−遠心し、得られた沈澱を
２．５参ＰＥ０１−０−で洗う。１７θθｆ１５−遠心
し、上清を排出する。

＋３１３７℃のＧＶＢ＋（２価陽イオンを含むゼラチン
ベロナールバッファー）５０ａ１３を加え、沈澱を溶解
する。補体源としてプール健康人血清１０１Ｌｌｊ加え
る。３７℃、３０１ｍ、免疫複合体と補体とを反応させ
る。

１４１１．５　Ｘ　１０’／ｍ　ＥＡ　（抗体感作赤血
球）１．Ｏｄを加え、３７℃６〇−振とうさせて、残存
補体による溶血反応を促進させる。

（５）反応後、４℃の生食水６，５−を加えて遠心し、
上清の吸光度（ＯＤ４１４）を測定する。

（６）対照（健康人血清）に対する溶血の阻止率を算出
し、単位をＰＥＧ−ｃｃチとする。

〔阻　　　　　　　　　　　　　　　〕対照−検体吸光
度 止車エー＝−，Ｘ　１００ 対照吸光度 なお、ＥＡは日本凍結乾燥研究新製の補体価測定用感作
赤血球（ＫＷ）を用いた。また、グロブリンは実施例１
で用いた方法によって測定した。未活性ゲルをコントロ
ールとして用い、結果はコントロールの吸着率を０チと
した場合の除去率で表−２−３５− に示したー これより、本発明の担体に結合した／、−）リプトファ
ンメチルエステルが血漿中のグロブリン系化合物を、特
にリウマチ因子、免役複合体を効率よく吸着することは
明らかである。また吸着前後の補体価を測定したが、い
ずれもその減少はわずかであった。

実施例５ 実施例２の吸着材５−を第１図の如き容器内に収納し、
グロブリンの除去装置を作成した。

第２図に示す実験系を用いてグロブリンの吸着実験を行
った。

すなわち、容器１０にヒト健康人血液（ヘパリン添加１
２ＤＯＵ／１００−血液）１１を２５−人５れ、ポンプ
１２により毎分１−の流速で汲み出し、イー　３４− ムノプロプリンの除去装置１に送り、ドリップキャンバ
−１５およびサンプリング口１３を経て、容器１０に返
送されるようにチューブ１４を配設した。なお、血液中
にはヘパリン２５０Ｕを添加した。

上記装置により、血液を１時間循環させた後、血液をサ
ンプリングし、血漿中のグロブリン量を測定した。結果
を表−３に示した。

いずれの場合も、循環の前後で白血球、血小板の減少は
比較的少なかった。まだ血栓形成や残血も比較的少なか
った。

表−３

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明のグロブリン系化合物の吸着装置の１例
を示す断面図、第２図は実施例におけるモデル実験説明
図である。 １・・・・・・グロブリン系化合物の除去装置　２・・
・・・・円筒３．３′・・・・・・フィルター　４．４
′・・・・・・バッキング５・・・・・・体液導入口　
６・・・・・・キャップ　７・・・・−・体液導出口　
８・・・・・・キャップ　９・・・・・・吸着材代理人
　清　水　　　猛 第１図 第２図 ４

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、ビニルアルコール単位を主構成々分とする架橋共重
   合体からなる担体に、疎水性化合物および／ｌたは疎水
   性化合物を含む重合体が結合されていることを特徴とす
   るイムノグロブリンおよび／またはイムノグロブリン複
   合体の吸着材。 ２、ビニルアルコール単位を主構成々分とする架橋共重
   合体が、カルボン酸のビニルエステルとイソシアヌレー
   ト環を有するビニル化合物の共重合体を加水分解して得
   られる架橋ポリビニルアルコールである特許請求の範囲
   第１項記載の吸着材。 ３、ビニルデルコール単位を主構成々分とする架橋共重
   合体からなる担体に、疎水性化合物および／または疎水
   性化合物を含む重合体が結合されてなる吸着材を流体の
   導出入口を有する容器内に収容してなることを特徴とす
   るイムノグロブリンおよび／またはイムノグロブリン複
   合体の吸着装置。