JPH01181875A - 免疫複合体の吸着体およびそれを用いた免疫複合体の除去装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 【産業上の利用分野］ 本発明は体液から有害な成分を吸着除去するための吸着
体およびそれを用いた除去装置に関する。さらに詳しく
は体液中より免疫複合体を除去し、自己免疫疾患を抑制
するための吸着体およびそれを用いた免疫複合体の除去
装置に関する。

［従来の技術および発明が解決しようとする課８］ われわれの周囲には、おびただしい種類のウィルス、細
菌、かび、寄生虫などの感染性の異物が存在している。

そのいずれもが生体に疾患をおこすことができ、もし無
制限に生体内で増殖すれば、最終的に生物を殺してしま
うことになる。そこで生体にはこれを防御する機能とし
て免疫系が存在している。この免疫系で主役をなすのが
抗体分子である。つまりウィルスや細菌などの異物が抗
原となり、免疫系を刺激すると、その抗原と選択的に結
合する抗体分子が産生される。

一方自己免疫疾患では、外部の生物でなく自己の細胞や
組織のもつ抗原に対して体液性あるいは細胞性の免疫応
答がおこり、自己に対する抗体（以下、自己抗体という
）や抗原抗体が特異的に反応しあって作られる複合体（
以下、免疫複合体という）などが大量に生じる。そして
この体液中の免疫複合体は、生理的排除機構によって処
理されず、腎糸球体、関節滑膜、肺、血管壁などの組織
に沈着して自己免疫疾患に特徴的な病態の出現に直接間
わりをもつことが多い。

代表的な自己免疫疾患である全身性エリテマトーデス（
以下、ＳＬＥという）では細胞の核成分、とりわけデオ
キシリボ核酸（以下、ＤＮＡという）に対する抗体（以
下、抗ＤＮＡ抗体という）が体液中に出現し、この自己
抗体自身が抗原と結合して免疫複合体を形成し組織に沈
着することにより組織障害を起こす機構が提唱されてい
る。ＳＬＨのばあいは発生した抗ＤＮＡ抗体が同じく血
中に流出した細胞由来のＤＮＡと免疫複合体を形成し、
血管壁、腎糸球体基底膜に沈着することによりそれぞれ
血管炎、ループス腎炎を発症することが知られており、
実際ＳＬＥでは腎不全により死亡する例が多い。

このように産生じた自己抗体と対応抗原との免疫複合体
によりさまざまな症状がひきおこされるわけであるから
、治療には免疫複合体のコントロールが非常に重要であ
る。

従来より免疫複合体の産生を抑制する目的でステロイド
剤、免疫抑制剤、免疫調節剤、抗炎症剤などがＳＬＨの
治療に広く用いられている。

なかでもステロイド剤はもっとも一般的に用いられ、パ
ルス療法と呼ばれるステロイドの短期超大量投与療法も
しばしば行われている。しかしながら、ステロイドは少
量の投与によっても副作用を生じやすいのでステロイド
の短期超大量投与療法によれば、さらに大きな副作用を
生じさせやすくなるのは自明である。また、これらの薬
剤は長期にわたって用いられることが多く、そのような
ばあいには副作用がさらに出やすく、また薬剤耐性によ
りしだいに増量しなければならないことも多いため症例
によってはこれらの薬剤の使用が不可能であったり、充
分な効果を発揮しないばあいも多い。とくにＳＬＨの活
動期は抗ＤＮＡ抗体および免疫複合体の抑制がもっとも
必要な時期であるにもかかわらず、上記の理由によりパ
ルス療法や免疫抑制剤などの薬剤を用いる強力な療法を
採用できないばあいも多い。

一方、これらの薬剤療法とは別のアプローチとして、体
液中の免疫複合体を体外循環によって直接除去しようと
する試みがなされている。

もっとも簡便な方法は、免疫複合体を含む患者の血漿を
健常人の血漿と交換する、いわゆる血漿交換療法である
。この方法によって血中の免疫複合体は大幅に低下し、
症状の改善がみられている。しかしながらこの方法では
大量の健常血漿が必要となり高価であるばかりでなく、
該療法処置中に血清肝炎などの感染の危険性を伴うため
に広く普及するには至っていない。

血漿交換療法では血漿中のすべての成分が除かれ、健常
血漿と交換されるわけであるが、これに対して病因物質
である免疫複合体を選択的に除去する目的で、分子サイ
ズにより病因物質を分離する血漿分離膜法が開発された
。この方法では膜により血漿を高分子量画分と低分子量
画分に分離し、病因物質が含まれている高分子量画分を
廃棄し、主要蛋白であるアルブミンが含まれている低分
子量画分を患者に戻すが、免疫複合体は、分子量約１８
万のＩｇＧ（免疫グロブリンＧ）と抗原との複合体が主
であり、その分子量分布も広いために、アルブミン、正
常なＩｇＧやＩｇＭ（免疫グロブリンＭ）との分離は必
ずしも充分でなく、免疫複合体を除去する際にこれらも
大量に除去され、さらに病因物質と同等以上の分子量の
蛋白はすべて除去されるなどの欠点がある。

したがって、病因物質である免疫複合体をより選択的に
除去し、体液中の有用成分がほとんど失われることのな
い除去手段の出現が望まれていた。

本発明者らは、かかる実情に鑑み鋭意研究を重ねた結果
、体液中の有効成分をほとんど失うことなくほぼ免疫複
合体のみを選択的に吸着しうる吸着体を見出し、本発明
を完成するに至った。

〔課題を解決するための手段〕

すなわち本発明は、水不溶性多孔質担体にアニオン性官
能基を有する化合物が固定されてなる免疫複合体の吸着
体ならびに流体の流入口および流出口を有する容器、流
体および該流体に含まれる成分は通過できるが、前記の
免疫複合体の吸着体は通過できないフィルター、および
前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸着体からな
る免疫複合体の除去装置に関する。

［実施例］ 本明細書において体液とは血液、血漿、血清、腹水、リ
ンパ液、関節内液およびこれらからえられた分画成分、
ならびにその他の生体由来の液性成分をいう。

本発明において水不溶性多孔質担体とは、アニオン性官
能基を有する化合物を固定するための水に溶解しない性
質を有する物質をいう。本発明に用いる水不溶性多孔質
担体は、大きな径の連続した細孔を有するものが好まし
い。すなわち免疫複合体は、おもにＩｇＧと抗原からな
り、分子量が１８万以上であり、分子量が１００万位の
巨大分子のものも存在すると予想されるために、これを
効率よく吸着するためには免疫複合体が容易に多孔質体
内に侵入しうろことが必要である。

細孔径の測定方法には種々あり、水銀圧入法がもっとも
よく用いられているが、親水性多孔質体のばあいには適
用が難しい。これに変わる細孔径の目安として排除限界
分子量がよく用いられ、親水性多孔質体、疎水性多孔質
体のいずれにも適用できる。排除限界分子量とは底置（
たとえば波多野博之、花卉俊彦著、実験高速液体クロマ
トグラフィー、化学同人）などに述べられているごとく
、ゲル浸透クロマトグラフィーにおいて細孔内に侵入で
きない（排除される）分子のうちもっとも小さい分子量
をもつ物の分子量をいう。

排除限界分子量は対象とする化合物により異なることが
知られており、一般に球状蛋白質、デキストラン、ポリ
エチレングリコールなどについてよく調べられているが
本発明に用いる担体のばあい、免疫複合体にもっとも類
似していると思われる球状蛋白質を用いてえられた値を
用いるのが適当である。

排除限界の異なる種々の水不溶性多孔質担体を用いて検
討した結果、免疫複合体の吸着に適当な細孔径の範囲は
、４０万以上８０００万以下であることが明らかになっ
た。すなわち４０万未満の排除限界分子量をもつ水不溶
性多孔質担体を用いたばあいには免疫複合体の吸着量は
小さく実用に耐えない。一方排除限界分子量が太き（な
るにつれて、免疫複合体の吸着量は増加するがやがて頭
打ちとなり、排除限界分子量が６０００万をこえると表
面積が少なすぎ吸着量は目だって低下するばかりでなく
、目的とする免疫複合体以外の吸着、すなわち非特異吸
着が増加し選択性がいちじるしく低下する。

したがって本発明に用いる水不溶性多孔質担体の好まし
い排除限界分子量は４０万以上８０００万以下であり、
さらに好ましくはより選択性吸着容量の大きい点から８
０万以上２０００万以下であるのがよい。

つぎに水不溶性多孔質担体の多孔構造については表面多
孔性よりも全多孔性が好ましく、空孔容積が吸着容量が
大きいという点から２０％以上であることが望ましい。

水不溶性多孔質担体の形状は、粒状、球状、繊維状、膜
状、ホローファイバー状など任意の形状を選ぶことがで
きる。粒状の水不溶性多孔質担体を用いるばあい、その
粒子径は１虜未満のばあい圧力損失が大きく　、５００
０ｍ＋をこえるばあい吸着容量が小さい点から１虜以上
５０００虜以下であるのが好ましい。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体は有機性、無機性い
ずれであってもよいが、目的とする免疫複合体以外の体
液成分の吸着（いわゆる非特異吸着）の少ないものが好
ましい。親水性であるほうが非特異吸着が少ないので水
不溶性多孔質担体は疎水性であるよりも、親水性である
ほうが好ましい。

さらに、水不溶性多孔質担体表面には、リガンドの固定
化反応に用いうる官能基が存在していると好都合である
。これらの官能基の代表例としては、水酸基、アミノ基
、アルデヒド基、アルボキシル基、チオール基、シラノ
ール基、アミド基、エポキシ基、ハロゲン基、スクシニ
ルイミド基、酸無水物基などがあげられるが、これらに
限定されるわけではない。また、水不溶性多孔質担体は
前記官能基のなかでも水酸基を有する化合物よりなるも
のであるばあい、非特異吸着が少ないのでとくに好まし
い。これら官能基をスペーサーとして導入された水不溶
性多孔質担体も、用いうろことはいうまでもない。

本発明に用いる水不溶性多孔質担体の代表例としては、
アガロース、デキストラン、ポリアクリルアミドなどの
軟質多孔質体、多孔質ガラス、多孔質シリカゲルなどの
無機多孔質体、ポリメチルメタクリレート、ポリビニル
アルコール、スチレン、ジビニルベンゼン共重合体など
の合成高分子および／またはセルロースなどの天然高分
子を原料とする多孔質ポリマーハードゲルなどがあげら
れるがこれらに限定されるわけではない。

本発明の吸着体を体外循環治療に用いる際には、血液、
血漿のごとき高粘性流体を高速で流す必要があるために
、圧密化を引き起こさない充分な機械的強度を有する硬
質水不溶性多孔質担体を用いるのが好ましい。すなわち
硬質水不溶性多孔質担体とは後記参考例に示すごとく、
水不溶性多孔質担体を円筒状カラムに均一に充填し、水
性流体を流通したばあいの圧力損失と流量との関係が少
なくとも０．３ｋｇ／ｃ−まで直線関係にあるものをい
う。

本発明の吸着体のアニオン性官能基は、ｐＨが中性付近
で負に帯電するような官能基であればいかなるものも使
用しうる。これらの代表例としては、カルボキシル基、
スルホン酸基、スルホン基、硫酸エステル基、シラノー
ル基、リン酸エステル基、フェノール性水酸基などがあ
げられるがこれらに限定されるものではない。

アニオン性官能基を有する化合物としては、１分子あた
りひとつのアニオン性官能基を有する化合物であっても
、また複数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化
合物であってもよい。ポリアニオン化合物は、免疫複合
体に対する親和性が大きく、また単位量の水不溶性多孔
質担体に多くのアニオン性官能基を導入しやすいので好
ましい。なかでも分子量が１０００以上のポリアニオン
化合物は親和性、アニオン性官能基導入量の点で好まし
い。ポリアニオン化合物が有するアニオン性官能基は１
種類であってもよいし、複数の種類であつてもよい。

本発明に用いるポリアニオン化合物の代表例としては、
ポリアクリル酸、ポリビニル硫酸、ポリビニルスルホン
酸、ポリビニルリン酸、ポリスチレンスルホン酸、ポリ
スチレンリン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン
酸、ポリメタクリル酸、ポリリン酸、スチレン−マレイ
ン酸共重合体などの合成ポリアニオン化合物、およびヘ
パリン、デキストラン硫酸、コンドロイチン、コンドロ
イチン硫酸、ホスホマンナン、キチン、キトサンなどの
アニオン性官能基含有多糖類があげられるがこれらに限
定されるわけではない。

本発明の吸着体に固定されるアニオン性官能基を有する
化合物は１種類であってもよいし、２種類以上であって
もよい。

本発明の吸着体は、水不溶性多孔質担体にアニオン性官
能基を有する化合物が固定された状態のものをいう。そ
のようなアニオン性官能基を有する化合物が固定されて
なる状態をうるためにアニオン性官能基を水不溶性多孔
質担体に導入する方法としては公知の種々の方法を特別
な制限なしに用いることができるが、そのようなアニオ
ン性官能基を有する化合物が固定されてなる状態をうる
ためのアニオン性官能基の担体への代表的な導入方法と
しては、 （１）　　アニオン性官能基あるいは容易にアニオン性
官能基に変換しうる官能基を含有する化合物をモノマー
あるいは架橋剤として用いる重合によって吸着体を形成
させる方法、 （２アニオン性官能基を含有する化合物を水不溶性多孔
質担体に固定させる方法、 Ｇ）　アニオン性官能基を形成する化合物と水不溶性多
孔質担体とを直接反応させることによって、水不溶性多
孔質担体にアニオン性官能基を有する化合物を固定させ
る方法 などがあげられる。

もちろんガラス、シリカ、アルミナなどもともとアニオ
ン性官能基を含有するアニオン性官能基含有化合物を吸
着体として用いてもよい。

（１）の方法において用いるアニオン性官能基あるいは
容易にアニオン性官能基に変換しうる官能基を含有する
モノマーあるいは架橋剤の代表例としては、アクリル酸
およびそのエステル、メタクリル酸およびそのエステル
、スチレンスルホン酸などがあげられるがこれらに限定
されるわけではない。

（２の方法、すなわちアニオン性官能基を含有する化合
物を水不溶性多孔質担体に固定させる方法としては、物
理的吸着による方法、イオン結合による方法、共有結合
により固定する方法などがあり、いかなる方法を用いて
もよいが、吸着体の保存性ならびに安定性のためにはア
ニオン性官能基含有化合物が脱離しないことが重要であ
るので、強固な固定が可能な共有結合法が望ましい。

・　共有結合によりアニオン性官能基含有化合物を固定
させるばあい、アニオン性官能基含有化合物がアニオン
性官能基以外に固定に利用できる官能基を有するのが好
ましい。

固定に利用できる官能基の代表例としては、アミノ基、
アミド基、カルボキシル基、酸無水物基、スクシニルイ
ミド基、水酸基、チオール基、アルデヒド基、ハロゲン
基、エポキシ基、シラノール基などがあげられるがこれ
らに限定されるわけではない。

これらの官能基を有するアニオン性官能基含有化合物は
多数存在するが、実施例に記載した、スルファニル酸、
ホスホリルエタノールアミン、グリシン、タウリンなど
はその一例である。

また、アニオン性官能基を含有する化合物のうち硫酸エ
ステル基を含有する化合物の代表例としてはアルコール
、糖類、グリコールなどの水酸基含有化合物の硫酸エス
テルがあげられるが、これらのなかでも多価アルコール
の部分硫酸エステル化合物、とりわけ糖類の硫酸エステ
ル化物が硫酸エステル基、固定に必要な官能基の双方を
含んでいるうえに、生体適合性および活性ともに高く、
さらに硫酸化多糖類は容易に水不溶性多孔質担体に画定
しうろことからとくに好ましい。

つぎに、（３）の方法、すなわちアニオン性官能基を形
成する化合物と水不溶性多孔質担体とを反応させること
によって、水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有
する化合物を固定させてアニオン性官能基を導入する方
法の代表例として水酸基含有多孔質担体に硫酸エステル
基を導入する反応があげられる。このばあい、水酸基含
有水不溶性多孔質担体とクロロスルホン酸、濃硫酸など
の試薬を反応させることによって直接硫酸エステル基を
導入することができる。

導入されるアニオン性官能基の量は、吸着体１ｍｌあた
り０．Ｏ１μ■ｏ１以上１０ｍ■Ｏ１以下が好ましい。

０．Ｏ１μｓ＋ｏ１未満のばあい吸着能力が充分でなく
、１０１１ｏ１をこえるばあい非特異吸着が多すぎて実
用に供することが困難になる。より好ましいアニオン性
官能基導入量は１μ■Ｏ１以上１００μｍｏｌ以下であ
るのがよい。

本発明の吸着体を治療に用いるには種々の方法がある。

もっとも簡便な方法としては患者の血液を体外に導出し
て血液バッグに貯め、これに本発明の吸着体を混合して
免疫複合体を除去後、フィルターを通して吸着体を除去
し、血液を患者に戻す方法がある。この方法は、複雑な
装置を必要としないが、１回の処理量が少なく治療に時
間を要し、操作が煩雑になるという欠点を有する。

つぎの方法は吸着体をカラムに充填し、体外循環回路に
組み込みオンラインで吸着除去を行うものである。すな
わち流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
び該流体に含まれる成分は通過できるが、水不溶性多孔
質担体にアニオン性官能基を有する化合物が固定されて
なる免疫複合体の吸着体は通過できないフィルター、お
よび前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸着体か
らなる免疫複合体の除去装置に体液を通液する方法が簡
便で好ましい。

第２図に本発明の免疫複合体の除去装置の一実施例の概
略断面図を示す。第２図中、（１）および（２）はそれ
ぞれの流体の流入口と流出口、（３）は本発明の吸着体
、（４）および（Ｓは流体および流体に含まれる成分は
通過できるが本発明の吸着体は通過できないフィルター
またはメツシュ、（６）はカラム、（刀は容器である。

ここで流体の流入口側のフィルター魯）は存在しなくて
もよい。

以下、実施例により本発明をさらに詳しく説明するが、
本発明はかかる実施例のみに限定されるものではない。

参考例 両端に孔径１５ＩｘＲのフィルターを装着したガラス製
円筒カラム（内径９１ｍ、カラム長さ１５０＋ｕ）にア
ガロースゲル（バイオラド（Ｂｌｏｒａｄｏ）社製のＢ
ｌｏｇｅｌ　Ａｓｍ、粒径５０〜１００メツシユ）、ポ
リマー硬質ゲル（東洋曹達工業■製のトヨパールａｗｅ
ｓ、粒径５０〜１００　ｔｍ、およびチッソ■製のセル
ロファインＧＣ７００、粒径４５〜１０５．ｃａ）をそ
れぞれ均一に充填しベリスタルティックポンプによりカ
ラム内に水を流通し、流量と圧力損失ΔＰとの関係を求
めた。その結果を第１図に示す。

同図より明らかなように軟質ゲルであるアガロースゲル
は一定の流量以上では圧密化をおこし、圧力を増加させ
ても流量が増加しないのに対し、トヨパール、セルロフ
ァインなどの硬質ゲルは圧力の増加にほぼ比例して流量
が増加する。

製造例１ 多孔質セルロースゲルであるＣＫゲルＡＳ（商品名、チ
ッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量５０００万、粒
径４５〜１０５　、ｃａ）　１００　ｍｌに２０％Ｎａ
ＯＨ４０ｇ１ヘプタン１２０ｇおよびノニオン系界面活
性剤トウィーン２０（商品名、花王アトラス■製）を１
０滴加えた。４０℃で２時間撹拌後、エピクロルヒドリ
ン５０ｇを加えて２時間撹拌し、ゲルを水洗濾過し、エ
ポキシ基の導入されたセルロースゲル（以下、エポキシ
化ゲルという）をえた。

実施例１ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５ｍｌにスルファニル酸
０．Ｌ’１ｇを１０ｍ１の水に溶解してｐＨ９，９に調
整した溶液を加え、常温で２４時間振盪し、０．５％モ
ノエタノールアミン水溶液を加えて振盪し未反応のエポ
キシ基を封止してスルファニル酸が固定されたセルロー
スゲルをえた。固定されたスルファニル酸により導入さ
れたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあたり６．５μ
ｍｏｌであった。

実施例２ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌにホスホリルエ
タノールアミン０．１　ｇを１０ｍ１の水に溶解してｐ
Ｈ９，８に調整した溶液を加え、４０℃で４時間振盪し
、０．５％モノエタノールアミン水溶液を加えて振盪し
未反応のエポキシ基を封止してホスホリルエタノールア
ミンが固定されたセルロースゲルをえた。固定されたホ
スホリルエタノールアミンにより導入されたアニオン性
官能基量は吸着体１ｍｌあたり４μ■ｏｆであった。

実施例３ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５ｍｌに分子量約５００
０、イオウ含量１５％のデキストラン硫酸ナトリウム４
ｇおよび水５ｍｌを加えｐＨ９に調整して４５℃で１６
時間振盪した。その後、ゲルを濾別して、２Ｍ食塩水溶
液、０．５Ｍ食塩水溶液および水を用いてこの順に洗浄
し、０．５％モノエタノールアミン水溶液を加えて振盪
し未反応のエポキシ基を封止してデキストラン硫酸ナト
リウムが固定されたセルロースゲルをえた。固定された
デキストラン硫酸により導入されたアニオン性官能基量
は吸着体１ｍｌあたりｌＯμ−０１であった。

実施例４ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５　ｍｌにグリシン０．
２２１−をｌＧｍ１の水に溶解してＰＨ９，８に調整し
た溶液を加えて常温で２４時間振盪した。その後、ゲル
を濾別して、０．５％モノエタノールアミン水溶液を加
えて振盪し未反応のエポキシ基を封止してグリシンが固
定されたセルロースゲルをえた。固定されたグリシンに
より導入されたアニオン性官能基量は吸着体１　ｍｌあ
たり９μｍｏｌであった。

実施例５ 製造例１でえたエポキシ化ゲル５ｍｌにタウリン０．３
７＆−を１０ｍ１の水に溶解してｐＨ９，０に調整した
溶液を加えて常温で２４時間振盪した。その後、ゲルを
濾別して、０．５％モノエタノールアミン水溶液を加え
て振盪し未反応のエポキシ基を封止してタウリンが固定
されたセルロースゲルをえた。固定されたタウリンによ
り導入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあたり
５μｍｏｌであった。

実施例６ 製造例１で用いたものと同様のＣＫゲルＡ３．１０ｍ１
を水洗後吸引濾過し、これにジメチルスルホキシド６ｍ
ｌ、２Ｎ−ＮａＯＨ２，６ｍｌ、エピクロルヒドリン１
．５ｍｌを加えて４０℃で２時間撹拌した。反応後ゲル
を濾別し、水洗してエポキシ基の導入されたセルロース
ゲルをえた。

これに濃アンモニア水６ｍｌを加え４０℃で２時間反応
させてアミノ化セルロースゲルをえた。

このゲル５ｍｌに分子量１９万〜５０万のポリアクリル
酸ナトリウム０．２ｇを１０ｍ１の水に溶解してｐｎａ
、ｓに調整した溶液を加え、さらに１−エチル−３−（
ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド２００■をｐ
Ｈ４，５に保ちながら添加し、４℃で２４時間振盪した
。反応後ゲルを濾別し、水洗してポリアクリル酸の導入
されたセルロースゲルをえた。固定されたポリアクリル
酸により導入されたアニオン性官能基量は吸着体１　ｍ
ｌあたり１４μｍｏｌであった。

実施例７ 多孔質セルロースゲルをＣＫゲルＡ２２（商品名、チッ
ソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量２０００万、粒径
４５〜１Ｏ５Ｉ！Ｒ）、セルロファインＧＣＬ−２００
０ｍ　　（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界
分子量３００万、粒径４４〜１０５　ｆｉ）　、セルロ
ファインＧＣＬ−１０００ｍ　（商品名、チッソ■製、
球状蛋白質の排除限界分子量６０万、粒径４４〜１０５
虜）、セルロファインＣＣ（ＯＯｓ＋　　（商品名、チ
ッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量４０万、粒径４
４〜１０５虜）、セルロファインＧＣ−２００層（商品
名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子量１２万、
粒径４５〜１０５　ｍ＋）　、セルロファインＧＣＬ−
９０（商品名、チッソ■製、球状蛋白質の排除限界分子
量３．５万、粒径４５〜１０５ｍ＋）にかえたほかは製
造例１および実施例３と同様にしてデキストラン硫酸ナ
トリウムの固定されたセルロースゲルをえた。固定され
たデキストラン硫酸により導入されたアニオン性官能基
量は吸着体１ｍｌあたりそれぞれ１６．１８．３０．２
４．３０．３７μ■ｏ１であった。

実施例８ エポキシ化架橋アガロースゲルであるエポキシアクティ
ベイティッドセファロースＣＬ−６Ｂ（商品名、ファル
マシアファインケミカルズ社製、球状蛋白質の排除限界
分子量４００万、粒径４５〜１８５ｍ＋）ゲルを用いた
ほかは実施例３と同様の方法でデキストラン硫酸ナトリ
ウムを固定した。固定されたデキストラン硫酸により導
入されたアニオン性官能基量は吸着体１ｍｌあたり２０
μ鳳ｏ１であった。

実施例９ ポリメタクリル酸メチルを主成分とする親水性多孔性硬
質ヒドロゲルであるＰＰ−ＨＧ　　（商品名、三菱化成
■製、球状蛋白質の排除限界分子量４００万、粒径１２
０ｍ＋）を用いたほかは製造例１および実施例３と同様
にしてデキストラン硫酸ナトリウムが固定されたゲルを
えた。固定されたデキストラン硫酸により導入されたア
ニオン性官能基量は吸着性１ｍｌあたり９μｓ＋ｏｌで
あった。

実施例１０ 実施例６と同様にしてえたアミノ化セルロースゲル２ｇ
に、実施例３で用いたものと同様の分子量５ｏｏｏ、イ
オウ含量１５％のデキストラン硫酸ナトリウム４ｇを０
．１Ｍリン酸バッファー（ｐＨ８，０）８ｍｌに溶解し
た液を加え室温で１８時間振盪した。反応後ＮａＣＮＢ
Ｈｓ　２ＧＩ１ｇを加え室温で３０分攪拌後、４０℃で
４時間加熱したのちゲルを濾別水洗してデキストラン硫
酸ナトリウムの固定されたセルロースゲルをえた。固定
されたデキストラン硫酸により導入されたアニオン性官
能基量は吸着体１　ｍｌあたり１８μｓ＋ｏｌであった
。

実施例１１ 実施例１〜６およびｌＯでえられた吸着体および比較の
目的で製造例１で用いた担体のＣＫゲルＡ３を１５Ｍ　
）リス緩衝液（ｐＨ７，４）で洗浄したのち、各吸着体
０　、１　ｍｌずつをポリプロピレン製マイクロチュー
ブ（容量７ｍ１）にとり、Ｏ，１５Ｍトリス緩衝液（ｐ
Ｈ７，４）を加えて全量を１ｍｌとした。これに免疫複
合体を含む血清０．２ｍｌずつを加え、２５℃で２時間
振盪した。この吸着操作終了後、遠心分離してゲルを沈
降させ、採取した上清中の免疫複合体濃度を酵素免疫抗
体法（ＥＬＩＳＡ法）により測定した。つまり、免疫複
合体濃度は、Ｃ１ｑをコートしたプレートに希釈した検
体を加え、抗原−抗体反応を行い、ペルオキシダーゼ標
識抗ヒト免疫グロブリン抗体を滴下し、酵素発色反応を
５ＬＴ−２１０（商品名、ラボサイエンス■製）にて測
定波長４８６ｎｍで測定した。測定値は、熱変性１ｇＧ
により作成した標準曲線により標準化した。第１表に、
各吸着体に固定されたアニオン性官能基を有する化合物
基、および各吸着体の上澄み中の免疫複合体濃度を希釈
を考慮して原血清中の濃度に換算して示す。

第１表から水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有
する化合物が固定されてなる吸着体は、免疫複合体を吸
着しているのがわかる。そして、デキストラン硫酸が固
定された吸着体の免疫複合体の吸着能がとくに優れてい
ることがわかる。

［以下余白］ 第　　１　　表 実施例１２ 実施例３および７〜９でえられた吸着体を用い、加えた
血清量を０．１ｍｌとしたほかは実施例１１と同様の方
法にしたがって上澄み中の免疫複合体濃度を希釈を考慮
して原血清中の濃度に換算して求めた。えられた結果を
用いた種々の水不溶性多孔質担体基とともに第２表に示
す。比較のため原血清の免疫複合体濃度を測定したとこ
ろ３２．２μｇ／ｍｌであった。

第２表から、排除限界分子量が４０万以下の水不溶性多
孔質担体である実施例７のセルロファインＣＣ−７００
ｍ、セル口ファインＧＣ−２００ｒｎおよびセルロース
ＧＣＬ−９０の免疫複合体吸着能がおとることがわかる
。また、逆に、排除限界分子量を５０００万と大きくし
すぎても実施例３のセルロースＣＫゲルＡ３の結果から
免疫複合体吸着能は落ちる傾向にあることがわかる。

［以下余白］ 第　　２　　表 ［発明の効果］ 本発明の吸着体およびそれを用いた除去装置は体液より
免疫複合体を選択的に除去する効果を奏する。

【図面の簡単な説明】

第１図は３種類のゲルを用いて流速と圧力損失との関係
を調べた結果を示すグラフであり、第２図は本発明の免
疫複合体の除去装置の一実施例の概−新面図である。 （図面の主要符号） （１）二流入口 （２）二流出口 （３）：吸着体 （４）、（５）：フィルター （７）：容　器 才１図 圧力損失ΔＰ（ｋ８／ａｍ２）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １　水不溶性多孔質担体にアニオン性官能基を有する化
   合物が固定されてなる免疫複合体の吸着体。 ２　水不溶性多孔質担体の球状蛋白質の排除限界分子量
   が４０万以上６０００万以下である請求項１記載の免疫
   複合体の吸着体。 ３　水不溶性多孔質担体が水酸基を有する化合物よりな
   る請求項１記載の免疫複合体の吸着体。 ４　アニオン性官能基を有する化合物が、１分子内に複
   数のアニオン性官能基を有するポリアニオン化合物であ
   る請求項１記載の免疫複合体の吸着体。 ５　流体の流入口および流出口を有する容器、流体およ
   び該流体に含まれる成分は通過できるが、請求項１記載
   の免疫複合体の吸着体は通過できないフィルター、およ
   び前記容器内に充填された前記免疫複合体の吸着体から
   なる免疫複合体の除去装置。