JPS5816694A - グルタチオンの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はグルタチオンの製造法に関する。

グルタチオンは医薬として肝疾患治療剤、解毒剤など広
く使用されている。

グルタチオンを生成する能力を有する微生物は多数知ら
れているが、いずれの微生物についてもグルタチオンは
菌体外には生成されず、菌体内に生成蓄積されるので、
グルタチオンを得るには、菌体より抽出しなければなら
ないが、これに要する費用は、グルタチオン製造コスト
の大半を占めている。

そこで本発明者らは、グルタチオンを微生物菌体外ピ生
成蓄積せしめるべく鋭意研究したところ、培地中に４０
ｍＭから２００　ｍＭのし一セリフと４０ｍＭから２０
０ｍＭのホウ酸を含有せしめれば、従来菌体内ンこグル
タチオンを生成することが知られているいずれの微生物
も、菌体外に著量のグルタチオンを生成蓄積することを
知った。この発明はこの知見に基づいて完成されたもの
である。

即ちこの発明は、４０ｍＭから２００ｍＭのセリンおよ
び４０ｍＭから２００ｍＭのホウ酸を含有する培地を用
いてグルタチオンな生成する能力を有する微生物を培養
し、培養液中に生成蓄積されたグルタチオンを採取する
ことを特徴とするグルタチオンの製造法である。

本発明において用いられるグルタチオンを生成する能力
を有する微生物としては、例えばエンテロバクタ−属、
プロテウス属、シュードモナス属、エルビニア属、エセ
リヒア属、アクロモバクタ−属、アルカリ土類金属、ミ
クロコツカス属、フラボバクテリウム属、アルスロバク
タ−属、アグロバクテリウム属、ブレビバクテリウム属
、コリネバクテリウム属などの細菌、およびサンカルマ
イセス属、キャンデイダ属、ピキア属、デバリオミセス
属、ハンゼヌラ属、ロドトルラ属、トルロプノス属など
の酵母に属する微生物である。具体的に例示すれば以下
のものがあげられる。

エンテロバクタ−・エロゲネス　　　　　　　ＡＴＣＣ
１３０４８プロテウス・ミラビリス　　　　　　　　　
　ＩＦｏ　　３８４９プロテウス・ブルガリス　　　　
　　　　　　ＦＩＭ−Ｐ　　４７９５シユードモナス拳
エルギノサ　　　　　　　ＡＴＣＣ１０１４５エルビニ
ア・ヘルビコラ　　　　　　　　　ＡＴＣＣ２１４３４
エセリヒア・コリ　　　　　　　　　　　　　　ＡＴＣ
Ｃ９６３７エセリヒア、コリ　　　　　　　　　　　　
　　ＡＴＣＣ１３０７０アクロモバクタ−・ビスコサス
　　　　　　　ＡＴＣＣ１２４４８アルカリゲネス・フ
ェカリス　　　　　　　　ＡＴＣＣ１５１７３アルスロ
バクタ−・ントレウス　　　　　　　ＡＴＣＣ１１６２
４ミクｐコツカス・ルテウス　　　　　　　　ＡＴＣＣ
４６９８フラホハクテリウム・フエルギニューム　　Ａ
ＴＣＣ１３５２４アグロバクテリウム・ツウメファシエ
ンス　ＡＴＣＣ４７２０ブレビバクテリシム・フラバム
　　　　　　　ＡＴＣＣ１３８２６コリネバクテリウム
彎キンロンス　　　　　　ＡＴＣＣ７０９４キャンデイ
ダ囃ウチリ７．　　　　　　　　　　ＡＴＣＣ１５２３
９ハンゼヌラ・シフェリ−ＩＦｏ　　０９０５ピキアφ
フエリノサ　　　　　　　　　　　　　ＴＦＯ０４６５
マ サツカロ１イセスーセレビシア　　　　　　ＡＴＣＣ７
７５２トルロプンス・キャンデイダ　　　　　　　　Ａ
ＴＣＣ１２７９０ロドトルラ・オーランティアカ　　　
　　　　ＩＦＯ０７５４也 テハリ第４ス・ハンセ三−ＩＦＯ００１７このような微
生物を培養する培地は、４０ｍＭから２００ｍＭのセリ
ンと４０ｍＭから２００ｍＭのホウ酸を含有する以外は
通常のものが使用できる。即ち、培地ンこは、炭素源、
窒素源、無機イオン更に必要によりビタミン、アミノ酸
等の有機微量栄養素が含まれる。炭素源としては、グル
コース、シュークロース等の炭水化物、酢酸などの有機
Ｍ、エタノール等のアルコール類等、使用される微生物
により資化されるものならばいずれも使用できる。窒素
源としては、アンモニア水、アンモニアガス、アンモニ
ウム塩、尿素、アミノ酸等が好適である。培地には必要
ｔこよりカリイオン、カルシウムイオン、リン酸イオン
等が無機イオンとして培地に添加される。

セリンとしては、Ｌ−セリン、Ｄ−セリン、ＤＬ−セ替
ンのいずれも使用できる。又ホウ酸としては遊離型及び
塩型のいずれも使用できる。

培養は好気的条件下に行うのがよく、培養の間、温度を
２０Ｃないし３７Ｃの範囲の適当な温度に、ｐＨを５か
ら８の範囲の適当なｐＨ１こ調節しつつ行うのが好まし
い。

培養液中に生成蓄積されたグルタチオンを培養液より採
取するＶこは、例えば、培養液を遠心分離して菌体を除
去し、上清を減圧濃縮した濃縮液を■ 「７ノバーライトＩＲ−１２ｏ」Ｈ型カラムに通してグ
ルタチオンを吸着させ、ついでｏ、ｉＮ硫酸によりグル
タチオンを溶出することｅこより行われ実施例Ｉ Ｉｅ当り、グルコ−７，１０ｆ１Ｍｇｓｏ４・７Ｈ２０
０，２２、ＫＨ，ＩＰｏ、　　１０　ｔ、　ＮａＮＨ，
ＨＰＯ４１０２、クエン酸１水和物７．０ｔＳＬ−スレ
オニン２５購ｇ１Ｌ−ロインン５０報、Ｌ−プロリン２
５ｍｇ、Ｌ　−７ルギ＝７５ＱＩｌ１９、Ｉ、　−１：
　スチレン１０■、サイアミン１．ＯＩＩＩｇおよびべ
／　ｔ−７１０９を含む培地ｔこＬ−セリン１００ｍＭ
おＬびホウ酸１００ｍＭ添加して、ｐＨｓ、ｏｔこ調節
した。この培地５０ｍ１を肩付７ラスコ（５００ｍ／’
）Ｉｃ分注し、１１５Ｃｔこて１５分間殺菌し、放冷し
た。これ１こあらかじめブイヨン培地で前培養したプロ
テウス・ミラビリスＩＦ０３８４９を接種し、３１υし
乙て３６時間培養した。

培養液中に生成蓄積されたグルタチオンの定量は液体ク
ロマトグラフィーｔこかけニンヒドリン発色法および２
１０　ｎｍの吸光度分析（カルポキンル基の測定）１こ
よって行った。またニトロプルンる ノド法及びテトラチオネート法によ一定量も併行して行
った。その結果、いずれの方法でも培養液中Ｐこグルタ
チオンが１８０１１Ｉｇ／ｌが見い出された。

同様な方法にて得られた培養液２．０　ｇを遠心分離し
て菌体を除去し、ついで上清な減圧濃縮した工 濃縮液を［γツバーライトーＲ−１２０）Ｈ型カラムｔ
こ通してグルタチオンを吸着させ、カラムを水洗し、つ
いで０．ＩＮ硫酸によりグルタチオンを溶出した。溶出
液を濃縮し、エタノールを加えて結晶化し、次に更にエ
タノールで再結晶して精製グルタチオン０．２２９を得
た。

実施例２ 実施例１に示す方法により第１表ｔこ示す微生物を３１
ｔＴにて３６時間培養した。培養液中に生成蓄積された
、グルタチオ／を液体クロマトグラフ−にかけ、ニンヒ
ドリン発色法および２１０　ｎｍの吸光度分析ンこよっ
て定量した。結果を第１表に示す。

尚、セリン及びホウ酸を培地に添加しない場合には培養
液中にはグルタチオンは生成されなかった。

第　　１　　表 実施例３ 酵母エキス］　Ｏｔ、−ニー／トン１０？、グルコース
２０２、ＫＨ２ＰＯ４２ｆ及びＭｇ５０４−７Ｈ２０１
７を水１ｅに溶解し、セリン１５０ｒｎＭ及びホウ酸１
５０ｍＭを添加して、ｐＨ６，０に調整した。

この培地５０ｍｅを５００ｍ／容の肩（；Ｉフラスコｔ
こ入れ、１２０Ｃｔこて１５分間殺菌した。これ？こあ
らかじめ培養した第２表に示す菌株を接種して、２８Ｃ
で４０時間培養した。対照としてセリン及びホウ酸を培
地に添加せずに、」−記と同じようにして培養を行った
　培養終了後、培養液中に生成蓄積されたグルタチオ７
を液体クロマトグラフィー法で定量した。その結果を第
２表に示す第　　２　　表 実施例４ 用いて、プロテウス・ミラビリスＩＦＯ３８４９を３１
ｒ：で３６時間培養した。培養液中に生成されたグルタ
チオンを液体クロマトグラフィー：こよつて定量した。

その結果を第３表に示す第　　３　　表 実施例５ 実施例１に示す培地１こ、セリン及びホウ酸それぞれ１
００ｍＭを第４表に示す時間に添加して、プロテウス・
ミラビリスＩＦＯ３８４９を３］ｒで４８時間培養した
。培養液中ｔこ生成蓄積されたグルタチオンを液体クロ
マトグラフィーによって定量した。結果を第４表に示す
。

第　　４　　表 特許出願人　味の素株式会社 第１頁の続き １／７２ １／７８ ７８４ １／８６５ １／８８ ０発　明　者　栃倉辰六部 京都市向日市上植野町野上山３１ １２

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ４０ｍＭから２００　ｍＭのセリンおよび４０ｍＭから
   ２００ｍＭのホウ酸を含有する培地を用いてグルタチオ
   ンを生成する能力を有する微生物を培養し、培養液中ｔ
   こ生成蓄積されたグルタチオンを採取することを特徴と
   するグルタチオンの製造法。