JPS5818384A - 抗生物質およびその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規な抗生物質ＫＡ−６６４３−Ｇまたはその
塩もしくはそのエステル、並びにその製造法に関する。

本発明者らは、先に、土壌より分離されたストレプトミ
セス・ＫＣ−６６４３株を培養し、該培養液からダラム
陽性菌及びダラム陰性菌に対して優れた抗菌力及びβ−
ラクタマーゼ阻害活性を有する抗生物質ＫＡ−６６４３
−Ａ物質、同ＫＡ−６６４３−Ｂ物質、同ＫＡ　−６６
４３−り物質及び同ＫＡ　−６６４３−Ｆ物質を分離採
取し、更にその一変異株であるＫＣ−６６４３Ｍ−１６
２−１７５株の培養液から抗生物質ＫＡ−６６４３−Ｘ
を分離採取することに成功し、特許出願しｆＣ，（特開
昭５５−１３９３８０号、同５６−４３２８４号、特願
昭５５−１４９１７７号、同５６一３１９８３号参照）
。

本発明者らは、上記培養液について検討を行っていたと
ころ、ストレプトミセス・ＫＣ−６６４３Ｍ−１６２−
１７５株の代謝産物中に上記抗生物質ＫＡ−６６４３−
Ｘとは異なる新規ガ抗生物質が存在することを見出し、
これを単離収得することに成功し、本発明を完成した。

本発明の宜抗生物質の製造に使用さねるＫＣ−６６４３
Ｍ−１６２−１７５株は、工業技術院微生物工業技術研
究所に受理番号第５８９０号として寄託されており、そ
の菌学的性質は特開昭５５−１３３９８０号及び％１昭
５６−３１９８３号明細書に詳述でれている。本発明に
おいては、当該菌株のみならず、この自然変異株及び人
工変異株も使用できる。

本発明の新抗生物質は、後述の物理化学的性質及び生物
学的性質から明らかな如く、抗生物質ＫＡ−６６４３−
Ｘ及び既知の抗生物質と異なるもので、抗生物質ＫＡ−
６６４３−Ｇ（以下、ＫＡ−６６４３−Ｇ物質と称する
こともある）と命名された。

本菌株の培養には通常の放線菌の培養方法が用いられる
。培地の炭素源としては柚々のものを用いることができ
るが、澱粉、グリセリン、マルトース、デキストリン、
果糖、糖蜜などを単独で寸たは組み合せて用いることが
好甘しく、その他畳化水素類、有機酸、植物ノ油などを
用いることもできる。窒素源としては大豆粉、酵母エキ
ス、乾燥酵母、ベプト　３− ン、内エキス、コーンステイープリカー、カザミノ版、
テイステイラーズソルユプル、塩化アンモニウム、伏ハ
アンモニウム、尿素、硝酸ナトリウムなどを単独捷たは
組み合せて用いることかできる。その他必要に応じ、賞
項、リン酸カリウム、リン酸ナトリウム、硫酸マグネシ
ウム、塩化カルシウム、炭酸カルシウム、水Ｕ北方ルシ
ウム、塩化コバルト、硫酸亜鉛、塩化鉄、硫酸鉄などの
無機塩および微量の亘金属を姉加することができる。さ
らに−の発育を助け、ＫＡ−６６４３−Ｇ物質の生産を
促進する有機および無機’４’ａ質、例えばメチオニン
、システィン、シスチン等の含硫黄アミノ酸などを適宜
Ｋ　Ｋｓ加することができる。捷た、通気培養法を用い
る場合には、烙　４　− らに脂肪油、シリコーン油、パラフィンなどの消泡剤を
添加するのが好ましい。

培養方法としては、固体培地上での培養もｏＴ能である
が、一般抗生物質生産の方法と同様に液体培養法、特に
深部培養法を用いることが好ましい。培養は好気的条件
下、３〜３５℃、好壕しくに２７〜３３℃で行われる。

１（Ａ　−６６４３物質の生産は振盪培養、タンクｊ＠
養のいずれを用いてもよく、２〜６日１’ｉＪ培養を行
うと、潤性物質が培養液中に蓄積きれる。培養液中の生
産重か厳犬に達した時点で培養を停止し、培養液中より
目的の抗生物質を単離棺製する。

斯くして得られる培養液中からＫＡ　−６６４３−Ｇ物
質を単離鞘製する方法としては、このような場合に使用
きねる公知の種々の方法が採用できるＣ その−輿」を示せば、吐ず培誉液全遠心分離せたはＺ：
ＩＡｉ処理して菌体を除去し、その培誉２１−Ｉ液につ
いて次の処理を任意に組合せる。すなわち、培養Ｐ液を
塩基性−イオン交換樹脂に通してＫＡ−６６４３物質を
吸着させ、次いで塩浴液−または塩の水性メタノール浴
液によってＫＡ−６６４３物質を浴出プせるＯ当該イオ
ン交侠側脂としては、例えはダウエックス１×２（ダウ
ケミカル社製）、ダイヤイオンＰＡ−３１８，３１６，
３０６，３０８，３１２（三菱化成社製）、了ンノく−
ライトＩＲＡ　−４００，４０１，４１０（ローム・ア
ンド・ハース社製）等の強塩基性陰イオン交換樹脂；ア
ンバーライトＩＲＡ　−６８のような中塩基性陰イオン
交換樹脂；　ＤＥＡＥ−セファデックス、ＬＩＥＡＥ−
セルロースのような弱塩基性陰イオン父換樹脂等が用い
られる。すだ、上記培養液ｆ液を活性炭素等の吸着剤に
吸着式せ、次いで水性メタノール、水性アセトン等でＫ
Ａ　−６６４３物質を溶出させることもできる０ 次いで、上記活性区分を強塩基性イオン交侠樹脂、例え
ばダウエックス１×２のカラムに通してＫＡ　−６６４
３物質を吸着をせたのち、リン醒緩衝液中食塩碗度を徐
々に変化して段階的に溶出させる。

また上記活性区分を中間極性−！たは非極性の疎水性交
叉結合ポリマー、例えはアンバーライトＸＡＤ　−２、
ダイヤイオンＨＰ　−２０、ＤＥＡＥ−セファデックス
Ａ−２５（）アルマシア社製）等を充填したカラムに通
して、ＫＡ−６６４３物質を分離採取することもできる
Ｃ 斯くして得られるＫＡ−６６４３ｖＩ餉は、更にビオゲ
ルＩ）　−２（ビオ・ラード社製）、セファデックスＧ
−１０（ファルマシア社製）等のゲルを用いてゲルΔ１
遇するとか、ボンダパックＣ１ａ　（ウオータス社製）
等を充填したカラムを用いて逆相クロマトグラフィーに
付すことによりＫＡ　−６６４３−Ｘ物質とＫＡ　−６
６４３−Ｇ物質とに分離することができる。

このＫＡ　−６６４３−Ｇ物質は、必要に応じて當法に
よってアルカリ金属塩、アルカリ土類６− 金属塩、第１、第２、第３級アミン塩又は第４級アンモ
ニウム塩又はエステル類に変換することができる。

本発明のＫＡ−６６４３−Ｇ物質は次のような理化学的
性質並ひに生物学的性質を有し、生体内において安定で
ある。

Ｉ　　ＫＡ−６６４３−Ｇ物質ナトリウム塩の物理化学
的性質 （１）　　外　観：白色粉末 （２）分子ｆ：メチルエステルのマススペクトル値実測
値：３４２．１２２４ 計算値＝３４２．１２４６　（Ｃｘ５Ｈ＋＋ｚＮｚＯｓ
Ｓとして）（３）分子式：　Ｃ１４ＨｔｇＮ１０５Ｓ−
Ｃ１４Ｈｔ　　紫外側吸収スペクトル： 水溶液の紫外線吸収スペクトルは第１図に示すとおりで
ある。

（５）赤外線吸収スペクトル： 美化カリウム中にペレットした赤外線吸収スペクトルは
第２図に示すとおりである。

主要ピーク （６Ｊ　　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル 重水中、１００１ｅＩｚで測ボしたＩＨ−ＮＭＲスペク
トルは第３図に示すとおりである。

主要ピーク δＤ２０　　ｐｐＨｌ　ａ １．７８　（３Ｈ、ｓ　、　Ｃ−Ｃｋｌｓ　）１．８３
　（３）ｉ　、　ｓ　−’Ｃ−Ｃｋｂ　）２．２５（３
Ｈ，ｓ、ＣＯＯ山） −１１− セルロースプレート（メルク社製）使用溶媒系　　　　
　　　　　　　　Ｒｆ値（８）　　高速液体クロマトグ
ラフィー：カラム：ラジアルバックＡ（ウォータース社
ｆｆ）ＯＪ３Ｘ１０ｃ１ｎ溶媒系　　　　　　　　流速
　　保持時間（９）溶解性 水、メタノールに可溶；アセトン、ハ［酸エチル、クロ
ロホルムに不溶。

ＣＩＱ　　呈色反応 陽性：エールリッヒ反応 陰性：ニンヒドリン反応 ｌ　　ＫＡ　−６６４３−Ｇ物質す）　ＩＪウム塩の生
物学的性質 （１）　　抗菌活性 本化合物のスタフィロコッカス・アウレウス　２０９　
ＰＪＣ−１に対する最小阻止線区は６ｍｃＰ／−であっ
た。

（２）　　β−ラクタム耐性菌に対する抗菌活性の増強
作用 アミノベンジルペニシリン（ＡＢＰＣ）　５００μＦ／
−’ｉ添加したベナツセイ・アカ−（共栄社製）にβ−
ラクタマーゼ（ＴＥＭｕ）生産菌のエシェリヒア・コリ
ＭＬ−１４１０ＲＥＣ−１ｍ’ｅ接拙し、この１０ｍ１
ｆ直径９ｃｒＩｌのベトリ皿に流してｌｉ￥ＩＩ捷らせ
、これを試験培−１ｚ〜 地とした。この寒天培地に各濃度のＫＡ　−６６４３−
Ｇ物質す）　ＩＪウム塩水溶液をそれぞれ３０μｔずつ
庄原した直径８ｍｍのパルプディスクを置き、３７℃で
１８時間培養後、ディスク絢辺の阻止円の大きさを測定
した。その結果は次表のとおりであった。

表 （３）安定性 ブタの腎臓より抽出、精製されたジヒドロベブチグーゼ
による分解率はＫＡ−６６４３−Ａ物質１に対し、ＫＡ
、６６４３−Ｇ物質は２．５×１０−３であった。

以上の諸性状よりＫＡ−６６４３−Ｇ物質は下記の栴Ｔ
ｉ式（１）を有するものと推定される。

（１） 次に笑施例を孕けて説明する。

実施例 コーンスターチ３．６％、大豆粉２．５％、綿実前１．
５　％　、硫酸マグネシウム・７水塩０．０５％、Ｌ−
システィン０．０２％、リン酸−カリウム０．２８％、
第ニリン酸ナトリウム・１２水塩０．１８％、塩化コバ
ルト・６水塩０．０００５１５− 一ンＫＭ　−７００，１％の組成を有する液体培地３０
ｄを５００ｍ／容のマイヤーに入れ、滅菌する。この培
地にストレプトミセスｓｐ。

ＫＣ−６６４３Ｍ−１６２−１７５を接種し、３０℃で
３日間振盪培養を行って第一種菌とする。

２０ｔＶのジャーファーメンタ−２基に前記組成を有す
る培地を１０ｔずつ仕込み、それぞれに第一種菌を移植
し、３０℃で通気攪拌方式（３００ｒｐｍ、通気量１０
ｔ／分、内圧０．５　Ｋ９　／　ｃｍ　”　）により６
日間培養を行う。

培養終了後、培養液を５．００　Ｏｒｐｍで遠心分離す
ると、遠心上清液１３ｔが得られる。

予め、ｐＨ８，０のリン酸緩衝液で洗浄した１６− ダイヤイオンＰＡ　−３０６を充填したカラム（６Ｘ　
４５　ｃｍ　）に、前記上清液を通過させ、水洗後、食
塩２０％を含有する０、０５ＭＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８
，６）で溶出して活性区分を集める。この活性区分４ｔ
を、食塩２０％を官有する０、０５リン酸緩衝液（ｐＨ
８，０）で洗伊したダイヤイオンＨＰ　−２０を充填し
たカラム（４，５Ｘ　５０　ｃｍ　）に吸着させ、０．
０５Ｍリンリン酸緩衝液ｐＨｓ、ｏ　）　１　ｔで洗浄
後、ｐＨ８，０の希アンモニア水で溶出し、活性区分を
染める。活性区分（１ｔ）を篭導度が３ｍΩになるまで
脱イオン水で希釈し、ベンジルメチルセチルアンモニウ
ムクロライド１％を官有する塩化メチレン１ｔで洸浄し
、予めｐＨ８，０に緩衝化したダウエックス１×２のカ
ラム（３，５×４０ｍ）に通し、食塩濃度が０と０．３
Ｍ含有する０、　０５　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（ｐＨ８，
０）各１ｔの間で濃度勾配法によって浴出する。活性区
分４００−を集め、食塩２０％を含む０．０５Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ８，０）４００−を加え、予め、食塩２０
％を含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄
したダイヤイオンＨＰ　−２０を充填したカラム（２Ｘ
　４５　ｃｍ　）に吸着させる。次いで、食塩１０％を
含む０．０５ＭＩＪン酸、緩衝液（ｐＨ８，０）　１５
０ｍｌで洗浄後ｐＨ８，０の希アンモニア水で溶出し、
活性区分を集め、３０℃以下、減圧下で約２１ｎｔまで
微細する。龜縮液をセファデックスＧ−１０を充填した
カラム（２，２Ｘ　９０　ｃｍ　）に吸着させ、ｐＨ８
，０の希アンモニア水で溶出する。活性区分を集め、破
線後、凍結乾燥すると、５０．４ｍｇの淡黄色固体が得
られる。

上記の面体をｐｉ（７，８の０．２　Ｍ　ＩＪン酸緩衝
液２−に浴解し、ボンダバックＣ１８／ポラシルＢ（ウ
ォータース社製）のカラム（Ｏ，ＳＸ１２０　ｃｍ　）
に通し、６ｔｄ／分の流速で上記緩衝ｇｘ、５ｔでＫＡ
−６６４３−Ｘ物質を浴出後、さらに脱イオン水４００
−で溶出するＣ脱イオン水浴出区分を染め、減圧下で磯
紬後、凍結乾燥すると、ＫＡ−６６４３−Ｇ’ｌｔＪ質
のす）　ＩＪウム塩２．５■か得られる。

【図面の簡単な説明】

第１図はＫＡ−６６４３−Ｇ物質ナトリウム塩の紫外蛛
吸収スペクトルを、第２図は同物質１９− の赤外線吸収スペクトルを、第３図は同物質の”Ｈ−Ｎ
ＭＲスペクトルである。 以上 出１人興和株式会社 一２〇− ５院　長 ％　　　　　　　　ラ　２　図 ６　　　　　５　　　　　４　　　　　３　　　　　　
Ｚ　　　　　　Ｌ　　　　　　ＯＷＷ第１頁の続き ７ｚ発　明　者　伊藤久克 川越市大字今福４６１ ・７２）発　明　者　森俊人 東村山市富士見町４−１６−３ ７５３−

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　次式（１）、 （１） で表わされる抗生物質ＫＡ−６６４３−Ｇまたはその塩
   もしくはそのエステル。 ２、　ストレプトミセス属に属する抗生物Ｉ質ＫＡ−６
   ６４３−Ｇ生産菌を培養し、その培養液から抗生物質Ｋ
   Ａ　−６６４３−Ｇを採取することを特徴とする抗生物
   質ＫＡ−６６４３−Ｇの製造法、