JPS5828293A - マイトマイシン類の製造法 - Google Patents
マイトマイシン類の製造法Info
- Publication number
- JPS5828293A JPS5828293A JP12525581A JP12525581A JPS5828293A JP S5828293 A JPS5828293 A JP S5828293A JP 12525581 A JP12525581 A JP 12525581A JP 12525581 A JP12525581 A JP 12525581A JP S5828293 A JPS5828293 A JP S5828293A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- mitomycin
- mitomycins
- acetone
- ethanol
- propanol
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本尭明はマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃなど（以下マイトマ
イシン類という）の製造法に関するものである。ストレ
グトミセス属薗の生産するマイトマイシン発酵液におい
ては、画体中に含まれるマイトマイシン分解酵素の作用
によシ、培養後通気攪拌を止め発酵液を静置すると短時
間でマイトマイシン類が分解される現象がある。
イシン類という）の製造法に関するものである。ストレ
グトミセス属薗の生産するマイトマイシン発酵液におい
ては、画体中に含まれるマイトマイシン分解酵素の作用
によシ、培養後通気攪拌を止め発酵液を静置すると短時
間でマイトマイシン類が分解される現象がある。
マイトマイシンの分解を抑制する方法については、短時
間に通気および冷却をしながら菌体を分離し安定化する
方法さらにはフェノール、ホルマリン、クロロホルム、
トルエン、ラウリル硫酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム
などを発酵液に添加し安定化させる方法が知られている
。
間に通気および冷却をしながら菌体を分離し安定化する
方法さらにはフェノール、ホルマリン、クロロホルム、
トルエン、ラウリル硫酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム
などを発酵液に添加し安定化させる方法が知られている
。
しかしこれらの方法では、工業的規模でマイトマイシン
Ａ、Ｂ、Ｃを同時に収率よく製造することが難かしい。
Ａ、Ｂ、Ｃを同時に収率よく製造することが難かしい。
そこで本発明者らは、発酵液でのマイトマイシン類の分
解を前止し、マイトマイシン類を同時に製造する方法に
ついて検討を行なつ九結来、発酵液にエタノール、ｎ−
プロパツール、１ｓＯ−プロパツール、アセトン、メチ
ルエチルケトンなどの水溶性有機溶媒を加えることによ
り、マイトマイシン類の分解を前止できることを見出し
た。そしてこれらの水溶性有機溶媒を添加した発酵液に
ｆ過助剤を加えてｆ過をすると、そのｒ液から容易にマ
イトマイシン類を製造することができることを見出し本
発明を完成するに致った。
解を前止し、マイトマイシン類を同時に製造する方法に
ついて検討を行なつ九結来、発酵液にエタノール、ｎ−
プロパツール、１ｓＯ−プロパツール、アセトン、メチ
ルエチルケトンなどの水溶性有機溶媒を加えることによ
り、マイトマイシン類の分解を前止できることを見出し
た。そしてこれらの水溶性有機溶媒を添加した発酵液に
ｆ過助剤を加えてｆ過をすると、そのｒ液から容易にマ
イトマイシン類を製造することができることを見出し本
発明を完成するに致った。
マイトマイシンＡ、Ｂ、Ｃ等はストレプトミセス・ケス
ビトーズスの生産する抗菌性抗履瘍物質である。中でも
マイトマイシンＣは抗腫瘍剤として広く使用され、その
効果は大きなものがある。一方マイトマイシンＡ、Ｆは
現在抗腫瘍剤として使用されていないが、その抗腫瘍効
果は強いものがあり抗腫瘍剤としての使用が期待される
とともに、マイトマイシン誘導体の合成原料としても非
常に重要な物質で参る。
ビトーズスの生産する抗菌性抗履瘍物質である。中でも
マイトマイシンＣは抗腫瘍剤として広く使用され、その
効果は大きなものがある。一方マイトマイシンＡ、Ｆは
現在抗腫瘍剤として使用されていないが、その抗腫瘍効
果は強いものがあり抗腫瘍剤としての使用が期待される
とともに、マイトマイシン誘導体の合成原料としても非
常に重要な物質で参る。
以下本発明をさらに詳細に説明する。
ストレプトミセス・ケスピトーズスヲ生産菌としたマイ
トマイシン類発酵液を培養終了後、直ちに菌体を分離す
ると、上澄液中のマイトマイシン類の安定性は比較的良
好となるが、菌体の存在する発酵液では極めて不安定で
室温で３０分程度靜置するとマイトマイシン類はほぼ１
００％分解される。
トマイシン類発酵液を培養終了後、直ちに菌体を分離す
ると、上澄液中のマイトマイシン類の安定性は比較的良
好となるが、菌体の存在する発酵液では極めて不安定で
室温で３０分程度靜置するとマイトマイシン類はほぼ１
００％分解される。
発酵液？：弔養終了−後通気攪拌しながらｊ℃前後壕で
冷却することによシ、マイトマイシン分解酵素活性はあ
る程度抑えられ、マイトマイシンＣは比較的安定化する
がマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｆはほとんど安定化されない
。
冷却することによシ、マイトマイシン分解酵素活性はあ
る程度抑えられ、マイトマイシンＣは比較的安定化する
がマイトマイシンＡ、Ｂ、Ｆはほとんど安定化されない
。
また発酵液にホルマリン、フェノール婢の薬剤を添加す
るとマイトマイシン分解酵素活性は抑えられるが、薬剤
の影響でマイトマイシン類が分解を受け、安定化はそれ
程良くない。
るとマイトマイシン分解酵素活性は抑えられるが、薬剤
の影響でマイトマイシン類が分解を受け、安定化はそれ
程良くない。
これらの結果から新しい安定化剤を見出すため、発酵液
に種々の薬剤の添加実験を行なった。
に種々の薬剤の添加実験を行なった。
この結果発酵液に対してｉｏ−，２ｏ俤の量に相当する
、エタノール、ｎ−プロパツール、１８０−プロパツー
ル、アセト／、メチルエチルケトン等の水溶性有機溶媒
を添加し、室温で１時間静置彼、マイトマイシフ類を６
４１］定し九ところ、マイトマイシンＡ％Ｂ、Ｃ，Ｆは
それぞれほぼ１００％発酵液中に残存し安定化すること
が見・ 出された。
、エタノール、ｎ−プロパツール、１８０−プロパツー
ル、アセト／、メチルエチルケトン等の水溶性有機溶媒
を添加し、室温で１時間静置彼、マイトマイシフ類を６
４１］定し九ところ、マイトマイシンＡ％Ｂ、Ｃ，Ｆは
それぞれほぼ１００％発酵液中に残存し安定化すること
が見・ 出された。
上記水溶性有機溶媒を添加した彼、菌体を分離しその分
解酵素活性を測定すると活性は完全に失活していること
が認められ丸。さらに上記水溶性有機溶媒にマイトマイ
シンＡ、Ｂ、Ｃ１Ｆを漆解させ安定性を測定した結果、
水溶液中よりも安定性が良好となっていることがｉｉ認
できた。
解酵素活性を測定すると活性は完全に失活していること
が認められ丸。さらに上記水溶性有機溶媒にマイトマイ
シンＡ、Ｂ、Ｃ１Ｆを漆解させ安定性を測定した結果、
水溶液中よりも安定性が良好となっていることがｉｉ認
できた。
以上の結果よりマイトマイシン発酵液に上記水溶性有機
溶媒を添加し、マイトマイシン分解酵素を失活させ、発
ｌｌ液中のマイトマイシン類を安定化できることがわか
る。
溶媒を添加し、マイトマイシン分解酵素を失活させ、発
ｌｌ液中のマイトマイシン類を安定化できることがわか
る。
また上記水溶性有機溶媒を発酵液に加え、マイトマイシ
ン類を安定化させた後、ｆ過助剤を加えフィルタープレ
スでｒ過を行ない、Ｐ液をダイヤイオンＨＰ （１０，
２０，３０，４ＡＯ，Ｊθ）樹脂（三菱化成工業社製の
商品名）、アンノ（−；ｙ（）ＸＡＤ（ＩＩ、 ＩＶ）
（ｃｒ−ムアンドノ１−ス社製の商品名）などの合成吸
着樹脂に通塔しマイトマイシン類を吸着させる。吸着後
メタノール、エタノール、アセトン等の水溶液を用いマ
イトマイシン類を溶出し、溶出液を減圧濃縮する。濃縮
液に食塩等の無機塩を加え、酢酸エチル等の溶媒で抽出
を行ない、抽出液に無水硫酸ナトリウムを加え脱水処理
をして、減圧ａｒｔ行なう。この龜縮液を酢酸エチル：
アセトン−１０：／−１：／の展開溶媒でシリカゲルク
ロ１ト分離を行なうと、マイトマイシンＦ、Ｂ、Ａ、Ｃ
の順で溶出される。各成分の区分をと沙、ｍ縮し各成分
を結晶化および沈でん化し、分離後真空礼譲し、マイト
マイシン各成分を得る。
ン類を安定化させた後、ｆ過助剤を加えフィルタープレ
スでｒ過を行ない、Ｐ液をダイヤイオンＨＰ （１０，
２０，３０，４ＡＯ，Ｊθ）樹脂（三菱化成工業社製の
商品名）、アンノ（−；ｙ（）ＸＡＤ（ＩＩ、 ＩＶ）
（ｃｒ−ムアンドノ１−ス社製の商品名）などの合成吸
着樹脂に通塔しマイトマイシン類を吸着させる。吸着後
メタノール、エタノール、アセトン等の水溶液を用いマ
イトマイシン類を溶出し、溶出液を減圧濃縮する。濃縮
液に食塩等の無機塩を加え、酢酸エチル等の溶媒で抽出
を行ない、抽出液に無水硫酸ナトリウムを加え脱水処理
をして、減圧ａｒｔ行なう。この龜縮液を酢酸エチル：
アセトン−１０：／−１：／の展開溶媒でシリカゲルク
ロ１ト分離を行なうと、マイトマイシンＦ、Ｂ、Ａ、Ｃ
の順で溶出される。各成分の区分をと沙、ｍ縮し各成分
を結晶化および沈でん化し、分離後真空礼譲し、マイト
マイシン各成分を得る。
以下に実施例をあげて本発明を具体的に説明する。
実施例を
種菌としてストレプトミセス・ケスビトーズスｙ−ａλ
／ （Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ａｎｔｉｂ、１
ｏｔｉｃｓＶＯ１，ｆｉ／Ｋｕ（／９６３）記載〕を用
い、ククコース／、３１／ｄ１％酵母ｉｔ／ｄｉ、デン
ゾ１０．ｚｙ／ｄｉ。
／ （Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｏｆ Ａｎｔｉｂ、１
ｏｔｉｃｓＶＯ１，ｆｉ／Ｋｕ（／９６３）記載〕を用
い、ククコース／、３１／ｄ１％酵母ｉｔ／ｄｉ、デン
ゾ１０．ｚｙ／ｄｉ。
食塩ｏ、ｚｔ／ノ、炭酸カルシウム０．Ｊｆ／ｄｌの珊
地でｐＨ７１，４１℃で種増養を行なう。得られた１１
１１Ｉ培養液を同じ組成の増地でコｉ℃、２日間増養す
る。発酵液中にはマイトマイジノＡｔソー、マイトマイ
シンＢ ／ Ｏｒ／ｄ、マイトマイシ／Ｃ／２１／−が
蓄積した。培養終了後、発酵液ｌ■にｎ−プロパツール
１００１を添加し九後１０℃まで冷却する。冷却後ｆ過
助剤を加えフィルタープレスでｒ過しｒ液を得る。ｒ液
をダイヤイオ７ＨＰ−コＯコ００１に通塔し、マイトマ
イシン類を吸着させ、水洗を行なった後、１０％アセト
水でマイトマイシン類を溶出する。溶出液のマイトマイ
シン類区分を集め減圧濃縮し、アセトンを除去し良後、
食塩を３０慢濃度になるように加え酢酸エチル１００１
でマイトマイシン類の抽出を行なう。酢酸エチル層を分
離した後、約１０１まで減圧濃縮を行ない、無水硫酸ナ
トリウム／Ｑを加え脱水処理をする、硫酸ナトリウムを
分離した後、ｆ液を酢酸エチルを用いて充填したシリカ
ゲルカラム！ｌに通塔しマイトマイシン類を吸着させる
。吸着後酢酸エチル：アセト／＝り：ｌ〜ｌ：／の展開
溶媒で溶出を行なうと、マイトマイシンＢ、マイトマイ
シンＡ１マイトマイシンＣの順で各成分が溶出される。
地でｐＨ７１，４１℃で種増養を行なう。得られた１１
１１Ｉ培養液を同じ組成の増地でコｉ℃、２日間増養す
る。発酵液中にはマイトマイジノＡｔソー、マイトマイ
シンＢ ／ Ｏｒ／ｄ、マイトマイシ／Ｃ／２１／−が
蓄積した。培養終了後、発酵液ｌ■にｎ−プロパツール
１００１を添加し九後１０℃まで冷却する。冷却後ｆ過
助剤を加えフィルタープレスでｒ過しｒ液を得る。ｒ液
をダイヤイオ７ＨＰ−コＯコ００１に通塔し、マイトマ
イシン類を吸着させ、水洗を行なった後、１０％アセト
水でマイトマイシン類を溶出する。溶出液のマイトマイ
シン類区分を集め減圧濃縮し、アセトンを除去し良後、
食塩を３０慢濃度になるように加え酢酸エチル１００１
でマイトマイシン類の抽出を行なう。酢酸エチル層を分
離した後、約１０１まで減圧濃縮を行ない、無水硫酸ナ
トリウム／Ｑを加え脱水処理をする、硫酸ナトリウムを
分離した後、ｆ液を酢酸エチルを用いて充填したシリカ
ゲルカラム！ｌに通塔しマイトマイシン類を吸着させる
。吸着後酢酸エチル：アセト／＝り：ｌ〜ｌ：／の展開
溶媒で溶出を行なうと、マイトマイシンＢ、マイトマイ
シンＡ１マイトマイシンＣの順で各成分が溶出される。
それぞれの成分を分画し、濃縮後結晶化させ、分離乾燥
したところ、マイトマイシンＡ＠Ｉｆ、マイトマイシン
Ｂ １０ ｔ、マイトマイシンＣ＆Ｊｆを得た。
したところ、マイトマイシンＡ＠Ｉｆ、マイトマイシン
Ｂ １０ ｔ、マイトマイシンＣ＆Ｊｆを得た。
実施例よ
種菌としてストレプトミセス・ケスピトーズスＴ−１７
−／３ｔ（ＮＲＲＬ ／２！ｆ；０８）を用いグ＃ ：
Ｉ−ス／ ｆ ／ ｄｌ、酵母／ ｆ ／ ｄｊ、デン
ゾ７０．！ｆ／ｌ、食塩０．１ｆ／ｄｉ、炭酸カルシウ
ムｏ、ｓｙ／ｄ１％ｐ Ｈ７，２の培地を用い、コｔ℃
で種培養を行なう。得られたａｔ、Ｖ養液を７ラクトー
スコｙ７ｃｕ、大豆粉４Ｉ−ｖ／ｄｔ１デンプン／ｆ／
ｄｌ、食塩０． ｊ ？ ／ ｄｌ、炭駿カルシウム０
、３ ｆ ／ ｄｉ 、 ｐ ）！ ７．２の培地を用
い３０℃で３日間培養する。発酵液中にはマイトマイシ
ンＡｔ ｊ ｒ ／ｍｌ、 マイトマイシンＢλＪｒ／
ｄ、−ｒイトマイシンＦｊｒ／ｓｃＪが蓄積した。増養
終了後通気を止めアセｉ／２０１を発酵液ｉｏｏｇに加
えマイトマイシン類を安定化させる。安定化させた培養
を実施例／と同様の操作を行ない、マイトマイシンＡＪ
ｆ、マイトマイシフ Ｂ ／、 Ｊ２、マイトマイシ
ンＦ Ｏ，／ ｆを得た。
−／３ｔ（ＮＲＲＬ ／２！ｆ；０８）を用いグ＃ ：
Ｉ−ス／ ｆ ／ ｄｌ、酵母／ ｆ ／ ｄｊ、デン
ゾ７０．！ｆ／ｌ、食塩０．１ｆ／ｄｉ、炭酸カルシウ
ムｏ、ｓｙ／ｄ１％ｐ Ｈ７，２の培地を用い、コｔ℃
で種培養を行なう。得られたａｔ、Ｖ養液を７ラクトー
スコｙ７ｃｕ、大豆粉４Ｉ−ｖ／ｄｔ１デンプン／ｆ／
ｄｌ、食塩０． ｊ ？ ／ ｄｌ、炭駿カルシウム０
、３ ｆ ／ ｄｉ 、 ｐ ）！ ７．２の培地を用
い３０℃で３日間培養する。発酵液中にはマイトマイシ
ンＡｔ ｊ ｒ ／ｍｌ、 マイトマイシンＢλＪｒ／
ｄ、−ｒイトマイシンＦｊｒ／ｓｃＪが蓄積した。増養
終了後通気を止めアセｉ／２０１を発酵液ｉｏｏｇに加
えマイトマイシン類を安定化させる。安定化させた培養
を実施例／と同様の操作を行ない、マイトマイシンＡＪ
ｆ、マイトマイシフ Ｂ ／、 Ｊ２、マイトマイシ
ンＦ Ｏ，／ ｆを得た。
実施例よ
実施例λと同様な操作を行ない、マイトマイシン＊７ｏ
ｒ／ｍｌ、マイトマイシンｒａ４Ａｏｒ／ｄ。
ｒ／ｍｌ、マイトマイシンｒａ４Ａｏｒ／ｄ。
マイトマイシンｙ＆ｒ／ｄの蓄積した発酵液１００１に
増養終了直後、メチルエチルケトン１０１を加えマイト
マイシン類を安定化させる。
増養終了直後、メチルエチルケトン１０１を加えマイト
マイシン類を安定化させる。
安定化させた発酵液を実施例１と同様の操作を行ないマ
イトマイシンＡ４’ｆ、マイトマイシンＢユコｆ１マイ
トマイシンＦ４１）、コｆ ヲ４り。
イトマイシンＡ４’ｆ、マイトマイシンＢユコｆ１マイ
トマイシンＦ４１）、コｆ ヲ４り。
実施例弘
実施例λと同様な操作を行ないマイトマイシンＡ ７
Ｊ ｒ ／ｍｌ、マイトマイシンＢＪＯｒ／ｄ、マイト
マイシンＦ≠ｒ／ｄ、の蓄積した発酵液を得た。培養直
後に発酵液１００１に対し１８０−プロパツールｌｔｌ
を加えてマイトマイシン類を安定化させた。安定化機実
施例１と同様の操作を行ない、マイトマイシンＡ４Ａｊ
ｆ、マイトマイシンＢ／、４ｃｔ、マイトマイシンＦｔ
−σコを得た。
Ｊ ｒ ／ｍｌ、マイトマイシンＢＪＯｒ／ｄ、マイト
マイシンＦ≠ｒ／ｄ、の蓄積した発酵液を得た。培養直
後に発酵液１００１に対し１８０−プロパツールｌｔｌ
を加えてマイトマイシン類を安定化させた。安定化機実
施例１と同様の操作を行ない、マイトマイシンＡ４Ａｊ
ｆ、マイトマイシンＢ／、４ｃｔ、マイトマイシンＦｔ
−σコを得た。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 マイトマイシン類を蓄積させた発酵液に、エタノール、
ｎ−プロパツール、１８０−プロパツール、アセトンお
よびメチルエチルケトンから選ばれる水溶性有機溶媒の
少なくとも７種を添加し、皺発酵液中のマイトマイシン
分解酵素を失活させ、マイトマイシン類を安定化させた
後。 骸発酵液からマイトマイシン類を採堆することを特徴と
するマイトマイシン類の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12525581A JPS5828293A (ja) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | マイトマイシン類の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12525581A JPS5828293A (ja) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | マイトマイシン類の製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5828293A true JPS5828293A (ja) | 1983-02-19 |
| JPS6321480B2 JPS6321480B2 (ja) | 1988-05-07 |
Family
ID=14905572
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12525581A Granted JPS5828293A (ja) | 1981-08-12 | 1981-08-12 | マイトマイシン類の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5828293A (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0425467U (ja) * | 1990-06-18 | 1992-02-28 |
-
1981
- 1981-08-12 JP JP12525581A patent/JPS5828293A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6321480B2 (ja) | 1988-05-07 |
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