JPS5843788A - アスパルチルグリコシルアミンアミドヒドロラ−ゼの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、アスパルチルグリコジルアミンアミドヒドロ
ラーゼ（以下ＡＧＡと略称する。）及びその製造法に関
する。

近年、人間の先天性代謝異常病の７つであるアスパルチ
ルグルコサミン尿症と精神薄弱症との関連が注目されて
いる。

そして、アスパルチルグルコサミン尿症の診断のために
は、尿中に排せつされるアスパルチルグルコサミンを例
えば、ＡＧＡを用いて定量する方法等が挙げられる〔ケ
ー、スガハラ（Ｋ、Ｓｕｇａｈａｒａ）等、クリニカ　
ヒミヵ　アクタ（Ｃ１１ｎｉｃａ　ＣｈｉｍｉｃａＡｃ
ｔａ“）　、第７２巻１．２ｔｊ−２ｔ７頁（／９７４
年発行）〕。

臓 しかしながら、前記ＡＧＡは、動物の各種器（例えば、
肝臓、腎臓等。）〔ニス、マハデバン（Ｓ　、Ｍａｈａ
ｄｅｖａｎ　）　、ｘイ、エル、タッペｋ　（Ａ、Ｌ、
Ｔａｐｐｅｌ）著、ジエイ、パイオル、ケム、　（Ｊ、
Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　）、第２４２巻、ｔｔｓｔｒ頁
＜ｌ＊ｔ７年発行）、エム、コーン（Ｍ、Ｋｏｈｎｏ）
　、７　イ、　ヤマシ−）−（工、Ｙａｍｓｈｉｎ＋バ
イオヒム、バイオフィズ、アクタ（Ｂｉｏｃｈｊ、ｍ、
ＢｉｏｐｈｙＡｃｔａ　）　、第２５８巻、４００頁（
／９７２年発行）エイ、エル、タレンティノ（Ａ、：Ｌ
、’Ｉ’ａｒｅｎｔ１ｎＯ）　、ｘフ、マレイ（Ｆ、Ｍ
ａｌｅｙ　）　、アーチ、バイオヶム、バイオフィズ、
　（Ａｒｃｈ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ、）　
　第１３０巻、２ｔｊ頁（／９乙９年発せ）〕、人間の
臓器（例えば、腎臓等。）又は血清及び精液中〔アーヤ
、ジェイ、ボリット（Ｒ，、ｒ、Ｐｏ１ｌｉｔｔ　）、
！　７．エイ。

シェナー（Ｆ、Ａ、ＪｅｎｎｌＢｒ　）、クリン、チム
、アクタ（Ｃｌ１ｎ、Ｃｈｉｍ、Ａｃｔａ　）、第２５
巻、１１１３頁（／　９４９年発行）、ジエイ、パロ　
エト　アール、（Ｊ、Ｐａｌ。

ｅｔ　ａｌ、）、アクタ　ネウロバッソール（Ａｃｔａ
Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ　）、第２０巻、４ｔ／３頁（
／９乙９年発行）〕等に、その存在が極くわずかに知ら
れているにすぎず、いかに多量にＡＧＡを得ようとして
も、その起源が動物であるため、それは著しく困難であ
り、甘たその製造にも著しく長時間を要する欠点があっ
た。

そしてまた、ＡＧＡ製造上好適な微生物起源の１）、Ａ
ＧＡは、まだその存在すら全く知られていない日、　の
が実情であった。

そこで、本発明者等は上記現況に鑑み種々検討した結果
、アシネトバクタ−属に属する細菌が、ＡＧＡを著しく
短時間のうちに効率良く多量に生産すること等の知見を
得、本発明を完成した。

すなわち本発明は、下記の理化学的性質を有するアスパ
ルチルグリコジルアミンアミドヒドロラーゼＯ ■　作用＝２−アセトアミド−／−β（Ｌ−アスバルト
アミド）−／１．２−ダイデオキシ−Ｄ−グルコースに
作用し、ｌ−アミノ−Ｎ−アセチルグルコサミンとアス
パラギン酸を生成する。

■　基質特異性：アスパラギン、グルタミンには作用し
ない。

■　至適ｐＨ：ｇ’、ｊ ■　安定１）Ｅニア〜１０．２ ■　作用適温の範囲：≠０−≠♂℃ ■　ｐＨ１温度等にょる失活の条件’Ｅ　ｐＨ≠以下及
びｐＨ／１．３以上で完全に失活する。

ｐＨｇ、ｒに於いて温度ｇｏ℃で１０分間の加熱処理に
よシ完全に失活する。

■　阻害二Ｎ・ブロムコハク酸イミド、塩化銅、硫酸マ
ンガンなどにょシ阻害される。

■　分子量：約≠ｓ、ｏｏｏ（セファデックスＧ１００
によるゲル濾過法）であシ、また本発明は、アシネトバ
クタ−属に属し、アスパルチルグリコジルアミンアミド
ヒドロラーゼ生産能を有する微生物を培地に培養し、培
養物よりアスパルチルグリコジルアミンアミドヒドロラ
ーゼを採取することを特徴とするアスパルチルグリコジ
ルアミンアミドヒドロラーゼの製造法である。

以下本発明の詳細な説明する。

先ず、本酵素の理化学的性質を以下に記載する。

（１）作用 本酵素は、コーアセトアミドーｌ−β（Ｌ−アスパルト
アミド）−／、２−ダイデオキシ−ｂ−グルコースに作
用し、／−アミノ−Ｎ−アセチルグルコサミンとアスパ
ラギン酸を生成する。

（２）基質特異性 アスパラギン及びグルタミンには作用しない。

（３）至適ｐＨ及び安定ｐＨ範囲 至適ｐＨは、コーアセトアミド−／−β（Ｌ−アスパル
トアミド）−／、、２−ダイデオキシ−Ｄ−グルコース
を基質とし、温度３７℃で１０分間作用（ｐＨＩＡθ〜
よｊ：０．Ｏｔ２Ｍ酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、１）
ＨＪ：ｊ−ｆ、０７０．０２Ｍリン酸−カリウム−リン
酸二ナトリウム緩衝液、（ＪＩＨとθ〜５’！　ｊ　：
　０．０２Ｍバルビトゥール酸に水酸化ナトリウムを添
加し夫々のｐＨに調整して得た緩衝液、ｐＨ’？、ｊ−
／／、ｊ　：　０．０２Ｍ＊つ酸−＊つ酸ナトリウム緩
衝液を夫々使用。）させた場合、・第１図に示す如＜、
ｌ！であシ、また安定ｐＨは、７〜７０．２である。

（４）力価の測定法 ０．７Ｍベロナール緩衝液（ｐＨ１３）０．／ｌｌ。

２−アセトアミド−／−β（Ｌ−アスパルトアミド）−
／、、２−ダイデオキシ−Ｄ−グルコース／θ”ｌｉ’
　／　ｍＡ’液０．０２−及び本、酵素液０．　／　ｍ
ｅに蒸留水を添加し、全量を０．　ｊ　ｄとしたものを
温度３７℃で／θ〜３０分間反応させたのち、温度／θ
θ℃で３分間加熱し、反応を停止させて酵素反応液を得
た。

なお対照は、上記の操作中本酵素０．　／　ｔｎｌＯ代
りに０．　／　ｔｎｌの０．１Ｍベロナール緩衝液を添
加する以外は、すべて同一操作によシ調整したものであ
る。

次に、上記酵素反応液及び対照液を夫々モルガンーエル
ソン法〔生化学実験講座４、糖質の化学下、東京化学同
人、３７９頁（／９７４年発行）〕によシ生成した／−
アミノ−Ｎ−アセチルグルコサミンを定量した。

なお酵素活性／単位は、２−アセトアミド−／１、−β
（Ｌ−アスパルトアミド）−／、、２−ダイデオキシ−
Ｄ−グルコースから／−アミノ−Ｎ−アセチルグルコサ
ミン／マイクロモルを６ａ分間で生成する酵素活性であ
る。

また、比活性は、蛋白質ｌ■当りの酵素単位で表示し、
該蛋白質の定量は、標準蛋白質として牛□ 血清アルブミンを′用い、バイオラド法〔ブラットフォ
ード、工Ａ　、（’　Ｂｒａ（ｌｆｏｒ（１，Ｍ、）、
アナル、バイオヶム、　（Ａｎａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、
）　、第７２巻、２≠ぐ頁（／９７ｊ年発行）〕によシ
行なった。

（５）作用適温の範囲 ｐＨｌｒ、ｊのもとに、各温度で７０〜３０分間作用さ
せた場合、２０〜７０℃の範囲内にあシ、特に≠Ｏ−≠
ｒ℃の範囲が最適である。

（６１１）Ｈ１温度等による失活の条件ｐＨ≠以下及び
ｐＴｌ／ｌ！’以上で完全に失活する。

ｐＨＩＡ″に於いて、温度≦θ℃で１０分間の加、熱処
理により完全に失活する。

（７）阻害、活性化及び安定化 ■　阻害 阻害剤無添加時の酵素活性値を１０θとし、夫夫Ｎ・ブ
ロムコハク酸イミド、塩化銅、硫酸マンガン、塩化亜鉛
、塩化水銀、塩化コバルト、塩化カドミウム、エチレン
ジアミンテトラ酢酸、ヨード酢酸、塩化カルシウム、塩
化ストロンチウム及び塩化マグネシウムを夫々添加し、
ｐＨ１３、温度３７℃で１０〜３０分間処理した際の残
存酵素活性を第１表に示す。

第　　　　　１　　　　　表 上表よシ明らかな如（ＡＧＡは、Ｎ・ブロムコハク酸イ
ミド、ＣｕＣ１コ及びＭｎ５０ｇによシ顕著に阻害され
、またＡＧＡは、ＺｎＣ１ａ、ＨｇＣ１ｚ、ＣＯＣＩＪ
及びＣｃｌＣｌ、２によシわずかに阻害される。

＠　活性化 特に活性化する薬剤は、まだ見い出されていない０ ０　安定化 特に安定化する薬剤は、まだ見い出されていない０ （８）精製方法 培養物を遠心分離して湿潤菌体を集菌し、得られる菌体
に、０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨｊ、ｊ）及びトリトン
ｘ１００を夫々添加し、充分攪拌しつつμ時間放置した
のち、これを遠心分離して固形分を除去し粗酵素液を得
る。

次いで、該粗酵素に硫安を添加し、６０〜？θチ飽和に
て沈殿する活性区分を採取し、これを、最小量の蒸留水
に溶解したものを、ｊ；　ｍ　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液Ｃ’
ＰＨ７，３）を用いて透：哲したのち、透析し□・１：
。

たものを該緩衝液で平衡化したＤＦｊＡＥ・セルロース
カラムに吸着させたのち、該緩衝液で充分に洗滌し、０
．　！ｒＭ食塩迄の直線濃度勾配法にて溶出する。

そして、該溶出区分のうち、活性区分を採取しコロジオ
ンバック〔西独ザルトリウスメンブランフィルタ−（株
）製、限界濾過膜〕を用いて限界濾過し濃縮したものを
、０．７Ｍ食塩を含むＱ、０７Ｍリン酸緩衝液（ｐＨＪ
’、θ）で平衡化したバイオゲル・ｐφ１００のカラム
にかけたのち、該組成の緩慣液を使用して溶出し、活性
区分を集める。

次いで、該活性区分を、０１０７Ｍ酢酸緩衝液ｐＨよθ
（０，０！Ｍ食塩を含む。）を用いて透析したものを該
緩衝液で平衡化しであるｓｐ・セファデックスカラムに
吸着させたのち、０．３Ｍ食塩濃度迄の直線濃度勾配溶
出法により溶出し、活性区分を集め、これを前記コロジ
オンバックにて濃縮したものを、前記バイオゲルｐ・１
００のクロマトグラフィーを行い溶出し、活性区分を精
製標品とする。

（９）分子量　ト ゲル濾過法〔アン□ドレウス　ピー、（Ａｎｄｒｅｗｓ
Ｐ、）著、バイオケム、ジエイ、（Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｊ
、　）、第９１巻、２２２頁、（／９ＪＩＩ−年発行）
〕による分子量は、約＋１．θθθであった。

Ｃ１（１１等電点 ゲルディスク焦点電気泳動法〔生化学実験講座１、タン
パク質の化学−１、東京化学同人、３０６頁（／９７．
＜年発行））　（ｐＨ３，３−／θ）にょシ測定した結
果は、約ｐＨｔ、７であった。

本酵素は、アスパルチルグルコサミン尿症の診断用試薬
、構造決定用生化学試薬等として極めて有用である。

次に、本酵素を製造するための具体的手段を以下に述べ
る。

本酵素を製造する方法としては、如何なる方法でも良く
、例えば、以下の方法が挙げら九る。

先ず本酵素を製造するにあたシ使用される菌としては、
アシネトバクタ−（Ａｃ１ｎｅｔｏｂａｃｔｅｒ　）　
　属に属しアスパルチルグリコジルアミンアミドヒドロ
ラーゼ生産能を有する菌であれば如何なる菌でもよく、
またこれらの菌の変種もしくは変異株でも良い。

そしてアシネトバクタ−属に属しアスパルチルグリコジ
ルアミンアミドヒドロラーゼ生産能を有す名画の具体例
としては、例えば、アシネトバク等が腐植土壌中よシ新
たに検索して得た菌株で、その菌学的性質は、以下に示
す通りである。

なお菌学的性質は、概ねマニュアル・オブ・マイクロバ
イオロジカル・メンッヅ（／９．５−９年、マグロ−・
ヒル・ブック・カンパニー社出版）記載の方法に準拠し
た。

アシネトバクタ−Ｔ−１１９の菌学的性質（ａ）形態顕
微碗的観察（肉汁寒天培地で３０℃、７２時間培養） ■　細胞の形及び大きさ； ０、　ｒ〜ｌμ×１．２〜．２．３μｍの桿菌である。

■　細胞の多形性の有無： 多形性は認められない。

■　運動性の有無：運動性無し。（鞭毛は、認められな
い。） ■　胞子の有無；無し。

■　ダラム染色：陰性。

■　抗酸性：陰性。

（ｂ）　　各培地における生育状態 ■　肉汁寒天平板培養 ３０℃、ｌＡｒ時間の培養で直径約Ｏ０ｊ〜／ＷＩｎの
円形コロニー。表面は扁平で、周辺は全縁状であシ、コ
ロニーの色は乳白色を呈する。

■　肉汁寒天斜面培養 ３０℃、≠？時間の培養で、拡布状の生育を示す。色沢
は乳白色を呈する。

■　肉汁液体培養 ３０℃、≠ｒ時間の静置培養で均一によく生育し、沈漬
を生成しない。

■　肉汁ゼラチン穿刺培養 ２３℃、７日間の静置培養で僅かに生育するが、ゼラチ
ンは液化されない。

■　リドマスミルク培養　　、、・ ３０℃、ｌ≠日日間静置培養でリドマスミルクは、変化
しない。

（Ｃ）生理的性質 ■　硝酸塩の還元：還元しない。

■　脱窒反応：陰性 ■　ＭＲテスト；陰性 ■　ｖｐテスト：陰性 ■　インドールの生成：生成しない。

■　硫化水素の生成：生成しない。

■　デンプンの加水分解：加水分解しない。

■　クエン酸の利用：両方とも利用しない。

（ＫＯ３８ｒの培地及びＣｈｒｉ８ｔｅｎｓｅｎ　（７
）培地使用。）■　無機窒素源の利用：利用する。（硝
酸塩及びアシモニウム塩） ［相］　色素の生成：生成しない。

■　ウレアーゼ：陽性。

■　オキシダーゼ：陰性。

０　カタラーゼ：陽性。

０　生育の範囲： 温度叫、１−≠θ℃ ｐＨ・＾Ｏ〜／　０．０ ［相］　酸素に対する態度：好気性。

（Ｌ＊　　０−Ｆテスト（Ｈｕｇｈ　Ｌｅｉｆｓｏｎ法
）：酸化＠　糖類から酸及びガスの生成ニ ゲルコース、サッカロース、マンノース、フラクトース
よシ酸の生成が認められるが、ガスの生成は、いずれの
糖よシも認められない。

［相］　ペニシリン耐性＝２０θ単位／−迄生育する。

なお、上記アシネトバクタ−Ｔ−１１９は、工業技術院
微生物工業技術研究所に微工研菌寄第６０７３号（ＦＩ
ＲＭ　Ｐ−６０７３）として寄託されている。

次に、上記した菌学的性質を有するアシネトバクタ−Ｔ
−１１９の分類学上の位置についてパージエイズ・マニ
ュアル・オプ拳デタミネイティブ・バクテリオロジー第
８版（１９７ケ年）の分類と対比検討した結果、上記菌
は、ダラム染色が陰性の桿菌で、好気性で胞子を形成せ
ず、グルコースよシ酸を生成し、ガスを生成しないこと
、運動性は、陰性で鞭毛も有せず、乳糖を発酵しないこ
と、更に、ＭＲテスト及びＶＰテストが陰性であること
より重曹は、アシネトバクタ−属に属するものと判定さ
れる。

更に、前記菌は、酢酸及び酪酸を唯一の炭素源として生
育しないこと、ｐＨ３〜／θのｐＨ範囲で生育する、ペ
ニシリン耐性が強いこと、更にＡＧＡを産生ずることよ
シ、アシネトバクタ−・カルコアセティカス（Ａｃ１ｎ
ｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｃａｌｃｏａｃｅｔｉｃｕｓ）と
は異なる菌で、この菌は、アシネトバクタ−属に属する
新菌種の菌と判定される。

次に、本酵素を生産するには、通常の固体培養法でも良
いが、なるべく液体培養法を採用するのが望ましい。

本酵素を製造するにあたシ用いられる培地としては、通
常の細菌の培養に用いられる培地が用いられる。

ソシて、例えば酵母エキス、ペプトン、肉エキス、コー
ンスチープリカー、クリシン、アラニン、グルタミン酸
ナトリウム等のアミノ酸類、大豆及硫酸マンガン等のマ
ンガン、リン酸、塩化カリウム等のカリウム、塩化マグ
ネシウム等のマグネシウム、塩化カルシウム等のカルシ
ウム等の適当な無機塩類の１種以上を添加し、必要にょ
シ炭素源例えば、糖類、ビタミン等を適宜添加したもの
が好適に用いられる。

なお培地の初発ｐＨは、約７．０程度に゛調整し、培養
温度は、≠θ℃以下、好ましくは約３０℃程度で、培養
時間は、１６時間以上、好ましくは約２ＩＩ一時間程度
培養する。そして、液体培地を用い振盪培養〜攪拌培養
又は通気培養等によシ好気的に培養するのが好ましい。

培養終了後、培養物よりＡＧＡを採取するには、通常の
酵素採取手段を用いて得ることができる。

しかし、本酵素は、主に菌体内に存在する酵素であるた
め、培養終了後培養物に例えばソデイウムコール酸、ト
リトンＸ・１００等の界面活性剤、トルエンを添加し例
えば２≠時間程度、振盪もしくは放置し、自己消化を行
力妬せることによシＡＧＡを菌体外に排出させることが
出来る。

また、培養物より例えば、濾過、遠心分離等のＡＧＡを
採取するのが好ましく、この場合菌体をそのま＼用いる
こともできるが、超音波破壊機、フレンチプレス、ダイ
ナミル等の種々の破壊手段を用いて菌体を破壊する方法
、リゾチームの如き細胞壁溶解酵素を用いて菌体細胞壁
を溶解する方法、摩耗剤を用いて菌体をすシつぶす方法
あるいは浸透圧ショックを適用する方法を用いる。

このようにして上記菌体もしくはこれを破壊したもの、
あるいは細胞壁を溶解したものより、例えば、濾過、遠
心分離等の適当な処理操作より固形物を除去して菌体抽
出液を得るか、又は、水、緩′衝液もしくは適当な溶剤
で抽出し、これをそのま＼粗酵素液として得るか、ある
いはまた該抽出液に必要によシ凍結乾燥法、アルコール
沈澱法、アセトン沈澱法等を適宜選択して実施すること
によシ粗酵素粉末番得る。

上記粗酵素液も己＜は粗酵素粉末より更に精製酵素標品
を得るには、例えば、セファデックスもしくはバイオゲ
ル等を用いるゲル濾過法、イオン交換体を用いる吸着溶
出法、ポリアクリルアミドゲル等を用いる電気泳動法、
ハイドロオキシアパタイトを用いる吸着溶出法、蔗糖密
度勾配遠心法等の沈降法、アフイニテイクロマト法、分
子ふるい膜もしくは中空糸膜等を用いる分画法等を適宜
選択し、組み合わせて実施することによシ、精製された
本酵素標品を得ることができる。

また、培養時間を長くして自己消化を行なわせた場合の
培養濾液についても、同様に処理することによυ本酵素
を得ることが出来る。

以上の如く、本発明は、ＡＧＡを効率良く多量に製造す
ることが出来、更に、細菌を用いてＡＧＡを製造するの
で、比較的著しく短時間のうちに製造することが出来る
等産業上極めて有意義である。

以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する。

実施例１ 乳糖７３ｆ１ポリペプトン／！θｆ１酵母エキス≠３ｆ
１　リン酸−カリウム７！ｔ、リン酸二ナトリウム３０
？、硫酸マグネシウムｚ３？及び硫酸第一鉄０．７　ｊ
　ｆを蒸留水に溶解し、このｐＨを７．２に調整し、蒸
留水を用いて全量を／ｊｔとして得た培地／、５′θｍ
ｌを夫々坂ロフラスーｆ：１１００本に分注したものを
、温度７．２０℃で圧力／　Ｋｙ　／　ｃｖｉ（ゲージ
圧力）の飽和水蒸気を用いて７３分間殺菌したのち、ア
シネトバクタ−Ｔ−１４９（微工研菌寄第６０７３号）
を接種し、温度３０℃で、！り時間振盪培養（／２θｓ
、ｐ０ｍ、の往復。）した。

培養終了後、培養液／ｊ−１を常法によシ遠心分離した
のち、上澄液を濾別して得られた菌体に、０、．２Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨＡ、、ｔ）／θθｄ及びトリトンＸ・
１００２０ｔｔｔｌを夫々添加し、充分攪拌しっ＼温度
コ！℃で弘時間放置したのち、常法によシ遠心分離して
固形分を除去して細胞抽出液あった。

実施例２ 実施例１で得られた粗酵素液／６１０−に硫酸アンモニ
ウムを加えて硫酸アンモニウムｔｏ−ｒ。

チ飽和で沈殿する蛋白区分全量を約１００ｍ１の水に溶
解したものを、！ｒｍ　Ｍ　ＩＪン酸緩衝液（Ｉ）Ｈ７
４−）を用いて透析したのち、該緩衝液で平衡化法のＤ
Ｅ！ＡＥ・　セルロースカラムに吸着させた。

次いで、該緩衝液を用いて充分に洗滌し、食塩濃度を０
−０．　ｊ　Ｍ迄連続的に上昇させる方法により溶出を
行い、得られた活性区分をコロジオンバック〔西独ザル
トリウスメンブランフィルタ−社（製）、限界濾過膜〕
によシ限界濾過して濃縮したのち、０．１Ｍ食塩を含む
０．０１Ｍベロナール緩衝液（ｐｌｉｒ、ｔ）で平衡化
法のバイオゲル（Ｂｉｏｇｅｌ　）Ｐ　−Ｉ　Ｑ　Ｑの
カラムに吸着させ、該組成の緩衝液により溶出し活性区
分を採取した。

このようにして得た活性区分を、０．　！；　Ｍ食塩を
含む０．０／Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨＪ：Ｏ）を用いて透析
したのち、該緩衝液で平衡化法のｓｐ−セファデックス
のカラムに吸着させ、１食塩濃度を０．　／〜：１ ０、　ｊ　Ｍ迄連続的に上昇させる方法によシ溶出を行
濃縮液を０．１Ｍ食塩を含む０．０／　Ｍ　ＩＪン酸緩
衝液（ｐＨｆ、、ｔ）で平衡化法の前記バイオゲルＰ・
１００ρカラムに吸着させ、該組成の緩衝液によシ溶出
を行い比活性／バ一単位／■蛋白質の精製標品ｏ、２ｉ
１ｎｇを得た（収率：ノー％）。

【図面の簡単な説明】

第１図は、２−アセトアミド−／−β（Ｌ−アスパルト
アミド）−／、、２−ダイデオキシ−Ｄ−グルコースを
基質として測定した本発明酵素の至適ｐＨ域を示す図で
ある。 １ 特許出願人　　キッコーマン株式会社

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の理化学的性質を有するアスパルチルグリコ
   ジルアミンアミドヒドロラーゼ。 ■　作用：２−アセトアミド−／−β（Ｌ−アスパルト
   アミド）−／、、２−グイデオキシ−Ｄ　−グルコース
   に作用し、／−アミノ−Ｎ−アセチルグルコサミンとア
   スパラギン酸を生成する。 ■　基質特異性：アスパラギン、グルタミンには作用し
   ない。 ■　至適ｐＨ：、ｊｊＪ ■　安定ｐＨニア〜１０．２ ■　作用適温の範囲：≠θ〜≠ｔ℃ ■　ｐＨ、温度等による失活の条件＝　ｐＨＩＩ以下及
   びｐＨｌＺｔ以上で完全に失活する。 ｐＨｒ、ｓに於いて温度ご０℃で７０分間の加熱処理に
   より完全に失活する。 ■　阻害二Ｎ・ブロムコハク酸イミド、塩化銅、硫酸マ
   ンガンなどにより阻害される。 ■　分子量：約≠Ｓ、ＯＯθ（セファデックス（）１０
   ０によるゲル濾過法）
2. （２）アシネトバクタ−属に属し、アスパルチルグリコ
   ジルアミンアミドヒドロラーゼ生産能ヲ有する微生物を
   培地に培養し、培養物よりアスパルチルグリコジルアミ
   ンアミドヒドロラーゼを採取することを特徴をするアス
   パルチルグリコジルアミンアミドヒドロラーゼの製造法
   。