JPS5856693A - ステロイド生物変換方法及び生成物 - Google Patents
ステロイド生物変換方法及び生成物Info
- Publication number
- JPS5856693A JPS5856693A JP57122245A JP12224582A JPS5856693A JP S5856693 A JPS5856693 A JP S5856693A JP 57122245 A JP57122245 A JP 57122245A JP 12224582 A JP12224582 A JP 12224582A JP S5856693 A JPS5856693 A JP S5856693A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- steroid
- steroids
- group
- compound
- sitosterol
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P33/00—Preparation of steroids
- C12P33/005—Degradation of the lateral chains at position 17
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07J—STEROIDS
- C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/863—Mycobacterium
- Y10S435/865—Mycobacterium fortuitum
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
合衆国特許第４ 、０２９ 、５４９号は、９−ヒドロ
キシ−３−オキソ−４−プレグネン−２ｏ−カルボン酸
〔９−ヒト四キシビスノル醗〕をつくルノにミコバクテ
リウム・７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ−８１１９を使用
することを明らかにし、その使用について特許請求をし
ている。同じ微生物は、合衆国特許第４ 、０３５ 、
２３６号では９−ヒト田キシー４−アンドロステン−３
，１７−シオン〔９−ヒドロキシアンドロステンジオン
〕をつくるため、合衆国特許第４．２１４．０５１号で
は９−ヒトルキシー３−オキソ−４−ルグネン−２０−
カルボン酸メチルエステル〔９−ヒドロキシビスノル酸
メチルエステル〕をつくるのに使われている。
キシ−３−オキソ−４−プレグネン−２ｏ−カルボン酸
〔９−ヒト四キシビスノル醗〕をつくルノにミコバクテ
リウム・７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ−８１１９を使用
することを明らかにし、その使用について特許請求をし
ている。同じ微生物は、合衆国特許第４ 、０３５ 、
２３６号では９−ヒト田キシー４−アンドロステン−３
，１７−シオン〔９−ヒドロキシアンドロステンジオン
〕をつくるため、合衆国特許第４．２１４．０５１号で
は９−ヒトルキシー３−オキソ−４−ルグネン−２０−
カルボン酸メチルエステル〔９−ヒドロキシビスノル酸
メチルエステル〕をつくるのに使われている。
欧州特許出願筒７９１０４３７２．２は、貴重なコルチ
コイド類の合成における中間体として有用な、９−ヒｒ
ロキシー３−オキソ−４，１７（２０）−プレグナジェ
ン−２０−カルボン！（１）をつくる２段階の発酵法を
明らかにしている。この方法は初めに瑠フバクテリウム
菌株ＮＲＲＬ ！ｌ−８０５４による発酵でのステロー
ル類の３−オキソ−４，１７（２０）−プレグナジェン
−２０−カルボン酸への転化と、９φ位置へヒドロキシ
ル基を導入できる幾つかの微生物の任意の一つとの培養
によるこの化金物の（Ｉ）への転化を伴っている。
コイド類の合成における中間体として有用な、９−ヒｒ
ロキシー３−オキソ−４，１７（２０）−プレグナジェ
ン−２０−カルボン！（１）をつくる２段階の発酵法を
明らかにしている。この方法は初めに瑠フバクテリウム
菌株ＮＲＲＬ ！ｌ−８０５４による発酵でのステロー
ル類の３−オキソ−４，１７（２０）−プレグナジェン
−２０−カルボン酸への転化と、９φ位置へヒドロキシ
ル基を導入できる幾つかの微生物の任意の一つとの培養
によるこの化金物の（Ｉ）への転化を伴っている。
新規な有用中間体９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，１
７（２０）−プレグナジェン−２０−カルホキすルデヒ
ド（１）をつくる発酵法が明らかにされ、特許請求され
ている。図１を参照。この方法は舅、フォアツーツムＭ
ＲＲＬ Ｂ−８１１９の突然変異株を使って行なわれる
。本発明は会衆°国特許第４，０２９．！＄４９号で明
らかにされた微生物の属、すなわちアースロパクター、
バチルス、ブレビバクテリウム、コリネバクテリウム、
ミコバクテリウム、ミコパタテリウ＾、ノカルディア、
プロトアシノパクター、セラティア、及びストレプトミ
セスから得られる二重突然変異株を使うことも含んでい
る０これらの属の微生物は、いずれも周知のステ胃−ル
分解微生物である。これらの属の舒生産菌株はステロー
ルを非選択的に低分子量化合物、例えば００゜十Ｈ，Ｏ
へ分解する。突然変異株は、合衆国特許第４．０２９，
５４９号Ｏ実施例１で明らかにされた手順に従って、こ
れらの舒生型からつくることができる。
７（２０）−プレグナジェン−２０−カルホキすルデヒ
ド（１）をつくる発酵法が明らかにされ、特許請求され
ている。図１を参照。この方法は舅、フォアツーツムＭ
ＲＲＬ Ｂ−８１１９の突然変異株を使って行なわれる
。本発明は会衆°国特許第４，０２９．！＄４９号で明
らかにされた微生物の属、すなわちアースロパクター、
バチルス、ブレビバクテリウム、コリネバクテリウム、
ミコバクテリウム、ミコパタテリウ＾、ノカルディア、
プロトアシノパクター、セラティア、及びストレプトミ
セスから得られる二重突然変異株を使うことも含んでい
る０これらの属の微生物は、いずれも周知のステ胃−ル
分解微生物である。これらの属の舒生産菌株はステロー
ルを非選択的に低分子量化合物、例えば００゜十Ｈ，Ｏ
へ分解する。突然変異株は、合衆国特許第４．０２９，
５４９号Ｏ実施例１で明らかにされた手順に従って、こ
れらの舒生型からつくることができる。
この実施例は舅、７オアツーツムＮＲＲＩ＋ Ｂ−８１
１９の調製を明らかにしている。
１９の調製を明らかにしている。
上に明らかにされた属の突然変異株は合衆国特許第４
、０２９ 、５４９号の実施例１０手順を使用してつく
ることができるが、次にこれを本明細書に記載の突然変
異手順にかけて、更に突然変異株をつくることができる
。Ｍ、 ７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ −１２４３３に
よって本明細書で例示されているとおり、これらの後者
の突然変異株は本明細書で明らかにされている発酵法で
化合物Ｉをつくるのに使用できる。
、０２９ 、５４９号の実施例１０手順を使用してつく
ることができるが、次にこれを本明細書に記載の突然変
異手順にかけて、更に突然変異株をつくることができる
。Ｍ、 ７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ −１２４３３に
よって本明細書で例示されているとおり、これらの後者
の突然変異株は本明細書で明らかにされている発酵法で
化合物Ｉをつくるのに使用できる。
微生物
１７−アルキル側鎖をもつステロイド類を選択的に転化
して、発酵液中に主生成物として９−ヒドロキシ−３−
オキソ−４，１７（２０）−プレグナジェン−２０−カ
ルボキサルデヒド（１）を蓄積する能力を特徴とする突
然変異株は次の属、すなわちアースロパクタ）、バチル
ス、ブレビバクテリウム、コリネバクテリウム、ミコバ
クテリウム、ミコバクテリウム、ノカルディア、プ璽ド
アミノバクター、セラティア九及びストレプトミセスの
微生物を突然変異化することによって得られた。
して、発酵液中に主生成物として９−ヒドロキシ−３−
オキソ−４，１７（２０）−プレグナジェン−２０−カ
ルボキサルデヒド（１）を蓄積する能力を特徴とする突
然変異株は次の属、すなわちアースロパクタ）、バチル
ス、ブレビバクテリウム、コリネバクテリウム、ミコバ
クテリウム、ミコバクテリウム、ノカルディア、プ璽ド
アミノバクター、セラティア九及びストレプトミセスの
微生物を突然変異化することによって得られた。
以下は発酵法で用いられる突然変異株の製造例である。
この例でつくられる突然変異株はＭ、 ７オアツーツム
ＮＲＲＩＩ Ｂ−１２４３３である。他のミコバクテリ
ウム属の種及び本明細書で引用された他の”微生動翼か
らの同様な突然変異株は、次の実施例の手順に従ってつ
くられる。
ＮＲＲＩＩ Ｂ−１２４３３である。他のミコバクテリ
ウム属の種及び本明細書で引用された他の”微生動翼か
らの同様な突然変異株は、次の実施例の手順に従ってつ
くられる。
異株の調製
！当りニュートリエ゛ントプ胃ス８ｇ、酵母エキス１ｇ
、グリ七ｐ−ル５ｇ、ツウィーン８０α１襲（Ｖマ）及
び蒸留水からなる培地で文コバクテリウム・７オアツー
ツム（Ｍｙｏｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｍ
）夏ＲＲＬ Ｂ−８１１９を３１°で生育させる。こ
の培地を１５１ンド／平方インチ、２０分のオートクレ
ーブ処理によって滅菌する。菌をｄ当り約５ Ｘ １０
” Ｃ）密度まで生育させ、次に無菌の０．２ミクｐン
フイルター上に回収する。０．１％ツイーン８０を含有
する同容量の無菌０．１Ｍ ＜えん酸ナトリウム、ｐＨ
５，６、Ｎ−メチル−）ｙＩ−ニトロ−Ｎ−ニド胃ソグ
アニジンを１００βり鷹の濃度に加え、菌懸液を３１℃
で１時間培養する。次に０．１％ツイーン８０を含有す
る２倍容量の無菌の０，１Ｍ燐酸カリウム緩衝液、ｐＨ
７、で菌を洗い、１珈量の同じ緩衝液に再懸濁させる。
、グリ七ｐ−ル５ｇ、ツウィーン８０α１襲（Ｖマ）及
び蒸留水からなる培地で文コバクテリウム・７オアツー
ツム（Ｍｙｏｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｆｏｒｔｕｉｔｍ
）夏ＲＲＬ Ｂ−８１１９を３１°で生育させる。こ
の培地を１５１ンド／平方インチ、２０分のオートクレ
ーブ処理によって滅菌する。菌をｄ当り約５ Ｘ １０
” Ｃ）密度まで生育させ、次に無菌の０．２ミクｐン
フイルター上に回収する。０．１％ツイーン８０を含有
する同容量の無菌０．１Ｍ ＜えん酸ナトリウム、ｐＨ
５，６、Ｎ−メチル−）ｙＩ−ニトロ−Ｎ−ニド胃ソグ
アニジンを１００βり鷹の濃度に加え、菌懸液を３１℃
で１時間培養する。次に０．１％ツイーン８０を含有す
る２倍容量の無菌の０，１Ｍ燐酸カリウム緩衝液、ｐＨ
７、で菌を洗い、１珈量の同じ緩衝液に再懸濁させる。
ｌ当りニュートリエンドブロス８９ 、ｗｈａｔ５ｇ、
グリセロール５９．及び蒸留水を含有する培地をつくる
。寒天を１５９／／まで加え、培地を１５１ｂ／ｉｎ２
．２０分のオートクレーブ処理し、無菌へ）１３皿に注
ぐ。突然変異させた菌をこの培地上に播き、皿上に生育
する集落を次に小規模に発酵させて、ステロールの化合
物１への転化能力についてスフＩＪ −ニングする。望
んでいる化合物の検出は、シリカゲルと塩化メチレン−
アセトン−酢酸（２１２−３８−１）の溶媒系を使用し
て、試験発酵の塩化メチレン抽出物の薄層クロマドグチ
フィによる。ステロール類の生物転化の主生成物として
９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，１７（２０）−プレ
グナジェン−２０−カルボキシアルデヒドを蓄積する突
然変異株ＮＲＲＬ Ｅ−１２４３３が単離される。
グリセロール５９．及び蒸留水を含有する培地をつくる
。寒天を１５９／／まで加え、培地を１５１ｂ／ｉｎ２
．２０分のオートクレーブ処理し、無菌へ）１３皿に注
ぐ。突然変異させた菌をこの培地上に播き、皿上に生育
する集落を次に小規模に発酵させて、ステロールの化合
物１への転化能力についてスフＩＪ −ニングする。望
んでいる化合物の検出は、シリカゲルと塩化メチレン−
アセトン−酢酸（２１２−３８−１）の溶媒系を使用し
て、試験発酵の塩化メチレン抽出物の薄層クロマドグチ
フィによる。ステロール類の生物転化の主生成物として
９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，１７（２０）−プレ
グナジェン−２０−カルボキシアルデヒドを蓄積する突
然変異株ＮＲＲＬ Ｅ−１２４３３が単離される。
本明細書で記載されたような突然変異株を単離するカギ
は、ステロイド環分解が阻害されているために９α−ヒ
ドロキシアンドロステンジオンをつくるＮＲＲＬ Ｂ−
８１１９のような突然変異株から出発し、この微生物に
ステロール側鎖減成に影響する第二の突然変異を導入す
ることである。
は、ステロイド環分解が阻害されているために９α−ヒ
ドロキシアンドロステンジオンをつくるＮＲＲＬ Ｂ−
８１１９のような突然変異株から出発し、この微生物に
ステロール側鎖減成に影響する第二の突然変異を導入す
ることである。
ｔｍ旦藍！
本明細書に記載の生物転化を生ずる突然変異株は、その
親培養基、例えばミツバクテリウム、７オアツーツムＮ
ＲＲＬ Ｅ−８１１９とは、ステロイド分子への作用の
点でのみ異なっている。形態や薬物感受性のようなその
他全部の点で、両者は同一ではないとしても似かよって
いる。Ｍ、 ７オアツ一ツム両培養基はアクチノマイセ
タレス（Ａａｔｉｎｏ呼５ｔａｌ＊ｓ）目のミコバクテ
リアセアエ（Ｍｙｃｏｂａａｔｅｒｉａｃ＠ａ・）科に
属する抗酸性、非ｌ動性、非胞子性の計画である。ルニ
四ン（Ｒｕｎｙｏｎ ）の分類（Ｒｕｎｙｏｎ 、 Ｍ
。
親培養基、例えばミツバクテリウム、７オアツーツムＮ
ＲＲＬ Ｅ−８１１９とは、ステロイド分子への作用の
点でのみ異なっている。形態や薬物感受性のようなその
他全部の点で、両者は同一ではないとしても似かよって
いる。Ｍ、 ７オアツ一ツム両培養基はアクチノマイセ
タレス（Ａａｔｉｎｏ呼５ｔａｌ＊ｓ）目のミコバクテ
リアセアエ（Ｍｙｃｏｂａａｔｅｒｉａｃ＠ａ・）科に
属する抗酸性、非ｌ動性、非胞子性の計画である。ルニ
四ン（Ｒｕｎｙｏｎ ）の分類（Ｒｕｎｙｏｎ 、 Ｍ
。
Ｈ，，１９５９年、Ｍｓｌ、 ０１ｉｎ、 Ｎｏｒｔｈ
Ａｍｅｒｉｃａ ４３巻２７３頁〕によれば、これは
非色素産生群■のミツバクテリウムである。すなわち、
これは低温で急速に生育し、比較的簡単な培地上で色素
のない集落をつくる。
Ａｍｅｒｉｃａ ４３巻２７３頁〕によれば、これは
非色素産生群■のミツバクテリウムである。すなわち、
これは低温で急速に生育し、比較的簡単な培地上で色素
のない集落をつくる。
Ｍ、フォアツーツムＮＲＲＩ、 Ｂ−８１１９及びＮＲ
ＲＬ Ｂ−１２４３３は合衆国イリノイ州ビオリア、合
衆国農務省北部地域研究所の永久保存株に預託された。
ＲＬ Ｂ−１２４３３は合衆国イリノイ州ビオリア、合
衆国農務省北部地域研究所の永久保存株に預託された。
遅くともこの微生物を明らかにした上記合衆国特許の発
行以後に、Ｍ、フォアツーツムｙｘｘｘ、 Ｂ−８１１
９は一般に入手できるようになった。Ｍ、 ７オアツー
ツムＮＲＲＬ Ｅ−１２４３３は１９８１年５月４日に
預託された。これらの微生物のサブカルチャーは要求す
ればＮＲＲＴ−保育所から入手できる。培養基が入手で
きるから−といって、政府措置によって証書と共に授与
される特許権を侵害してまで本発明を実施する特許実施
権が成立するものではないことを理解すべきである。
行以後に、Ｍ、フォアツーツムｙｘｘｘ、 Ｂ−８１１
９は一般に入手できるようになった。Ｍ、 ７オアツー
ツムＮＲＲＬ Ｅ−１２４３３は１９８１年５月４日に
預託された。これらの微生物のサブカルチャーは要求す
ればＮＲＲＴ−保育所から入手できる。培養基が入手で
きるから−といって、政府措置によって証書と共に授与
される特許権を侵害してまで本発明を実施する特許実施
権が成立するものではないことを理解すべきである。
化合物Ｉは価値あるフーチフイド類の合成における中間
体として有用である。例えばこれを対応する酸、すなわ
ち９−ヒドロキシ−３−オキソー４．１７（２０）−プ
、レグナシエンー２０−カルボン酸へ酸化し、次にこれ
を公開された欧州特許出願第７９１０４３７Ｚ２に詳述
された手順に従って八本ド四コーチシンアセテートへ転
化できる。
体として有用である。例えばこれを対応する酸、すなわ
ち９−ヒドロキシ−３−オキソー４．１７（２０）−プ
、レグナシエンー２０−カルボン酸へ酸化し、次にこれ
を公開された欧州特許出願第７９１０４３７Ｚ２に詳述
された手順に従って八本ド四コーチシンアセテートへ転
化できる。
以下は本発明の発酵法を例示する実施例である。
これらの実施例はたんなる例示的なものであり、従って
限定的に考えられてはならない。他に注意がなければ、
百分率はすべて型針であり、溶媒混合物の割合はすべて
容量による。
限定的に考えられてはならない。他に注意がなければ、
百分率はすべて型針であり、溶媒混合物の割合はすべて
容量による。
実施例１ 粗製シトステロールの発酵
生物転化培地は水道水ｊ当りニーコン８．０９、七しロ
ースＦｈ、Ｏｇ、ＮＨ４ｏ１３．０９ 、０ａＯＯ，ａ
、ｏり、ｈ、〔くえん醗塩） ２１，０ ＆０９、ツウ
イーン８０２、．０９、大豆粉１．０ｇ、Ｋｉｔ２ＰＯ
４０，５り、尿素０．５ｇ、及び粗製シトステロール３
０．０９を含有し、ｐＩ（７，０に調整されている。こ
の培地１００−ずつを含有するフラスコに、Ｍ、フォア
ツーツムＮＲＲＩＩ Ｂ−１２４３３の種ｍ培養基ｌＯ
−を接種する。この培養基は蒸留水ｚ当りニュートリエ
ンドブロス＆Ｏｇ、グリセ四−ル５．０９ 、酵母エキ
ス１．０９、ツイーン８０１．０ｇを含有し、ｐＨ７，
０に調整した培地中で２８°で生育させたものである。
ースＦｈ、Ｏｇ、ＮＨ４ｏ１３．０９ 、０ａＯＯ，ａ
、ｏり、ｈ、〔くえん醗塩） ２１，０ ＆０９、ツウ
イーン８０２、．０９、大豆粉１．０ｇ、Ｋｉｔ２ＰＯ
４０，５り、尿素０．５ｇ、及び粗製シトステロール３
０．０９を含有し、ｐＩ（７，０に調整されている。こ
の培地１００−ずつを含有するフラスコに、Ｍ、フォア
ツーツムＮＲＲＩＩ Ｂ−１２４３３の種ｍ培養基ｌＯ
−を接種する。この培養基は蒸留水ｚ当りニュートリエ
ンドブロス＆Ｏｇ、グリセ四−ル５．０９ 、酵母エキ
ス１．０９、ツイーン８０１．０ｇを含有し、ｐＨ７，
０に調整した培地中で２８°で生育させたものである。
次に培養基を２８＠の回転振とう機上で３３６時間培養
する。培養後、混合物を抽出し、生成物を下に実施例３
で説明されるとおりに単離する。
する。培養後、混合物を抽出し、生成物を下に実施例３
で説明されるとおりに単離する。
遺ｍＮ２
実施例１と同様であるが、単独又は組合せて、精製又は
粗製形で与えられる種々のステロイド基質を使用する。
粗製形で与えられる種々のステロイド基質を使用する。
このような基質はシトステ四−ル、コレステロール、ス
チグマステ四−ル及びカンペステロールを包含する。
チグマステ四−ル及びカンペステロールを包含する。
実施例３ Ｍ、フォアツーツムＭＲＲＸｒ Ｂ−１２
４３３醗酵からの（１）の単離 Ｍ、 ７オアツーツムＮＲＲＩ、 Ｂ−１２４３３を使
用するシトステロール生物転化からの醗酵液１２００
ｍ−を酸性にし、同社の塩化メチレン（Ｍｔｓｏ！、
）で２回抽出すると、粗製抽出物それぞれ２９．２９と
８．９ｇを生ずる。
４３３醗酵からの（１）の単離 Ｍ、 ７オアツーツムＮＲＲＩ、 Ｂ−１２４３３を使
用するシトステロール生物転化からの醗酵液１２００
ｍ−を酸性にし、同社の塩化メチレン（Ｍｔｓｏ！、
）で２回抽出すると、粗製抽出物それぞれ２９．２９と
８．９ｇを生ずる。
最初の抽出物をＭｅａｌ、に再溶解し、酸性成分を除く
ために飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗う。残りの中性成
分は溶媒除去後茶色の油１８，６りとして得られる＠Ｔ
ＬＯ及び液体クロマトグラフィにより、三つの主要紫外
線吸収帯を含むことが示される。
ために飽和重炭酸ナトリウム溶液で洗う。残りの中性成
分は溶媒除去後茶色の油１８，６りとして得られる＠Ｔ
ＬＯ及び液体クロマトグラフィにより、三つの主要紫外
線吸収帯を含むことが示される。
これらのうち極性の最も少ないものはメチルエステルム
ζＢの混合物であって、３が主要量である。
ζＢの混合物であって、３が主要量である。
図１を参照。極性の鰻も大きＧ１のは９，２２−ジヒド
ロキシ化合物０であり、中程度の一極性の化合物は次の
ように９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，１７（２０）
−プレグナジェン−２０・−カルボキサルデヒド（１）
と確認される。アルデヒド（１）に富むフラクシ曹ンを
、塩化メチレン中の３０％酢酸エチルで溶離される短い
シリカカラム上の予備的クロマドグチフィから得られる
。この材料３．３９を直列に配置した３本の予備充填さ
れたロバ−・シリカゲルカラム〔サイズＢ１イー・メル
ク社〕上で注意深く再クロマトグラフィにかけ、塩化メ
チレン中の２０％酢酸エチルで＃離する。アルデヒド（
１月才無色固体として得られ、これは酢１−エチル／塩
化メチレンから新品１．０５９として結晶化した。融点
１９４〜２１２°。〔α１１＋９６°［： Ｑ ％ １
．０２４１０ＨＯ／、 ］分析； 測定値： ０．７７
．５３％、Ｈ，８，７１％０、、Ｈ，。Ｏ３の計算値：
０．７７．１６％、ｉ！、 ８．８３％質量スペクト
ルはｒｒｖ’ｓ ３４２ （基礎ピーク）に分子イオン
、３２４．３０９．２９５．１９１．１３６、及び１２
４に主なフラグメントイ寸ンを与えた。
ロキシ化合物０であり、中程度の一極性の化合物は次の
ように９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，１７（２０）
−プレグナジェン−２０・−カルボキサルデヒド（１）
と確認される。アルデヒド（１）に富むフラクシ曹ンを
、塩化メチレン中の３０％酢酸エチルで溶離される短い
シリカカラム上の予備的クロマドグチフィから得られる
。この材料３．３９を直列に配置した３本の予備充填さ
れたロバ−・シリカゲルカラム〔サイズＢ１イー・メル
ク社〕上で注意深く再クロマトグラフィにかけ、塩化メ
チレン中の２０％酢酸エチルで＃離する。アルデヒド（
１月才無色固体として得られ、これは酢１−エチル／塩
化メチレンから新品１．０５９として結晶化した。融点
１９４〜２１２°。〔α１１＋９６°［： Ｑ ％ １
．０２４１０ＨＯ／、 ］分析； 測定値： ０．７７
．５３％、Ｈ，８，７１％０、、Ｈ，。Ｏ３の計算値：
０．７７．１６％、ｉ！、 ８．８３％質量スペクト
ルはｒｒｖ’ｓ ３４２ （基礎ピーク）に分子イオン
、３２４．３０９．２９５．１９１．１３６、及び１２
４に主なフラグメントイ寸ンを与えた。
Ｈ−ｎｍｒスペクトル： １．０２．（１８−ＯＨ，
）； １．３６．（１９−ＱＨ，戸１．８２． （２
１−ＯＨ，）＋ ５．８８゜（４−Ｈ）ｉ １０．０４
．（０１０）ｐＰ” 。
）； １．３６．（１９−ＱＨ，戸１．８２． （２
１−ＯＨ，）＋ ５．８８゜（４−Ｈ）ｉ １０．０４
．（０１０）ｐＰ” 。
工Ｒスペクトルｉ ３４９７．３４４０ ｃｍ−’
（−０Ｈ）ｉ １６６３Ｃｒ１１−′（α、β不飽和カ
ルボニ ル）、１６２２．１６１７ ｃｒｓ−’ （ｏ−ａ）Ｕ
Ｖスペクトル： λＨ大２５０ ｎｍ （ξ、 ２７，
９００、メタノール） 実施例４ Ｍ、 ７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ−１２４３３をつく
るのに明らかにされた方法で、Ｍ、７オアツ一ツムｍＢ
−８１１９の代わりにアースロバフタ−、バチルス、ブ
レビバクテリウム、フリネバクテリウム、ノカルディア
、プロト了ミノバクタ〜、セラティア、及びストレプト
ミセス属からのステ四−ル分解性優性物を使用して、０
１７側鎖をもつステロイド讃を選択的に減成分解し、主
生成゛物として化合物（ｆ）を１ｖ穆する能力を特徴と
する突然変異微生物が得られる。
（−０Ｈ）ｉ １６６３Ｃｒ１１−′（α、β不飽和カ
ルボニ ル）、１６２２．１６１７ ｃｒｓ−’ （ｏ−ａ）Ｕ
Ｖスペクトル： λＨ大２５０ ｎｍ （ξ、 ２７，
９００、メタノール） 実施例４ Ｍ、 ７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ−１２４３３をつく
るのに明らかにされた方法で、Ｍ、７オアツ一ツムｍＢ
−８１１９の代わりにアースロバフタ−、バチルス、ブ
レビバクテリウム、フリネバクテリウム、ノカルディア
、プロト了ミノバクタ〜、セラティア、及びストレプト
ミセス属からのステ四−ル分解性優性物を使用して、０
１７側鎖をもつステロイド讃を選択的に減成分解し、主
生成゛物として化合物（ｆ）を１ｖ穆する能力を特徴と
する突然変異微生物が得られる。
実施例５
実施例１のＭ、 ７オアツーツムＮＲＲＬ Ｂ−１２４
３３の代わりに実施例４で得られる突然変異株を使用し
て、化合物（１）が得られる。
３３の代わりに実施例４で得られる突然変異株を使用し
て、化合物（１）が得られる。
図Ｉ
出願人 ジ アップジョン カンパニー代理人 弁理
士佐々井彌太部 （ほか１名） −−−−１ ：収入： 手続補正書Ｃ方式） ％式％ ： ） ） １、事件の表示 昭和５７年特許願第１Ｊ２２４５
号２・ 発明の名称 ステロイド生物変換方法及び
生成物３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 住 所 〒１６０ 東京都新宿区新宿２丁目８
番１号新宿セブンビル６０８９室 （ａｓｏｔ）氏名弁１１士佐々井彌太部
［株］（電話３５４−１２８５■〜６） ５、補正命令の日付 昭和５’／年１０月７８゛６．補
正により増加する発明の数 ［ｎゞず７、補正の対象
明細書の発明の詳細な説明の項８、補正の内容 ５員
４行及び１６頁１行「図１」を「反応式Ｉ」に訂正する
。
士佐々井彌太部 （ほか１名） −−−−１ ：収入： 手続補正書Ｃ方式） ％式％ ： ） ） １、事件の表示 昭和５７年特許願第１Ｊ２２４５
号２・ 発明の名称 ステロイド生物変換方法及び
生成物３、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ４、代理人 住 所 〒１６０ 東京都新宿区新宿２丁目８
番１号新宿セブンビル６０８９室 （ａｓｏｔ）氏名弁１１士佐々井彌太部
［株］（電話３５４−１２８５■〜６） ５、補正命令の日付 昭和５’／年１０月７８゛６．補
正により増加する発明の数 ［ｎゞず７、補正の対象
明細書の発明の詳細な説明の項８、補正の内容 ５員
４行及び１６頁１行「図１」を「反応式Ｉ」に訂正する
。
第１頁の続き
１／４６５
０発 明 者 メール・ジーン・ウォッチャアメリカ合
衆国ミシガン州カラ マズー・サウス・プレーリー・ アベニュー１４５
衆国ミシガン州カラ マズー・サウス・プレーリー・ アベニュー１４５
Claims (1)
- １．０−１７側鎖をもつステロイドの存在下、好気的条
件下に水性栄養培地中でミコバクテリウム・フォアツー
ツムＮＲＲＬ Ｂ−１２４３３を培養し、望んでいる生
成物を回収することからなる、の化合物の発酵製造法。 ２ ステロイドがシトステロール、コレステロール、ス
チグマステロール、カンペステロール又は上記ステロイ
ドの混合物からなる群から選ばれる、特許請求の範囲第
１項による方法。 λ ０−１７側鎖をもったステロイドの存在下、好気的
条件下に水性栄養培地中でアースロバフタ−（Ａｒｔｈ
ｒｏｂａａｔｏｒ ） 、バチルス（Ｂｍａｉｌｌｕｓ
）、ブレビバクテリウム（Ｂｒ＠ｖｉｂａｏｔ＠ｒｉ
ｕｍ ） 、コリネバクテリウム（０ｏｒｙｎｅｂａｏ
ｔ＠ｒｉｕｍ ） Ｓ ノカルディア（Ｎｏｃａｒｄｉ
ａ ） 、プロドア叱ノバクタ＋ （Ｐｒ０ｔＯ＆１
１１１ｎＯｔｌ＆Ｏｔ＠ｒ ） 、セラティア（８＊ｒ
ｒａｔｉａ ）、及びストレプトミセス（８ｔｒｓｐｔ
ｏｍｙｏｓｓ ）からなる群から選ばれる突然変異株の
微生物を培養することからなり、この突然変異株が０−
１７側鎖をもつステロイド類を選択的に転化し、発酵液
中に９−ヒドロキシ−３−オキソ−４，１７（２０）−
プレグナジェン−２０−カルボキサルデヒドを主生成物
として蓄積する能力により特徴付けられる特許請求の範
囲第１項で定義された化合物の発酵製造法。 ｔ ステロイドがシトステルール、コレステロール、ス
チグマステロール、及びカンペステロール又は上記ステ
ロイド類の混合物からなる群から選ばれる、特許請求の
範囲第３項による方法。 ５、ａ−１７側鎖をもつステロイド類を選択的に転化し
、発酵液中に主生成物として９−ヒトルキシー３−オキ
ソ−４，１７（２０）−プレグナジエシー２０−カルポ
シアサルデヒドを蓄積する能力を特徴とするミコバクテ
リウム突然変異株を、０−１７側鎖をもつステロイドの
存在下、好気的条件下に水性栄養培地中で培養し望んで
いる生成物を回収することからなる、特許請求の範Ｆｌ
！Ｉ＠１項で定義された化合物の発酵製造法。 ６、 ステロイドがシトステロール、コレステロール、
スチグマステロール、及びカンペステロール又は上記ス
テロール類の混合物からなる群から選ばれる、特許請求
の範囲第５項による方法。 の化合物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US28630881A | 1981-07-24 | 1981-07-24 | |
| US286308 | 1981-07-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5856693A true JPS5856693A (ja) | 1983-04-04 |
Family
ID=23098007
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57122245A Pending JPS5856693A (ja) | 1981-07-24 | 1982-07-15 | ステロイド生物変換方法及び生成物 |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4425429A (ja) |
| JP (1) | JPS5856693A (ja) |
| CH (1) | CH656390A5 (ja) |
| DD (1) | DD206393A5 (ja) |
| DE (1) | DE3225649A1 (ja) |
| FR (1) | FR2510138A1 (ja) |
| GB (1) | GB2102429B (ja) |
| HU (1) | HU186868B (ja) |
| IE (1) | IE53354B1 (ja) |
| IT (1) | IT1158019B (ja) |
| NL (1) | NL8202849A (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4444884A (en) * | 1982-05-25 | 1984-04-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| US4755463A (en) * | 1982-05-25 | 1988-07-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Process for preparing steroids |
| IL94272A (en) * | 1989-05-11 | 1994-04-12 | Richter Gedeon Vegyeszet | 9ALPHA-hydroxy-3-oxo-4,24(25)-stigmastadien-26-oicacid derivatives, a process for preparating same and pharmaceutical compositions containing same |
| GB2577037A (en) * | 2018-08-09 | 2020-03-18 | Cambrex Karlskoga Ab | Genetically-modified bacteria and uses thereof |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4035236A (en) | 1975-10-24 | 1977-07-12 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-hydroxyandrostenedione |
| US4029549A (en) | 1976-03-26 | 1977-06-14 | The Upjohn Company | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum |
| US4175006A (en) | 1977-10-21 | 1979-11-20 | The Upjohn Company | Composition of matter and process |
| US4214051A (en) | 1977-10-21 | 1980-07-22 | The Upjohn Company | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester |
| US4429041A (en) * | 1981-05-11 | 1984-01-31 | The Upjohn Company | Process of producing 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadiene-20-carboxylic acid |
-
1981
- 1981-07-24 US US06/386,308 patent/US4425429A/en not_active Expired - Fee Related
-
1982
- 1982-07-06 GB GB08219482A patent/GB2102429B/en not_active Expired
- 1982-07-09 DE DE19823225649 patent/DE3225649A1/de not_active Withdrawn
- 1982-07-12 CH CH4241/82A patent/CH656390A5/de not_active IP Right Cessation
- 1982-07-14 NL NL8202849A patent/NL8202849A/nl not_active Application Discontinuation
- 1982-07-15 JP JP57122245A patent/JPS5856693A/ja active Pending
- 1982-07-19 IT IT48847/82A patent/IT1158019B/it active
- 1982-07-23 HU HU822384A patent/HU186868B/hu unknown
- 1982-07-23 FR FR8212931A patent/FR2510138A1/fr not_active Withdrawn
- 1982-07-23 IE IE1783/82A patent/IE53354B1/en unknown
- 1982-07-23 DD DD82241900A patent/DD206393A5/de unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| IE53354B1 (en) | 1988-10-26 |
| US4425429A (en) | 1984-01-10 |
| IE821783L (en) | 1983-01-24 |
| IT8248847A0 (it) | 1982-07-19 |
| DE3225649A1 (de) | 1983-02-17 |
| FR2510138A1 (fr) | 1983-01-28 |
| DD206393A5 (de) | 1984-01-25 |
| HU186868B (en) | 1985-10-28 |
| IT1158019B (it) | 1987-02-18 |
| CH656390A5 (de) | 1986-06-30 |
| GB2102429B (en) | 1985-08-21 |
| NL8202849A (nl) | 1983-02-16 |
| IT8248847A1 (it) | 1984-01-19 |
| GB2102429A (en) | 1983-02-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US4029549A (en) | Process of producing 9α-hydroxy-3-ketobisnorchol-4-en-22-oic with mycobacterium fortuitum | |
| US4429041A (en) | Process of producing 9-hydroxy-3-oxo-4,17(20)-pregnadiene-20-carboxylic acid | |
| JPS5856693A (ja) | ステロイド生物変換方法及び生成物 | |
| US4039381A (en) | Composition of matter and process | |
| US4062729A (en) | Microbial transformation of steroids | |
| US4405525A (en) | Composition of matter and process | |
| US4175006A (en) | Composition of matter and process | |
| JPS6141547B2 (ja) | ||
| US4214051A (en) | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester | |
| US4042459A (en) | Composition of matter and process | |
| US4062880A (en) | 9α-Hydroxy-bis-nor-cholanic acid | |
| US4304860A (en) | Process for the microbial transformation of steroids | |
| US4431591A (en) | 24-Nor-1,4-choladiene-3,22-dione | |
| US4423146A (en) | Composition of matter and process | |
| US4226936A (en) | Process for preparing 9α-OH BN alcohol | |
| US4214052A (en) | Process for preparing 9α-OH BN alcohol | |
| US4329432A (en) | Mycobacterium fortuitum strain | |
| US4211841A (en) | Process for microbial transformation of steroids | |
| JPS61205480A (ja) | 新規微生物 | |
| US4223092A (en) | Process for preparing 9α-OH BN acid methyl ester | |
| US4221868A (en) | Process for preparing 9α-OH testosterone | |
| JPS608120B2 (ja) | 微生物による化合物の製法 | |
| JPH0120878B2 (ja) | ||
| US4443541A (en) | Process for preparing an indenedione and a mycobacterium culture therefor | |
| GB2104526A (en) | 6-fluoro-9-hydroxyandrost-4- ene-3,17-diones and microbial preparation thereof |