JPS5878595A - 新規な酸性ヘテロ多糖類の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はアセトバクター属に属する細菌による新規な酸
性へテロ多糖類の製造法に関する。

従来−粘質多糖類は粘着性、粘稠性などの性質からその
利用範囲は広く１食料品、化粧品への添加剤として、さ
らに接着剤−被覆剤−凍結安定剤。

潤滑剤−ドリリングマッド添加剤及び油田にかげる石油
回収用剤等として各方面への用途が開発されつつある０
また近年、ある種の多糖類の抗腫瘍性作用−血圧降下作
用等の薬理作用が認められるに至り、医薬としての利用
範囲の拡大も期待されている。

そし−である種の微生物が多糖類を生産することは公知
であり−たとえばアルカリ土類金属、バチルス属−キサ
ントモナス属、アセトバクター属。

アゾトバクタ−属、シュードモナス属、ロイコノストッ
ク属あるいはオーレオパシジウム属等の菌株の生産する
ものが知られている。

またアセトバクター属に属する菌株がある種の多糖類を
生産することも公知である。即ちアセトバクター・キシ
リナムが生産するセルロースが著名であｆ）　（Ｊ、　
Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、ム！、１７２　（／ｇｇ≦）；　
Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｊ、、　　ｉｚｇ、　　３ａｔ　（
ｔ　ｑ　ｚ　ａ　））、さらにアセトバクター・レバニ
カムがレバン（Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｊ、３７．ｕｊＯ（／９４７．７））を、そしてアセト
バクター・カブシュレイタムがデキストラン〔Ｃａｒｂ
ｏｂ）’ｄｒ、　Ｒｅｓ、　７−ｔ＋　−１７ｊｃ／９
７９）　、ｌを生産する′ことが知られており、そして
また、アセトバクター・キシリナムの自然変異株からグ
ルコース、マンノース、ラムノース−グルクロン酸を構
成成分とする含窒素多糖類が分離されたことも報告され
ている（　Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ、、コ
ア、ｊ９９−６０３　（／　９　ｆ　／　）　）　カ、
その生産量はアセトバクター・キシリナムの生産するセ
ルロースを除いては微々たるものであり、工業的生産手
段とはなり得ないのが現状である。

本発明者らは、微生物による安全性の高い高粘性の多糖
類の生産を意図し−古くから人類の食料に供され歴史的
にその安全性が確められている各種発酵食品の醸造過程
に関与する微生物の多糖類生産能を広く検索した結果１
食酢の発酵醪から分離したアセトバクター属に属する菌
株を培地に培養することによシーグルコース−ガラクト
ース。

マンノース、およびグルクロン酸を主要構成糖とする高
粘性の酸性へテロ多糖類が生産されることを発見し、こ
れに基いて本発明を完成した一〇すなわち本発明はアセ
トバクター属に属しグルコース、ガラクトース−マンノ
ース−およびグルクロン酸を主構成成分とする酸性へテ
ロ多糖類生産能を有する菌株を培地に培養し一培養物か
ら上新規な酸性へテロ多糖類の創造法である。

゛　本発明で使用することができる微生物としては。

アセトバクター属に属し上記酸性へテロ多糖類を生産す
るものであればよいが−特に本発明者らが食酢の発酵醪
から新たに分離したアセトバクター・ポリサラ力ロゲネ
ス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒ
ｏｇｅｎｅｓ）に属スるＭＴ−１１−ユおよびＭＦ−ｇ
は本発明において極めて有利に利用できる菌株の例であ
る。

上記ＭＴ−／／−λおよびＭＦ−ｇの菌学的性質は下記
の如くである（特に菌株側に記載されていないものは各
菌共通の性質および生育状態である）。

なお菌学的性質に関する実験方法は、１９７１年６月２
０日東京大学出版会発行−長谷用武治編著［微生物の分
類と同定」−「ザ拳ジャーナル・オプ・ジェネラル・ア
ンド・アプライド・マイクロバイオロジー（Ｔｈｅ　Ｊ
ｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｅｎｅｒａｌ　ａｎｄＡｐｐｌ
ｉｅｄ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇ）’）第１Ｏ巻、第２
号、第９ｊ〜ｌコロ頁（１９ｊｊ年、）」のｒＴｈｅ　
Ｆｌａｇｅｌｌａｔｉｏｎａｎｄ　Ｔａｘｏｎｏｒｒｌ
ｙｏｆ　Ｇｅｎｅｒａ　Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　
ａｎｄＡｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｗｉｔｈ　Ｒｅｆｅｒ
ｅｎｃｅ　　ｔｏ　　ｔｈｅ　Ｅｘｉｓｔｅｎｃ＠ｏｆ
　Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　５ｔｒａｉｎｓ　（中間
菌株の存在に関連シてのグルコノバクタ−属およびアセ
トバクター属のフラゲレーションおよび分類学）Ｊ［び
［ザ・ソサエティー・フォー・アプライド°・バクテリ
オロジー・、テクニカル拳シリーズ・Ｎｏ、　２　（Ｔ
ｈｅ　５ｏｅｉｅｔ７　ｆｏｒ　Ａｐｐｌｉｅｄ　Ｂａ
ｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ’　ＴｅｃｈｎｉｃａｌＳｅｒｉ
ｅｓ　Ｎｏ、　２）アイデンテイフイケイション・メソ
ツズ・フォー・マイクロバイオロジ°スツ（Ｉｄｅｎｔ
ｉｆｉｃａｔ’ｉｏｎ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　Ｍｉ
ｅｒｏｂｉｏｌｏｇｉａｔａ）１９６１年」の第１．ｇ
頁のｒ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒＩｄｅｎｔｉｆｙｉｎ
ｇ　Ａｃｅｔｉｃ　Ａｃ１ｄ　Ｂａｃｔｅｒｉａ　　（
酢酸菌の同定法）」に従った。

また酵母エキス−ブドウ糖寒天培地は酵母エキス１？−
ブドウ糖３０ｆ、ポリペプトン３ｆ、寒天１ｊｆを蒸留
水／Ａに溶解しｐＨを６．３に岬節したもの一酵母エキ
スニブドウ糖液体培地は酵母エキスｉｆ、ブドウ糖３０
１Ｆ、ポリペプトン３ｆを蒸留水ｌ！に溶解しｐＨをｔ
＜、ｊに調節したもの。

エタノール含有酵母エキス−ブドウ糖液体培地は酵母エ
キスｊｆ−ブドウ糖３０？、ポリペプトンＪｉＦを蒸留
水ｌ！に溶解しｐＨを６．・ｊに調節して滅菌後−エタ
ノールを３４　（Ｖ／Ｖ　）無菌的に添加したもの−Ｍ
Ｙ平板培地はブドウ糖ＩＱｆ、ポリペプトンＪ−１−、
酵母エキスＪｆ、モルトエキス３１Ｆ、寒天１ｊｆを蒸
留水ｌ！に溶解しｐＨを６．３に調節′したもの、肉汁
液体培地は肉エキスＩＱ、ｆ、ポリペプトンｌＱｆを蒸
留水ｌ！に溶解しｐＨを−４、ｊ、）Ｉｃ調節したもの
一加糖肉汁液体培地はブドウ糖１０９−、肉エキス１０
１１−％ポリペプトン１０？を蒸留水ｌ！に溶解しｐＨ
を６．ｊに調節したものである。　　　　　　　　− ゛そしてまた、−ピキノし−の同定は１紙り・〜トゲラ
フイーー薄層クロマトグラフィー、　赤外部すよび紫外
部吸収スペクトラムおよび質量分析法で行なった。

■、形態晶所見 形状　　　　　短稈状 大きさ　　　　　０．ｊ　〜０．７×１．０〜ノ、１２
μｍ集２団　　　　　　単独あるいは連鎖状運動性　　
　　無し 胞子形成　　　形成せず ダラム染色　　　　陰性 抗酸性　　　　陰性 ＩＩ、培養的所見 ■酵母エキ′スープドウ糖寒天平板培養（３００′″ｃ
ｇ日間培養） 形状　　　　　円形 辺縁　　　　　平滑で金縁 隆起　　　　　隆起状（Ｒａ１ｓｅｄ　）光沢　　　　
　有り 表面　　　　　平滑 色調　　　　　　　ＭＴ、−、／／−ユは淡黄色で光沢
ありＭＦ−ｇはうす桃色で光沢あり ■炭酸カルシウム含有酵母エキスーブドウ糖斜面培養（
３０Ｃで３日間培養） 生育の良否　　良好 隆　起　　　　中程度　、□ 表　面　　　　平滑 辺　縁　　　　平滑で金縁 色　調　　　　　ＭＴ−１／−２は淡黄色で光沢ありＭ
Ｆ−ｇはうす桃色で光沢あり ■エタノール含有酵母エキスーブドウ糖液体静置培養（
３０Ｃでｑ日間培養） よく生育する。湿潤でもろ− 菌膜を形成する。混濁しｍ一 部は底に沈殿する。セルロー スからなる厚膜な形成しない。

■肉汁液体静置培養（３０７：で７日間培養）生育乏し
い。セルロースから なる厚膜を形成しない ＭＴ−１１−λはリング状に生育する。

ＭＦ−４は極めて薄い菌膜を形成する。

■ブドウ糖含有肉エキス液体静置培養（３０Ｃで７日間
培養） 生育良好。セルロースからな る厚膜な形成しない。

・ＭＴ−ＩＪ−２の培養液は混濁し、一部は沈殿する。

薄い菌膜を形成する。

ＭＦ−ｆｆの培養液はよく混濁し沈殿 する。もろい菌膜な形成する。

■ＭＹゼラチン高層培養（−〇〇で２日間培養） 生育良好。液化性無し０ ■リドマスミルク（３０Ｃで２日間培養）凝固性無し０ ■、生理学的性質 ■硝酸塩の還元：無し ■脱窒反応：無し ■ｖｐテスト：陰性 ■インドールの生成：無し ■硫化水素の生成：無し ■デンプンの加水分解：無し ■クエン酸の利用： Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎの培地：無し ■無機窒素源の利用： 硝酸塩：無し アンモニウム塩：無し ■培地中への色素の生成：無し ［相］ウレアーゼ活性：無し オキシダーゼ活性：無し ０カタラーゼ活性：有り ０生育ｐＨ範囲：３．θ〜２．５ 一最適ｐＨ範囲：１１．０−ｊ、ｊ Ｏ生育温度範囲：ｌ！ｉ〜３ｊＣ 最適温度範囲：２θ〜コざＣ ■酸素に対する態度：好気的 ［相］！−ケトグルコン酸の生成：有り［相］ジヒドロ
キシアセトンの生成：有り０エタノール資化性：エタノ
ールを弱（資化し酢酸を生成する ［相］酢酸の資化性：無し ［相］乳酸の資化性：無し ［相］ビタミン要求性：有り ■酢酸の分解性：有り ■乳酸の分解性：有り ◎塩化第ユ鉄反応：陰性（グルコース培地）工ｖ、炭素
源の資化性およびそれらからの酸およびガスの生成 第１表のとおりであるＯ ■、電子伝達系の補酵素の種類 補酵素ノ主要成分；ユビキノンーＩＱ 上記の諸性質に従い一本菌の分類学的地位を「バージイ
ズ・マニュアル・オブ・デターミネイティブ・バクテリ
オロシア　（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　　Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ
　ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅＢａｃｔｅｒｉｏｌｏｇ
ｙ）第３版」−ならびに［ザ・ジャーナル・オプ・ジェ
ネラルφアンド・アプライドｅマイクロバイオロジー第
１θ巻、９３〜）２６頁（／９乙４年）」のｒ　Ｔｈｅ
　Ｆｌａｇｅｌｌａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｔａｘｏｎｏｍ
ｙ　ｏｆ　ＧｅｎｅｒａＧｌｕｅｏｎｏｂａｃｔｅｒ　
ａｎｄ　Ａｃｅｔｏｂａ、ｃｔｅｒ　ｗｉｔｈ　Ｒｅｆ
ｅｒｅｎｃｅｔｏ　ｔｈｅ　Ｅｘｉｓｔｅｎｃｅ　ｏｆ
　Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ　５ｔｒａｉｎｓ　（中間
菌株の存在に関連してのグルコノバクタ−属およびアセ
トバクター属のフラゲレーションおよび分類学）Ｊ。

および［ザ・ジャーナル・オプ拳ジェネラル・アンド・
アプライドΦマイクロバイオロジー第１！巻、）ざ７〜
１９６頁（／９４９年）」のｒ　Ｅｎｚ）’ｍａｔｔｅ
　５ｔｕｄｉｅｓ　ｏｎｔｈｅ　０ｘｉｄａｔｉｏｎ　
ｏｆ　Ｓｕｇａｒ　ａｎｄ　Ｓｕｇａｒ　ａｌｃｏｈｏ
ｌ　’％（糖および糖アルコールの酸化に関する酵素的
研究＼）■。

幅Ｕｂｉｑｕｉｎｏｎｅ　ｏｆ　Ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉ
ｄ　ｂａｃｔｅｒｉａ　ａｎｄ　ｉｔｓ　Ｒｅ１ａｔｉ
ｏｎｔｏ　Ｃ１ａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｇｅ
ｎｅｒａ　Ｇｌｕｃｏｎｏｂａｃｔｅｒ　　ａｎｄＡｃ
ｅｔｏｂａｃｔｅｒ、ｅｓｐｅｃｉａｌｌｙ　ｏｆ　　
ｔｈｅ　　ｓｏ−ｃａｌｌｅｄｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔ
ｅ　５ｔｒａｉｎｓ（酢酸菌のユビキノンおよびその゛
グルコノバクター属卦よびアセトバクター属、特に所謂
中間菌株の分類との関係）」に従って求めた。

即ち本菌はグラム−性の好気性桿菌でエタ、ノールな酸
化して酢酸を生成し、またｐＨ３、０でも増殖できるこ
とから、一般に酢酸菌と呼ばれるアセトバクター属もし
くはグルコノバクタ−属に属する菌株であることは明ら
かである。

本菌は王たるユビキノンタイプがＱ、。でビタミンが生
育に必須であり、またジヒドロキシアセトンの生成能を
有する点ではグルコノバクタ−属トしての性質を有する
が、一方酢酸および乳酸の分解性を示す点ではアセトバ
クター属としての性質を示し、アセトバクター属または
グルコノバクタ−属のいずれとも断定し難いが、酢酸お
よび乳酸の分解性を示すことより一一応アセトバクター
属に入れるのが妥当と考えられる。

一方、ユビキノンタイプがＱ＋ｏであり、かつ酢酸およ
び乳酸の分解性を有する菌株としてはアセトバクター・
キシリナムが知られているが、アセトバクター・キシリ
ナムは静置培養でセルロースからなる厚膜を形成し一生
育にビタミンを要求しない点で本菌と＆、ま明らかに異
なる。また本菌はグルコース培地で塩化第ユ鉄反応が陰
性であり−かつ培地中に水溶性色素を生成しないことか
ら、酢酸菌の中間法として位置づけられているグルコノ
バクタ−〇メラノゲナスやグルコノバクタ−・リクエフ
ァシエンス等の公知種とも異なる。

以上の諸点に加えて培地中にグルコース、ガラクトース
−マンノース−およびグルクロン酸を主構成成分とする
酸性へテロ多糖類を蓄積する能力のある酢酸菌は未だ見
い出されておらず一本菌はアセトバクター属に属する新
菌種と認定するのが妥当であり−アセトバクター拳ポリ
サツカロゲネス（Ａｃｅｔｏｂａｃｔｅｒ　ｐｏｌｙｓ
ａｃｃｈａｒｏｇｅｎｅｓ　）と命名した。

なお、上記したＭＴ　−／　／−コとＭＦ　−ｆｆとは
類似の性質が多いが、酵母エキス−ブドウ糖培地での色
セトバクター・ポリサッカロゲネスＭＴ−／／−λおよ
びアセトバクター・ポリサラ力ロゲネスＭＦ−ｇと命名
した。そしてこれらの菌は工業技術院微生物工業技術研
究所にアセトバクター・ポリサツカロゲネスＭ’ｌ’−
／／−Ｊは微工研菌寄第４　／７１号（ＦＥＲＭ　　Ｐ
　−ｇ１７１として、アセトバクター・ボリサツ力ロゲ
ネスＭＦ−４は微工研菌寄第６１７！号（ＦＥＲＭ　Ｐ
−Δ１７ｊ）として寄託されている。

本発明において、使用菌としてはアセトバクター・ボリ
サツ力ロゲネスＭＴ−１１−，１やアセトバクター・ポ
リサツカロゲネスＭＰ−ｇばかりでなく。

アセトバクター属に属する微生物であって目的とする上
記酸性へテロ多糖類を生産するものであればすべて用い
ることができる。

次に本発明で使用する培地の炭素源としては。

たとえばグルコース−ガラクトース−フラクトース、シ
ュクロース、／ＩＪセロール、マンニトール。

エタノール−クエン酸、リンゴ酸−糖蜜、各種澱粉質含
有穀類の糖化液などが単独または混合して用いられる。

また窒素源としては一酵母エキスーペプトン。

コーンステイープリカー、硫酸アンモニウムなどの有機
および無機窒素源が用いられる。

さらにカリウ、ム、カルシウム、マグネシウム。

ナトリウムなどの塩類やパントテン酸、ニコチン酸、Ｆ
ｅ、　Ｃｏ、　Ｍｏなどの微量要素が上記酸性へテロ多
糖類の生産および粘性を高めるために有効に使用される
。

培養は、コＯ〜３Ｊ−Ｃ，好ましくはコｊ−コざＣ１培
地のｐＨ３〜ｇ、好ましくはｊ〜７において好気的条件
下で１通常振盪培養あるいは通気攪拌培養で行なわれる
。培養時間は種々の条件によって異なるが一通常ｙｇ〜
９６時間の範囲で行なわれる。

このようにして培養物中に得られた上記酸性ヘテ日多糖
類（以下、上記多糖類という）の回収は公知の方法を用
いて行うことができる０たとえば。

培養液をそのまま−または適量の水で希釈後、遠心分離
、濾過などによって菌体を分離し、メタノール−エタノ
ール、プロパツールあるいはアセトンなどの沈澱剤を加
え繊維状の上記多糖類゛を沈澱せしめた後、アセトン洗
滌して乾燥を行うことにより回収することができる。

また本発明で得られる上記多糖類は酸性物質であるので
一閑体を除いた培養液にセチルトリメチルアンモニウム
ブロマイドなどを添加して上記多糖類を沈澱させること
により回収することができる０ 粗製の上記多糖類は多糖類の精製法にしたがって精製す
ることができる。例えば粗製の上記多糖類を水に再溶解
し、熱処理後−遠心分離して不溶物を完全に除去し、ア
セトンなどの沈澱剤で再沈澱を（９返すことによシ純度
の高い白色綿状の精製された上記多糖類が得られる０ま
た、セチルトリメチルアンモニウムブロマイドによる沈
澱（ＣＴＡＢ処理）、透析、およびイオン交換樹脂など
を併用して高純度の精製品を得ることもできる。

本発明で得られる上記多糖類の理化学的性質を示すと以
下の通りである。

■赤外吸収スペクトル 脱塩前の赤外吸収スペクトルは第７図に示す通りであり
、脱塩後の赤外吸収スペクトルは第一図に示す通りであ
る。

■呈色反応 アンスロン反応　　　　　陽性 カルバゾール反応　　　　陽性 エルソンーモルガン反応陰性 ヨード′反応　　　　　　　陽性 ■塩基性、酸性−中性の別 セチルトリメチルアンモニウムブロマイドあるいはセチ
ルピリジウムクロライドを添加すると白色沈澱が生じる
。従って本多糖類は酸性である。

■溶剤に対する溶解度 水に可溶で一エタノール、エーテル、アセトン等に不溶
である。

０色及び形状 精製品は白色綿状または繊維状である。

■粘　度 水溶液は無色透明で粘性を有する。その／％溶イズ）（
２ｊＣ，３０ｒｐｍ−東京計器製Ｂ型粘度計による）で
ある。

■主たる構成糖及びその構成比 本多糖類を−Ｎ硫酸で１ｏｏＣ，ａ時間加水分解した後
−アセトン：イソプロパノール二〇、１Ｍ乳酸（２：λ
：））の展開溶媒を用いて薄層クロマトグラフィーな行
ない、アニリン：ジフェニールアミン：アセトン：燐酸
試薬で呈色させたとコロ、／’ルコース、ガラクトース
、マンノース。

グルクロン酸が検出された。更にガスクロマトグラフィ
ーによる分析結果からも、少なくともグルコース、カラ
クトース、マンノース、グルクロン酸が主構成糖である
ことが確認され、そのグルコ−、ｘ、　：　ｔｊラクト
ース：マンノース：グルクロン酸構成比は約ｔｏ：、７
〜１：０．２〜ユニ０．！〜ユであった。

■元素分析値 Ｃ＝４＜０．４３±・ｌ憾、Ｈ＝６，２ダ±ｌ憾；Ｎ＝
ｏ憾：　灰分１，０？土Ｏ０ざ憾 ■比旋光度 〔α）２７　：＋４ＩＪ　、　θ　　〜＋ｊ７　、０　
　（Ｃ＝０．３３．水溶液）［相］その他の特徴的性質 本多糖類の水溶液はローカストピーンガム及びグアガム
などのガラクトマンナン類と相溶してゲル化あるいは高
粘性化を示す０本多糖類とローカストピーンガムとの相
溶作用の関係は第３図に示されている。

■分子量 ｌＯ５乃至１０７以上である。

＠融　点 ／９０’ｌ：：で黒褐色化が始まり、ユＳＯＣで分解す
る。

従来、アセトバクターに属する細菌が生産するヘテロ多
糖類としては、アセトバクター・キシリナムの自然変異
株がグルコース−ラムノース、マンノース、グルクロン
酸の構成糖比が３：ｌ：ノ：ｌでかつ炭素原子と窒素原
子のモル比が１ｔｓ（蛋白質として／、＜４重量パーセ
ント）である含窒素の酸性へテロ多糖類を生産すること
が報告されそいるが（Ｃａｎ、　Ｊ、　Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ、−２７、ｊ９９−６０３（ｔ９ｔｔ）〕、本発明
で得られる上記多糖類は゛主要構成糖としてガラクトー
スを含有すること、ラムノースを検出しないこと、およ
び窒素を含有しない点で上記の報告されている多糖類と
は明らかに異なり１本発明で得られる上記多糖類は新規
なものと認められる。

本発明で得られる上記多糖類は、古来から食酢醸造に使
用され、歴史的にその安全性が確かめられているアセト
バクター属の微生物が生産する高粘性多糖類であり、そ
の安全性と高粘性を生かして食品工業Ｋ　ｉ−ける用途
をはじめ医薬品としての用途が十分期待できる。また潤
滑剤、被覆剤、糊料、懸濁補助剤、化粧品素材１石油を
回収する際の増粘剤などの工業用途にも充分利用するこ
とが可能である。

以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明する０ 実施例　１ リン酸１カリθ、！ノー　リン酸２カリＱ−１７、硫酸
マグネシウム２水塩Ｏ，ユＺｆ−塩化第コ鉄ｏ、ｏｏ、
ｔｙ−、酵母エキスユノ、およびシュクロース３０ｆｉ
！−をｌｆの純水に溶解して培地とした。

この培地３！を調製し−ｐＨを１．０としたのち。

！！容のジャーファーメンタ−に注入し、ｉａ。

ｔ、？’λθ分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い一坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター・ポリサツカロゲネスＭＴ−１１−ユ
を上記のジャーファーメンタ−に接種り、、　培養温度
、７　ｏ　Ｃ，通気量０　、ｊＶＶＭＴ？！；時間培養
した。培養終了液のｐＨは３．４ｔ、Ｂ型粘度計による
粘度はｌコＯｃｐであった。

９ｔ時間の培養の後、培養終了液に水を加えてＩＱＩ、
とし、１０．００Ｏｒｐｍ″ｒ：２０分間遠心分離して
菌体および固形物を除去したのち、ｌｊＪのエタノール
を徐々に加えると白色の繊維状沈澱が得られた。沈澱を
採取し−アセトンで洗浄し。

減圧乾燥した。このようにして得た白色繊維状の粗渠の
上記多糖類の収量は−１２，！？（収率コ！憾）であっ
た。

このようにして得た粗精の上記多糖類：１０ｆを再び水
ユ！に溶解し−これにセチルトリメチルアンモニウムブ
ロマイドを加え上記多糖類をセチルトリメチルアンモニ
ウムブロマイドとの複合体として沈澱させた。この複合
体を水およびエタノールで十分洗浄して過剰のセチルト
リメチルアンモニウムブロマイドを除いた後、飽和塩化
ナトリウム水溶液を加えて複合体を溶解した。この溶液
に３倍量のエタノールを加えて上記多糖類を沈澱させた
。沈澱を分離し、減圧乾燥後、再び水に溶解した。得ら
れた溶液を透析用セロハンチューブに入れ３日間流水中
で透析を行なった後、３倍量のアセトンを加えて上記多
糖類を沈澱させ、沈澱物を分取、減圧乾燥を行い精製さ
れた上記多糖類ノざ、ｊノを得た。

実施例　２ リン酸１カリＱ、／ノー　リン酸２カリ０　、　’　ｊ
’　ｂ硫酸マグネシウム７水塩０，２ｊｐ、塩化第コ鉄
ｏ、ｏｏｓｙ−１酵母エキスコｔ、クエン酸！？および
マンニトール２ｊＰをｌｉの純水に溶解して培地とした
。この培地３ノを調製し、ｐＨＡ、０としたのチ、！！
容のジャーファーメンタ−に注入しｌλＯＣで２０分間
殺菌した０ 上記と同一組成の培地を用い坂ロフラスコで前培養した
アセト、バクター・ポリサツカロゲネス頴−ｌノー−を
上記ジャーファーメンタ−に接種し。

培養温度３０Ｃ１通気量ｏ　、ｚＶＶＭでざ０時間培養
した。培養終了液のｐＨはｊｊｍ　Ｂ型粘度計による粘
度は／　／　Ｑ　ＯＣｐであった０この培養終了液を実
施例１と同様に処理して粗精の上記多糖類をａ−ｔ？Ｃ
収率ｔｏｉ）得た。

実施例　３ リン酸１カリＱ、ｌｆ、　　リン酸２カリ０．１？。

硫酸マグネシウム・７水塩ｏ　、　２ｓ？、：Ｆ−７ス
テイープリカーｌ？、および廃糖蜜（シュクロース！！
憾を含む）ｊｊｆを／Ａの純水に溶解して培地とした０
この培地１０Ｊｌを調製し−ｐＨ’＆　、　０トシたの
ち、、２０ｉ容のジャーファーメンタ−に注入し１２０
７：で２０分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い一坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクター・ポリサツカロゲネスＭＦ−ｇを上記
のジャーファーメンタ−に接種し。

培［温１ｆ　、？　０　’Ｃ通気量０　、　ｊ　ＶＶＭ
Ｔ　ＩＩ　０時間培養した。なお−水酸化す）　ＩＪウ
ムと塩酸の水溶液を用い培養中のｐＨは乙、０前後に調
節した。培養終了ｉのＢ型粘度計による粘度は２ｊ００
Ｃｐであった。

この培養終了液を実施例１と同様に処理して粗精の上記
多糖類をコロ０ｆ（収率ざ６係）得た。

実施例　４ リン酸１カリ／？、　リン酸２カリノ？−硫酸マグネシ
ウムミツ水塩０．．ｌｊｆ、コーンメチ−ブリカー２９
．ペプトンλノ、およびグルコースコＯ１をｌｆの純水
に溶解して培地とした。この培地ｌＱｐを調整し、ｐＨ
６，０とし起のちｍ；〇！のジャーファーメンタ−に注
入し１２０Ｃで２０分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を用い、坂ロフラスコで前培養し
たアセトバクターのポリサツカロゲネスＭＰ−ｇを上記
のンヤーフアーメンターに接種し、培養温度３θＣ１通
気量θ、ｉｖｖＭでｇｏ時間培養した。なお水酸化す）
　１３ウムと塩酸の水溶液を用い培養中のｐＨはｊ、０
前後に調節した。培養終了液のＢ型粘度計による粘度は
ｌユ００ｃｐであった。

この培養終了液を実施例１と同様に処理して粗精の上記
多糖類を７６λノ（収率ｆ　／　、０１４）得た０ 実施例　５ リン酸１カリｌ？−リン酸２カリ／ｌ−、硫酸マグネシ
ウム・２水塩０．２．ｔｐ−塩化第一鉄Ｏ０α？、酵母
エキスユノーコーンスチーブリ力一ノノ。

コハク酸ｇノ、およびグリセロール３０ノをノ！の純水
に溶解して培地とした。この培地３！を調整し、ｐＨ６
，０としたのち−！ノ容のジャーファーメンタ−に注入
し、ｌコＯＣで゛ユ０分間殺菌した。

上記と同一組成の培地を２用い一坂ロフラスコで前培養
したアセトバクター９ポリサツカロゲネスＭＴ−７ノー
ユを上記のジャーファーメンタ−に接種し一培養温度−
ｇＣ−通気量ｏ　、ｇＶＶＭで９乙時間培養した。培養
終了液のｐＨはｓ、ｔｔｒ　Ｂ型粘度計に゛よる粘度は
／　９００　ｅｐであった。

この培養終了液を実施例１と同様に処理して粗精の上記
多糖類をｊ／、４？（収率−ｔ＜ｉ４）を得た０

【図面の簡単な説明】

第１図および第２図は本発明で得られる酸性へテロ多糖
類め赤外吸収スペクトルを示し、第７図は脱塩前のもの
、第２図は脱塩後のものであり。 そして第３図は本発明で得られる酸性へテロ多糖類とロ
ーカストピーンガムとの相溶作用の関係を示す図である
。 ’ＩＫ３図 ネＳ明Ｔｆｌｔすｔ々醸性ヘテロ〃劣喰ダタｎ９良廣坐
）手　　続　　補　　正　　書 昭和１２年９月３０日 特許庁長官　若　杉　和　夫　殿 １、事件の表示 昭和！６年特評願第７２６１１０号 ２、発明の名称 新規な酸性へテロ多糖類の製這法 ３、補正をする省 ４、代理人 住所　郵便番号　／７／ ５、補正命令の日付 自発補正 ６、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ７、補正の内容゛ （１〕明細書第１ｊ頁第６行〜第２′行の「微工研菌寄
第６／７＆号（ＦＥＲＭ　Ｐ−、＋７７＜＜）ｊを「微
工研条寄第１／λ号（ＦＥＲＭ　ＢＰ　−／　／コ）〔
微工研菌寄第Ｊ／７＜４号、ＦＥＲＭ　Ｐ−、＜／７４
’）ｊと訂正します。 （２）明細書第１３頁第ｇ行〜第９行の「微工研菌寄第
に１７１号（ＦＥＲＭ　Ｐ−≦ｔ２ｊ）ｊを「微工研条
寄第１／、７号（ＦＥＲＭ　ＢＰ−／／３）（微工研菌
寄第ぶ１７１号、ＦＥＢＭ　Ｐ−ｇ１７ｔ）ｊと訂正し
ます。 ８、添付書類の目録

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. アセトバクタ、−属に属しグルコース−ガラクトース、
   マンノース−およびグルクロン酸を主構成成分とする酸
   性へテロ多糖類生産能を有する菌株を培地に培養し、培
   養物から上記酸性へテロ多糖類を採取することを特徴と
   する新規な酸性へテロ多糖類の製造法。