JPS59155347A - ヒト白血病ウイルス関連ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト白血病ウィルス（Δｄｕｌｔ　　Ｔ　−
ｃｅｌｌ　　ｌｅｕｋｅｍｉａ　　Ｖ　１ｒｕｓ　：　
Ａ　Ｔ　Ｌ　Ｖ又はｌ−１ｕｍａｎＴ−ｃｅｌｌ　　ｌ
ｅｕｋｅｍｉａ　　Ｖｉｒｕｓ：　ＨＴＬＶ）に関連す
る新規なペプチドであり、かかるウィルス感染ならびに
成人下細胞白血病、皮膚型Ｔ１１１胞リンパ脛などの成
熟Ｔ細胞白面病・リンパ腫に関連するペプチドに閂する
。

水明ｍ書において、アミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、核酸塩基、その他に関して略号で表示する場合はＩ
ＵＰＡＣｌＩＬＩＢの規定或いは当該分野における慣用
記号に従うものとし、その例を次に挙げる。またアミノ
酸等に関して光学異性体がありうる場合は、特に明記し
なければＬ体を示すものとする。

Ｓｅｒ；セリン　　　　ｌｅｕ；ロイシンＴｈｒ；スレ
オニン　　Ａ　ｓｎ　；アスパラギンＧｌｎ；グルタミ
ン　　ＧＩＩにグルタミン酸Ｌ　ｙｓ　：リジン　　　
　ｐｒｏ；プロリンＶａ１；バリン　　　　Ｔｒｐニト
リブトファン１１ｉｓ；ヒスチジン　　ＡＳ＋）：アス
パラギン酸Ｇｌｙニゲリシン　　　Ｉｌｅ；イソロイシ
ンＡｌミニアラニン　　　Ｔｙｒ；チロシンＭｅｔ；メ
チオニン　　Ｐ　ｈｅ　：フェニルアラニンΔｒｇ；ア
ルギニン　　Ｃｙｓ：シスチンΔ　：アデニン　　　丁
　；チミン Ｇ　ニゲアニン　　　Ｃ；シ］・シン Ｔｏｓ：ｐ−トルエンスルホニル基 Ｂ　ｏｃ　：第３級１トキシ力ルボニル基ＯＮＰ：ｐ−
二１−ロフエノキシ基 Ｂｚｌ　　；ベンジル基 ０Ｂｚｌ；ベンジルオキシ基 Ｃｌｐ〜Ｂｚｌ；２．６−ジクロルベンジル基ＣＩ−Ｚ
：２−クロルベンジルオキシカルボニル基 ヒト白血病ウィルスは、成人Ｔ細胞白血病（ＡＴＬ）よ
り分離され、該疾患との関連が注目されているウィルス
である。本発明者の吉日、菅野は、遺伝子工学的手法を
もちい、宿主細胞のＤＮＡに組込まれたプロウィルス遺
伝子をクローニング（ｃｌｏｎｉｎｏ　）　Ｌ／、その
全塩基配列を決定した。これに基づいて該疾患ならびに
該ウィルス感染の診断・治療・予防の基礎を確立し、さ
きに特許申請を行なった（特願昭５７−２１４２８７号
）。

本発明は、Ｆ記の基礎的な情報を基にし完成されたもの
であり、該ウィルス感染の診断を目的とした該ウィルス
関連ペプチド、ならびにそれ等に対するＩｎ抗体の作製
と測定法に関する。決定されたト記ウィルス遺伝子のコ
ア（ギャグ）蛋白前駆体を］−ドする塩基配列を下記第
１表に示す。

第１表 １−ｃｕ　　Ｇｌｎ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｔｙｒ　
　Ａｒｏ　　ｌ−、ｃｕ　　Ｇｌｕ　’Ｐｒ。

Ｌｅｕ　　Ｌｙｓ　　１−ｙｓ　　Ｐｈｅ　　Ｉ−ｃｕ
　　ｔ−ｙｓ　　Ｔｌｅ　　Ａｌａ　　ｌ　、ｅｕＧＡ
Ａ　ＡＣＡ　ＣＣＧ　ＧＣＴ　ＣＧＧ　ＡＴ’ＣＴＧＴ
’　ＣＣＣＡＴＩ−Ｇｌｕ　　Ｔ’ｌｌｒ　　Ｐｒｏ　
　Ａｌａ　　Ａｒａ　　ｌｉｅ　　Ｃｙｓ　　Ｐｒｏ　
　ｆｌａΔ△Ｃ丁へＣ１”ＣＣＣＴＣＧ’Ｔ’Ａ　　Ｇ
ＣＣＡＣＣＣＴＡ　　ＣＴ’ＣＡｓｎ　　Ｔｙｒ　　３
ｅｒ　　１．、ｅｕ　　Ｉ−ｃｕ　　Ａｌａ　　ｓｅｒ
　　Ｉｅｕ　　ｔｅｕＣＣＡ　ΔＡＡ　ＧＧＡ　　ＴＡ
ＣＣＣＣＧＧＣＣＧＧ　ＧＴＧ　ＡＡＴＰｒｏ　　　１
−ｙｓ　　ＧＩＶ　　Ｔｙｒ　　　ＰｒＯＧｌｙ　　Ａ
ｒ（］　　　Ｖａｔ　　　ＡｓｎＧＡＡ　　ＡＴＩ−Ｔ
Ｔ’Ａ　　ＣＡＣＡＴＡ　　ＣＴＣＡＴＣＣＡＡ　　Ａ
ＣＣＧｌｕ　　Ｔｌｅ　　Ｉｅｕ　　Ｈｉｓ　　Ｉｌｅ
　　ｌｅｕ　　ｌｌｅ　　Ｇｌｎ　　Ｔｌ１ｒＣＡＡ　
ＧＣＣＣＡＧ’　ＡＴＣＣ’；ＣＧ　ＴＣＣＣＧＴ　Ｃ
ＣＣＧＣＧＧｌｎ　　Ａｌａ　　Ｇｌｎ　　ｌｌｅ　　
Ｐｒｏ　　３ｅｒ　　ΔｒｇＰｒｏ　　Δ１ａＣＣＡ　
ＣＣＧ　ＣＣＧ　ＣＣＧ　Ｔ’ＣＡ　ＴＣＣＣＣＣＡＣ
ＣＣＡＣＰｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｓ
ｅｒ　　Ｓｅｒ　　Ｐｒｏ　　Ｔｈｒ　　ｆｉｔｓＧＡ
Ｇ　ＣＣＣＣＣＧ　ＧＡＴ−ＴＣＴ　ＧＡＩ−ＣＣＡ　
ＣＡＡ　Ａｌ−ＣΔＳｐ　　ｐｒｏ　　ｐｒｏ　　Ａｓ
ｐ　　Ｓｅｒ　　ΔＳｒｌ　　Ｐ「ＯＧ１１１　７１ｅ
ＣＣＣＣＣＩ’　ＣＣＣＴＡＴ　ＧＴＴ’　ＣＡＧ　Ｇ
ＣＴ’　ＡＣＧ　ＧＣＣＰＩ’ＯＰｒｏ　　ＰｒＯ’ｉ
ｙｒ　　Ｖａｌ　　ＧＩＬＩ　　ｐｒｏ　　Ｔｌ１ｌ’
　　Δ１ａｃｃｃ　　ｃ△Ａ　　ＧＴＣＣＴ’Ｔ　　Ｃ
ＣＡ　　ＧＴＣＡＴ’Ｇ　　ＣＡＴ’　　ＣＣＡＰｒｏ
　　Ｇｉｎ　　Ｖａｌ　　Ｉ−ｅｔｌ　　Ｐｒｏ　　Ｖ
ａｔ　　Ｍｅｔ　　Ｈｉｓ　　Ｐｒ。

ＣΔｌ’　　ＧＧ　１’　　ＧＣＴ　　ＣＣ１’　　Ｃ
Ｃ１ＡＡＣＣＡＴ　ＣＧＣＣＣＡｆ−１ｉｓ　　ＧＩＶ
　　Ａｌａ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ａｓｎ　　Ｈｉｓ
　　Ａｒａ　　Ｐｒ。

ＴＧＧ　　ＣＡＡ　ＡＴＣΔΔΔ　ＧＡＣＣＴＡ　　Ｃ
ＡＣＧＣＯ△ＴＴＴ＋’ｐ　　Ｇｌｎ　　〜ｖｅｔ　　
　１．ＶＳ　　ＡＳＤ　’　　Ｉ　Ｏ（Ｉ　　Ｇｌｎ　
　Ａｌａ　　　ｒｌｅ△ΔＧＣ△△　ＧΔΔ　ＧＴＣＴ
ＣＣ（’、ΔΔ　Ｇ（ＣΔ　ＧＣＣＣＣＴｌｙｓ　　Ｇ
ｌｎ　　Ｇｌｕ　　　Ｖａｌ　　　Ｓｅｔ’　　Ｇ１１
ｌ　　　Ａｌａ　　　ΔＩａＰｒ。

ＧＧＧ　　ＡＣＣＣＯＣＣＡＧ　　Ｔ−Ｔ”’Ｉ　　△
’Ｔ−Ｇ　　ＣＡＣＡＣＣＡＴＣＧＩＶ　　　Ｓｅｒ　
　　Ｐｒｏ　　　Ｇｌｎ　　　ＰＩＩＧ　　　Ｍｅｔ　
　　Ｇｉｎ　　　Ｔ市ｒ　　　ｌ１ｅＣＧＧ　　ＣＴｌ
−ＧＣＧ　　ＧＴＧ　　ＣΔＧＣΔＧ　　４Ｔ’ｌ−Ｇ
ＡＣＣＣＣΔｒｇ　　　ｌ　ｅｕ　　　Ａｌａ　　　Ｖ
ａｔ　　　Ｇｌｎ　　　Ｇｌｎ　　　Ｐｈｅ　　　Ａｓ
ｐ　　　Ｐｒ。

△ＣＴ　　ＧＣＣΔ△Δ　ＣＡＣＣＴＣＣＡＡ　ＧＡＣ
ＣＴＣＣＴ−０丁１＋ｒ　　　Ａｌａ　　　１−ｙｓ　
　　ＡＳＤ　　　１−ｅｕ　　　Ｇｌｎ　　　Ａｓｐ　
　　１−ｅｕ　　　Ｌ−ｅｕＣΔＧ　１△ＣＣＴｌ−Ｔ
ＧＣＴＣＣＴＣＣＣＴＣＧＴＧ　　ＧＣＴＧｉｎ　　　
Ｔｙｒ　　　１．、ｅｌｌ　　　Ｃｙｓ　　　Ｓｅｒ　
　　Ｓｅｒ　　　ｌｅｕ　　　Ｖａｔ　　　Δ１ａＴＣ
ＣＣＴＣＣＡＴ　　ＣＡＣＣＡＧ　　ＣＡＧ　　ＣＴ−
Δ　ＧＡＴ　　ＡＧＣ８ｅｒ　　　１−ｅｕ　　　ＨＩ
ｓ　　　Ｈｉｓ　　　Ｇｌｎ　　　Ｇｌｎ　　　１−ｃ
ｕ　　　ＡＳＤ　　　３ｅｒＣＴＴ　　ＡＴＡ　　ＴＣ
Δ　ＧＡＧ　　ＧＣＣＧΔΔ　ＡＣＣＣＧＡ　　ＧＧＴ
ｌ−ｅｕ　　　　Ｉｌｅ　　　Ｓｅｒ　　　Ｇｌｕ　　
　Ａｌａ　　　ＧＩＬＩ　　　　丁ｈｒ　　　Ａｒｏ　
　　ＧｌｙＡＴＴ　　ＡＣＡ　ＧＧＴ　　ＴＡＴ　　Ａ
ＡＣＣＣＡ　　Ｔ’Ｔ−Ａ　　ＧＣＣＧＧＴｌｉｅ　　
　Ｔｈｒ　　　Ｇｌｙ　　　Ｔｙｒ　　　Ａｓｎ　　　
ｐｒｏ　　　ｌｅｕ　　　Ａｌａ　　　ＧＩＶＣＣＣＣ
ＴＣＣＧＴ　　ＧＴＣＣＡＡ　　ＧＣＣ△Δ０　△ＡＴ
　　ＣＣＡＰｒｏ　　　Ｌｅｕ　　　ＡｒＧ　　　Ｖａ
ｌ　　　Ｇｌｎ　　　Ａｌａ　　　Ａｓｎ　　　Ａｓｎ
　　　ｐｒ。

Ｃ△△　Ｏ△△　０△△　ＧＧΔ　ＴＴ−Δ　ＡＧＣＯ
（’ｉΔ　０ΔΔ　］ΔＣＧ１１ｌ　　Ｇ１１ｌ　　Ｇ
ｉｎ　　Ｇｌｙ　　　ｉ、ｅＬＩ　　　Δｒｇ　　△ｒ
（ｌ　　Ｇｌｕ　　　Ｔｙｒ（ＣＡＣＯ△八　ＣＴ（Ｃ
ｌ’ＧＧ　　ＣＴ−ＣＧＣＣＧＣＣＴ’ｌ’ＣＧＣＣＧ
ｌｎ　　Ｇｌｎ　　＋、、ｅｕ　　Ｔｒｐ　　Ｉ−ｅｕ
　　Ａｌａ　　Ａｌａ　　Ｐｈｅ　　Δ１ａＧＣＣＣＴ
Ｇ　　ＣＣＧ　　ＧＧＧ　　ＡＧＴ　　ＧＣＣ△△Δ　
ＣＡＣＣＣＴ△ｆｉｌ　　　ｌ　ｅｌｆ　　　Ｐ　ｒＯ
Ｇ　ｌｙ　　　Ｓｅｒ　　　Ａｌａ　　　Ｉｖｓ　　　
ΔＳｐＰ「０ＴＣＣ−Ｔ−ＧＧ　　ＧＣＣＩ　Ｃ１△丁
ＣＣＴＣＣΔΔ　ＧＧＣＣＴＧ３ｅｒ　　　−ｒｒｌｌ
　　△１ａＳｎｌ’　　　ｒｌｅ　　　ｌ、ｅｌｆ　　
Ｇｌｎ　　Ｇｌ！／　　　１−ｅｕＧΔＧ　　ＧＡＧ　
　ＣＣ’Ｔ　　ｌΔ（ＣＣＡＣＧＣＣ’；　　ＴＴＣＧ
ｌ△　ＧΔΔＧｌｕ　　　Ｇｌｕ　　　Ｐｒｏ　　　Ｔ
ＶｒＨｉｓ　　　△ＩａＰｌｅＯＶａｌ　　　ＧｌｕＣ
ＧＣＣＴ’Ｃ△△Ｃ△１′Δ　ＧＣＴ　　ＣＴＴ　　Ｃ
ＡＣΔΔＴ’　　ＧＧＧΔｒｇ　　　ｌｅｕ　　　Ａｓ
ｎ　　　Ｉｌｅ　　　Ａｌａ　　　１−ｅｕ　　　Ａｓ
ｎ　　Ａｓｎ　　　Ｇｌｙ（〕Ｔ’Ｇ　　ＣＣＡ　ＧΔ
△　ＧＧＣΔＣＧ　　ＣＣＣＡΔ△　ＣＡＣＣＣＣ１−
ｅｕ　　　Ｐｒｏ　　　Ｑｌｕ　　　ＧＩＶ　　　Ｔｈ
ｒ　　　Ｐｒｏ　　　Ｌｙｓ　　　ＡＳＤ　　　ｐｒ。

ΔＴＣＴＴＡ　ＣＧＴ’　　ＴＣＣＴＴＡ　　ＧＣＣＴ
　ΔＣＴＣＣＣＣΔＡＴｒ　Ｉｅ　　　ｌ、、ｅｕ　　
　Ａｒａ　　　Ｓｅｒ　　　ｌ、、ｅｕ　　　Ａｌａ　
　　’Ｔ’ｙｒ　　　Ｓｅｒ　　　ＡｓｎＧＣΔ　△Δ
ＣΔΔΔ　ＧＡΔ　ＴＧＣＣΔΔ　ΔΔΔ　ＴＴＡ　Ｃ
ＴＡＡｌａ　　　、ＡＳｎ　　　１．、ｙｓ　　　Ｇｌ
ｕ　　　ＣＶＳ　　　Ｇｌｎ　　　Ｌｙｓ　　　ｌ−、
ｅｕ　　　ｊｅｕＣΔＧ　　ＧＣＣＣＣＡ　ＧＧΔ　Ｃ
ＡＣＡＣＴ　　ΔΔＴ　　ＡＧＣＣＣＴＧｌｎ　　　Ａ
ｌａ　　　Ａｒｏ　　　Ｇｌｙ　　　Ｈｉｓ　　　Ｔｈ
ｒ　　　Ａｓｎ　　、　　Ｓｃｒ　　　Ｐｒ。

Ｔｂｒ　　Ｔｒｐ　　Ｔｈｒ　　　Ｐｒｏ　　　Ｌｙｓ
　　ＡＳＤ　　　ＬＶＳ　　Ｔ’ｈｒ　　　１ｙｓＧＴ
’Ｇ　Ｔ−ＴＡ　Ｇｌ−Ｔ　ＧＴＣＣＡＧ　ＣＣＩ　　
△ΔΔΔΔΔ　ＣＣＣＶａｌ　　ｌ、ｅｕ　　Ｖａｔ　
　Ｖａｌ　　Ｇｌｎ　　ｐｒｏ　　１−ｙｓ　　Ｉ−ｙ
ｓ　　Ｐｒ。

ＣＣＣＣＣＡΔ△Ｔ　ＣＡＧ　ＣＣＧ　ＴＧＣ１’−１
−ＣＣＧＧ　ＴＧＣｐｒｏ　　ｐｒｏ　　ＡＳｎ　　Ｇ
ｌｎ　　Ｐｒｏ　　Ｃ；ＶＳ　　Ｐｈｅ　　Ａｒａ　　
ＣｙｓＧＧＧ　△△ΔＧＣΔＧＧＣＣＡＣＴＧＧΔＧ’
Ｔ’　ＣＧＧ　ＧΔＣＧｌｙ　　ｌｙｓ　　Ａｌａ　　
Ｑｌｙ　　Ｈｉｓ　　Ｔｒｐ　　Ｓｅｒ　　Δｒｇ　　
ＡＳＩ）ＴＧＣＡＣＴ　ＣＡＧ　ＣＣ’ｒ　ＣＧ’Ｔ−
ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＧＧＧＣｙｓ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｎ
　　Ｐｒｏ　　Ａｒａ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ
　　ＧＩＶ）−Ｉｔｓ　　Ｔｒｐ　　　Ｉ　ｙｓ　　Δ
「ｇ　　Ａｓｎ　　　ｃｖｓ　　　Ｐｒｏ　　Δｒ（］
　　　ｌ、ｅｌｌΔΔＧ　ＣＣＣＡＣＴ　　Δ１℃　Ｃ
ＣＡ　ＧΔ△　ＣＣＡ　ＣＡＧ　　ＣＣＡｌｙｓ　　Ｐ
ｒｏ　　Ｔｌ１ｒ　　Ｉｌａ　　Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　
Ｐｒｏ　　Ｇｌｕ　　ｐｒ。

ＧＡＧ　Ｇ△Δ　Ｇ△１　　ＧＣＣＣＴに　　ＣＴＡ　
　ＴＴ八　ＣＡＣＣＩＣＧｌｕ　　ＧＩＬＩ　　Ａｓｎ
　　Ａｌａ　　Ｉ−ｅｕ　　１．−ｅｔ＋　　ｌ、ｅｕ
　　Ａｓｎ　　１ｅｕＣＣＣＧＣＴ　　ＧＡＣＡｌ’Ｃ
ＣＣＡ　　ＣＡＣＣＣＡ　　ΔΔΔ　ΔΔＣＰｒｏ　　
Ａｌａ　　Ａｓｐ　　　Ｉｌｅ　　Ｐｒｏ　　Ｈｉｓ　
　Ｐｒｏ　　Ｉｙｓ　　ΔｓｎＴ’ＣＣＡＴΔ　ＧＧＧ
　　ＧＧＧ　　ＣＡＧ　　ＧＴＴＳｅｒ　　　ｒｌｅ　
　　Ｇｌｙ　　　ＧＩＶ　　　ＧＩＬＩ　　　Ｖａｔ上
記第１表より、コアー蛋白前駆体は、４２９個のアミノ
酸から成ることが示され、既に報告されているρ−２４
の末端構造（Ｐ　ｒｏｃ、Ｎ　ａｔｌ、△ｃａｄ　。

Ｓｃｉ、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　Ｖｏｌ、　７９、ｆｌＤ
ｌ　２９　ｉ　〜１２９４　（１９８２）参照〕から考
えて、該前駆体はさらに切断されてｐ−１４、ｐ−２４
及びｐ−１０のコアー蛋白となることが予想された。

上記の如き観点にもとづき、本発明者等は、上記ヒト白
血病ウィルスの関連蛋白くコアー蛋白）のハブテンとな
り得る特定のベブヂドを見い出し、ここに本発明を完成
するに至った。

即ち本発明は式 ％式％ （１） で゛表わされるベプヂド、一般式 ＲＭｅｊ−ＧＩＶ−Ｇｌｌｌ　　Ｉ　ｌｅ　　ｐＨｅ−
３ｅｒ　−△　ｒｇ　−Ｓ　　ｅｒ　−Δ　Ｉａ　−３
ｅｒ−Ｐ　　ｒｏ−０ト１　　　　　（２）〔式中Ｒは
水素原子又はＩ−１−Ｔ　ｙｒ基を示覆。〕で表わされ
るペブヂド及び式 ％式％ （（３） で表わされるベブヂドからなる群より選ばれたヒト白血
病ウィルス関連ベブヂドに係る。

本発明の上記一般式（１）〜（３）で表わされるペブヂ
ドは、いずれも入手容易な市販のアミノＦ１１ｉを利用
して、簡甲な操作で容易に合成づ−ることができ、各ベ
ブヂドからは、これらをハブテンとして用いて抗原を作
成でき、斯くして得られる抗原からはウィルス関連蛋白
に特異反応性を有する抗体を収得することができる。該
特異抗体はこれを例えばアフィニティークロマトグラフ
ィー用担体と結合させて、該クロマトグラフに利用する
等によりウィルス関連蛋白の精製に用いることができ、
また該ウィルス関連蛋白の各種免疫測定法における特異
抗体として使用でき、ヒ１〜白面病ウィルス感染の診断
、ひいて（Ｊ、成人工細胞白面病、皮円型Ｔ＃ＩＩＩ胞
リンパ腫等の成熟Ｔ細胞白血病・リンパ師ならびに門）
巾りる疾倦の診断、研究等に有用である。。

本発明の一般式（１）〜・（３）で表わされるペプチド
は、通常のペプチド合成法、具体的には［ザ　ペプチド
（Ｔｈｅ　　ｒ’ｃｐｔｉｄｅｓ　）　、１第１巻（１
９６６年）　（３ｃｈｒｏｄｅｒ　ａｎｄ　ｌ　ｕｂｋ
ｅ￥、Δｃａｄｅｍｉｃ　　ｐｒｃｓｓ、Ｎ　ｃｗ　　
Ｙ　ｏｒｋ、　Ｌ）ＳΔ〕或いは「ペプチド合成１　〔
東屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）〕に記載される
如き方法に従い、例えばアジド法、クロライド法、酸無
水物法、温石り無水物法、Ｄ　ＣＣ法、活性エステル法
（ｐ−二１−ロフェニルエステル法、Ｎ−ヒドロキシコ
ハク酸イミドＪステル法、シアツメデルＪステル法等）
、ウッドワード試）ＭＫを用いる方法、カルボジイミダ
ゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／アディティブ（ＨＯＮ
Ｂ、ＨＯＲｔ　、ＨＯ８ｕ　）法等により製造できる。

Ｆ開方法にＪ３いては、固相合成法及び液相合成法のい
ずれをも適用できる。通常本発明のペプチドは、上記し
た一般のポリペプチドの合成法に従い、例えば末端アミ
ノ酸に順次１個づつアミノ酸を縮合させる所謂ステップ
ワイズ法により、又は数個のフラグメン１〜に分けてカ
ップリングさせていく方法により製造される。より詳細
には、例えば固相合成法を採用する場合、Ｃ末端アミノ
酸をそのカルボキシル基によって、不溶性担体に結合さ
ける。不溶性担体としては、反応性カルボキシル基と結
合性を有するものであれば特に限定はなく、例えばクロ
ロメチル樹脂、ブロモメチル樹脂等のへ〇グツメチル樹
脂やヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ
−アルキルオキシカルボニルヒドラジド化樹脂等を使用
できる。

次いでアミノ保護基を除去した後、一般式（１）〜（３
）で表わされるアミノ酸配列に従い順次アミノ基保護ア
ミノ酸を、その反応性アミノ基及び反応性カルボキシル
基との縮合反応により結合させ、一段階ずつ合成し、全
配列を合成した後、ペプチドを不溶性担体からはずすこ
とにより製造される。

に記にＪ３いＣアルギニン、チロシン、グルタミン酸、
スレオニン、リジン、アスパラギン酸及びセリンの各ア
ミノ酸は、その側鎖官能基を保護しておくのが好ましく
、これは通常の保護基により保護され、反応終了後熟保
護基は脱離される。、また反応に関与する官能基は、通
常活性化される。

これら各反応方法は、公知であり、それらに用いられる
試桑等も公知のものから適宜選択される。

アミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカル
ボニル、Ｂｏｃ、　ｔｅｒｔ−アミルオキシカルボニル
、イソボルニルオキシカルボニル、ｐ−メトキシベンジ
ルオキシカルボニル ダマンデルオキシカルボニル、トリフルオロアセチル、
フタリル、ホルミル、０−ニトロフェニルスルフェニル
、ジフェニルホスフィノチオイル基等が挙げられる。

アルギニンの保護基としては、Ｔｏｓ、二１−口、ベン
ジルオキシカルボニル等が挙げられる。

セリン及びスレオニンの水ＦＦＩ基の保護基としては、
例えば、Ｒｚｌ、ｔｅｒｔ−メチル、アセチル、テ１ー
ラヒドロビ２ニル基等が挙げられる。

チロシンの水１ｇの保ｒｓ基としては、例えばＢｚｌ、
Ｃｌｐ−３ｚｌ、ベンジルオキシカルボニル、アセチル
、Ｔｏｓ基等が挙げられる。

リジンのアミン基の保護基としては、例えばベンジルオ
キシカルボニル、Ｃ）−７、ＣＩ２　Ｂｚｌ、ｆ３ｏｃ
，　Ｔｏｓ基等が挙げられる。

グルタミン酸及びアスパラギン酸のカルボキシル基の保
護基としては、例えばベンジルアルコール、メタノール
、エタノール、ｔｅｒｔ−ブタノール等とのエステル化
により行なわれる。

カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば対
応．する酸クロライド、酸無水物又は混合酸無水物、ア
ジド、活性ニスデル（ペンタクロ【−１フエノール、ｐ
−ニトロフェノール、Ｎ−ヒト［１キシサクシンイミド
、Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシ
−５−ノルボルネン−２、３−ジカルボキシイミド等と
のエステル）等が挙げられる。尚ペプチド結合形成反応
は、縮合剤例えばジシクロへキシルカルボジイミド、カ
ルポジイミダゾール等のカルボジイミド試薬やテＩ・ラ
エチルビロホスフィン等の存在下に実施し轡る場合もあ
る。

以下、本発明ペプチドの製造の一例につき反応行程式を
挙げて具体的に説明する。

〔反応行程式−１］ Δ−ＴＶｒ−ＯＨ（イ） ↓ △−Ｔ　ｒｙ−Ｒ’　　　　　（ロ） ↓ １ｌ−Ｔｒｙ−Ｒ’　　　　　（ハ） ↓　Δ−Ｐ　ｒｏ−〇　Ｈ（ニ） △−Ｐｒｏ−Ｔｒｙ−Ｒ’　　　（ホ）Ａ　−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｇ　ｌｎ−Ｐｒｏ−１−ｙｓ−１ｖｓ−Ｐｒ。

−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−Ｒ’　　　　（Ａ、）↓ Ｈ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇ　Ｉｎ−Ｐｒｏ　−ｃｙｓ−Ｌ
ｙｓ　−Ｐｒ。

−Ｐｒｏ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ−〇Ｈ（１）（式中△はアミ
ノ基の保護基及びＲＩＧま不溶性担体を示覆。） 上記において、Δの好ましいものとして１ａＢＯｃｉ、
ベンジルオキシカルボニル基、ｐ−メトキシベンジルオ
キシカルボニル基等を、またＲ１の好ましいものとして
はクロロメチル化ポリスチレン等をそれぞれ例示するこ
とができる。

また、各反応において、使用するアミノ酸が反応に関与
しない側鎖官能基を有する場合は、常法どうり、前述し
た保護基により、保護され、これは不溶性担体Ｒ１の脱
離と同時に脱離される。

上記方法において、アミノＦｉｎ（イ）と不溶性担体Ｒ
１との１反応は、常法に従いアミノ酸（イ）の反応性カ
ルボキシル基を利用して、これをＲ１と結合させること
によって行なわれる。該反応は例えばクロロメチル化ポ
リスチレンを使用する場合は適当な溶媒中、例えば１−
リエチルアミン、カリウムｔｅｒｔ−ブトキシド、炭Ｉ
５！セシウム、水酸化セシウム等の塩基性化合物の存在
下に行なわれる。

溶媒としては、例えばジメチルホルムアミド（Ｄ　Ｍ　
Ｆ　）　、　シ）（チル）、ルホ＊シト（ＤＭＳＯ）、
ピリジン、クロロホルム、ジオキサン、ジクロロメタン
、テトラヒドロフラン、Ｎ−メヂルビロリドン、ヘキリ
メチルリン酸トリアミド等又はこれらの混合溶媒等を例
示覆ることができる。上記反応は、通常Ｏ〜８５℃、好
ましくは２５〜８０℃稈度、数分〜２４Ｒ間程度で終了
する。アミノ酸と不溶性担体との使用割合は通常後者１
当吊に対して前当を過剰量、一般に１〜３倍当吊どする
のがよい。

かくして得られる一般式（ロ）の同相化アミノ酸の保護
基への脱離反応は、常法により行なわれる。該方法とし
ては例えばパラジウム、パラジウム黒等の触媒を用いる
水素添加、液体アンモニア中金屈ナトリウムによる還元
等の還元的方法、トリフルオロ酢酸、塩化水素酸、弗化
水素、メタンスルボン酸、臭化水素酸等の強酸によるア
シドリシス等を例示することができる。上記触媒を用い
る水素添加は、例えば水素圧１気圧、０〜４０℃にて行
ない１９る。触媒の使用量としては通常１００＋１１（
１〜１ｇ程度とするのがよく、一般に１〜４８時間程度
で反応は終了する。また上記アシドリシスは、無溶媒下
、通常Ｏ〜３０℃程度、好ましくはＯ〜２０℃程度で約
１５分〜１時間程度を要して行なわれる。酸の使用量は
原料化合物に対し通常５〜１０倍争程度とするのがよい
。該アシドリシスにおいて保護基Ａのみを脱離する場合
は酸としてトリフルオロ酢酸又は塩化水素酸を使用づる
のが好ましい。更に上記液体アンモニア中金属ナトリウ
ムによる還元は、反応液がパーマネジ１〜ブルーに３０
秒〜１０分間程度呈色しているような吊の金属ナトリウ
ムを用い、通常−４０℃〜−７０℃程度にて行ない１ｑ
る。

次いで冑られる一般式（ハ）の固相化アミノ酸とアミノ
酸（ニ）（もしくはそのカルボキシル基の活性化された
もの）との反応は、溶媒の存在下に行なわれる。該溶媒
としては、ペプチド縮合反応に慣用される公知の各種の
もの、例えば無水ジメチルホルムアミド、ジメチルスル
ホキシド、ピリジン、クロ［ｌホルム、ジオキ１ナン、
ジクロ［１メタン、テ１〜ラヒドロフラン、酢酸エチル
、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキサメヂルリン酸ｉ〜リア
ミド或いはこれらの混合溶媒等を例示することができる
。また該反応は、必要に応じて、通常のペプチド結合形
成反応に用いられる試薬、例えばＮ　　、Ｎ−ジシクロ
へキシルカルボジイミド（ＤＣＣ＞、Ｎ−エチル−Ｎ′
　−ジメチルアミノカルボジイミド、１−エチル−３−
ジイソプロピルアミノカルボジイミド、１−シクロへキ
シル−３−（２−モルホリニル− ルボジイミド類等の脱水縮合剤の存在下に行４Ｔうこと
ができる。アミノ酸（ハ）とアミノＲ（二）との使用割
合としでは、特に限定はないが、通路前者に対して後者
を等モルｍ−１０倍モル姶、好ましくは等モル昂へ・５
倍モル隋ど覆るのがよい。

脱水縮合剤の使用醋も特に限定はなく、通常アミノ酸（
二）に対して、好ましくは等モル竿稈度使用される。反
応温度はペプチド結合形成反応に使用される通常の範囲
、一般には約−４０′Ｃ〜約６　０　’Ｃ、好ましくは
約−２０℃〜約４０℃の範囲から適宜選択される。反応
時間は一般に数分〜３０時間時間上される。

かくして得られる一般式（ボ）のペプチドは、上記と同
様に保護基Δの脱Ｐ！＋後、一般式（１）で表わされる
アミノ酸配列に従い、△−Ｐ　ｌ’ｏ　−　０　）１、
八−Ｐ　ｒｏ−　Ｏ　ｔ−１、Δ−１−．　ｙｓ−　Ｏ
　Ｈ、Δー１ー１／Ｓ−Ｏ　　Ｈ　　、　　△　−　ｐ
ｒｏ−ＯＨ　　、　　Δ　−　Ｇ　　Ｉｎ−　　０　　
１−１　　、　　八　−Ｖａｔ−ＯＨ、ΔーＶａｔーＯ
Ｈ（７）各７ミ／Ｗちしくは側鎖官能基を保護されたも
の乃至そのカルボキシ基を活性化されたものと順次縮合
反応さ往ることにより行なわれ、斯くして一般式くべ）
で表わされるペプチドに誘導することができる。これら
縮合反応及び保護基への脱離反応は、それぞれ前記した
方法と同様にして行ｔ【われる。

またｉｑられるペプチド（へ〉は、同様にして保護基へ
の脱Ｒ（、アミノ酸の側鎖官能基の保護基のｎＨ　１！
ＩＩ及び不溶性担体Ｒ１の脱離により、式（１）で表わ
されるペプチドにｖＩ，導される。ここで側鎖官能基の
保護基及び不溶性担体Ｒ１の脱離反応は、保護基への脱
離反応と同様に行ｆ．１い轡、この場合前として弗化水
素又Ｌｌ臭化水ｍ　Ｍを用いるのが好ましい。尚、トＷ
ｆ）方法においＣ使用される各アミノ酸は、いずれ′ｌ
）公知の市販品Ｃよい。

以１−のようにしηツ１造されに式（１）の本弁明ペグ
ブトは、反応混合物からペプチドの９円１手段例えば抽
出、分配、カラｌ＼り［１７トグラフイー等により甲丙
１ｔ’Ｆｉ製される。

また、一般式（２）及び（３）で表わされる各ペプチド
も、１−記に準じて製造される。

かくして１９られる本発明のペプチドは、これに１２’
５Ｊ，＋”ｌｌｊ等の放射性物質、パーオキシダーゼ（
ＰＯＸ＞、キＥートリプシノーゲン、ブロノｊルボキシ
ペブヂダーゼ、グリセロアルデヒド−３−リンｎ　ｌり
水素酵素、アミラーゼ、ホスホリラーゼ、Ｉ’）−Ｎａ
ｓａ　、Ｐ−Ｎａｓｃ　、β−ガラクトシダーゼ、グル
ロース−６−フオスフエートデハイドログノーぜ、オル
ニヂンデ力ルポキシラーゼ等の８秤酵素試苓等を導入す
ることにより、ラジオイｌ＼ノアツセイ（ＲｒΔ）法又
はエンザイムイムノアツセイ（　Ｆ．　ＩΔ）法におい
て用いられる標識抗原として利用できる。」−記放射性
物買の導入は、通常の方法により実施できる。例えば放
射性ヨードは、り「］ラミンＴを用いる酸化的ヨード化
法（Ｗ．　　Ｍ．　　Ｈｕｎｔｅｒ　　ａｎｄ　　Ｆ　
　、　　Ｃ．　　Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ；Ｎａｔｕｒｅ，
１　９４　　、４９５　（　１　９６２）　、Ｂｉｏｃ
ｈｅｍＪ．８９　　、１４４　　、（１９６３）参照）
等により行なわれ、Ｍ素試薬の導入は、通常のカップリ
ング法例えばエルランガー（Ｂ．　Ｆ．　Ｅｒｌａｎａ
ｅｒ　）らの方法〔△ｃｔａ．　Ｅ　ｎｄｏｃｒｉｎｏ
ｌ．ｓ　ｕｐｐｌ．、　１　６　８　　。

２０６　（１９７２））及びカロール（Ｍ．Ｈ。

Ｋａｒｏｌ）らの方法（　Ｐ　ｒｏｃ，Ｎ　ａ．ｔｌ．
Δｃａｄ．ｓｃｉ．。

（〕ＳＡ．．５７　　ニア１３＜１９６７＞）等の公知
の方法によって行なうことができる。

以下、本発明のペプチドをハプテンとして利用した抗原
のＩｌ造方法につき詳述する。

上記抗原は本発明ペプチドをハプテンとし、これをハプ
テン−担体結合試薬の存在下に、適当な担体と反応さ往
ることにより製造される。上記においてハプテンに結合
される担体どしでは、通常抗原の作成に当り慣用される
高分子の天然もしくは合成の蛋白質を広く使用できる。

該担体としては例えば馬血清アルブミン、牛血清アルブ
ミン、つυギ面清アルブミン、人面清アルブミン、ヒツ
ジ血清アルブミン等の動物の面清アルブミン類；馬血清
グロブリン、牛面清グロブリン、つ１ツギ血清グロブリ
ン、人ｔｍグロブリン、ヒツジ血清グロブリン等の動物
の面清グロブリン類；馬ヂログロプリン、牛チログロブ
リン、ウサギチログロブリン、人チログロブリン、ヒツ
ジチログロブリン等の動物のヂログロプリン類；馬ヘモ
グロブリン、牛ヘモグロブリン、ウサギヘモグロブリン
、人ヘモグロブリン、ヒツジヘモグロブリン等の動物の
ヘモグロブリン類；キーホールリンベットヘモシアニン
（ＫＩＨ）等の動物のヘモシアニン類；回虫より抽出さ
れた蛋白質（アスカ−リス抽出物、特開昭５６−１６４
１４月公報、Ｊ　、　　ｒ　ｉ＋ｍｕｎ、。

１１１　．２６０〜２６８　（１９７３）、Ｊ。

Ｉｍｍｕｎ、、１２２　．３０２〜３０Ｂ　（１９７９
）、Ｊ、ｒｍｍｕｎ、、９８　．８９３〜９００　（１
９６７）及びＡｍ、Ｊ　、　ｒ’ｈｙｓｉｏ１．．１９
９　．５７５〜５７８（１９６０）に記載されたもの又
はこれらを更に精製したもの）：ポリリジン、ポリグル
タミン酸、リジン−グルタミン酸共重合体、リジン又は
オルニチンを含む共重合体笠を挙げることができる。

ハブテン−担体結合試薬としては、通常抗原の作成に当
り慣用されているものを広く使用で゛きる。

具体的にはチロシン、ヒスチジン、１〜リプトファンを
架橋結合させる、例えばビスジアゾタイズドベンジジン
（ＢＤＢ＞、ビスジアゾタイズドー３゜３′−ジアニシ
ジン（Ｂ　Ｄ　Ｄ　）等のジアゾニウム化合物；アミノ
基とアミノ基とを架橋結合させる、例えばグリオキリー
ル、７【−１ンジアルデじド、ゲルタールアルデヒド、
スクシ〕ノアルデじド、アジボアルデヒド等の脂肪族ジ
アルデヒド類：チオール基どチオール基とを架橋結合さ
せる、例えばＮＮＴ　　Ｏ−フェニレンジマレイミド、
Ｎ　　、Ｎ’−ｍ−フェニレンシマ１ノイミド等のシマ
トノイミド化合物；アミノ基とチオール基とを架橋結合
させる、例えばメタマレイミド。ベンゾイル−Ｎ−ヒト
「１キシスクシンイミドエステル、４−（マレイミドメ
ヂル）−シクロヘキサン−１−カルボキシル−Ｎ’　−
ヒドロキシスクシンイミドエステル等のマレイミドカル
ボキシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル類；
アミノ基とカルボキシル基とをアミド結合させる通常の
ペプチド結合形成反応に用いられる試薬、例えばＮ　　
、Ｎ−ジシク１」へキシルカルボジイミド、Ｎ−エチル
−Ｎ′−ジメヂルアミノｊＪルボジイミド、１−エチル
−３−ジ　′イソプロピルアミノカルボジイミド、１−
シフ「」へキシル−３−（２−モルホリニル−４−エチ
ル）カルボジイミド等のカルボジイミド類等の脱水縮合
剤等を挙げることができる。また上記ハブテン−担体結
合試薬としては、ｐ−ジアゾニウムフェニル酢酸等のジ
アゾニウムアリールカルボン酸類と通常のペプチド結合
形成反応試薬、例えば上記脱水縮合剤とを組合せたもの
も使用可能である。

上記抗原の製造反応は、例えば水溶液もしくはｐＨ７〜
１０の通常の緩衝液中、好ましくはｐＨ８〜９の緩１１
ｉｌ中、０〜／１０℃、好ましくは室温付近で行なわれ
る。該反応は通常約１〜２４時間、好ましくは３〜５時
間で完結する。上記において用いられる代表的Ｍ衝液と
しては、次のものを例示できる。

０．２Ｎ水酸化ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２Ｍ
塩化カリウム緩衝液、 ０．２Ｍ炭酸ナトリウム−０，２Ｍホウ酸−０，２Ｍ塩
化カリウム緩衝液、 ０．０５Ｍ四ホウ酸ナトリウムー０．２Ｍホウ酸−０，
０５Ｍ塩化ナトリウム緩衝液、０．１Ｍリン酸二水素カ
リウム−０，０５Ｍ四つ酸ナトリウム緩衝液 上記においてハブテン、ハブテン−担体結合試薬及び担
体Ｑ使用割合は、適宜に決定できるが、通常ハブテンに
対して担体を１〜６倍ｉＪＩ程度、好ましくは１〜５倍
重県程度、及びハブテン−担体結合試薬を５〜１０倍モ
ル程度用いるのがよい。

上記反応によりハブテン−担体結合試薬を仲介させて担
体とハブテンとが結合したペプチド−担体複合体からな
る所望の抗原が収骨される。

反応終了後前られる抗原は常法に従い、例えば透析法、
ゲル濾過法、分別沈澱法等により容易に単離精製できる
。

斯くして得られる抗原は、通常蛋白質１モルに対してペ
プチドが平均５〜６０モル結合したものであり、いずれ
も引き続き該抗原に対して特異性の高い抗体の製造を可
能とするものである。

該抗原による抗体の製造は、上記抗原を哺乳動物に投与
し、生体内に所望抗体を産生させ、これを採取すること
により実施される。

抗体の製造に供仕られる哺乳動物としては、特に制限は
ないが、通常ウサギやモルモッ！・を用いるのが好まし
い。抗体の産生に当っては、上記により得られる抗原の
所定−を生理食塩水で適当濃度に希釈し、フ「１インド
の補助液（Ｃ０ＩＩＩＤｌｅｔｅＦｒｅｕｎｄ　’　ｓ
　　ＡｄＪｕｖａｎｔ　）と混合して！ｌ！濁液を調整
し、これを哺乳動物体に投与すればよい。例えばウサギ
にＶ記！Ｉ！濁液を皮内注！ｉｎ（抗原のωとして０．
１〜５１ｎｌｌｚ’回）し、以後２３１１間毎に２〜１
０ケ月、好ましくは４〜６ケ月間投与し免疫化させれば
よい。抗体の採取は、上記懸濁液の最終投与の１〜２週
間経過後、免疫化された動物から採面し、これを遠心分
離後、自消を分離することにより行なわれる。上記によ
れば、用いる抗原に対して優れた特異性を有する抗体を
収得でき、これはＲＩＡ法、ＥｌＡ法等に利用してヒト
白血病ウィルス関連蛋白の定伶に用い得る。

以下本発明を更に詳しく説明するため、一般式（１）、
（２）及び（３）で表わされる本発明ペプチドの製造例
及びこれにより得られるペプチドからの抗原及び抗体の
製造例を挙げるが、本発明はこれらに限定されるもので
はない。

尚、各製造例におけるＲｆ＠はシリカゲル上の薄層クロ
マ、トゲラフイーにて下記混合溶媒を用いて測定したち
ので逼る。

Ｒｆ’・ｎ−ブタノール−酢酸−水（４：１：５）Ｒｆ
２・・・ｎ−ブタノール−酢酸−ビリジン−水（１５：
３：１０：１２） くペプチドの製造〉 製造例　１ ■　カリウム　ｔａｒｔ−ブトキシド１５．３３ミリ当
量のＤＭＳＯ溶液４２ｍＱに３ｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃｌ　ｐ
−Ｂｚｌ）−ＯＨの７．５３１１１を溶解し、クロロメ
ヂル化ボリスヂレンＩＬ１脂（財団法人蛋白質研究奨励
金）１０ｑを加えて、８０℃で３０分間反応させる。樹
脂をｒ）ＭＳＯ１５ｏ９６酢酸／クロ［”１ホルム、塩
化メチレンの順に、充分に洗浄し、減圧乾燥して１２ｇ
の１３ｏｃ　　Ｔｙｒ　（Ｃ１２Ｂｚｌ）−樹脂を得る
。

一部を加水分解後アミノ酸分析を行なった結果アミノ酸
０　、３１１１１１１１０１／（Ｉ樹脂テアツタ。

■　上記■で得たＢｏａ　　ＴＶｒ　（（／Ｉ　２　　
Ｂｚｌ）−樹脂１．７０（＋をクロロホルム３０ｍＱで
３回洗浄後、５０％１ヘリフルオロ酢酸（ＴＥＡ）あり
ロロホルム溶液３０ｍＱに加え、室温で２０分間反応さ
せる。樹脂をり［１［１ホルム３ｏ鵬で１回、塩化メチ
レン３０軛で５回、１０％］・リエチルアミンの塩化メ
ヂレン溶’ｍ　３０　ｍＱで３回、次いで塩化メチレン
３０Ｉｌｌｉ２テ６回それぞれ洗浄してＨ−Ｔｙｒ（Ｃ
１２Ｂｚｌ）−樹脂を得る。

Ｂ　ｏｃ　−Ｐ　ｒｏ−ＯＨの０．２８ｏを塩化メチレ
ンに溶かした溶液２５鵬に一ヒ記Ｈ−Ｔｙｒ（Ｃ１２−
Ｂｚｌ）−樹脂を加え、次いでＤＣＣの０．２７゜を塩
化メチレンに溶かした溶液５１１１１１１を加え室温で
２時間反応させる。樹脂を塩化メチレン３０鵬で６回洗
浄後、Ｂ　ｏｃ　−Ｐ　ｒｏ　−ＯＨの０．２８ｏ及び
１−ヒトＯキシベンゾトリアゾール０．５５ｏの塩化メ
チレン２５鵬に加え、次いでＤＣＣの０．２７０を塩化
メチレンに溶かした溶液５−を加えて再度同様に反応さ
せる（二重カップリング法）。樹脂を塩化メチレンで充
分に洗浄して３ｏｃ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（Ｃ１２Ｂｚｌ）
−樹脂を得る。

■　上記■と同様にして、Ｂｏｃ　−ｐ　ｒｏ　−Ｔ　
ｙｒ（Ｃｌ　２−、Ｂ　ｚｌ　）−樹脂の脱Ｂｏｃ化を
行ない、次いで下記アミノ酸、側鎖官能基保護アミノ酸
又はカルボキシル基の活性化されたアミノ酸を順次縮合
及び脱３ｏｃ反応に付す。

Ｂｏａ−Ｐｒｏ−ＯＨＯ，２８ａ Ｂ　ｏｃ　−Ｐ　ｒｏ−ＯＨ０、２８０Ｂｏａ−Ｌｙｓ
（ＣＩ−Ｚ）−ＯＨＯ，５５Ω１３ｏａ−ＬｙＳ（ＣＩ
−Ｚ）−ＯＨ０，５５ｇＢｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ０，２８
０ Ｒｏｅ−Ｇｌｎ−ＯＮＰ　　　　　　　　　　Ｏ，４８
０Ｂｏｃ−Ｖａｔ−ＯＨ０，２９ｇ Ｂｏａ−Ｖａｌ−ＯＨ０，２９＋＋ 斯くしてｔ−１−Ｖａｔ−Ｖａｔ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｌ
ＶＳ（ＣＩ−Ｚ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ｐｒｏ−Ｐｒ
ｏ　−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（Ｃ１２−ＢＺＩ）−樹脂の２．
５７ｇを得る。このうち１．２０ａをアニソール２ＩＩ
Ｉ１２及び弗化水素２０鵬に溶かし、−２０℃で３０分
間、次いで０℃で３０分間インキュベーションさせた後
、過剰の弗化水素を減圧留去し、残渣を１０％酢酸にて
抽出し、エーテルにて洗浄する。水層を凍結乾燥し、次
いでセファデックスＧ−２５（ファルマシア社、溶出液
１Ｍ酢酸）によるゲル濾過、さらにＣＭ−２３・セルロ
ース（ワラ１−フン社、０．０４Ｍ酢酸アンモニウム、
ｐＨ７，２）を用い精製して目的ペプチド１６２１１ｇ
を得る。以下このペプチドを「ペプチドＡ」と呼ぶ。

Ｒｆ値： Ｒｆｌ−０，０１Ｒｆ２＝０．２７ 元素分析値： （ＣＦ、　ｅ　Ｈｅ　ｅ　ＯＨ３Ｎ＋　３　・３ＣＨ３
ＣＯ９Ｈ・４Ｈ２０として） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　５３．０２　７．８２　１２．９６分析値　
　５２．９４　８．０６　１２．７４アミノ酸分析値：
（日立８３５型にて分析）分析値 Ｇｌｎ（１）　　　　　　１．０５ Ｌｌ（２＞　　　　　　２．１７ Ｐｒｏ（４）　　　　　　４．０２ Ｔｖｒ（１）　　　　　　１．０５ Ｖａｔ（２，＞　　　　　　１．６９ 製造例　２ 製造例１の■と同様にして得たＢＯＣ−ρｒ〇−樹脂（
０、４４ｍｗ＋ｏ１１０樹脂）１．２０ｇに、製造例１
の■及び■と同様にして、以下の各アミノ酸又はその誘
導体を順次縮合及び脱１３ｏｃ化反応させる。

Ｂｏａ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０，３９ａＢｏａ−Ａ
ｌａ−ＯＨ０，２５゜ Ｂｏｃ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）　　−ＯＨ０，３９ＣＩＢｏ
ｃ−Δｒｇ（Ｔｏｓ）−ＯＨ０，５６＜ＩＢｏａ−８ｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０，３９ＣＩＦ３　　ｏｃ　−Ｐ　
　ｈｅ　−０ト１　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　０．３５ＱＢｏａ−１１ｅ−ＯＨ１／　２Ｈ２０ ０，３，２！；Ｉ Ｂｏａ−Ｇｉｎ−ＯＮＰ　　　　　　　　　０．　４９
ｇＢｏａ−Ｇｌｙ−０１−１０，２３０ Ｂｏａ−Ｍｅｔ−ＯＨ０，３３Ｑ 斯くシテ、Ｈ−Ｍｅｔ　−Ｇ　ＩＶ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｉ
　Ｉａ　　Ｐ　ｈｅ−Ｓ、ｅｒ　（Ｂ　ｚｌ）　　−Δ
ｒａ（Ｔｏｓ）　　−８ｅｔ（Ｂｚｌ）−Δ１ａ−８ｅ
ｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−樹脂１．５８（＋を得る。この
うち０．４０（ｌを弗化水素１０ｍ１２．１゜２−エタ
ンジチオール０．５ｍＧ及びアニソール１噌と混合し、
−２０℃で３０分間、次いで０℃で３０分間インキュベ
ーションした後、過剰の弗化水素を減圧留去して１０％
酢酸にて抽出し、エーテル洗浄を軒で、凍結乾燥する。

次いでＵファデックスＧ−２５（ファルマシア社、溶出
液１Ｍ酢酸）によるゲル濾過、さらにＣＭ−セル［１−
ス２３（ワットマン社、０．１→０．５Ｍ酢酸アンモニ
ウム、ｏ　ｔ−１＝５．０直線部度勾配）によって、精
製して、目的ペプチド３２ｍｇを轡る。以下このペプチ
ドを１ペプチドＢ」と呼ぶ。

［値： Ｒｆｌ−０，０１Ｒｆ２−０．５０ 元素分析値： （ＣｓｏＨｅ＋０＋ｅＮ＋ｓＳ。

ＣＨ３ＣＯ２Ｈ・５ＨシＯとして） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　、４６．９４　７．２０　１５．７９分析値
　　４７．０１　７．３２　１５．６６アミノ酸分析値
：（日立８３５型にて分析）分析値 Ａｌａ（１）　　　　　　１．０７ Ａｒａ（１）　　　　　　１．０７ Ｇｌｎ（１）　　　　　　１．００ Ｇｌｙ（１）　　　　　　１．００ １１ｅ（１）　　　　　　　　　　０．９１Ｍｅｔ（１
）　　　　　　　　　　０．９４ｒ’ｌ＋ａ（１）　　
　　　　　　　０．　９３Ｐｒｏ（１）　　　　　　　
　　　１．０７Ｓｅｒ（３）　　　　　　　　　　２．
　９８製造例　３ 前記製造例２で得た、ＨＭ　ｅｔ−Ｇ　ｌｙ　　Ｇ　Ｉ
ｎ　−１ｌｅ　−Ｐｈｅ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ａｒｏ
　（Ｔｏｓ）　−８ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ａｌａ−８ｅｐ
（Ｂｚｌ）　−Ｐｒｏ−樹脂の０．４１ｇに、Ｂｏａ−
ＴＶｒ（Ｃ１２Ｂｚり　−〇　Ｈの０．４７ｏを前記製
造例１−■ど同様にして二重カップリング反応させる。

次いでトリフルオロ酢酸ｒ　ｓ　ｏｃ基を脱離して、Ｈ
−Ｔｙｒ（Ｃ１２−Ｂｚｌ）　−Ｍｅｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌ
ｎ−１１ｅ−Ｐｈｅ−８ｅｒ（Ｂｚｌ）　−ＡｒｌＴｏ
ｓ）　−８ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ａｌａ−８ｅｒ（Ｂｚｌ
）−Ｐｒｏ−樹脂を得る。これを弗化水素１０ｍＧ、ア
ニソール１ｍｌ及び１．２−エタンジチオール０．５１
１０と混合し、−３０℃で３０分間、次いで０℃で３０
分間インキュベーションし、過剰の弗化水素を減圧留去
した後、１０％酢酸で抽出し、エーテルで洗浄し、凍結
乾燥した。次いで廿ファデックスＧ−２５（ファルマシ
ア社、溶出液１Ｍ酢酸）によるゲル濾過、さらにデベロ
ジル力ラムを用いた１−（ＰＬＯ（ダム３社、溶出液０
、ＩＭ　　Ｎａ　Ｈ２ＰＯ４：７セｌ−二ｌ−リルー８
０　：　２０）によって精製した後、セファデックスＧ
−２５（ファルマシア社、溶出液１Ｍ酢酸）で脱塩して
目的ペプチド９．２３１＋ｌ！ＩＩを得る。以下このペ
プチドを「ペプチドＣ」と覆る。

Ｒｆ値： Ｒｆ　Ｉ　−０，０１Ｒｆ　２−０．５２元素分析値： （Ｃ５９ｊ１９ｏＯ＋ｅＮ＋ｅＳａ ＣＨ３ＣＯ１！Ｈ・６Ｈ２０として） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　４８．４７　７．０７　１４．８２分析値　
　４８．６３　７．０１　１４．７７アミノ酸分析Ｗ１
：（日立８３５型にて分析）分析値 Ａｌａ（１１１，０３ Ｍｅｔ（１）　　　　　　　　　１．００Ａｒｇ（１）
　　　　　　　　　１．０７Ｐｈｅ（１）　　　　　　
　　１．０９Ｇｉｎ（１）　　　　　　　　１．０３Ｐ
ｒｏ（１）　　　　　　　　　０．９９Ｇｌｙ（１）　
　　　　　　　　１．１４Ｓｅｒ（３）　　　　　　　
　　２．６８１１ｅ（１）　　　　　　　　　１．０３
Ｔｙｒ（１）　　　　　　　　　１．０３製造例　４ 製造例１の■と同様にして３　ｏｃ　−１ｅｕ−樹脂の
０　、２７　ｍ１ｉｏ１１０樹ｍを製造し、その２ｇに
、前記製造例１の■及び■と同様にして、以下のアミノ
酸又はその誘導体を順次二重カップリング反応及び鋭Ｂ
ｏａ化反応させる。

Ｂｏｃ−８ｅｒ−ＯＨｏ、　４０Ｑ Ｂｏａ−Ａｒｃ（Ｔｏｓ）　−ＯＨＯ，５８（］Ｂｏｃ
　−１−ｅｕ−ＯＨ−Ｈ２００，３４ＱＢｏｃ−１ｉｅ
−ＯＨ・１／２Ｈ２００，３２ｇＢｏａ−Ｐｒｏ−０）
−Ｉ　　　　　　　　　Ｏ，２９゜Ｂｏａ−Ａｓｐ（Ｂ
ｚｌ）−ＯＨＯ，４４ｇＢｏｃ−１，ｙｓ（ＣＩ−Ｚ）
−ＯＨＯ，５６Ω３ｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＨ０，２９す Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　　−ＯＨＯ，３９（］］Ｂ
ｏａ−Ｇｌｙ−ＯＨ０，２４゜ Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）−ＯＨ０，４６＋ＩＢｏａ−
Ｐｒｏ−ＯＨ０，２９０ Ｂｏａ−Ｔ’Ｖｒ（ＣＩ２　　　Ｂｚｌ）　　　ＯＨ０
，５７（］ 斯くしてＢｏａ−丁ｙｒ（ＣＩ　２−ＢＺＩ）　−Ｐｒ
ｏ−Ｇｌｕ（Ｂｚｌ）　　−Ｇｌｙ−ＴＩ＋ｒ（Ｂｚｌ
）　　−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＣＩ　　−Ｚ）　　−Ａｓｐ
（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−１１ｅ−１ｅｕ−Ａｒ（Ｊ　（Ｔ
ｐＳ）　−Ｓ　０ｒ−Ｌ　００−樹脂２．６２ｏを得る
。

その１，６２０を弗化水素２０＋１１２及びアニソール
２１１１１２に溶かし、−２０℃で３０分間、次いで０
℃で３０分間反応させ、過剰の弗化水素を減圧留去し、
１０％酢酸にて抽出し、エーテルにて洗浄後、凍結乾燥
する。次いでセファデックスＧ−２５（１Ｍ酢酸）でゲ
ルｔＦ’過し更にデベロジルカラムを用いたＨＰＩ−、
Ｃ（溶出液、Ｏ，１Ｍホスファイ１−バツファ−：アレ
トニトリルー８０　：　２０）を用いて精製して、Ｈ〜
Ｔ　Ｖｒ　−Ｐ　ｒｏ−Ｇ　Ｉｕ　−Ｇ　１ｙ−Ｔｈｒ
　−Ｐｒｏ　−Ｌ　ｙｓ−ΔＳＤ−Ｐ　ｒｏ−１ｌｅ　
−ｌ−、ｅｕ−△ｒｇ　−５ｅｒ−Ｌ　ｅｕ−ＯＨのペ
プチド１０４ｎ＋ｏを得る。以下これを「ペプチドＤ」
と呼ぶ。

Ｒｆ値： Ｒｆ　　盲　　＝０．　　０１　　　　　　　［２＝０
．　　４２元素分析値： （Ｃｒ２　Ｈ＋＋ｇ０２２Ｎ＋　８　’ＣＨ３ＧＯ２Ｈ
・７Ｈ２０として） Ｃ（％）　　Ｈ（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　５０．１６　７．６２　１４．２３分析値　
　４９．８７　７．６０　１４．２９アミノ酸分析値：
（日立８３５型にて分析）分析値 Ａｓｐ（１）　　　　　　０．９６ Ｌｙｓ（１）　　　　　　１　、１３ Δｒｇ（１）　　　　　　１．０２ Ｐｒｏ（３）　　　　　　２．７９ Ｇｌｕ（１−）　　　　　　　１．０５Ｓｅｒ（１）　
　　　　　　　　０゜９２Ｇｌｙ（１，、）　　　　　
　　　　１．０３Ｔｈｒ（１）　　　　　　　　　０．
９９Ｔｌｅ（１）　　　　　　　　　０．９９Ｔｙｒ（
１）　　　　　　　　　０．９７Ｌｅｕ（２）　　　　
　　　　　２．　１　１く抗原の製造〉 製造例　１ ペプチドの製造例１で得たペプチドＢ５．０９■及びＫ
Ｌ）−１（シグマ社）２５．１０ａ＋ａを、０．０５Ｍ
ＩＪン酸塩１１１１ｉ液（ＥＩ　Ｈ−７，０）３．０１
に加え、この溶液に２％グルタルアルデヒド溶液０．２
ｍＱを滴下し、室温で３時間撹拌する。その後反応混合
物を一夜蒸留水で４℃で透析し、凍結乾燥して、目的抗
原２６．４９ａＱを得る。

以下この抗原を「抗原工」と言う。

抗原■はＫＬＩ−１１モル（平均分子量を１０万とした
場合）に対してペプチドＢが平均１０モル結合したもの
である。尚このペプチドＢとＫ　Ｌ　Ｈとの結合率は、
１ｑられる抗原■を更に廿ファデックスＧ５０（溶出液
：生理食塩水、検出：Ｏ［）２８０　ｎｍ、流出速度：
３ｍＱ／時間、分取Ｆｆｉ　：　１　ｍＱづつ）でゲル
濾過した際、未反応のＫ　１．、　Ｈ及びペプチドＢの
存在は認められないことより、該ゲル濾過によってＫＬ
）−１に結合したペプチドＢのフラクションと他の生成
体くペプチドＢの２醋休）のフラクションとを分離し、
ペプチド２量体の標準濃度の検ｍｔａを作成して、上記
２ｊｉｉＩ体の吊を求め、これを出発原料として用いた
ペプチドＢの酔から差し引いた値がづべてＫｌ）−１に
結合しているとして求めたものである。以下の抗原の製
造例においても同様とする。

製造例　２ ■　０．２Ｎ−ＨＣＱの２０ＷＩＪとＤＭＦの３鵬どの
混合溶媒にベンジジン８３．２５Ｈを加え、水冷下に撹
拌し、該溶液に亜硝酸ナトリウム８７．０３万ｇの蒸留
水２鵬を徐々に加え、３０分間撹拌してＢＤＢ溶液を調
整した。

■　ヘ７チｔ’Ｄ５．１３ｎｏ及ヒＫ１−Ｈ８，１０ｎ
ａを０．１３Ｍ　　Ｎａ　ＣＧ！の０．１６Ｍホウ酸塩
緩衝液（ｐ　Ｈ−９，０）１鵬に溶解し、４℃にて静か
に撹拌する。該溶液に上記■のＢＤＢ溶液０．５鵬を徐
々に滴下する。反応溶液を０．５ＮＮａ　ＯＨにてｐＨ
＝９．０に調整し、さらに４℃で２時間反応する。その
後反応混合物を一夜蒸留水で４℃下に透析し、凍結乾燥
して、目的抗原１２．７６ｕを得る。以下この抗原梗「
抗原■」と言う。抗原■はＫ　Ｌ　Ｈ１モルに対してペ
プチドＤが平均１８モル結合したものである。

製造例　３ ペプチドＡ５．１７１１＋ａ及びＫ１−Ｈ８，０３Ｒ１
（ｌを使用して、前記製造例２と同様にして目的抗原１
２．７４１Ｂを得る。、以下この抗原を「抗原■」と言
う。抗原■はＫ　Ｌ　Ｈ１モルに対してペプチド△が平
均２５モル結合したものである。

く抗体の製造〉 製造例　１ 抗原の製造例１で得た抗原１〜ｍのそれぞれ１１００Ｌ
１を１．５−の生理食塩水に溶解後、これにフロイント
の補助液１．５ｍＱを加えて調整した懸濁液を、それぞ
れ３羽のウサギ（Ｎｅｗ−７ｅａｌａｎｄ　　ｗｈｉｔ
ｅ　　　ｒａｂｂｌｔｓ　）　　（２，５〜３．　０ｋ
ｏ）に皮下投与し、２週間毎に６回同一を投与する。更
にその優１ケ月毎に３回、最初に投与した脳と間際を投
与する。最終投与、後７日経過してのち試験動物から採
血し、遠心分離して抗面清を採取して、それぞれ目的抗
体を得る。

（以　−Ｅ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ０式 ％式％ で表わされるペプチド、一般式 Ｒ−Ｍｅｔ−ＧＩＶ−Ｇｌｎ　−１１ｅ　−Ｐｌ＋ｅ−
   ８ｅｒ−Ａｒａ−８ｅｒ−Δ　ｔａ　−Ｓ　　ｅｒ　−
   Ｐ　　ｒｏ−０１１〔式中Ｒは水素原子又はＨ−Ｔｙｒ
   基を示す。〕で表わされるペプチド及び式 ％式％ ） で表わされるペプチドからなるｎＹより選ばれたヒト白
   血病ウィルス間連ベブヂド。