JPS59128366A - ヒト白血病ウイルス関連ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト白面病ウィルス（ＡｄｕｊｔＴ−ｃｅｌ
ｌ　　ｌｅｕｋｅｍｉａ　　Ｖｉｒｕｓ：ＡＴＬＶ又は
１−ＩＬＩｎｌａｎＴ−ｃｅｌｌ　　Ｉｅｕｋｅｎ＋Ｉ
ａ　　Ｖｉｒｕｓ：　ｌ−Ｉ　Ｔｌ−Ｖ　）　ニ関連す
る新規なペプチドであり、これはかかるウィルス感染な
らびに成人下細胞白血病、皮ＦＭ型Ｔ細胞リンパ腫など
の成熟Ｔ細胞白面病・リンパ種に関連ザるペプチド°で
もある。

本明細店において、アミノ酸、ペプチド、保護基、活性
基、核酸塩基、その他に関して略号で表示する場合はＴ
ＵＰＡＣ，ＩＵ８の規定或いは当該分野における慣用記
号に従うものとし、その例を次に挙げる。またアミノ酸
等に関して光学異性体がありうる場合は、特に明記しな
ければ１体を示すものとする。

Ｓｅｒ：セリン　　　　Ｌｅｕ；ｏイシンＴＩ＋ｒ：ス
レオニン　　Ａｓｎ；ア、スパラギンＧｌｎ：グルタミ
ン　　Ｇｌｕ；グルタミン酸Ｌ　ｙｓ　：リジン　　　
　Ｐ　ｒｏ　ニブロリンＶａｌ：バリン　　　　Ｔｒｐ
；ｌ−リブトノアン１−１ｉｓ；ヒスチジン　　Ａ　Ｓ
ｔ）　：アスパラギン酸Ｇｌｙニゲリシン　　　Ｉｌｅ
：イソロイシンＡｌミニアラニン　　　７ｙｒ；チロシ
ンＡ　：アデニン　　　Ｔ　：チミン Ｇ　；グアニン　　　Ｃ：シトシン ＴＯ３：Ｉｌ＋　−トルエンスルホニル其Ｂ　ｏｃ　；
第３級ブトキシカルボニル基ｏＮｐ：ｐ−二１〜ロフエ
ノキシ幕 ＲＺＩ　　：ベンジル基 ０Ｂｚｌ：ベンジルオキシＬ↓ Ｃｌ　２−ＢＺＩ；　２．６−ジクロルベンジｌし１７
ＩＣＩ−７：２−クロルベンジルオキシカルル阜 ヒト白血病ウィルスは、成人］−細胞白血病（ＡＴＬ）
より分ν］され、該疾患との関Ｍ　ｈ＜　ｔ↑目されて
いるウィルスである。本発明者の古川、菅野は、遺伝子
工学的手法をもちい、宿主細胞のＩ〕ＮＡに組込まれた
プロウィルス遺伝子をクローニング（ｃ＋ｏｎ＋ｎｇ　
）　シ、その全１３基配Ｉ／ＩＪを決定し１こ。

これに基づいて該疾患ならびに該ウィルス感染の診断・
治療・予防の基礎を確立し、さきに４６　ｆｒ　Ｆｌｌ
請を行なった。

本発明は、上記の基礎的な情報を基（こし完成されたも
のであり、該ウィルス感染の診断を目的とした該ウィル
ス関連ペブヂド、ならびにそれ等に対する特異抗体の作
製と測定法に関する。決定された上記ウィルス遺伝子の
コア（ギャグ）蛋白前駆体を」−ドするＪｆＡ基配列配
列記第１表に示す。

第１表 Ａ’ｒＧ　ＧＧＣ　ＣＡＡ　ＡＴ’Ｃ　ＴＴ”ｒ　ＴＣ
Ｃ　ＣＧＴ　ＡＧＣ　ＧＣ−ｒＭｅｔ　　Ｇｌｙ　　Ｇ
ｌｎ　　Ｉｌｅ　　ｌ−）ｌ＋ｃ　　３ｅｒ　　Ａｒｇ
　　ｃ３ｅｒ　　ＡｌａＡＧＣ　ＣＣＴ　’ＡＴＴ　Ｃ
ＣＧ　ＣＧＡ　ＣＣＧ　ＣＣＣ　ＣＧＧ　ＧＧＧＳｅｒ
　　ｌ）ｒｏ　　Ｉｌｅ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｒｔ　　ｌ
）ｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ａｒｏ　　ＧＩＶＣＴＧ　　ＧＣ
Ｃ　　ＧＣＴ　　ＣＡＴ　　ＣＡＣ　　−ｌ−ＧＧ　　
ＣＴＩ−　　ＡＡＣ　　ＴＴＣＬｅｕ　　Ａｌａ　　Ａ
ｌａ　　　Ｉ−１ｉｓ　　　Ｌｌｉｓ　　Ｔｒｐ　　　
Ｌｃｕ　　Ａｓｎ　　　Ｉ）ｈｅＣ−ｒＣ　ＣＡＧ　Ｇ
ＣＧ　ＧＣＡ　−１−Ａ−Ｉ−　ＣＧＣ　ＣＴＡ　ＧＡ
Ａ　ＣＣＣ１−ｅｕ　　Ｇｌｎ　　Ａｌａ　　Ａｌａ　
　Ｔｙｒ　　Ａｒ（ｌ　　Ｌｅｕ　　ＧＩＬＩ　　ｐｒ
。

ＧＧＴ　ＣＣＣ　ＴＣＣ　ＡＧＴ　−ｒＡｃ　ＧＡＴ　
−ｒＴＣ　ＣＡＣ　ＣＡＧＧＩＶ　　ｔＪｒｏ　　３ｃ
ｒ　　Ｓｅｒ　　ＴＶｒ　　ＡＳＩ）　　Ｐｌ）ｅ　　
ｌｉｌｓ　　ＧｌｎＴＴＡ　ＡＡＡ　ＡＡＡ　ＴＴＴ　
ＣＴＴ　ＡＡＡ　ＡＴＡ　ＧＣＴ　ＴＴＡｌｏｌｌ　　
ｃ．ｙｓ　　Ｉ−ｙｓ　　Ｐｈｅ　　ｌ−ｅｕ　　Ｌｙ
ｓ　　ｌｌｅ　　Ａｌａ　　ｌ−ｅｕＧＡＡ　ＡＣＡ　
ＣＣＧ　ＧＣＴ　ＣＧＧ　Ａｌ−Ｃ　ＴＧＴ’　ＣＣＣ
　ＡＴＴＧｌｕ　　Ｔｈｒ　　Ｐｒｏ　　Ａｌａ　　Ａ
ｒｏ　　ｌｌｃ　　Ｃｖｓ　　Ｐｒｏ　　ＩｌｅＡＡＣ
　　ＴＡＣ　　ＴＣＣ　　ＣＴＣ　　ＣＴＡ　　ＧＣＣ
　　ＡＧＣ　　ＣＴＡ　　Ｃ−ｒＣＡｓｎ　　Ｔｙｒ　
　Ｓｅｒ　　　Ｌｅｕ　　　Ｌｅｕ　　Ａｌａ　　Ｓｅ
ｒ　　　ｌ−ｅｕ　　ｌｅｕＣＣＡ　　ＡＡＡ　　ＧＧ
Ａ　　ＴＡＣ　　ＣＣＣ　　ＧＧＣ　　ＣＧＧ　　ＧＴ
Ｇ　　ＡＡＴＰｒｏ　　ＬＶＳ　　Ｇｌｙ　　Ｔｙｒ　
　ｐｒｏ　　Ｇｌｙ　　’Ａｒｏ　　Ｖａｌ　　Ａｓｎ
ＧＡ’Ａ　　ＡＴＴ　　ＴＴＡ　　ＣＡＣ　　ＡＴＡ　
　ＣＴＣ　　ＡＴＣ　　ＣＡＡ　　ＡＣＣＧｌｕ　　　
ｌｌｃ　　　Ｌｅｕ　　　Ｈｉｓ　　　ｌｌｅ　　　ｌ
−ｅｕ　　　Ｉｌｅ　　　ＧＩＴＩ　　　Ｔｌ＋ｒＣＡ
Ａ　　ＧＣＣ　　ＣＡＧ　　ＡＴＣ　　ＣＣＧ　　ＴＣ
Ｃ　　ＣＧＴ　　ＣＣＣ　　ＧＣＧＧｌｎ　　Ａｌａ　
　Ｇｌｎ　　　Ｉｌｅ　　Ｐｒｏ　　Ｓｅｒ　　Ａｒｏ
　　　Ｐｒｏ　　ＡｌａＣＣＡ　　ＣＣＧ　　ＣＣＧ　
　ＣＣＧ　　ＴＣＡ　　ＴＣＣ　　ｃｃｃ　　ＡＣＣ　
　ＣＡＣｐｒｏ　　　　Ｐｒｏ　　　　Ｐｒｏ　　　　
Ｐｒｏ　　　　Ｓｅｒ　　　　３ｅｒ　　　　Ｐｒｏ　
　　　Ｔ１１ｒ　　　　トｌｉｓＧＡＣ　　ＣＣＣ　　
ＣＣＧ　　ＧＡＴ　　ＴＣＴ　　ＧＡＴ　　ＣＣＡ　　
ＣＡＡ　　ＡＴＣＡＳＩＩ　　　ｐｒｏ　　　ｐｒｏ　
　　ＡＳＩ）３ｅｒ　　　Ａｓｐ　　　Ｐｒｏ　　　Ｇ
ｉｎ　　　ｌｌｃＣＣＣ　　ＣＣＴ　　ＣＣＣ　　ＴＡ
Ｔ　　ＧＴＴ　　ＧＡＧ　　ＣＣＴ　　ＡＣＧ　　ＧＣ
ＣＰｒｏ　　　Ｐｒｏ　　　Ｐｒｏ　　　Ｔｙｒ　　　
Ｖａｌ　　　Ｇｌｕ　　　ｐｒｏ　　　Ｔｈｒ　　Ａｌ
ａＣＣＣ　　ＣＡＡ　　ＧＴＣ　　ＣＴＴ　　ＣＣＡ　
　ＧＴＣ　　ＡＴＧ　　ＣＡＴ　　ＣＣＡＰｒｏ　　　
Ｇｌｎ　　　Ｖａｔ　　　Ｌｅｕ　　　Ｐｒｏ　　　Ｖ
ａｔ　　　Ｍｅｔ　　　Ｉ−（ｉｓ　　　Ｐｒ。

ＣＡＴ　　ＧＧＴ　　ＧＣＴ　　ＣＣＴ　　ＣＣＴ　　
ＡＡＣ　　ＣＡＴ　　ＣＧＣ　　ＣＣＡＨｉｓ　　　Ｇ
ｌｙ　　　Ａｌａ　　　Ｐｒｏ　　　ｐｒｏ　　　Ａｓ
ｎ　　　Ｉ−１ｉｓ　　　Ａｒｏ　　　Ｐｒ。

ＴＧＧ　　ＣＡＡ　　ＡＴＧ　　ＡＡＡ　　ＧＡＣ　　
ＣＴＡ　　ＣＡＧ　　ＧＣＣ　　ＡＴＴＴｒｐ　　Ｇｌ
ｎ’　　Ｍｅｔ　　　Ｌ．ｙｓ　　ＡＳＩ）　　ｌ，−
ｅｌｆ　　Ｇｌｒ＋　　Ａｌａ　　　ｒｌｅＣＡＧ　　
ＣＡＡ　　ＣＴＣＴＧＧ　　ＣＴＣＧＣＣＧＣＣＴ１’
ＣＧＣＣＧｌｎ　　　Ｇｌｎ　　’ｌｅｕ　　　Ｔｒｐ
　　　ＬＣｕ　　　Ａｌａ　　　Ａｌａ　　　Ｐｈｅ　
　　ＡｌａＧＣＣＣＴＧ　　ＣＣＧ　　ＧＧＧ　　ＡＣ
Ｔ　ＧＣＣＡＡＡ　　ＧＡＣＣＣ，ＴＡｌａ　　　Ｌａ
ｕ　　　Ｐｒｏ　　　ＧＩＶ　　　Ｓｅｒ″　Ａ　Ｉａ
　　　ｌ−、、ＶＳ　　　Ａｓｒ＋　　　Ｐｒ。

ＴＣＣＴＧＧ　　ＧＣＣＴＣＴ　　ＡＴＣＣＴＣＣＡＡ
　　ＧＧＣＣＴＧＳｅｒ　　　Ｔｌ’ｌ’ｌ　　Ａｌａ
　　Ｓｅｒ　　　ｌｌｅ　　　ｌ−（！Ｉｆ　　　Ｇｌ
ｎ　　ＧＩＶ　　　１−ｅＬＩＧＡＧ　　ＧＡＧ　　Ｃ
ＣＴ　　ＴＡＣＣＡＣＧＣＣ丁ＴＣＧＴＡ　’ＧＡ△Ｇ
１１ｌ　　　Ｑｌｕ　　　ｐｒｏ　　　Ｔｙｒ　　　Ｈ
ｉｓ　　　Ａｌａ　　　ｐｉｋｅ　　　Ｖａｌ　　　Ｇ
ｌｕＣＧＣＣＴＣＡＡＣＡＴＡ　　ＧＣＴ　　Ｃ−ｒＴ
　　ＧＡＣＡＡＴ　　ＧＧＧＡｒｇ　　　１−ｅｕ　　
　ＡＳＩ））ｌｅ　　　Ａｌａ　　　Ｌｅｌｌ　　　Ａ
ＳＤ　　　Ａｓｎ　　　ＧＩＶＣＴＧ　　ＣＣＡ　　Ｇ
ＡＡ　　ＧＧＣＡＣＧ　　ＣＣＣＡＡＡ　　ＧＡＣＣＣ
ＣＬｅＬＩ　　　Ｐｒｏ　　　ＧＩＬＩ　　　ＧＩＶ　
　　ＴｈｒＰｒｏ　　　Ｌｙｓ　　　ＡＳＤ　　　Ｐｒ
。

ＡＴＣＴＴＡ　　ＣＧＴ　　ＴＣＣＴＴＡ　　ＧＣＣＴ
ＡＣＴＣＣＡＡＴｌｌｅ　　　Ｌｅｕ　　　ＡｒｇＳｅ
ｒ　　　Ｌｅｕ　　　Ａｌａ　　　Ｔｙｒ　　　Ｓｅｒ
　　　ＡｓｎＧＣＡ　　ＡＡＣＡＡＡ　　ＧＡＡ　　Ｔ
ＧＣＣＡＡ　　ＡＡＡ　　ＴＴＡ　　ＣＴＡＡｌａ　　
　　Ａｓｎ　　　　Ｌｙｓ　　　　Ｇ口ｒ　　　　ＣＶ
Ｓ　　　　Ｇｌｎ　　　　Ｌｙｓ　　　　Ｌｅｕ　　　
　１−ｅｕＣＡＧ　　ＧＣＣＣＧＡ　　ＧＧＡ　　ＣＡ
ＣＡＣＴ　　ＡＡＴ　　ＡＧＣＣＣＴＧｌｎ　　　Ａｌ
ａ　　　Ａｒｏ　　　Ｇｌｙ　　　ｌ」ｉｓ　　　Ｔｈ
ｒ　　　Ａｓｎ　　　３ｅｒ　　　Ｐｒ。

ＣＴＡ　　’ＧＧＡ　　ＧＡＴ　　ＡＴＧ　　ＴＴＧ　
　ＣＧＧ　　ＧＣＴ　　ＴＧＴ　　ＣＡＧＬｅｕ　　　
Ｇｌｙ　　　ＡＳｐ　　　Ｍｅｔ　　　（、ｅｕ　　　
Ａｒｏ　　　Ａｌａ　　　Ｃｙｓ　　　ＱｌｎＡＣＣＴ
ＧＧ　　ＡＣＣＣＣＣＡＡＡ　　ＧＡＣＡＡＡ　　ＡＣ
ＣＡＡＡＴｌｌｒ　　Ｔｒｌ＞　　Ｔｈｒ　　　Ｐｒｏ
　　　ＬＶＳ　　ＡＳＩ）＋−ｙｓ　　Ｔｌ１ｒ　　　
１−ｙｓＧＴＧ　　ＴＴＡ　　ＧＴＴ　　ＧＴＣＣＡＧ
　　ＣＣＴ　　ＡＡＡ　　ＡＡＡ　　ＣＣＣＶａｔ　　
　Ｌｅｕ　　　Ｖａｌ　　　Ｖａｔ　　　Ｇｉｎ　　　
Ｐｒｏ　　　ＬｙＳ　　　Ｌｙｓ　　　Ｐｒ。

ＣＣＣＣＣＡ　　ＡＡＴ　　ＣＡＧ　　ＣＣＧ　　ＴＧ
ＣＴＴＣＣＧＧ　　ＴＧＣＰｒｏ　　　Ｐｒｏ　　Ａｓ
ｎ　　Ｇｌｎ　　　ｐｒｏ　　　ＣＶＳ　　　ｐｈｅ　
　Ａｒｇ　　　ＣＶＳＧＧＧ　　ＡＡＡ　　ＧＣＡ　　
ＧＧＣＣＡＣＴＧＧ　　ＡＧＴ　　ＣＧＧ　　ＧＡＣＧ
ＩＶ　　　ＬＶＳ　　Ａｌａ　　ＧＩＶ　　ｔ−１ｉｓ
　　　Ｔｒｐ　　Ｓｅｒ　　Ａｒｏ　　ＡｓｐＴＧＣＡ
ＣＴ　　ＣＡＧ　　ＣＣＴ　　ＣＣＴ　ＣＣＣＣＣＣＣ
ＣＣＧＧＧＣｙｓ　　Ｔｈｒ　　Ｇｌｎ　　Ｐｒｏ　　
Ａｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　Ｐｒｏ　　ＧｌｙＣＣ
Ａ　　ＴＧＣＣＣＣＣＴＡ　　ＴＧＴ　　ＣＡＡ　　Ｇ
ＡＧ　　ＣＣＡ　　ＡＣＴＰｒｏ　　　Ｃｙｓ　　　Ｐ
ｒｏ　　　１−ｅｕ　　　Ｃｙｓ　　　Ｇｌｎ　　　Ａ
ＳＩ）　　　Ｐｒｏ　　　丁ｈｒＣＡＣ１”ＧＧ　　Ａ
ＡＧ　　ＣＧＡ　　ＧＡＣＴＧＣＣＣＣＣＧＣＣＴＡｌ
−１ｉｓ　　　Ｔｒｌｌ　　　Ｌｙｓ　　ＡｒＯＡＳＩ
Ｉ　　Ｃｙｓ　　　Ｐｒｏ　　Ａｒｏ　　　ＬｅｔｌＡ
ＡＧ　　ＣＣＣＡＣＴ　　ＡＴＣＣＣＡ　　ＧＡＡ　　
ＣＣＡ　　ＧＡＧ　　ＣＣＡＬｙｓ　　　Ｐｒｏ　　　
Ｔ１＋ｒ　　　ｒｌｅ　　　Ｐｒｏ　　　Ｇｌｕ　　　
ｐｒｏ　　　Ｑｌｕ　　　ｐｒ。

ＧＡＧ　　ＧＡＡ　　ＧＡＴ　　ＧＣＣＣＴＣＣＴＡ　
　ＴＴＡ　　ＧＡＣＣＴＣＧ’ｌｕ　　Ｇｌｕ　　Ａｓ
ｐ　　Ａｌａ　　　Ｌｅｕ　　　１−ｅｕ　　Ｉ−ｅｕ
　　ＡＳＤ　　Ｌ８ＬＩＣＣＣＧＣＴ　　ＧＡＣＡＴＣ
ＣＣＡ　　ＣＡＣＣＣＡ　　ＡＡＡ　　ＡＡＣＰｒｏ　
　Ａｌａ　　ＡＳＤ　　Ｉｌｅ　　Ｐｒ０　１−１１ｓ
　　Ｐｌ’ＯＬｙＳ　　ＡｓｎＴＣＣＡＴＡ　　ＧＧＧ
　　ＧＧＧ　　ＧＡＧ　　ＧＴＴＳｅｒ　　　Ｉｌｅ　
　　ＧＩＶ　　　ＧＩＶ　　　ＧＩＵ　　　Ｖａｔト記
第１表より、コアー蛋白前駆体は、４２９個のアミノ酸
から成ることが示され、既に報告されているｐ−２４の
末端構造（Ｐ　ｒｏｃ、Ｎ　ａｔｌ、Ａ　ｃａｄ。

Ｓｃｉ、Ｕ、Ｓ、Ａ、Ｖｏｌ、７９．１１ＤＩ２９１〜
１２９４　（１９８２）参照）から考えて、該前駆体は
さらに切断されてｐ−１４、ｐ−２４及び【〕−１０の
コアー蛋白どなることが予九（された。

一般に蛋白質の生合成は、下記第２表に示ず生合成経路
をふむ。

第２表 ＤＮＡ→ＩｎＲＮＡ→ペプチド前駆体 （ｒ＋ｒｏ　−ｐｅｐｔｉｄｅ　） シグナルペプチド　　　　　ペプチド 第２表において、シグナルペプチドはＮ　ＧＡｉｔ側に
のびていることから、末ζ“１：ペプチドを抗原決定ふ
（として採用する場合は、そのＣ一端側アミノｈ！ｉ配
列が最適と予想される。１−記の如き観点にもとづき、
本発明者等は、ｌ記ヒ１〜白血病ウィルスの関連蛋白く
コアー蛋白）のハブテンとなり得る特定のペプチドを見
い出し、ここに本発明を完成覆るに至った。

即ら本発明は式 ％式％ （１） で表わされるペプチド、一般式 Ｒ−Ｉｌｅ　−Ｐｒｏ　−１−１ｉｓ　−Ｐｒｏ　−１
−ｙｓ　−Ａｓｎ　−３ｅｒ−ｒ　Ｉｅ−ＧＩＶ−ＧＩ
Ｖ−Ｇｌｌｌ−Ｖａｌ−Ｑ）ｌ〈２） Ｃ式中Ｒは水素原子又は］−１−丁ｙｒ基を示す。〕で
表わされるペプチド及び一般式 ％式％ （３） ｃ式中Ｒは上記に１６１じ。） で表わされるペプチドからなる群より選ばれたと１・白
血病ウィルス関連ペプチドに係る。

本発明の上記一般式（１）〜（３）で表わされるペプチ
ドは、いずれも入手容易な市販のアミノ６りを利用して
、簡単な操作で容易に合成すること−ができ、各ペプチ
ドからは、これらをハプテンとして用いて抗踪を作成で
き、斯くして得られる抗原からはウィルス関連蛋白に特
異反応性を右する抗体を収得することがでさる。該特５
１４抗体はこれを例えばアフィニティークロマ１〜グラ
フイー用担体と結合させて、該クロマトグラフに利用づ
る等によりウィルス関連蛋白の精製に用いることができ
、また該ウィルス関連蛋白の各種免疫測定７Ａ、にお（
）る特異抗体として使用でき、ヒ１〜白血病ウィルス感
染の診断、ひいては、成人丁細胞白血病１、皮脚型Ｔ細
胞リンパ腫等の成熟Ｔ細胞白血病・リンパ師ならびに関
連Ｊる疾患の診断、研究等に有用である。

本発明の一般式（１）〜（３）で表わされるペプチドは
、通常のペプチド合成法、具体的に（Ｊ［ザ　ペプチド
（ｌ−ｈｅ　　１）ｅｐｔｉｄｅｓ　）　Ｊ第１巻（１
９６６年＞　　（５ｃｈｒｏｄｅｒ　　ａｎｄ　　Ｌ　
ｕｈｋｅ著、Ａｃａｄｅｎ＋ｉｃ　　ｐｒｅｓｓ、Ｎｅ
ｗ　　Ｙｏｒｋ、ＬＪＳＡ）ｐｉ１２イＧ、ｔ「ペプチ
ド合成」　（東屋ら著、丸善株式会社（１９７５年）〕
に記載される如き方法に従い、例えばアジド法、クロラ
イド法、酸無水物法、混酸無水物法、Ｄ　ＣＣ法、活性
エステル法（ｐ−ニトロフェニルエステル法、Ｎ−ヒド
ロキシコハク酸イミドエステル法、シアンメチルニスデ
ル法等）、ウッドワード試共１＜を用いる方法、カルボ
ジイミダゾール法、酸化還元法、ＤＣＣ／アディティブ
（ｌ」ＯＮ、Ｂ、ｔ−１０Ｂｔ　、ＨＯ３ｕ　）法等に
より製造できる。」二記り法にｄ５いては、固相合成法
及び液相合成法のいずれを−ｂ適用できる。通常本発明
のペプチドは、上記した一般のポリペプチドの合成法に
従い、例えば末端アミノ酸に順次１個づつアミノＮ’Ｓ
を縮合させる所謂ステップワイズ法にＪ：す、又は数個
のフラグメント、に分けてカップリングさゼていく方法
にＪ：り製造される。より詳細には、例えば固相合成法
を採用する場合、Ｃ末端アミノ酸をそのカルボキシル基
にＪこって、不溶性担体に結合させる。不溶性担体と、
しては、反応性カルボキシル基と結合１イ［を右するも
のであれば特に限定はなく、例えば汐Ｏロメチル樹脂、
ブロモメチル樹脂等のハロゲノメチル（１１脂やヒドロ
キシメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ−アルキル
オキシカルボニルヒドラジド化樹Ｂ；ｉ等を□使用でき
る。

次いでアミン保護基を除去した（ね、一般式（１）〜（
３）で表わされるアミノ酸配列に従い順次アミノ其保護
アミノ酸を、その反応性アミノ基及び反応性カルボキシ
ル基との縮合反応により結合さけ、一段階ずつ合成し、
全配列を合成した後、ペプチドを不溶性担体からはずづ
ことにＪ、り製造される。

」二記においてヒスデシン、チロシン、グルタミン酸、
スレオニン、リジン、アスパラギン酸及びセリンの各ア
ミノ酸は、その側鎖官ｆｊＬ基を保護しておくのが好ま
しく、これは通常の保護基により保護され、反応終了後
肢保護基は１１１２　＋＝ｆされる。また反応に関与す
る官能基は、通常油性化される。

これら°各反応方法は、公知であり、それらに用いられ
る試薬等も公知のものから適宜選択される。

アミノ基の保護基としては、例えばベンジルオキシカル
ボニル ニル トキシベンジルオキシノコルボニル、２−クロロ−ベン
ジルオキシカルボニル ルボニル ホルミル、０−二トロフＴニルスルフェニル、ジフェニ
ルホスフィノチオイル基等が挙げられる。

ヒスチジンのイミノ基の４’Ａ：　Ｆｉｆ２　’Ａ祐し
ては、例えばＴｏｓ，　Ｂｚｌ、ベンジルオニ１ニジカ
ルボニルチル基等が挙げられる。

セリン及びスレオニンの水ｆｉ％　ｉ，ｉの保護１とし
ては、例えば、Ｂｚｌ、ｔｅｒｔ−ブヂル、アセチル、
テ１〜う１＝ドロピラニル丼等が苧げられる。

チロシンの水ＭＭの保Ｈ＞！としては、例えばＢｚｌ、
ＣＩ２’−Ｂｚｌ、ベンジルオキシカルボニル、アレチ
ル、Ｔ　ｏｓ基等が挙げられる。

リジンのアミノ基の保Ｆ＋Ｉ　ＵＧとしては、例えばベ
ンジルオキシカルボニル、ＣＩ　２−３ｚｌ、アルデヒ
ド、　Ｂｏｃ，　−ｒＯｓ基等が挙げられる。

グルタミン酸及びアスパラギンｉ々のカルボキシル基の
保護基としては、例えばベンジルアルコール、メタノー
ル、エタノール、　ｔｅｒｔ−ブタノール等とのＴステ
ル化により行なわれる。

カルボキシル基の活性化されたものとしては、例えば対
応する酸クロライド、Ｍ無水物又は）【１合酸無水物、
アジド、活性エステル（ペンタクロロフェノール、ｐ−
二１〜口フェノール、Ｎ−ヒドロキシサクシンイミド、
Ｎ−ヒドロキシベンズトリアゾール、Ｎ−ヒ（ζロキシ
ー５−ノルボルネンー２．３−ジカルボキシイミド等と
のエステル）等が挙げられる。尚ペプチド結合形成反応
は、縮合剤例えばジシクロへキシルカルボジイミド、カ
ルボジイミダゾール等のカルボジイミド試鋳やテ１−ラ
エチルビ口ボスフィン等の存在下に実施し得る場合もあ
る。

以下、本発明ペプチドの製造の一例につき反応行程式を
挙げて具体的ｔこ説明する、。

（反応行程式−１〕 Ａ−Ｌ−ｅｕ−Ｏｆ−ｌ　　　　　（−１’　）Ａ−Ｌ
−ｅｕ−Ｒ’　　　　　　　　　　　　　　（ｏ）↓ Ｈ−１ａｌｌ−ＪＲ’　　　　　（ハ）↓　Ａ−Ｖａｌ
−Ｏｆ−１（ニ） Ａ−Ｖａｔ−Ｌｅｕｌ：（＋　　　（ホ）Ａ　　　Ｔｙ
ｒ　　Ｖａｌ−Ｇ　１ｕ−Ｐ　ｒＯ−Ｔ　１１ｒ７　Ａ
　Ｉａ−ｐ　「０−Ｇｌｎ−Ｖａｌ−１ｅｕ−Ｒ’　　
　　（へ）↓ １−１−　Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ｇ　ｌｕ−Ｐｒｏ−１−ｈ
ｒ−Ａ　ｌａ−ｐｒ。

〜　Ｇｌｎ　−Ｖａｔ−Ｌｅｕ−ＯＨ（１）（式中Ａは
アミノ基の保護基及びＲ１は不溶性担体を示す。〕 、１：記において、Ａの好ましいものとしてはＢｏｃ。

ベンジルオキシカルボニル ジルオキシカルボニル基等を、またＲ　Ｉの好ましいも
のとしてはクロロメチル化ポリスチレン等をそれぞれ例
示することができる。

また、各反応において、使用でるアミノ酸が反応に関与
しない側鎖官能基を右する場合は、常法どうり、前述し
た保護基にＪ、す、保護され、これは不溶性担体１丈１
のＩＩ＋２　！．［と同時に）１（（離される。

」−記方法にｃ１３いで、アミノ酸（イ）と不溶１４川
体Ｒ１との反応は、常法に従いアミノ酸（イ）の反応性
カルボキシルＬ（を利用してこれをＲ１と結合させるこ
とにＪ：つて行ｔ１われる。該反応は例えばりＤＯＯｆ
ル化ポリスチレンを使用する場合は適当な溶媒中、例え
ば１ヘリエチルアミン、カリウムｔｅｒｔ−ブ［−キシ
ド、炭６９セシウム、水酸化１′！シウム等の塩基性化
合物の存在下に？−■なわれる。溶媒どしては例えばジ
メチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、ピリジン
、クロロホルム、ジオキサン、ジクロロメタン、テ１−
ラヒド［コツラン、Ｎ−メチルピロリドン、ｌ＼キ′Ｉ
Ｊ−メチルリン酸１〜リアミド等又はこれらのｉ１２合
ｒＦＩ　’）ｉ等を例示覆ることができる。上記反応は
、通常Ｏ〜８５℃、好Ｊニジくは２５〜８０℃程度、数
分〜２４時間程瓜１終了する。アミノらすと不溶性担体
どの使用割合は通常後着１当吊に対してがｉ者を過剰量
、一般に１〜３倍当量とするのがよい。

かくして得られる一般式（口）の同相化アミノ酸のＣ！
．マφ［Ａの脱出１１反応（：１、常法にＪ：り行なわ
れる。該方法としては例えばパラジウム、パラジウム黒
等の触媒を用いる水素添加、液体アンモニア中金屈ナト
リウムによる還元等の還元的方法、１−リフルオロ酢酸
、塩化水素ｆｉ（ｔ、弗化水素、メタンスルホン酸、臭
化水素１ｊり等の強酸にＪζるアシドリシス等を例示す
ることができる。上記触媒を用いる水素添加は、例えば
水素圧１気圧、０〜４０°Ｃにて行ない１ηる。触媒の
使用量どしては通常１００ｍｏ〜１ｇ程痕とするのがＪ
：＜、一般に１〜４８詩［＋ｉ１程度で反応は終了（る
。Ｊ：だ上記アシドリシスは、無？８媒下、通常Ｏ〜３
０°Ｃ程度、好ましくはＯ〜２０℃程ｒσで約１５分〜
１時間程度を要して行イ１ねれる。酸の使用量は１京利
化合物に対し通’Ｍ　５〜１０倍椿稈度とするのがよい
。該アシドリシスにおいて保護基Ａのみを１１１２　１
ｉ，Ｉｆする場合は酸としてトリフルオ［１酢６を又は
塩化水索鹸を使用するのが好ましい。更に上記液体アン
モニア中金属す１〜リウムによる還元は、反応液ｊ）＜
パーマネジ１〜ブルーに３０秒〜１０分間程庶里色して
いるような量の金属す１ヘリウムを用い、通常−４０℃
〜−７０′Ｃ程度にて行ない得る。

次いで（９られる一般式（ハ）の固相化アミノ酸とアミ
ノＶ、＜二）（もしくはそのカルボキシルの活性化され
たもの）との反応は、溶媒の存在下に行なわれる。該溶
媒としでは、ペプチド縮合Ｌ（応に慣用される公知の各
種のもの、例えば無水ジメチルホルムアミド、ジメチル
スルホキシド〈ＤＭＳＯ）　、ピリジン、クロロホルｌ
＼、ジオキリ゛ン、ジクロロメタン、テｌ〜うしドロフ
ラン、酢酸］ーチル、Ｎ−メチルピロリドン、ヘキザメ
チルリン酸トリアミド或いはこれらの混合溶媒等を例示
づることができる。また該反応は、必要に応じて、通常
のペプチド結合形成反応に用いられる試共、例えばＮ　
　、Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１）ＣＧ）
、Ｎ−エチル−Ｎ′−ジメチルアミノカルボジイミト、
１−エチル−３−ジイソプロピルアミノカルボジイミド
、１−シクロへキシル−３−（２〜モルポリニル−４　
−　Ｉチル）カルボジイミド等のカルボジイミド類等の
１税水綜合剤の存在下に行なうことができる。アミノ酸
（ハ）とアミノ酸（二）との使用割合としては、１・３
に限定はないが、通常前者に対して１凍者を等モル阜〜
１０侶モル闇、好ましくｌ：１等］ニル１υ〜５倍モル
量とするのかよい。脱水縮合ハ１１の使用ｉｔｂ特に限
定はなく、通常アミノ酸（二）に対して、好ましくは等
モルＨ４程度使用される。反応温度はペプチド結合形成
反応に使用される通常の範囲、一般には約＝４０℃〜約
６　０　’Ｃ、好Ｊ、しくは約−２　０　’Ｃ〜約４０
゛Ｃの範囲から適宜選択される。反応時間は一般に数分
〜３　０　１１ｉ間程）哀とされる３、かくして得られ
る一般式（ホ〉のペプチドは、上記と同様に保護基Ａの
１１１１凹（後、一般式（１）で表わされるアミノ酸配
列に従い、Ａ−Ｇｌｎ−ＯＨ、Ａ−Ｐｒｏ−Ｏｆ−ｌ、
Ａ−Ａｌａ−０１−１、Ａ−Ｔｔ＋ｒ−０１４、Ａ−Ｐ
ｒｏ−ＯＮ、Ａ−Ｇｉｌｌ−０１−１、八−ｖａｌ−Ｏ
ｆ−１、Ａ−Ｔｏｙｒ−Ｏｆ−１の各アミノ酸もしくは
そのカルボキシ基の活性化されたものと順次縮合反応さ
せることにより行なわれ、斯くして一般式（へ）で表わ
されるペプチドに誕導することができる。これら縮合ｌ
シ応及び伍÷護基Ａの脱離反応は、それぞれｉｉｉ＋　
配した方法と同様にして行なわれる。

また得られるペプチド（へ〉は、同様にして保護基Δの
脱１ｉ．ｆｔ、アミノ酸の側鎖官能基の保’ｉ（　Ｍの
説蘭及び不溶性１４１体Ｒ１の１１夕ＨＡにより、式（
１）で表わされるペプチドに誘う９される。ここで側鎖
官能基の保護基及び不溶性（１体［＜１の脱頭反応は、
保護２１ＡのＩＩｔＪ　ＤＡ反応と同（１；に行ない得
、この場合酸として弗化水素又は臭化水ｙ（酸を用いる
のが好ましい。尚、上記方法において使用される各アミ
ノ酸は、いずれも公知の市販品でよい。

以上のようにして製造された式（１）の本発明ペプチド
は、反応混合物からペプチドの分離手段例えば抽出、分
配、カラムクロマ１−グラフィー等により単１！ｉｌｌ
精製される。

また、一般式（２）及び（３）で表わされる各ペプチド
も、上記に準じて９７造される。

かくして得られる本発明のペプチドは、これに１２、５
７、＋３−１）等のＪｊＭ胴性物性物バーオキシダーゼ
（ＰＯＸ）　、キモトリプシノーゲン、プロ力ルポキシ
ペブチダーゼ、グリセロアルデヒド−３−リン酸１■（
水索酵累、アミラーゼ、ホスポリラーゼ、Ｄ　−　Ｎａ
ｓｅ　、　ｐ　−　Ｎａｒｅ　、βーガラク１〜シダー
Ｕ１グル］ース〜６−７オスフエー１〜デバイドロゲナ
ーゼ、−Ａルニチンデカルボキシラーゼ等の各秤酵索試
共等を導入することにより、ラジオイムノアッセイ（Ｒ
ＩＡ）法又はエンザイムイｌ、ノアツセイ（ＥＩＡ＞法
において用いられる４ａＥＪ＆抗ＢＪ！（として利用で
きる。上記放射性物質の導入は、通常の方法により実施
できる。例えば放射性ヨードは、クロラミン−１を用い
る酸化的ヨード化法Ｃ．Ｗ．Ｍ．　　　ト１　　ｕｎｔ
ｅｒ　　ａｎ（ｌ　　　Ｆ　、　　　Ｃ　　、　　　Ｇ
　　ｒｅｅｎｗｏｏｔｌ　　；Ｎａｔｕｒｅ．１　９４
　　、４９５　（　１　９６２）　、ＢＩｏｃｌ＋ｅｍ
Ｊ．色艶．１４４　　、（１９６３）参照）等により行
なわれ、８）索試薬のう９人は、通常のカップリング法
例えばエルランガ−（　１３　、　Ｆ　、　Ｆ　ｒｌａ
ｎｇｅｒ　）らの方法（Ａ　ｃｔａ、　Ｅ　ｎｄｏｃｒ
ｉｎｏｌ、ｓ　ｕｐｐｌ、、１６８　　。

２０６　（１９７２））及び力ロール（Ｍ、ＨｌＫａｒ
ｏｌ）らの方法（ｐ　ｒｏｃ、Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、Ｓ
ｃｉ、。

ＵＳＡ、、５７　’、７１３　（１９６７））等の公知
の方法にＪ二つて行なうことができる。

ノス下、本発明のペプチドをハブテンとして利用した抗
原の製造方法につき詳述Ｊる。

上記抗原は本発明ペプチドをハブテンとし、これをハブ
テン−担体結合試薬の存在下に、適当な担体と反応させ
ることにより製造される。上記においてハブテンに結合
される１■体としては、通常抗ＩＩノ（の作成に当り慣
用される高分子の天然乙しくは合成の蛋白質を広（使用
でざる。該１１体としては例えば馬血清アルブミン、牛
血漬アルブミン、つ゛リーギ面清アルブミン、人血清ア
ルブミン、ヒツジ血清アルブミン等の動物の血清ノフル
ブミン汀（：馬血清グロブリン、生血清グロブリン、ウ
リ：１゛血泊グロブリン、人血清グロブリン、ヒツジ血
清グロブリン等のリノ物の血清グロブリン類：馬チログ
ロブリン、牛チログロブリン、ウリ°ギチ旧グロブリン
、人チログロブリン、ヒツジチログロブリン等の動物の
チログロブリン類；馬ヘモグロブリン、牛ヘモグロブリ
ン、ウザギヘモグロプリン、人ヘモグロブリン、ヒツジ
ヘモグロブリン等の動物のヘモグロブリン知：キーホー
ルリンベットヘモシアニン（Ｋ　Ｌ　ｌ’ｌ　）等の動
物のヘモシアニン類：回虫ｊ：り抽出された蛋白質（ア
スカ−リス抽出物、特開ｎｑ５６−’ｔ６４’ｚｑ公報
、Ｊ　、Ｉ　１１１ｍ１Ｉｎ、。

１１１．２６０〜２６８　（１９７３）、Ｊ。

Ｉ　ｍｍｕｎ、、　１２２　．３０２〜３０８　（１９
７９）、Ｊ、Ｉｍｍｕｎ−，９８，８９３〜９００　（
１９６７）及びＡｍ、Ｊ、　Ｐｌ＋ｙｓｉｏ１．、１　
江、ｂ　７５〜５７８（１９６０）に記載されたもの又
はこれらを更にｔｉ製したもの）；ポリリジン、ポリグ
ルタミン酸、リシン−グルタミン酸共重合体、リジン又
はＡルニチンを含む共重合体等を挙げることができる。

ハブテン−用体結合試バｂとしては、通常抗原の作成に
当り慣用されているものを広く使用できる。

具体的にはチ［］シン、ヒスチジン、トリプトファンを
架橋結合さ「る、例えはビスジアゾタイズドベンジジン
（１３１）８）、ビスジアゾタイズド〜３゜３′−ジア
ニシジン（ＢＤｒ））等のジアゾうラム化合物；アミノ
基とアミノ基とを架橋結合させる、例えばグリオキリ“
−ル、マロンジアルデヒド、ゲルタールアルデヒド、ス
クシンアルデヒド、アシボアルデヒド等の脂肪族ジアル
デヒド類；チオールＭとチオールＵとを架イｎ結合さゼ
゛る、例えばＮ、Ｎ’−ｏ−フェニレンジマレイミド、
Ｎ　　、Ｎ’−１１−フェニレンジマレイミド等のシマ
レイミド化合物；アミノ基とチオール！１↓とを架橋結
合させる、例えばメタマレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒド
ロキシスクシンイミドエステル、４−（マレイミドメチ
ル）−シクロヘキサン−１−カルボキシル−Ｎ’　−ヒ
ドロキシスクシンイミドエステル等のマレイミドカルボ
キシル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル類；ア
ミノ基とカルボキシルとを７ミド結合させる通常のペプ
チド結合形成ｌｉｔ応に用いられるＲ＋１．　Ｊｌｉ　
、例えばＮ　　、Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド
、Ｎ−エチル−Ｎ′−ジメチルアミノカルボジイミド、
１−Ｊチル−３−ジインプＤごルアミノカルボジイミド
、１−シクロヘキシル−３−（２−モルポリニル カルボジイミド等のカルボジイミド類等の脱水縮合剤等
を挙げることかできる。また上記ハブテン−担体結合試
薬としては、ｐ−ジアゾニウムフェニル酢酸等のジアゾ
ニウムアリ−“−ルヵルボン酸類と通常のペプチド結合
形成Ｉヅ応試ａｔｉ、例えば上記脱水縮合剤とを組合け
だものも使用可能である。

−Ｖ記抗原の製造反応は、例えば水溶液もしくはＩｌ＋
−１７〜１ｏの通常のｕｊ　ｊｉｊ液中、好ましくはｌ
）Ｈ８〜９の緩函液中、０〜４０”Ｃ、好ましくは至瀉
イ・１近で行なわれる。該反応は通ｈ（約１〜２４時間
、りγＪ、しくは３〜５詩１．’ｆＪて゛完ネＡ覆る。

」二記にＪ５いて用いられる代表的超ｋｒ　８２として
は、次のものを例示できる。

０、２Ｎ水酸化ブートリウム−０．２Ｍボウバト０、２
ＭＪｊＡ化カリウム緩旨）１２、０、２Ｍ炭酸すトリウ
ノ＼−０．２〜１ホウリド０、２Ｍ塩化カリウムｇ．’
Ａ　（Ｉ！ｌ液、０、０５Ｍ四ホウ酸すｊ・リウムー０
．２Ｍホウ酸−０．０５Ｍ塩化ナトリウム超衝液、０．
１ＭＩＪン酸二水累カリウムー０．０５Ｍ四つ酸すトリ
ウムＭ衝）ｊ々 上記においてハプテン、ハブテン−担体結合試桑及び担
体の使用割合は、適宜に決定できるが、通常ハプテンに
対して１！′］体を１〜６倍重量稈Ｆす、りＩましくは
１〜ｂ　（＝＝が稈瓜、及びハブテン−Ｊ１重結合試薬
を５〜１０倍モル稈１印用いるのがよい。

上記反応にＪ、リハプテンー１１１体ｌＩ！ｉ合試薬を
仲介させて４０体とハプテンとが結合したペプヂドー担
体複合体からなる所望の坑口；先／Ｊ（Ｉｆゾ得される
。

反応終了後１！’ｙられる抗原は常法に従い、例えば透
析法、ゲル濾過法、分別沈澱法等により容易に単離精製
できる。

斯くして得られる抗原は、通常蛋白質１モルに対してペ
プチドが平均５〜６０モル結合したｂのであり、いずれ
も引き続δ該抗鮨に対して特Ｖｄ　（生の高い抗体の製
造を可（１ｕとＪｏるものである。

該抗原による抗体の製造は、上記抗Ｄｏｔを１すｌ乳動
物に投与し、生体内に所望抗体を産生させ、これを採取
することににり実施される。

抗体の製造に供せられる−（ｌ乳動物としては、特に制
限はないが、通常ウサギやモルモットを用いるのが好ま
しい。抗体の産生に当っては、上記により１１１られる
抗原の所定ｆＵＪを生理食１′Ｍ水で適当濃度に希釈し
、フロイントの補助液（Ｃ０ｎｌｐｌｅｔｅ１：ｒｅｕ
ｎｄ　’　ｓ　　Ａ　ｊｕｖａｎｔ）と混合し一部（’
１濁液を調整し、これを吐乳動物体に投与ずればよい。

例えばつ′リーギに上記懸濁液を皮肉ｔｌ！ｊ’Ｊ（抗
原の吊として０．５〜５［］／回）し、以後２週間毎に
２〜１０ケ月、好ましくは４〜６り月間投与し免疫化さ
°ければよい。抗体の採取は、上記懸濁液の最終投与の
１〜２週聞軽過後、免ｆ２化された動物から採血し、こ
れを遠心分Ｈ１後、面端を分離することにＪ、り行なわ
れる。」−記によれば、用いる抗原に対して侵れた特異
性を右する抗体を収得でき、これはＲＩＡ法、ＩＥＩＡ
法等に利用してヒト白血病ウィルスｒ！ｌ連饋白の定量
に用い得る。

以下本発明を更に詳しくん２明づるため、一般式（１）
、（２）及び（３）で表わされる本発明ペプチドの製造
例及びこれにＪ：り得られるペプチドからの抗原及び抗
体の製造例を挙げるが、本発明はこれらに限定されるも
のではない。

尚、各製造例におりるＲｆ値はシリカゲル−Ｌの薄層ク
ロマトグラフィーにて下記混合溶媒を用いて測定したも
のである。

Ｒｆｌ・・・ｎ−ブタノール−酢酸−水（４：’Ｌ：５
）Ｒｔ２・・・ｎ−ブタノール−酢酸−ビリジン−水（
１５：３：１０：、１２） 〈ペプチドの製造〉 製造例　１ ■　カリウム　ｔｅｒｔ−ブ１ヘキシド５．８８ミリ当
量のＤＭＳＯＦｆＪ８Ｊｉ　１４　ｍｌにＢｏｃ　−Ｉ
−ｅｕ　−Ｏｆ−１１，５４０を溶が１し、クロロ゛メ
チル化ポリスチレン樹脂（財団法人蛋白質研究奨励金）
５Ｑを加えて、８０゛Ｃで３０分反応させる。樹脂をＤ
ＭＳｏ。

５０％酢酸／クロロホルム、塩化メチレンの順に、充分
に洗浄し、減圧乾燥して５．０６ｏのＢｏｃ−しｅト］
１脂を得る。

一部を加水分解後アミノ酸分析を行なった結果アミ７１
１０．３’Ｏｍｍｏｌ／ｇ樹脂であった。

■　上記■で得た３　０Ｃ−１０１１−樹脂２．１７（
ｌをクロロホルム３（Ｍ＋ｌで３回洗浄後、５０％トリ
フルオ日酢酸（ＴＦＡ）のり［］１コ小ルム溶液３０ｍ
１に加え、至温で２０分間反応させる。樹脂をクロロボ
ルム３０…１で１回、塩化メチレン３０　ｍ’ｌで５回
、１０％トリエヂルアミンの塩化メチレン溶液３Ｑｍｌ
で３回、次いで塩化メチレン３０ｍ１で６回それぞれ洗
浄して１−（−Ｌ　ｅｕ−樹脂を得る。

Ｂｏａ−Ｖａｔ−ＯＨの０．３５ｏを塩化メチレンに溶
かした溶！２５ｍ１に上記Ｈ−１ｅｕ−樹脂を加え、次
いでＤＣＣの０．３３ｐを塩化メチレンに溶かした溶液
５ｍｌを加え空温で２時間反応させる。

樹脂を塩化メチレン３０ｍ１で６回洗浄後、３ｏｃ−Ｖ
ａｌ−ＯＨの０．３５（Ｊ及び１−ヒドロキシベンゾト
リアゾール０．５５（＋の塩化メチレン溶１２５ｍ１に
加え、次いでＯＣＣの０．３３ｇを塩化メチレンに溶か
した溶液５ｍｌを加えて再度同様に反応さぼる（二匝カ
ップリング法）。樹脂を塩化メチレンで充分に洗浄して
Ｂ　ｏｃ−ｙ　ａｔ　−１ｅｕ−樹脂を得る。

■　上記■とｌｒｉ］様にして、１３　ｏｃ　−Ｖ　ａ
ｌ　−１−ｅｕ−樹脂のＩｌｌ　Ｂ　ｏｃ化を行ない、
次いで下記アミノ酸を順次縮合及びＩＩｆ２　Ｂ　ｏｃ
反応に付１゜Ｂｏｃ−Ｇｌｎ−ＯＮＰ　　　　　　０．
５９゜３ｏｃ−ｐｒｏ−ＯＮ　　　　　　　０．３５０
Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＮ　　　　　　　０．３１　（ＪＢ
ｏｃ−ＴＩ＋ｒ（ｔｌｚｌ）　−０１１０；　５０（Ｉ
Ｂｏｃ−Ｐｒｏ−ＯＮ　　　　　　　０．３５（ＩＢｏ
ｃ−Ｇｌｕ（０１３２１）　　ＯＮ　　Ｏ，！′）５１
］Ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｏｆ−１０，３５０ ［３ｏｃ−Ｔｙｒ＜Ｃ１２−１３２１）　−ＯＮ０．７
１ｇ 斯クシてト１−Ｔｙｒ（Ｃｌ　２−ＢＺＩ）　−Ｖａｌ
　−ＧＩＬＩ（ＯＢＺＩ）　−Ｐｒｏ−ＴＩ＋ｒ（［３
ｚｌ）　−Ａｌａ　−ｐ　ｒｏ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｖ　ａ
ｌ７　Ｌ　ｅｕ−樹脂の２゜６５（ｌを得る。このうち
１．３５０をアニソール３ｎ＋Ｉ及び弗化水ＦＡ３０ｍ
ｌに溶かし、−２０℃で３０分、次いで０℃で３０分反
応させた後、弗化水素を留去し、残漬を１０％酢酸にて
抽出し、エーテルにて洗浄する。水層を凍結乾燥し、次
いでセファデックスＧ−１０（ファルマシアネ［、溶出
液１０％酢酸）にＪ：るゲル濾過、次いでセファデック
スＧ−２５（ファルマシノ′社、溶出液Ｒｕ　ＯＨ：　
Ａｃ　０ｆ−１：Ｈ２０＝４　：　１　：　５）による
パーティションクロマトグラフィ、史にＬ　ｌ−１−２
０＜ファルマシア社、溶出液、１　／　１０００　Ｎ　
−ＨＣＩ　）にて精製して、ト１−Ｔ’ｙｒ−Ｖａｔ　
　−Ｇ　１ｕ−ｐｒｏ−４’ｌ＋ｒ−Ａｌａ　−Ｐｒ。

−Ｇ　Ｉｎ　−Ｖ　ａｌ−Ｌ　ｅｕ　−ＯＩ−ｌを１１
７る。以下このペプチドを「ペプチドＡ」と呼ぶ。

Ｒｆ値： ＋＜ｒ　＋　−ｏ、　１２　　　［２＝Ｏ−５８元素分
析値： （Ｃ５２１−１ｓ　＋　ＯＨｅ　Ｎ＋　＋　　・７Ｈ２
０として）Ｃ（％　）　　　　ト１　　（％　）　　　
　　　　Ｎ　　（％　）理論値　　５０．２７　７．７
１　１２．４０分析値　　５０．４１　７．８３　１２
．４１製造例　２ 製造例１の■と同様にして得た３　ｏｃ　−Ｖ　ａｔ　
−ＪｆｌＪ脂（０，２９６ｍｍｏｌ／（１４ａｌｆｌｔ
ｊ）　１　、７００に、製造例１の■及び■ど同ね；に
して、以下の各アミノ酸をに１１重縮合及びｌｌ１Ｊ　
Ｂ　ｏｃ化反応さける。

１３ｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）　−ＯＮ　　　　０．４
３ＣＩＲｏｃ−Ｇｌｙ−ＯｆＩ　　　　　　　　　Ｏ，
’２２０１３ｏｃ−Ｇｌｙ−Ｏｌ」０．２２０ Ｂｏｃ　−ｌ１ｅ−ＯＨ（１／２　　ト＋２　　０）　
　　０．　　３．　１　　（ＪＢｏｃ−８Ｏｒ（１３ｚ
ｌ）　−ＯＨ０，３８゜［３０Ｃ−Δ５ｎ−ＯＮ　Ｐ　
　　　　　　　Ｏ，４６０Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）
−０’Ｈ０，５３（ＩＢ　ｏｃ　−Ｐ　ｒｏ−ＯＨ０、
２８ａ１’３ｏｃ−１−１ｉｓ（Ｔｏｓ＞　−０ｆ−Ｉ
　　　　　Ｏ，５２ＣＩＢｏｃ−Ｐｒｏ−０１１Ｏ，２
８（］ ］８００−１リー０ｔＩ　１／２１１２０）Ｑ、３１’
１期＜シて、ト１−１１ｅ−ｐｒｏ−ｆｉｔｓ（Ｔｏｓ
）　−Ｐｒｏ　−ＬＶＳ＜ＣＩ　−Ｚ　）　−Ａｓｎ−
８ｅｒ（Ｂｚｌ）　−Ｉ　ｌｅ　　ＧＩＶ　　ＧＩＶ　
　ＧＩＬＩ（ＯＢｚｌ）　−Ｖａｔ−樹脂２．２５ｏを
得る。このうち０．８１１３を弗化水素１５１１１１及
びアニソール１．５ｎｌ＋と混合し、−２０’Ｃで３０
分間次いで０℃で３０分間反応さ・せ、過剰の弗化水素
を留去し、１０％酢酸にて抽出し、エーテルにて洗浄後
、凍結乾燥する。次いでセファデックスＧ２５（１Ｍ酢
酸）によるゲル濾過、及びＣＭ−セルロース２３（ワッ
トマン社、０．０４ＭＡｃ　ＯＮ＋−１４、ｐ　Ｌｌ＝
７゜２）を用いて精製して、Ｉ−１−Ｉ　Ｉｅ　−１）
ｒｏ−ＩＩ　１ｓ−Ｐ　ｒｏ　−１−ｙ３−ＡＳｎ−３
ｅｒ−１１ｅ−Ｇｌｙ　　　Ｇｌｙ　　　Ｇ　巨１−Ｖ
ａｔ−０１−ｌをつ婬る。以下これを「ペプチドＢ１ど
呼ぶ。

Ｒｆ値： Ｒｆ　Ｉ　＝０．０１　　　Ｒｆ　２−０．４２元水分
析値： （Ｃ５ｓ　ｔ−１ｎ　ｏ　ＯＨ７Ｎ＋　ｅ　　・８１−
Ｌ　Ｏとして）Ｃ（％）Ｉ−１（％）　　　Ｎ（％） 理論値　　４７．４７　７．６８　１６．１０分析値　
　４．７−３９　７．７１　１５．９８製造例　３ 前記製造例２で得た、ｌ−１−１１ｅ　−ｐ　ｒｏ　−
１１１ｓ（ＴＯ８）　−Ｐｒｏ　−ＬＶＳ（ＣＩ　−Ｚ
　）　−Ａｓｎ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）　　Ｉ　１ｅ＝ＧＩ
ｙ　　ＧＩＶ　　Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−Ｖａｌ−樹脂の
０．７７９に、Ｂｏｃ−−ｒ’ｙｒ（ＣＩ　２−Ｌ３　
ｚｌ＞　−０ｌ＝ｌ、０．１９ｏを前記製造例１−■ど
同ね；にして二車カップリング反応さける。次いで１゛
「Ａで３　ｏｃｌ１４をｌｌＩ’Ｊ　ｉｌｌ　ｔ、で、
１−１−丁ｙｒ（Ｃ１２−Ｒ／、ｌ）’　−１ｌｅ　−
Ｐ　　ｒｏ−ト１ｉｓ（Ｔｏｓ）　　−ｐｒｏ　−１，
１Ｓ（ＣＩ　−Ｚ）　−Ａｓｎ−８ａｒ（Ｂｚｌ）　−
１ｌｅ　−ＧＩＶ　　ＧＩＶ　　（３１１１（ＯＩＥＩ
ＺＩ）　　ｖａｌ　　４ｔｌ脂の０、ε３２０をＪ（ｓ
た。これを弗化水素１５ｍ１及びアニソール１．５ｍｌ
とｆｌｆｆ合し、−２０’Ｃで３０分間−１次いで１０
℃で３０分間反応ざゼ、過剰の弗化水素を留去し、１０
％酢酸にて抽出し、エーテルにて洗ンｈ後、凍結乾燥す
る１２次いでセファデックスＧ−２５（１Ｍ酢酸）によ
るゲル濾過、及びＣＭ−レル］コース２３　（０，０４
ＭΔｃＯＮＮ、。

ｐｌ（−７，２）を用いて精製しで、＋１−　Ｔ’　Ｖ
ｒ−ｒ　ｌｃ　−ｌ：）ｒｏ　−Ｌｌ　ｉｓ　−１１ｒ
ｏ　−１ｙｓ−Ａｓｎ−３ｅｒ　−１１ｅ−Ｇｌｙ　　
Ｇｌｙ　　Ｇｌｔ＋−Ｖａｔ−ｏｌ−１を得る。以下こ
れを「ペプチドＣ」と呼ぶ。

Ｒｆ値： １’（ｆ　’　＝０．０２１（ｆ　”　−０，４７元素
分析値： （Ｃｅ　４Ｈａ　ｏ　Ｏ＋　ｏ　Ｎ＋　７　・８Ｈ２０
として）Ｃ（％）１（（％）　　　　　Ｎ（％）３！！
！諭値　　　７１９．４４　　７．４６’　　　１５．
３２分析値　　４９．４３　７．５６　１５．０６製造
例　４ 製造例１−■と同様にして（３ｏｃ　−１ｅｕ−樹脂を
Ｈ３Ｂし、その２．１７ｏに、１１ｉＪ記製）前例１−
■及び■と同様にして以下のアミノ酸を順次二重カップ
リング反応及び脱Ｂｏｃ化反１心さける。尚Ｔｒｐ含右
ペプチドの説［３ｏＣ，化反応は、−Ｌタンジチオール
の存在下に行なった。

Ｂｏｃ−Ｖａｔ−ＯＨ０，３５０ Ｂｏｃ−Ｌｙ’５（ＣＩ　　−１＞　−〇ｌ−１０，６
６０Ｂｏｃ−１−ｈｒ（Ｂｚｌ）　−０ｆ−１０，５０
０Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（ＣＩ　−，７）’−０ｆ−１　　０
．．６６（ＩＢＯＧ−ＡＳＩ１（ＯＢＺＩ＞　−０１ｌ
　　　　０．５２ｇＢｏａ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−０ｆ
−Ｉ　　　Ｏ，６（３０８ｏｃ−Ｐｒｏ−Ｏｆ−１０，
、３５（ＩＢｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−〇Ｎ　　　　
　０．５０（＋８ｏｃ　−Ｔｒｐ−Ｏｆ−１０，４９゜
Ｂｏｃ−ＴｈｒＮ３ｚｌ）−０’ｌｌ　　　　　　　０
．　５０Ｑ１１１’ｉ＜　ＬＴＨ−Ｔｌｌｒ（Ｂｚｌ）
　−ＴｒＤ−Ｔｂｒ（Ｂｚｌ）−ｌ’−’ｒｏ−Ｌ−ｙ
ｓ（ＣＩ　　−Ｚ）　　−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−１−Ｖ
Ｓ（ＣＩ　　−Ｚ）　−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−１−ｙｓ
（ＣＩ　　−Ｚ　）　−Ｖａｌ　−１，ｅｕ−樹脂のご
３．０１０を得る。

その１．１０！］を弗化水素１５ｎ＋ｌ、アニソール１
．５ｍｌ及びエタンジチオール０．６ｍ＋に溶かし、−
２０（：：で３０分間、次いでＯｏｏで３０分間反応さ
ｕ１過剰の弗化水素を留去し、１０％酢酸にて抽出し、
エーテルにて洗浄後、凍結乾燥する。次いでセファデッ
クスＧ　−２ｂ　（Ｉ　Ｍｌｌｌ￥酸）でゲル濾過し更
にＣＭ−セルロース２３（０，０５ＭＡ　ＣＯＮ　Ｈｔ
、Ｄ　ｌ−ｉ　−７、２）及び１．−１−１−２０（１
０−”ＮＨＣ＋）を用いて１Ｍ　”ＩＪして、Ｈ−Ｔ　
ｈｒ−Ｔ’ｒｐ−Ｔ１１ｒ−ＰｒＯ−Ｉ　ＶＳ−ＡＳＩ
）−Ｌｙｓ−Ｔｌｌｒ　−１−ｙｓ　−Ｖ　ａｌ−１ｅ
ｕ　−ＯＨを１ηるｕＩＸ下これを「ペプチドＤ」と呼
ぶ。

Ｒｆ値： ［＋　＝−０，０１Ｒｆ　２　＝０．４４元素分析値： （Ｃｓ＋ｌｉ＋ｏ＋Ｏ＋　　７　Ｎ＋　　５　・　１７
Ｈ２（”））Ｃ（％）　　［１（％）　　　　　Ｎ（％
）理論値　　４５．１５　８．３９　１２．９５分析値
　　４５．１２　８．６５　１２．８９製造例　５ 前記製造例４で得たＨ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｔｒｐ　
−Ｔｂｒ（Ｂｚｌ）−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ）−Ａ
ｓｐ（ＯＢｚｌ）　−Ｌｙｓ（ＣＩ　−Ｚ）　−１−ｈ
ｒ（１３ｚｌ）−１ｙｓ（ＣＩ　−Ｚ）　−Ｖａｌ−１
−ｅｕ−樹脂の０．５５ｏに、Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃｌ　
２−Ｂ、ＺＩ）　−０１−１の０．１３ｇを二重カップ
リング反応させる。

次いでエタンジチオールの存在下にＴ　Ｅ　Ａで１３６
ｃ基を脱離して、ト１−Ｔｙｒ（ＣＩ　２−ＢＺＩ＞　
−Ｔｒｐ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）　−Ｐｒｏ−Ｌｙｓ（ＣＩ
　−、Ｚ）　−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）−Ｌｙｓ（ＣＩ−Ｚ
）−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）−Ｌｙｓ（ＣＩ　−Ｚ）　−Ｖａ
ｌ−ｌ−ｅｕ−樹１１ｆ７（７）０．５９９を得た。

これを弗化水素１５ｍ１、アニソール１−５ｍ１及びエ
タンジチオール０．８ｍｌに溶かし、−２０’Ｃ。

で３０分間、次いで０℃で３０分間反応させ、過剰の弗
化水素を留去し、１０％酎酸耐て抽出し、エーテルにて
洗浄後、凍結乾燥する。次いでＣＭ−セルロース２３　
（０，０５ＭＡＣ０ＮＨ４，Ｄ１１＝７．２）及びｌ−
１−１−２０（１０−’Ｎ＋−１１）を用いて精製して
、Ｌｌ−１−ｙｒ　−１’　ｈｒ−Ｔ　ｒｐ　−Ｔ　ｈ
ｒ−Ｐ　ｒＯ−Ｌ　ＶＳ−Ａ　５ｌｌ−Ｌ　ＶＳ−１−
旧゛−Ｌ　ＶＳ−Ｖ　ａｌ−ｌ−ｅｕ　−Ｏｔｌを得る
。以下これを１ペプチドＥ」と呼ぶ。

１（［値： ＲＭ＝０．０１　　　Ｒｒ２−０．４７元素分析個： ＜Ｃ７ｏＨ＋　　１　ｏＯ＋　　ｏ　Ｎ＋ｅ　　　・　
１７Ｈ２０）Ｃ（９６）　　１−ｌ（％）　　　Ｎ（％
）理陥１ｉ１’ｉ　　　４７．０８　８．１３　１．２
．５５分析値　　４６．８９　８．３４　１２．５４〈
抗原の製造〉 製造例　１ ペプチドの製造例１でｌ↑たペプチドＡの５ｍ１）及び
Ｋ　Ｌ　ｌ−１（シグマ社）１２ｍｇを０．０５Ｍリン
酸塩緩Ｗ；ｉ液（１１１−１＝　７．０＞　３．０ｍｌ
に加え、この溶液に２９６グルタルアルデヒド溶液０．
２ｍｌを滴下し、室温で３時間撹拌７”る。その後反応
混合物を一夜蒸留水で４°Ｃで透析し、凍結乾燥して、
目的抗原１６．５ｎ＋ｏを１！Ｉる。以下この抗原を［
抗原■１と言う。

抗原■はＫ　Ｌ　ｊ−１１モル（平均分子量を１０万と
した場合）に対してペプチドＡが平均１０モル結合した
ものである。尚このペプチドＡとＫ　Ｌ　ｌ−１との結
合率は、１詳られる抗原■を更にセファデックスＧ−５
０（溶出液：生理食Ｊ２ａ水、検出二０１）２８　Ｏｎ
＋１１、流出法［：３ａ＋Ｉ／時間、分取ｌ：１ｍｌづ
つ）でゲル濾過した際、未反応のＫ　Ｌ　Ｈ及びペプチ
ドＡの存在は認められないことより、該ゲルか過によっ
てＫ　Ｌ　ｌ−１に結合したペプチドＡのフラクション
と伯の生成体（ペプチドＡの２回体）のフラクションと
を分離し、ペプチド２昂体の４Ｅｔ　ｆｌ！−濃度の倹
損線を作成して、上記２回体の量を求め、これを出発原
料として用いたペプチドＡの世から差し引いた値がすべ
てＫＬＩ＋に結合しているどして求めたものである。ｊ
ｘ下の抗原の製造例においても同様とする。

製造例　２ ■　０．２Ｎ−ｌ−ＩＣ１，−２０ｍ１及びＤＭＦ３１
の混合溶媒にベンジジン８３．２５１１１（Ｉを加え、
水冷下に撹拌し、該溶）陵に亜硝酸ナトリウム８７．０
３ｍｇの蒸留水２＋１１１を徐々に加え、３０分間撹拌
してｆ３　Ｄ　Ｂ溶液を調整した。

■　ペプチドＥ５．０８１１１０及びＫＬＩ−１８，０
７ｍ。

、を０．１３Ｍ　　Ｎａ　Ｃ１の０．１６ＭホウＲ’Ｕ
　ｊｌＡ綴自液（Ｄ　Ｈ−９，０）　１ｍｌに溶解し、
４℃にて静かに撹拌づる。該溶）渣に上記■のＢ　ｌ’
）　［３？ＥＩ８し１１を徐々に）＾下する。反応溶液
を０．５ＮＮａ　ＯＨにて１１ｔ−１＝　９　、０　ｋ
ｍ　調整し、サラニ４℃で２時間反応する。その後反応
混合物を−Ｔｕ蒸留水で４℃下に透析し、凍結乾燥して
、目的・抗原１２．２７ｍｇを（５Ｉる。以下この抗原
をｒ　ＪＡＩＪ’Ａ　Ｉｆ　Ｊ　トＭう。抗１ｉ；ｉ１
１　ｔｉｔ　Ｋ　１．−　Ｌｌ　１　モルニ対してペプ
チドＩヨが平均３５モル結合した・ｂのである。

製造例　３ ペプチドＣ５，１７ｍｇ、Ｋ１−１−１８．０３ｍｇを
使用して、前記製造例２と同様にして目的抗原１２．７
４ｍｇを得る。以下この抗原を［抗原Ｉｎ　−１と言う
。抗原■はＫ　Ｌ　Ｈ１モルに対してペプチドＣが平均
４２モル結合した一ｂのである。

〈抗体のＭＡ造〉 製造例　１ 抗原の製造例１で得た抗＋＋’Ａ　丁〜■のそれぞれ１
００ｕＯを１．５１の生理食塩水に溶解後、これにフロ
イントの補助１１．５１１１１を加えて調整したＵＱ　
Ｂｇ液を、それぞれ３羽のウサギ（Ｎｅｗ−Ｚｅａｌａ
ｎｄ　　ｗｈｉｔｅ　　　ｒａｂｂｉｔｓ　）　　（２
，５〜３．　０に！＋）に皮下投与し、２週間ｆｉｊ　
ｌこ６回向量を投与する。更にその後１ケ月ｆ］ｉに３
回、最初に投与した量と同量を投与する。最終投与後７
日経過してのち試ルに動物から採血し、遠心分離して抗
血清を採取して、それぞれ目的抗体を得る。

（ＪＸＪ二・）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ０式 ％式％ で表わされるペプチド、一般式 Ｒ−Ｉ　Ｉｅ−ｐｒｏ−Ｈｉｓ　−Ｐｒｏ−ＬＭＳ−Ａ
   Ｓｎ−８ｅｒ　−１１ｏ−ＧＩＶ　　Ｇｌｙ　　Ｇ１１
   ｌ−Ｖａｌ−ＯＨ〔式中Ｒは水素原子又はト１７”ｒ’
   Ｖｒ基を示す。〕で表わされるペプチド及び一般式 ％式％ 〔式中Ｒは上記に同じ。〕 で表わされるペプチドからなる群Ｊ：り選ばれたヒ１〜
   白血病ウィルス関連ペプチド。