JPS5920355B2 - 新規な抗生物質複合体 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新しいアントラサイクリン抗性物質複合体、な
らびにその製造および回収裔こ関する。

本発明は、本明細書でライグ口イン酸複合体と呼ぶ新し
いアントラサイクリン抗生物質複合体を提供するもので
あり、この複合体は新しい菌株でヨ あるストレプトス
ポランギウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｎ］
）ｓｐ、菌株Ｃ−３１、７５１、Ａ、Ｔ、Ｃ、Ｃ、廉３
１１２９を好気性深部培養条件下、同化し得る窒素源お
よび炭素源を含有する水性の普通培地中で、上記微生物
瘉こより培地中に実質的な量のフイガロイン酸・ 複合
体が産出されるまで培養し、任意にこの培地からフイガ
ロイン酸複合体を回収することによつて得られる。本発
明はまた、稀釈溶液中のフイガ口イン酸複合体、粗濃縮
物または固体の形のアントラサイタリン抗生物質の未分
析混合物をも含む。ストレプトスボランギウムＳｐ．菌
株Ｃ−３１，７５１と呼ばれるストレプトスポランギウ
ムの新しい菌株は、米国インジアナ州シーリビル（Ｓｅ
ｅ−Ｉｙｖｉｌｌｅ）で採取した土壌サンプルから得ら
れた。この微生物の培養菌は米国ワシントン市のアメリ
カン・タイプ・カルチユア・コレクシヨン（．Ａｒｌｌ
ｅ−ＲｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣＯｌｌｅｃｔ
ｉＯｎ）に寄託され、その微生物永久コレクシヨンにＡ
．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３ｌｌ２９として加えられている。また
該微生物は昭和５１年７月６田こ工業技術院微生物工業
技術研究所に委託された（微工研菌寄第３６２９号）。
フイガロイン酸複合体は種々のグラム陽性バクテリアた
とえば黄色ブドウ球菌（ＳｔａｐｈｙｌＯｃＯｃｃｕｓ
ｌａｕｒｅｕｓ）および結核菌（ＭｙｃＯｂａｃｔｅｒ
ｉｕｍｔｕｂｅｒｃ一ＵＩＯｓｉｓ）および種々の原虫
類や酵母類たとえば鵞口癒ガンシダ（Ｃａｎｄｉｄａａ
ｌｂｉｃａｎｓ））ヒストプラズマ３カプシユレータム
（ＨｉｓｔＯｐｌａｓｍａｃａｐｓｕ一１ａＴｕｍ））
腟トリコモナス（ＴｒｉｃｈＯｍＯｎａｓｖａｇｉｎ−
[■■０ｎａｓｆａｅｔｕｓ）（７）生長を阻害する。
この物質はバクテリオフアージ封入性があり、ケツ歯動
物に種々のリンパ性および充実性腫瘍系たとえば肉腫１
８０、Ｌ−１２１０リンパ性白血病、ウオーカ 乏一２
５６癌肉腫、Ｐ−３８８リンパ性白血病およびＢ−１６
色素細胞腫の生長を阻害する。このフイガロイン酸複合
体はこのものだけを用いてもよく、または他の抗菌性薬
物と組み合わせて用いてもよく、上述の感応性グラム陽
性バクテリア、酵 ３母および原虫類の生長を防いだり
、またはこれらの数を減少させたりすることができる。
これは衛生用の洗浄液たとえば手洗浄用および種々の研
究室の消毒用、歯料装置および医療装置の消毒用、その
他の汚染された物質の消毒用、および洗濯し ３た衣類
用の制菌すすぎ液として使用することができる。またさ
らにマウスやラツトにおける上述の腫瘍系の治療にも用
いられる。菌株Ｃ−３１，７５１は次のような形態学的
特徴を有する。

すなわち、不十分な空中菌糸体を形成する。生長の早期
の段階においては胞子体先端に短く、密で不規則に渦巻
状（こなつた胞子鎖が見られる。この渦巻状の胞子鎖は
直径４〜１２μの球状の真の胞子のうになる。大部分の
胞子のう柄の長さは５〜１０μである。これらの胞子の
うと共に、場合によつては輪状または短い屈曲した胞子
鎖が生じることがある。基質の菌糸体は分枝しており、
しばしばわん曲しており、恐らくは隔膜がない。胞子の
う胞子は運動性がなく、球状ないし長円形で大きさは０
．７〜０．９μである。胞子表面の構造はまだ解明され
ていない。種々の培地で観察した培養菌の性質を第１表
に示す。

この観察は２８℃で１〜２か月培養の後に行なつた。こ
の微生物はシユクロース硝酸塩寒天、無機塩一澱粉寒天
、酵母エキズ−麦芽工キズ寒天およびオートミ―ル寒天
上で徐々に空中菌糸体を形成する。この空中菌糸体の大
部分の色は白みがかつた桃色ないし桃色である。アスパ
ラギン寒天、チロシン寒天、普通寒天およびペプトンー
酵母工゛二＝讐′．′；′．種：？：：；゜天およびオ
ートミール寒天上で胞子のうが生成する。

２８℃で７週間培養後、後者の二種類の培地上で多数の
胞子のうが見られた。

肉眼および顕微鏡で観察すると、この基質菌糸体の塊は
粒状物であつた。グルコース−アスパラギン寒天および
酵母エキズ−麦芽工キズ寒天上における基質菌糸体の主
な色は、それぞれ赤橙色および赤紫である。グルコース
−アスパラギン寒天および酵母エキズ−麦芽工キズ寒天
中で淡黄色、拡散性の色素が生成する。チロシン寒天お
よびペプトン一酵母エキズ−鉄寒天中で痕跡量のメラノ
イド色素が形成されるか、または全然生成されない。菌
株Ｃ−３１，７５１の生理学的特性および水化物利用に
関して、それぞれ第２表および第表に示す。

この微生物は天然の有機培地中では酸塩を還元して亜硝
酸塩とするが、無機培地中はそれを行なわない。大部分
のミクロモノスポ属の菌株と同様に、この菌株は塩化ナ
トリウムに対してかなり敏感である。これは中温菌であ
る。長いラグ・タイム後に、ある種の炭水化物たとえば
シユクロース、ラフイノース、可溶性澱粉およびＤ−マ
ンニトールを利用する。菌株Ｃ−３１，７５１は細胞壁
に等徴的なアミノ酸成分としてメソージアミノピメリン
酸（ＭｅｓＯ−ＤＡＰ）を含有する。

特徴的な炭水化物は存在しなかつた。以上の特性をまと
めると、菌株Ｃ−３１，７５１は白みがかつた桃色（貝
殼ピック）の空中菌糸体および球状の胞子のうを形成す
る。

胞子のう胞子の運動性はない。胞子のう柄は短く、通常
その長さは１０μ以下である。基質菌糸体の全体的な色
は橙色ないしスミレ色である。明らかな分散性色素（メ
ラニンを含む）は生成しない。通常の炭水化物のほとん
ど全部が生長に利用される。この菌株の細胞壁にはメソ
一ＤＡＰが含まれるが、特徴的な糖成分は含まれていな
かつた。これらの主要な特徴から菌株Ｃ−３１，７５１
がストレプトスポランギウム属の一菌株であることがわ
かる。

ノノムラ（Ｈ．ＮＯｎＯｍｕｒａ）およびオーハラ（Ｙ
．Ｏｈａｒａ）のストレプトスポランギウムの分類〔Ｊ
．Ｆｅｒｍｅｎｔ．ＴｅｃｈｎＯｌ．４ｌ（１１）：７
０１〜７０９，１９６９および５２（２）：７１〜７７
（１９７４）〕によれば、１６種類の菌株が記載されて
いる。これらの中で８種類の菌３，３． ４（ 株が桃色がかつた空中菌糸体および短い胞子のう柄を有
する。

これらはストレプトスポランギウム・ルブルム（Ｓｔｒ
ｅｐｔＯｓｐＯｒａｎｇｉｕｍｒｕｂｒｕｍＰＯ一Ｔｅ
ｋｈｉｎａｌ９６５）、Ｓ．ロンギスポルム（Ｓ．ｌＯ
ｎｇｉｓｐＯｒｕｍＳｃｈａｆｆｅｒｌ９６９）ＳＳ．
ロゼウム（Ｓ．ｒＯｓｅｕｍｌＣＯｕｃｈｌ９５５）、
Ｓ．アメチストゲネス（Ｓ．ａｍｅｔｈｙｓｔＯｇｅｎ
ｅｓＮＯｎＯ−ＭｕｒａｅｔＯｈａｒａｌ９６Ｏ）、Ｓ
．アメチストゲネスＶａｒ．ノンレデユセンス（Ｓ．ａ
ｍｅｔｈｙｓｔＯｇ−Ｅｎｅｓｖａｒ．ｎＯｎｒｅｄｕ
ｃｅｎｓＰｒａｕｓｅｒｅｔＥｃｋｅｒｄｔｌ９６７）
、 Ｓ．フクレガ゛−レ（Ｓ．ｖｕＩｇ−ＡｒｅＮＯｎ
ＯｍｕｒａｅｔＯｈａｒａｌ９６Ｏ）１Ｓ．フ０ソイド
フつレガ゛−レ（Ｓ．ＰｓｅｕｄＯｖｕｌｇａｒｅＮＯ
ｎＯ一ＭｕｒａｅｔＯｈａｒａｌ９６９）、およびＳ．
ノンジアスタチクム（Ｓ．ｎＯｎｄｉａｓｔｉｃｕｍＮ
Ｏｎ（ＴｎＵｒａｅｔＯｈａｒａｌ９６９）である。そ
の後Ｓ．ビオラセオクロモゲネス（Ｓ．ｖｉＯｌａｃｅ
ＯｃｈｒＯｍＯｇｅｎｅｓ）ＭＫ−４９がこの菌株群に
加えられた（１９７４年４月４日の日本特許４９−４２
８９６）。菌株Ｃ−３１，７５１はストレプトスポラン
ギウム・アメチストゲネス、Ｓ．ロゼウムおよびＳ．ブ
ルガーレとは４２℃で積極的な生長を示す点で異なり、
Ｓ．ロンギスポルムとはグルボース胞子において異なり
、Ｓ，ノンジアスタチクムとはラムノース、イノシトー
ルおよび澱粉を積極的に利用する点で異なり、Ｓ．プソ
イドブルガーレとはラムノースおよびイノシトールを積
極的に利用する点および橙色または赤紫色の基質菌糸体
を生成する点において異なる。

Ｓ．ビオラセオクロモゲネスは無色または金色の基質菌
糸体を生成する点およびイノシトールやラムノースの利
用がマイナスまたは疑わしいという点で菌株３１，７５
１と区別する。菌株Ｃ−３１，７５１はポテキーナ（Ｌ
．Ｌ．ＰＯｔｅｋｈｉｎａ）が「ミクロビオロギヤ（Ｍ
ｉｋｒＯｂｌＯｌＯｇｉｙａ）」３４，２９２（１９６
５）に記載しているストレプトスポランギウム・ルブル
ム（ＳｔｒｅｐｔＯｓｐＯｒａｎｇｉｕｍｒｕｂｒｕｍ
）と共通ないくつかの特徴を有する。たとえば空気中に
おける全体色な色、基質菌糸体の色、可溶性色素および
胞子の形状等である。しかし現在入手可能なＳ．ルブル
ムに関する文献には、これらの二種類の微生物が同一の
ものであると明らかに結論づけるのに十分な記載はなく
、従つてさらに新しいデータが得られるまで菌株Ｃ−３
１，７５１はストレブトスポランギウム属の未知の菌株
と考える。フイガロイン酸複合体は好気性深部培養条件
下、水性の栄養培地中でＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３ｌｌ２９ま
たはその突然変異体の特徴を有するフイガロイン酸生成
菌を培養することによつて製造することができる。この
微生物は同化可能な炭素源たとえば同化可能な炭水化物
る含有する栄養培地中で生長する。好ましい炭素源の例
として（ま、ラクトース、グリセロース、シェークロー
ス、コーンスターチ、グルコース、マンノースおよびフ
ルクトースがある。栄養培地において炭素源として澱粉
を使用する場合には乳剤の問題が生じる可能性があるの
で、これを少なくするために回収前にブイヨンをこアミ
ラーゼを加えてもよい。この栄養培地はまた同化可能な
窒素源たとえば魚粉、ペプトン、大豆粉、ピーナツツ粉
、綿実粉およびコーン・スチープ・りカーを含むことが
必要である。この培地には栄養になる無機塩を加えても
よく、このような塩はナトリウム、カリウム、アンモニ
ウム、カルシウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、臭化物
、硝酸塩、炭酸塩等のイオンを与えることのできる通常
の塩の中のいずれかである。フ フイガロイン酸複合体は上記微生物を満足に生長させる
任意の温度すなわち約４３℃までの室温で生成すること
ができるが、約２７℃の温度で行なうのが便利である。

通常約１７０〜２１０時間培養すると最適なフイガロイ
ン酸複合体の生成が行なわれる。この培地はわずかにア
ルカリ性であるが、正確なＰＨ値は用いるそれぞれの培
地によつて異なる。この発酵はエルレンマイヤ一・フラ
スコおよび種々の容量の実験室用または工業用発酵器内
で行なうことができる。タンク発酵を行なう場合ｔこは
、ブイヨン培養物に微生物の斜面培養物または土培養物
あるいは凍結乾燥培養物を接種することによつて、栄養
ブイヨン中に生長接種物を生じさせるのが望ましい。こ
のようにして活性接種物を得た後、これを無菌的に発酵
タンクの培地に移して、抗生物質複合体を大規模に製造
する。その中で前記の微生物が良好に生長するようなも
のであれば、生長接種物生成用の培地は新しい複合体の
生成用のタンクで用いる倍地と同じものでもよく、また
は異なつていてもよい。発酵完結後、水と非混和性の適
当な有機溶剤を用いて全ブイヨンから抗生物質複合体を
抽出し、この有機抽出物を濃縮し、適当な反溶剤で濃縮
抽出物を稀釈することにより固体の複合体を沈澱させる
。

抽出は、塩化メチレンからｎ−ブタノールまでの種々の
極性を有しＰＨ範囲約３．５〜８．５である水と非混和
性の有機溶剤を用いて行なうことができる。ケトン類や
エステル類のような中間の極性範囲を有する溶剤はアル
コール類よりも選択性が大きく、しかも良好な分散特性
を与えるのに十分な極性を有することがわかつたので好
ましい溶剤である。特に好ましい抽出用溶剤の例は、メ
チルイソブチルケトンおよび酢酸エチルである。最も好
ましい溶剤はメチルイソブチルケトンである。この抽出
はＨＣｌまたはＨ２ＳＯ４のような鉱酸を加えて弱酸性
条件すなわちＰＨ４，Ｏ〜５．０としても、または弱ア
ルカリ性ブイヨンＰＨ条件すなわちＰＨ８〜８．５とし
ても好都合に行なうことができる。メチルイソブチルケ
トンを用いてＰＨ４．５〜５．０とすると最大収量が得
られる。抽出混合吻に淵過助剤を加えてからこの混合物
をろ過するのが好ましい。有機相を濃縮し、次に適当な
反溶剤たとえばエーテルを加えて稀釈してフイガロイン
酸複合体を沈澱させる。アルカリ性条件下で回収すると
紫色のフイガロイン酸複合体が得られるが、これを水に
溶解し、得られた溶液を酸性にして酸性複合体を沈澱さ
せ、これを次に淵過して回収するか、または有機溶剤中
に抽出することによつて赤橙色の遊離酸に変えることが
できる。本明細書においてフイガロイン酸複合体と呼ぶ
抗性物質複合体は、遊離酸の状態では橙赤色の無定形固
体である。これは比較的非極性溶剤たとえばエーテル、
ベンゼンおよび脂肪族炭化水素類たとえばｎ−ヘキサン
に不溶で、低級アルコール類（メタノール、エタノール
、ｎ−ブタノール、２−プロパノール）、アセトン、テ
トラヒドロフランおよびジオキサンに殆んど可溶性であ
り、極性の高い溶剤たとえばジメチルホルムアミドおよ
びジメチルアセタミドにことごとく溶解する。アルカリ
性条件下で回収するとこの複合体は深い紫色をしており
、酸の形から陰イオン状態に変つたことを示す。フイガ
ロイン酸複合体は塩基と容易に塩を形成し、この複合体
の製剤学的に受け入れられる塩たとえば製剤学的に受け
入れられるアルカリ金属塩およびアルカリ土類金属塩は
本発明の範囲内に含まれる。

フイガロイン酸複合体は元素分析によると５３．８２重
量％の炭素、５８．５重量？の水素、１．６３重量％の
窒素、および３８．７０重量％の酸素を含む。

ただし酸素の分析値は実測した炭素、水素および窒素の
百分率の合計値を１００重量％から引いて求めた計算値
である。これはＮａＨＣＯ３水溶液およびＢａ（０Ｈ）
２水溶液に溶けてそれぞれ赤みがかつたスミレ色および
青色の溶液を作る。これはアルコール性酢酸マグネシウ
ムと赤い蛍光を発する深紅色の溶液を生じ、またアルコ
ール性塩化第二鉄と黒色溶液（稀釈によりスミレ色の蛍
光を有する橙褐色）を生じる。この複合体はトレンス・
テストで陽性であるが、カルバゾールおよびニヒドリン
・テストでは色素の色によつて反応色が見分けられない
。これは酸性亜鉛末、亜硫酸水素ナトリウムおよび過酸
化水素では色が変化しない。アルカリ性亜硫酸水素ナト
リウムによりスミレ色から赤色にわずかに退色する。ア
ルカリ性過酸化水素では、大過剰ではスミレ色から桃色
に退色するが、その他の影響はない。薄層クロマトグラ
フをシリカゲル６０Ｆ−２５４（Ｂｒｉｎｋｍａｎｎ社
製品）で予備被覆したＴＬＣプレート上で行なつた。

フイガロイン酸複合体の試料をクロロホルム中に２ｗ９
／ｍｌの濃度で調製し、その試料を４０Ｉｔ１（８０μ
！）づつ上記プレートに適用した。クロマトグラフ操作
は使用した特定？，７′；呻；、．．÷二紳二；：リ：
で検知しうる着色帯域）を境界の明瞭な３つの系につい
て下記のとおり示す。

Ｒｆ値および帯域強度（カツコ内に示す）をこれらの系
のそれぞれについて示してあるが、後者は定性的に強（
ｓ）、中程度（ホ）および弱（ｗ）および非常に弱（Ｖ
，ｗ）に分類して示したものである。Ｒｆが０．０であ
る帯域は適用の時点のものである。Ａ系 クロロホルム
リメタノール（１９：１）、９帯域あり。

Ｒｆ値＝０．０（ｓ），０．３９（ｗ），０，２１４−
，０．２４３（ｗ），０．３４９（至），０．４７０（
ｗ），０．６１２（ｓ），０．６５１（ｓ），および０
．６９４（ｒ］１）。

Ｂ系 クロロホルムリメタノールリギ酸（９０：１０：
１）、１４帯域あり。

Ｒｆ値−０．０（ｗ），０．０４３（ｓ），０．０７３
−，０．１４９（ｓ），０．１６９（ｓ），０．２１２
（ｗ），０．２７２（ホ），０．３０８（ホ），０．３
６８（ｗ），０，４６７−，０．５２３−，０．７２２
（ｓ），０．７９５（ｗ）および０．８２５（ｓ）。

Ｃ系 クロロホルムリメタノールリギ酸（８０：２０：
１）、１３帯域あり。Ｒｆ値＝０．０（Ｖ．ｗ．），０
、２００６１１），０．２３３（ｗ），０．２７９−，
０．３１１（ｗ），０．４４６（ホ），０．４７２（ｓ
），０．５０８−，０．６２２（ｗ），０．７４１（ｍ
），０．８３９（ｓ），０．８９２（ＲＩｌｌおよび０
．９２８（ｓ）。

フイガロイン酸複合体の赤外および紫外吸収スベクトル
から、この複合体がアントラサイクリン成分の混合物で
あることがわかる。第１図に示した赤外線スペクトル（
ＫＢｒペレツト）では主バンドが２．９４（広）、３．
４，６．０４〜６．１３，６，１８６．３，６．９５（
広）、７．１（広）、８．１，９．３，９．５および９
．７μに見られる。酸性条件下および塩基性条件下にお
けるこの複合体の紫外吸収スベクトルを第２図に示す。
第２図における吸収性は次の式プルの濃度（９／ｌ）で
ある〕で表わされる。

メタノール中０．１Ｎ−ＨＣＩ溶液中における濃度５０
μＬＺｄでは、フイガロイン酸複合体の吸収ピーク（実
線）は、２３３，２５３，２８７〜２８８（シヨルダ一
）、４６７（シヨルダ一）、４８０（シヨルダ一）、４
９０，５１１（シヨルダ一）および５２４（シヨルダ一
）ｍμに認められる。メタノール中０．１Ｎ−ＮａＯＨ
溶液における複合体の吸収ピーク（点線）は、２３８，
２６６〜２６８（シヨルダ一）および５５３ｍμに見ら
れる。本発明の目的物質であるフイガロイン酸複合体を
構成するアントラサイタリン成分の１つは、アクチノマ
ジユラの１種すなわちアクチノマジユラカルミナタ（Ａ
ｃｔｉｎＯｍａｄｕｒａｃａｒｍｉｎａｔａ）の発酵に
よつて製造されたとしてＪ．ＡｎｔｉｂｉＯｔｉｃｓ，
２７，２５４（１９７４）にＭ．Ｇ．Ｂｒａｚｈｎｉｋ
Ｏｖａらによつて既に開示された（西独特許公開公報第
２３６２７０７号も参照）カルミノマイシンＩであるこ
とがわかつた。カルミノマイシンは動物および人間の種
々のガンに有望な抗腫瘍活性を示すことが報告された〔
たとえばＣａｎｃｅｒＣｈｅｍＯｔｈｅｒ．Ｒｅｐ．，
Ｐａｒｔｌ，５８，２５５（１９７４）参照〕。カルミ
ノマイシンＩはフイガロイン酸複合体の温和な酸加水分
解によつて製造することができる。すなわち、フイガロ
イン酸複合体を有機溶媒好ましくはメタノールもしくは
メタノールとクロロホルムとの混合物の中に抽出し、次
いでこの抽出物を温和な酸加水分解にかけてカルミノマ
イシンＩを生成させ、これを溶媒蒸発などの手段によつ
て回収し、粗生成物をたとえばセフアデツクスＬＨ一２
０上でクロマトグラフ処理して精製する。前記の如く、
フイガロイン酸複合体の赤外および紫外吸収スペクトル
から、この複合体がアントラサイクリン成分の混合物で
あることがわかつた。従つてフイガロイン酸複合体の分
子量、融点および比旋光度を明確に記載することはでき
ない。然し、以上にのべた理化学的囲質、特に分子量、
融点および比旋光度に代る薄層クロマトグラフについて
の詳細な記述は、フイガロイン酸複合体についてその他
の理化学的件質およびフイガロイン酸複合体の加水分解
によるカルミノマイシンＩの生成の事実とあいまつてフ
イガロイン酸複合体の生成を確認するに十分な資料とな
りうるものである。標準試験管稀釈法によりいくつかの
微生物ｌこ対するフイガロイン酸複合体の試験管内最小
阻市濃度（ＭＩＣ）を測定した。第４表に示した結果か
ら、いくつかのグラム陽性微生物、酵母および三種類の
原虫がこの抗生物質に感受性であつた。グラム陰性の微
生物は感受ｌがなかつた。大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａＣＯＩｉ）Ｗｌ７Ｏ９の溶原性菌株におけるフイガ
ロイン酸複合体のバクテリオフアージ生産を起す能力を
試験した。

０．８μ９ノｄ以上で有意なインダクシヨンが見られた
。

組織倍養におけるＨｅＬａ細胞に対する細胞毒効果を測
定するために試験管稀釈蛋白質テストを行なつた結果、
５０％エンド・ポイント（ＥＤ５Ｏ）は０．００４μＬ
肩ｌであつた〔「抗菌剤および化学療法（Ａｒｌｔｉｍ
ｉｃｒＯｂｉａｌＡｇｅｎｔｓａｎｄＣｈｅｍＯｔ一Ｈ
ｅｒａｐｙ）１９６６：６１３〜６１８（１９６７）〕
。いくつかのケツ歯動物の腫瘍に対するフイガロイン酸
複合体の効果についても研究した。用いた方法の詳細に
関しては、「ガン研究（ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ
）２２：１６７−１７３，１９６２および「ガンの化学
療法レポート（ＣａｎｃｅｒＣｈｅｍ−０ｔｈ．Ｒｅｐ
０ｒｔｓ）」３：１−８７（パート３）１９７２に記載
されている。充実性腫瘍として皮下に肉腫１８０を移植
したマウスをフイガロイン酸複合体発酵ブイヨンで治療
すると、腫瘍の直径の増加が３７％阻市された（腫瘍重
量の増加は７５％阻市されると推定）。Ｌ−１２１０白
血病のマウスの寿命は、このブイヨンで治療することに
より、対照と比較して２９％のびた。このフイガロイン
酸複合体ブイヨンはケツ歯動物のウオーカ一２５６癌肉
腫（筋肉内）、Ｐ−３８８リンパ性白血病およびＢ−１
６色素細胞腫に活性であることがわかつた。固体のフイ
ガロイン酸複合体についてもテストを行ない、種々の腫
瘍系に対して活性であることがわかつた。マウスにおけ
るＬ一１２１０白血病およびＢ−１６色素細胞腫に対す
る結果を第５表に示す〇次に実施例をあげて本発明を説
明するが、これらの実施例は本発明を限定するものでは
ない。

スケリーソルブ（ＳｋｅｌｌｙｓＯＩｖｅ）Ｂは主とし
てｎ−ヘキサンからなる。沸点６０〜６８℃の石油エー
テル留分である。ＭＩＢＫはメチルイソブチルケトンで
ある。例１ フラスコ振盪培養 Ｄ−グルコース２９、オートミール２０９、大豆ペプト
ン２９および寒天２０ｆ！に蒸留水を加えて１２として
作つた寒天斜面培地で、微生物すなわちストレプトスポ
ランギウムＳｐ．菌株Ｃ−３１，７５１を生長させる。

２７℃で少なくとも６日間培養後胞子を５００７１１１
のエルレンマイヤ一・フラスコに移すが、このフラスコ
にはコーンスターチ５０９、大豆粉１０９、ピーナツツ
あらびき粉１０９、ＣａＣＯ３３９に蒸留水を加えて１
１とした無菌培地を１００ｍ１入れておく。

この生長培養物を円の直径５．１ｃ！ｎとしたロータリ
ー・シューカー〔ニユ一・ブランスウイツク・サイエン
テイフイツク社（ＮｅｗＢｒｕｎｓｗｉｃｋＳｃｌｅｎ
ｔｉｆｉｃＣＯ．，Ｉｎｃ．）のジヤイロタリ一・タイ
ヤ一・シューカー、モデルＧ５３（ＧｙｒＯｔＯｒｙｔ
ｉｅｒｓｈａｋｅｒ，ＭＯ一ＤｅｌＧ５３）〕を２１０
ｒｅｖ／ｍｌにセツトしたものの上で培養する。４８時
間後に培養物４ｍ１を５００ｍ１のエルレンマイヤ一・
フラスコＣこ移すが、このフラスコにはシェークロース
５０９、大豆粉２０９、ピーナツツのあらびき粉２０９
、ＣａｃＯ３３ｇに蒸留水を加えて１１とした６無菌の
増殖用培地１００ＴＬＩを入れておく。

この培養物を２３０ｒｅｖ．／Ｍｍ．にセツトしたシュ
ーカー上、２７℃で１７０時間培養する。この時点でフ
イガロイン酸複合体◆こよる抗菌活性が培養物戸液およ
び菌糸体に見られる。例２ タンク培養 無菌の増殖用培地（例１と同様）３７．８１を入れたタ
ンク培養器に、例１に従つて調製した生長培養物１．８
９１を接種し、インペラー速度３７５ｒｅｖ．／／Ｎｍ
．で振盪し、７６．５１／Ｍｍの割合で通気を行ない、
２７℃で培養する。

１９０時間後に抗菌性複合体を分離する。

例３ タンク倍養 増殖用培地（例１と同様）３０３０１を入れたタンク培
養器に例１に従つて調製した生長培養物１５２１を接種
し、インペラー速度１５５ｒｅｖ．／Ｍｍで振盪し、１
４２０１／Ｍｍの割合で通気を行ない、２７℃で培養す
る。

２１０時間後にフイガロイン酸複合体を分離する。

例４ ブイヨンＰＨ（わずかにアルカリ性）における、ｎ−ブ
タノールによるブイヨンおよび菌糸体の抽出原料培地合
計５１を用いて振盪フラスコ発酵物からブイヨンの抽出
を行なうと済液２．５１が得られ、そのＰＨは８．５で
あつた。

これから各１１のｎ−ブタノールを用い、２回にわたつ
て１．５１を抽出した。これらの相を分離し、有機層を
合わせて濃縮した。この濃縮物をエーテルで稀釈すると
無定形の紫色の固体１．４９が得られ、これはマウスの
Ｌ−１２１０白血病に対して２〜／Ｋ９／Ｄａｙで活性
であつた。ブイヨンＦ液から得られた菌糸体ケーキに十
分なメタノールを加えて３０分間撹拌すると流動状スラ
リーが得られ、これを次に済過した。アルコールが大部
分除去されてしまうまでこの戸液を濃縮し、水性の残渣
を上述のようにして抽出すると、フイガ七イン酸複合体
６．３５９が得られた。この生成物は無定形の紫色の固
体であり、８〜／Ｋｇ／日の濃縮でマウスのＬ−１２１
０白血病に対して活性であることがわかつた。例５ブイ
ヨンＰＨにおける、ｎ−ブタノールによる全ブイヨンの
抽出ＰＨ８．６の全ブイヨン１．５１を大体等容量のｎ
−ブタノールと共に撹拌した。

セライト〔ジヨーンズーマンビル社（ＪＯｈｎｓ−Ｍａ
ｎｖｌｌｌｅＰｒＯｄｕｃｔｓＣＯ．）製のケイソウ土
の商標〕ケーキを通してこの濃い′混合物をろ過し、こ
れらの相を分離し、有機相を濃縮して小容量とした。

これを過剰のエーテルで稀釈するとフイガロイン酸複合
体６２１〜が沈澱する。こうして得られた無定形の紫色
の固体は０．２η／Ｋ９／日の量でマウスにおけるＬ−
１２１０白血病に活性であることがわかつた。この固体
は２００℃以上の温度で溶融せずに分解する。例６酸性
ＰＨにおける、ｎ−ブタノールによる全ブイヨンの抽出
ＨＣｌを用いて全ブイヨンのＰＨを４．０に調整し、抽
出の間この値に保つた以外は一般に例５の方法をくり返
した。

全ブイヨン４１から遊離酸の状態のフイガロイン酸複合
体１．７９が橙赤色の固体として得られた。この固体は
０．２５η／Ｋｇ／日の濃度でマウスに対して毒性を示
し、１．５μＬ涜ｌまでの稀釈においてバクテリオフア
ージ誘導性を示す。例７ ｎ−ブタノールによる大規模な全ブイヨン（わずかにア
ルカリ性）の抽出全ブイヨン（２７８８１，ｐＨ８．６
）をｎ−ブタノール１３５７１と共に撹拌した。

有機相を分離すると濃厚なエキス７８３１が得られ、こ
れを１３１まで濃縮した。「スケリーソルブＢ」８０１
を加えると粗製のフイガロイン酸複合体７２８９が得ら
れた。例８ メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）による全ブイヨン
の酸性抽出凍結して貯蔵しておいた全ブイヨン（１０１
）のＰＨを４．５に調整してからＭＩＢＫｌＯＩと２０
分間撹拌した。

沢過助剤をこの混合物に撹拌して入れ、Ｆ過助剤パツド
の上で上記の混合物を済過した。済液を各相に分離し、
有機相を小容量まで濃縮した。これを過剰の「スケリー
ソルブＢ」で稀釈すると、６．２μ９／ｍｌの稀釈度で
バクテリオフアージ誘導活性を有する橙赤色のフイガロ
イン酸複合体遊離酸４９が得られた。例９ メチルイソブチルケトン（ＭＩＢＫ）による大規模な全
ブイヨンの酸性抽出撹拌および冷却下に３０％Ｈ２ＳＯ
４４９ｌを加え、１０℃で全ブイヨン（３０９５１）を
ＰＨ８．３５〜３．３５に調整した。

２倍容量（６４１２１）のＭＩＢＫをこのブイヨンと共
に撹拌し、次に過剰のろ過助剤（ケイソウ土）を加えた
。

リンス剤としてさらに２５５４１（７）ＭＩＢＫを用い
、プレコートした真空フイルタ一を通してこの混合物を
済過した。この濃厚なＭＩＢＫ抽出物（７５５５１）を
分離し、濃縮して１０１とした。濃縮の間に湿潤固体１
．２８５ｋｇが沈澱し、これを集めた。この濃縮物に「
スケリーソルブＢ」１００１を加えると、粗製の油状物
質がさらに３６５９得られた。これらの固体のうち最初
の収集分を乾燥して８５８９とし、これを三つの画分に
分けた。これらを各各アセトン４１中で撹拌し、不溶性
物質を淵別した。この不溶性物質は済過助剤であること
が証明され、これを合わせて乾燥すると重量は３６７９
であつた０上記のアセトン溶液を濃縮し、次に過剰のエ
ーテルで稀釈すると粗製のフイガロイン酸複合体２９４
．５９が得られた。このエーテルを蒸発させると不活性
物質１９．２９が得られた。油状の「スケリーソルブＢ
」沈澱もエーテルで処理したが、不活性であることが証
明された。例１０ フイガロイン酸複合体からその遊離酸への変換例７の記
載に従つてアルカリ性ｎ−ブタノール抽出を行なうこと
により得た粗製の紫色の固体（２５９）を、溶解するま
で２５℃でＨ２Ｏｌｌ中で撹拌した。

この紫色の溶液に撹拌下に謝Ｃｌを滴下することにより
、そのＰＨを８．３から１．１に調整した。フイガロイ
ン酸複合体遊離酸が微細な沈泥状のレンガ赤色の沈澱と
して得られ、これを遠心分離により集めた。乾燥後の重
量は１３，６９であり、０．２Ｗ９／Ｋ９／日以上の投
与量においてマウスのＬ−１２１０腫瘍系に活性を示し
た。上澄み液を凍結乾燥すると全体的に不活性な無定形
固体１０．０９が得られ、この燃焼による灰分含量は７
．８％であつた。燃焼分析の結果、この紫色の陰イオン
性フイガロイン酸複合体と結合している陽イオン性物質
の大部分が有機物質であることがわかる。

【図面の簡単な説明】

第１図はフイガロイン酸複合体の赤外線吸収スベクトル
を示す一（ＫＢｒペレツト）。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 好気性深部培養条件下、同化し得る窒素源および炭
   素源を含有する水性の栄養培地中にストレプトスポラン
   ギウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ）の、Ａ
   ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３１１２９の特徴を有するフイガロイン
   酸生成菌株によつて実質的な量のフイガロイン酸複合体
   が生じるまでこの培地中で上記微生物を培養することか
   らなる、フイガロイン酸複合体と呼ばれる抗生物質複合
   体を製造する方法。 ２ 特許請求の範囲第１項に記載の方法において、使用
   菌株がＡ．Ｔ．Ｃ．Ｃ．３１１２９またはその突然変異
   体である方法。 ３ 特許請求の範囲第１項に記載の方法において、さら
   に培地からフイガロイン酸複合体を回収する工程を含む
   方法。 ４ 特許請求の範囲第３項に記載の方法において、水と
   非混合性の有機溶剤を用いて全培養ブイヨンの抽出を行
   ない、有機相を濃縮し、この濃縮有機抽出物を反溶剤で
   稀釈して固体フイガロイン酸複合体を沈澱させる方法。 ５ 特許請求の範囲第４項に記載の方法において、全ブ
   イヨンをｎ−ブタノールで抽出し、濃縮された有機抽出
   物からエーテルを用いて固体の複合体を沈澱させる方法
   。 ６ 特許請求の範囲第３項に記載の方法においで、酸を
   用いて全ブイヨンをｐＨ約４．５〜５．０に調整し、水
   と非混和性の有機溶剤を用いてブイヨンを抽出し、有機
   相を濃縮し、この濃縮有機抽出物を反溶剤で稀釈するこ
   とによつて固体のフイガロイン酸複合体を沈澱させる方
   法。 ７ 特許請求の範囲第６項に記載の方法において、酸性
   化したブイヨンをメチルイソブチルケトンで抽出し、濃
   縮した有機抽出物からエーテルを用いて固体複合体を沈
   澱させる方法。