JPS59210100A - 新規アミドｎ置換ブレオマイシン類の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、一般式ＣＩ］ 〔式中、ＢＭはプレオマイシン骨格の残基、Ｘは置、換
基を有してもよいアルキル基を示し、Ｉ（，１はシクロ
アルキル又はフェニル基で置換されたアルキル（フェニ
ルはさらに］゛ロゲン原子・シアノ、ベンジルオキシの
一種又は二種以上で置換されてもよい）、几２は水素原
子または■ｔ１と同じ基を示す。〕で表わせる毒性の少
ない新規なアミドＮ置換プレオマイシン類の新規な製造
法に関するものである。

プレオマイシンは１９６６年本発明者の一人であろ梅沢
らにより発見された制癌性抗生物質で（梅沢らジャーナ
ル・オブ・アンチビオチフス、１９Ａ、２００頁、１９
６６年）放線菌ストレプトミセス・バーチシラスにより
生産される１原子の２価の銅を容易にキレートする塩基
性水溶糖ペプチドで、通常の培養法では１６種が生産さ
れ、単離されている。（例えば、梅沢ら：ジャーナル・
オブ・アンチビオチフス１９Ａ、２１０頁、１９６６年
）。これらプレオマイシンのうち、ＡＩ、Ａ２、Ａ５、
Ｂ２デメチルＡ２等は、その混合物の脱銅体（、以下「
プレオマイシン・コンプレックス」という。）が現在す
でに癌治療の臨床面で広く使用されており、とくに偏平
上皮癌を中心に、皮虜癌、頭頚部癌、肺癌、悪性リンパ
腫などで優れた成績をあげている。

また、米国特許第３９２２２６２号及び米国特許第Ｒｅ
　３０４５１号には種々のプレオマイシン類が開示され
ている。

これらのプレオマイシン類は通常発酵法において、含銅
体の形で得られるが、それを脱銅することにより脱銅体
とされろ。本発明においてはｑ’！ｊ　Ｋ断わらない限
り、プレオマイシンという語は含銅体及び脱銅体の両者
を含むものとする。

そしてこれらのプレオマイシン類は下記二股式〔旧 （式中Ｒはプレオマイシン類の末端アミン残基）で表わ
され４（但し含銅体の場合のキレート銅は省略）。

しかしながらこれらのプレオマイシン類は優れた効果を
示す一方、使用法によっては胛前性などの副作用を生じ
るため、使用法が制限されており、より副作用の少ない
プレオマイシン類の開発が要望されている。本発明者ら
はこの要望に答えるべく種々研究の結果、先に、前記一
般式〔■〕で示されるアミドＮ置換プレオマイシン類を
見い出した。

本発明者らは更に研究の結果、下記一般式％式％ 〔式中Ｂ　Ｍ　、　Ｘ　はそれぞれ前記と同じ〕で表わ
せる３−〔Ｎ−メチル−Ｎ−（３−アミノプロピル）ア
ミノコプロピルアミノブレオマイシンのアミドＮ置換誘
導体を一般式Ｉｔ、３ＣＩＩＯｒＪＶ］Ｒ３ハ、（１）
シクロアルキル、（２）フェニルで置換されたアルキル
（フェニルはさらに）・ロケン原子で置換されていても
よい、（３）ハロゲン原♀、シアン、ペンジルオギシの
一種又は二押以上で置換されていてもよいフェニル基。

〕で表わせるアルデヒドと還元的に縮合させろ方法によ
り、一般式（Ｌｌで示されるアミドＮ置換プレオマイシ
ン類を大量生産出来ることを見出し、本発明を完成した
。

なお本発明の一般式における［３Ｍ−Ｊで表わされるプ
レオマイシン骨格の残基は前記プレオマイシン類の一般
式において・・・・・線で囲われている部分を意味し、
含銅体及び脱銅体のいずれおも含むものとする。

本発明で使用する一般式〔Ｉ■〕のシクロアルオルアル
デヒドとしては、例えは０５〜ＣＩ３のシクロアルキル
アルデヒド、具体的にはシクロペンチルアルデヒド、シ
クロオクチルアルデヒド、シクロデカニルアルデヒド、
シクロウンデカノイルアルデヒｉ・などがあげもね１、
フェニル置換アルキルアルデヒドとしてはフェニル置換
の０１〜Ｃ５のアルキルアルデヒド例えばフエ二ルアセ
トアルテヒド、フェニルエチルアルデヒド、ρ−クロロ
フェニルアセトアルデヒドなどがあケラれろ。丑だベン
ズアルデヒド類としては例えばベンズアルデヒド、ｐ−
クロロペンズアルアヒ１゛、■−ブロモベンズアルデヒ
ド、ｆｆｌ＋ｐ−ジベンジロキシベンズアルデヒド等が
あげられる。

本発明の出発原料である一般式〔Ｉ旧で示される化合物
は、３−〔Ｎ−メチル−Ｎ−（３−アミノプロピル）ア
ミノコプロピルアミノブレオマイシン（以下プレオマイ
シンＡ、Ｐ　ＭＰと略ｔ）をプレオマイシン不活化酵素
（以下、［不活化酵素という：梅沢ら、ジャーナル・オ
プ・アンチビオチク７２７巻、４１９頁、１９７４年）
を用いて加水分解して、式 ％式％ で示されろ３−〔Ｎ−メチル−Ｎ　−（：３−アミノク
ロビル〕アミン〕プロビルアミノーデアミドブレオマイ
ゾン（以下、デアミドプレオマイシンＡ　Ｐ　Ｍ　Ｐと
略す）とし、次に一般式〔］　Ｎｌ２−Ｘ（Ｘは上式Ｃ
Ｉ’］中のＸと同じ）で示さ、１１．るアミノを縮合さ
せることにより製造することが出来る。

Ｘとしては例えば０６〜ＣＩＯのアルキル−または第１
級アミン基で置換された０２〜Ｃ６のアルキルがあげら
れ、特に【〕−オクチル捷たは、フェニルエチルアミノ
プロピルが好ましい。

たとえば、牛肝臓を燐酸緩衝液とホモジエネエイトして
、８０００１（ＰＭで遠心分離し、−７ｃ　ｏ、）上清
を燐酸緩衝液に対し透析し粗酵素液し、それにプレオマ
イシンＡＰＭＰの脱銅体を燐酸緩衝液に俗解したものを
加え、；う７℃、５〜４８時間反応させろ。反応液から
適当な方法で蛋白質を除き、（たとえば５％となる。ｌ
：うに、トリクロロ酢酸（以下′Ｉ″ＣＡと略す）を加
え蛋白質を沈澱させ、遠心分離で沈γ殿を除き、沈澱を
３回５％’Ｉ”　ＣＡで゛イ先浄し洗液をあつめる）中
和後、プレオマイシンに対して過剰の酢酸銅を加え目的
物を銅キレートとする。これを脱塩するため■ 蒸留水で充填した吸着樹脂ダイアイオン　ｉ−Ｉ　Ｐ２
Ｏ、のカラムに注ぎ目的物を吸着する。蒸留水で塩類を
あらい流した後、１１５０規定塩酸水溶液−メタノール
（１：４ｖ／ｖ）で溶出し、波長２９０ミリミクロンイ
ゴ近に吸収極太を示す分画をあつめる。陰イオン交換樹
脂、ダウエラ■ クス　４４ＣＯＨ型；ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和
しムニのち、減圧下で濃縮して凍結乾燥する。

上記の粉末を蒸留水に溶解し、あらかじめｐｌ−１４５
，１／２０モル酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液■ で平衡化し７−、　ＣＭセファデックスＣ−２５（Ｎａ
」−型フアルマシア、ファインケミカル？、ｆ　製）　
ヲ充填したカラムに注入し吸着し、上記の緩衝液に連続
的に塩化すトリウムを加えろことによりナトリウム濃度
を１．０モル寸で徐々に上昇さぜろ直線濃度勾配法によ
り溶出し、目的物の青紫■ 色の分画な集める。先に用いたダイアイオン１（Ｐ４０
脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥するとデアミドプレオ
マイシンＡＰＭ、ｉ）の含銅体が青色の無定形粉末で得
られる。

このようにして得られたテアミドプレオマイシンＡ　ｉ
Ｐ　Ｍ　Ｐを次に酸アミド結合を形成する１こめの公知
の方法、たとえは、特公昭５４−６３０８９号記載の方
法等を用いて、一般式〔Ｖ］Ｎ　ｌ−１２−Ｘ　　　　
　〔Ｖ］ で示されるアミンと縮合し、必要なら脱銅ずろことによ
り一般式〔用〕の化合物を合成出来る。

縮合剤としては、ジシクロへキシルカルボジイミド、１
−エチル−３−（３−ジメチルアミンプロピル）カルボ
ジイミド、１−シクロ−＼キシル−３−（２−モルフォ
リノエチル）カルボジイミド、ジイソプロピルカルボジ
イミド、ジフェニルフメスフメルアジテイｌ−（ｉ、）
　Ｐｉ？　Ａ、　）　、ジエチルフメスフォロシアニデ
イｌ−（１）ＥＰＣ）、６−りＤ　ｒＪ、１．　　ハラ
ｐロロベンゼンスルホニルオキシベンズＩ・リアゾール
（ＣＣＢＴ）などがあげも、１１．ろ。

又、」二記縮合剤と伴にｐ−ニトロフェノール、ｏ、　
Ｉ）　−ジニトロフェノール、ペンタクロロフェノール
、２．４．５−トリクロロフェノール、ペンタフルオロ
フェノール、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、Ｎ−ヒド
ロキシ−５−ノルボルネン−２；３−ジカルボキシイミ
ド１−ヒｉ・ロキシベンズトリアゾール等の活性エステ
ル合成用試薬等も用いも、！１．る。

反応は溶媒どして水、ジメチルフセルムアミド、アセト
二）　ｌ）ル、そ」１．らの混合液が用いら」７．ろ。

乙１漬度ば−１０〜；３０度、反応時間は１時間〜７０
時間がよい。

以上のようにして得られた一般式口Ｔ１．］の化合物を
単離するには、アセトン寸たはエーテル等の有機溶媒を
反応液に加え目的物を沈澱させ、次いで蒸留水に溶解し
ｐ■■を６に合せ、脱塩する１こめ吸着樹脂たとえばア
ンバーライト■Ｘ　Ａ　ＩＩ）　−２（ローム・アンド
・ハース社製）を蒸留水を用いて充填したカラムに注入
して、目的物を吸着する。蒸留水で塩類をあらい流し１
こ後、酸性の含水メタノール、１ことえ（は１１５０規
定塩酸水溶液−メタノール（］：４ｖ／ｖ）で゛浴出し
、波長２９０ミリミクロン付近に吸収極太を示す分画を
あつめる。陰イオン交換樹脂、ダウエラ■ クス４４．　（Ｏ）Ｉ型；ザ・ダウ・ケミカル社製）で
中和したのち減圧下でｇ？縮して凍結乾燥すると、誘導
体の粗粉末がえらハ、る。

上記脱塩操作は省略できる場合もあり、そのときは上記
沈澱を蒸留水に溶解しっぎの操作に９つろこともできる
。

上記の粉末を蒸留水に浴解し、あらかじめｐＨ４、，５
、１，／　２０モル酢酸−酢酸すトリウム緩衝液で平衡
化したＣ　Ｎｉセファデックス　Ｃ−２５（Ｎａ十型：
ファルマシア、ファインケミカル社製）４・充ｊｆ　Ｌ
　ｔｌカラムに注入し吸着する。−４−記の緩衝液（／
Ｃ連続的に塩化ナトリウムを加えることによりすトリウ
ム儂度を１．０モル寸で徐々に上昇させろ直線濃度勾配
法により溶出する。この時未反応の原料と副生物はより
早く溶出する性質があるので、紫外線吸収モニターを用
いることにより分離除法することが可能である。もし目
的物の分画に不純物の混入が認められれは、上記のクロ
マＩ・グラフィーを再度行ない完全除去をはかね、はよ
い。

」−記のクロマトグラフィーを行うかわりに吸１１樹脂
たとえはア〜・にライト［株］ＸＡＤ−２を用いるクロ
マトグラフィーをおこなってもよい。

樹脂を緩衝液、１ことえば１％酢酸アンモニウム水溶液
、を用いて充填したカラムに粗物質の水溶液を注入して
、目的物を吸着する。緩衝液に連続的にメタノールを加
えることによりメタノール濃度を徐々に上昇させる直線
濃度勾配法により溶出する。この時未反応の原料はより
早く主な副生物はよか遅く溶出する性質があるので紫外
線吸収モニターを用いろことにより分離除去ずろことが
可能である。もし目的物の分画に不純物の混１人が認め
ら」１．れば、上記のクロマトグラフィーを再度行い完
全除去をはがれｄよい。

上記２種の精製操作は単独でも、又組合せて行ってもよ
い。

このようにして得らＪする目的物の分画を上述した吸着
樹脂、例えはアンバーライ）”　Ｘ　Ａ、　Ｉ）　−２
を用いた脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥すると、一般
式〔川〕の化合物の含銅体が青色の無定形粉末で得られ
る。

このようにして得らね、る含銅体を公知の方法たとえば
Ｅ　Ｄ　Ｔ　Ａを用いる方法（特公昭５２−３１８７５
）で脱銅ずり、は脱銅体がイ＠　ｒ−）ｈ、　ロ。

その−例を説明ずろと、含銅体を蒸留水に溶解し、これ
を蒸留水で充填したアンバーライト＠ＸＡＤ−２０カラ
ムに注入し吸着する。樹脂を塩化ナトリウムと５％のエ
チレンジアミン四酢酸拳２ナトリウム（以下（−Ｅｌ）
’１．”Ａ・２　Ｎａ　Ｊという）からなる水溶液でカ
ラムを洗うと、銅イオンニを二ｈ：　ｌ）　ｉ”　Ａ−
２Ｎ；＋に」こり運び去もね１、脱銅体が樹脂上に残る
。塩化すｌ・リウムで洗いＥ　Ｊ）　Ｔ　Ａ・２Ｎａを
除去し、さらに蒸留水で洗浄する。最後に酸性含水メタ
ノール、ムニとえは１１５０規定塩酸水溶液−メタノー
ル（］：４ｖ／ｖ）で溶出し波長２９０ミリミクロン（
＝１近に吸収極大を示す分画を集める。ダウエックス■
４４（０１−１型；ザ・ダウ・ケミカル社製）でｐ、ｆ
（６，０に合わせた後、減圧下で濃縮し、凍結乾燥する
と一般式［１１１’：ｌの化合物の脱銅体・塩酸塩が白
色の無定型粉末で得られる。

もし、」二記の塩酸水溶液のかわりに、硫酸水溶液を用
いれば値酸塩が得られろ。このように上記溶出工程で用
いられろ酸の種類を選択することにＪコリ、任意の酸と
の間の塩かえられる。

本発明を実施するには、ここに得られ定一般式〔ｆ旧の
化合物に、一般式〔Ｉ〜？〕で示されるアルデヒドを還
元的に縮合する。

縮合に用いる還元剤としては、シアノ水素化ホウ素すｌ
・リウムなどの水素化ホウ素化合物などがあげられろ。

廿だパラジウム炭素などの触媒をもちいて接触還元なお
こなってもよい。一般式［ＪＶ］で示さ−１するアルデ
ヒｊ・を１〜１５モルを用いＡ１．ば、主としてＩ（，
２が水素の化合物、；３モル以上用いればｒｊ、　、　
Ｒ，、、が同じである化合物が１１）ら」１．るが、望
捷しい添加量は］（，２が水素である化である。文武Ｑ
Ｖ］のアルデヒドとしてｎ］、Ｉ）−ジベンジルオキシ
ベンズアルデヒドの、ｉ：　’、）Ｋメタノールに溶け
にくい化合物乞もちいろ場合には反応時間を増加させれ
ば添加量を減じてもよい。

反応は溶媒として、メタノール、水、ジメチルフォルム
アミド、アセトニトリル、そ」しらの混合液が用いらハ
、る。温度は一５〜８０℃１，１１ｕ常はＯ〜５０’Ｃ
がよい。よりくわしくは、Ｊ＜、２が水素の銹導体では
０℃から２５℃、Ｉイｑ　、　Ｈ，ｚが回しである化合
物で特に立体障害の大きいアルデヒド、又は脣解度の低
いアルデヒドを用いろ場合は３５〜５０℃に暖めろこと
が望丑しい。反応待間は３時間〜７０時間がよい。立体
障害の大きいアルデヒド、又は溶解度の低いアルデヒド
を用いろ場合は時間を長ぐすることが有効である。

以上のようにして得られた一般式〔■〕のアミドＮ置換
プレオマイシン類を単離するには、水素化ホウ素化合物
を用いた場合には、塩酸で反応液の１〕■（を１に合わ
せ室温で５〜１０分攪拌し過剰の還元剤を分解したのち
中和し、メタノールを減圧で溜去した後、過剰のアルデ
ヒド、ケトンをエーテル又はブタノールで抽出除去し、
続いて次の脱塩操作を行う。即ち吸着樹脂たとえばアン
バーライト’ＸＡＤ−２（ローム・アンド・ハース社製
）を蒸留水を用いて充填したカラムに注入して、目的物
を吸着する。蒸留水で塩類をあらい流した後、酸性の含
水メタノールたとえば１１５０規定塩酸水溶液−メタノ
ール（］：４ｖ／ｖ）で溶出し、青色のプレオマイシン
誘導体の分画を集め必要ならば、陰イオン交換樹脂、ダ
ウエックス■４４−　（ＯＩ−１型；ザ・ダウ・ケミカ
ル社製）で中和したのち、減圧下で濃縮して凍結乾燥す
ると、目的化合物の青色粗粉末かえられる。

さらに純度をあげるためつぎの操作を行う。

上記の粉末を蒸留水に溶解し、あらかじめ１）１１４．
５，１／２０モル酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液で平（力
化し１こＣＭセファデックス■Ｃ−２５（Ｎａ＋型：フ
ァルマシア、ファインケミカル社製）を充填し１こカラ
ムに注入し吸着する。上記の緩衝液に連続的に塩化ナト
リウムを加えることによりナトリウム濃度を１．０モル
寸で徐々に」二昇させる直線濃度勾配法により溶出する
。もし目的物の分画に不純物の混入が認められれば、上
記のクロマトグラフィーにつづいて吸着樹脂たとえばア
ンバーライト■ＸＡＤ−２を用いるクロマトグラフィー
をおこなってもよい。樹脂ケ緩衝液、たとえば４％酢酸
アンモニウム水溶液を用いて充填したカラムに粗物質の
水溶液を注入して、目的物を吸着する。緩衝液に連続的
にメタノールを加えることによりメタノール濃度を徐／
２に上バさぜる直線０度勾配法により溶出ずろ。この時
未反応の原料は最も早く、次いでＩ＋、２が水素で・あ
る化合物が射出し、Ｉ（、、、Ｒ２が同じである化合物
が最後に浴出する性質があるので紫外線吸収モニターを
用いることにより分離することが１寸能である。もし目
的物の分画に不純物の混入が認められれは、上記クロマ
トグラフィーを両度行い完全除去をはかればよい。

又、ＣＭ−セファデックス■Ｃ−２５のかわりに、メタ
ノールで洗浄したＣＭ−セファデック（ｋｌ ス　ＣＬ　　６　Ｊ３　（ファルマシア、ファインケミ
カル社製）又は、ＣＭトヨバール！”６５０（東洋曹辻
上業社）等を充填したカラムを用いることも出来る。そ
の場合、反応後の脱塩操作を省くことも出来、反応液を
直接カラムに通して目的物を吸着させ、メタノールで試
薬類を洗い流したのち、０１モルの塩化ナトリウムを溶
かした含水メタノ−で溶出し１このち、アンバーライト
ＸＡＩ）−２のクロマトグラフィーな行う。

このようにして得られる目的物の分画を先に用いたダイ
アイオン１Ｉｐ−４ｏ脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥
することにより、一般式ＣＩＩのアミドＮ置換プレオマ
イシン類の含銅体が青色の無定形粉末で得られる。

このようにして得られるアミドＮ１６換プレオマイシン
類の含銅体を、前記の方法で脱銅することによシ、所望
の塩として脱銅体の白色無定型粉末を得ることが出来る
。

一般式〔■〕におけるＸとしては、例えば０２〜Ｃ９の
アルキル具体的にはエチル、オクチルなど捷たはそれら
のフェニル置換体、具体的にはフェニルエチルなどがあ
げられる。毒性などの点から特に１１−オクチル、フェ
ニルエチルのとき好ましい。

次に本発明の代表的化合物を表１に示す。

又、物性値を表２に示す。

Ｏ ■　　　　　　トｃＯ０ 表　　　　　　２ イ １、ｄＭＣＩＢＺ−ＰＥＰ２８９（９０）０．５３１．
１６２、ｄＭＣＩＢＺ−ＯＣＴ２９０（８８）０．５０
１．０８３、　　　ｄＭｃＩＰＥ　−ＰＥＰ　　　　　
　２９０（７９）　　　　　　　　　　０．５３　　　
　　　　　　１．０４４、　　　ｄＭｃＩＰＥ　　　Ｏ
ＣＴ　　　　　　２９０（８５）　　　　　　　　　０
．５２　　　　　　　　０．９６５、ｄＭＣＮＢＺ−Ｐ
ＥＰ　　　　　　２９１（９３）　　　　　　　　　０
６９　　　　　　　１．１０６、　　　ｄＭｃＮＩ３Ｚ
−ＯＣＴ　　　　　　２９２（９４）　　　　　　　　
　０．５９　　　　　　　　０．９５７、ｄＭＣＯ−Ｐ
’ＥＰ　　　　　　２９１（８９）　　　　　　　　　
　０．５３　　　　　　　　　１．０（ｉ８、ｄＭＣＯ
−ＯＣＴ　　　　　　２９１（８３）　　　　　　　　
　　０．４２　　　　　　　　　０．９６９、ｄＤＩ）
−Ｐ′ＦＪＰ２８５（７４）０．０９０．９３１０、　
　　ｄＩ）Ｄ　　　　　　　ＯＣＴ　　　　　　２８５
（７６）　　　　　　　　　０．０４　　　　　　　　
　０．６４註ドシリゲル６０　Ｆ２５４シラナイズド■
（メルり社）・メタノール−６％酢酢酸アンノン６０：
４０ｖ／ｖ）註２：アビセルＳ　Ｆ■（ＦＭＣ社）・ギ
酸−酢酸一水（２７：７５：９００ｖ／ｖ）８００Ｖ、
１５分次に本発明の化合物の代表例によって調べ１こ七
物学的諸性物を以下に説明する。

１）　　ミコバクテリウム・スメグマチス・Ａ　Ｉ”　
ＣＣ６９７、及ヒバチルス・ズブチリスに対ずろ抗菌活
性 上記の検定菌を用いて、寒天平板円筒法により１ｉｌｌ
ｌ定した。ただし、標準物質プレオマイシンＡ２（Ｉ悦
銅体）を１．０００　ｍｃｇ力ｆ＋ｌＩｉ　７　ｍｑと
した。

２）培養ＨｅＬａ５３細胞に対する増殖阻害効果プラス
チック・シャーレの培養基（，１−０％仔牛血清添加Ｍ
ＥＭ）に［−１ｃ　Ｌａ　８３細胞を接種し２日後にブ
レオマイシン類を添加、１ｊｊｏ’さらに３日間培養を
続けた後、細胞数を測定した。

増殖阻害率は次式 ％式％（） 〔式中、Ａは被験試料添加後３日月の最終細胞数、Ｂは
被験試料を添加しない対照における最終細胞数、Ｃは被
験試料添加時の細胞数を表わす。〕を用いて算出し１こ
。試イ・１濃度と阻止率のグラフから、１．　’Ｄ５ｏ
仙（５０％β且害σ）表　　　　　３ Ｉ　　ｄＭｃ］ＢＺ　ＰＦＪＰ　　　１４．８８０　　
２，５９０　　　　０．５３２　　ｄＭｃｌＰＥ−ＯＣ
Ｔ　　　　３８，２００　　　１，８０８　　　　０．
４３３　　ｄＭｃｌＰＥ−ＰＦＩＩＰ　　　１５，５９
３　　４，２６７　　　　０．３７４　　ｄＭｃＩＰＥ
−ＯＣＴ　　　　３８，７５０　　　１，８９８　　　
　０．２３５　　ｄＭＣＮＢＺ　　ＰＥＰ　　　　２１
，８７７　　　ＩＩ、０５６　　　　０．６０６　　ｄ
ＭＣＮＴ３Ｚ　−０ＣＴ　　　４９，２７０　　　３８
１　　　　０．２８７　　ｄＭｃＯ−ＰＩ”、Ｐ　　　
　５４，３４５　　　７，２７３　　　　０．３３８　
　ｄＭｃｏ　−ＯＣＴ　　　６５，７３３　　５，４７
３　　　０．２３９　　　ｄＤＤ　　　−ＰＥＰ　　　
　　１１５　　　　　　　　　２３　　　　　　　　　
　　　　０．０５８１０　ｄｐｏ　　−ＯＣＴ　　　１
５３　　　１３　　　　　０．３０３）マウスの肺１３
件（肺線維化）　Ｉ　Ｃｌｉ、、系マウス（雄性１５週
令）を一群９四として用１７・ムニ。

各薬剤の投与量は、５　ｍ９　／　ｋｌとし、１日１１
ハ１律続１０Ｆ１間、腹腔内注射し、投〜終了後、５週
間飼育し、観察後、層殺剖倹し、肺θ）線維化の頻度、
及び程度を調ベムニ。

成績は、投与（１イの肺線維化をもつマウス数なお表中
の点数は下記のとおりである。

０点二線維化を認めない。

１点：肺胞に浸出液の蓄積がみら」１４、肺＋１ｉＵ中
隔に線糾化様変化が見らハ、る。

２点：数か所にみ、ら」１．ろ線維化 ４点：散在性にみらｈ−る線維化 ６点；２！３以上の広範囲にみもハ５ろ線維化 また、表中の比はブレオマイシンコンプレックスとの比
率を示す。

凰　　　　　菱 １　　　　２／９　　（２０）　　　　　　２／２７　
　（７）　　００７３　　　　０／１　　（ｏ）　　　
　　　０／３　　　（０）　　０６　　　　０／！＋　
　（０）　　　　　　Ｏ／２７　　（０）　　”７　　
　　０／！ｌ　　（０）　　　　　　Ｏ／２７　　（０
）　　０８　　　　０／！ｌ　　（０）　　　　　　Ｏ
／２７　　（０）　　０！−１０／９　　（０）　　　
　　　Ｏ／２’ｌ　　（０）　　　０１０　　　０／９
　　（０）　　　　　　Ｏ／２７　　（０）　　０く、
優れた抗菌活性をも自しており、胛前性を著しく減じて
いることがわかり、臨床面て゛の有用性を強く示唆して
Ｌ・ろ。

次に本発明を実施例により具体的Ｖこ説１ｐｌする。

〔実施例〕

Ａステップ 新鮮な牛肝臓８００９−を１．６ｐの（１，（１５モル
燐酸緩衝液（ｐＨ＋　７．２　）とホモジエネエイｌ−
して、８０００　Ｉｔ・ＰＭで３０分遠心分離し、その
上詰を００５モル燐酸緩衝液に対し透析し１１１酵素散
とずろ。ブレオマイシンＡ、’ＰＭＰ　３２．７　Ｐ　
＆こ上記粗酵素液１．５１を加え、３７℃、２４時間反
応させイ）。

反応液（で５５％トリクｏａ酢酸（以下’ｒ　ｃΔと略
す）　］、　５０　ｒｒｌを加え蛋白質乞沈澱させ、遠
心分離で沈澱を除き、沈澱２３回５％′１゛（ΣＡで゛
洗浄し）、、Ｂτ液と洗液をあつめ４モルＮａ　ＯＨで
中和後、５１の酢酸銅（ブレオマイシンに対して１２等
量）を加え目的物を鋼キレートとする。こ、１１．を脱
塩する定め蒸留水で充填した吸着樹脂ダイアイオン０旧
４０、（三菱化成社製）のカラム（７１・容）に注ぎ目
的物を吸着した。１４．ｅの蒸留水で塩類をあらい流し
た後、１１５０規定塩酸水溶液−メタノール（１：４ｖ
／ｖ）で゛浴出し、波長２９）Ｏミリミり「］７１句に
吸収極太を示ず分画をあつめ１こ。ダウエックス（ｉＤ
４４（０１１型、ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和し１
このぢ減圧下で濃縮しムニ。

上記の濃縮液を、あらかじめｐＨ４，５，１，／２０モ
ル酢酸−酢酸すトリウム緩衝液で平（釦化したＣＭ十フ
ァテックスＣ−２５（Ｎａ　十型：ファルマシア、ファ
インケミカル社製）を充填し１こカラム（：３１容）に
注入し吸着した。上記の緩衝液に連続的に塩化すトリウ
ムを加えることによりすトリウム濃度を１０モル斗で徐
々に上昇させる直線濃度勾配法により溶出した。０．６
Ｍ前後で溶出するｒｆ色の分画な集め、先に用いにダイ
アイオン０ＩＩＰ４０脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥
するとデアミドプレオマイシンＡ　Ｐ　Ｍ　Ｊ）の含銅
体が２］、７Ｐ、青色の無定形粉末が得られた（収率６
６％）。

水晶の蒸留水で測定した紫外吸収極太および（）、、〕
１　、ｆｇ　）　　は　２　４　１　　ｍμ　（］、　
　２　７　　）　　、　　２　９　２　　ｍμ＜　　］
、　　０　４．　　）でｋ）つた。

水晶の蒸留水で測定した赤外吸収極太波数（ｃｍ−）は
：３３５０．１７２５．１６５０．１５６０．１，４６
０゜］３８０．　１２００．　１１４０．　　］１００
．　１０６０．　１０２０゜９９０、　８８０．　７７
０ で゛あった。

その他の物性値を表５に示す。

Ｂステップ Ａステップで得ｔ＝　７’アミドプレオマイシンＡ　Ｐ
Ｍ、Ｐの含銅体５ｇ−と、３−（（Ｓ）　−］］’−フ
Ｊニルエチルアミノプロピルアミン塩酸＋＝　８．　：
＜　ｙ　（プレオマイシンに対して１０倍量）を］、　
００　ｍｌのジメチルホルムアミドに溶解し、０℃冷却
攪拌し、１３４１の１−ヒドロギシベンズｌ−ＩＪアゾ
ール（プレオマイシンに対して１３０倍量）と、Ｎ−メ
チルモルフォリン３．６．３　ｍｌを加え、続いて６．
８ｇのジシクロへキシルカルボジイミド（プレオマイシ
ンに対して１０倍量）を加えろ。室温で６時間攪拌し反
応させる。

反応液に１０倍容のアセトンを加え、目的物を沈澱させ
、アセトンでよく洗った後この沈澱を蒸留水に溶解し、
あらかじめｐｆ−１４，５、］、　／　２０　モル酢酸
−酢酸すトリウム緩衝液で平衡化しｆ、　（、：　Ｍセ
ファテックス（１−２５（Ｎａ十型：ファルマシア、フ
ァインケミカル社製）を充填したカラム（５００ｍ６容
）に注入し吸着し１こ。上記の緩衝液に連続的に塩化す
ｌ・リウムを加えることによりすトリウム１１＋Ｊ度を
１０モル寸で徐々に上昇さぜる直線濃度勾配法により溶
出した。０７モ一ル前後で溶出する青色の分画な集め、
先に用い１こダイアイオン’　Ｈｉ、）　−／ＩＯ（５
００ｍｅ使用）の脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥する
とアミドＮ−４３−（（Ｓ）　−］］’−フェニルエチ
ルアミノプロピル］−プレオマイシンＡＰＭＰの含銅体
３；３７が青色の無定形粉末て得らｊ＋、１こ。（収率
６（５％）水晶の蒸留水で測定し１こ紫外吸収極太およ
び（［す］％／　１　ｃｍ　）は２４　］、　ｍｚｔ（
１０８）、’２９２ｍμ（８７）であっ１こ。夾化カリ
錠剤法で測定した赤外吸収極大波数（ｃｍ　）は３：（
５（１，］　　７２５．　　］　６４５．　　］　　５
６０．　１４６０．　１３８０゜１２５（１，Ｊ１４０
．Ｊｌｏｏ、Ｉ（ン６０．１．Ｏ１５，９９０゜８８　
（、）　、　７６５　、７００　　であった。

その他の物性値は表５に示す。

又、３−　（（Ｓ）　−１’−フェニルエチル）アミノ
プロヒルアミン塩酸塩どＮ−メチルモルポリンツカわり
に、ｊ］−オクチルアミンを使用すること（〆Ｃより、
アミ）へ−（ｎ−オクチル）−プレオマイシンＡ　Ｐ　
ＭＰが得らり、　ｔｃ　。

水晶の蒸留水でｄ（１］定し１こ紫外吸収極太お、［び
（Ｊ弓！Ｉ）は２４１ｍμ（］、　ｌ　８　）　、　２
９２１１１／４　（！Ｊ　５　）であった。

臭化カリ錠剤法で劃（１１定した赤外吸収（夕犬波数（
ｃｎ＋）は３３５０．２９４０．　］　７２０．１６／
１０゜１．５５５，１４６０，１３７０．Ｊ２５０，１
１１５．＋１００゜１０６０．１０１０．９９５，９３
０，８８０，７６０であった。

この物質のその他の物性値を表５に示す。

代　　　　５ テアミドプレオマイシンＡＰＭＰＯ，２８０，９３１？
土１ニジリカゲル６０　Ｆ　　２５４シラナイズ■（メ
ルク社）・メタノール−３％酢酢酸アンノン６０：４０
ｖ／Ｖ）但し＊印をつけたものは（６５：　：３４　ｖ
／ｖ）で測定した。

、ｉ１２：アビセルＳ　Ｆ■（Ｊ・’ＭＣ社）・ギ酸−
酢酸一水（２７：７５：９００ｖ／ｖ）８００Ｖ、１５
分Ｃステ、プ Ｊ３ステップで得らｆｔたアミドＮ−〔３〜（（Ｓ）−
１′−フェニルエチルアミノ）プロピル］−フレオマイ
シンＡ　Ｐ　Ｍｉ）の含金同体１．０７−をｌ　ＯＯｍ
ｌのメタノールに溶解し、Ｉｌｌ、ｐ〜ジベンジルオキ
ンベンズアルデヒト’　７００　ｍｇ　（プレオマイシ
ン１１こ対して約４倍量）を添加し、ついで、４６ｍｇ
のシアン水素化ホウ素すｌ・リウム（ブレオマイヅンヶ
こ対シて約１．３倍量）を添加した。４．０’ｔＳ、４
８時間反応したのち、反応液を、あらかじめメタノール
で６Ｌ浄して充填し１こＣＭ−トヨパール’　６５０　
（Ｎａ　、東洋留達工業社製）のカラム（１００ｍ６容
に注入し、目的物を吸着せしめた。カラムを２００ｍ１
のメタノールで洗浄したのち、５００　ｍｌのメタノー
ル−水（７：３）に、５００　ｍｌの０２モルの塩化ツ
ートリウムを含むメタノール−水（７：３）を連続的に
加える直線濃度勾配法により浴出した。塩６１３度約０
．１２モル前後に溶出してくる青色分画１３゜ｍｌを集
め、アンバーライト■ＸＡＤ−２を充填し１こカラム（
１６０曲容）に吸着させた１１のＯｏ５モル酸酸−酸酸
カリ緩８ｉ液ｐ１．−１．４．５に１石のメタノールを
連続的に加え、メタノール０度を直線的に」−ｙｌさせ
る直線グ５度勾配法により溶出を行つπ。

メタノール４”１？度９０％付近で溶出され、る宵色分
１面をアンバーライト■ＸＡＪ）’−２を充填したカラ
ム（ｌ　Ｏ０ｍ１ｊ’ｄ　）に通し、目的物を吸着させ
た。水２００　ｍｌで洗ったのち、１１５０規定塩酸水
溶液−メタノール（Ｊ、　：　４　ｖ／ｖ）で溶出を行
い、青色分画を集め、ダウエックス’！’４．４　（Ｏ
ｌ−１−型：ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和したのち
濃縮乾固し、（ｉ　７　Ｑ　ｍ９の一８色粉末を得た。

この粉末を５０ｍ１３の水に薄力化、アンバーライト■
ＸＡ１）−２を充填し１こカラム（１００ｍ／！容）に
吸着させた。カラムを５％１＝：　Ｉ）　ＴΔ・２Ｎａ
水ｉ液：３００　ｍ（３，２％塩化ナトリウム水溶液１
００　ｍｌ、水２００　ｍｅの順に洗浄し１このち、１
１５０規定塩酸水溶液−メタノール（１：　ｌＩ　ｖ／
ｖ）で溶出した。波長２９０曲１　＋Ｊ近Ｖこ吸収極大
を示す分画を集め、ダウエックス■４４（ＯＩＩ型）で
ｐＩｌ、　６．０に合せ、凍結乾燥を行い、３−（Ｎ−
メチル−Ｎ−〔３−ビス（ＩＩＩ、Ｉ）−ジベンジロキ
シー、ンジルアミノ）プロピルアミノ）−プロピルアミ
ノ−（アミド）　Ｎ−［３−（（Ｓ）　−１’−フェニ
ルエチルアミノ）プロピルコープレオマイシンの脱銅体
塩酸塩６４０　ｍ９を白色無定形粉末として得た。（収
率６４％） 水晶の蒸留水で測定し１こ紫外部吸収極太、および（Ｅ
）ｃｍ　）　ｕ、２８５ｎｍ（７４，４，）であツタ。

臭化カリ錠剤法で測定しｒこ赤外吸収極太波数（ｃｍ）
は３４００．２９００．　１７１０．　１，６５０．　
１５４５．　１，５０５゜１４５０、　１，３８０．　
１２６０．　１１３５．　１０６０．　　、ＬＯｌｏ。

８００．７３０，６９０　　であった。その他の物性は
、表１に示しである。

本ステップで、原料プレオマイシンとして、アミド−Ｎ
−［ｎ−オクチル］−プレオマイシンＡ　Ｐ　Ｍ　Ｐを
用いて、同様な操作を行うことにより、３−（Ｎ−メチ
ル−Ｎ−〔３−ビス（ｍ、ｐ−ジベンジロキシベンジル
アミノ）プロピルコアミノ）−プロピルアミノ−（アミ
ド）　Ｎ　−［＋］−オクチル〕−プレオマイシンカＫ
ｎ　ラｈ１こ。

特許出願人　「１本化薬株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕　　一般式 ％式％ 〔式中Ｂ　Ｍはプレオマイシン骨格の残基、Ｘは植換基
   を有してもよいアルキル基を示す〕で示さ１＋−る３−
   〔Ｎ−メチル−Ｎ−（３−アミノプロピル）アミン〕プ
   ロピルアミノブレオマイシンのアミドＮ置換誘導体を、
   一般式％式％ （式中、Ｒ・３ば、（１）シクロアルキル、（２）フェ
   ニルで置換されたアルキル（フェニルはさらに・・ロゲ
   ン原子で置換されていてもよい）、を特徴とする、一般
   式 ％式％ 〔式中、Ｘは前記と同じ、Ｒ１はシクロアルキル又はフ
   ェニル基で置換されたアルギル（フェニルは、さらにハ
   ロゲン原子、シアンベンジルオキシの一種又は二種以上
   で置換されてもよい）　、Ｒ，２は水素寸たはｌ（・１
   と同じ基を示す。〕で表わせる新規アミドＮ＠換ブレオ
   マイシン類の製造法。 〔２〕式 ％式％ で示される３−〔Ｎ−メチル−Ｎ−（３−アミノプロピ
   ル）アミン〕プロピルアミノデアミドプレオマイシン