JPS596887A - 酵素の固定化方法 - Google Patents
酵素の固定化方法Info
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- JPS596887A JPS596887A JP11499482A JP11499482A JPS596887A JP S596887 A JPS596887 A JP S596887A JP 11499482 A JP11499482 A JP 11499482A JP 11499482 A JP11499482 A JP 11499482A JP S596887 A JPS596887 A JP S596887A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は酵素の固定化方法に関し、さらに詳しくは特定
のスペーサーを導入した相体を用いた酵素の固定化方法
に関する。。
のスペーサーを導入した相体を用いた酵素の固定化方法
に関する。。
これまでに知られている固定化酵素の製造法の７つとし
てｖ！＃素を水不溶性担体に共有結合させる方法または
多官能性試薬にて酵素を架橋結合させる方法があるが、
酵素の活性発現を極力妨害しないためには担体の幹部と
官能基との距離を適当に離す必要がある。そのためには
煩雑な反応処理が心臓で、そのため相体の作成が割高な
ものになる場合が多かった。
てｖ！＃素を水不溶性担体に共有結合させる方法または
多官能性試薬にて酵素を架橋結合させる方法があるが、
酵素の活性発現を極力妨害しないためには担体の幹部と
官能基との距離を適当に離す必要がある。そのためには
煩雑な反応処理が心臓で、そのため相体の作成が割高な
ものになる場合が多かった。
かかる現状に鋤み本発明者らは酬累の活性発現を極力妨
害しないようなスペーサーを有する水不溶性担体を容易
にかつ安（ｉｌｆｉに製造すべく、揚々研究ｆ重ねた結
果、水酸基および／ｆたは７ミノ基を有する高分子物質
に、一般式（１）％式％（１） 〔式中、Ｗは脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基また
は−（ＣＨ□）ｒｒ、−Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｍ
″ −′マ・畦 ・ ２ｒｒ１ ２ｎ＃＃坤
千コ；ｎはそれぞれθ、／、！、３゜り、ｊをあられし
、Ｙはアリール基をあられす。）を、Ｘはビニル基、−
ＣＨ２ＣＨ２−Ａ−Ｒ（Ａは酸素原子またはイオウ原子
を、Ｒは多塩基性酸の残基を表わす。）またはへロゲノ
エチル基をあられす。〕 で示される化合物またはそのアミノ基が保賎された化合
物とをアルカリの存在下反応させて得られる神体を用い
ることを特徴とする酵素の固定化方法を見い出した。
害しないようなスペーサーを有する水不溶性担体を容易
にかつ安（ｉｌｆｉに製造すべく、揚々研究ｆ重ねた結
果、水酸基および／ｆたは７ミノ基を有する高分子物質
に、一般式（１）％式％（１） 〔式中、Ｗは脂肪族炭化水素基、脂環式炭化水素基また
は−（ＣＨ□）ｒｒ、−Ｙ−（ＣＨ２）ｎ−（式中、ｍ
″ −′マ・畦 ・ ２ｒｒ１ ２ｎ＃＃坤
千コ；ｎはそれぞれθ、／、！、３゜り、ｊをあられし
、Ｙはアリール基をあられす。）を、Ｘはビニル基、−
ＣＨ２ＣＨ２−Ａ−Ｒ（Ａは酸素原子またはイオウ原子
を、Ｒは多塩基性酸の残基を表わす。）またはへロゲノ
エチル基をあられす。〕 で示される化合物またはそのアミノ基が保賎された化合
物とをアルカリの存在下反応させて得られる神体を用い
ることを特徴とする酵素の固定化方法を見い出した。
以下に本発明の詳細な説明する。水酸基および／またけ
アミノ基を有する高分子物質としてはビニルスルホン型
戊応性染料と反応しうるものであれはイ＋７１でもよく
、たとえばセルロース、アガロース、デンプンなどの多
糖類、ポリビニルアルコール、絹、羊毛彦どがあげられ
る。
アミノ基を有する高分子物質としてはビニルスルホン型
戊応性染料と反応しうるものであれはイ＋７１でもよく
、たとえばセルロース、アガロース、デンプンなどの多
糖類、ポリビニルアルコール、絹、羊毛彦どがあげられ
る。
一般式（Ｉ）で示される化合物としては、末端に７ミノ
基があり、他端にビニルスルホン型反応性染料の活性二
重結合反応基として通常用いられているビニルスルホニ
ル基、−８ｏ２−ＣＨ２ＣＨ２−Ａ−Ｒ（Ａ、Ｒ，け前
述のとおり）またはハロゲノエチルスルホニル基があれ
はよい１．Ｗは両端のアミノ基と−５０２−Ｘとの距離
を保つために存在するのであり、前述のような基であれ
ばよい。
基があり、他端にビニルスルホン型反応性染料の活性二
重結合反応基として通常用いられているビニルスルホニ
ル基、−８ｏ２−ＣＨ２ＣＨ２−Ａ−Ｒ（Ａ、Ｒ，け前
述のとおり）またはハロゲノエチルスルホニル基があれ
はよい１．Ｗは両端のアミノ基と−５０２−Ｘとの距離
を保つために存在するのであり、前述のような基であれ
ばよい。
さらに具体的に述べるならば、多＊卑゛性酸（その残基
がＲを表わす）としては、例えば硫酸、燐ｒｒｉ・たけ
その酸４Ｚｌ−Ｌｉｊがあげられる。へロゲノエチル基
のハロゲン原子とし２てけ地紫、臭素、ヨウ素かあＶＹ
られるが増素が好捷しい。
がＲを表わす）としては、例えば硫酸、燐ｒｒｉ・たけ
その酸４Ｚｌ−Ｌｉｊがあげられる。へロゲノエチル基
のハロゲン原子とし２てけ地紫、臭素、ヨウ素かあＶＹ
られるが増素が好捷しい。
脂肪族炭化水素基としては、＃捗または無置換のＣ１−
Ｃ５低級アルキレン基が、アリール基としてはたとえば
置換または無置換のフェニレン基、ナフチレン基が、脂
環式炭化水素基としてはＣ３−Ｃ７の低級シクロアルキ
レン基があげられるがもちろんこれに限定されるもので
は々い。
Ｃ５低級アルキレン基が、アリール基としてはたとえば
置換または無置換のフェニレン基、ナフチレン基が、脂
環式炭化水素基としてはＣ３−Ｃ７の低級シクロアルキ
レン基があげられるがもちろんこれに限定されるもので
は々い。
Ｗとして好ましいものとしては、置換または無置換のフ
ェニレン基があけられ、そのときの置換基として低級ア
ルキル基、低級アルコキシル専、ハロゲン原子等があげ
られる。
ェニレン基があけられ、そのときの置換基として低級ア
ルキル基、低級アルコキシル専、ハロゲン原子等があげ
られる。
さらに具体的にいうならば、一般式（１）で示される化
合物として、β−スルフアートエチルスルホニルアニリ
ン、β−スルフアートエチルスルホニルトルイジン、β
−スルフ了−トエチルスルホニルアニシジン、β−スル
フアートエチルスルホニルメトキシメチルアニリン、β
−スルフ丁−トエチルスルホニルハロゲノアニリン、β
−チオスルフアートエチルスルホニルアニリン、β−ホ
スフ了−トエチルスルホニルアニリン、ビニルスルホニ
ルアニリン、ビニルスルホニルトルイジン、β−スルフ
アートエチルスルホニルベンジルアミン、β−スルファ
ートエチ゛ルアニリノメタン、β−スルフアートエチル
スルホニルベンジルアミノエタン、β−クロロエチルス
ルホニルアニリン、β−クロロエチルスルホニルトルイ
ジン等があげられる。
合物として、β−スルフアートエチルスルホニルアニリ
ン、β−スルフアートエチルスルホニルトルイジン、β
−スルフ了−トエチルスルホニルアニシジン、β−スル
フアートエチルスルホニルメトキシメチルアニリン、β
−スルフ丁−トエチルスルホニルハロゲノアニリン、β
−チオスルフアートエチルスルホニルアニリン、β−ホ
スフ了−トエチルスルホニルアニリン、ビニルスルホニ
ルアニリン、ビニルスルホニルトルイジン、β−スルフ
アートエチルスルホニルベンジルアミン、β−スルファ
ートエチ゛ルアニリノメタン、β−スルフアートエチル
スルホニルベンジルアミノエタン、β−クロロエチルス
ルホニルアニリン、β−クロロエチルスルホニルトルイ
ジン等があげられる。
一般式（１）の７ミノ基が保護された化合物としては、
高分子物質と反応波、適当な分解反応にてフリーの７ミ
ノ基になる化合物であればよくたとえばビニルスルホン
型の反応性染料（例えばＣｍ １． Ｒｅａｃｔｉｖｅ
Ｙｅｌｌｏｗ ／ ３〜／ ７、α工。
高分子物質と反応波、適当な分解反応にてフリーの７ミ
ノ基になる化合物であればよくたとえばビニルスルホン
型の反応性染料（例えばＣｍ １． Ｒｅａｃｔｉｖｅ
Ｙｅｌｌｏｗ ／ ３〜／ ７、α工。
Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｒｅｄ 、２ ／ 〜ａ２３やＣ，
１，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｂｌａｃｋｊなど）またはアミ
ノ基が低級アルカノイル基で保諭された化合物、例えば
β−スルフアートエチルスルホニルアセトアミノベンゼ
ン、β−ホスフ了−トエチルスルホニルアセトアミノベ
ンゼンなどが挙げられる。
１，Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｂｌａｃｋｊなど）またはアミ
ノ基が低級アルカノイル基で保諭された化合物、例えば
β−スルフアートエチルスルホニルアセトアミノベンゼ
ン、β−ホスフ了−トエチルスルホニルアセトアミノベ
ンゼンなどが挙げられる。
本発明で用いられる酵素固定化用担体を製造するには、
ビニルスルホン型反応性染料の染着条件がそのまま適用
されるが、特に好捷しくけ浴比が／対１０θ以下の適当
な溶媒（例えば水）中水酸化ナトリウム、水散化カリウ
ム、第三リン酸ナトリウム、炭酪ナトリウム等の通常の
フルカリ剤の存在下、ｐｌ（に以−ヒ、好ましくはｐＨ
１／θ〜／、２、温度コθ〜に０°Ｃにて、さらに好
□ましくは電解質物質（例えば芒硝、食塩など）
：を適当ｔ（例えば−〜コθｗｔ％）添加し、
／〜数十時間攪拌接触させた後、十分に洗浄を行ない、
さらに好まｔ、 ＜は非イオンまたは弱７ニオン洗剤を
用いてンθ〜１０θ°Ｃにて、２〜２θ分程度のソーピ
ング処理を行ない、未反応分を除去することにより客側
に製造される。
ビニルスルホン型反応性染料の染着条件がそのまま適用
されるが、特に好捷しくけ浴比が／対１０θ以下の適当
な溶媒（例えば水）中水酸化ナトリウム、水散化カリウ
ム、第三リン酸ナトリウム、炭酪ナトリウム等の通常の
フルカリ剤の存在下、ｐｌ（に以−ヒ、好ましくはｐＨ
１／θ〜／、２、温度コθ〜に０°Ｃにて、さらに好
□ましくは電解質物質（例えば芒硝、食塩など）
：を適当ｔ（例えば−〜コθｗｔ％）添加し、
／〜数十時間攪拌接触させた後、十分に洗浄を行ない、
さらに好まｔ、 ＜は非イオンまたは弱７ニオン洗剤を
用いてンθ〜１０θ°Ｃにて、２〜２θ分程度のソーピ
ング処理を行ない、未反応分を除去することにより客側
に製造される。
一般式（１）の７ミノ基が保護された化合物と高分子物
質を反応させた場合には、アミノ基の保ゾ。
質を反応させた場合には、アミノ基の保ゾ。
護基は通常の方法、たとえばジアノ結合の歩合は還元、
低級アルカノイル基の場合は加水分解によりアミノ基に
導かれる。
低級アルカノイル基の場合は加水分解によりアミノ基に
導かれる。
このようにして得られた相体に酵素を固定化する。固定
化方法の一つとして、架橋結合法があるが、得られた担
体に酵素を架橋結合にて結合させるには、酵素の７ミノ
基と相体のスペーサー末端部の７ミノ基と反応しうる多
官能性試薬（例えばグルタルアルデヒド、グリオキサー
ル、マロンジアルデヒド、マレインジアルデヒド等のジ
アルデヒド化合物やヘキサメチレンジイソシアナート彦
ど）を用い、好ましくは緩衝液中、比較的低い温度で攪
拌混合する。
化方法の一つとして、架橋結合法があるが、得られた担
体に酵素を架橋結合にて結合させるには、酵素の７ミノ
基と相体のスペーサー末端部の７ミノ基と反応しうる多
官能性試薬（例えばグルタルアルデヒド、グリオキサー
ル、マロンジアルデヒド、マレインジアルデヒド等のジ
アルデヒド化合物やヘキサメチレンジイソシアナート彦
ど）を用い、好ましくは緩衝液中、比較的低い温度で攪
拌混合する。
この場合、酵素と相体を先に接触させた後に多官能性試
薬を加えることも、逆に担体と多官能性試薬を接触反応
させた後に酵素を添加することも、さらには同一系で三
者を混合接触させることも可能であり、Ｗｌ、素活性が
失なわれない限りにおいては、相体と酵素と多官能性試
薬との反応条件は特に制限されるものではない。
薬を加えることも、逆に担体と多官能性試薬を接触反応
させた後に酵素を添加することも、さらには同一系で三
者を混合接触させることも可能であり、Ｗｌ、素活性が
失なわれない限りにおいては、相体と酵素と多官能性試
薬との反応条件は特に制限されるものではない。
本発明で用いられる酵素固定化用担体に、酵素を固定化
する方法は架橋結合法に限られるものではなく、ジアゾ
法やこのアミノ基を他の官能基に費換して用いる方法も
適用できる。
する方法は架橋結合法に限られるものではなく、ジアゾ
法やこのアミノ基を他の官能基に費換して用いる方法も
適用できる。
本発明において用いられる酵素は、特に限定されるもの
ではない。
ではない。
以下に実施例で本発明の詳細な説明するが、本発明はこ
れによって限定されるものではない。
れによって限定されるものではない。
例中、部およびチは夫々重量部および重量％を表わす。
実施例／
（水不溶性担体の調製）
綿一部と硫酸ナトリウム７９部を、β−スルフアートエ
チルスルホニル−ｐ−アミノベンゼンｄ−７％水溶液／
θθ部に加え、り０°Ｃに”Ｉ２θ分間］愉拌後１．２
ｇ％水酸化ナトリウム（７） 水溶液にてｐＩ■を２．０にコントロールしつつ、６時
間混合担拌を行ない、反応終了伊、綿を炉別し、濡水コ
θθ部にて洗浄し、さらにθ、／チモノゲン（花王石鹸
株製）液７００部にて、９．５′〜／θθ°０で７０分
間煮沸し、水３０部にて洗浄炉別し、６θ°Ｃにて乾燥
した。得られた水不溶性］−１］体／ｙは、ジアゾ分析
から７ミノ基を０．９７ｍ−ｍｏｌｅ有していることが
判かった０ （酵素の固定化） θ、θ／％ラクターセパ液（ｐＨ＝ｊ、θの０．０３Ｍ
酢酸緩衝液）ｇθ部に、前記で調製した水不溶性担体／
部を加え１．２ｊ’Ｃにて９時間ゆるやかに攪拌後、ｐ
Ｈ＝、５．θのθ。３Ｍ酢酸緩衝液１０θ部にて洗浄し
イオン交換水グθ部と３％グルタルアルデヒド水溶液（
ｐａ＝４ｔ、ｔに調節）２０部を加え、７ｇ″Ｃにてβ
時間反応させた。
チルスルホニル−ｐ−アミノベンゼンｄ−７％水溶液／
θθ部に加え、り０°Ｃに”Ｉ２θ分間］愉拌後１．２
ｇ％水酸化ナトリウム（７） 水溶液にてｐＩ■を２．０にコントロールしつつ、６時
間混合担拌を行ない、反応終了伊、綿を炉別し、濡水コ
θθ部にて洗浄し、さらにθ、／チモノゲン（花王石鹸
株製）液７００部にて、９．５′〜／θθ°０で７０分
間煮沸し、水３０部にて洗浄炉別し、６θ°Ｃにて乾燥
した。得られた水不溶性］−１］体／ｙは、ジアゾ分析
から７ミノ基を０．９７ｍ−ｍｏｌｅ有していることが
判かった０ （酵素の固定化） θ、θ／％ラクターセパ液（ｐＨ＝ｊ、θの０．０３Ｍ
酢酸緩衝液）ｇθ部に、前記で調製した水不溶性担体／
部を加え１．２ｊ’Ｃにて９時間ゆるやかに攪拌後、ｐ
Ｈ＝、５．θのθ。３Ｍ酢酸緩衝液１０θ部にて洗浄し
イオン交換水グθ部と３％グルタルアルデヒド水溶液（
ｐａ＝４ｔ、ｔに調節）２０部を加え、７ｇ″Ｃにてβ
時間反応させた。
反応終了後、残存グルタルアルデヒドを十分１：のイオ
ン交換水にて洗浄し、固定化ラクターゼを作成した。
ン交換水にて洗浄し、固定化ラクターゼを作成した。
（に ）
得られた固定化ラクターゼ剤の酵素活性を測定したとこ
ろ、Ａ３．２μｍｒｎｏｌａ ／ Ｈｒ ／ Ｐ （乾
重量）の活性を示した。
ろ、Ａ３．２μｍｒｎｏｌａ ／ Ｈｒ ／ Ｐ （乾
重量）の活性を示した。
ここでラクターゼ活性は、／θチラクトース溶液を基質
とし３θ’Ｃ，ｐＨ＝ｊｓθにて反応させた時、７時間
に生成するグルコースのμ−ｍｏｌｅ数にて表した。
とし３θ’Ｃ，ｐＨ＝ｊｓθにて反応させた時、７時間
に生成するグルコースのμ−ｍｏｌｅ数にて表した。
実施例コ
（水不溶性担体の調製）
β−スルフアートエチルスルホニル−ｐ −７ミノベン
ゼンの代わシに、ビニルスルホニル−ｐ−７ミノベンゼ
ンを用いる以外は実施例／と］■１様の処理を行なった
よころ、得られた水不溶性担体／ｙはアミノ基をθ、
６３ｒｒｒ−ｍｏ １ ｅ有していた。
ゼンの代わシに、ビニルスルホニル−ｐ−７ミノベンゼ
ンを用いる以外は実施例／と］■１様の処理を行なった
よころ、得られた水不溶性担体／ｙはアミノ基をθ、
６３ｒｒｒ−ｍｏ １ ｅ有していた。
（酵素の固定化）
イオン交換水９６部に、前記で調製した水不溶性担体／
部を加え、／に°Ｃにて３チグリオキサール水溶液（ｐ
Ｈ＝１１．、！；に調節）７０部を添加し、７時間接触
後、イオン交換水／ｊθ部と０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝ｊ、θ）７９０部にて十分洗浄し、９．６７％ラク
ターゼ液（ｐＨ＝ふθ：ｏ、θ５Ｍ酢酸緩衝液）に０部
を加え２５″Ｃにてグ時間ゆるやかに攪拌し、その後θ
、３Ｍ酢酸緩債液（ｐＨ＝５．θ）７９０部とイオン交
換水５θθ部にて十分洗浄した。
部を加え、／に°Ｃにて３チグリオキサール水溶液（ｐ
Ｈ＝１１．、！；に調節）７０部を添加し、７時間接触
後、イオン交換水／ｊθ部と０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐ
Ｈ＝ｊ、θ）７９０部にて十分洗浄し、９．６７％ラク
ターゼ液（ｐＨ＝ふθ：ｏ、θ５Ｍ酢酸緩衝液）に０部
を加え２５″Ｃにてグ時間ゆるやかに攪拌し、その後θ
、３Ｍ酢酸緩債液（ｐＨ＝５．θ）７９０部とイオン交
換水５θθ部にて十分洗浄した。
かくして得られた固定化ラクターゼ剤の酵素活性を測定
したところ３７３μ−ｍｏｌｅ ／ Ｈｒ ／ ｆ（朝
市′＠′）の活性を示した。
したところ３７３μ−ｍｏｌｅ ／ Ｈｒ ／ ｆ（朝
市′＠′）の活性を示した。
実施例３
（水不溶性相体の調’Ｒ）
β−スルフアートエチルスルホニル−ｐ −７ミノベン
ゼンの代わりに、β−スルフアートエチルスルホニル−
ｍ−７ミノベンゼンをｐＨ調整剤として、２ｇ％水酸水
酸化ナトリウム水溶式わりに、−〇チ炭酸ナトリウム水
溶液を用いる以外は、実施例／と同様の処理を行なった
。
ゼンの代わりに、β−スルフアートエチルスルホニル−
ｍ−７ミノベンゼンをｐＨ調整剤として、２ｇ％水酸水
酸化ナトリウム水溶式わりに、−〇チ炭酸ナトリウム水
溶液を用いる以外は、実施例／と同様の処理を行なった
。
得られた水工′＃８ｉ性担体／ｙはアミノ基をθ＋６３
＋ｒｒ−＋ｎｏ ｌ ｅ有している。
＋ｒｒ−＋ｎｏ ｌ ｅ有している。
（酵素の一定化）
イオン交換水７０部に、前記で調製した水不溶性担体／
部を加え、／に°Ｃにて３％グルタルアルデヒド水溶液
（ｐＨ÷１．ｊに調節）−０部を添加し、一時間接触稜
、イオン交換水３０部と０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ±
６．０）７９０部にて十分洗浄し、０．０７％グルコア
ミラーゼ液（ｐＨ＝５．θ；θ、ＯＪ Ｍ酢酸緩衝液）
７９０部を加え、２／°Ｃにてり時間ゆるやかに攪拌し
、その稜θ、３Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．θ）−００部
とイオン交換水５００部にて十分洗浄した。
部を加え、／に°Ｃにて３％グルタルアルデヒド水溶液
（ｐＨ÷１．ｊに調節）−０部を添加し、一時間接触稜
、イオン交換水３０部と０．０５Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ±
６．０）７９０部にて十分洗浄し、０．０７％グルコア
ミラーゼ液（ｐＨ＝５．θ；θ、ＯＪ Ｍ酢酸緩衝液）
７９０部を加え、２／°Ｃにてり時間ゆるやかに攪拌し
、その稜θ、３Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ＝５．θ）−００部
とイオン交換水５００部にて十分洗浄した。
かくして得られた固定化グルロアミラーゼ剤の酵素活性
を測定したところ、ダθ１μｍｍｏｌａＡＩｒ／Ｆ（乾
重ｔ）の活性を示した〇 ここで、グルコアミラーゼ活性は、７％可溶性デンプン
を基質とし、りθ℃、声ヌｊ、θで反応させた時に、７
時間に生成するグルコースのμｍｍａｔｅ数にて表わし
た。
を測定したところ、ダθ１μｍｍｏｌａＡＩｒ／Ｆ（乾
重ｔ）の活性を示した〇 ここで、グルコアミラーゼ活性は、７％可溶性デンプン
を基質とし、りθ℃、声ヌｊ、θで反応させた時に、７
時間に生成するグルコースのμｍｍａｔｅ数にて表わし
た。
実施例亭
（水不溶性担体の詞１！Ｉ）
（／／）
セルロースパウダー一部と塩化ナトリウム／θ部ヲβ−
スルフアートエチルスルホニル−〇−７ミノベンゼン／
θ係水溶ｉＫ加え、５０°Ｃにて／時間攪拌後−〇係第
三リン酸ナトリウム水溶液にて坪を？、ｊにコントロー
ルしつつ７０時間攪拌し、反応終了後、実施例／と同様
の方法にて、洗浄、ソーピング処理を行たった。
スルフアートエチルスルホニル−〇−７ミノベンゼン／
θ係水溶ｉＫ加え、５０°Ｃにて／時間攪拌後−〇係第
三リン酸ナトリウム水溶液にて坪を？、ｊにコントロー
ルしつつ７０時間攪拌し、反応終了後、実施例／と同様
の方法にて、洗浄、ソーピング処理を行たった。
得られた水不溶性担体／ｊｌは、アミノ基をθ１．夕９
ｍ−ｍｏｌｅ有していた。
ｍ−ｍｏｌｅ有していた。
（酵素の固定化）
実施例／と同様の方法にて、前記で得られた水不溶性担
体にラクターゼを固定化した。
体にラクターゼを固定化した。
得られり固定化ラクターゼ剤の酵素活性は、２．２／
ｐ−ｍｏ／、ｅ／Ｂｒ／７Ｆ （乾重量）でｌった。
ｐ−ｍｏ／、ｅ／Ｂｒ／７Ｆ （乾重量）でｌった。
実施例Ｓ
（水不溶性相体のｖＩ４製）
ビニ１２７０部をβ−スルフアートエチルスルホニル−
ｐ−７ミノベンゼン／ｉ％水溶液３θθ部に加え、ダθ
°Ｃにて／時間混合攪拌（７，２） 後、−〇チ炭酸ナトリウム水溶液にて坪をり、θにコン
トロールして、−５時間攪拌を継続した。反応終了後、
実施例／と同様の方法にて。
ｐ−７ミノベンゼン／ｉ％水溶液３θθ部に加え、ダθ
°Ｃにて／時間混合攪拌（７，２） 後、−〇チ炭酸ナトリウム水溶液にて坪をり、θにコン
トロールして、−５時間攪拌を継続した。反応終了後、
実施例／と同様の方法にて。
洗浄、ソーとング処理を行なった。
得られた水不溶性担体／Ｐは、アミノ基をθ、θ？ ｍ
−ｍｏム有していた。
−ｍｏム有していた。
（酵素の固定化）
０．０５％セルラーゼ液（ｐＨ＝ ４’ −ｊ ；０．
０５Ｍ酢酸緩衝液）７９０部に、前記で得られた水不溶
性担体／部を加え、３部°Ｃにて３時間ゆるやかに攪拌
した援、３％グルタルアルデヒド水溶液（ｐＨｍａ、ｓ
に調節）−０部を加え、７５℃にて２時間反応した。反
応終了後、十分量の声−り、ｊ；θ、ＪＭ酢酸緩衝液と
イオン交換水にて洗浄し九〇 得られた固定化セルラーゼ剤の酵素活性を測定したとζ
ろ、／りμｍｍｏｔａ／Ｈｒ／タ （乾重量）の活性を
示し九〇 ここで、セルラーゼ活性は、７％可溶性デンプンを基質
とし１、りθ’Ｃ１ｐＨ□り、ｊで反応させ、７時間で
生成するグルコースのμ−師ム数にて表わした０ 実施例乙 反応性染料Ｓｕｍｉｒｉｚ ＢムｏｋＢ、■ （住友化
学工業に、に品 （一部Ｈａ塩も存在する））−０部と綿７０部を３００
部の水に添加し１．２θチ炭酸ナトリウム水溶液にて坪
を／θ、θにコントロールしつつ３０°Ｃにて一〇時間
反応させ、十分量の混水で洗浄を行ない、更にθ、／％
モノゲン（花王石鹸蛛Ｗ）水溶液９００部に懸濁させ、
９Ｓ〜／θθ°Ｃにて７０分間ソーとング処理を行ない
、十分に洗浄した後、ハイドロサルファイドｑ部を加え
、ｉ、ｓ〜７θ°Ｃにて１時間処理を行なうことによシ
ジアゾ結合を還元し、アミノ基とした０ 得られた水不溶性担体／Ｆは、アミノ基をθ、／ル声−
ｔｎａｔｓ有していたり （酵素の固定化） 実施例／と同様の方法にて、前記で得られた水不溶性担
体にラクターゼを固定化した。
０５Ｍ酢酸緩衝液）７９０部に、前記で得られた水不溶
性担体／部を加え、３部°Ｃにて３時間ゆるやかに攪拌
した援、３％グルタルアルデヒド水溶液（ｐＨｍａ、ｓ
に調節）−０部を加え、７５℃にて２時間反応した。反
応終了後、十分量の声−り、ｊ；θ、ＪＭ酢酸緩衝液と
イオン交換水にて洗浄し九〇 得られた固定化セルラーゼ剤の酵素活性を測定したとζ
ろ、／りμｍｍｏｔａ／Ｈｒ／タ （乾重量）の活性を
示し九〇 ここで、セルラーゼ活性は、７％可溶性デンプンを基質
とし１、りθ’Ｃ１ｐＨ□り、ｊで反応させ、７時間で
生成するグルコースのμ−師ム数にて表わした０ 実施例乙 反応性染料Ｓｕｍｉｒｉｚ ＢムｏｋＢ、■ （住友化
学工業に、に品 （一部Ｈａ塩も存在する））−０部と綿７０部を３００
部の水に添加し１．２θチ炭酸ナトリウム水溶液にて坪
を／θ、θにコントロールしつつ３０°Ｃにて一〇時間
反応させ、十分量の混水で洗浄を行ない、更にθ、／％
モノゲン（花王石鹸蛛Ｗ）水溶液９００部に懸濁させ、
９Ｓ〜／θθ°Ｃにて７０分間ソーとング処理を行ない
、十分に洗浄した後、ハイドロサルファイドｑ部を加え
、ｉ、ｓ〜７θ°Ｃにて１時間処理を行なうことによシ
ジアゾ結合を還元し、アミノ基とした０ 得られた水不溶性担体／Ｆは、アミノ基をθ、／ル声−
ｔｎａｔｓ有していたり （酵素の固定化） 実施例／と同様の方法にて、前記で得られた水不溶性担
体にラクターゼを固定化した。
得られた固定化ラクターゼ剤の酵素活性を測定したとこ
ろ、／／１３ ＪＪ−ｍｇｅ／Ｈｒ／Ｐ （乾重量）の
活性を示した＠ −の代わシに、βスルフ アートエチルスルホニルｐ−７セト７ミノベ１νゼンを
用いる以外は、実施例／と同様の処理を行ない、更に２
１部％水酸化ナトリウム水溶液／θ部と水り０部を加え
、ｔｏ−ｉｓ″Ｃにて６時間加水分解処理を行なり九〇 得られた水不溶性担体／ｆＢ、アミノ基をρ、θＡｍ−
５ｏｊａ有していた〇 （酵素の固定化） 実施例／と同様の方法にて、前記で魯られた水不溶性担
体にラクターゼを固定化した。
ろ、／／１３ ＪＪ−ｍｇｅ／Ｈｒ／Ｐ （乾重量）の
活性を示した＠ −の代わシに、βスルフ アートエチルスルホニルｐ−７セト７ミノベ１νゼンを
用いる以外は、実施例／と同様の処理を行ない、更に２
１部％水酸化ナトリウム水溶液／θ部と水り０部を加え
、ｔｏ−ｉｓ″Ｃにて６時間加水分解処理を行なり九〇 得られた水不溶性担体／ｆＢ、アミノ基をρ、θＡｍ−
５ｏｊａ有していた〇 （酵素の固定化） 実施例／と同様の方法にて、前記で魯られた水不溶性担
体にラクターゼを固定化した。
（／ｊ ）
得られた固定化ラクターゼ剤の酵素活性を測定したとこ
ろ１．２／７１． ｐ−ｍｏ＆／Ｈｒ／ｊ’ （乾重量
）の活性を示した０ 参考例／ 実施例／にて作成した固定化ラクターゼ剤を、冷厳庫中
に湿潤状態で保存し、／θ日稜の酵素活性を測定したと
ころ、／／９μ−ｍｏｌβ／ｍｉｎ／７ （乾重量）の
活性を示した０参考例コ 実施例／にて作成した固定化ラクターゼ剤を用いて１．
２日毎に酵素反応をｊ回繰夛返し使用した０ 結果を表−／に示す＠ ３回の再使用において、本固定化ラクターゼ剤は、ｆｌ
とんど酵素活性の低下を示していかかったＯ 表 −７ （／ ６ ）
ろ１．２／７１． ｐ−ｍｏ＆／Ｈｒ／ｊ’ （乾重量
）の活性を示した０ 参考例／ 実施例／にて作成した固定化ラクターゼ剤を、冷厳庫中
に湿潤状態で保存し、／θ日稜の酵素活性を測定したと
ころ、／／９μ−ｍｏｌβ／ｍｉｎ／７ （乾重量）の
活性を示した０参考例コ 実施例／にて作成した固定化ラクターゼ剤を用いて１．
２日毎に酵素反応をｊ回繰夛返し使用した０ 結果を表−／に示す＠ ３回の再使用において、本固定化ラクターゼ剤は、ｆｌ
とんど酵素活性の低下を示していかかったＯ 表 −７ （／ ６ ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 水酸基および／またはアミノ基を有する高分子物質と一
般式 ％式％ 〔式中、Ｗは脂肪族炭化水素基、脂肪族炭化水素基、ま
たは−（ＣＨ２）ｍＹ （ＣＨ２）Ｈ（式中ｍ、ｎはそ
れぞれθ、／、虎、３．グ、ｊをあられし、Ｙはアリー
ル基をあられず。）をＸはビニル基、−ＣＩ（２ＣＨ２
−Ａ−Ｒ（Ａは酸素原子またけイオウ原子を、Ｒけ多塩
基性酸の残基を表わす。）またはハロゲノエチル基をあ
られす。〕 で示される化合物またはそのアミノ基が保神された化合
物とをアルカリの存在下反応させて得られる４１１体を
用いることを特徴とする酵木の同定化方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11499482A JPS596887A (ja) | 1982-07-01 | 1982-07-01 | 酵素の固定化方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP11499482A JPS596887A (ja) | 1982-07-01 | 1982-07-01 | 酵素の固定化方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS596887A true JPS596887A (ja) | 1984-01-13 |
| JPH0346106B2 JPH0346106B2 (ja) | 1991-07-15 |
Family
ID=14651678
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11499482A Granted JPS596887A (ja) | 1982-07-01 | 1982-07-01 | 酵素の固定化方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS596887A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60237993A (ja) * | 1984-05-10 | 1985-11-26 | Toyobo Co Ltd | 水酸基含有繊維への酵素固定化法 |
-
1982
- 1982-07-01 JP JP11499482A patent/JPS596887A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS60237993A (ja) * | 1984-05-10 | 1985-11-26 | Toyobo Co Ltd | 水酸基含有繊維への酵素固定化法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0346106B2 (ja) | 1991-07-15 |
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