JPS6012025B2 - ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 - Google Patents
ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法Info
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- JPS6012025B2 JPS6012025B2 JP10438781A JP10438781A JPS6012025B2 JP S6012025 B2 JPS6012025 B2 JP S6012025B2 JP 10438781 A JP10438781 A JP 10438781A JP 10438781 A JP10438781 A JP 10438781A JP S6012025 B2 JPS6012025 B2 JP S6012025B2
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、スーパーオキサイド・ジスムターゼ（以下Ｓ
．０．Ｄと略す）の新規な分離精製法に関する。
．０．Ｄと略す）の新規な分離精製法に関する。
Ｓ．〇．Ｄは、１９６乎王、フリードビッチとマッコー
ド等によりキサンチンオキシターゼの研究に於いて、そ
の中間生成物のスーパーオキサィド（０２‐）を分解す
る酵素として、最初に見出された。
ド等によりキサンチンオキシターゼの研究に於いて、そ
の中間生成物のスーパーオキサィド（０２‐）を分解す
る酵素として、最初に見出された。
その後、Ｓ．０．Ｄは、生体の酸素毒性防御機構という
観点から注目され、現在は、抗炎症剤として慢性関節リ
ウマチ、変形性関節症、放射線照射による副作用、ある
種の泌尿器疾患などの治療に用いられている。従来、Ｓ
．０．Ｄの精製法としては、加熱処理、硫安塩析をはじ
めとして、ＤＥＡＥーセルロース〔Ｊｏｕｒ佃ｌ ｏｆ
ＢｉｏｌｏｇｃａＩ ＣｈｅｍｉＳｂｙ，２４４（２２
）６ｏ４９（１９４９）．〕，ＤＥＡＥーセフアデツク
ス，セフアデツクスＧ−１００ Ｕｏｍ肌ｌ ｏｆ Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔび，８５１３９７（１９７９）．〕
，ＣＭーセルロース，ＣＭ−セフアデツクス，セフアデ
ツクスＧ一７５〔Ｊｏｕｍａｌｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｃａ
ｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４８（ １０）３５８２（
１９７３）．〕，ハイドロキシアパタイト〔Ｊｏｕｍａ
ｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔひ，２５２
（１８）６４２１（１９７７）．〕等を用いて精製する
方法が知られている。
観点から注目され、現在は、抗炎症剤として慢性関節リ
ウマチ、変形性関節症、放射線照射による副作用、ある
種の泌尿器疾患などの治療に用いられている。従来、Ｓ
．０．Ｄの精製法としては、加熱処理、硫安塩析をはじ
めとして、ＤＥＡＥーセルロース〔Ｊｏｕｒ佃ｌ ｏｆ
ＢｉｏｌｏｇｃａＩ ＣｈｅｍｉＳｂｙ，２４４（２２
）６ｏ４９（１９４９）．〕，ＤＥＡＥーセフアデツク
ス，セフアデツクスＧ−１００ Ｕｏｍ肌ｌ ｏｆ Ｂ
ｉｏｃｈｅｍｉｓｔび，８５１３９７（１９７９）．〕
，ＣＭーセルロース，ＣＭ−セフアデツクス，セフアデ
ツクスＧ一７５〔Ｊｏｕｍａｌｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｃａ
ｌ ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２４８（ １０）３５８２（
１９７３）．〕，ハイドロキシアパタイト〔Ｊｏｕｍａ
ｌｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈｅｍｉｓｔひ，２５２
（１８）６４２１（１９７７）．〕等を用いて精製する
方法が知られている。
しかしながら、これらの方法では、処理工程中に脱塩処
理を必要としたり、吸着剤に吸着するのに長時間要し、
かつ吸着剤のメズマリ等の問題があるため、工業的に有
利な方法とは言い難い。
理を必要としたり、吸着剤に吸着するのに長時間要し、
かつ吸着剤のメズマリ等の問題があるため、工業的に有
利な方法とは言い難い。
本発明者等は、これらの問題を解決するための鋭意研究
の結果、本発明を完成した。すなわち、本発明は粗製Ｓ
．０．Ｄ溶液をフェニール基またはオクテル基の結合し
た架橋アガロースゲルに接触させ、吸着したＳ．０．Ｄ
を溶離採取することを特徴とするＳ．０．Ｄ精製法に関
するものである。
の結果、本発明を完成した。すなわち、本発明は粗製Ｓ
．０．Ｄ溶液をフェニール基またはオクテル基の結合し
た架橋アガロースゲルに接触させ、吸着したＳ．０．Ｄ
を溶離採取することを特徴とするＳ．０．Ｄ精製法に関
するものである。
本発明に使用するフエニール基またはオクチル基の結合
した架橋アガロースゲルは、ファルマシア・ファイン・
ケミカル社より「フェニールセフアロースＣＬ‐伍」及
び「オクチル・セファロースＣＬ‐の」の商品名で市販
されているものが使用出来る。
した架橋アガロースゲルは、ファルマシア・ファイン・
ケミカル社より「フェニールセフアロースＣＬ‐伍」及
び「オクチル・セファロースＣＬ‐の」の商品名で市販
されているものが使用出来る。
これらフヱニールセフアロースＣＬ一』Ｂまたはオクチ
ル・セファロースＣＬ−のを製造するために用いられて
いるマトリックスとしてのセフアロースＣＬ‐姫はアガ
ロースを、２，３ジブロモ・プロパノールで架橋し、更
に、還元条件で、アルカリ加水分解して脱硫酸したもの
である。
ル・セファロースＣＬ−のを製造するために用いられて
いるマトリックスとしてのセフアロースＣＬ‐姫はアガ
ロースを、２，３ジブロモ・プロパノールで架橋し、更
に、還元条件で、アルカリ加水分解して脱硫酸したもの
である。
フェニール基またはオクチル基は、セフアロースＣＬ−
岬と相当するグリシチィールェーテル反応させて、それ
ぞれマトリックスに結合させたものである。本発明で用
いる出発原料の粗製Ｓ．０．Ｄは、生物界において非常
に広い範囲にわたり分布しているものを適宜利用するこ
とが出来、特に起源を限定するものではないが、通常、
ヒト，ウシ，ニワトリ，ウサギ，サル，ラツト等の血液
又は胎盤より公知の方法で予備精製した物が好ましい。
岬と相当するグリシチィールェーテル反応させて、それ
ぞれマトリックスに結合させたものである。本発明で用
いる出発原料の粗製Ｓ．０．Ｄは、生物界において非常
に広い範囲にわたり分布しているものを適宜利用するこ
とが出来、特に起源を限定するものではないが、通常、
ヒト，ウシ，ニワトリ，ウサギ，サル，ラツト等の血液
又は胎盤より公知の方法で予備精製した物が好ましい。
特に好ましいのは、ヒト，又はウシの血液の赤血球又は
胎盤より次のいずれかの方法で予備精製した物が好まし
い。すなわち新鮮なヒト又はウシの血液を、クエン酸ソ
ーダ等血液凝固阻害物質の共存する状態で採取し、冷却
遠心して、上蒲の血鰍を除き、沈澱物の赤血球を、生理
食塩水で２〜３回洗浄して採取する。このものは更に、
次の何れかの方法により処理して本発明の出発原料とし
て使用するのが好ましい。即ち■超音波処理又は、サポ
ニン処理等で溶皿後、ＤＥＡＥセルロースで精製したも
のを使用するか、又は■水を加えて、溶血後、土橋法処
理〔ッチバシ法；バイオヘミツシエ・ツアイトシユリフ
ト１４０，６３（１９２３）〕により（エタノール＋ク
ロロホルム＋水）を加えて燈拝し、遠心分離でヘモグロ
ビンを沈降除去し、Ｋ２ＨＰ０４を加えて再度遠心分離
して得た上清液に０．７弦容量のアセトンを加えて沈澱
を生じさせ、この沈澱を水に溶かして、粗製Ｓ．０．０
として用いる。本発明に於いて，フェニールセフアロー
スＣＬ一辺Ｂまたはオクチル・セフアロースＣＬ−４Ｂ
と接触させる粗製Ｓ．０．Ｄは、あらかじめ１．３〜１
．９Ｍ濃度の塩類を加え０．２Ｍリン酸第１カリウム又
は、リン酸第２カリウムでｐＨ５〜９、好ましくは、６
．５〜７．５に調整して使用する。ここで用いられる塩
類は、陰イオンとして、Ｐ〇葦−，Ｓ〇孝−，ＣＨ３Ｃ
〇〇−，Ｃ そ− ，Ｂｒ−，Ｎ０３−，Ｃ夕０４−，
１−，ＳＣＮ‐，等腸イオンとして、ＮＨ４十，Ｒｂ＋
，Ｋ＋，Ｎａ十，Ｃｓ＋，Ｌｉ＋，Ｍ多十，Ｃａ２十，
Ｂａ２十，等を適宜組合わせたものが代表例として上げ
られるが、通常、硫酸アンモン，リン酸カリ，リン酸ナ
トリウム，リン酸アンモニウム，塩化アンモニウム，塩
化カリ，塩化ナトリウム等が適当である。
胎盤より次のいずれかの方法で予備精製した物が好まし
い。すなわち新鮮なヒト又はウシの血液を、クエン酸ソ
ーダ等血液凝固阻害物質の共存する状態で採取し、冷却
遠心して、上蒲の血鰍を除き、沈澱物の赤血球を、生理
食塩水で２〜３回洗浄して採取する。このものは更に、
次の何れかの方法により処理して本発明の出発原料とし
て使用するのが好ましい。即ち■超音波処理又は、サポ
ニン処理等で溶皿後、ＤＥＡＥセルロースで精製したも
のを使用するか、又は■水を加えて、溶血後、土橋法処
理〔ッチバシ法；バイオヘミツシエ・ツアイトシユリフ
ト１４０，６３（１９２３）〕により（エタノール＋ク
ロロホルム＋水）を加えて燈拝し、遠心分離でヘモグロ
ビンを沈降除去し、Ｋ２ＨＰ０４を加えて再度遠心分離
して得た上清液に０．７弦容量のアセトンを加えて沈澱
を生じさせ、この沈澱を水に溶かして、粗製Ｓ．０．０
として用いる。本発明に於いて，フェニールセフアロー
スＣＬ一辺Ｂまたはオクチル・セフアロースＣＬ−４Ｂ
と接触させる粗製Ｓ．０．Ｄは、あらかじめ１．３〜１
．９Ｍ濃度の塩類を加え０．２Ｍリン酸第１カリウム又
は、リン酸第２カリウムでｐＨ５〜９、好ましくは、６
．５〜７．５に調整して使用する。ここで用いられる塩
類は、陰イオンとして、Ｐ〇葦−，Ｓ〇孝−，ＣＨ３Ｃ
〇〇−，Ｃ そ− ，Ｂｒ−，Ｎ０３−，Ｃ夕０４−，
１−，ＳＣＮ‐，等腸イオンとして、ＮＨ４十，Ｒｂ＋
，Ｋ＋，Ｎａ十，Ｃｓ＋，Ｌｉ＋，Ｍ多十，Ｃａ２十，
Ｂａ２十，等を適宜組合わせたものが代表例として上げ
られるが、通常、硫酸アンモン，リン酸カリ，リン酸ナ
トリウム，リン酸アンモニウム，塩化アンモニウム，塩
化カリ，塩化ナトリウム等が適当である。
吸着剤のゲルは、Ｓ．０．Ｄ２３００〜４６０山単位／
の‘の割合で使用するのが適当であり、吸着工程及び洗
浄工程に於ける流液の比速度（１時間当りの流量／ベッ
ドボリウム）は１．５以下が好ましい。
の‘の割合で使用するのが適当であり、吸着工程及び洗
浄工程に於ける流液の比速度（１時間当りの流量／ベッ
ドボリウム）は１．５以下が好ましい。
Ｓ．０．Ｄの綾織はｐＨ７〜９の水又は１．３〜１．８
Ｍ硫安−水の濃度勾配法により、比速度０．５以下で行
うのが適当である。使用済みゲルは水洗後、１２０ｑｏ
、１５分処理するか、又は０．１Ｍカセイソーダ、水洗
「０．１Ｍ酢酸ソーダ洗浄を２〜３回、繰り返し、再使
用できる。本発明の精製法の特徴は次のごとくである。
Ｍ硫安−水の濃度勾配法により、比速度０．５以下で行
うのが適当である。使用済みゲルは水洗後、１２０ｑｏ
、１５分処理するか、又は０．１Ｍカセイソーダ、水洗
「０．１Ｍ酢酸ソーダ洗浄を２〜３回、繰り返し、再使
用できる。本発明の精製法の特徴は次のごとくである。
■ ゲルは安定性が良いので、１２０℃でのオートクレ
ープによる滅菌が出来、かつ繰り返し使用が可能である
。■ ゲルへのＳ．０．Ｄの選択的吸着性が大きいので
、作業時間が短かく済み、Ｓ．０．Ｄの活性低下がみら
れない。
ープによる滅菌が出来、かつ繰り返し使用が可能である
。■ ゲルへのＳ．０．Ｄの選択的吸着性が大きいので
、作業時間が短かく済み、Ｓ．０．Ｄの活性低下がみら
れない。
■ 高塩濃度で吸着させることができるため、処理が容
易である。
易である。
■ 溶出が水又は水性溶媒であるので濃縮が簡単であり
、かつ後処理で脱塩工程を入れる必要がない。
、かつ後処理で脱塩工程を入れる必要がない。
本発明に於いて、Ｓ．０．Ｄの活性測定はキサンチンと
キサンチンオキシターゼの反応により生じたスーパーオ
キサイド（０２‐）による酸化型チトクロームＣの還元
をＳ．０．Ｄが阻害することを利用したマツコード及び
フリードビツチ法にもとづいて行った。
キサンチンオキシターゼの反応により生じたスーパーオ
キサイド（０２‐）による酸化型チトクロームＣの還元
をＳ．０．Ｄが阻害することを利用したマツコード及び
フリードビツチ法にもとづいて行った。
溶出の各分画は２６５ｈ山と２８仇ｈムの吸光度を測定
し、吸光度比ＯＤ２６５／ＯＤ２８０＞１を目安として
、Ｓ．０．Ｄ区分を選択した。〔ジェー・ェム・マツコ
ードとフリードビツチ；ジヤーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリ−，２４４（２２）６０４９（１９６
９）〕，蛋白質の定量はローリー法〔ローリー・オー・
エッチ；ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー，１９３，２６５（１９５１）〕によつた。以下、
本発明の出発原料として好適に使用出来る粗製Ｓ．０．
Ｄを調製するための予備精製法を参考例で示す。
し、吸光度比ＯＤ２６５／ＯＤ２８０＞１を目安として
、Ｓ．０．Ｄ区分を選択した。〔ジェー・ェム・マツコ
ードとフリードビツチ；ジヤーナル・オブ・バイオロジ
カル・ケミストリ−，２４４（２２）６０４９（１９６
９）〕，蛋白質の定量はローリー法〔ローリー・オー・
エッチ；ジヤーナル・オブ・バイオロジカル・ケミスト
リー，１９３，２６５（１９５１）〕によつた。以下、
本発明の出発原料として好適に使用出来る粗製Ｓ．０．
Ｄを調製するための予備精製法を参考例で示す。
参考例 １新鮮な牛血液２そを、３．８％クエン酸ナト
リウム１ク中に採取し、２℃，２５００×Ｇ，２び分、
遠心分離する。
リウム１ク中に採取し、２℃，２５００×Ｇ，２び分、
遠心分離する。
上蒲液を除去後、沈降した赤血球を生理食塩水で３回洗
浄し、この赤血球沈澱１客に水１容を加えて、溶血させ
る。この全量を士橋法にしたがい、エチルアルコール０
．２５客、クロロホルム０．１５客、水０．１客を加え
て、十分混合し、ごらに５℃，２び分間、鷹拝し、黒褐
色の混合物を２５００×Ｇ，２び分間遠○し、ヘモグロ
ビン等を除去後、上情にリン酸第２カリウムを０．総／
の‘の割合で加え十分混合し、１５分間室温に静遣し、
２層に分離した淡褐色上層を、２５００×Ｇ，２■ト間
遠○し、淡黄色上情を得る。これに冷アセトン０．７５
客混合し、２５００×Ｇ，１粉ご間冷却遠Ｄして、白色
沈澱物を得、これを洗浄赤血球の約１／１畔客の水で溶
かし、１００００×Ｇ，２０分間冷却遠心して、透明な
上清９５の‘を得た。この物はＳ．０．Ｄ３４７２単位
／の‘（比活性４１７単位／の９蛋白）の粗製Ｓ．０．
Ｄであり、本発明方法により、精製するための出発原料
として好適に使用出来る。参考例 ２ 娩出されたヒトの胎盤の外側を充分水洗してポリエチレ
ン袋に入れ直ちに凍結したものｌｋｇを径５肋以上の粗
大片を認めなくなるまで〈だき、０．９％食塩水２そを
加え、５℃で一夜燈枠抽出し、２５００×Ｇ，２０分間
遠心分離して固形物を除き上情を得る。
浄し、この赤血球沈澱１客に水１容を加えて、溶血させ
る。この全量を士橋法にしたがい、エチルアルコール０
．２５客、クロロホルム０．１５客、水０．１客を加え
て、十分混合し、ごらに５℃，２び分間、鷹拝し、黒褐
色の混合物を２５００×Ｇ，２び分間遠○し、ヘモグロ
ビン等を除去後、上情にリン酸第２カリウムを０．総／
の‘の割合で加え十分混合し、１５分間室温に静遣し、
２層に分離した淡褐色上層を、２５００×Ｇ，２■ト間
遠○し、淡黄色上情を得る。これに冷アセトン０．７５
客混合し、２５００×Ｇ，１粉ご間冷却遠Ｄして、白色
沈澱物を得、これを洗浄赤血球の約１／１畔客の水で溶
かし、１００００×Ｇ，２０分間冷却遠心して、透明な
上清９５の‘を得た。この物はＳ．０．Ｄ３４７２単位
／の‘（比活性４１７単位／の９蛋白）の粗製Ｓ．０．
Ｄであり、本発明方法により、精製するための出発原料
として好適に使用出来る。参考例 ２ 娩出されたヒトの胎盤の外側を充分水洗してポリエチレ
ン袋に入れ直ちに凍結したものｌｋｇを径５肋以上の粗
大片を認めなくなるまで〈だき、０．９％食塩水２そを
加え、５℃で一夜燈枠抽出し、２５００×Ｇ，２０分間
遠心分離して固形物を除き上情を得る。
以下参考例１に倣って土橋法処理，アセトン処理，冷却
遠心等により透明な上情５０の‘を得た。この物はＳ．
０．Ｄ３５０山単位／のと（比活性：７５０単位／雌蛋
白）の粗製Ｓ．０．Ｄであり本発明方法により精製する
ための出発原料として好適に使用出来る。実施例 １ 参考例１で得た粗製Ｓ．０．Ｄに硫安１７．１ｇを加え
て溶かし、０．２Ｍリン酸第一カリウムでｐＨ６．８‘
こ修正する。
遠心等により透明な上情５０の‘を得た。この物はＳ．
０．Ｄ３５０山単位／のと（比活性：７５０単位／雌蛋
白）の粗製Ｓ．０．Ｄであり本発明方法により精製する
ための出発原料として好適に使用出来る。実施例 １ 参考例１で得た粗製Ｓ．０．Ｄに硫安１７．１ｇを加え
て溶かし、０．２Ｍリン酸第一カリウムでｐＨ６．８‘
こ修正する。
この溶液をあらかじめｐＨ６．８の緩衝液（１．４Ｍ硫
安＋０．０９Ｍリン酸）で、平衡化したフェニールセフ
ァロースＣＬ−砥８０叫を充填した力ラム（径２．０ｃ
の，高さ２５．５狐）に流速１２０の【／時間で通過さ
せて、Ｓ．０．Ｄを吸着させる。ｐＨ６．８の緩衝液（
１．４Ｍ硫安十０．０９Ｍリン酸カリ）８０羽で洗浄し
、ついで、ｐＨ９の水（０．１ＭカセイソーダでｐＨ９
に調整）で流速４０の上／時間で溶出する。この溶出パ
ターンは第１図に示す。Ｓ．０．Ｄ活性の高い区分（Ｆ
ｒ１４〜Ｆｒｌ９）から得たＳ．０．Ｄの比活性は、７
２００単位／の９蛋白であり、粗製Ｓ．０．Ｄからの活
性収率は９５％であった。実施例 ２ フェニルセファロースＣＬ−碑の代りにオクチル・セフ
ァロースＣＬ−碑を使用する外は実施例１と同一の操作
を行い比活・性６８００単位／舵９蛋白のＳ．０．Ｄを
活性収率９６％で得た。
安＋０．０９Ｍリン酸）で、平衡化したフェニールセフ
ァロースＣＬ−砥８０叫を充填した力ラム（径２．０ｃ
の，高さ２５．５狐）に流速１２０の【／時間で通過さ
せて、Ｓ．０．Ｄを吸着させる。ｐＨ６．８の緩衝液（
１．４Ｍ硫安十０．０９Ｍリン酸カリ）８０羽で洗浄し
、ついで、ｐＨ９の水（０．１ＭカセイソーダでｐＨ９
に調整）で流速４０の上／時間で溶出する。この溶出パ
ターンは第１図に示す。Ｓ．０．Ｄ活性の高い区分（Ｆ
ｒ１４〜Ｆｒｌ９）から得たＳ．０．Ｄの比活性は、７
２００単位／の９蛋白であり、粗製Ｓ．０．Ｄからの活
性収率は９５％であった。実施例 ２ フェニルセファロースＣＬ−碑の代りにオクチル・セフ
ァロースＣＬ−碑を使用する外は実施例１と同一の操作
を行い比活・性６８００単位／舵９蛋白のＳ．０．Ｄを
活性収率９６％で得た。
実施例 ３
クエン酸デキストリン共存状態で２〜３日，５℃に保存
したヒト血液ＩＺを用いて参考例１に倣って、粗製Ｓ．
０．Ｄ４０の【（２５００単位／の‘，比活性６６７単
位／雌蛋白）を得た。
したヒト血液ＩＺを用いて参考例１に倣って、粗製Ｓ．
０．Ｄ４０の【（２５００単位／の‘，比活性６６７単
位／雌蛋白）を得た。
次にこの粗製Ｓ．０．Ｄに硫安７．をを溶かし、ｐＨ６
．８に調整後、あらかじめｐＨ６．８の緩衝液（１．４
Ｍ硫安＋０．０９Ｍリン酸カリ）で平衡化したフェニー
ルセフアロースＣＬ−蟹，４０の‘を充填したカラム（
径２．０肌，高さ１２．７弧）に流速６０の【／時間で
、通塔させる。ついで、前記ｐＨ６．８の緩衝液約４０
の‘で洗浄後、同緩衝液２００の‘と水２００泌との濃
度勾配で、流速２０の‘／時間で溶出液のＳ．０．Ｄの
比活性は７４００単位／雌蛋白であり、粗製Ｓ．０．Ｄ
からの活性収率は９７％であった。実施例 ４ フェニルセファロースＣＬ‐のの代りにオクチル・セフ
ァロースＣＬ−のを使用する外は実施例３と同一の操作
を行い比活性８００山単位／雌蛋白のＳ．０．０を活性
収率９９％で得た。
．８に調整後、あらかじめｐＨ６．８の緩衝液（１．４
Ｍ硫安＋０．０９Ｍリン酸カリ）で平衡化したフェニー
ルセフアロースＣＬ−蟹，４０の‘を充填したカラム（
径２．０肌，高さ１２．７弧）に流速６０の【／時間で
、通塔させる。ついで、前記ｐＨ６．８の緩衝液約４０
の‘で洗浄後、同緩衝液２００の‘と水２００泌との濃
度勾配で、流速２０の‘／時間で溶出液のＳ．０．Ｄの
比活性は７４００単位／雌蛋白であり、粗製Ｓ．０．Ｄ
からの活性収率は９７％であった。実施例 ４ フェニルセファロースＣＬ‐のの代りにオクチル・セフ
ァロースＣＬ−のを使用する外は実施例３と同一の操作
を行い比活性８００山単位／雌蛋白のＳ．０．０を活性
収率９９％で得た。
なお、参考例１で得た粗製Ｓ．０．Ｄについて、ＤＥＡ
Ｅセルロース、及びＣＭセルロースを使用する公知方法
と、本発明の実施例１〜４の方法についてＳ．０．０の
精製効果を比較した結果は第１表の通りであり、本発明
方法によれば、公知のいずれの方法に比べても、収率，
純度共に優れている。
Ｅセルロース、及びＣＭセルロースを使用する公知方法
と、本発明の実施例１〜４の方法についてＳ．０．０の
精製効果を比較した結果は第１表の通りであり、本発明
方法によれば、公知のいずれの方法に比べても、収率，
純度共に優れている。
第１表 各種吸着剤による精製効果の比較実施例 ５
参考例で得た粗製５．０．０に硫安９．雌を溶かした液
をｐＨ６．８に調整後、あらかじめｐＨ６．８の緩衝液
（１．４Ｍ硫安＋０．０８Ｍリン酸）で平衡化されたフ
ェニールセファロースＣＬ−碑４０机を充填したカラム
、（径２．０伽，高さ１２．７伽）に流速６０の【／時
間で通塔させる。
をｐＨ６．８に調整後、あらかじめｐＨ６．８の緩衝液
（１．４Ｍ硫安＋０．０８Ｍリン酸）で平衡化されたフ
ェニールセファロースＣＬ−碑４０机を充填したカラム
、（径２．０伽，高さ１２．７伽）に流速６０の【／時
間で通塔させる。
ついで同一緩衝液４０の‘で洗浄後，ｐＨ９の水で、流
速２０の‘／時間で溶出させる。綾出液のＳ．０．Ｄの
比活性は７５００単位／の９蛋白であり、粗製Ｓ．０．
０からの活性収率は９６．５％であった。実施例 ６フ
ヱニルセファロースＣＬ−伍の代りにオクチル・セファ
ロースＣＬ−燈を使用する外は、実施例５と同一の操作
を行い比活性７６５０単位／雌蛋白のＳ．０．Ｄを活性
収率９８％で得た。
速２０の‘／時間で溶出させる。綾出液のＳ．０．Ｄの
比活性は７５００単位／の９蛋白であり、粗製Ｓ．０．
０からの活性収率は９６．５％であった。実施例 ６フ
ヱニルセファロースＣＬ−伍の代りにオクチル・セファ
ロースＣＬ−燈を使用する外は、実施例５と同一の操作
を行い比活性７６５０単位／雌蛋白のＳ．０．Ｄを活性
収率９８％で得た。
第１図は、本発明による溶出パターンを示すものである
。 縦軸はＳ．０．Ｄ活性（単位／地）及び、２６８ｈ〆と
２８瓜ｈ〃の吸光度を示し、横軸は溶出フラクション（
ＩＦｒ＝６の【）を示す。笛１図
。 縦軸はＳ．０．Ｄ活性（単位／地）及び、２６８ｈ〆と
２８瓜ｈ〃の吸光度を示し、横軸は溶出フラクション（
ＩＦｒ＝６の【）を示す。笛１図
Claims (1)
- １ フエニール基またはオクチル基の結合した架橋アガ
ロースゲルに粗製スーパーオキサイド・ジスムターゼ含
有溶液を接触させ、吸着したスーパーオキサイド・ジス
ムターゼを溶離採取することを特徴とするスーパーオキ
サイド・ジスムターゼの精製法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10438781A JPS6012025B2 (ja) | 1981-07-06 | 1981-07-06 | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10438781A JPS6012025B2 (ja) | 1981-07-06 | 1981-07-06 | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS589686A JPS589686A (ja) | 1983-01-20 |
| JPS6012025B2 true JPS6012025B2 (ja) | 1985-03-29 |
Family
ID=14379334
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10438781A Expired JPS6012025B2 (ja) | 1981-07-06 | 1981-07-06 | ス−パ−オキサイドジスムタ−ゼの精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6012025B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61276614A (ja) * | 1985-05-31 | 1986-12-06 | Kyocera Corp | 気化器 |
| JPH0262218U (ja) * | 1988-10-25 | 1990-05-09 |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3486452T2 (de) * | 1983-10-03 | 1997-11-06 | Chiron Corp., Emeryville, Calif. | Superoxiddismutase und deren Expression in Mikroorganismen |
| JPH078856A (ja) * | 1993-06-21 | 1995-01-13 | Masayuki Kanno | 曲面塗装用フィルム及び曲面塗装用フィルムの調製システム |
-
1981
- 1981-07-06 JP JP10438781A patent/JPS6012025B2/ja not_active Expired
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61276614A (ja) * | 1985-05-31 | 1986-12-06 | Kyocera Corp | 気化器 |
| JPH0262218U (ja) * | 1988-10-25 | 1990-05-09 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS589686A (ja) | 1983-01-20 |
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