JPS60130601A - ヒアルロン酸水不溶性組成物の製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明はヒアルロン酸又はその塩の生体適合性で水圧
不溶な組成物及びその製法に関する。こＱ発明の組成物
は、生体適合性であるので、人工心臓パル′プや、導管
移植片などを含む人工器官のような各種の生体内用途忙
用いることができる。

また、この発明の組成物は、各種の重合体製品の改質に
Ｊ伯いることができ、この改質品は同様に各種生体内用
途を有する。

ヒアルロン酸は、公知の天然物であって、医薬や生物学
で多くの用途が知られているもので（たとえば米国特許
第４．２　’７２，５２２号及びその中の引用文献参照
）、またヒアルロン酸のある種の架橋ゲμは公知−ｃ”
６る（ａ−１ｚンら、ＡＱｔａ　Ｃｈｅｍ、　５ｃａｎ
ａ。

１８　１９６４　陥ユ、ｐ２１４〜５）。

この発明によれば、ヒアルロン酸又はその塩をホルムア
ルデヒド、ジメチロール尿素、ジメチロールエチレン尿
累、エチレンオキシド、ポリアジリジン、ポリインシア
ネート及びジビニルスルボンからなる群より選択された
架橋剤との処理に付すことからなる水不溶性ヒアルロン
酸又はその塩の組成物の製法が提供される。

この発明におけるヒアルロン酸又はその塩杜、市販品又
はそれから誘導されたものが用いることができる。ヒア
ルロン酸の塩は、生体適合性で多るかぎ）、各種の公知
の塩が含まれる。好ましい具体例としてナトリウム、カ
リシム、カｐシクムなどの塩が含まれる。

ヒアルロン酸又はその塩は、架橋時に粉末状、フィルム
状、ゲル状の何れであってもよい。さらに、支持材で支
持されたものであってもよい。支持材としては、たとえ
ばポリエチレンテレフタレートのよ、うな合成樹脂の編
物のシートや、イオン交換樹脂、シリカ、アルミナのよ
うな粒状物であってもよい。粉状物を例にとれば、粉状
物を予めヒアルロン酸又はその塩で被覆し、得られる被
覆粉状物をこの発明の架橋剤で架橋されてもよい。

また、編物のシートを文に材とする場合には、ヒアルロ
ン酸又はその塩はフィルム状として支持されたものであ
る。

この発明で使用する架橋剤は、前述のごとき特定Ｏもの
であるが、架橋条件は架橋剤の種類によって変えられる
。処理は乾燥又は水性条什下、室温又はＭ流温度で行う
ことができる。その１例を挙げると架橋剤がジビニルス
ルボンの場合、架橋約２０℃で行うことができる。ヒア
ルロン酸又はその塩は、熱に脱感でｂるのでなるべく低
いｍ度の処理が好ましい。

より詳しい処理条件は、次に挙げる実施例によって説明
する。

次にこの発明の数種のＡ体側を実施例（特に明記しない
限ハ重址部）で例証するが、これによってこの発明は限
定されるものではない。

実施例１ 水−アセトン混合物に、５ｔ９６Ｃ重量）ホルムアルデ
ヒド水溶液と濃塩酸を加えた。得られた混合物ｔｖ組成
（重ｆｉｋｇ６　）　ハ、ＣＨ，Ｏ０，２７；　ＨＧＪ
　０．１９；水／アセトン比ｌ：２８であった。ヒアル
ロン酸ナトリウム粉末（０，５９）を、この混合物５０
ｄ中で１０分間加熱還流した。次いで粉末をＦ取し、十
分に水／ア七トン１：３混液で洗い、次いでアセトンで
洗い、真空オープン中で乾燥した。生成したヒアルロン
酸粉末は、水に不溶で、結合したＣＨ２Ｏ′ｆｒ１．４
１９６含有した◎実施例２ 次（Ｄｍ成（１ｉ９６　）　：　ＣＨ２Ｏｇ、５　；Ｈ
Ｑｅ　ｏ、：ｓａ　；水／アセトン比ｌ：２の架橋混液
で、上記の実施例Ｉｔ−緑如返し行った。生成物のＣ迅
０含量は５．３９６であった。

実施例１と２で、ヒアルロン酸粉末の架橋は、水−アセ
トン漏液中で実施された。水／アセトン比とホルムアル
デヒド濃度を変化さすことによシ、生成物のｓａ比（ｓ
ｗｅｌｌｉｎｇ　ｒａｔｉｏ　）をｉｎすることが可能
である。かくして、膨問比は実施例１の生成物で１７８
９６で実施例２のものは２３０９６であった。膨潤化は
混液中のアセトン証とホルムアルデヒド濃度とを増加さ
すことにより減少さすことができる。

次の実施例は、架橋剤としてポリアジリジン化合物を使
用する場合を例証する。このポリアジリジンタイプの化
合物は、乾燥状態で室温でとアルロン酸を架橋するが、
慮温で行うことはヒアルロン酸が熱に脱感なポリマーで
あるためヒアルロン酸の場合に特に重要である。

実施例３ と７７ｙａｙ酸の水溶液１１３．ｏｒ（５度１４．：ａ
ｒｒ、ｙ／―）に、　Ｏ，４５Ｖのポリアジリジン化合
物−クロス−リンカ−０Ｘ１ｏｏ　（ポリビニルケミカ
ル社製）を加えた。架橋剤のヒアルロン酸に対するモル
比は０．５であった。混合物をガラス板で５＆ｉ＋厚さ
の層として、室温で２日間乾燥した。架信ヒアルロン酸
の透明フィルムが得られ、このものは水に溶解せず、か
つ１６０９６の水中の膨潤比を有した。

実施例４ Ｏ１５１の乾燥ヒアルロン酸粉末を、クロヌーリンカ−
０Ｘ−１ｏｏの１９６アセトン液５０　ｔｔｔｌと混合
し、５分間保った後、戸取した。粉末を空気中で２時間
乾燥し、次いで水で数回洗い、真空オープン中４０℃で
４時間乾燥した。架橋粉末の水中での膨潤比は１３５９
（ｉであった。

次の実施例は、高度の膨潤性を有する架橋ヒアルロン酸
を得るためボリアシリノン化合物を用いた場合を例証す
るものである。

実施例５ 固形のとアＡ／μン酸ナトリクム０．６ｔを、ｏ、ｅ９
６クロスーリンカーＣＸ−１００の水溶液と混合した。

得うレ六−Ｉ８液はヒアルロン酸す−トリウムに列する
０Ｘ−１００のモＡ／比＝０．１を有した。ｒＵ液中ノ
ヒアμロン酸ナトリウム含蓋は６．０４０６　（ＭＲ）
であった。得られた高粘稠性混合液のｌ）Ｈを２％塩酸
で２，５に調製した。得られたフィルムは水に易溶性で
あった。このフィルムを６０℃で３０分間加熱した。こ
の加熱処理で強固な水不溶性のフィルムが得らハた。

実施例６ 繊維様のヒアルロン酸ナトリウム（０，１０９：Ｍ）を
１９６ポリイノシアナート（モーベイ・ケミカル社製、
デスモジュアＮ−７５）のアセトン１７１　Ｋ　２５ｕ
ｌと混合し、混合物を１０分間還流した。沈澱物を分離
し、アセトンで３回洗浄し、４５ｍＨ／の減圧下６０℃
で３０分間乾燥し、最後に５酸化燐入り減圧デシケータ
−で乾燥した。得られた生成１７（ａｌ１２７ｔ）　は
水に不溶で、１２０９（ｉの膨潤比を有した。

実施例７ とアルロン酸ナトリクム水溶液（濃度９．８　Ｗ／ｄ　
）の６ｔを、　Ｏ，０１７ｒのＮ、Ｎ−ジメチロールエ
チレン尿素及び０．００５９の硝酸亜鉛と混合した。混
合物をガラス板上にギャヌトし、−夜装置乾燥した。

得られたフィルムを１１０℃で１５分間加熱処理した。

そのものは、水に不溶で、１４５９（５の膨潤比を示し
た。

次の実施例はヒアルロンｒａを架橋するためにノビニル
スルホンを用いた場合である。

実施例８ ０．４ｏ１ｔ　（１ミリモ／Ｌ／）のジビニルスルホン
含有のヒアルロン酸ナトリウム溶液３５ｍｇにジピニｙ
ｙ　ｙｖホンｏ、１ｘａｆ　（ｌ　ミ！Ｊ　−６Ｎ　）
　ｔ−７Ｊｌ；合した。

混合物のｐＨを１９６水酸化ナトリウム水溶液で約８．
５〜９に調整した。混合物をガラス板にキャストシ、−
夜室温で乾燥して、フィルムを得た。このフィルムは水
に易溶であった。フィルムを６０℃で３０分間加熱して
、強固な水に不溶なフィルムを得た。

実箆例９ ＩＰ！４ｆｊヒアｐロン酸の乾燥フィルムを、２６２の
アセトンと１１の水との混液に０．６ｙのジビニＡ／ス
／Ｉ／ホンを溶解した液中に入れ、１０分間保持した。

溶液からフィルムを取り出し、空気中で１０分間乾燥し
、次いでオーブン中６５℃で２０分間加熱した。ヒアル
ロン酸の強固な架橋フィルムが得られた。

実施例１０ 風乾ヒアルロン酸ナトリウム２．９５５’を０．２規定
水酸化すＩｌｌｌｌラム液５７．３５１と混合し、完全
に溶解するまでガラス棒で攪拌した。次いでジビニルヌ
ルホン１１をその混合物に混合攪拌し、室温で１時間放
置した。混合物は、堅いゲルとなった。このゲルを１０
０ｄの水とともに、Ｖｉｒ　ＴｉＳゝ１４５“ホモゲナ
イザに入れ、３０．００Ｏｒｐｍで５分間処理した。非
常に膨潤した小さな粒子が得られた。この粒子を水で数
回洗浄し、ガフスロート上吸引ｐ取した。膨潤率を測定
するため、約１２のゲルを、１５１！Ｉｌのガラスフィ
ルターに入れ、次−でゲラステックの遠心管に入れ、３
．００Ｏｒｐｍで５０分間遠心分離した。圧出した水が
遠心管の底に集められた。ゲル中のヒアルロン酸濃度は
、０．２１％て、即ち水中での膨潤比が４７６でちった
。

実施例１１ 実施例１０に記載した手法でゲ／ｌ／を得、これを０．
１５モル食塩水に分数じた。粒子を同じ食塩水で洗浄し
た。遠心分ｙｉ後のゲル中のヒアルロン酸濃度は１．２
９９６で、膨潤比は７７．５であった。

実Ｊム例１２ 風乾ヒアルロン酸ナトリウム１．０９　ｆ　０．２モ／
’）Ｊ＜酸化ナトリクム水溶液９．Ｏｆｆに浴解し、ガ
フス棒で攪拌した。得られた粘稠液に、ジビニルスルホ
ン０．３３ｙを混合攪拌し、室温で２０時間放置しｆｃ
。

得られた硬いゲ／Ｉ／を実施例１０と同様に処理しｌ〔
。

遠心万緑後のゲル中のヒアルロン酸濃度は４．３０％で
あシ、即ち膨潤比が２３．６であった。

この発明による製剤の生体適合性は、下記のゲスト法に
よシ例証される。

実五例１３−血液適合性テスト 実施例１０によって作られたサンプルの血液反応性を評
価する予備０［究に、与■−セロ）ニンのヒト血小板に
よる放出を用いた。正常ヒト静脈血をグツスナック・シ
リンジで採取し、直ちに３．８９６クエン酸ナトリウム
含有のグツスナック・チューブに移した（９部の全血に
対し１部のクエン酸ナトリウム）、。

血小板に富んだ血漿を、４℃で１２５　Ｘｇで１５分間
遠心分離で作り、血清学用ピペットでプラスチック製又
はシリコン化試験管に移した。血小板ｔｉｃ　Ｎ　／ｖ
　タ血Ｎｉｌ　（ＰＥＰ　）、６．２〜０．５　ｔｔＥ
／ｍ　ＰＦＪ’に、３Ｈ−セロトニン（”Ｈ−５−ヒト
ｌ’ＪＩｒＶ）リプタミン（”Ｈ−５ＨＴ）ニュー・イ
ングフンド・ヌクｖｙｆＭ、２６．３０ｉ／ｍｏｌ、　
ｌ　ｍ　Ｃ１／ｄ！　工ｊｒノーｐ−水〕を加え、３７
℃で１５分間培養した。この検定では、シリコン化又は
ボリグロビレン試験管ヲ用い、トロンビンを正のコント
ローμとして使用し、被覆したサングル及び被覆しない
サングルをテストした。検定すべきサン１μ含有の複数
の管の各々に、１．０〜２．Ｏｗｌの一−５Ｅ（Ｔ　−
Ｐぴを加えた。全放射能を測定するためコントロール混
合物から５０μｅの部分標品を採取した。適当な培養期
間（１０〜１２０分）を経た後、懸濁液の０．２〜０．
５をとシ、エベンドμフ・小型遠心分離機中のシリコン
油上で１２，０ＯＯＸ（）で１０分間遠心分離する。容
管から５Ｑｄの上澄液をとり、５ｄＯ液体ンンテレーシ
ョン液を加え、放射量をベーター分光測定で測定した。

トロンビン又はテストサンプルで放出された３Ｈ−５ｆ
（Ｔの量は、上澄液の放射量の増加（実験サンプルの放
射量−コントロールの放射量）である。テスト物質は、
１２０分まで”Ｈ−５ＨＴの顕著な血小板放出を誘因し
な力為った。

トイ 代理人　弁理士　野河信太邸

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　ヒアルロン酸又はその塩を、ホルムアルデヒド、
   ジメチロール尿素、ジメチロールエチレン尿素、エチレ
   ンオキシド、ポリアジリジン、ｄ！リイソシ”１ネート
   およびジビニルスルホンからなる群から選択された架橋
   剤との処理に付すことからなる水不溶性のヒアルロン酸
   又はその塩の組成物の製法。 ２、架橋剤がホルムアルデヒドで、処理が水性媒体中還
   流温度で行われる特許請求の範囲１項による方法。 ３、架橋剤がポリアジリジンで、処理が乾燥状態で定温
   で行われる特許請求の範囲１項による方法。 ４、　１ＪｉＡ橋剤が４ζリイソＶアナートで１．処理
   がアセトン中還流温度で行われる特許請求の範囲１項に
   よる方法〇 ５、架橋剤がジメチロールエチレン尿素で、処理が約１
   １０℃で行われる特許請求の範囲１項による方法。 ６、架橋剤がジビニルスルホンで、処理が約６０〜６５
   ℃で行われる特許請求の範囲１項による方法。 ７、架橋剤がジビニルスルホンで、処理が約２０℃でア
   ルカリ条件下で行われる特許請求の範囲１項による方法
   。 ８、　ヒアルロン酸又はその塩が、粉末状、フィル、ζ
   状又はゲル状の形で架橋されてなる特許請求の範囲１〜
   ７項の何れかの方法。