JPS60152500A - α−アミラ−ゼ抑制作用を有する新規ポリペプチドおよびそれらの製法 - Google Patents
α−アミラ−ゼ抑制作用を有する新規ポリペプチドおよびそれらの製法Info
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- JPS60152500A JPS60152500A JP59243562A JP24356284A JPS60152500A JP S60152500 A JPS60152500 A JP S60152500A JP 59243562 A JP59243562 A JP 59243562A JP 24356284 A JP24356284 A JP 24356284A JP S60152500 A JPS60152500 A JP S60152500A
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
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- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な生物学的に活性な環状ポリペプチドに関
する。これらはα−アミラーゼ抑制性質’ｆＭしそして
それゆえ人間および動物の医薬、医学的診断剤ならひに
澱粉のバイオテクノロジーにおいて使用され９る。
する。これらはα−アミラーゼ抑制性質’ｆＭしそして
それゆえ人間および動物の医薬、医学的診断剤ならひに
澱粉のバイオテクノロジーにおいて使用され９る。
本発明によるペプチドは１０〜２００個のアミノ酸から
成りそして下記式Ｉ ７メ″＼、 Ｚ−８−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｙ Ｉ （式中２はＧｌｎ 、 ＡｓｎまたはＭｅ ｔであり、
ＳはＳａｒまたはＴｈｒであり、Ｙ Ｉｄ Ｐｈｅ 、
Ｔｙｒ ’ＥたはＡｓｎで６’）、ＡＳはそれら自身
天然のアミノ酸またはペプチド鎖によってさらに置換さ
れていることができる天然のアミノ酸５〜２５個からな
るポリペプチド鎖である）を有し、その際α−アミラー
ゼ不不活性化剤ノンダミスタートＴｅｎｄａ−ｍｉｓｔ
ａｔ ）ならびにストレグトマイシス・ビオラセオルパ
−（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕ
ｂｅｒ ） ＡＴＣＣ３１２０９の培養Ｆｉから得られ
たα−アミラーゼ抑制剤全除外するものとする。
成りそして下記式Ｉ ７メ″＼、 Ｚ−８−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−Ｙ Ｉ （式中２はＧｌｎ 、 ＡｓｎまたはＭｅ ｔであり、
ＳはＳａｒまたはＴｈｒであり、Ｙ Ｉｄ Ｐｈｅ 、
Ｔｙｒ ’ＥたはＡｓｎで６’）、ＡＳはそれら自身
天然のアミノ酸またはペプチド鎖によってさらに置換さ
れていることができる天然のアミノ酸５〜２５個からな
るポリペプチド鎖である）を有し、その際α−アミラー
ゼ不不活性化剤ノンダミスタートＴｅｎｄａ−ｍｉｓｔ
ａｔ ）ならびにストレグトマイシス・ビオラセオルパ
−（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕ
ｂｅｒ ） ＡＴＣＣ３１２０９の培養Ｆｉから得られ
たα−アミラーゼ抑制剤全除外するものとする。
本発明は特に２が（）Ｉｎであり、ＳがＳｅｒで油り、
ＹがＴｙｒでありそしてＡｓが２個のペプチド鎖によっ
て置換されている１２個のアミノ酸からなる号セリペプ
チＰ鎖である式Ｉの環状ポリペプチドに関する。
ＹがＴｙｒでありそしてＡｓが２個のペプチド鎖によっ
て置換されている１２個のアミノ酸からなる号セリペプ
チＰ鎖である式Ｉの環状ポリペプチドに関する。
本発明によるポリペプチドのうちでは、以下の記述にお
いてＡＩ −６６８８としても示される式を有するペプ
チド、ならびに下記の構造変異物が好ましい。
いてＡＩ −６６８８としても示される式を有するペプ
チド、ならびに下記の構造変異物が好ましい。
１−デアラニン誘導体Ａｌ−３６８８ａ（アミノ酸１が
Ａｌａでな（Ｔｈｒである）、 ペプチドＡｌ−３６８８ｂ（これは第１４番目のアミノ
酸ＧｉｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−５６
８８と相異すΣ）、 ペプチドＡｌ−３６８８ｃ（これは第５４番目のアミノ
酸ＧｌｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−５６
８８と相異する）、 ペプチドＡｌ−３６８８ａ（これは第１６番目のアミノ
＃ （）ＩｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−
３６８８ａと相異する、すなわちこりペプチドはＡＩ
−３６８８ｂの１−デアラニン誘導体である）、ペプチ
ドＡｌ−３６８８ｅ（これは第６５番目のアミノ酸Ｇｉ
ｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−３６８８ａ
と相異する、すなわちこのペプチドはＡＩ −３６８８
ｃの１−デアラニン誘導体である）、ペプチドＡｌ−３
６８８ｆ（これは第１４番目ならびに第３４番目のアミ
ノ酸ＧｌｎがＧｌｕによって交換されている点でＡＩ
−３６８８と相異する）、および ペプチドＡＩ−３６８８ｇ（これはＡＩ −３６８８ｆ
の１−デアラニン誘導体である）。
Ａｌａでな（Ｔｈｒである）、 ペプチドＡｌ−３６８８ｂ（これは第１４番目のアミノ
酸ＧｉｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−５６
８８と相異すΣ）、 ペプチドＡｌ−３６８８ｃ（これは第５４番目のアミノ
酸ＧｌｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−５６
８８と相異する）、 ペプチドＡｌ−３６８８ａ（これは第１６番目のアミノ
＃ （）ＩｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−
３６８８ａと相異する、すなわちこりペプチドはＡＩ
−３６８８ｂの１−デアラニン誘導体である）、ペプチ
ドＡｌ−３６８８ｅ（これは第６５番目のアミノ酸Ｇｉ
ｎがＧｌｕにより交換されている点でＡｌ−３６８８ａ
と相異する、すなわちこのペプチドはＡＩ −３６８８
ｃの１−デアラニン誘導体である）、ペプチドＡｌ−３
６８８ｆ（これは第１４番目ならびに第３４番目のアミ
ノ酸ＧｌｎがＧｌｕによって交換されている点でＡＩ
−３６８８と相異する）、および ペプチドＡＩ−３６８８ｇ（これはＡＩ −３６８８ｆ
の１−デアラニン誘導体である）。
これらのポリペプチドにおいてはＺはＧｌｎ ｆ、Ｓは
８ｅｒｉ、ＹはＴｙｒ ｆそしてＡｓは８個または７個
および１１個のアミノ酸からなる２本のペグチド鎖によ
ってジ置換されている、１２個のアミノ酸からなるポリ
ペプチド鎖を意味する。
８ｅｒｉ、ＹはＴｙｒ ｆそしてＡｓは８個または７個
および１１個のアミノ酸からなる２本のペグチド鎖によ
ってジ置換されている、１２個のアミノ酸からなるポリ
ペプチド鎖を意味する。
これらペプチドは３６またｔま６５個のアミノ酸を有す
る。アミノ酸配列のアミノ末端はアラニン（１）または
Ｔｈｒに存在する。ペプチドＡｌ−３６８８にはＣｙｓ
（９）とＣｙｓ （２５）との間にジスルフイツド橋
が存在する。このジスルフイツド橋は変異物においては
対応する位置に存在する。
る。アミノ酸配列のアミノ末端はアラニン（１）または
Ｔｈｒに存在する。ペプチドＡｌ−３６８８にはＣｙｓ
（９）とＣｙｓ （２５）との間にジスルフイツド橋
が存在する。このジスルフイツド橋は変異物においては
対応する位置に存在する。
前記および後記の記述において抑制剤中に含有されるア
ミノ酸はり、 ５ｔｒｙｅｒ氏のｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙＪ第１４頁以下（１９７２年）、Ｗ、Ｈ，Ｆｒ
ｅｅｍａｎ ＆Ｃｏｍｐａｎｙ出版、サンフランシスコ
、において使用されているような記号により記載される
。
ミノ酸はり、 ５ｔｒｙｅｒ氏のｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙＪ第１４頁以下（１９７２年）、Ｗ、Ｈ，Ｆｒ
ｅｅｍａｎ ＆Ｃｏｍｐａｎｙ出版、サンフランシスコ
、において使用されているような記号により記載される
。
本発明はさらに式Ｉを有する環状ポリペプチドの製法、
式Ｉの化合物を含有する医薬製剤および薬剤、診断剤お
よび試薬としての使用にも関する。
式Ｉの化合物を含有する医薬製剤および薬剤、診断剤お
よび試薬としての使用にも関する。
特に本発明はポリペプチドＡＩ −３６８８ならびに変
異物ＡＩ−！＋６８８ａ 〜ｇの製法、Ａｌ−５６８８
または変異物の１種全含有する医薬製剤および薬剤、診
断剤および試薬としてのそれらの使用に関する。
異物ＡＩ−！＋６８８ａ 〜ｇの製法、Ａｌ−５６８８
または変異物の１種全含有する医薬製剤および薬剤、診
断剤および試薬としてのそれらの使用に関する。
式Ｉ’に有するポリペプチドの製法は式Ｉのポリペグチ
ドｔ−澱生ずるストレゾトミセス科（８ｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ ）放線菌を発酵培地中法部培養法で培養
し、ポリペプチドを菌糸体または培養Ｆｇ、からそれ自
体知られた方法で単離しそしてＮ製することを特徴とす
る。
ドｔ−澱生ずるストレゾトミセス科（８ｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｔｅｓ ）放線菌を発酵培地中法部培養法で培養
し、ポリペプチドを菌糸体または培養Ｆｇ、からそれ自
体知られた方法で単離しそしてＮ製することを特徴とす
る。
ストレプトミセス科放線菌のうちではストレプトマイシ
ス・アラレオファシェンス（８ｔｒｅｐｔｏ−ｍｙｃｅ
ｓ ａｕｒｅｏｆａＣｌｅｎｓ ）が特に適当である。
ス・アラレオファシェンス（８ｔｒｅｐｔｏ−ｍｙｃｅ
ｓ ａｕｒｅｏｆａＣｌｅｎｓ ）が特に適当である。
ＡＩ −３６８８および構造変異物ＡＩ −５６８８ａ
−ｇは好ましくはストレプトマイシス・アラレオファシ
ェンスＦＨ１６５６の菌糸体および培養Ｐｉから得られ
る。この菌株はドイツ微生物収集物（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ
８ａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍ ） （ＤＳＭ ）に寄託番号Ｄ８Ｍ２７９０にて
寄託されている。しかしまたこの菌株の変種および突然
変異体もＡｌ−３６８８およびその構造変異物の取得に
使用されうる。
−ｇは好ましくはストレプトマイシス・アラレオファシ
ェンスＦＨ１６５６の菌糸体および培養Ｐｉから得られ
る。この菌株はドイツ微生物収集物（Ｄｅｕｔｓｃｈｅ
８ａｍｍｌｕｎｇ ｖｏｎ Ｍｉｋｒｏｏｒｇａｎｉ
ｓｍ ） （ＤＳＭ ）に寄託番号Ｄ８Ｍ２７９０にて
寄託されている。しかしまたこの菌株の変種および突然
変異体もＡｌ−３６８８およびその構造変異物の取得に
使用されうる。
ストレプトマイシス・アラレオファシェンスＤＳＭ２７
９０の分類学的性質ｒ’ Ｂｅｒｇｌｅｙ’ｓ Ｍａｎ
ｕａｌ ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ Ｊ第８版（１９７４年）、Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｃｏｒｐ出版、ケルチモ
ア、におけるストレプトマイシス・アラレオファシェン
スの記述に一致する。そこに記載された菌株との相異は
代謝生成物にある。ストレグトマイシス・アクレオ７ア
シ工ンス株の代１生成物としての環状ペプチドはこれま
で記載されていなかった。従ってこの菌株は新規である
。それゆえ本発明はまたストレプトマイシス・アラレオ
ファシェンスＤ８Ｍ２７９０にも関する。
９０の分類学的性質ｒ’ Ｂｅｒｇｌｅｙ’ｓ Ｍａｎ
ｕａｌ ｏｆＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｙ Ｊ第８版（１９７４年）、Ｗｉｌｌｉ
ａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ Ｃｏｒｐ出版、ケルチモ
ア、におけるストレプトマイシス・アラレオファシェン
スの記述に一致する。そこに記載された菌株との相異は
代謝生成物にある。ストレグトマイシス・アクレオ７ア
シ工ンス株の代１生成物としての環状ペプチドはこれま
で記載されていなかった。従ってこの菌株は新規である
。それゆえ本発明はまたストレプトマイシス・アラレオ
ファシェンスＤ８Ｍ２７９０にも関する。
ＡＩ −３６８８は好都合には以下のようにして単離さ
れる。
れる。
ストレプトマイシス・アラレオファシェンスＤＡＭ ２
７９０ ’ｔ”水性栄養培地中で浸漬および好ましくけ
好気性条件下に充分な濃度のＡｌ−３６８８が得られる
まで培養する。栄養培地は一方では例えは炭水化物のよ
うな炭素原ヲそしてもシ一方では例えば蛋白質含有物質
のような適当な窒素化合物が包含される窒素源を含有す
る。炭素を供給する好ましい化合物は葡萄糖、蔗糖、グ
リセリン、麦芽抽出物、澱粉、油状物、脂肪等である。
７９０ ’ｔ”水性栄養培地中で浸漬および好ましくけ
好気性条件下に充分な濃度のＡｌ−３６８８が得られる
まで培養する。栄養培地は一方では例えは炭水化物のよ
うな炭素原ヲそしてもシ一方では例えば蛋白質含有物質
のような適当な窒素化合物が包含される窒素源を含有す
る。炭素を供給する好ましい化合物は葡萄糖、蔗糖、グ
リセリン、麦芽抽出物、澱粉、油状物、脂肪等である。
窒素を供給する好ましい物質は例えはコーンステイープ
リカー、酵母抽出物、大豆粉、魚粉、スキムミルク末、
部分消化カゼインまたは内袖出物である。いわゆる「合
成」栄養溶液も使用されうる。さらに例えば亜鉛、マグ
ネシウム、鉄、コバルトまたはマンガンのような浅跡元
累を発酵培地に添加することも有用でありうるＯ ＡＩ −６６８８が形成される発酵は広い温度範囲で実
施されうる。例えば、１０〜４０℃ｉましくは約２５〜
５５℃で実施される。培地の一値、は同様に微生物の生
育を促進する値、例え［４４，０〜９．０好ましくは５
．０〜ａＯに保持される。例えは質的および量的組成の
ような栄養培地、そして例えば通気割合、温度または声
値のような発酵条件の如何に応じ通常約２〜１０日後に
Ａｌ−６６８８は培養溶液中に形成される。
リカー、酵母抽出物、大豆粉、魚粉、スキムミルク末、
部分消化カゼインまたは内袖出物である。いわゆる「合
成」栄養溶液も使用されうる。さらに例えば亜鉛、マグ
ネシウム、鉄、コバルトまたはマンガンのような浅跡元
累を発酵培地に添加することも有用でありうるＯ ＡＩ −６６８８が形成される発酵は広い温度範囲で実
施されうる。例えば、１０〜４０℃ｉましくは約２５〜
５５℃で実施される。培地の一値、は同様に微生物の生
育を促進する値、例え［４４，０〜９．０好ましくは５
．０〜ａＯに保持される。例えは質的および量的組成の
ような栄養培地、そして例えば通気割合、温度または声
値のような発酵条件の如何に応じ通常約２〜１０日後に
Ａｌ−６６８８は培養溶液中に形成される。
Ａｌ−３６８８は菌糸体中におよび発酵の培″ＩＦ液中
にも存在する。ＡＩ −５６８８の大部分は一般に培養
Ｆ液中に見出される。それゆえ好ましくは水相から例え
は濾過または遠心分離により菌糸体を分離しそしてｌ−
３６８８ｆｆｉそれぞれの相からそれ自体知られた方法
で単離しそして梢製する。これには例えはイオン交換体
でのクロマトグラフィー、モレキュラーシープまたは吸
着樹脂、結晶化、溶媒または塩沈澱、限外濾過、クレー
ブ（Ｃｒａｉｇ ）分配等のような多数の方法が適する
。
にも存在する。ＡＩ −５６８８の大部分は一般に培養
Ｆ液中に見出される。それゆえ好ましくは水相から例え
は濾過または遠心分離により菌糸体を分離しそしてｌ−
３６８８ｆｆｉそれぞれの相からそれ自体知られた方法
で単離しそして梢製する。これには例えはイオン交換体
でのクロマトグラフィー、モレキュラーシープまたは吸
着樹脂、結晶化、溶媒または塩沈澱、限外濾過、クレー
ブ（Ｃｒａｉｇ ）分配等のような多数の方法が適する
。
ＡＩ −３６８８の好ましい単離法は、培養Ｐ液から例
えばポリスチレンに基くような適当な樹脂上に抑制剤を
吸着させ、この負荷された樹脂を分離しそして抑制剤Ａ
Ｉ −３６８８を例えば燐酸塩またはｌ炭酸塩緩衝溶液
のような適当な緩衝溶ｇ、または例えばメタノール、エ
タノール、アセトンのような場合により水を含有してい
てもよい有機溶媒、しかし好ましくは水性イソプロパツ
ールを用いて溶離することにより単離することにある。
えばポリスチレンに基くような適当な樹脂上に抑制剤を
吸着させ、この負荷された樹脂を分離しそして抑制剤Ａ
Ｉ −３６８８を例えば燐酸塩またはｌ炭酸塩緩衝溶液
のような適当な緩衝溶ｇ、または例えばメタノール、エ
タノール、アセトンのような場合により水を含有してい
てもよい有機溶媒、しかし好ましくは水性イソプロパツ
ールを用いて溶離することにより単離することにある。
抑制剤を含有する溶出液を知られた方法で限外濾過する
ことにより濃縮すると脱塩が同時に行われる。イオン濃
度の少ないＡｌ−５６８８の水溶液上次にそれ自体知ら
れた方法でイオン交換体カラムでクロマトグラフィーす
ることにより分離する。イオン交換体として好ましくは
ＤｇＡＥ−セルロースまたはＤＥＡＥ−修正（ｍｏｄｉ
ｆｉｅｄ ）セルＣＩ−ス（例え＃１ＤＥＡＥ−８ｅｐ
ｈａｄｅｐ）が用いられるが、しかし他の多数の商業上
入手しうる陰イオン交換体および陰イオン交換体も使用
されうる。単離の最終段階ではモレキュラーシープ（例
えばＢｉＯｇｅｌ■Ｐ−６または５ｅｐｈａｄｅＸ■）
を使用する。得られる純粋な物質の水溶液を次に例えば
凍結乾燥により乾燥する。比活性は固形物質１■当りα
−アミラーゼ抑制剤単位１．５ｘｉｏ である。
ことにより濃縮すると脱塩が同時に行われる。イオン濃
度の少ないＡｌ−５６８８の水溶液上次にそれ自体知ら
れた方法でイオン交換体カラムでクロマトグラフィーす
ることにより分離する。イオン交換体として好ましくは
ＤｇＡＥ−セルロースまたはＤＥＡＥ−修正（ｍｏｄｉ
ｆｉｅｄ ）セルＣＩ−ス（例え＃１ＤＥＡＥ−８ｅｐ
ｈａｄｅｐ）が用いられるが、しかし他の多数の商業上
入手しうる陰イオン交換体および陰イオン交換体も使用
されうる。単離の最終段階ではモレキュラーシープ（例
えばＢｉＯｇｅｌ■Ｐ−６または５ｅｐｈａｄｅＸ■）
を使用する。得られる純粋な物質の水溶液を次に例えば
凍結乾燥により乾燥する。比活性は固形物質１■当りα
−アミラーゼ抑制剤単位１．５ｘｉｏ である。
純粋な抑制剤ＡＩ −３６８８は無色列？リペプチドで
あり、そのアミノ酸分析値は大抵の天然アミノ酸の存在
を示す。このものは前記式１ａ’ｔ−有する。
あり、そのアミノ酸分析値は大抵の天然アミノ酸の存在
を示す。このものは前記式１ａ’ｔ−有する。
特に比較的長期にわたる発酵においては、抑制剤ＡＩ
−５６８８が単一でない場合が起り９る。
−５６８８が単一でない場合が起り９る。
これらの場合個々の成分への分離はＨＰＬＣ−技法、好
ましくは溶離剤として水／アセトニトリル（９５：５）
混合物を用いる逆相Ｉ−ＩＰ１８担体上のＨＰＬＣによ
り行われうる。かくして得られた成分は前記した構造Ａ
ｌ−３６８８ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅｔｆおよびｇを有する
。構造変異物はＡＩ ’−３６８８と同程度に有効でち
る。
ましくは溶離剤として水／アセトニトリル（９５：５）
混合物を用いる逆相Ｉ−ＩＰ１８担体上のＨＰＬＣによ
り行われうる。かくして得られた成分は前記した構造Ａ
ｌ−３６８８ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅｔｆおよびｇを有する
。構造変異物はＡＩ ’−３６８８と同程度に有効でち
る。
ＡＩ −３６８８およびＡＩ −３６８８，ａ −ｇに
とって天然に存在するアミノ酸Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、 Ｌｅ
ｕ。
とって天然に存在するアミノ酸Ｍｅｔ、Ｉｌｅ、 Ｌｅ
ｕ。
Ｌｙ ｓおよびＨｉｓが欠けていることか特徴である。
紫外線は水中にてＡｌ−３６８８によりλｍａｘ＝２７
５ｎｍ、 Ｅ１！−２１で吸収ちれる。等蒐集束により
測定された等電点は４．２でおる。抑制剤Ａｌ−３６１
３８は水および水性緩衝溶液中に容易に溶解するが、た
だ？％電点附近で溶解度が低下する。
５ｎｍ、 Ｅ１！−２１で吸収ちれる。等蒐集束により
測定された等電点は４．２でおる。抑制剤Ａｌ−３６１
３８は水および水性緩衝溶液中に容易に溶解するが、た
だ？％電点附近で溶解度が低下する。
前記アミノ酸組成そして当然その構造においてＡＩ −
５６８８ならびにＡＡｌ−３６８８ａ−はすべての知ら
れたα−アミラーゼ抑制剤と相異しており、従ってこれ
らは新規物質である。
５６８８ならびにＡＡｌ−３６８８ａ−はすべての知ら
れたα−アミラーゼ抑制剤と相異しており、従ってこれ
らは新規物質である。
式１ａにおいて表わされるように化学構造ではＡｌ−３
６８８のアミノ酸配列ならびにその上、Ｃｙｓ （第９
位）とＣｙｓ （第２５位）と゛の結合による１７個の
アミノ酸により形成される環の存在が示される。Ｐ、Ｙ
、 Ｃｈｏｕ氏他によれば（１”Ａｃ１ｖａｎｃ ｅＥ
３ｉｎ ＥｎｚｙｍｏｌＯｇＹ Ｘ第４７巻第４ｓ 〜
１４８頁、ＪｏｈｎＷｉＬｅｙ ＆ Ｓｏｎ出版、１９
７８年）、第一次構造により、関与する個々のアミノ酸
の空間的特徴およびそれらの結合、すなわちそれらの配
列およびそれらの環形成に基づきペグチドの第二次構造
が引き出されうる。抑制剤Ａｌ−３６８８に対しＣｈｏ
ｕ／Ｆａｓｍａｎ分析が実施された。その際篤くべきこ
とは、露出された位置にある、すなわち空間的に欠き出
た環の部分配列−（）Ｉｎ−８ｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−
Ｔｙｒ−が生化学的反応にとって適当な方法で分子中に
とり込まれそして結局効力の原因でおることが見出され
た。さらに、１７個のアミノ酸全含有する環？開環させ
る例えはシスチンの硫黄−硫黄結合全切断することによ
り空間的構造の変化が惹起され、それにより前記した決
定的な部分配列が最早中空間的に出現せずそして酵素抑
制効果が失われゆくことも見出された。α−アミラーゼ
抑制剤Ａｌ−３６８８の開環により生成した化学的誘導
体は生物学的および生化学的に不活性である（実施例４
参照）。本発明によるα−アミラーゼ不活性化剤にとっ
てそして実質上それらの抑制作用にとって特徴的なこと
は大きな、１０〜５０個好ましくは１７個のアミノ酸か
らなる猿が存在しそしてこの環中にアミノ酸配列−Ｚ−
８−Ｔｒｌ）−Ａｒｇ−Ｙ−特に−Ｇｌｎ−８ｅｒ−Ｔ
ｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｙｒが包含されていることである。本
発明によるポリペプチドに含有されるような部分配列の
組成は酵素抑制効力の強度にあまり影響しない。
６８８のアミノ酸配列ならびにその上、Ｃｙｓ （第９
位）とＣｙｓ （第２５位）と゛の結合による１７個の
アミノ酸により形成される環の存在が示される。Ｐ、Ｙ
、 Ｃｈｏｕ氏他によれば（１”Ａｃ１ｖａｎｃ ｅＥ
３ｉｎ ＥｎｚｙｍｏｌＯｇＹ Ｘ第４７巻第４ｓ 〜
１４８頁、ＪｏｈｎＷｉＬｅｙ ＆ Ｓｏｎ出版、１９
７８年）、第一次構造により、関与する個々のアミノ酸
の空間的特徴およびそれらの結合、すなわちそれらの配
列およびそれらの環形成に基づきペグチドの第二次構造
が引き出されうる。抑制剤Ａｌ−３６８８に対しＣｈｏ
ｕ／Ｆａｓｍａｎ分析が実施された。その際篤くべきこ
とは、露出された位置にある、すなわち空間的に欠き出
た環の部分配列−（）Ｉｎ−８ｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ−
Ｔｙｒ−が生化学的反応にとって適当な方法で分子中に
とり込まれそして結局効力の原因でおることが見出され
た。さらに、１７個のアミノ酸全含有する環？開環させ
る例えはシスチンの硫黄−硫黄結合全切断することによ
り空間的構造の変化が惹起され、それにより前記した決
定的な部分配列が最早中空間的に出現せずそして酵素抑
制効果が失われゆくことも見出された。α−アミラーゼ
抑制剤Ａｌ−３６８８の開環により生成した化学的誘導
体は生物学的および生化学的に不活性である（実施例４
参照）。本発明によるα−アミラーゼ不活性化剤にとっ
てそして実質上それらの抑制作用にとって特徴的なこと
は大きな、１０〜５０個好ましくは１７個のアミノ酸か
らなる猿が存在しそしてこの環中にアミノ酸配列−Ｚ−
８−Ｔｒｌ）−Ａｒｇ−Ｙ−特に−Ｇｌｎ−８ｅｒ−Ｔ
ｒｐ−Ａｒｇ−Ｔｙｒが包含されていることである。本
発明によるポリペプチドに含有されるような部分配列の
組成は酵素抑制効力の強度にあまり影響しない。
環状ペグテドの環形成性質も！要でない。環化の化学的
結合様式も径路、すなわち生物学的に得られたかまたは
合成的に得られたか、も効力にとって重要でなく、前記
したアミノ酸部分配列を含有する環系の存在が重要であ
る。
結合様式も径路、すなわち生物学的に得られたかまたは
合成的に得られたか、も効力にとって重要でなく、前記
したアミノ酸部分配列を含有する環系の存在が重要であ
る。
西ドイツ特許公開公報第２７１６０５０号明細書記載の
、ストレプトマイシス・ビオラセオルノ々−（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕｂｅｒ ）
ＡＴＣＣ３１２０，９から単離されたα−アミラーゼ不
活性化剤を用いる研究では前記した部分配列ならひに環
系の存在が抑制作用の原因となっていることか示された
。研究は以下のようにして実施された。
、ストレプトマイシス・ビオラセオルノ々−（Ｓｔｒｅ
ｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃｅｏｒｕｂｅｒ ）
ＡＴＣＣ３１２０，９から単離されたα−アミラーゼ不
活性化剤を用いる研究では前記した部分配列ならひに環
系の存在が抑制作用の原因となっていることか示された
。研究は以下のようにして実施された。
ストレプトマイシス・ビオラセオルノ々−ＡＴＣＣ３１
２０９から得られたα−アミラーゼ抑制剤の部分配列の
決定：還元約１たは酸化的開環により線状となされたα
−アミラーゼ−不活性化剤の整理配列はＱ、２モルの緩
衝系（Ｑｕａｄｒｏｌ ）中Ｂｅｃｋｍａｎｎ−８ｅｑ
ｕｅｎａｔｏｒ＠ｆ用いアミノ酸フェニルチオヒダント
イン（Ｐ’Ｉ’Ｈ）法を用いて自動的に遂行された。
２０９から得られたα−アミラーゼ抑制剤の部分配列の
決定：還元約１たは酸化的開環により線状となされたα
−アミラーゼ−不活性化剤の整理配列はＱ、２モルの緩
衝系（Ｑｕａｄｒｏｌ ）中Ｂｅｃｋｍａｎｎ−８ｅｑ
ｕｅｎａｔｏｒ＠ｆ用いアミノ酸フェニルチオヒダント
イン（Ｐ’Ｉ’Ｈ）法を用いて自動的に遂行された。
この物質の２個のシスティン基の間でなかんずく下記部
分配列が見られた、 −Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ）ｌｎ−８ｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ
−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−０本発明
による抑制剤の性質は糖尿病および糖尿病前期ならびに
脂肪症に対する治療剤としておよび食餌の補助としての
使用に関して′Ｍ要でおる。それらの性質ゆえにこれら
は診断目的の試薬として価値がある。
分配列が見られた、 −Ｔｙｒ−Ｐｈｅ−Ｃ）ｌｎ−８ｅｒ−Ｔｒｐ−Ａｒｇ
−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−０本発明
による抑制剤の性質は糖尿病および糖尿病前期ならびに
脂肪症に対する治療剤としておよび食餌の補助としての
使用に関して′Ｍ要でおる。それらの性質ゆえにこれら
は診断目的の試薬として価値がある。
澱粉を含有する食料品および嗜好品は動物および人間で
血糖上昇を来しそしてそれにより膵臓のインシュリン分
泌増大をも来す。過血糖症はアミラーゼおよびマルトー
スの作用により消化管において澱粉が分解されて葡萄糖
を生ずることにより起る。
血糖上昇を来しそしてそれにより膵臓のインシュリン分
泌増大をも来す。過血糖症はアミラーゼおよびマルトー
スの作用により消化管において澱粉が分解されて葡萄糖
を生ずることにより起る。
糖尿病患者においては、過血糖症が段々に著明でそして
長期持続性である。
長期持続性である。
澱粉摂取後の食餌性過血糖症ならびに過インシュリン血
症は本発明によるアミラーゼ抑制剤特にＡＩ −５６８
８により減少されうる。この作用は薬量依存性である。
症は本発明によるアミラーゼ抑制剤特にＡＩ −５６８
８により減少されうる。この作用は薬量依存性である。
それゆえ本発明によるアミラーゼ抑制剤は糖尿病、糖尿
病前期および脂肪症の治療剤としてならびに食餌の補助
に使用されうる。この目的には特に食事時の投与が好ま
しい。患者の体重ならびにそれぞれの要求に基つくべき
薬用量は１回量当り約１０〜５００ ｌｌｖであり、好
都合には各食事時に微毛される。しかしながら薬用量は
それぞれ理由のある場合にはまたそれ以上またはそれ以
下であることもできる。
病前期および脂肪症の治療剤としてならびに食餌の補助
に使用されうる。この目的には特に食事時の投与が好ま
しい。患者の体重ならびにそれぞれの要求に基つくべき
薬用量は１回量当り約１０〜５００ ｌｌｖであり、好
都合には各食事時に微毛される。しかしながら薬用量は
それぞれ理由のある場合にはまたそれ以上またはそれ以
下であることもできる。
本発明によるアミラーゼ抑制剤は特に経口投与に適する
。これらは純粋な物質としてまたは慣用の助剤および担
体物質を使用して医薬上の製剤の形態で使用されうる。
。これらは純粋な物質としてまたは慣用の助剤および担
体物質を使用して医薬上の製剤の形態で使用されうる。
血糖降下性または脂質低下性物質のような他の医薬と組
み合せて使用することも好都合でありうる。１比較的分
子量の高いペプチドはそのままでは消化管から吸収され
ないか、またはとるに足るほどには吸収されないので、
本発明による物質からは何ら毒物学的に疑わしい副作用
は予期されない。異常でないアミノ酸組成ゆえにありう
る蛋白分解的崩壊並物も生理学的に危険がないと見なさ
れる。
み合せて使用することも好都合でありうる。１比較的分
子量の高いペプチドはそのままでは消化管から吸収され
ないか、またはとるに足るほどには吸収されないので、
本発明による物質からは何ら毒物学的に疑わしい副作用
は予期されない。異常でないアミノ酸組成ゆえにありう
る蛋白分解的崩壊並物も生理学的に危険がないと見なさ
れる。
従って、経口投与では実験動物に高い量のアミラーゼ抑
制剤Ａｌ−３６８８も何ら顕著な症候は認められ得なか
った。アミラーゼ抑制剤の薬理学的作用を試験するため
に、体重２００〜２５０ｔの絶食させた雄のウィスター
系ラットに本発明による抑制物質Ａｌ−３６８８ｉ澱粉
２ｆ／に９と同時に経口投与した。α−アミラーゼ抑１
１ｉｌｊ剤の投与前、投与中および投与後に採取された
血液試料中における血糖濃度を測定することにより製剤
の効力が実証された。
制剤Ａｌ−３６８８も何ら顕著な症候は認められ得なか
った。アミラーゼ抑制剤の薬理学的作用を試験するため
に、体重２００〜２５０ｔの絶食させた雄のウィスター
系ラットに本発明による抑制物質Ａｌ−３６８８ｉ澱粉
２ｆ／に９と同時に経口投与した。α−アミラーゼ抑１
１ｉｌｊ剤の投与前、投与中および投与後に採取された
血液試料中における血糖濃度を測定することにより製剤
の効力が実証された。
血液中の葡萄糖調節と並んで本発明によるポリペプチド
を唾液アミラーゼの抑制に使用することもできる。この
酵素は口内における澱粉の消化を生じそしてかくして形
成された糖は歯のう蝕を促進する。それゆえ本発明によ
る化合物は虫歯の形成の予防または減少に使用されうる
。
を唾液アミラーゼの抑制に使用することもできる。この
酵素は口内における澱粉の消化を生じそしてかくして形
成された糖は歯のう蝕を促進する。それゆえ本発明によ
る化合物は虫歯の形成の予防または減少に使用されうる
。
これらはまた生化学的試薬としてならびに診断剤として
も使用されうる。
も使用されうる。
１アミラ一ゼ抑制剤単位（ＡＩＵ）は試験条件下に２ア
ミラ一ゼ単位（ＡＵ）ｉ５０％まで抑制しうる抑制剤量
として定義される。国際協定によれば１アミラ一ゼ単位
は１分間以内に澱粉中の１μ当量のグルコシド結合を分
解する酵素量である。分解されたグルコシド結合のμ価
は還元糖のμ価としてジニトロサリチル酸を用いて測光
的に測定される。データはマルトース検量直線に基づき
測定されるマルトースμモルとじて計算される。
ミラ一ゼ単位（ＡＵ）ｉ５０％まで抑制しうる抑制剤量
として定義される。国際協定によれば１アミラ一ゼ単位
は１分間以内に澱粉中の１μ当量のグルコシド結合を分
解する酵素量である。分解されたグルコシド結合のμ価
は還元糖のμ価としてジニトロサリチル酸を用いて測光
的に測定される。データはマルトース検量直線に基づき
測定されるマルトースμモルとじて計算される。
試験は以下のようにして実施される。
豚の膵臓からのα−アミラーゼおよび試駆スべき溶液全
−緒にしてｐ［−１６，９の２０ミリモル燐酸塩緩衝液
ｔＯｄ＋１０ミリモルのＮａＣｔ中で６７℃で１０〜２
０分間予め保温培養する。酵素反応はＺｕｌｋｏｗｓｋ
ｉ氏による溶性澱粉（前記緩衝液中０．２５％）１．０
＋ｍ７ｔの添加により開始される。正確に１０分間後に
反応をジニトロサリチル酸着色試薬（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社製品、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
−ｒ −Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｎ ） ２、Ｏｍｊ
’１ｊｉ−用いて停止させそして発色嘔せるためにこの
混合物を沸騰した水浴中５分間加熱する。冷却後生試験
に対する５ ４６ ｎｍでの吸光を測定する。抑制され
てない酵素反応に比較して種々の抑制剤量を用いること
により確率図から図表的に５０％抑制を測定する。
−緒にしてｐ［−１６，９の２０ミリモル燐酸塩緩衝液
ｔＯｄ＋１０ミリモルのＮａＣｔ中で６７℃で１０〜２
０分間予め保温培養する。酵素反応はＺｕｌｋｏｗｓｋ
ｉ氏による溶性澱粉（前記緩衝液中０．２５％）１．０
＋ｍ７ｔの添加により開始される。正確に１０分間後に
反応をジニトロサリチル酸着色試薬（Ｂｏｅｈｒｉｎｇ
ｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ社製品、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ
−ｒ −Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｎ ） ２、Ｏｍｊ
’１ｊｉ−用いて停止させそして発色嘔せるためにこの
混合物を沸騰した水浴中５分間加熱する。冷却後生試験
に対する５ ４６ ｎｍでの吸光を測定する。抑制され
てない酵素反応に比較して種々の抑制剤量を用いること
により確率図から図表的に５０％抑制を測定する。
実施例 １
ＡＩ−６６８８′ｆｉ−得るために、凍結乾燥された細
菌ストレグトマイシス・アクレオファシェンスＦＨ１６
５６、ＤＳＭ２７９０の胞子から、微生物学的実施に通
常であるように、単一コロニー継代接種および傾斜管用
−て接種物を培養した（微生物の培養）。発酵に必要な
胞子の大量生産は同様にＲｏｕｘ−ビン中固形栄養培地
上で実施ちれた。
菌ストレグトマイシス・アクレオファシェンスＦＨ１６
５６、ＤＳＭ２７９０の胞子から、微生物学的実施に通
常であるように、単一コロニー継代接種および傾斜管用
−て接種物を培養した（微生物の培養）。発酵に必要な
胞子の大量生産は同様にＲｏｕｘ−ビン中固形栄養培地
上で実施ちれた。
プレート、傾斜管およびＲｏｕｘビン用寒天培地デキス
トリン １５．Ｏｆ−／ｉ 蔗糖 ３．ＯｆｌＩｋ 内袖出物 １．υ ｙ７．ｉ 酵母抽出物 ２．ＬＪ ｔ／’ｉ 食塩 Ｌｌ、５ ｔ／ｉ Ｋ２’ｋｌＰ０４０．５ ｔ／Ｊｌ− Ｆｅ８０４Ｘ７Ｈ２００，０１ｔ／Ｉｔ寒天 ２．ＣＪ
ｔ／Ｉ。
トリン １５．Ｏｆ−／ｉ 蔗糖 ３．ＯｆｌＩｋ 内袖出物 １．υ ｙ７．ｉ 酵母抽出物 ２．ＬＪ ｔ／’ｉ 食塩 Ｌｌ、５ ｔ／ｉ Ｋ２’ｋｌＰ０４０．５ ｔ／Ｊｌ− Ｆｅ８０４Ｘ７Ｈ２００，０１ｔ／Ｉｔ寒天 ２．ＣＪ
ｔ／Ｉ。
ｐｌ（−値 Ｚ３
１２０℃、２０分間滅菌、３０℃、？日間保温培養。
滅菌水１０〇−中にＲｏｕｘビンの胞子懸濁液を用いて
Ｆ’ｅｒｎｂａｃｈフラスコ中の栄養発酵中間体に接種
した（操作容量１．２７ ）。
Ｆ’ｅｒｎｂａｃｈフラスコ中の栄養発酵中間体に接種
した（操作容量１．２７ ）。
中間体培地
葡萄、ｌｉｔ ３（ＬＯｔ／Ｚ
大豆粉 ２０．０ ｔ／Ｉ。
とうもろこし澱粉 ２．０ ｔ／Ｉ。
尿 素 １．０ ｔ／Ｉｋ
硝酸アンモニウム １．Ｏｆ？／Ｉ。
麦芽抽出物 ５．ＯｆｌＡ
−一値 ６．８
１２０℃、２０分滅菌、振盪器上１５０ ｒｐｍおよび
振巾５ｃＩＩＬで２日間２８℃で保温培養。
振巾５ｃＩＩＬで２日間２８℃で保温培養。
主発酵
４８時間予備培養（前記）したのち主発酵培地２００！
にＦｅｒｎｂａｃｈ ７ラスコからの＠程物１．２ｉを
接種した。
にＦｅｒｎｂａｃｈ ７ラスコからの＠程物１．２ｉを
接種した。
培地
溶性澱粉 ４．０ ｆ／Ｉ。
葡萄糖 １．Ｏｆｆ／Ａ
カゼイン−ペグトン １．Ｌｌ グ／〃コーンステイー
プ（液体）ｏ、ａｒ／ｚ大豆粉 ０．４ ｆｌＡ （ＮＨ４）２ＨＰＯ４０，８ｆｌＡ −一値 ａ６ １２０℃、３０分間滅菌。
プ（液体）ｏ、ａｒ／ｚ大豆粉 ０．４ ｆｌＡ （ＮＨ４）２ＨＰＯ４０，８ｆｌＡ −一値 ａ６ １２０℃、３０分間滅菌。
保温培養は２８℃で攪拌下に末梢速度５ｍ、９および通
気速度Ｑ、１ ｖｖｍで遂行嘔れた。ｐ）１値は発酵中
に低下しそして水酸化ナトリウムを用いて５．５〜６．
０に制御された。５日後に収穫し、収量は培養液１！当
りＡｌ−３６８８６０■であった。
気速度Ｑ、１ ｖｖｍで遂行嘔れた。ｐ）１値は発酵中
に低下しそして水酸化ナトリウムを用いて５．５〜６．
０に制御された。５日後に収穫し、収量は培養液１！当
りＡｌ−３６８８６０■であった。
実施例 ２
実施例１記載の発酵溶液１８０ｉから遠心分離により細
胞塊全除去しそして透明な液相ヲ声４．９に調整した。
胞塊全除去しそして透明な液相ヲ声４．９に調整した。
次にこの溶液を１５ｉのポリスチレン吸着樹脂（１）ｉ
ａｉｏｎ■ＨＰ−２０）を含有するカラムに適用し、水
６０！で洗いそして漸増する量のイソゾロパノールを添
加した水で溶離した。２５％のイソゾロパノールを含有
する混合物により抑制剤ＡＩ −３６８８がカラムから
脱着された。これら活性な溶出液（２１）７ａ−限外濾
過により濃縮しそして水協加およびさらに限外濾過しな
がら残留物がＰＪら検出可能な塩を含有１７なくなるま
で脱塩した。得られる濃縮物（１，５７）ｋｐＨ５，６
の１７１５モル燐酸塩緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−修
正セルロース（ＤＥＡＥ−８ｅｐｈａｄｅｘ” ）上で
分離した。付加的な食塩傾斜を用いることによりα−ア
ミラーゼ抑抑制性性分溶離した。相当するフラクション
を脱塩した。ｐＨ５，６の１／１５モル燐酸塩緩衝液で
平衡化した限外濾過セル（Ａｍｉｃｏｎ町で濃縮した。
ａｉｏｎ■ＨＰ−２０）を含有するカラムに適用し、水
６０！で洗いそして漸増する量のイソゾロパノールを添
加した水で溶離した。２５％のイソゾロパノールを含有
する混合物により抑制剤ＡＩ −３６８８がカラムから
脱着された。これら活性な溶出液（２１）７ａ−限外濾
過により濃縮しそして水協加およびさらに限外濾過しな
がら残留物がＰＪら検出可能な塩を含有１７なくなるま
で脱塩した。得られる濃縮物（１，５７）ｋｐＨ５，６
の１７１５モル燐酸塩緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−修
正セルロース（ＤＥＡＥ−８ｅｐｈａｄｅｘ” ）上で
分離した。付加的な食塩傾斜を用いることによりα−ア
ミラーゼ抑抑制性性分溶離した。相当するフラクション
を脱塩した。ｐＨ５，６の１／１５モル燐酸塩緩衝液で
平衡化した限外濾過セル（Ａｍｉｃｏｎ町で濃縮した。
付加的な食塩傾斜を適用することによりα−アミラーゼ
抑制活性を溶離した。相当するフラクション會脱塩した
。限外濾過セル（ｐｘｎｉｃｏｎ＠）中で再び濃縮した
。最終精製は溶媒として純粋な水を用いポリアクリルア
ミドゲル（Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ −６■）で行われた。こ
のカラムのＡｌ−３６８８ｉ含有するフラクションを集
めぞして凍結乾燥した。α−アミラーゼ抑制剤単位１．
５×１０／■を有する無色粉末１．２７が得られた。
抑制活性を溶離した。相当するフラクション會脱塩した
。限外濾過セル（ｐｘｎｉｃｏｎ＠）中で再び濃縮した
。最終精製は溶媒として純粋な水を用いポリアクリルア
ミドゲル（Ｂｉｏｇｅｌ Ｐ −６■）で行われた。こ
のカラムのＡｌ−３６８８ｉ含有するフラクションを集
めぞして凍結乾燥した。α−アミラーゼ抑制剤単位１．
５×１０／■を有する無色粉末１．２７が得られた。
実施例 ３
数種の成分を含有するＡｌ−３６８８抑制剤複合物が実
施例１記載のようにして得られるが、そこに記載される
発酵時間５口上８日に廷長した。
施例１記載のようにして得られるが、そこに記載される
発酵時間５口上８日に廷長した。
発酵溶液の後処理は実施例２に従い遂行されるが、しか
しその際得られた無色物＊（’０．９ｒ）は化学的に単
一ではなかった。この粉末１（ＪＯＩｙ９を水／アセト
ニトリル（９５： ５ Ｖ／’１７ ） １−中に溶解
させそして逆相シリカゲルＲＰ、８に充填した鋼製カラ
ム（内径ｓ、２ｘ２５ｃＩｒＬ）上に適用した。トリフ
ルオロ酢酸を用いてｐｉ−１２，１に調整した溶媒混合
物水／アセトニトリル（９５：５）’ｉ用いて溶離した
。往復運動するポンプにより生じた７０バールなる操作
圧の下に毎分８−なる流速に調整した。カラムからの流
出液は２７６ ｎｍでの紫外吸収全測定することにより
監視し−た。４１〜４６分間供に数種の吸収化合物がカ
ラムから洗い出され、これら全すべて別々に集め、α−
アミラーゼ抑制作用について試験し、真空下に濃縮しそ
して仄に凍結乾燥した。個々のフラクションｆ Ｉ３ｅ
ｃｋｍａｎ ８ｅｑｕｅｎｃｅｒ ８９０ Ｃｔ−用い
て単一性について調査しそしてアミノ酸配列を泥犯した
・ここで分析の結果を示すと次のとおりでおった。
しその際得られた無色物＊（’０．９ｒ）は化学的に単
一ではなかった。この粉末１（ＪＯＩｙ９を水／アセト
ニトリル（９５： ５ Ｖ／’１７ ） １−中に溶解
させそして逆相シリカゲルＲＰ、８に充填した鋼製カラ
ム（内径ｓ、２ｘ２５ｃＩｒＬ）上に適用した。トリフ
ルオロ酢酸を用いてｐｉ−１２，１に調整した溶媒混合
物水／アセトニトリル（９５：５）’ｉ用いて溶離した
。往復運動するポンプにより生じた７０バールなる操作
圧の下に毎分８−なる流速に調整した。カラムからの流
出液は２７６ ｎｍでの紫外吸収全測定することにより
監視し−た。４１〜４６分間供に数種の吸収化合物がカ
ラムから洗い出され、これら全すべて別々に集め、α−
アミラーゼ抑制作用について試験し、真空下に濃縮しそ
して仄に凍結乾燥した。個々のフラクションｆ Ｉ３ｅ
ｃｋｍａｎ ８ｅｑｕｅｎｃｅｒ ８９０ Ｃｔ−用い
て単一性について調査しそしてアミノ酸配列を泥犯した
・ここで分析の結果を示すと次のとおりでおった。
ピーク１ その構造が式１ａに相当するがしかしながら
アミノ酸３４ （Ｇｌｕ）が（）ｉｎで交換されたアミ
ノ酸配列（＝ＡＩ−５６８８ Ｃ）ピーク２ その構造
が式１ａに相当するアミノ酸配列（＝ＡＩ−３６８８
） ピーク６ 式１ａの記載と同じであるが、しかしながら
アミノ酸１４ （Ｇｌｎ）がＧｌｕで置換されたアミノ
酸配列（＝ＡＩ−３６８８ ｂ ）ピーク４１−デスＡ
ｌａ−ＡＩ−３６８８（−ＡＩ−３６８８ａ）ピーク５
２種類の１−７′スＡｌａ−ＡＩ−３６８８化合物の混
合物、すなわち一方はアミノ酸 ３３ （Ｇｌｕ）が（）ｉｎにより置換されており（＝
ＡＩ−３６８８ ｅ ）そしてもう一方はアミノ酸１５
（（）ｉｎ）がＧｌｕにより置換されている（＝ＡＩ
−３６８８ ｄ ） すべての化合物の比α−アミラーゼ抑制活性は（１，５
±α１ ）Ｘ１０ ＡＩＵ／ηであった。
アミノ酸３４ （Ｇｌｕ）が（）ｉｎで交換されたアミ
ノ酸配列（＝ＡＩ−５６８８ Ｃ）ピーク２ その構造
が式１ａに相当するアミノ酸配列（＝ＡＩ−３６８８
） ピーク６ 式１ａの記載と同じであるが、しかしながら
アミノ酸１４ （Ｇｌｎ）がＧｌｕで置換されたアミノ
酸配列（＝ＡＩ−３６８８ ｂ ）ピーク４１−デスＡ
ｌａ−ＡＩ−３６８８（−ＡＩ−３６８８ａ）ピーク５
２種類の１−７′スＡｌａ−ＡＩ−３６８８化合物の混
合物、すなわち一方はアミノ酸 ３３ （Ｇｌｕ）が（）ｉｎにより置換されており（＝
ＡＩ−３６８８ ｅ ）そしてもう一方はアミノ酸１５
（（）ｉｎ）がＧｌｕにより置換されている（＝ＡＩ
−３６８８ ｄ ） すべての化合物の比α−アミラーゼ抑制活性は（１，５
±α１ ）Ｘ１０ ＡＩＵ／ηであった。
実施例 ４
（開環、有効成分の検出）
実施例２記載のＡｌ−３６８８１０１ｎｇｔｐ８７．０
の燐酸塩緩衝液５ｒｎｔ中に溶解させた。少量の試料を
試験のために除去しそして次にノチオエリトリトール１
０．ｑｆ加えた。室温で１８時間放置後反応溶液會α−
アミラーゼ抑制活性について出発溶做と比較して試験し
た。出発物質は１，５ｘ １０ ＡｘＵＡを有して完全
に活性でおるが、一方反応溶液の効力は検出限界以下で
おった。
の燐酸塩緩衝液５ｒｎｔ中に溶解させた。少量の試料を
試験のために除去しそして次にノチオエリトリトール１
０．ｑｆ加えた。室温で１８時間放置後反応溶液會α−
アミラーゼ抑制活性について出発溶做と比較して試験し
た。出発物質は１，５ｘ １０ ＡｘＵＡを有して完全
に活性でおるが、一方反応溶液の効力は検出限界以下で
おった。
特許出願人 ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト
第１頁の続き
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １） １０〜２００個のアミノ酸から成りそして下（式
中２はＧｌｎ 、 ＡｓｎまたはＭｅｔでちり、ＳはＳ
ｅｒまたはＴｈｒであり、Ｙはｐｈｅ 、 Ｔｙｒまた
はＡｓｎでありそしてＡｓはそれら自身天然のアミノ酸
またはペプチド鎖によってさらに置換されていることが
できる天然のアミノ酸５〜２５個からなるポリペプチド
鎖である）を有する環状ポリペプチドであってその際α
−アミラーゼ不活性化剤テンダミスタート（Ｔｅｎｄａ
ｍｉｓｔａｔ ）ならびにストレゾトマイシス・ビオラ
セオルパ−（８ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｏｌａｃ
ｅｏｒｕｂｅｒ）ＡＴＣＣ３１２０９の培養Ｆｆｆから
得られたα−アミラーゼ抑制剤を除外するものとする。 ２）式Ｉにおいて２がＧｉｎであり、ＳがＳｅｒであり
、ＹがＴｙｒでありそしてＡｓが２個のペプチド鎖によ
って置換されている１２個のアミノ酸からなるポリペプ
チド鎖であることを特徴とする前記第１項記載の環状ポ
リペプチド。 ６）式１ａ を有することを特徴とする前記第１項記載の環状ポリペ
プチド。 ４）ポリペグチドｔ−８−生ずるストレプトミセス科（
５ｔｒｅｐｔ、ｏｍｙｃｅｔ、ａｓ ）放線菌ヲ発酵培
地中深部培養法で培養し、ポリペプチドを菌糸体または
培養Ｆ液からそれ自体知られた方法で単離しそして精製
すること全特徴とする前記第１項記載の環状ポリペプチ
ドの製法。 ５）ストレグトマイシス・アラレオファシェンス（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｕｒｅｏｆａｃｉａｎｓ ）
Ｄ８Ｍ ２７９０ ｆ培養しそして培養ｐ液からポリ
ペプチドＡｌ−３６８８全単離しそして精製することを
特徴とする前記第４項記載の方法。 ６）前記第１項記載のポリペプチドを含有することを特
徴とする医薬製剤。 ７）前記第６項記載のポリペプチドを含有することを特
徴とする医薬製剤。 ８）α−アミラーゼ抑制のための前記第１項記載のポリ
ペプチドの使用。 ９）ストレグトマイシス・アクレオ７アシ工ン
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