JPS6019497A - 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法Info
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- JPS6019497A JPS6019497A JP12820483A JP12820483A JPS6019497A JP S6019497 A JPS6019497 A JP S6019497A JP 12820483 A JP12820483 A JP 12820483A JP 12820483 A JP12820483 A JP 12820483A JP S6019497 A JPS6019497 A JP S6019497A
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法にょるＩ７−グルタミン酸の製造法に関
する。
する。
本発明者等は、ブレビバクテリウム届およびコリネバク
テリウム属に屈し、りエン酸に耐性ををする変異株の中
からいくつかのＬ−グルタミン酸生産能の優秀な菌株を
分離することに成功した。
テリウム属に屈し、りエン酸に耐性ををする変異株の中
からいくつかのＬ−グルタミン酸生産能の優秀な菌株を
分離することに成功した。
本発明は、この知見に基いて完成されたものである。
即ち、本発明は、ブレビバクテリウム属またはコリネバ
クテリウム属に属し、クエン酸に対し耐性を佇する微生
物を培養し、培養液中に生成諮積したし一グルタミン酸
を採取することを特徴とするし一グルタミン酸の製造法
に関する。
クテリウム属に属し、クエン酸に対し耐性を佇する微生
物を培養し、培養液中に生成諮積したし一グルタミン酸
を採取することを特徴とするし一グルタミン酸の製造法
に関する。
本発明に使用するブレビバクテリウム属またはコリネバ
クテリウム属のクエン酸に耐性を仔する菌株は例えば以
下の菌株がある。
クテリウム属のクエン酸に耐性を仔する菌株は例えば以
下の菌株がある。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタム ＡＪ１２
０５３ （ＦＥＲＭ−Ｐ ７１４０）コリネバクテリウ
ム・グルタミクム ° ＡＪＩ２０５４ （ＦＥＲＭ−
Ｐ ７１４１）これらの菌株は、ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１３Ｅｉ８９及びコリネ
バクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２を親株
として変異誘導したものである。この他に、本発明のク
エン酸耐性を有し、Ｌ−グルタミン酸生産能ををする変
異株を誘導するだめの親株としては、Ｌ−グルタミン酸
生産能を存するコリネフォルム−バクテリアが使用でき
る。コリネフォルム・バクテリアとは好気性、グラム陽
性桿菌であり、非抗酸性てバーデース響マニアル・オブ
・デクーミネイティタ・バクテリオロジー第８版５９９
頁（Ｉ）１７４）に記載されている。本発明の親株とし
て使用できるコリネフォルム・グルタミン酸生産菌の例
としては次のようなものかあげられる。
０５３ （ＦＥＲＭ−Ｐ ７１４０）コリネバクテリウ
ム・グルタミクム ° ＡＪＩ２０５４ （ＦＥＲＭ−
Ｐ ７１４１）これらの菌株は、ブレビバクテリウム・
ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１３Ｅｉ８９及びコリネ
バクテリウム・グルタミクムＡＴＣＣ１３０３２を親株
として変異誘導したものである。この他に、本発明のク
エン酸耐性を有し、Ｌ−グルタミン酸生産能ををする変
異株を誘導するだめの親株としては、Ｌ−グルタミン酸
生産能を存するコリネフォルム−バクテリアが使用でき
る。コリネフォルム・バクテリアとは好気性、グラム陽
性桿菌であり、非抗酸性てバーデース響マニアル・オブ
・デクーミネイティタ・バクテリオロジー第８版５９９
頁（Ｉ）１７４）に記載されている。本発明の親株とし
て使用できるコリネフォルム・グルタミン酸生産菌の例
としては次のようなものかあげられる。
ブレビバクテリウム・フラバム ＡＴＣＣ１４００７プ
レビバクテルウム・サラカロリティカム ＡＴＣＣ１４
０８０ブレビバクテリウム・デバリカタム ＡＴＣＣ＋
４０２０コリネバクテリウム・アセドア７ドフイラム
ＡＴＣＣ＋３８７０本発明のクエ／ｒＩ！、耐性変異株
を変異誘導する方法としては、紫外線照射、放射線照射
、変異誘導起剤処理等の通常の方法が用いられ、例えば
２００μｇｌ紅のニトロングアニジ／で０°Ｃで２０分
間処理する方法等がある。
レビバクテルウム・サラカロリティカム ＡＴＣＣ１４
０８０ブレビバクテリウム・デバリカタム ＡＴＣＣ＋
４０２０コリネバクテリウム・アセドア７ドフイラム
ＡＴＣＣ＋３８７０本発明のクエ／ｒＩ！、耐性変異株
を変異誘導する方法としては、紫外線照射、放射線照射
、変異誘導起剤処理等の通常の方法が用いられ、例えば
２００μｇｌ紅のニトロングアニジ／で０°Ｃで２０分
間処理する方法等がある。
以下に本発明の使用菌であるブレビバクテリウム・ラク
トフェルメンタム ＡＪ ＋２０５３及びコリネバクゾ
リウム・グルタミクム ＡＪ １２０５４の具体的誘導
方法とクエン酸に対する耐性の度合を示す実験例を示す
。
トフェルメンタム ＡＪ ＋２０５３及びコリネバクゾ
リウム・グルタミクム ＡＪ １２０５４の具体的誘導
方法とクエン酸に対する耐性の度合を示す実験例を示す
。
ブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１
３０８９およびコリネノ（クテリウム・グルタミクム
八ＴＣＣ１３０３２を親株とし、これらを２０００μｇ
／ｍ名のニトロリ・グアニジンで０℃で２０分１１処理
した。ついて、第−表に示す合成培地に親株力≦生育で
きない濃度のクエン酸、即ち１０００＠ ／ ｌのクエ
ン酸を添加して平板培地を作成し、これ番ご変異処理し
た ＡＴＣＣ＋３１３８９およびＡＴＣＣ１３０３２を
塗４１し、３０°Ｃで９日間放置後、コロニーとして生
育する菌株、即ちクエン酸耐性変異株を採取し、このう
ちグルタミン酸生産能の優れた変異株 八Ｊ１２０５３
（ＡＴＣＣ１３０８９より誘導）及び変異株へＪ １２
０５４（ＡＴＣＣ１３０３２より誘導）を採取した。
３０８９およびコリネノ（クテリウム・グルタミクム
八ＴＣＣ１３０３２を親株とし、これらを２０００μｇ
／ｍ名のニトロリ・グアニジンで０℃で２０分１１処理
した。ついて、第−表に示す合成培地に親株力≦生育で
きない濃度のクエン酸、即ち１０００＠ ／ ｌのクエ
ン酸を添加して平板培地を作成し、これ番ご変異処理し
た ＡＴＣＣ＋３１３８９およびＡＴＣＣ１３０３２を
塗４１し、３０°Ｃで９日間放置後、コロニーとして生
育する菌株、即ちクエン酸耐性変異株を採取し、このう
ちグルタミン酸生産能の優れた変異株 八Ｊ１２０５３
（ＡＴＣＣ１３０８９より誘導）及び変異株へＪ １２
０５４（ＡＴＣＣ１３０３２より誘導）を採取した。
第 −表
成 分 Ｏ度 成 分 −度
グ／ｌ／：ｌ−ｙ、 ０．５ ｇ＃ｊ！ ＦｅＣｌ２・
６Ｈ２０４，８５ｍｇ／ｆｆ尿 素 ０． ＋５ ＩＩ
Ｃｕ５Ｏｔ ’５１１２０ １．９５ ＪＪ硫ｍア／
モニ’ｙム ０．＋５ 〃 （Ｎｌ１１）６ＭＯ７０２
１０，＋８５ ｎＫＩＩ２ＰＯ１Ｏ，３ｎ Ｚｎ５Ｏｔ
４ＨａＯ４４ｎＫ２１１１’ＯｔＯ，１〃ＭｎＣｌ２４
１１２０４４〃ＭｊｉＳＯｔ−７１−ｈｏ ０．０１
〃Ｎａ２１１ｔＯ？・１Ｉ２００．４４ ｎＣａＣｌ
２４２＋１ｚ Ｏ’ Ｏ，ｌ ｗｇ／ｕ ビオチン ３
μｇ／ｄ→ノイアミノ１ｉ＋酸塩 １０ ｕｇ／ｕ
ｐｌ＋ ７．０次に、上述の変異処理により得られたＡ
Ｊ １２０５３、ＡＪ １２０５４及び対応する親株の
クエン酸に対する６、１性の度合を調べた結果を第二表
に示す。
６Ｈ２０４，８５ｍｇ／ｆｆ尿 素 ０． ＋５ ＩＩ
Ｃｕ５Ｏｔ ’５１１２０ １．９５ ＪＪ硫ｍア／
モニ’ｙム ０．＋５ 〃 （Ｎｌ１１）６ＭＯ７０２
１０，＋８５ ｎＫＩＩ２ＰＯ１Ｏ，３ｎ Ｚｎ５Ｏｔ
４ＨａＯ４４ｎＫ２１１１’ＯｔＯ，１〃ＭｎＣｌ２４
１１２０４４〃ＭｊｉＳＯｔ−７１−ｈｏ ０．０１
〃Ｎａ２１１ｔＯ？・１Ｉ２００．４４ ｎＣａＣｌ
２４２＋１ｚ Ｏ’ Ｏ，ｌ ｗｇ／ｕ ビオチン ３
μｇ／ｄ→ノイアミノ１ｉ＋酸塩 １０ ｕｇ／ｕ
ｐｌ＋ ７．０次に、上述の変異処理により得られたＡ
Ｊ １２０５３、ＡＪ １２０５４及び対応する親株の
クエン酸に対する６、１性の度合を調べた結果を第二表
に示す。
第 二 表
相対生育度
クエン酸０度 ＡＴＣＣＡＪ ＡＴＣＣＡＪ（暉／！、
） １３０８９ １２０５３ １３０３２ １２０５４
０ １００ １００ ’１００ １００２０ １００
１００ １００ １００４０ １００ １００ １００
１００５０ ９１ １００ ９６ １００ １００ （３０１００，７３１００ ２００１３８９２９７４ １００００’６２ ０ ３９ 第二表に示した相対生育度は、次のようにして測定した
。
） １３０８９ １２０５３ １３０３２ １２０５４
０ １００ １００ ’１００ １００２０ １００
１００ １００ １００４０ １００ １００ １００
１００５０ ９１ １００ ９６ １００ １００ （３０１００，７３１００ ２００１３８９２９７４ １００００’６２ ０ ３９ 第二表に示した相対生育度は、次のようにして測定した
。
第−表に示す組成の培地に第二表に示した濃度のクエン
酸を加え５００１ＪＩ！容の肩付フラスコに夫々２Ｏｍ
ｆ宛分注し１２０ ’Ｃで１０分間加熱滅菌した。この
培地に肉汁寒天培地上に生育（３１°Ｃ１２４時間培養
）させた第二表に示した菌株を接種し、３１．５℃で２
４時間振盪培養した。培養液を純水で２６倍に希釈し、
５ Ｅｉ ２ ｎ１１に於ける吸光度を測定しクエン酸
無添加区の吸光度を１００とした時の相対値をめた。
酸を加え５００１ＪＩ！容の肩付フラスコに夫々２Ｏｍ
ｆ宛分注し１２０ ’Ｃで１０分間加熱滅菌した。この
培地に肉汁寒天培地上に生育（３１°Ｃ１２４時間培養
）させた第二表に示した菌株を接種し、３１．５℃で２
４時間振盪培養した。培養液を純水で２６倍に希釈し、
５ Ｅｉ ２ ｎ１１に於ける吸光度を測定しクエン酸
無添加区の吸光度を１００とした時の相対値をめた。
なお、本変異株はクエン酸に対して耐性を示す以外に生
育湯度に関しても親株か３４℃以上で生育できないのに
対し、本変異株は３８°Ｃまで生育可能であり、グルタ
ミン酸生産能は３７°Ｃまでは低下しないという特徴を
何している。
育湯度に関しても親株か３４℃以上で生育できないのに
対し、本変異株は３８°Ｃまで生育可能であり、グルタ
ミン酸生産能は３７°Ｃまでは低下しないという特徴を
何している。
本発明において使用する培地は炭素源、窒素源、無機イ
オノ、更に必要に応じて打機微量栄養素を含をする栄養
培地か使用される。
オノ、更に必要に応じて打機微量栄養素を含をする栄養
培地か使用される。
上記炭素源としてはグルコース、シュークロース、フラ
クトース、マルトース等の糖類、これ等糖類を含をする
澱粉粘化液、果汁等、更には酢酸等の「機酸、エタノー
ル等のアルコール類も使用できる。窒素源としては、例
えば通常のし一グルタミン酸発酵に用いられるア／モニ
ウム塩、アンモニア水、アンモニアガス、尿素等が用い
られ、その他必要に応してリン酸塩、マグネシウム塩等
の無機イオンが適宜培地に添加される。また必要に応じ
てサイアミン、ビオチン等の微量栄養素かＭ宜（ｌ用さ
れる。さらにビオチンが過剰に存在する培地には、ポリ
オキシエチレンソルビクンモノバルミテート、ペニシリ
ン等のビオチン作用抑制物質が常法により培地に添加さ
れる。
クトース、マルトース等の糖類、これ等糖類を含をする
澱粉粘化液、果汁等、更には酢酸等の「機酸、エタノー
ル等のアルコール類も使用できる。窒素源としては、例
えば通常のし一グルタミン酸発酵に用いられるア／モニ
ウム塩、アンモニア水、アンモニアガス、尿素等が用い
られ、その他必要に応してリン酸塩、マグネシウム塩等
の無機イオンが適宜培地に添加される。また必要に応じ
てサイアミン、ビオチン等の微量栄養素かＭ宜（ｌ用さ
れる。さらにビオチンが過剰に存在する培地には、ポリ
オキシエチレンソルビクンモノバルミテート、ペニシリ
ン等のビオチン作用抑制物質が常法により培地に添加さ
れる。
培養は、通常のし一グルタミン酸発酵と同様に好気的条
件下で行うのが良く、培養温度を２４〜３７℃、ｐＨを
６〜９に制御するのが良く、ｐ Ｉ−１の調整には無機
あるいは有機の酸性あるいは、アルカリ性物質、さらに
は尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス等を使用する
ことかできる。発酵液からのし一グルタミン酸の採取は
イオン交換樹脂法、その他の公知の方法を適宜組合せる
ことにより行われる。
件下で行うのが良く、培養温度を２４〜３７℃、ｐＨを
６〜９に制御するのが良く、ｐ Ｉ−１の調整には無機
あるいは有機の酸性あるいは、アルカリ性物質、さらに
は尿素、炭酸カルシウム、アンモニアガス等を使用する
ことかできる。発酵液からのし一グルタミン酸の採取は
イオン交換樹脂法、その他の公知の方法を適宜組合せる
ことにより行われる。
以下、実施例にて説明する。
実施例１
グルコ−スＩＯｇ／ｄＩ！、ＫＩＩ２ＰＯａ Ｏ，Ｉｇ
／ｄ６、ＭｇＳＯ４・７１１ｚ ＯＯ，Ｉｇ／ａｅ、尿
素１ｇ／ｄｆ 、ＦｃＳＯ４・７１ｈ ＯＬｇ ／ｅｌ
ｌ ％ ？ イアミノ地酸塩１０μｇ／ｃＬｇ、ビオチ
ン０．３μｇ／ｄ！、大豆蛋白分解濃縮液（Ｔ−Ｎとし
て）３０１１ｇ ／ｄ６ （ｐＨ７，０）の組成を有す
る培地を調製し、その２０紅ずつを５００ ｖｌ容振詰
フラスコに分注し、１１５℃１０分加熱殺菌した。この
培地に第二表に示す菌株を夫々接種し、３１．５°Ｃで
振公培養を行った。なお、培養中は培養液をｐＨ８，５
〜９．０に保つため４５ｇ／ｃｌｆの尿素水溶液をΔ宜
添加した。
／ｄ６、ＭｇＳＯ４・７１１ｚ ＯＯ，Ｉｇ／ａｅ、尿
素１ｇ／ｄｆ 、ＦｃＳＯ４・７１ｈ ＯＬｇ ／ｅｌ
ｌ ％ ？ イアミノ地酸塩１０μｇ／ｃＬｇ、ビオチ
ン０．３μｇ／ｄ！、大豆蛋白分解濃縮液（Ｔ−Ｎとし
て）３０１１ｇ ／ｄ６ （ｐＨ７，０）の組成を有す
る培地を調製し、その２０紅ずつを５００ ｖｌ容振詰
フラスコに分注し、１１５℃１０分加熱殺菌した。この
培地に第二表に示す菌株を夫々接種し、３１．５°Ｃで
振公培養を行った。なお、培養中は培養液をｐＨ８，５
〜９．０に保つため４５ｇ／ｃｌｆの尿素水溶液をΔ宜
添加した。
４０時間で培養を終了した。培養中に蓄積したＬ−グル
タミン酸の対糖収率をめた。その結果を第三表に示す。
タミン酸の対糖収率をめた。その結果を第三表に示す。
第 三 表 し−グールタ ミ ン酸敗率ＡＪ １２０
５３ ５９ ＡＴＣＣ１３０３２４８ ＡＪ １２０５４ ５５ 実施例２ 甘蔗廃糖蜜（全糖として） ｌｏｇ／ｄＪ！ １ＫＩＩ
２ ＰＯ４０、Ｉｇ／ｄＪｌ： １ＭｇＳＯ４・７Ｌ’
００．１ｇ／ｄ１．、Ｆｅ５Ｏｎ ・７１ｈ ＯＩｍ
ｇ ／Ｕ １１１１ｎＳＯ４・７１ｈ ＯＩｇ ／Ｕ
１サイアミン塩酸塩２０μｇ／Ｊ、および大豆蛋白分解
濃縮液（Ｔ−Ｎとして） ３（ｉｍｇ ／ｄｉ！ （ｐ
Ｈ７，０）を含有する培地３００ｖ！。
５３ ５９ ＡＴＣＣ１３０３２４８ ＡＪ １２０５４ ５５ 実施例２ 甘蔗廃糖蜜（全糖として） ｌｏｇ／ｄＪ！ １ＫＩＩ
２ ＰＯ４０、Ｉｇ／ｄＪｌ： １ＭｇＳＯ４・７Ｌ’
００．１ｇ／ｄ１．、Ｆｅ５Ｏｎ ・７１ｈ ＯＩｍ
ｇ ／Ｕ １１１１ｎＳＯ４・７１ｈ ＯＩｇ ／Ｕ
１サイアミン塩酸塩２０μｇ／Ｊ、および大豆蛋白分解
濃縮液（Ｔ−Ｎとして） ３（ｉｍｇ ／ｄｉ！ （ｐ
Ｈ７，０）を含有する培地３００ｖ！。
を１．５！、容ジャーファーメンタ−に張込み１２０℃
１５分間滅菌した。この培地に同培地で培養したブレビ
バクテリウム・ラクトフェルメンタム 八ＴＣｃ １３
６８９、八Ｊ １２０５３、フリネバクテリウム・グル
タミクム ＡＴＣＣ３３０３２及び八Ｊ １２０５４の
種培養液を接種し、Ｐｌｌを７．８に保ちつつ３１．５
℃で通気撹拌培養（ＩＯｏＯｒｐｍ、イＶＶＭ）を行っ
た。培養開始後、培養液の２６倍希釈液の５ Ｂ ２
ｎｍにおける吸光度が、０．３に到達した時にポリオキ
シエチレンンルビタ／モノパルミチイトを添加した。以
上の結果、培養４０時間後第四表に示す量のＬ−グルタ
ミン酸が培養液中に生成蓄積された。
１５分間滅菌した。この培地に同培地で培養したブレビ
バクテリウム・ラクトフェルメンタム 八ＴＣｃ １３
６８９、八Ｊ １２０５３、フリネバクテリウム・グル
タミクム ＡＴＣＣ３３０３２及び八Ｊ １２０５４の
種培養液を接種し、Ｐｌｌを７．８に保ちつつ３１．５
℃で通気撹拌培養（ＩＯｏＯｒｐｍ、イＶＶＭ）を行っ
た。培養開始後、培養液の２６倍希釈液の５ Ｂ ２
ｎｍにおける吸光度が、０．３に到達した時にポリオキ
シエチレンンルビタ／モノパルミチイトを添加した。以
上の結果、培養４０時間後第四表に示す量のＬ−グルタ
ミン酸が培養液中に生成蓄積された。
第 四 表 Ｌ−グルタミン酸収率
菌 株 歯 対糖収率（％）
ＡＴＣＣ１３６８９４７
ＡＪ １２０５３ ５９
ＡＴＣＣ１３０３２４Ｇ
ＡＪ １２０５４ ５５
実施例２
実施例１に示した方法に従い、第三表に示した菌株を接
種し、第三表に示した温度で培養した。
種し、第三表に示した温度で培養した。
なお、培地中のグルコースの消費が５ ｇ ／ ｄ６以
下番ごなった時点から培養の終了時間である４０時間ま
での間に新たに５ｇ／ ｕになる様に予め調整したグル
コース溶液を段階的に添加した。培養終了後の培地中の
グルタミン酸の蓄積量を第五表に示した。
下番ごなった時点から培養の終了時間である４０時間ま
での間に新たに５ｇ／ ｕになる様に予め調整したグル
コース溶液を段階的に添加した。培養終了後の培地中の
グルタミン酸の蓄積量を第五表に示した。
第 五 表
Claims (1)
- ブレビバクテリウム属もしくはコリネバクテリウム属に
属し、クエン酸耐性を介し、Ｌ−グルタミン酸生産能を
をする微生物を培養し、培養液中に生成蓄積したし一グ
ルタミン酸を採取することを特徴とするＩ７−グルタミ
ン酸の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12820483A JPS6019497A (ja) | 1983-07-14 | 1983-07-14 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12820483A JPS6019497A (ja) | 1983-07-14 | 1983-07-14 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6019497A true JPS6019497A (ja) | 1985-01-31 |
Family
ID=14979044
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12820483A Pending JPS6019497A (ja) | 1983-07-14 | 1983-07-14 | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6019497A (ja) |
-
1983
- 1983-07-14 JP JP12820483A patent/JPS6019497A/ja active Pending
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