JPS60214890A - Ｌ−カルニチンおよびγ−ブチロベタインの製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、心臓疾患や脂肪血症の治療剤として有用なＬ
−力μ二チンおよびγ−ブチロベタインの製造法に関す
る。

従来の技術 り一カルニチンおよびγ−ブチロベタインは、下記の構
造を有する。

Ｒ−ＯＨ：Ｌ−力ルニチン Ｒ≠Ｈ：γ−ブチロベタイン Ｌ−力／Ｌ’二チンは、心臓疾患や脂肪面症の治療剤と
して有用であり、また、高カロリー輸液として用いるこ
ともできることが知られている。γ−ブチロベタインも
同様に用いることができることが知られている。

発明が解決しようとする問題点 これらの化合物は、化学的合成法などによって製造され
ることが知られているが、このような化学的合成法によ
るとラセミ体が生成するためその分割のための工程が必
要となるので、製造工程が煩雑となる。

本発明者らは、これら化合物を醗酵法により有利に製造
する方法を得る目的で鋭意研究した結果、エメリセラ属
菌を用いると有利にこれら化合物を製造できることを見
い出し、これに基づいてさらに研究した結果、本発明を
完成した。

、　本発明は、エメリセラ属に属しＬ−力μニチンおよ
び／またはγ−ブチロベタインを生産する能力を有する
微生物を培地に培養し、培養物中にこれを生成蓄積させ
採取することを特徴とするＬ−力〃ニチンおよび／ｌた
はγ−ブチロベタインの製造法である。

本発明に用いられる微生物としては、エメリセフ（Ｅｍ
ｅｒｉｃｅｌｌａ　）属に属し、Ｌ−力／Ｉ／ニチンお
よび／またはγ−ブチロベタインを生産する能力を有す
るものであれば、いずれも用いることができる。その例
としては、たとえばエメリセフ・カドリリネアター（Ｅ
ｍｅｒｉｃｅｌｌａ　ｑｕａｄｒｉｌｉｎｅａｔａ）が
挙げられ、さらに具体的には、エメリセラ・カドリリネ
アターエＦＯ５８５９株、その変異株であるエメリセフ
・力ドリリネアター８ｃｍ５−１８１株が挙げられる。

この変異株は紫外線照射により誘導され、生理活性物質
ＦＡ−５８５９（特開昭５８−９６０４９公報参照）を
生産しない菌株であり、Ｌ−カルニチンおよび／または
γ−ブチベタインの生産において、生産性、単離精製の
容易さなど、親株と比べてはるかに有利に使用しうるも
のである。

エメリセラ・カドリリネアターの菌学的性状は日本画学
会会報第２０巻第４号４８１頁（１９７９年）、トラン
スアクシロンズ・オプ・ザ・ミコロジカル・ソサエティ
・オプ・ジャパン （Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　Ｔｈｅ　Ｍｙｃｏ
ｌｏｇｉｃａｌＳｏｃｉｅｔｙ　ｏｆ　Ｊａｐａｎ　）
　ｖｏｌ、　２０１　＆　４１４８１（１９７９）に記
載の菌学的性状と同一である。

上記エメリセラ・カドリリネアターＩＦ０５８５９株は
、財団法人発酵研究所（ＩＦＯ）に昭和２９年９月１４
日に寄託され、該研究所（工ＦＯ）発行のリスト・オプ
・力μチャーズ第６版１９７８年（工ｎａｔｉｔｕｔｅ
　Ｆｏｒ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ＋０ｓａｋａ＋　
Ｌｉ５ｔ　Ｏｆ　Ｃｕ１ｔｕｒｅｓ＋　ｔｓｙａ、　５
ｉｘｔｈＥｄｉｔｉｏｎ）に掲載されている。

上記エメリセフ・カドリリネアター８ｃｍ５−１８１株
は、財団法人発酵研究所に昭和５９年３月２２日に受託
番号工ＦＯ３１５００として寄託されている。また、本
微生物は、通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所
（ＦＢＩ）に昭和５９年３月２８日に受託番号ＦＥＲＭ
　Ｐ−７５６５として寄託されている。

エメリセラ属は分類学上アスベμギμス属のうち完全世
代が明らかになった株をまとめたものであるので、菌株
の有性世代や無性世代とは無関係ＫＬ−カ〜ニチンおよ
び／ｌたはγ−ブチロベタインを生成する能力を有する
菌株であればいずれの属の微生物を用いることができる
ことはざうまでもない。

エメリセフ属菌は、微生物の一般的性質として自然的に
または変異剤によって変異を起し得る。

たとえばＸ線、ガンマ−線、紫外線等の放射線の照射、
更には単胞子分離、種々の薬剤による処理または薬剤を
含有する培地上での培養、その他の手段で変異させて得
られる多くの変異株、あるいれ自然的に得られた突然変
異株等であっても、Ｌ−カルニチンおよび／ｌたはγ−
ブチロベタインを生産する性質を有するものはすべて本
発明の方法に利用し得る。

本発明方法の培養に用いられる培地は用いられる菌株が
利用し得る栄養−を含むものなら、液状でも固状でもよ
いが、大量を処理するときには液体培地を用いるのがよ
り適当である。培地には同化し得る伏素源、消化し得る
窒素源、無機物質。

微量栄養素が適宜配合される。度素諒としては、たとえ
ばブドウ糖、乳糖、Ｖヨ糖、麦芽糖、デキストリン、で
ん粉、グリセリン、マンニド−〃。

ソμピトーμ、油脂類（例、大豆油、オリーブ油。

ヌカ油、ごま油、ラード油、チキン油など）、各種脂肪
酸類（例、ツウリン酸、ミリスチン酸、／＜ルミチン酸
、ステアリン酸、オレイン酸など）、窒素源としては、
たとえば肉エキス、酵母エキス。

乾燥酵母、大豆粉、コーン・スチーデ・リカー。

ペプトン、綿実粉、廃糖蜜、尿累、アンモニウム塩類１
１Ｊ、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム。

硝酸アンモニウム、酢酸アンモニウムなど）その他が用
いられる。さらにナトリウム、カリウム。

力ｆｉ／Ｖウム、マグネシウムなどを含む塩類、鉄。

マンガン、亜鉛、コバμト、ニッケｐなどの金属塩類、
リン酸、ホウ酸などの塩類や酢酸、グロビオン酸などの
有機酸の塩類が適宜用いられる。そノ他、アミノ酸（例
、グルタミン酸、アスパラギン酸、アフニン、リジン、
バリン、メチオニン。

プロリン等）、ペプチド（例、ジペプチド、トリペプチ
ド等）、ビタミン類（例、Ｂエ　、Ｂ２．ニコチン酸、
Ｂ工２．Ｃ等）、核酸類（例、プリン。

ピリミジンおよびその誘導体）等を含有させてもよい。

もちろん培地のｐＨを調節する目的で無機または有機の
酸、アルカリ類、緩衝剤等を加え、あるいは消泡の目的
で油脂類９表面活性剤等の適量が添加される。

培養の手段は静置培養でも、振盪培養あるいは通気撹拌
培養法等の手段を用いてもよい。大量の処理には、いわ
ゆる深部通気攪拌培養によるのが望ましいことはいうま
でもない。培養の条件は培地の状態１組成、菌株の種類
、培養の手段等によって一定しないのは当然であるが、
それらは通常約１５°Ｃ〜３７°Ｃの温度で、初発ｐＨ
約３〜８付近に選択するのがよい。とシわけ、培養中期
の温度は約２３°Ｃ〜３２°Ｃ９また初発ｐＨは約４〜
６るまで培養するのがよい。これに要する時間は液体培
地を用いる振盪培養または通気攪拌培養の場合は通常約
１〜１２日開栓度である。

生成したＬ−カルニチンおよび／またはγ−ブチロベタ
インは主として培養ろ液中に存在するので、培養物を遠
心分離あるいは沖過によって上澄液と菌体とに分離し、
その上清液から精製するのが有利である。しかし培養物
から、直接に精製することも可能である。

さらにこのＬ−カルニチンおよび／またはγ−ブチロベ
タインを採取するには微生物が生産する代翻産物を採取
するのに通常用いられる手段を適宜利用することが出来
る。たとえば遠心分離によって菌体を除去したのち、そ
の炉液から一般に有効物質を分離、採取、精製する方法
を用いる。

すなわち適当な溶媒に対する溶解性および溶解度の差、
溶液からの析出法および析出速度の差、種々の吸着親和
力の差、イオン交換体によるイオン交換クロマトグラフ
ィー、あるいは減圧濃縮。

凍結乾燥、結晶化、再結晶、乾燥などの手段が単独ある
いは任意の順序に組合わせて、または反復して利用され
る。

その−例を示すと次のとおりである。すなわち、培養終
了後培養液をか過し得られるｐ液を強酸性陽イオン交換
樹脂たとえばアンバーライトエＲ−１２０（Ｈ）（ｃｆ
−ム・アンド・ハース社（米国）製〕のカラムに通過さ
せると、ＦＡ−５８５９は樹脂に吸着される。樹脂から
の溶出はアンモニア水、アルカリ水、あるいは鉱酸また
は無機梅（たとえば食塩、塩化アンモニウム、硫酸ソー
ダ。

硫酸アンモニウム）の水溶液を使用することが出来る。

ここに得られた活性物質の溶出液の脱塩にはたとえば活
性炭などの吸着剤を用い活性物質をこれに吸着せしめた
のち親水性有機溶媒系を用いて溶出させる。親水性有機
溶媒系として用いられるものには、アセトン、メチ〜エ
チμケトン、メチｐイソブチ〃ケトンなどの低級ケトン
類、メタノール、エタノール、インプロパノ−ｐ、プロ
パツール、ブタノール、インブタノール等の低級ア〜コ
ー／Ｌ’類の単独または混合溶媒と水との混合溶液があ
げられる。また水溶性高分子物質が混ｒＥ　している場
合これを除去するには通常用いられる分子ふるいの方法
を利用するのがよい。すなわち本物質が低分子であるこ
とから、たとえばセファデックスＧ−１０（）１−マシ
ア・ファイン・ケミ力／ｌ／（スエーデン）製〕などを
用いて水溶性高分子物質を吸着させ除去することができ
る。このようにして得られた机物質をさらに精製するに
は氷晶が両性物質であることを利用して、緩衝化したカ
チオン交換樹脂を用いるカラムクロマトグラフィーが有
利にｆ−ＩＪ用出来る。すなわち、担体としてはカチオ
ン交換樹脂たとえばアンバーフイトエＲ−１２０，ＣＧ
−５Ｑ、ダウエックス５０　（Ｘ２）〔ダ２゛ケミカル
社（米国）製〕、ダイヤイオン８Ｋ（三菱化成（日本）
製）、ＣＭ−セファデックス〔）１−マシア・ファイン
・ケミ力／Ｌ／（スエーデン）製〕等を適当なｐＨたと
えばｐＨ４の緩衝液を用いて緩衝化したものを用いる。

粗物質の溶液を通過せしめて樹脂に眼着後、溶出には吸
着時のｐＨ値より高いｐＨ値の緩衝液を用いて溶出する
。再度この有効区分を強酸性カチオン交換樹脂を用いて
吸着・脱離を行って、脱塩後、さらに混在する不純物を
除く目的で、強塩基性アニオン交換樹脂たとえば、ダウ
エックス１（ＯＨ）（ダウ・ケミカル社（米国）Ｉ！Ｉ
ｆ）のカラムを通過せしめて通過液を減圧濃縮後凍結乾
燥を行い、Ｌ−カルニチン又はγ−ブチロベタインのシ
ロップ状物質が得られる。

但し、Ｌ−カルニチンとＴ−ブチロベタインとの分離は
たとえばＣＭ−セファデックス、ダウエックス５０等の
カラムクロマトグラフィーで行うことができ、たとえば
ｐＨ４、５の緩衝液で緩衝化したＣＭ−セファデックス
のカラムを用い、同緩衝液で溶出すると、最初にＬ−カ
ルニチンが溶出され、次にγ−ブチロベタインが溶出さ
れる。

す１ このようにして得られたＬ−カルニチンは、心臓疾患の
治療剤〔循環器科１４巻５号３８６ベージ及び３９４ペ
ージ（１９８３年）　ｉ　ＪｏｕｒｎａＦｏｆ　Ａｐｐ
ｌｉｅｄ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　３巻３２８ペー
ジ（１９８１年）参照〕、脂肪血症の治療剤（Ｄｒｕｇ
ｓ　ｕｎｄｅｒ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ａｎｄｃ
ｌｉｎｉｃａｌ　ｒｅｓｅａｖｃｈ　９巻１２号９２５
ページ（１９８３年）参照〕として用いられ、また、高
参照〕として用いられることが知られている。

また、γ−グチロペタインは、Ｌ−カルニチンと同様の
目的で用いることができることが知られている〔特開昭
５７−１３６５１６号公報参照〕。

さらに、γ−ブチロベタインはＬ−カルニチン生産の中
間体としても利用しうる。

実施例 以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。

実施例１ エメリセラ・カドリリネアターエＦＯ５８５９をグルコ
ース２９６　＋マルトース３％、生大豆粉１．５％、コ
ーン・スチートリカー１％、ポリペプトン（大五栄養化
学株式会社製）０．５９６゜酵母エキス０．３％、塩化
ナトリウム０．３％からなる種培地５０口ｖｒｌを含む
２１容坂ロフラスコに接種し、２８°Ｃで１日間振盪培
養し、得られた培養液の２４を前記種培地にアクトコ−
／Ｉ／（武田薬品工業株式会社製）０．０５％を添加し
た培地１００１を含む２００１容醗酵槽に接種し、２８
°Ｃ４８詩間通気攪拌培養を行った。得られた培養液の
８０４を大豆油３９６．生大豆粉０．５％、ポリペプト
ン１９６．酵母エキス０．２％、リン酸−カリウム０．
１９６．硫酸第一鉄０．０５％、硫酸マンガン０．０５
％、ｆ／ＬｒＷＩマグネシウム０．０５％及びアルドコ
ール なる主培養培地３９２０６を含む醗酵槽に接種し、温度
２８°Ｃ，通気量１００％（ｖ／ｖ／分）、攪拌１２０
ｒｐｍ，内圧１ｋｑ／ｃＭ２の条件下で６日間培養を行
なった。得られた培養液を濾過助剤（ハイフロスーパー
セｆｉ／妬ーンズ・マンビル・プロダクト社製，米国）
を用いて濾過し、除菌した培養ｆ液を得た。

実施例２ 実施例１で得られた培賀沖液３５００１をアンバーフィ
ト２　０　０　（　Ｈ　型’）　（ローム・アンド・ハ
ース社製，米ｌｊｄ　）　（　２　０　０　１　）のカ
ラムに通し、水６００Ａ’でカラムを洗滌後Ｎーアンモ
ニア水１０００／で溶出した。溶出液を２９１まで減圧
′ａ縮した後１．２＆ｑの活性炭を加えて脱色した。

活性度を磨過して除いた後、ｆ）ｊ液をｐＨ４．０の酸
酢緩衝液（０．１Ｍ）で綱繭化したダウエックス５０Ｗ
Ｘ２（ダウケミカル社囮，米国）（２４１）のカラムに
通した。同緑値ｉ液５０１でカラムを洗った後、１２０
１のｐＨ５．５の酢咽緩衝液（ＯＩＭ）でｉ出を行った
。ＩＯ（１／から１２０１−＆での溶出内分をあつめて
アンパーフィｌ−ＩＲ−１２０（Ｈ＋型）（　２ｎ）−
〇カラムに通し、水６１で洗滌後Ｎーアンモニア水６１
で浴出した。

溶出液を３００ｍｌにまで濃縮した後、ダウエックス１
ｘ８（ｏｎ−型）（５００ｍ／）に通し、水５００胛ｊ
で洗滌した。この通過液および洗滌液を合わせて１ｅに
まで濃縮し、ダイアイオンＨＰ−２０（２５メツシユ）
（三冑化成工業株式会社車！り（１１）のカラムに通し
た。３１の水で溶出し、５６０＊／から８８０＃Ｉ／ま
での溶出画分をあっめて５０＃！／１で濃縮した。この
濃縮液をダイアイオンＨＰ−２０（５０−１００メツシ
ユ）（１／）のカラムに通し、３１の水で溶出した。６
８０　ｍｌヵ・らｌｌｔでの溶出画分をあつめて１００
ｍ／′まで濃縮し、ｐＨ５，Ｑ（７）酢酸ゆ衝液（０，
０５Ｍ）で緩衝化したＣＭ−セファデックスＣ−２５（
ファーマシア社製、ヌエーデン）（１１りに通した。

同Ｒｆｉｒ液３／”ｔ’溶出し、１２５ｏＩ１１ｔから
１５００ｍｌまでの溶出画分をあっめてダウエックス５
０ＷＸ２（０１（−型）（Ｉｎ（ｌｒ／）のカラムに通
した。

７ｋ　３００　ｍｌでカラムを洗滌した後０．５Ｎアン
モニア水３００ｍ／で溶出し、溶出液を減圧濃縮して５
、Ｏｆの油状物をえた。この油状物を５０ｒｇｌの水に
溶解し、ｐＨ４，５の酢酸緩衝液（０，０５Ｍ）で緩衝
化したＣＭ−セファデックスｃ−２５（１１）のカラム
に通した。同緩衝液３１で溶出を行い、１８００譚／が
ら２３００ＷＩｔまテノ溶出画分をあつめてダウエック
ス５０ＷＸ２（ＯＨｚＨ髪）（Ｔ　００ｖｒｌ　）ツカ
ラムに通した。３００評／の水で洗滌した後０．５Ｎア
ンモニア水３００　ｍｌ　テａ出した。溶出液をあわせ
て減Ｊ＋濃縮し３０５　ｊｄｆ／の油状物を得た。この
油状物を２．８ｔｇｉのＮ−塩酸に溶かし、減圧乾固し
た後エタノールおよびエチルエーテルの混合溶媒から結
晶化し、２０１１＃のＬ−カルニチン・塩酸塩を吸湿性
の結晶として得た。

〔α）２３−２２　、８°（ｃ　’＝　０　、５　、水
）。

元素分析　ｃ７Ｈ□６Ｎｏ３ｃｌ　としてｌｉｔ　！、
色値：ｃ、４２．５４；　Ｌ８．１６；　Ｎ、７．０９
；Ｃ１，＋７．９４％ 実？則値　：　ｃ、４２．２１；　Ｌ８．３８；　Ｎ、
７．３４；ｃｌ、１７．８０％ １Ｈ−ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ｊＪ氷水中Ｊ　：　２．９
０（２Ｈ９豆、−Ｃ旦２−ＣＯｏＤ）、　３．４６（９
Ｈ，生。

−Ｎ（Ｃ旦３）３Ｌ　３．７４（２Ｈ，ｄ、−ＣＨ２−
Ｎ（ＣＨ３）５）。

赤外線吸収スペクトル；νｎ＋ａｘ　（ＫＢｒ）ｚ　：
３４５０．２９８０．　１７３５．　１４８０．　＋４
０５゜＋１９０．　１０９０．　９８０．　９４０．　
８３５．６１０実施例３ エメリセフ・カドリリネアター８ｃ−５−１８１株（工
ＦＯ３１５０ｇ　、ＦＥＲＭ　Ｐ−７５６５）を実施例
１と同様の挿培地５００ｇ／を含む２１容坂１」フラス
コに接種後、２８°Ｃで１日間振盪培養した。得られた
培養液の１４を同様の種培地にアクトコ−／ｌ’０．０
５％添加した培地３０ｇを含む５０１芥的酵惰に接様し
、４８時間通気イマノ拌培養を行なった。得られた培養
液の５１ｆ：大豆油７％。

乾￥’ｌ！　（Ｍ母５％、ポリペプトン０．１％、塩化
第一鉄０．０５％、及びアクトコ−７ｖＱ、０５％から
なる主培養培地９５ｇを含む２００１容ｋｉ酵槽にｔｘ
　４１ｊｔ　Ｌ、温度２８℃９通気量１００％（ｖ／ｖ
／分）、攪拌１１００ｒｐ及び内圧１＃／♂の条が得ら
れた。

実施例４ 実施例３で得られた培養沖液６０ｇをアンバーライトＩ
Ｒ−１２０（Ｈ型、１５１）のカラムに通し、３０６の
水で洗滌した。Ｎ−アンモニア水４５ｇで溶出し、溶出
液を２０ｇまで減圧ン農縮した。この７ＦＡ＆ａ液を活
性灰のカラム（２５Ｎ）に通し、水５０１で洗滌した後
５０９６メタノール５０ｇで溶出した。溶出液を減圧Ｉ
ＰＸｆ、ｊ７後、凍結乾燥して５２１の粉末を得た。こ
の粉末を２５０　ｗｒｌの水に溶解してダイアイオンＨ
Ｐ−２０（２５メツシユ）（ＩＮ）に通し、１．５１の
水で溶出した。溶出液を２００Ｗ！？まで減圧濃縮し、
アンバーライ）ＣＧ−５０（ＨＱ）（１ｅ）のカラムに
通した。５ｅの水で溶出し、１．９４から５１−１での
溶出画分をあつめて減圧濃縮し連結乾燥した。

得られた２、７ｙの油状物を５０＊、の水に溶１１ｒ＃
　してダイアイオンＨＰ−２００カラム（１１）に通し
た。２１の水で溶出し、７００ｗ１から１３００ｖｔｌ
までの溶出両分を３０ｙｐｌまで減圧ｅａ縮し、ｐＨ４
，５の酢酸緩内液（０，０５Ｍ）で緩衝化したＣＭ−セ
ファデックスのカラム（１ｅ）に通した。

同緩衝液３４で溶出し１８００ＷＩ／がら２３００＊／
までの溶出画分をあつめてダウエックス５０Ｗ×２（Ｈ
Ｆ）（５０ｇ／）のカラムに通した。１５０ｍ１の水で
カラムを洗滌後０．５Ｒアンモニア水２００ｇ／で溶出
した。溶出液を減圧乾固してＬ　−力μニチンの組物質
３０５Ｗを得た。父上記ＣＭ−セファデックスのカラム
クロマトグラフィーにおける２５００＊ｌから３１００
＊／までの溶出画分をあつめてダウエックス５０ＷＸ２
（Ｈ型）（５０耐）のカラムに通した。１５（１ｗ／の
水でカラムを洗滌した後、０．５Ｎアンモニア水２００
ｒｓｌで溶出した。溶出液を減圧乾固してγ−ブチロベ
タインの組物＊２０５ｑを得た。

一方実施例３と同様の方法で得た５ｃ−５−１８１株の
培養ｐ液５５１を用い、上記と同じ精製工程を経て、１
８（１ｑのＬ−カルニチンの組物質及び１４０岬のγ−
ブチロベタインの組物質を得た。

Ｌ−カルニチンの組物質を合しく４８５＃）水２０肩ｌ
にとかしてｐＨ４，５の酢酸Ｉ！衝液（０、０５Ｍ）で
緩衝化したＣＭ−セファデックスのカラム（１１）に付
し、同ｍｔｉ液３１で溶出した。

１９００ｍ１から２６００＊ｆｆまでの溶出画分をあつ
めてダウエックス５０ＷＸ２　（ｕ　型）　（５０＊ｌ
）のカラムに通した。１５（１＋／の水でカラムを洗滌
した後０．５Ｎアンモニア水２００ｇ／で溶出した。

溶出液を２０ｘｌまで減圧濃縮し、ダウエックスｌＸ８
（ＯＨ−型）（ＩＬＩｇ／）に通し、２０ｔｐｔｌの水
で洗滌した。通過液と洗液を合して減圧濃縮して２５９
Ｍｇの油状物を得た。これｔ　２０　ｔｓｌの水にとか
してＮ−塩酸１．５ｇｌを加え減圧濃縮した。残留物を
エタノール〜エチｐエーテ〜から結晶化し、２２６ｇｖ
のＬ−カルニチン塩酸塩を投湿性の結晶として得た。

元素分析　ｃ７　Ｈ１６ＮＯ３Ｃ１として計算値：　ｃ
、４２．５４；　Ｈ＋８−１６；　Ｎ、７．０９；ｃｔ
　、　１７．９４１６ 実測値：　ｃ、４２．４５暮ａ、８．１２；　Ｎ、７．
２９７Ｃ１，１７，７３％ ’Ｈ−Ｎ　Ｍ　Ｒ（９０ＭＨｚ　、重水中）　ａ　：　
２．８８（２Ｈ，ｄ、−Ｃ旦２　Ｃ００Ｄ）＋　３．４
６（９Ｈ，ｓ。

−Ｎ（Ｃル３）３）、３．７２（２１（、ｄ、−Ｃ圧２
−Ｎ（ＣＨｙ、　）　３　）。

赤外吸収スペクトル： ｖ　（ＫＢｒ）Ｉｆｆ　’　：３５００．　２９５０．
　１７３０゜ａｘ １４Ｂ０．　１４００．　１１９０．　１０９０，９８
０゜９４０、８３０．　６１０ （第２図参照） 又γ−ブチロベタインの組物質を合して（３４５ｑ）水
２０ｗ１に溶かし、ｐＨ４、５の酢酸緩雨液（０，０５
Ｍ）で緩衝化したＣＭ−セファデックスのカラム（１１
）に付した。同１ｉｌｌｔｌＫｒ液３１で溶出し、２０
００ｍ１から３０００＊ｌまでの溶出画分をあつめてダ
ウエックス５０ＷＸ２（■　８Ｉり（５０肩ｌ）に通し
た。１５０　ｙｘｔの水でカラムを洗滌した後、０．５
Ｎアンモニア水２００＋ｗｌで溶出した。溶出液を２０
ｍ１まで減圧濃縮し、ダウエックス１Ｘ８（ＯＨ−型）
（１０肩ｌ）に通して２ｒＪｙｔの水でカラムを洗った
。通過液と水洗液を合して減圧濃縮し、１８３ダの油状
物を得た。これを２０ｗ１の水に溶かしてＮ−塩酸ｉ、
２ｗｌを加え減圧濃縮した。残留物をエタノ−μ〜エチ
ｐエーテμから結晶化し、１９７〜のγ−ブチロベタイ
ン・塩酸塩の針状結晶を得た。

元素分析　Ｃ７１１工。Ｎｏ２Ｃ１として計算値：　ｃ
、４６．２８；　ｕ、８．８８；　Ｎ、７．７１；ｃｌ
、１９．５２Ｊ 実測値：　（Ｌ４６．４０；　Ｈ，８，９３；　Ｎ、７
．５７；Ｃ１，１９，４３９６ １Ｈ−ＨＭＲ（９０肩ｌ２．重水中）　ａ　：　２．３
３（２Ｈ，ｎｔｌ−ＣＨ２−ＣＨ２−ＣＭ２−）、２．
７３（２Ｈ，ｔ。

−ＣＨ２−Ｃ旦２−ＣＯｏＤ）＋３．３５（９Ｈ９８＋
−Ｎ（ＣＨ３）３　＞　、　３．６０（２Ｈ、ｍ　、−
ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３）５）。

赤外吸収スペクトル　νｍａｘ　（ＫＢｒ　）ｃｌｌ−
’　。

３４１０、　３０４０．　２９５０．　１７３５．　１
４Ｂ５゜１２９５、　１２００．　９４０ （第３図参照） 発刊９力１ 本発明方法は、従来、化学合成で製造されていたＬ−カ
ルニチンおよびγ−ブチロベタインを、発酵法により製
造する方法に関するものである。

本発明方法によると、通常の合成法によって生じる光学
異性体の９体の関与を問題にしなくても良く、又光学活
性のＬ体のみを合成するための技術的煩雑さを避けるこ
とができる利点がある。また、Ｌ−カルニチンおよび／
またはγ−ブチロベタインを培養液中よシ直接採取しう
る利点がある。

又、醗酵法による製造においては、応用微生物学の領域
で通常用いられる生産菌株の変異目種によって、より高
い生産量を期待することもできる。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例２で得られたＬ−カルニチンの赤外吸収
スベク）／Ｉ／を、第２図は実施例４で得らｔＬ７’ｈ
Ｌ−１μニチンの赤外吸収スペク）／ｌ／を、第３図は
実施例４で得られたγ−ブチロベタインの赤外吸収スペ
クトルをそれぞれ示す。 ４！Ａ％ｌ藍？ １呵←？ −ｋＡ噸＠−？

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. エメリセラ属に＃！！　Ｌ　Ｌ−カルニチンおよび／ま
   たはγ−ブチロベタインを生産する能力を有する微生物
   を培地に培養し、培養物中にこれを生成蓄積させ採取す
   ることを特徴とするＬ−力μニチンおよび／またはγ−
   ブチロベタインの製造法。