JPS6038657A - 貯蔵安定なユニバーサル対照血清 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明の目的は、ヒト又は動物の血清を基礎とし、適当
な緩衝剤（その緩衝作用が生理的範囲内にある）の添加
により安定化されている貯蔵安定なユニバーサル対照血
清である。 測定法の正確−及び精密対照のためもしくは、自動分析
の較正のために、通例、公知の正確な固定濃度で測定す
べき・ξラメータを含有する慣用の対照血清もしくは較
正血清が使用される。 １つたく！特定の・ξラメーク又は限られた大抵は関連
性のあるパラメータ群（例えば僅少・ξラメータ）の対
照もしくは較正のために役立つ特別対照血清と、できる
だけすべての慣用・ξラメータの対照もしくは較正のた
めて実際上慣用のすべての測定に使用可能であるいわゆ
るユニバーサル対照血清とは区別しそいる。診断にとっ
て重要であるすべての基質及び酵素は、現在市販されて
いるユニバーサル対照血清中に含有されている。従って
、１５０〜２００種の」１１定法を対照もしくは較正す
ることができる。。 対照血清の信頼性及びこれに伴う対照血清で対照された
もしくは較正された測定法の信頼性は、決定的に、対照
血清中の基質及び酵素の安定性に依り決まる。安定性の
問題は、対照血清中に含有される・ξラメータが多い程
、重要になるが、困難にもなる。対照血清は通例、凍結
乾燥された形で入手される。それというのも、この際て
安定性の問題が最も少ないからである。 しかしながら、凍結乾燥、凍結乾燥した生成物の貯蔵及
び使用前の対照血清の復元も、安定性損失の原因となり
、これは個々の・ξラメータにおいて重大なことであり
、屡々、診断てとって特ＶＣ＠要な特定の・ξラメータ
例えばビリルビン、クレアチンキナーゼ、アヌノξルテ
ートーアミノトラ〉ヌフエラーぜ、アラニンーアミノト
ランヌフエラーゼ、アルドラーゼ等の場合に問題を惹起
する。 ス、」照血清において重要なことは、凍結乾燥した血清
の貯蔵及び復元の後の個々の・ξラメータの再現性であ
る。この再現率は理想的な場合に鳴゛ は１−００％である。市販のユニバーサル対照血清は大
抵の・ξラメータに対して８５〜９５％の範囲にある再
現率を示している。 本発明の課題は、ヒト又は動物の血清を基礎とするユニ
バーサル対照血清中に含まれる／ｅラメータの安定性を
、殊に実際上側々測定される臨床上の・？ラメータに関
する再現率をほぼ１００％であるように、改良すること
であった。 意外にも、ヒト又は動物血清を基礎とするユニバーサル
対照血清が、生理的範囲内に緩衝作用のある好適な緩゛
衝剤を含有する際Ｋ、個々のパラメータに関する再現率
は明らかに上昇されることを確認した。再現率の上昇は
、本発明によれば多くのノξラメータに関して５〜１０
％であるから、多くの場合に、理想値１００％にほぼ到
達する。 特別な対照血清に、中に含有する基質もしくは酵素の安
定性を高めるために、緩偕剤を添加することは公知であ
る。例えば、Ａｍｅｒ、、Ｊ　、（！１ｉｎＰａｔｈ、
　５３巻（１ｇ７０年）９２４〜９２７頁には、ＨＥＰ
ＢＳ−緩衝剤（ＨＥＰＥＳ　＝　Ｎ　−２−ヒドロキシ
エチル１１”　ベラ）ノーＮ−２−エタンスルホン酸〕
の添＋ＪＤ　Ｋよって安定化ばれた僅少・ξラメータに
関する対照溶液が記載さオ］、ている。しかしながら、
従来、ヒト又は動物血清を基礎とするユニバーサル対照
血清には緩衝剤は添加されていなかった。この種の対照
血清は、従来から、緩衝されていない状態で取扱わ１ｔ
ている。 ユニバ−サルに使用可能な対照血清中に含有される多く
の基質及び酵素ｆおいて、従来は、他の化学物質の添加
は個々の測定法に障害をもたらすと恐れらｇていたので
、緩衝剤の添］Ｊ［］をさけていた。 更に、ヒト及び動物の血清の成分は、それ自体酸に緩衝
作用を有している。従来は、天然の緩唾糸を有するこの
血清を凍結乾燥形に変えるだけで充分であると考えられ
ていた。極端な場合てば、凍結乾燥した血清の復元の後
に観察さ第１るｐＨ値上昇（これは凍結乾燥時の００２
−ロスに帰因する〕を、高すぎるｐＨ値で特定の・ξラ
メータが復元された対照血清中で不安定になるのをさけ
るために、生理学的ｐＨ値１で修正することが必要であ
った。 問題点を解決するだめの手段 緩衝物質としては、原則的に、そのＰｋ　−値が生理学
的ｐＨ−範囲を包含するすべての緩衝剤を使用すること
ができる。特に、塩基分（カチオン）及び酸分（アニ、
オンンから成る組成の緩衝剤が特に好適でおり、この際
、塩基としては２−アミノ−２−（ヒドロキシメチル）
−１゜３−ゾロノξンノオール、２−アミノ−２−メチ
ル−１，３−、’ロノξンジオール、イミダゾール、ジ
エチル−、トリエチル−、ノエタノールー、トリエタノ
ール−アミンが有利であり、酸としては酢酸塩、プロピ
オシ酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、コハク酸塩、酒
石酸塩、クエン酸塩、ホウ酸塩が有利である。両性イオ
ン緩衝剤例えハＨＥＰＥＳ　（Ｎ　−２−ヒドロキシエ
チルピペラジン−Ｎ′−２−エタンヌルホン酸〕、Ｐ工
ＰＥＳ

【ピペラジン−Ｎ、Ｎ−ビヌー〔２−エタンヌル
ホン酸〕】及びＭＯＰＳ　（３−（Ｎ−モルホリノ）−
プロ・ぐンスルポン酸）を使用するのが特に有利でおる
。 本発明による貯蔵安定なユニバーサル対照血清の製造の
ために、ヒト又は動物の血清例えば仔牛血清にル１望の
基質及び酵素を添加する。次いで緩倫剤物質を添加する
。得られる溶液を濾過し、常法で凍結乾燥することがで
きる。このユニバーサル対照血清は、凍結乾燥した形で
取扱うのが有利である。凍結乾燥物は水性媒体有利に、
蒸溜水で復元することができる。 緩衝剤を血清に、凍結乾燥の前に、１０〜１００　ｍ％
　ル／　／有利Ｋ　３０〜５０　ｍモル／Ｉの濃度で添
加する。使用緩衝剤のｐＨ値は、６．０〜８ｏ有利に６
．７〜７．３の範囲内にあるべきでおる。 作用 こうして製造したユニバーサル対照血清は特に安定であ
る。ユニ・ζ−サル対照血清の安定性は、例えば熱処理
（例えば３５℃で３週間）し、その後、個々のＩξミラ
メーク再現率を測定１−ることにより、測定することが
できる。本発明によるユニバーサル対照血清は、多くの
・ぞラメータＶこ関してほぼ１００％の再現率を有する
。、従って、安定性に関し、従来公知の市販の緩衝’ｉ
ＡＪ＋、ていなかったユニ・ζ−サル対照血清よりも明
らかに優れている。 実施例 次の実施例につき本発明を詳述する。 例１（比較例） 緩栴剤を添＋ＪＩＩ　Ｌ々いヒト血清を基礎とするユニ
バーサル対照血清・ ヒｚｍ清１００−に、酵素アルトラ−セ、α−アミラー
ゼ、アル上カリ性ホヌファターゼ（ＡＰ）、コリンエヌ
テラーゼ“（ＯＨＥ　）、クレアチンキナーゼ（ＯＫ）
、グルタメートーデヒドロゲナ−４（（）ＩＤＨ）、ア
タノξルテートーアミノトランスフエラー−ｔ（ｃｏＴ
）、アラニンーアミノトランヌフエラー、Ｎ　（ＧＰＴ
　）、Ｌ−γ−クルタミル−トランヌフエラーゼ（７’
−ＧＴ　）、ロインンーアリールアミダーゼ（ＬＡＰ　
）、ラクテート−デヒドロゲナーゼ（ＬＤＨ）、リノξ
−ゼ及び酸性、にｙ、−ｙｌタ−セ（ｓ　ｐ　）　ヲ第
１表Ｋ１１Ｊｌ’）ＩＩ）ＬＹｌｑ「ｌコ最終濃度に達
するような量で添加する。更に。 ヒリルビン、クレアチニン、クルコーヌ、尿酸、尿素、
乳酸塩、サリチ／ｌ／酸塩、鉄−及び赴シー塩を、同様
に第１表ｒ記載の最終濃度に達するような量で添加する
。酢酸を添カロする。量は復元された凍結乾燥物中で約
７０のｐＨ値（て達するように秤取する。得られる溶液
を濾過して澄明にし、５−宛フラスコ中に充填し、凍結
乾燥をせる。この凍結乾燥試料を冷蔵庫内で貯蔵する。 試料の１部分を３５℃で３週間保持する。その後、安定
性の検査のために、この温度処理した試料及び温度処理
しない試料中の酵素の活性及び基質の濃度を水での復元
の後に測定する。 ｄｌＡ度処理した試料の、処理しなかった試料と比べた
再功１率（％ンを第２表中に挙げる。 例２ ｒｔ衝剤を添加したヒト血清を基礎とするユニバーサル
対照血清； ヒト血清１００−に、例１に記載の酵素及び基質を添加
する。ＨｆｆＰ］１ｉＳ−緩衝剤を添加すると溶液は約
７．０のｐＨ値を有する（１．２．９）。 例１の記載と同様に後処理する。再現率データを同様に
第２表中に挙げる。 世」３ 緩衝剤を添加したヒト血清を基礎とするユニバーサル対
照血清： ヒト血清１００−に例１に記載の酵素及び基質を添加す
る。付加的にトリグリセリド及びコレステリンを添加す
ると、第１表に記載の総トリダリセリドもしくは総コレ
ステリン含分に達する。更に、１（ＥＰＥＳ−緩衝剤を
添加すると、溶液は約７０のｐＨ値を有する（１．２．
９）。こうして得た溶液を、例１の記載と同様に後処理
する。再現率データを同様に第２表に挙げる。 例牛 緩衝剤を添加した修生血清を基礎とするユニバーサル対
照血清／ユニバーサル標阜液：へモリーゼの少ない修生
血清１００−に例１に記載の酵素を加える。更に、ビリ
ルビン、クレアチニン、グルコース、グリセリン、尿酸
、尿素及び場合によってはトリグリセリド、コレステリ
ン、乳酸塩、サリチル酸塩、鉄−２銅−及びマグネシウ
ム塩を、第１表に記載の最終濃度に達するまで、添加す
る。トリエタノールアミンスクシネートを添加すると、
溶液は、約７０のｐＨ値を有する（約２．０８ＩＩ）。 こうして得た溶液を濾過して澄明にし、例１の記載と同
様に後処理する。再現率は、同様に、第２表に記載のと
おりである。 次表に、例１〜４のユニバーサル対照血清中の神々の・
ξラメータの最終濃度を記載する。正常値は、・？ラメ
ータが慣用の、通例出現する濃度で測定される測定の対
照及び較正のだめのユニバーサル対照血清にあてはまる
。 病理的値ば、・ξラメータが病理的濃度範囲で測定され
る測定の対照及び較正のためのユニバーサル対照血清に
当てはまる。使用酵素に関する活性値は、それぞれ活性
が測定される温度で示される。 第２表には、例１〜牛によるユニバーサル対照血清に関
する再現率を挙げる。値は、敬回測定の３Ｆ　均値であ
る。これらの値はユニバーサル対照血清に関し、正常範
囲にも病理的範囲にも、当てはまる。 第　１　表 例１〜４によるユニ・ζ−サル対照血清中の種々の・ξ
ラメータの最終濃度 第　２　表 凍結乾燥物を３５℃で３週間処理した後の未処理試Ｆｌ
に７１する１１Ｊ現率（％） 第１頁の続き ０発　明　者　ルドルフ・ポルテンハ　ドイツ連邦共不
つザー　セ　２６ベ一

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ　ヒト又は動物の血清を基礎とする貯蔵安定なユニ・
   ２−サル対照血清において、これは、血清に添加さオし
   た、緩衝作用カニ生理学的ｐＨ−範囲１ノ４にある緩衝
   剤を含有することを特徴とする、貯蔵安定なユニ・ぐ−
   サル対照血清。 ２　緩衝剤として、塩基分及び酸分よりなる組成の緩衝
   剤（／″の際塩基は、２−アミノ−２−（ヒドロキシメ
   チｌし）−１，３−プロ・ξンノオール、２−アミノ−
   ２−メチル−１，３−プロ・８／ノオール、イミダゾー
   ル、ノエチルー、トリエチル−、ジェタノール−及びト
   リエタノールアミンのｍから選択したものであり、酸は
   酢酸塩、ゾロビメン酸塩、りんご酸塩、マレイン酸塩、
   フ／’％り酸塩、酒石酸塩クエン酸塩及びホウ酸塩の群
   から選択したものである）又は両性イオン緩衝剤が使用
   されでいる、特許請求の範囲第１項記載のユバ−サル対
   照血清。 ３、緩ｉ　剤として、トリエタノールアミンーヌクシネ
   ート、Ｎ−２−ヒドロキゾエチルピペラ）　ンーＮ’−
   ２−エタンスルポン酸、ビ滅うジンーＮ、Ｎ’−ヒス（
   ２−エタンスルホン酸）３１ｊ：３−（Ｎ−モルホリノ
   ）−フロ・ξンヌルホン酸が使用されている５特言′１
   請＊の範囲第２項記載のユニバーサル対照血清。 ４、緩衝剤が血清に凍結乾燥の前に１０〜１００ｍモル
   ／ｌの濃度で添加されている、特３′１−請求の範囲第
   １項から第３項のいずれか１項に記載のユニバーサル対
   照血清。 ５、緩笛剤濃度は３０〜５０　ｍモル／１１テする、特
   許請求の範囲第４項記載のユニバーサル対照血清。 ６、　緩衝剤は、６０〜８、Ｏの範囲で緩衝作用を有す
   る、特許請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記
   載のユニバーサル対照面ｆｌ’ｆ　。 ７、緩衝剤の緩衝作用は、６．７〜７．３の間に存在す
   る、％　Ｗ＋請求の範囲第６項記載のユニバーザル対照
   血清。 ８　凍結乾燥された形又は水性媒体で復元された形であ
   る、特ｇ′ｒ請求の範囲第１項から第７項のいずれか１
   項に記載のユニバーサル対照血清。