JPS6043394A - 抗生物質ｏａ−６１２９ｂ↓２の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質ＯＡ　６１２９Ｂ２０新現な製造方法
に関し、さらに詳しくは発酵法による下記式 ％式％ で示される抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ、の選択的製造方
法に関する。

本発明者らは先に下記式 １１ Ｃ１ｉｚ　ＮＨＣＣＨＯＨ Ｃ山−Ｃ−Ｃ）１２０Ｈ（１１ Ｈｓ 式中、Ｒけ水素伸子、−〇０又は−０８０３Ｈを表わす
、 で示される一連の新矧１な抗生物質がスト１／ブトミセ
ス・エスピー０Ａ−６１２９（微工研条寄第１１号）の
発酵により生庇されることを９い出し、それ−どれ抗生
物質０Ａ−６１２９Ａ（Ｒ＝Ｈ）、０Ａ−（’；　１２
９１’３．　（Ｔｊ　＝００．５．６−ｃｉｓ体）、Ｏ
Ａ−６１２９Ｂ２　（Ｒ＝ＯＨ，５，６−ｔｒａｎｓ体
）及び（ＩＡ−６１２９Ｃ（Ｒ＝ＩＳＯ，Ｅｌ　）と命
名し提案した（ヨーロッパ７１１＋・許出１１頑公ｉｆ
ｌ明眉ＩＩ　１．！４’第４８，９９９Ａ１号、特開昭
５７−６２２８０号公ず臥特開昭５７−７０８９０特開
峨）、２び特開昭５７−９５９８７号公報参照）。

上記生産菌株は抗生物質ｎＡ　−６１２９ＡＸＣ）Ａ−
６１２９Ｂ＋　及び０Ａ−６１２９Ｂ２も生？Ｒするが
、抗生物質０Ａ−６１２９Ｃを・−ｋ〈生産する顛向が
ある。しかし、上記式（ＩＩ）の化合物をさらに有用な
他の抗生物質に１ｌｉ１導する場合にけ、Ｒ＝ｎｓｏ３
ｒ１である場合の式（Ｉｌ）の化合物、ｕｌｌら抗生物
質０Ａ−６１２９（：’よりも、む１−１ろＲ＝　ＯＲ
である場合の弐（１１の什介物、［−１１ら抗生物）／
ｉ０Ａ　−６１２９Ｂ、’！け０Ａ−ｆｉ１２９Ｂ、の
方−Ｍ利用範囲が大きいと思われる。

そこで本発叩者ら！ｄ、ｌ／を物質０Ａ−１’ｉ１２９
Ｂｍ　及び／又け０Ａ−ｆ’１１２９Ｒ２を゛」択的に
生産する能力のある：゛１コ株をλＪ′Ｊ″ｒ税意７＋
＋ｒ究を行々つた糸古果、］二記ストレプトミセＸ・エ
スピーＯＡ−＋ｉ　］　２９　（−８ｏｒｅｐｔｏ＋ｎ
ｙｃｅｓ　ｓｐ、　ＯＡ、−６１２９）を変異処理しｔ
イ：ｔられるストレプトミナスエスピー０Ａ−６１２９
−３Ｎ　−５０４（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｐ、０
Ａ−６１２９−３Ｎ−５０４）が、前記式（１）で示さ
れる）Ａ、生物質ＯＡ　６１２９Ｂｔを選択的に生ｌｒ
ｌすることを踏い出し本発明を完成するに至っん。

１、かして、本発明によれｔず、ストレプトミセス・エ
スピー０Ａ−６１２９−３Ｎ−５０４を栄養培地で１合
養し、その培養物から下記式 ％式％ ［） で示される抗生物質ＯＡ　６１２９］３ｚを採取するこ
とを特徴とする抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ２　の製造方
法が提供される。

本発明の方法において使用される菌株、ストレプトミセ
ス・エスピー０Ａ−６１２９−３Ｎ　−５０４は、従来
の文献に未載の新規な菌株であり、その菌学的性質を示
せば次のとおりである。

１）　形態 顕微鏡下でよく分枝１〜た基中菌糸より、直状〜曲状（
Ｓｔｒａ　ｉｇｈｔ−ｆ　１ｅｘｕｏｕｓ　）の気菌糸
を伸長し、輪生枝はみとめられない。成熟［７だ胞子鎖
は１０個以上の楕円〜円筒形を１〜だ胞子から成り、胞
子のりは認められない。胞子の大きさは０．６〜１、０
　Ｘ　０．７〜２．５ミクロン位で、胞子の表面番−り
平滑である。鞭毛胞子はみとめられない３．２）　各種
培地における生育状態 培養は特記しないかぎり２８°〜３０℃で行った１゜６
− また色；ｊｌｌ’Ｊの記載は王としてエッチ・ディ・ト
レスナーとイー・ジエー・バカス（Ｈ，］’）、　Ｔｒ
ｅｓｎｅｒａｎｄ　１ｉ：、　Ｊ、　１ｌａｃｌｑ１ｓ
　）著、ジャー−）−ル・、ｔ７’　・７プライド・ミ
ツ１１ビオロジイ−（Ｊｒ＋ｕｒｎａｌ　ｏｆＡｐｐｌ
ｉｅｄ　ＭｉｃｒｎｂｉｎｌｏｇＹ）　１１巻、４号、
（１９６３年）３３５〜３３８頁の方法に従い、［］内
に示す符号［ＣＨＭｆｆ−ド（ｃｏｄｅ）〕はコンデイ
ナー・コーポレーション・オプ・アメリカのカラー〇ハ
ーモニー・マニュアル（ＣｏｎｔａｉｎｅｒＣｏｒｐｏ
ｒａｌ　ｉｏｎ　ｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ　のＣｏｌｏｒ
Ｈａｒｍｎｎｙ　Ｍａｎｕａｌ　）を用いた。

（］）シュークロース・硝酸塩寒天培地：背広［２（Ｉ
Ｃ：）〜明るい灰黄茶Ｃ３ｇｅ　］　の中等ＩＷ生育上
に、背広［２（Ｉ　Ｃ’］〜灰黄ピンク［５ｄＣ〕の気
菌糸を着生１〜、溶ＤｌＦ性色素はみとめらｔｒ　ノｒ
い。

（２１りｔｖフコースアスパラギンｊＱ大培地：うす黄
［２ｄｂｌ〜明るいオリーブ基［２ｇｅ］の良好な生育
上に、明るい灰〔ｄ〕の′、！（＋４糸を層中する。尚
この気菌糸はおぐれで灰黄ピンク〔５ｄＣ〕となる。溶
解性色素はみとめられない。

（３）グリセリン・アスパラギン寒天１７ｆｉｌｌｔ　
（Ｉ　Ｓ　Ｐ培地−５）： 穏やかな黄ピンク〔４ｇｃ　：］〜明るい茶［４ｉｅ〕
の良好な生育上に、明るい灰〔ｄ〕〜明るい灰赤茶［５
ｆｅ］の気菌糸を着生する。溶解１’ｉ：　ｔ’ｆ＝素
はみとめられない。

（４）スターチ無機塩寒天培」＋ｈ　（ｒ　ｓ　ｐ培地
−４）：うす黄［２ｄｈ〕−・灰色［２ｆｅ］の良好な
生育上に明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する１、溶解性
色素は生成しない。

（５）チロシン寒天培地（■ＳＰ培地−７）：灰黄〔３
ｅｃ〕〜明るい茶［４ｉｅ〕の生育−ヒに、明るい灰〔
ｄ〕〜明るい茶灰［３ｆｅ］の気菌糸を着生ずる。培地
は愼〈席かに茶色を帯びる。

（６）栄養寒天培地： うす黄［２ｄｂ：または明るい黄［２ｆｂ：］〜明るい
オリーブ基［２ｇｅ］の良好な生育−ヒに、明るい灰赤
茶［５ｆｅ〕の気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめ
らｉｌない。

（７）　イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ＩｓＰ
培地−２）： 穏やかな黄ピンク［４ｇｃ〕〜明るい茶［４ｉｅ〕の良
好な生育上に、灰黄ピンク［５ｄｃ］或いはややおくれ
て明るい灰〔ｄ〕の気菌糸を着生する。溶解性色素はみ
占められない。

（８）オートミール寒天培地（ＩＳＰ培地−３）：灰黄
［３ｅｃ’ｌ〜明るいオレンジ黄［３ｅａ：ｌ、或いは
明るい灰黄茶［３ｇｅ］の良好な生育上に、明るい茶灰
［３ｆｅ］〜明るい灰赤茶［５ｆｅ〕の気菌糸を着生１
／、閘集落の周辺の培地は僅かに９− 褐色を呈す。

（９）　リンゴ酸石灰寒天培地： 暗色〜黄灰（２ｄｃｌの中等ＩＷの生育上に、明るい灰
〔ｄ〕〜明るい灰赤茶［５ｆｅ］の気菌糸を着生し、溶
解性色素ｖｊみとめらｉｌ４い。生育；Ｎ集落の周辺に
カルシウム塩の溶解帯が吃られる。

（１０）ゲルコース・ペプトン・ゲラチン培地（２０℃
培養） うす黄［２ｄｂｌ〜茶色の良好な生育上に白色〔ｂ〕〜
灰黄ピンク〔５ｃｂ〕の気菌糸を着生する。培養長期（
約３週間以上）にわたると褐色の溶解性色素を生成した
。

３）生理的性質 （１）生育温度範囲 イーストエキス・麦芽エキス寒天培ｊｌＩＩ（Ｉ　Ｓ　
Ｐ培地−２）を用いて１０°、２０°、？５°、３０°
。

３４°、３７°、４０°、４５°、５０℃の各温度で実
１０− 験の結果、３７℃では殆んど発育出来ない。４０℃以上
では全く発育しない。その他の各温度でに生育がみとめ
られた。最適生育温度範囲は２０〜３０℃と思われる。

（２）ゲラチンの液化：液化する。

（３）スターチの加水分解：分解する。

（４）脱脂牛乳の凝固、ペプトン化：凝固けしないが、
ペプトン化する。

（５）　メラニン様色素の生成： ペプトン・イースト・鉄寒天培地（ＩＭＦ培地−５）及
びトリプトン・イーストエキス・プロス培地（ＩＳＰ培
地−１１）ではメラニン様色素の生成は認められなかっ
た。チロシン寒天培地で極〈僅かに茶色を呈するも、メ
ラニンの生成は痕跡程度である。

４）　各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリブ寒天
培地使用） （１）Ｌ−アラビノース　１ （２１Ｄ−−４シＩＪ−ぺ　十 （３）　Ｄ−グルコース　＋ （４）Ｄ−フラクトース　ｊ〜 （５）　シュークロース　疑わしい （６）イノシトール　− （７）Ｌ−ラムノース　＋ （８）　ラフィノース　− （９）Ｄ−マンニット　＋ 十は同化する、　−は同化しない。

Ｊ″Ｊトの菌学的性質より０Ａ−６１２９閑株けＳｔ　
ｒｅｐｉｏｍｙｃｅｓ属に属する菌株であって１気菌糸
の形状はセクションＲＦ　（Ｓｅｃｔｉｏｎ　Ｒｃｃｔ
ｉ−ｆ　１ｅｘｉｂｉ　Ｉｅｓ　’ｌ　と考えられ、胞
子表面平滑であった。気菌□糸の色調は大多数の培１１
１！％即ちオートミール寒天、グリセリン・アスパラギ
ン寒天、スターチ・無機塩寒天等の培地では明るい灰色
「ｄ］で、火（ρ系（Ｇｒａｙ　５ｅｒｉｅｓ’）の菌
株である。１゜か１〜／ニークローズ・硝酸塩寒天、イ
ーストエキス・表芽エギス寒天、及びグルコース・アス
パラギン寒天１ｔ’ｆ地でけ培套時朋に依ってけ天童ピ
ンク［５ｒＬｃ］の赤色系（１イｅｄ　５ｅｒｉｅｓ）
　ｆ呈する事がある。また、基中菌糸の色は培養初期け
いづれの培地でもうす黄〜天童で、培養を続けると黄茶
〜灰赦茶或いは茶色の色調を示す様になる。メラニン色
素はペグトン・イーストエキス・鉄寒天培地中及びトリ
プトン・イーストエキス・ブロス中産み＾・められす、
またその仙の水溶性色素も多くの培地で生ｈｌｊ　ｌ、
なかった。しかしチロシン寒天培地、クルコース・ペプ
トン・ゲラチン培地及びオートミール寒天培地中に僅か
に茶色の色素をみとめた。

本発明者等は本菌株をストレプトミセス・エスピー０Ａ
−ｆ５１２９−３Ｎ　−５０４ｒＳｔｒｅｐｔｏ−１３
− ｍｙｃｅｓ　ｓｐ、０Ａ−６１２９−３Ｎ−５０４）と
して、工業技術院微生物工業技術研究所に、特許手続上
の微生物の寄託に関するブタベスト条約による国際寄託
として昭和５８年８月５日に微工研条をｇｇ３３４号（
ＦｐＲＭ　ＢＰ−３３４）と１．て寄記した。

本菌株は前述のヨーロッパ特許用（・□、（α公開明細
書や公開公報に記載され公知のストレプトミ士スーｒ−
スヒ−０Ａ−６１２９の変異処理により創製することが
できる。以下その変異処理法についてさらに詳しく説明
する。

スナわち、ストレプトミセス・エスピーｒ）Ａ　−６１
２９を紫外線照射、放射線照射、化学変異誘起剤処理等
の通常の変異誘導方法によって処理することにより、抗
生物質０Ａ−６１２９Ｃの生合成系が欠失し、抗生物質
０Ａ−６１２９Ｂｔを、“Ｎ択的に生産しつる菌株を取
得することができる。こ１４− こでに１、化学変異ｉ力起剤処理法のうち、Ｎ−メチル
−Ｎ／−二トローＮ−ニトロングアニジン（ＮＴＧ）を
用いた処１１１１によって変異を行った場合について以
下さらに詳Ａ１１ｌｌに１況明するが、曲の変異誘搗方
〆！Ｅ　（７よっても目的の変ＩＡ菌株を？！すること
かでき乙。

ｆｉｌ　’：４鳥：ｌ＾６Ｘリル理 イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（■ＳＰ培地−２
）トで２８℃、２週間培養１−またストレプトミセス　
エスピー（）Ａ−６１２９の斜面培養１本の表向からか
きとった胞子をｐＨ７，５の０．０１Ｍリン−（イソナ
Ｉ・リウム緩イ・ｌｉｉｎＭ　９　ｍｇに懸濁し、ガラ
スフィルター（廠２）で炉部（８、この炉液１．　ｒｒ
ｔｌに９ｍｌの前Ｈ１４す：／　（Ｈ’）ｊバッファー
で希釈ｌ、７たのら、ＮＴＧを最終ｉＱ度１１１　（１
０μ、！９　／　ｍｅ　Ｐ＋’：々るように添加し２８
℃で１時間（ｉ一つ。乙のとき９０％の役胞子効Ｍ！、
−，５ｉあつ、ＩζＯＮ　Ｔ　Ｇ　処１甲川ル子液を？
、　５　（１０Ｘ　９で２０分間遠心分離し、胞子を０
．８５％生理食塩水に懸濁し、適当に希釈して、その胞
子懸濁希釈前をＩＭＦ培地−２上に塗布［７，２８℃で
２　ｒ’ｒいし３週間培養を行いコロニーを形成′、ぎ
ゼーた３、（２）変異菌株の学殖法 −Ｆ記の如＜ＩＳＰ培地−２ヒに形成ｊ７たコロニーを
捨い、ＩＳＰ培１＋１−２斜面、１１１　トＶＣ移Ｌ２
８℃で２週間培養を行った。これらの各菌株の胴面培地
から１白金叩を５Ｅ−４種母培地〔牛肉エキス（］、３
％、バクトドリブトン０．５　％　、グルコース０．１
係、可溶セ［でんぷん２．４％、酸１ｎエキス０５チ、
炭酸カルシウム０．４％、大豆粉（ｔｔ、１：の素（株
）製ミート特等）　０．５　％、ｒ）Ｈ７，（１］３　
ｔｒｉを含む試ＭＷ培地へ接種Ｌ、２８℃で２日間振と
り培養（。

た。つぎにこの培養液Ｑ、　５　ｍｌをＧ昌１．１合ｉ
１ｋ　（大豆粉４．５係、グリセリン１０係、Ｋ２ＦＩ
　Ｐ　Ｏ４０，２係、Ｍｇ５Ｏ，・７　Ｈ２Ｏ０，１％
、ＣａＣＯ３０，３％、ＣｎＣ１２５ｒ　／　ｍｌ、Ｔ
）Ｈ７，０）１０　ｗＩｌを含む２５０　Ｉｎｌ三角フ
ラスコに１年イ巾ｉ、、２８℃でロータリーシェーカー
−に４１］間１音・崗１．た。

この１〆り而−１−澄みを５　／Ｌ／シリカゲル６０１
ｊ’　２５４（メルクｒ１：）にスポット１２、貝空デ
シケーター中で約１０分間乾燥したのち、クロロホルム
：メタノール：八＝１／１００すｙ　ｒｉ鶴Ｊｚ　ｉ’
ｉｉｉ液（Ｉ）Ｉｆ　７．５　）　＝８：　６　：　１
　（７）ｌｆｌｉｌＧｕｆ聾’−ｒｌｌｆｌ開＋＆、ｉ
＜ｔ　ｒ！Ｉｅ、−ｃ　ｘ：：　ＩＡ　ｋ　除去１、た
のらエールリッヒ試セ１とにひたＬ、１０５℃で５＜＋
間加熱１．て発色さぜ、抗生物質０Ａ−６１２９Ｃのス
ポットが消失ｊ−２、抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ２のス
ポットを示した豫゛異１Ａ１株を分離１．ｌ（。

こねにｔす、当業者Ｑ１本発明の目的に適合した１吸生
物を容鵬に検索すること力（アきる。

−１に発明の方法によれば、Ｉ７Ｎ、生１１４１１質０
Ａ−（ｉ１２９Ｂ２け、上記菌株ストＩ／ブトミ士ス　
°［スビー（）Ａｊｉ　１２９−３Ｎ　５０４のｊＭ！
子寸たけ菌糸を１７− 栄養源含有培地に接種して、好気的に増焔させることに
よって生産させる。

その栄養源としては、放線菌の栄Ｕ’Ｊｊ　ｔｂｊｊと
Ｌ５て通常使用されるもの、例えば炭水化物、（：マ素
隙、無機塩などの同化できる栄養源を使用できる。例え
ば、ぶどう糖、グリセリン、麦芽糖、蔗糖、糖蜜、デキ
ストリン、デンプンなどの炭水化ｑ、１６や、大入ブ油
、落花生油、ラードなどの油脂、脂肪類の如き炭素源；
ペプトン、肉エキス、大豆粉、綿実粉、乾燥酵母、コー
ンスチーブリカー、酵母エキス、脱脂乳、カゼイ／、硝
酸ナトリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウムな
どの♀素線；燐醒ニカリウム、食塩、炭酸カルシウム、
４〆Ｍ　１９マグネシウムなどの無機塩が使用でき、必
要により微量・金属例えばコバルト、マンガンなどを添
加することができる。栄養源としては、その他、抗生物
質０Ａ−６１２９Ｂｔの生産を阻害しないものであれ１
８− ば、いずＪｌ、の栄養源でも使用でき、公知の放崖閑の
培養イＡ′４＋はいずれも使用できる。また、加熱殺菌
時及び培養中における発泡を抑えるため、シリコン、ｌ
＋ｆｕｌ勿油なとの消泡側を添加することもできろ。

上記の如き栄養源の配合割合は特に制約されるものでＨ
’　Ｍ：　＜　、Ｅ範囲に亘って変えることができ、使
用する前記菌株にとって好適な栄養源の組成及び配合割
合は、当業者であれば簡単な小規模実験により容易に決
定することができる。

オた、栄養培地は培養に先立ち殺菌することができ、こ
の殺菌の前Ｖけ後で、培地のｐＨを４〜９の範囲、４Ｉ
ｒ　Ｋ　ｐ　Ｆｌ　６〜Ｂの範囲に調節するのが有利で
ある。

かかるｌ′、Ｈ養培地でのストレプトミセス　エスピー
０Ａ−６１２４１−３Ｎ−５０４の培養は原則的には、
一般の放線菌にする抗生物質の製造において通常１ψ用
されて（八る方法にＩｒ−じて行、＋ろととができる。

通常好気的粂件下に培養するのが好Ｉ＋４で矛、す、通
常Ｉｒ拌しな力Ｉら及び／又は通気しな力；ら行；ｔう
ことができる。′また、培養方法と１７てけ静置培養、
振盪培養、通気攪拌をともなう液内培養のめずれも［重
用可能であるが、液内培養ｌｌＫ有利である。

使用しつる培養温度は菌株ｒ）Ａ−６１２４’）−３Ｎ
−５０４の発育が′Ｕ質的に１’目害されず抗生物質０
Ａ−ｆｉ１２９Ｂ２　を生産し得る範囲であれば特に制
限されるものではない力；、一般に２０〜４０℃、好ま
しくけ２５〜３５℃の範囲内の１ＰＩｆが好適である。

また、培養を好適に行なうため、必要に応１−で、培養
中に培養物のｐＨを４〜９．１１′「に６〜８の範囲に
Ｈ１ａ節することができる。

大規模な大量培養の場合、１１宜種母培養を行ない、こ
れを栄養’ｊ”ｓ　［１１に接種し、液体培養するのが
１１利である。

培養は通常抗生物質０Ａ−６１２９Ｂａ　が充分に蓄積
するまで継続することができる。その培養時間は、培地
の組成や培養温度、使用生産株等により弄なるが、通常
３０〜９０時間の範囲である。

培養中の抗生物質０Ａ−６１２９Ｂｙ　の蓄積量・は前
述のシリカゲルを用いる薄層クロマトグラフィーにより
定隈することができ、それにより最適°　蓄積量を容易
に知ることができる。

かくして、培養物中に蓄積された抗生物質０Ａ−６１２
９Ｂ、は水溶性であり、主として菌体外に存在するので
、有利には、培養後、沖過、遠心分離、抽出などのそれ
自体公知の分離法によって菌体を除去し、そのｌＦ５液
、上澄液、抽出液などより回収さｉする。

回収を才それ自体公知の種々の方法で行なうこと２１− ができ、特にカルボｙｔｖ型抗生物質の回収のためにＪ
ｉ　ｋ利用される方法が有利に適用される。（＞１＋え
ば、低ｐＨＫおける酢酸エチル、ｎ−ブタノール等での
溶媒抽出及びその溶Ｗ層からＩｉ″ＴｉｐＨ＊層への転
溶；活性炭、アンバーライトＸＡ、ｎ（ローム・アンド
・ハース社製）、ダイヤイオンＩＮ’−２０（＝菱化成
社製）等による吸着と、メタノール７Ｉ（、アセトン水
等による溶出；ダウエックス１×２（ダウケミカル社製
）、ＱＡＥ−セファデックスＡ−２５（ファルマシア社
Ｍ）、ＤＥＡＥ−セルローズワットマンｒ）Ｅ−３２ｒ
ワットマン社製）、１１　Ｅ　Ａ　Ｅ−セファデックス
Ａ−２５（ファルマシア社製）等のイオン交換樹脂にし
る吸着及び溶出；セファデックスＧ−１０（ファルマシ
ア社製）、バイオ・ゲルＰ−２（バイオ・ラッド１）、
等によるゲル痙過；セルローズ、アビ士ルＳＦＣアメリ
カン・ビスコース社１！　）’Ｄのカラムクロマト−２
２＝ グラフィー；アセトン等の溶剤添加による強制沈殿法；
凍結乾燥法、等をそれぞれ単独で或いは適宜組合せて、
さらに場合によっては反復して使用される。

回１１．に精９・ソ工程中の抗生物質０Ａ−６１２ＱＢ
。

の挙動も捷だ、前ν１（の薄層クロマトグラフィーによ
り定晴測定することができ、かくして、抗生物質ＯＡ　
ｆｉ１２９Ｂｔがイ９らｔする。

本発明の方法によｔｌば、培養条件によって、培養物中
に抗生物質０Ａ−６１２９Ａが少量生産さり、ることも
あるが、抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ＋−や（）Ａ−６１
２９Ｃは丈際上生産されることがなく、１ノ）：生物質
ＯＡ　６１２９Ｂｔが選択的に生産される。

本杭生物ノｆＭＯＡ、　−６１，２９Ｂｙは、一般に遊
離形のものよりも塩の形の方がより安定であるから、後
述する医薬用途に使用ｊ７たり、さらに誘濁体に＋Ａ換
する場合の中間体として使用したり、或いシ１゜前記し
た８１Ｓ製工程に付する場合等に二おい−（け、ｉ？ｌ
ｌｌの形で処理することが好適である。

抗生物質０Ａ−６１２９’Ｂ、　（１）その１訂形への
転化けそれ自知の方法に従い、ｉｔ亥抗生４９／＋４７
　ＯＡ　−６１２９Ｂ２　を無機又は有機の塩基で処理
することにより行７！ｉ：１′１ことができる。この造
塩反応に使用し得る無機又は有機の塩基としてけ、ｉ；
；１１＊　ｌｌｆ、水酸化ナトリウム、水Ｙ゛１〃化カ
リウム、水ｒ・１？什リチウムの如きアルカリ金がの水
酸化物；水酸化ノ１ルシウム、水酸化マグネシウムの如
きアルカリ土類金属の水酸化物；モノエチルアミン、ジ
メ峯ルアミン、トリノ千ルアミン、モノ玉〃ノールアミ
ン、ジェタノールアミン、ベンザチン、フ゛ロカインの
如き第一級、第二級又は第三級の有機アミン等が挙げら
れる。

本発明の方法により製造される抗生物質ＯＡ−灼１２９
１３２は、前１１（のヨーロッパ！１１ト許出願公開Ｑ
ｉｌ　、１ｊｌｌ　４Ｊ−）にｄ［シ１１夕すれテイル
Ｊ、”）　Ｋ　ｒ　範（８１（’）　ｔ／Ｌ　画情４（
トをイ１しており抗菌剤としての用途が考えられると共
に、さらに有用Ｊｉｃ抗生ｑ５７質に￥ｆｊ’ｊ４什に
導くための合成中間体と１．ての用途も考えられる。

次に’−）″゛施イ／１１により本発明を′ざらに説明
する。なお・、以下の実施例において用いる抗１′ｙ活
性物質の定１−分析は、それ自体公知の抗生クシ、り質
を指標として、前述の薄明クロマトグラクイ−によね行
った。

実施例 ［：Ａ］　５１１（’ｉｓ／ｇエルレンマイヤー・フラ
スコに１０　ｎ　Ｉｎｌの下記組成の４′！Ｉｔ　ｎ１
培地Ｃ３ｌ）−４）を入れ、常法に、ｒ　；ｉ、１？１
℃ｆ１５　分間殺＋Ｍ　Ｌ７’（。

一方、ストレフトミセス・エスピーＯＡ　−６１２９（
Ｆ：５ｒｅｐ＋ｎｍ）ＩｃｅＳ８１）、　＋１　Ａ　−
６１２４）　”）（１？］ｌ；Ｒ，Ｍ　ｆ（Ｐ−１１）
からイ（Ｉられた変異株３Ｎ−！ｉ　０４株（ＦＥＲ，
へ４　Ｒ１）　−３３／ｌ　を胞子を充＝２５＝ 分着生させ、この１白金叩を一１ニパ【シ、団１：ｔ　
＋３池に浅ｊ４ｉし、２８℃で・１８時）１１１０−タ
リーシエーカー（９０１１ｒｐｍ、振幅７ａｎ）で１と
う垢養１−Ａ−６この種母培地１０１）　ｔＩｌを、下
１１肥［１成の生］・“ｐ培地（Ｇλ’ｌ−３）５．Ｏ
ｔ″４−人Ｊまた１ｏ　／−＋７＋、−〕ンヤー・ファ
ーメンタ−に接種し、汗９存酸素ｈ１で培養液中の溶存
酸素濃度（％飽和）が１０俤１１下とならぬように回転
数を制ｊ卸して、通うい＋５　ｚ、／ｍｉｎ　％　温度
２８℃で９０時間通気攪拌培養した。消泡剤としてでシ
リコンＴ（Ｍ−７５（信越化学６株）製］を０、１ＣＩ
６使用した。経時的に培蕃液ζ・サンプリング１７、遠
心分離した−１−澄液について抗生物質ＯＡ　−６１２
９化合物の電量を前述の薄ｌｆククロマトｚｌラフイー
を使っておこなった。各培養時間におけ７、分析活用を
下−１シの表１１ζ示十。

２６− （ｗ／ｖ） グルコース　０・１チ 可溶性澱粉　２４％ 牛肉エキス　０．３係 ミ’−）　り、５９４ バクｌ−トリプトン　０．５％ （：ａＣ（’）１　０・２チ 水道水 ９７　− 生産培地（ＧＭ　３）の組成： グリセリン　８．０チ 大豆粉　３．０係 台湾酵母　１．ｎ係 ｌＶｆｇｓＯ，０，２％ に、ＨＰＯ４０，２％ ＣａＣＯ５０，３％ ＣＯＣｌ！　５１１９／ｍｌ ［Ｂ］ｈ記〔Ａ〕で１４１られた９０時間培養後の発酵
液４，５ｔに水道水を加えて６．０ＬＬし、ドブコバー
ライトＡ３４（東回パーライト（株）胛）を添加したの
ち、ヌツチェで固型物を分離し、４．Ｏｔの炉液（１）
を得だ。次いで固型物を再び水道水に溶かして４．Ｏｔ
とし、ヌツチェで沖過をして２．Ｏ４のｐ液（Ｉ）を得
た。炉液（１）と（１）をあわせ、ダイヤイオンＦＴＰ
２０レジンを４００　ｍｌ充てんしたガラスカラム（４
０ｎｕｎ×３２０ｎａｍ　）に通液速度４００ｍｅ　／
　ｈ　ｒの速度で吸魁させた。４０（１ｍｌの蒸留水で
カラムを水洗したのち、５ｑ６（ｖ／ｖ）、１０係（ｖ
／ｖ）及び１５％（ｖ／ｖ）のアセトン水で段階的にア
セトン濃度をあげながら溶出した。

１区分をＪ５ｗｌとし、その溶出液を分画し、薄層クロ
マトグラフィー法で分析して０Ａ−６１２９１３！を主
とする両分３３〜画分５７の区分を集め４３０　ｔｘｌ
を得た。ＯＡ　６１２９Ｂ２　と共に少量生産された０
Ａ−６１２９ＡＪ：１画４）５９から両分６６に含有さ
れていた。

次に前記ｎＡ−６１２９Ｂ、画分を予め０．０１Ｍのリ
ン酸緩衝液（ｐＨ８，（ｌで平衡化したダイヤイオンＴ
’Ａ３０６Ｓを充填したカラム（１７，５ｔｎｔａ　Ｘ
　２５　Ｑ　ｒａｍ　’Ｉに吸着させ、ｔ　ｏ　ｏ　ａ
ｔの蒸留水で充分水洗１．たのち、食塩濃度が０から４
チまで直線的に変化する食塩水合計１．　ｏ　、ｃで溶
出した。１２９− 区分を５１として分画ｌ−た。各画分を薄層クロマトグ
ラフィー法で分析し、ＯＡ　６１２９Ｂｚを含有する画
分３３から画分５５までを集め１３０　ａｔを得た。こ
の画分を（１，０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，０）で予
め平衡化したダイヤイオンＨＰ２０カラム（１５，０Ｄ
ＩＩＩＩＸ　４３０市）に吸着させ、この溶出液をアセ
トン濃度がＯから２０係まで直線的に変化するアセトン
水合計６００　ｍｌで溶出１〜た。１区分を５　ｍｌと
して、その溶出液を分画した。各分画を薄層クロマトグ
ラフィー法で分析し、０Ａ−６１２９Ｂ２を含有する画
分４１から画分６１までの両分を集め２０　ｎ　ｍｔを
得た。これを常法に従って凍結乾燥し、１８０りの淡黄
色粉末を得た。

この粉末の純度は薄層クロマトグラフィー法で５１チで
あった。

〔Ｃ〕　前記〔Ｂ〕で得た凍結乾燥品のうち１５０〜を
約１０１の蒸留水にとかしたのち、予め、３０− ００１Ｍリン酸緩衝液で平衡化したＱ、　Ａ　’Ｅセフ
ァデックスＡ２５レジンカラム（１０ｊ励Ｘ９００市）
に吸着させた。蒸留水約１０　Ｑ　ｖ＋ｌで水洗（〜た
のち、敞地濃町が０から２％１で直線的に変化する食塩
水合計６００　ｍｌで溶出した。１区分を５　ｍｌづつ
分画１〜、その溶出液を分画した。各両分を薄層クロマ
トグラフィー法で分析することにより、画分３７から画
分４７までの０Ａ−６１２９Ｂ２画分１００ｍ１を得た
。この０Ａ−６１２９Ｂｔ画分を予めＱ、ｎ　Ｉ　Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＴ（８，（ｌで平衡化１〜たダイヤイオ
ンＣＨＰ２０カラム（１０ｍｍＸ　９０ｍｍ　）に吸着
させ、カラムを少量の蒸留水で洗ったのち、′アセトン
濃度がＯから１０チまで直線的に変化するアセトン水、
合計８１１０　ｍｌで溶出した。

１区分を５　ｍｌづつ分画Ｌ　、その溶出液を分画した
。

各両分を薄層クロマトグラフィー法で分析し、エーリツ
ヒ試薬で発色する両分８９〜画分１１９あわせて１８０
ｉ＋７′ｆ、得た。これを凍結乾燥し、３９〜の淡黄色
粉末を得た。この粉末は、バイオナートグラフィー及び
下記のＮＭＲＸＵＶ、ＩＲの測定値よシ、抗生物質０Ａ
−６１２９Ｂ２　であることを確認した。なお、Ｕｖの
吸光度からめたこの物質の純度は約９８チであった。

ＮＭＲスペクトル（溶媒：Ｄ２０、内部標準ＤＳＳ）δ
　・ ｐｐｍ’ ２．４５　（２Ｈ，ｔ、　Ｊ”６．５Ｈ２，ＮＨＣＨ□
ＣＨ２−Ｃ０）、２．７５−３．６０（ＩＩＨ，ｍ、　
Ｃ−４Ｈ２，４−６Ｆ］。

３．９４（Ｉ　ＨＸ　ｓ、ｌｏ−０Ｈ−Ｃｏ）、Ｈ ３，９５−４，３５（２１１、ｍ、　Ｃ−５Ｆｌ、　Ｃ
Ｂ、−ＣＩ−）。

ＵＶ吸収スペクトル え０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ８，４）ａｘ ｎｍ（ｔ）＝３ｎｏ（５４（’１０） ＫＢｒ　−１＋。

ＴＲ吸収スペクトル　νｍａｘｃ′ｒｎ　・１７６０　
（β−ラクタム） １（５６０（アミド） １６００　（ガルボキシレート） ３３− −届ｑ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ストレプトミセス・エスピー□Ａ−６１２９−３Ｎ−５
   ０４を栄養培地で培養し、その培養物から下記式 ％式％（ ） で示される抗生物質ＯＡ　６１２９Ｂｙを採取すること
   を特徴とする抗生物質０Ａ−６１２９Ｂ、の製造方法。