JPS6083585A - 新抗生物質ｓｆ−２１９７ａ物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、新規な抗生物質５Ｆ−２１９７Ａ及びその製
造法に関するものである。更に詳しく述べれば、新規な
抗生物質５Ｆ−２１９７Ａ物質及びミクロビスポラ属に
属する５Ｆ−２１９７Ａ物質生産菌を培養し、培養物か
ら５Ｆ−２１９７Ａ物質を採取することよりなる該物質
の製造法に関するものである。

本発明者らは、種々のダラム陽性菌及び陰性菌に抗菌活
性を有する新規、かつ有用な抗生物質を探索した結果、
ミクロビスポラ属に属］−る菌株の培養物中に新規抗生
物質５Ｆ−２１９７Ａ物質が生産されていることを見い
出し、その有効物質を培養物中から純粋に単離し、その
理化学的性状及び生物学的性状を確定することにより、
本発明を完成させた。

すなわち本発明は、下記の理化学的性質を有する５Ｆ−
２１９７Ａ物質、 １）元素分析値：炭素６０．４３％、水素８．６４％。

窒素１０．３２％、酸素１９．１２％ ２）分子量：質量分析（ＦＤＭＳ　）によりｍ／ｚ　４
３８に（Ｍ＋＋１）のピークが認められる ことから分子量は４３７と考えられ る。

３）融点：６１℃付近から徐々に融解するが、明瞭な融
点を示さない。

４）比旋光度：〔Ｃ３；、５＝−１３２°（ｃｌ、メタ
ノール）５）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さ
ない。

６）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである。

７）溶解度：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
酸エチルに可溶。水、ｎ−ヘ キサンに不溶。

８）呈色反応ニレミュー及びヨウ素試薬陽性。

ニンヒドリン及び硫酸試薬陰性。

９）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカゲル６０
Ｆ−２５４（メルク社製） クロロホルム−メタノール（５：１）０．６５ベンゼン
−アセトン（１：１）０．６３１０）中性、酸性、塩基
性の区別：中性１１）物質の色：白色 １２）　”Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第２図に示す通りで
ある。

１３）　”Ｏ−ＮＭＲスペクトル：第３図に示す通りで
ある。

であり、さらに本発明はミクロビスポラ属に属する抗生
物質５Ｆ−２１９７Ａ生産菌を培地に培養し、培養物か
ら上記の理化学的性質を有する５Ｆ−２１９７Ａ物質を
単離することを特徴とする新抗生物質５Ｆ−２１９７Ａ
の製造法である。

本発明に使用される８Ｆ−２１９７Ａ物質生産菌の一例
としては、静岡県焼津市の土壌より分離された放線菌５
Ｆ−２１９７株がある。５Ｆ−２１９７株の菌学的性状
は下記の通りである。

■、形態的性質 グルコース・アスパラギン寒天、１ネツト寒天等で単純
分枝の気菌糸をよく着生し、気菌糸上に多数の互生する
短い胞子連鎖を形成する。電子顕微鏡による観察では、
胞子の連鎖は２個の場合が多いが、３個の連鎖もかなり
見つにすられ、４個の場合もある。胞子の表面はスムー
ス、胞子の形態は長円形〜卵形で大きさは０．４〜０．
６　Ｘ　Ｏ，６〜１．２μｍ　である。運動性は認めら
れない。基中菌糸はよく伸長、分枝し分断は見られない
。その細胞子のう、菌核、結束糸等の特殊な構造は観察
できなかった。

５Ｆ−２１９７株の各種培地上での生育状態は、この表
に示した通りである。培養は２８°Ｃ１観察は１４〜２
１日培養後に行った。

■、生理的性質 （１）生育温度範囲：イースト麦芽寒天において１５〜
４２°Ｃの温度範囲で生育し ２５〜３０℃で良好に生育する。

（２）ゼラチンの液化：陰性 （３）スターチの加水分解：陰性 （４）脱脂乳のペプトン化：陰性 脱脂乳の凝固：陰性 （５）硝酸塩の還元：陰性 （６）耐塩性：５％食塩では生育するが、７％以上では
生育しない。

（７）メラニン様色素の生成：疑わしい■、　炭素源の
利用性（グリ−）゛ノ、ム・ゴツトリーブ寒天培地）（
１）利用する糖：Ｄ−グルコース、Ｄ−７ラクトース、
Ｄ−ギシロース、グリセロール、Ｌ−アラビノース。

Ｄ−マンニトール、ンフイノース、Ｌ−ラムノース、シ
ューク日〜ス （２）利用しない糖＝１−イノシトール■、細凪壁組成 ベラカー（Ｅｅｃｋｅｒ　）らの方法（Ａｐｐｌ、　Ｍ
ｉｃｒｏ−ｂｉｏｌ、、　１２　、４２１　（１９６４
’：ｌ及びルシバリエ（Ｌｅｃｈｅｖａｌｉ　ｅｒ）の
方法ＣＪ、”Ｌａｂ、　Ｃ１１ｎ、　Ｍｅｄ、、　７１
　、９３’４　（１９６８）　）により分析した結果、
全細胞加、水分解物中のジアミノピメリン酸はＤＬ型で
あり、キシロース、アラビノースは検出できなかった。

以上の菌学的性状から、５Ｆ−２１９７株は放線菌の中
でミクロビスポラ（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏｒａ　）属と
ミクロテトラスポラ（Ｍｉｃｒｏｔｅｔｒａｓｐｏｒａ
　）属の中間的菌株と考えられるが、主として胞子連日
が２個であることを重視し、ミクロビスポラ属に所属さ
せることにした。

従って、本発明者らは８Ｆ−２１９７株をミクロビスポ
ラ・エスピー−５Ｆ−２１９７（Ｍｉｃｒｏｂｉｓｐｏ
ｒａ　ｓｐ。

５Ｆ−２１９７）と命名した。なお、本菌株は微工研に
、受託番号第７２１３号（ＦＥＲＭ　Ｐ７７２１３　）
として寄託されている。

８Ｆ−２１９７株は、他の放線菌の菌株の場合にみられ
るように、その性状が変化しやすく、例えば紫外線、エ
ックス線、放射線、薬品等を用いる人工的変異手段で変
異しうるものであり、いずれの変異株であっても５Ｆ−
２１９７Ａ物質の生産能を有するものはすべて本発明の
方法に使用することができる。

本発明の方法では、前記菌株を通常の微生物が利用しう
る栄養物を含有する培地で培養する。栄養源としては従
来より放線菌の培養に利用されている公知のものが使用
できる。例えば炭素源としてグルコース、グリセロール
、シュークロース。

スターチ、水あめ、デキストリン、糖みつ、オートミー
ル、食用油等を使用しうる。また、窒素源としては大豆
粉、小麦胚芽、綿実かす、トマトケチャツプ、コーンス
テイープリカー、肉エキス。

ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸ナトリ
ウム等を使用しうる。その他必要に応じて炭酸カルシウ
ム、塩化ナトリウム、塩化コバルト。

リン酸塩、硫酸マグネシウム等の無機塩類を添加する他
、菌の生育を助け、５Ｆ−２１９７Ａ物質の生産を促進
するごとき有機及び無機物質を適当に添加することがで
きる。

培養法としては、一般抗生物質生産の公知の方法と同じ
く、好気的条件下での液体培養法、特に深部培養法が最
も適している。培養に適当な温度は２０℃〜３５℃であ
るが、多くの場合２５℃〜３０°Ｃの範囲で培養するこ
とが好ましい。

５Ｆ−２１９７Ａ物質の生産は、使用する培地や培養方
法によっても異なるが、振盪培養法ある（・は培養タン
クを用いる深部培養法では通常２〜７日の間でその蓄積
が最高に達する。

５Ｆ−２１９７Ａ物質の検定にあたっては次の方法が用
いられる。検定用培地としてはガム寒天培地（日永製薬
）を用いる。検定口としてはバクテロイデス・フシギリ
ス（Ｂａ、ｃｔｅｒｏｉｄｃｓ　ｆｒａｇｉｌｉｓ　）
を用いる。

５Ｆ−２１９７Ａ物質は１０μり一〜ｉｏｏμ沙儲にお
いて、濃度の対数と阻止円径どの関係は直線関係を示し
、それぞれ１３ｍｍ〜２７朋の阻止円径を与える（ペー
パーディスク平板法）。

本発明により得られる５Ｆ−２１９７Ａ物質は脂溶性。

中性物質である。これを培養物より採取するに当って、
その抽出、精製にはアンバーライ）ＫＡＪ）　−２（ロ
ーム・アンド・）１−ス社製）、ダイヤイオンＨＰ−２
０（三菱化成社製）等の合成吸着剤、セファデックスＬ
Ｈ−２０等のゲル濾過剤、ヘキサンによる沈澱法、酢酸
エチル等による浴媒抽出法、シリカゲルによるカラムク
ロマトグラフィー等が有効であるが、以下の方法が効率
的である。即ち、培養液より菌体その他の固型物をケイ
ンウ上等の１過助剤を用いて戸別し、次いで、ｐ液中の
有効成分をダイヤイオンＩ（Ｐ−２０に吸着させる。樹
脂部を水洗後、５０％メタノール水で予洗後、有効成分
を８０％アセトン水で溶出する。活性画分を減圧濃縮し
、アセトンを溶去した濃縮液から酢酸エチルで有効成分
を抽出する。この抽出液を減圧濃縮後、ｎ−ヘキサンを
加え有効成分を沈澱させる。沈澱物をセファデックスＬ
ｌｉ−２０，シリカゲル等のカラムクロマトグラフィー
、高速液体クロマドグ２フイー等を適宜組合わせること
により５Ｆ−２１９７Ａ物質の純品を得ることができる
。

以下に５ｌｌｉ’−２１９７Ａ物質の理化学的性状を示
す。

（１）元素分析値：炭素６０．４３％、水素８．６４％
。

窒素１０．３２％、酸素１９．１２％ （２）分子量：質量分析（ＦＤＭＳ　）によりｍ／ｚ　
４３８（Ｍ”＋１）のピークが認められることから分子
量は４３７と考えられる。

（３）融点二６７℃付近から徐々に融解するが、８Ａ瞭
な融点を示さない。

（４）比旋光度：〔α〕ｉ”＝−１３２°に１．メタノ
ール）（５）紫外部吸収スペクトル：％徴的吸収を示さ
ない。

（６）赤外部吸収スペクトル：臭化カリウム錠中で測定
したスペクトルは第１図に示した通り である。

（７）溶解度：メタノール、クロロホルム、アセトン。

酢酸エチルに可溶。水、ｎ−ヘキサン に不溶。

（８）呈色反応；レミュー及びヨウ素試薬陽性。

ニンヒドリン及び硫酸試薬隘性。

（９）薄層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカゲル６
０Ｆ−２５４（メルク社製） クロロホルム−メタノール（５：１）　０．６５ベンゼ
ン−アセトン　（１：１）　０．６３（［１中性、酸性
、塩基性の区別：中性（６）物質の色：白色 （ロ）ＩＨ−ＮＰ１ｍスペクト／Ｉ／二重クロロりルム
中４００　Ｍｌ（ｚで測定したスペクトルを第２図に示
す。

αａ）　１３０−ＮＭＲスペクトル：重クロロホルム中
１００　ＭＨｚで測定したスペクトルを第３図に示す。

次に、５Ｆ−２１９７Ａ物質の各種微生物に対する最小
発育阻止濃度は次表に示した通りであり、医薬あるいは
農畜薬またはそれらへの変換中間体として用いられる。

／ 第１表 本物質の急性毒性をマウスを用いて試験した結果、１０
０　ｍｙ／ｋｇ腹空内投与で金側生存した。

以上の生物学的性状、理化学的性状を有する５Ｆ−２１
９７Ａ物質は文献上これに該当するものがないが、分子
量４３７を有する放ね菌の生産物としてセルビオシジン
（Ｃｅｒｅｖｉｏｃｃｉｄｉｎ　）　［Ｋ、Ａｎｚａｉ
ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ、　Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃａ　Ａ旦
、　４２　（１９５５）　］及び］０−６１１Ｅ物質特
開昭５５−８３７９７号〕が知られている。しかし、こ
れらはいずれも他の理化学的性状が異なるので５Ｆ−２
１９７Ａ物質を新規な抗生物質と判定するに至った。

以下に本発明の実施例を示すが、これらは単なる一例で
あって、本発明を限定するものではない。

ここに例示しなかった多くの変法あるいは修飾手段を用
い得ることはもちろんである。

実施例１ 種菌用培地（グルコース１．０％、スターチ１．Ｑ％、
ベクトン０．５％、イーストエキス０．３％、大豆粉０
．２％、ミートエキス０．２％、炭酸カルシウム０．１
％）を１００ｍ／容三角７７　ス：Ｉ　Ｋ　２Ｑ　ｍｉ
分注滅菌後、ミクロビスポラ・エスピー５Ｆ−２１９７
株（ＦＥ几Ｊｉｆ　Ｐ−７２１３）をイーストスターチ
寒天斜面培養より３〜４白金白金耳口、２８°Ｃで３日
間培養した。得られた種菌５Ｑｍを、上記培地１１を５
１容三角フラスコ２本に分注滅菌したものに接種し、２
８°Ｃで２４時間振盪培養した。

次に、この種菌１ノを、上記培地３５１を５０４容ジャ
ーファーメンタ’−２基に入れ滅菌後接性し、２８°Ｃ
で２４時間培養した。この種培養液３０１を滅菌した生
産培地（水飴６．０％、大豆油０．３％、サングレイン
（サントリー社製）１．０％。

綿実粕１．５％、グルテンミール１．２％、小麦胚芽０
．８％、炭酸カルシウム０．２％）２０ＯＡを含む３０
０１容ステンレスタンク２基に接種し、２８°Ｃで４日
間通気攪拌培養した（通気量２００　ｔｉ、４゜攪拌初
期１００回転／分、２日目から１５０回恥冬）。

培養終了後、培養液のｐＨを２．０に調節し、ケイソウ
土を助剤に用いて濾過し培養液２８０Ａを得た。

実施例２ 実施例１で得られた培養液２８０ＡをｐＨ７，０に調節
後、ダイヤイオンＨｐ−２０（三菱化成社製）１５ノに
バッチ法にて有効成分を吸着させた。樹脂を回収後、塔
にっめ３０Ａの水で洗浄したのち５０％メタノール水６
０１にて予洗を行った。さらに、８０％アセトン水にて
溶離した。活性区分３０１を集め、減圧濃縮し、アセト
ンを溶去した。

濃縮液１０１に酢酸エチルＩＯＡを加え、有効物質を抽
出した。

この抽出液を減圧下で濃縮し、１００ｍ１になったとこ
ろでｎ−ヘキサン１１を加えて放置すると、有効物質は
沈澱した。上澄を除去した後、沈澱物をメタノールに溶
解させ、セファデックスＬＩＩ−２０（ファルマシア社
製）５００ｍＡ！の塔に付し、メタノールで展開スると
、２０ＷＬ１分画でフラクション１５〜３０に有効物質
が溶出した。この活性フラクションを合併し、減圧下で
濃縮乾固すると、５Ｆ−２１９７Ａ物質の粗粉末６．３
８りが・１υられた。

この粗粉末をクロロホルムで充填したワコーゲル０−２
００　（和光紬薬製）２００１ｒＬｌＯ）塔に付し、ク
ロロホルム−メタノール（５０：１）混液で展開すると
、１５ゴ分画でフラクション４０〜５０に有効物質が溶
出した。活性フラクションを合併し、濃縮乾固すると、
５Ｆ−２１９７Ａ物質の粗粉末８３５ｍ９が得られた。

このうち８３０ｍ９を７０％メタノールで充填したＬＨ
−２０５００ｄｇの塔に付し７０％メタノールにて展開
すると、２０ゴ分画でフラクション２０〜２５に活性フ
ラクションが得られた。この活性フラクションを合併し
減圧下で濃縮乾固すると、５Ｆ−２１９７Ａ物質の粗粉
末３４７■が得られた。

実施例３ 実施例２で得られた５Ｆ−２１９７Ａ物質の粗粉末３４
０ダをベンゼンにて充填したワコーゲル０−０−３００
５Ｑの塔に付し、ベンゼン−アセトン（５：１）の混液
で展開し、有効物質を溶出させた。活性フラクションを
濃縮乾固し３０ηの粗粉末を得た。この粗粉末３０〜を
１ｄのメタノールに溶解し、マイクロボンダパックＣｌ
８（ウォータース・アソシエイツ製）の力２ム（１０φ
Ｘ　２５ｏ　龍）を用いた高速液体クロマトグラフィー
で２吟倦の流速にて７０％メタノールで展開し、活性画
分を濃縮乾固して５Ｆ−２１９７Ａ物質の白色粉末１０
ｍ７を得た。本物質は前記した理化学的性質を有してい

【図面の簡単な説明】

第１図は５Ｆ−２１９７Ａ物質の臭化カリウム錠中での
赤外部吸収スペクトルである。第２図は５Ｆ−２１９７
Ａ物質の重クロロホルム溶液中での”Ｉｌ−ＮＭＩＬス
ペクトルである。第３図は５Ｆ−２１９７Ａ物質の重ク
ロロホルム溶液中での”　８Ｏ−ＺＧＩＲスペクトルで
ある。 特許出願人　明治製菓株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１１下記の理化学的性質を有する５Ｆ−２１９７Ａ物
   質。 ｌ）元素分析値：炭素６０．４３％、水素８．６４％。 窒素１０．３２％、酸素１９．１２％ ２）分子量：質量分析（ＦＤＭＳ　）により”／ｚ　４
   ３８に（Ｍ＋＋１）のピークが認められ ることから分子量は４３７と考え られる。 ３）融点＝６１℃付近から徐々に融解するが、明瞭な融
   点を示さない。 ４）比旋光度：〔α）、Ｄ’−−１３２゜（Ｃ１，メタ
   ノール） 、５）紫外部吸収スペクトル：％徴的吸収を示さない。 ６）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通りで□ある
   。 ７）溶解度：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
   酸エチルに可溶。水、＋１ −へキサンに不溶。 ８）呈色反応ニレミュー及びヨウ素試ｉＲ性。 ニンヒドリン及び硫酸試桑陰比。 ９）　薄層クロマトグラフィーのＲｆ値ニジリカゲル６
   ０Ｆ−２５４（メルク社製） クロロホルム−メタノール（５二１）０．６５ベンゼン
   −アセトン（１：　１　）　０．６３１０）　中性、酸
   性、塩基性の区別：中性１１）　物質の色：白色 １２）　”Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第２図に示す通りで
   ある。 １３）　１８Ｃｊ−ＮＭＲスペクトル：第３図に示す通
   りである。１（２）　ミクロビスポラ属に屈する抗生物
   質５Ｆ−２１９７Ａ生産菌を培地に培養し、培養物から
   下記の理化学的性質を有する５Ｆ−２１９７Ａ物質を単
   η（（１゛ることを特徴とする新抗生物質５Ｆ−２１９
   ７Ａ　Ｏ）　！！’ｊ造法。 １）　元素分析値：炭素６０．４３％、水素Ｓ、６４％
   。 窒素１０．３２％、酸素１９．１２％ ２）分子量：質量分析（ＦＤＭＳ　）にｊ：すｍｙ、４
   ３８に（Ｍ＋＋１）のピークが認められ ることから分子量は４３７と考え られる。 ３）融点二６１°Ｃ付近から徐々に融解するが、明瞭な
   融点を示さない。 リ　比旋光度：〔α〕、”＝−１３２゜（Ｃ１，メタノ
   ール） ５）紫外部吸収スペクトル：特徴的吸収を示さない。 ６）赤外部吸収スペクトル：第１図に示す通りである。 ７）溶解度：メタノール、クロロホルム、アセトン、酢
   酸エチルに可溶。水、ｎ −ヘキサンに不溶。 ８）呈色反応ニレミュー及びヨウ素試薬陽性。 ニンヒドリン及び硫酸試薬陰性。 ９）薄層クロマトグラフィーのｎｆ値：　シリカゲル６
   ０１Ｆ−２５４（メルク社製） クロロホルム−ん＾ブール（５：１）０．６５ベンゼン
   −アセトン（１：　１）　０．６３１０）　中性、酸性
   、塩基性の区別：中性１１）物質の色：白色 １２）　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル：第２図に示す通りで
   ある。 １３）　”０−ＮＭＲスペクトル：第３図に示す通りで
   ある。